JPH0892272A - 癌悪液質治療物質ｆｒ１７７３９１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属に属する微
生物（例えばＳｅｒｒａｔｉａ ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅ
ｎｓ Ｎｏ．１８２１）を培養して、酸性淡黄色粉末、
ＦＲ１７７３９１物質を製造する。 【効果】 この物質は、癌悪液質治療剤、抗腫瘍剤等と
して利用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ＦＲ１７７３９１物
質、その製法及び用途に関するものである。ＦＲ１７７
３９１物質は、微生物、特に細菌の培養物から分離採取
された従来未知の新規物質であり、すぐれたリポプロテ
インリパーゼ（以下、ＬＰＬということもある）活性回
復作用を示し、癌悪液質治療剤及び制癌剤等該作用に基
ずく各種の医薬として有用である。

【０００２】

【従来の技術】悪液質は、カヘキシー（cachexy）とも
いわれ、現在、結核、血友病、癌腫、梅毒等の際に全身
状態の衰弱を招来する悪態症の同義語として用いられて
いる。そして、特に、癌悪液質は、ＱＯＬの考えから臨
床上注目されている。悪液質にあっては、担癌患者は体
重減少、貧血、皮膚乾燥、浮腫あるいは食欲不振に陥
り、化学療法や放射線療法の副作用が出やすく、また栄
養不良による免疫力低下のために二次感染を招きやすく
なる。

【０００３】このような悪液質を予防、治療する医薬と
しては、その有効なスクリーニング法が確立されていな
いこともあって、特効薬は未だ開発されておらず、当業
界においては、すぐれた悪液質治療の開発が強く望まれ
ている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
当業界における要望に応えるためになされたものであっ
て、新規にして卓越した悪液質治療薬を開発する目的で
なされたものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、各方面から検討の結果、先ずはじめに、悪液質にか
かった患者では、血漿中のリポプロテインリパーゼ（Ｌ
ＰＬ）活性が体重減少の程度とよく相関して減少してい
ることに着目した。

【０００６】一方、細胞レベルにおいてＬＰＬ活性をみ
てみると、３Ｔ３Ｌ₁細胞はデキサメサゾン（１μ
Ｍ）、イソ−ブチル−メチル−キサンチン（０．５ｍ
Ｍ）およびインシュリン（１０μｇ／ｍｌ）を加えて培
養すると脂肪細胞に分化し、ＬＰＬ活性が誘導される。
その過程において、ＢＣＧ次いでＬＰＳを投与したウサ
ギ血清を添加（最終濃度２％）すると、ＬＰＬ活性発現
が抑制される。

【０００７】本発明者らは、これらの点に着目し、この
系を利用する悪液質治療剤のスクリーニング法を開発す
るに至った。すなわち、ＬＰＬ活性誘導細胞にＢＣＧ
（結核菌のメンブランフラクション）次いでＬＰＳ
（Ｅ．ｃｏｌｉ由来のトキソイド）投与ウサギ血清を添
加してＬＰＬ活性発現を抑制せしめた後、試験サンプル
を加えてＬＰＬ活性を回復せしめ、ウサギ正常血清を添
加したレベルにまで回復したものを、有効なものとして
スクリーニングする方法を開発することに成功したので
ある。

【０００８】更にまた、ＬＰＬ活性の測定も、検鏡によ
り脂肪細胞への分化程度を観察したり、必要に応じて比
色法にてＬＰＬ活性の定量を行ったりすることにより、
簡便且つ正確に行うことができることも併せ確認して、
スクリーニング系を全体的に完成させた。

【０００９】他方、本発明者らは、微生物の発酵生産物
について探索を続けており、ニュージーランドから得ら
れた土壌より新たに分離したＮｏ．１８２１株の培養物
から分離抽出した物質を、上記スクリーニング法によっ
て検討したところ、すぐれたＬＰＬ活性の抑制を回復
（ないし拮抗）する作用を有するという新知見を得、そ
して更にこの物質についてその理化学的性質を詳細に研
究したところ、従来未知の新規物質であることを確認
し、この物質を新たにＦＲ１７７３９１物質と命名し、
そして更に研究の結果、その工業的製法を確立し、本発
明を完成するに至った。

