JPH0859461A - Ａｃａｔ阻害剤 - Google Patents
Ａｃａｔ阻害剤Info
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- JPH0859461A JPH0859461A JP6203351A JP20335194A JPH0859461A JP H0859461 A JPH0859461 A JP H0859461A JP 6203351 A JP6203351 A JP 6203351A JP 20335194 A JP20335194 A JP 20335194A JP H0859461 A JPH0859461 A JP H0859461A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 次式（１）
【化１】
で表されるオストール又は蛇床子抽出エキスを有効成分
とするＡＣＡＴ阻害剤、コレステロール吸収抑制剤及び
動脈硬化予防・治療剤。 【効果】 小腸、肝臓及びマクロファージのＡＣＡＴ活
性を特異的に阻害し、コレステロール吸収抑制剤又は動
脈硬化予防・治療剤として有用である。
とするＡＣＡＴ阻害剤、コレステロール吸収抑制剤及び
動脈硬化予防・治療剤。 【効果】 小腸、肝臓及びマクロファージのＡＣＡＴ活
性を特異的に阻害し、コレステロール吸収抑制剤又は動
脈硬化予防・治療剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アシルコエンザイム
Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡ
Ｔ）阻害剤に関し、更に詳細にはオカゼリ（蛇床）の果
実（蛇床子）に含まれるオストールを有効成分とするＡ
ＣＡＴ阻害剤に関する。
Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡ
Ｔ）阻害剤に関し、更に詳細にはオカゼリ（蛇床）の果
実（蛇床子）に含まれるオストールを有効成分とするＡ
ＣＡＴ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】食生活
の欧米化に伴って、わが国における虚血性心疾患の発生
頻度は著しく増加している。欧米型の食生活によって上
昇する血中のコレステロール値と動脈硬化症の関係は、
多くの疫学的研究で明らかにされてきた。すなわち、血
清コレステロール値と虚血性心疾患発生頻度との間には
有意な相関があり、高コレステロール血症を治療するこ
とが動脈硬化症を予防するといわれている。動脈硬化症
は、血管への脂質蓄積による内膜の肥厚が特徴的な病変
であるが、近年粥状動脈硬化症の病巣に、マクロファー
ジ由来の細胞がコレステロールエステルを脂肪滴として
貯蔵している泡末細胞が観察され、病変の進展に深く関
わっていると推定されている。
の欧米化に伴って、わが国における虚血性心疾患の発生
頻度は著しく増加している。欧米型の食生活によって上
昇する血中のコレステロール値と動脈硬化症の関係は、
多くの疫学的研究で明らかにされてきた。すなわち、血
清コレステロール値と虚血性心疾患発生頻度との間には
有意な相関があり、高コレステロール血症を治療するこ
とが動脈硬化症を予防するといわれている。動脈硬化症
は、血管への脂質蓄積による内膜の肥厚が特徴的な病変
であるが、近年粥状動脈硬化症の病巣に、マクロファー
ジ由来の細胞がコレステロールエステルを脂肪滴として
貯蔵している泡末細胞が観察され、病変の進展に深く関
わっていると推定されている。
【０００３】一方、アシルコエンザイムＡ：コレステロ
ールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）は、コレス
テロールの脂肪酸エステル化酵素であり、本酵素の阻害
剤は動脈硬化症の治療薬として期待されている（Ｄｒａ
ｇｏ Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｐｓ １９４，（１
２），１９９１）。すなわち、動脈硬化病変部位の血管
壁ではＡＣＡＴ活性が高くなっており、血管壁へコレス
テロールエステルが蓄積していることが報告されてい
る。従って、ＡＣＡＴ活性抑制作用を有する物質を用い