【００１０】本発明に係るＦＲ１７７３９１物質は、下
記表２、表３、表４に示される理化学的性質を有する新
規物質である。

【００１１】

【表２】

【００１２】

【表３】

【００１３】

【表４】

【００１４】本発明に係るＦＲ１７７３９１物質は、例
えばニュージーランドで採取した土壌サンプルから新た
に分離したＮｏ．１８２１株によって生産される。以下
にＮｏ．１８２１株の菌学的性質を示すが、分類学的研
究は、主に下記の文献１）、２）に記載された方法にし
たがった。 １）Krieg, N.R. and Holt, J.G. ed.: Bergey's Manua
l of SystematicBacteriology, Vol.1 Williams and Wi
lkins company, Baltimore, 1984 ２）Cowan, S.T. ed.: Manual for the Identification
of Medical Bacteria,Cambridge University Press, 1
974

【００１５】（１）形態的特徴 本菌株をニュートリエント寒天培地上において３０℃、
２４時間生育せしめた後、光学顕微鏡及び電子顕微鏡で
形態の観察を行った。その結果を下記の表５に示した。
その結果から明らかなように、本菌株は、グラム陰性、
運動性の細菌である。本菌株のニュートリエント寒天培
地でのコロニーは、smooth, pale yellow, circular, e
ntire-edgedであった。胞子の形成は認められなかっ
た。細胞は、０．５〜０．８×１．０〜２．０μｍの大
きさである。

【００１６】

【表５】

【００１７】（２）生理的特徴 本菌株の生理的特徴を下記の表６〜８に示した。

【００１８】

【表６】

【００１９】

【表７】

【００２０】

【表８】

【００２１】上記結果から明らかなように、本菌株の生
育温度範囲は、３℃から３４℃であった。本菌株は、カ
タラーゼ、クエン酸の資化性、硝酸塩の還元、エスカリ
ンの加水分解、ＯＮＰＧ試験、ＤＮase，ＶＰ試験、ゼ
ラチン液化、Ｔｗｅｅｎ８０加水分解、カゼイン加水分
解及びリジンデカルボキシラーゼの試験はいずれも陽性
であった。本菌株のＯ−Ｆ試験は、醗酵的であった。オ
キシダーゼ活性、インドール生成、澱粉の分解、いずれ
も陰性であった。Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、Ｄ
−フラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトー
ル、Ｄ−マンノース、Ｄ−トレハロース、グリセリン、
イノシトール、シュークロース、サリシンより、酸の生
成がみられた。また、Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビ
トール、Ｄ−マンノース、Ｄ−トレハロース、グリセリ
ン、イノシトール、シュークロース、及びマルトースを
資化した。

【００２２】（３）同 定 以上の特徴をBergey's Manual of Systematic Bacterio
logy（Vol.1）より検索した結果、Ｎｏ．１８２１株
は、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）に属するものと考え
られ、本菌株を、セラチア リクファシエンス（Ｓｅｒ
ｒａｔｉａ ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｎｏ．１８２
１と同定し、これを通産省工業技術院生命工学工業技術
研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１４４７５として寄託した
（寄託日：平成６年８月１８日）。

【００２３】ＦＲ１７７３９１物質の生産は、単に説明
を目的として挙げただけの本明細書記載の特定の微生物
の使用に限定されるものではないことを理解するべきで
ある。この発明は、記載の微生物からＸ線照射、紫外線
照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン、２−アミノプリン等の変異処理により取得できる
人工変異株並びに自然変異株を含めてＦＲ１７７３９１
物質を生産しうる全ての変異株の使用をも包含するもの
である。

【００２４】本発明に係るＦＲ１７７３９１物質は、細
菌に属する該物質生産菌（例えばＮｏ．１８２１株）を
資化しうる炭素及び窒素源を含む栄養培地中に接種し、
好気条件下で培養することにより（例えば、振とう培
養、通気撹拌培養等）、生産せしめることができる。

【００２５】炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、澱粉、変性澱粉、フラクトース、グリセリンその
他の炭水化物を使用するのが好ましい。

【００２６】窒素源としては、オートミール、酵母エキ
ス、ペプトン、グリテンミール、綿実粉、綿実油粕、大
豆粉、コーンスティープリカー、乾燥酵母、小麦胚芽、
落花生粉、チキン骨肉ミール等を使用するのが好ましい
が、アンモニウム塩（例えば、硝酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム、リン酸アンモニウム等）尿素、アミノ酸
等の無機及び有機の窒素化合物も有利に使用することが
できる。

【００２７】これらの炭素源及び窒素源は、併用するの
が有利であるが、純粋なものを必らずしも使用する必要
はない。不純なものには生長因子や微量要素が含まれて
いる場合などもあり、有利な場合があるからである。

【００２８】必要ある場合には、例えば次のような無機
塩類を培地に添加してもよい；炭酸ナトリウム、炭酸カ
リウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、塩化ナト
リウム、塩化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリ
ウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩等。

【００２９】特に、培地が強く発泡するのであれば、必
要に応じて、液体パラフィン、動物油、植物油、鉱物
油、シリコン等を添加してもよい。

【００３０】目的物質を大量に工業生産するには、他の
発酵生産物の場合と同様に、通気撹拌培養するのが好ま
しい。少量生産の場合は、フラスコを用いる振とう培養
が好適である。また、培養を大きなタンクで行う場合、
ＦＲ１７７３９１物質の生産工程において菌の生育遅延
を防止するため、はじめに比較的少量の培地に生産菌を
接種培養した後、次に培養物を大きなタンクに移してそ
こで生産培養するのが好ましい。この場合、前培養に使
用する培地及び生産培養に使用する培地の組成は、両者
ともに同一であってもよいし必要あれば両者を変えても
よい。

【００３１】培養は通気撹拌条件で行うのが好ましく、
例えばプロペラやその他機械による撹拌、ファーメンタ
ーの回転または振とう、ポンプ処理、空気の吹込み等既
知の方法が適宜使用される。通気用の空気は滅菌したも
のを用いる。

【００３２】培養温度は、ＦＲ１７７３９１物質生産菌
が本物質を生産する範囲内で適宜変更しうるが、通常は
１〜４０℃、好ましくは２３〜３０℃で培養するのがよ
い。培養時間は、培養条件や培養量によっても異なるが
通常は約１日〜１週間である。

【００３３】発酵終了後、培養物から目的とするＦＲ１
７７３９１物質を回収する。すなわち、菌体は、直接水
及び／又は有機溶媒による抽出、あるいは、これを機械
的に又は超音波等既知の手段を用いて破壊した後、水及
び／又は有機溶媒で抽出した後、常法にしたがって回
収、精製する。培養液の場合は、直接、常法にしたがっ
て回収、精製すればよい。

【００３４】回収、精製方法としては、例えば、水、有
機溶媒、これらの混合溶媒による溶媒抽出；クロマトグ
ラフィー；単一溶媒又は混合溶媒からの再結晶等常法が
適宜単独であるいは組合わせて使用できる。

【００３５】ＦＲ１７７３９１物質の回収、精製は上記
のような既知の方法を適宜利用して行うが、例えば次の
ようにしてもよい。培養物をアセトンで抽出し、さらに
酢酸エチルで抽出した後、クロマトグラフィーで精製す
る。ＦＲ１７７３９１物質は酸性物質であり、塩基と反
応して塩を形成することができる。ＦＲ１７７３９１物
質は遊離の状態（ＦＲ１７７３９１物質自体）でも回
収、精製することができるし、またそれらの塩としても
回収、精製できる。また、これらは常法により相互に交
換することもできる。ＦＲ１７７３９１物質の塩基との
塩としてはナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金
属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類
金属塩などが挙げられる。