れば、コレステロールのエステル化を阻害することがで
き、細胞に存在する遊離コレステロールは高比重リポ蛋
白（ＨＤＬ）によって、沈着部位から取り去られ、肝臓
に運ばれて代謝されるので、病変部位でのコレステロー
ルエステルの蓄積が抑制され、直接的な抗動脈硬化作用
を得ることができる。
ールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）は、コレス
テロールの脂肪酸エステル化酵素であり、本酵素の阻害
剤は動脈硬化症の治療薬として期待されている（Ｄｒａ
ｇｏ Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｐｓ １９４，（１
２），１９９１）。すなわち、動脈硬化病変部位の血管
壁ではＡＣＡＴ活性が高くなっており、血管壁へコレス
テロールエステルが蓄積していることが報告されてい
る。従って、ＡＣＡＴ活性抑制作用を有する物質を用い
れば、コレステロールのエステル化を阻害することがで
き、細胞に存在する遊離コレステロールは高比重リポ蛋
白（ＨＤＬ）によって、沈着部位から取り去られ、肝臓
に運ばれて代謝されるので、病変部位でのコレステロー
ルエステルの蓄積が抑制され、直接的な抗動脈硬化作用
を得ることができる。
【０００４】また、食物中に含まれるコレステロール
は、小腸粘膜細胞においてＡＣＡＴによりエステル化さ
れた後、カイロミクロンの成分として血流に放出され
る。よって、ＡＣＡＴ阻害剤を用いれば、食物中のコレ
ステロールの小腸上皮細胞での吸収を阻害することによ
り、血中コレステロールを低下させることができるた
め、その結果として、動脈硬化を抑制することができ
る。
は、小腸粘膜細胞においてＡＣＡＴによりエステル化さ
れた後、カイロミクロンの成分として血流に放出され
る。よって、ＡＣＡＴ阻害剤を用いれば、食物中のコレ
ステロールの小腸上皮細胞での吸収を阻害することによ
り、血中コレステロールを低下させることができるた
め、その結果として、動脈硬化を抑制することができ
る。
【０００５】また、カイロミクロンによって肝臓まで運
ばれたコレステロールエステルはコレステロールエステ
ラーゼで遊離コレステロールに分解された後、肝臓で合
成された遊離コレステロールとともにＡＣＡＴによって
再度コレステロールエステルに変換され、超低比重リポ
蛋白（ＶＬＤＬ）に組み込まれて血中へと放出される。
よって、ＡＣＡＴ阻害剤によってコレステロールのエス
テル化が阻止されれば、肝臓の遊離コレステロール量が
増加し、コレステロール合成系の抑制がかかるととも
に、コレステロールの胆汁酸への変換の過程における律
速酵素である７α−水酸化酵素活性が亢進し、コレステ
ロールの胆汁酸への異化***作用が高まる。
ばれたコレステロールエステルはコレステロールエステ
ラーゼで遊離コレステロールに分解された後、肝臓で合
成された遊離コレステロールとともにＡＣＡＴによって
再度コレステロールエステルに変換され、超低比重リポ
蛋白（ＶＬＤＬ）に組み込まれて血中へと放出される。
よって、ＡＣＡＴ阻害剤によってコレステロールのエス
テル化が阻止されれば、肝臓の遊離コレステロール量が
増加し、コレステロール合成系の抑制がかかるととも
に、コレステロールの胆汁酸への変換の過程における律
速酵素である７α−水酸化酵素活性が亢進し、コレステ
ロールの胆汁酸への異化***作用が高まる。
【０００６】このように、ＡＣＡＴ阻害物質を用いれ
ば、食物中のコレステロールの小腸からの吸収の阻害、
肝臓でのコレステロールの再エステル化の抑制、更にこ
れによるコレステロールの異化***促進作用により血中
コレステロールを低下させることができる。
ば、食物中のコレステロールの小腸からの吸収の阻害、
肝臓でのコレステロールの再エステル化の抑制、更にこ
れによるコレステロールの異化***促進作用により血中
コレステロールを低下させることができる。
【０００７】従来、天然由来のＡＣＡＴ阻害物質として
は、微生物が産生する物質がいくつか知られているが、
植物由来のＡＣＡＴ阻害物質は未だ見出されていない。
は、微生物が産生する物質がいくつか知られているが、
植物由来のＡＣＡＴ阻害物質は未だ見出されていない。
【０００８】
【課題を解決するための手段】かかる実情において本発