【００３６】本発明に係るＦＲ１７７３９１物質は、後
記するところからも明らかなように、すぐれたＬＰＬ活
性抑制に対する拮抗（回復）作用を有することが確認さ
れ、且つ低毒性で安全性も高いことが確認され、ＬＰＬ
活性抑制に対する拮抗（回復）剤として有用であり、悪
液質治療剤、抗腫瘍剤として非常に有効である。

【００３７】したがって本発明に係る物質は、医薬の有
効成分として使用することができ、このような医薬も本
発明に包含されるものである。本発明に係る薬剤組成物
は、ＦＲ１７７３９１物質及び／又はその塩を有効成分
としてこれに常用される無機又は有機の担体を加えて、
固体、半固体又は液体の形で、経口投与剤のほか、外用
剤等の非経口投与剤に製剤化する。

【００３８】経口投与のための製剤としては、錠剤、丸
剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、エリキシル
剤等が挙げられる。非経口投与のための製剤としては、
注射剤、点滴剤、輸液、軟膏、ローション、トニック、
スプレー、懸濁剤、油剤、乳剤、坐剤等が挙げられる。
本発明の有効成分を製剤化するには、常法にしたがえば
よく、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、
安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張剤その他常用される佐薬
を適宜使用する。

【００３９】本発明に係る薬剤組成物の投与量は、その
種類、治療ないし予防対象疾病の種類、投与方法、患者
の年令、患者の症状、処理時間等によって相違するが、
静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分（ＦＲ
１７７３９１または／およびその塩）を０．０１〜１０
００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ
投与し、筋肉投与の場合は同じく０．０１〜１０００ｍ
ｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ投与
し、経口投与の場合は０．５〜２０００ｍｇ／ｋｇ、好
ましくは１〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲内で投与する。

【００４０】以下、本発明を実施例について更に詳しく
説明する。

【００４１】

【実施例１：ＦＲ１７７３９１の発酵生産】

【００４２】（１）培養 酵母エキス（０．５％）、ポリペプトン（１％）、塩化
ナトリウム（０．５％）の組成の種培地を５００ｍｌ容
エルレンマイヤーフラスコ１５本にそれぞれ１２０ｍｌ
ずつ加え、１２０℃で３０分間滅菌する。それらにＳｅ
ｒｒａｔｉａｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ Ｎｏ．１８２
１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４４７５）の斜面培養物をそれ
ぞれ１白金耳ずつ接種し、ロータリーシェーカーで毎分
２５０回転、３０℃で１日振とう培養する。あらかじめ
グリセリン（２％）、グルコース（１％）、コーンステ
ィープリカー（１％）、脱脂大豆粉（１％）、肉エキス
（０．２％）、硫酸アンモニウム（０．２％）、硫酸マ
グネシウムの７水和物（０．０１％）、炭酸カルシウム
（０．２％）の組成物の培地（ｐＨ７．０）１００Ｌを
３０Ｌ容ジャーファーメンター５基中に２０Ｌずつ注入
し、１２０℃で３０分間滅菌したあと、上記培養物を３
６０ｍｌずつ接種して、通気量１ＶＶＭ、撹拌速度毎分
２００回転、培養温度２５℃にて、３日間培養する。