明者らは、植物の成分中にＡＣＡＴ活性調節作用を有す
る活性成分の探索を続けた結果、セリ科の植物でハマゼ
リ属に属する、オカゼリ（蛇床：Ｃｎｉｄｉｕｍ ｍｏ
ｎｎｉｅｒｉ）の果実（蛇床子）のアルコール抽出エキ
スがＡＣＡＴ阻害作用を有することを見出した。そして
更に該エキスからＡＣＡＴ阻害活性を有する物質を単
離、精製した結果、その活性物質が次式（１）
明者らは、植物の成分中にＡＣＡＴ活性調節作用を有す
る活性成分の探索を続けた結果、セリ科の植物でハマゼ
リ属に属する、オカゼリ（蛇床：Ｃｎｉｄｉｕｍ ｍｏ
ｎｎｉｅｒｉ）の果実（蛇床子）のアルコール抽出エキ
スがＡＣＡＴ阻害作用を有することを見出した。そして
更に該エキスからＡＣＡＴ阻害活性を有する物質を単
離、精製した結果、その活性物質が次式（１）
【０００９】
【化２】
【００１０】で表されるオストールであることを見出
し、本発明を完成した。
し、本発明を完成した。
【００１１】すなわち本発明は、オストールを有効成分
とするＡＣＡＴ阻害剤に係るものである。
とするＡＣＡＴ阻害剤に係るものである。
【００１２】また、本発明は、蛇床子の抽出エキスを有
効成分とするＡＣＡＴ阻害剤に係るものである。
効成分とするＡＣＡＴ阻害剤に係るものである。
【００１３】本発明に使用されるオストールとしては、
その由来に特に制限はなく、天然由来、全合成品、半合
成品を問わずいずれも利用できる。
その由来に特に制限はなく、天然由来、全合成品、半合
成品を問わずいずれも利用できる。
【００１４】オストール起源として植物を利用する場
合、オストールを含有する植物としては、例えばセリ科
ハマゼリ属の植物が挙げられ、特に中国産オカゼリ（蛇
床：Ｃｎｉｄｉｕｍ ｍｏｎｎｉｅｒｉ）の果実（蛇床
子）が好適に用いられる。
合、オストールを含有する植物としては、例えばセリ科
ハマゼリ属の植物が挙げられ、特に中国産オカゼリ（蛇
床：Ｃｎｉｄｉｕｍ ｍｏｎｎｉｅｒｉ）の果実（蛇床
子）が好適に用いられる。
【００１５】オカゼリ（蛇床）は中国東北部原産でモン
ゴル、シベリア、ウスリー、朝鮮半島に分布する越年草
であり、その果実を採取して乾燥したものを蛇床子と呼
んでいる。蛇床子は消炎、収れん、強精等の目的で古来
用いられている漢方薬であり、そのエキスには抗トリコ
モナス作用、性ホルモン様作用等が報告されている。し
かし、そのＡＣＡＴ阻害作用については全く報告されて
いない。
ゴル、シベリア、ウスリー、朝鮮半島に分布する越年草
であり、その果実を採取して乾燥したものを蛇床子と呼
んでいる。蛇床子は消炎、収れん、強精等の目的で古来
用いられている漢方薬であり、そのエキスには抗トリコ
モナス作用、性ホルモン様作用等が報告されている。し
かし、そのＡＣＡＴ阻害作用については全く報告されて
いない。
【００１６】蛇床子からの抽出エキスないしオストール
の採取は、例えば以下のようにして行われる。まず抽出
エキスは、蛇床子をメタノール、エタノール、アセトン
等の極性有機溶媒で抽出し、得られた抽出液を減圧濃縮
することにより得られる。ここで、この抽出エキスをそ
のままＡＣＡＴ阻害剤に使用することもできるが、必要
に応じて以下のように精製し、各段階の精製物をＡＣＡ
Ｔ阻害剤に使用することもできる。抽出エキスの精製
は、例えばまず抽出エキスをエーテルと水とで振り分
け、このエーテル層を濃縮してシリカゲルカラムに重層
し、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（１：
１）、酢酸エチル、メタノールの４種の溶媒で順次溶出
することによって活性成分の分画を行う。次いで、溶出
液の活性画分を減圧乾固することにより粗活性物質が得
られる。これを高速液体クロマトグラフィーを用いた逆
相Ｃ18カラムによりアセトニトリル：水（８０：５０）
の溶媒系から分離精製することによりオストールが得ら
れる。また、必要に応じて分取薄層クロマトグラフィー
による精製を行うことができる。
の採取は、例えば以下のようにして行われる。まず抽出
エキスは、蛇床子をメタノール、エタノール、アセトン
等の極性有機溶媒で抽出し、得られた抽出液を減圧濃縮
することにより得られる。ここで、この抽出エキスをそ
のままＡＣＡＴ阻害剤に使用することもできるが、必要