【００４３】（２）精製 培養終了後、培養物（１００Ｌ）に等量のアセトンを加
え、１時間室温にて抽出する。けい藻土４ｋｇを添加
し、ろ過する。得られたろ液（１６０Ｌ）を１００Ｌま
で減圧濃縮する。この濃縮物のｐＨを７に修正したあ
と、等量の酢酸エチルを加え、抽出する。抽出残査に再
び等量の酢酸エチルを加え、抽出を繰り返す。得られた
抽出液を減圧濃縮し、得られた油状物質（３０ｇ）をシ
リカゲルクロマトグラフィー（１Ｌ）に付す。このカラ
ムをｎ−ヘキサン（３Ｌ）、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エ
チル（１：１；ｖ／ｖ）の混液（３Ｌ）、酢酸エチル
（３Ｌ）、酢酸エチルおよびアセトン（１：１；ｖ／
ｖ）の混液（３Ｌ）、アセトン（３Ｌ）で洗った後、ア
セトンおよびメタノール（１：１；ｖ／ｖ）の混液（３
Ｌ）で溶出する。

【００４４】活性溶出液を減圧濃縮し、得られた油状物
質（２．６ｇ）を再びシリカゲルクロマトグラフィー
（１００ｍｌ）に付す。カラムをジクロロメタン（３０
０ｍｌ）、ジクロロメタンおよびメタノール（５０：
１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍｌ）、ジクロロメタンお
よびメタノール（２０：１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍ
ｌ）、ジクロロメタンおよびメタノール（１０：１；ｖ
／ｖ）の混液（３００ｍｌ）で洗った後、ジクロロメタ
ンおよびメタノール（５：１；ｖ／ｖ）の混液（３００
ｍｌ）、次いでジクロロメタンおよびメタノール（２：
１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍｌ）で溶出する。活性溶
出液を減圧濃縮し、得られた油状物質（１８０ｍｇ）を
１０ｍｌのメタノールに溶かす。このメタノール溶液を
逆相樹脂「ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＭ」（商標、ＹＭＣ社
製）（ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ−５０タイプ）を充填
したカラム（３５０ｍｌ）に付す。カラムを３５％水性
アセトニトリル−５０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）にて展開し、活性画分を減圧濃縮し、溶媒を除去し
た後に酢酸エチルで抽出する。得られた抽出液を減圧濃
縮し、粗粉末１０２ｍｇを得る。

【００４５】粗粉末をシリカゲルクロマトグラフィー
（１０ｍｌ）に付す。このカラムをｎ−ヘキサン（３０
ｍｌ）、ｎ−ヘキサンおよびアセトン（１：１；ｖ／
ｖ）の混液（３０ｍｌ）、アセトン（３０ｍｌ）、アセ
トンおよびメタノール（３：１；ｖ／ｖ）の混液（３０
ｍｌ）で洗った後、アセトンおよびメタノール（１：
１；ｖ／ｖ）の混液（３０ｍｌ）、次いでメタノール
（３０ｍｌ）で溶出する。活性画分を減圧濃縮し、得ら
れた粗粉末３６ｍｇを１ｍｌのメタノールに溶かす。こ
のメタノール溶液を逆相樹脂「ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＭ」
（商標、ＹＭＣ社製）（ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ−５
タイプ）を充填したＨＰＬＣカラムＡＭ−３０３（ｉ．
ｄ．２５０×４．６ｍｍ）に付す。カラムを３５％水性
アセトニトリル−５０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）にて展開し、活性画分を減圧濃縮し、溶媒を除去し
た後に酢酸エチルで３回抽出する。得られた抽出液を合
わせて減圧濃縮し、乾燥してＦＲ１７７３９１物質の粉
末（２５ｍｇ）を得る。

【００４６】

【実施例２：ＦＲ１７７３１の生物化学的性質】

【００４７】（１）ＢＣＧ及びＬＰＳ投与ウサギ血清
（２％）による３Ｔ３Ｌ₁細胞のＬＰＬ活性抑制に対す
る拮抗（回復）作用」 次のようにして、ＬＰＬ活性抑制に対するＦＲ１７７３
９１物質の拮抗作用ないし回復作用を測定した。