に応じて以下のように精製し、各段階の精製物をＡＣＡ
Ｔ阻害剤に使用することもできる。抽出エキスの精製
は、例えばまず抽出エキスをエーテルと水とで振り分
け、このエーテル層を濃縮してシリカゲルカラムに重層
し、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（１：
１）、酢酸エチル、メタノールの４種の溶媒で順次溶出
することによって活性成分の分画を行う。次いで、溶出
液の活性画分を減圧乾固することにより粗活性物質が得
られる。これを高速液体クロマトグラフィーを用いた逆
相Ｃ18カラムによりアセトニトリル：水（８０：５０）
の溶媒系から分離精製することによりオストールが得ら
れる。また、必要に応じて分取薄層クロマトグラフィー
による精製を行うことができる。
【００１７】このようにして得られるオストール又は蛇
床子抽出エキスは、小腸、肝臓及びマクロファージのＡ
ＣＡＴの活性を特異的に阻害する。このため、これらを
有効成分とする本発明ＡＣＡＴ阻害剤は、コレステロー
ル吸収抑制剤、又は動脈硬化症もしくはこれに起因する
動脈硬化性病変の予防・治療剤として有用である。
床子抽出エキスは、小腸、肝臓及びマクロファージのＡ
ＣＡＴの活性を特異的に阻害する。このため、これらを
有効成分とする本発明ＡＣＡＴ阻害剤は、コレステロー
ル吸収抑制剤、又は動脈硬化症もしくはこれに起因する
動脈硬化性病変の予防・治療剤として有用である。
【００１８】また、蛇床子は従来漢方薬として用いられ
ているものであり、オストールはその成分であるので、
本発明ＡＣＡＴ阻害剤は安全性の点で問題はない。
ているものであり、オストールはその成分であるので、
本発明ＡＣＡＴ阻害剤は安全性の点で問題はない。
【００１９】オストール又は蛇床子抽出エキスは、単独
で又は薬理的に許容される担体等とともに、経口的に投
与するのが好ましい。経口製剤としては、例えば錠剤、
カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、トローチ剤、シロップ剤
等が挙げられる。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、
トローチ剤等の固型製剤においては、オストール又は蛇
床子抽出エキス以外にデンプン、ラクトース、カルボキ
シメチルセルロース、沈降炭酸カルシウム等の賦形剤；
アラビアゴム、トラガントゴム、ゼラチン、メチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース等の結合剤、アル
ギン酸、コーンスターチ等の崩壊剤；ステアリン酸マグ
ネシウム、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸等の滑沢
剤、サッカロース等の甘味剤、メントール等のフレーバ
ー剤等を配合することができる。シロップ剤など液状製
剤においては、オストール又は蛇床子抽出エキス以外に
ソルビトール、ゼラチン、メチルセルロース、植物油、
乳化剤等のほか甘味剤、フレーバー剤、着色剤等を配合
することができる。これらの製剤中には１〜９５重量％
のオストールを配合するのが望ましい。
で又は薬理的に許容される担体等とともに、経口的に投
与するのが好ましい。経口製剤としては、例えば錠剤、
カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、トローチ剤、シロップ剤
等が挙げられる。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、
トローチ剤等の固型製剤においては、オストール又は蛇
床子抽出エキス以外にデンプン、ラクトース、カルボキ
シメチルセルロース、沈降炭酸カルシウム等の賦形剤；
アラビアゴム、トラガントゴム、ゼラチン、メチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース等の結合剤、アル
ギン酸、コーンスターチ等の崩壊剤；ステアリン酸マグ
ネシウム、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸等の滑沢
剤、サッカロース等の甘味剤、メントール等のフレーバ
ー剤等を配合することができる。シロップ剤など液状製
剤においては、オストール又は蛇床子抽出エキス以外に
ソルビトール、ゼラチン、メチルセルロース、植物油、
乳化剤等のほか甘味剤、フレーバー剤、着色剤等を配合
することができる。これらの製剤中には１〜９５重量％
のオストールを配合するのが望ましい。
【００２０】
（１）ラット由来ＡＣＡＴに対する阻害作用 オストールのＡＣＡＴ活性に対する影響を、ラット肝臓
のミクロゾーム蛋白画分より調製した粗酵素を用い、14
Ｃ−オレオイルＣｏＡを基質に、内因性のコレステロー
ルから14Ｃ−コレステリルオレエートを生成させる反応
をインビトロで行うことにより調べた。
のミクロゾーム蛋白画分より調製した粗酵素を用い、14
Ｃ−オレオイルＣｏＡを基質に、内因性のコレステロー
ルから14Ｃ−コレステリルオレエートを生成させる反応
をインビトロで行うことにより調べた。
【００２１】反応液組成は、２０μｌのミクロゾーム蛋
白（１．８３mg／ml）、２０μｌの 14Ｃ−オレオイルＣ
ｏＡ（５μＣｉ／ml、ＢＳＡ：９６nmol／ml）、１０６
μｌの１００mMリン酸緩衝液（５mMのジチオスレイトー
ルを含む、pH７．４）、及び４μｌのメタノールあるい
はジメチルスルホキシドに溶解したオストールの合計１
５０μｌとした。
白（１．８３mg／ml）、２０μｌの 14Ｃ−オレオイルＣ
ｏＡ（５μＣｉ／ml、ＢＳＡ：９６nmol／ml）、１０６
μｌの１００mMリン酸緩衝液（５mMのジチオスレイトー
ルを含む、pH７．４）、及び４μｌのメタノールあるい
はジメチルスルホキシドに溶解したオストールの合計１
５０μｌとした。
【００２２】反応は３７℃で行い、所定の反応時間（通
常１８分間）経過後、５．６５mlのクロロホルム：メタ
ノール（２：１）を添加して反応を停止した後、０．０
４Ｎの塩酸水溶液０．９８ml及びキャリアーとしてコレ
ステリルオレエートを加え、２０分間振盪機で抽出した
後、１晩冷暗所に放置した。翌日、分離したクロロホル
ム下層全量を抜き取り、これを窒素気流下に乾燥させ、
残った上層にホルチの分配溶液下層５．６５mlを加えて
再度抽出した。これを１晩暗所に放置した後、下層全量
を抜き取り、先に乾固したクロロホルム下層画分と合わ
せて乾固した。
常１８分間）経過後、５．６５mlのクロロホルム：メタ
ノール（２：１）を添加して反応を停止した後、０．０
４Ｎの塩酸水溶液０．９８ml及びキャリアーとしてコレ
ステリルオレエートを加え、２０分間振盪機で抽出した
後、１晩冷暗所に放置した。翌日、分離したクロロホル
ム下層全量を抜き取り、これを窒素気流下に乾燥させ、
残った上層にホルチの分配溶液下層５．６５mlを加えて
再度抽出した。これを１晩暗所に放置した後、下層全量
を抜き取り、先に乾固したクロロホルム下層画分と合わ
せて乾固した。
【００２３】次に、これを２００μｌのクロロホルムに
溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｇ６０プ
レート（アルミニウムシート）に全量塗布した。これを
ジエチルエーテル：石油エーテル（１０：１９０）で１
０cm展開した後、オートラジオグラフィーを行い、生成
した14Ｃ−コレステリルオレエートを確認した。次にこ
の部分を切りとって、トルエン中で各試料共５分間の液
体シンチレーションカウンティングあるいはベータスコ
ープ（ベータ・ジェン社製）によって３０分間放射活性
を測定した。本酵素を５０％阻害する濃度を測定した結
果、オストールのＩＣ50値は２０μＭであった。
溶解し、シリカゲル薄層クロマトグラフィー Ｇ６０プ
レート（アルミニウムシート）に全量塗布した。これを
ジエチルエーテル：石油エーテル（１０：１９０）で１
０cm展開した後、オートラジオグラフィーを行い、生成
した14Ｃ−コレステリルオレエートを確認した。次にこ
の部分を切りとって、トルエン中で各試料共５分間の液
体シンチレーションカウンティングあるいはベータスコ
ープ（ベータ・ジェン社製）によって３０分間放射活性
を測定した。本酵素を５０％阻害する濃度を測定した結
果、オストールのＩＣ50値は２０μＭであった。
【００２４】（２）マクロファージに対するコレステロ
ールエステル蓄積抑制作用 オストールのマクロファージに対するコレステロールエ