【００４８】ｉ）方法 ＢＣＧ及びＬＰＳ投与ウサギ血清：白色家兎Ｎｅｗ Ｚ
ｅａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅ（１２週令、雌）の耳静脈か
ら経皮用乾燥ＢＣＧ（日本ＢＣＧ製造（株））を４０ｍ
ｇ（／ｍｌ／ｈｅａｄ）を投与し、２週間飼育したあ
と、さらに耳静脈からＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ８，Ｄ
ｉｆｃｏ）１００μｇ（／ｍｌ／ｈｅａｄ）を投与す
る。投与１時間３０分後、ウサギ耳静脈より全血採血
し、血液を３７℃で２時間、静置した後、遠心分離（３
０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）により、血清画分を得る。
血清は、５６℃、３０分間加熱処理により非働化し、さ
らにミリポアフィルターでろ過滅菌したものを実験に供
した。

【００４９】ＭＥＭ培地（１０％ウシ胎児血清ＦＢＳ添
加）を用いてＦ７５フラスコ（コーニング社）で継代培
養してきた３Ｔ３Ｌ₁細胞を、トリプシン処理して得た
細胞懸濁液を、２×１０⁴ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになる
ように９６穴マイクロタイタープレートに撒いた。３７
℃、５％ＣＯ₂インキュベーター中で２日間培養した。
培養２日後、培養培地（ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）を抜き
取り、分化誘導培地（デキサメサゾン１μＭ、イソ−ブ
チル−メチル−キサンチン０．５ｍＭおよびインシュリ
ン１０μｇ／ｍｌ含有のＭＥＭ培地）を１００μｌずつ
新たに加え、さらに培養を続けた。培養２日後（培養開
始４日目）に、培養培地を抜き取り、ウサギ血清（１．
５〜２％）を含むＭＥＭ培地で、希釈したサンプル液１
００μｌを加え、さらに５日間培養した後、３Ｔ３Ｌ₁
細胞の脂肪細胞への分化程度を、ＬＰＬ活性定量あるい
は細胞の分化程度を検鏡することによって測定した。

【００５０】この測定により、ＢＣＧ次いでＬＰＳを投
与したウサギ血清による３Ｔ３Ｌ₁細胞の脂肪細胞への
分化に伴うＬＰＬ活性発現の抑制に対する、サンプルの
回復作用を検討することが可能となった。

【００５１】ＬＰＬ活性の測定：ＬＰＬ活性はＬＰＬを
９６穴の各穴細胞を凍結融解した後ヘパリンで細胞から
溶出させた培養液を酵素液（１０μｌ）として、これに
ウシ血清アルブミン（２％）、硫安（０．０５％）、基
質としてトリグリセライド・エマルジョン（１％）を加
え、反応液総量５０μｌを用いてＮＥＦＡＣテストワコ
ー・キットによりＦＦＡを定量して、ＬＰＬ活性の測定
を行った。

【００５２】ii）結果 ＢＣＧ次いでＬＰＳを投与したウサギ血清による３Ｔ３
Ｌ₁細胞の脂肪細胞への分化に伴うＬＰＬ活性発現の抑
制に対するＦＲ１７７３９１物質の拮抗（回復）作用濃
度ＥＤ₅₀：ｎｇ／ｍｌ）は、次のとおりであった。 ＦＲ１７７３９１物質：０．０１〜０．０２

【００５３】（２）ＴＮＦ−αによる３Ｔ３Ｌ₁細胞の
ＬＰＬ活性抑制に対する拮抗作用 ｉ）３Ｔ３Ｌ₁細胞を前述（１）の方法に従って培養
し、分化誘導培地添加した培養後、ヒトＴＮＦ−α（２
５ｎｇ／ｍｌ）を含むＭＥＭ培地で希釈したサンプルを
加え分化を抑制させ、さらに５日間培養して、ＴＮＦ−
αによる３Ｔ３Ｌ₁細胞の脂肪細胞への分化抑制に対す
る回復程度を測定した。