ステル蓄積抑制作用を、マウスのマクロファージ樹立細
胞であるＪ７７１．４株を用いて調べた。
ールエステル蓄積抑制作用 オストールのマクロファージに対するコレステロールエ
ステル蓄積抑制作用を、マウスのマクロファージ樹立細
胞であるＪ７７１．４株を用いて調べた。
【００２５】内皮細胞や平滑筋細胞におけるＬＤＬの代
謝は細胞内の過剰の遊離コレステロールによって、ＬＤ
Ｌレセプターのダウンレギュレーションがかかるが、マ
クロファージにおいては変性ＬＤＬの取り込みは、スカ
ベンジャーレセプター経由による。この経路はレギャレ
ーションがかからないためコレステロールエステルが無
制限に蓄積してゆく。
謝は細胞内の過剰の遊離コレステロールによって、ＬＤ
Ｌレセプターのダウンレギュレーションがかかるが、マ
クロファージにおいては変性ＬＤＬの取り込みは、スカ
ベンジャーレセプター経由による。この経路はレギャレ
ーションがかからないためコレステロールエステルが無
制限に蓄積してゆく。
【００２６】そこで、14Ｃでラベルしたコレステロール
とホスファチジルコリンからなるリポソームをマクロフ
ァージ細胞に取り込ませ、粗面小胞体に存在するＡＣＡ
Ｔに作用させることにより、オストールが細胞内コレス
テロールエステルの蓄積を抑制するか否かを調べた。
とホスファチジルコリンからなるリポソームをマクロフ
ァージ細胞に取り込ませ、粗面小胞体に存在するＡＣＡ
Ｔに作用させることにより、オストールが細胞内コレス
テロールエステルの蓄積を抑制するか否かを調べた。
【００２７】マクロファージ細胞を１０％牛胎児血清、
ペニシリン５０Ｕ／ml及びストレプトマイシン５０μｇ
／mlを加えたＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬社製）
にて、２日間、５％ＣＯ2の条件にてインキュベートし
た。次いで、トリプシン処理を行い、ウェルの底面に付
着している細胞を剥がして細胞懸濁液とした後、細胞を
上記新鮮培地で洗浄し、２４穴のマルチプルウェルプレ
ート（コーニング社製２５８２０−２４）に１ウェル当
たり２×１０6個／mlの細胞溶液７５０μｌを播種し
た。３７℃、５％ＣＯ2の条件下で３７時間培養した後
に前記新鮮培地と交換し、更に８０μｇのコレステロー
ル（０．４μＣｉの3Ｈ−コレステロールを含む）と１
６０μｇのホスファチジルコリンを含んだ０．３Ｍのグ
ルコース溶液４０μｌ、及びオストールを溶解したメタ
ノール溶液１０μｌを添加して、１２時間培養した。こ
れらの操作は無菌的に行った。
ペニシリン５０Ｕ／ml及びストレプトマイシン５０μｇ
／mlを加えたＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬社製）
にて、２日間、５％ＣＯ2の条件にてインキュベートし
た。次いで、トリプシン処理を行い、ウェルの底面に付
着している細胞を剥がして細胞懸濁液とした後、細胞を
上記新鮮培地で洗浄し、２４穴のマルチプルウェルプレ
ート（コーニング社製２５８２０−２４）に１ウェル当
たり２×１０6個／mlの細胞溶液７５０μｌを播種し
た。３７℃、５％ＣＯ2の条件下で３７時間培養した後
に前記新鮮培地と交換し、更に８０μｇのコレステロー
ル（０．４μＣｉの3Ｈ−コレステロールを含む）と１
６０μｇのホスファチジルコリンを含んだ０．３Ｍのグ
ルコース溶液４０μｌ、及びオストールを溶解したメタ
ノール溶液１０μｌを添加して、１２時間培養した。こ
れらの操作は無菌的に行った。
【００２８】培養終了後、血清を含まないＲＰＭＩ １
６４０培地を使用して底面に付着している細胞を５回駒
込ピペットで洗浄した後、１mlの２−プロパノールを添
加して細胞内のコレステロール及び生成したコレステロ
ールエステルを抽出した。この抽出液をシリカゲル薄層
クロマトグラフィー（メルク社製Ａｒｔ．５５５３）に
全量塗布し、ヘキサン：エーテル：ギ酸（８０：２０：
２）にて展開した後、オートラジオグラフィーを行っ
た。次に、3Ｈでラベルされたコレステロールエステル
及びコレステロール部分を切り取り、液体シンチレーシ
ョンカウンターにて放射活性を測定し、対照と比較して
コレステロールエステル蓄積抑制率を得た。その結果、