【００５４】ii）結果 ＦＲ１７７３９１物質のＬＰＬ活性抑制に対する拮抗
（回復）作用濃度（ＥＤ₅₀：ｎｇ／ｍｌ）は、次のとお
りであった。 ＦＲ１７７３９１物質：０．５〜１．０

【００５５】（３）抗腫瘍活性（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）
（細胞毒性） ＦＲ１７７３９１のヒト乳腺癌（ＭＣＦ−７）、ヒト肺
腺癌（Ａ５４９）、ヒトＴ細胞白血病（Ｊｕｒｋａ
ｔ）、ヒト組織球性リンパ腫（Ｕ９３７）、ＳＶ４０形
質転換ヒト線維芽細胞（２９３ＳＶ４０）、マウス白血
病細胞（Ｐ３８８）および対照としてマウス骨髄細胞に
対する細胞増殖抑制活性を調べた。活性検定は常法によ
ったが、細胞濃度５×１０³／ｗｅｌｌで培養を開始
し、４日目に生細胞数をＭＴＴ法にて定量した。ただ
し、マウス骨髄細胞については１．５×１０⁴／ｗｅｌ
ｌの細胞濃度を用いた。結果を表９にまとめた。

【００５６】

【表９】

【００５７】上記結果から明らかなように、癌細胞であ
るＭＣＦ−７、Ｊｕｒｋａｔ、Ｕ９３７、２９３ＳＶ４
０及びＰ３８８に対して、ＦＲ１７７３９１物質はすぐ
れた抗腫瘍活性を示すものである。

【００５８】（４）毒性試験 生後５週令のＩＣＲ系雌マウス５匹にＦＲ１７７３９１
物質を５ｍｇ／ｋｇの投与量で毎日１回、３日間連続腹
腔内注射したが死亡例はなく、体重増加も無投与マウス
群と全く同じであり、ＦＲ１７７３９１物質の安全性の
高さが確認された。

【００５９】

【実施例３：注射剤の製造】 （１）実施例１で製造したＦＲ１７７３９１物質 ５ｇ （２）食塩 ９ｇ （３）炭酸水素ナトリウム １ｇ

【００６０】（１）〜（３）の全成分を蒸留水１００ｍ
ｌに溶解した後、アンプルに１ｍｌずつ分注して、注射
剤１００本を製造した。

【００６１】

【発明の効果】本発明は、ＦＲ１７７３９１物質を提供
するものであるが、この物質は従来未知の新規物質であ
って、すぐれたＬＰＬ活性抑制に対する拮抗作用ないし
回復作用を示し、癌悪液質治療剤、抗腫瘍剤等ＬＰＬ活
性回復医薬製剤として各種の医薬品に利用することがで
きる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＦＲ１７７３９１物質の¹Ｈ核磁気共鳴スペク
トルを示すチャートである。

【図２】ＦＲ１７７３９１物質の¹³Ｃ核磁気共鳴スペク
トルを示すチャートである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:425） (72)発明者 寺野 紘 茨城県土浦市真鍋2600−３

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記表１に示される物性を有することを
   特徴とするＦＲ１７７３９１物質。 【表１】
2. 【請求項２】 ＦＲ１７７３９１物質生産菌を培養して
   ＦＲ１７７３９１物質を生産せしめ、これを採取するこ
   とを特徴とするＦＲ１７７３９１物質の製造方法。
3. 【請求項３】 ＦＲ１７７３９１物質生産菌がセラチア
   （Ｓｅｒｒａｔｉａ）属に属する微生物であることを特
   徴とする請求項２に記載の製造方法。
4. 【請求項４】 ＦＲ１７７３９１物質を有効成分とする
   リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）活性回復医薬製剤。
5. 【請求項５】 ＬＰＬ活性回復医薬製剤が癌悪液質治療
   剤である請求項４に記載の医薬製剤。
6. 【請求項６】 ＬＰＬ活性回復医薬製剤が抗腫瘍剤であ
   る請求項４に記載の医薬製剤。