オストールのＩＣ50値は２０μＭであった。
６４０培地を使用して底面に付着している細胞を５回駒
込ピペットで洗浄した後、１mlの２−プロパノールを添
加して細胞内のコレステロール及び生成したコレステロ
ールエステルを抽出した。この抽出液をシリカゲル薄層
クロマトグラフィー（メルク社製Ａｒｔ．５５５３）に
全量塗布し、ヘキサン：エーテル：ギ酸（８０：２０：
２）にて展開した後、オートラジオグラフィーを行っ
た。次に、3Ｈでラベルされたコレステロールエステル
及びコレステロール部分を切り取り、液体シンチレーシ
ョンカウンターにて放射活性を測定し、対照と比較して
コレステロールエステル蓄積抑制率を得た。その結果、
オストールのＩＣ50値は２０μＭであった。
【００２９】
【実施例】以下、実施例を挙げて更に詳細に説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３０】製造例１ ５００ｇの蛇床子を、１０リットルのメタノールを用い
て１週間室温で冷浸抽出した。抽出液を濾過した後、減
圧濃縮及び乾固して３８．４ｇの粗抽出物を得た。次に
この粗抽出物をエーテルと水とで振り分けた。このエー
テル層を濃縮してシリカゲルカラム（内径５cm，長さ９
０cm）に重層し、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル（１：１）、酢酸エチル、メタノールの４種の溶媒
各１リットルで順次溶出し、活性成分の分画を行った。
て１週間室温で冷浸抽出した。抽出液を濾過した後、減
圧濃縮及び乾固して３８．４ｇの粗抽出物を得た。次に
この粗抽出物をエーテルと水とで振り分けた。このエー
テル層を濃縮してシリカゲルカラム（内径５cm，長さ９
０cm）に重層し、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル（１：１）、酢酸エチル、メタノールの４種の溶媒
各１リットルで順次溶出し、活性成分の分画を行った。
【００３１】溶出した液を１５０mlずつ分取し、活性画
分を減圧乾固して粗活性物質４．８５ｇを取得した。次
に、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５cmφ×６
０cm）に全粗抽出物を積層し、６００mlのクロロホルム
にて溶出した後、９５％クロロホルム：メタノール、９
０％クロロホルム：メタノール、及び８０％クロロホル
ム：メタノールそれぞれ６００mlにて順次溶出すること
により、活性画分を回収した。得られた粗活性物質は
３．５ｇであった。
分を減圧乾固して粗活性物質４．８５ｇを取得した。次
に、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５cmφ×６
０cm）に全粗抽出物を積層し、６００mlのクロロホルム
にて溶出した後、９５％クロロホルム：メタノール、９
０％クロロホルム：メタノール、及び８０％クロロホル
ム：メタノールそれぞれ６００mlにて順次溶出すること
により、活性画分を回収した。得られた粗活性物質は
３．５ｇであった。
【００３２】次に、この粗活性物質全量をクロロホル
ム：メタノール（９０：１０）を溶出液としたシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（５cmφ×１００cm）にて
再度クロマトグラフィー分画を行った。溶出液は１５０
mlずつ分取し、活性画分を減圧乾固して２．６ｇの粗活
性画分を取得した。
ム：メタノール（９０：１０）を溶出液としたシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（５cmφ×１００cm）にて
再度クロマトグラフィー分画を行った。溶出液は１５０
mlずつ分取し、活性画分を減圧乾固して２．６ｇの粗活
性画分を取得した。
【００３３】この内の１ｇを高速液体クロマトグラフィ
ー（ウォーターズ社製システム６００Ｅ）を用い、逆相
Ｃ18カラムを使用して、アセトニトリル：水（８０：２
０）の溶媒系により分離精製した結果、０．５３ｇの粗
活性画分を得た。
ー（ウォーターズ社製システム６００Ｅ）を用い、逆相
Ｃ18カラムを使用して、アセトニトリル：水（８０：２
０）の溶媒系により分離精製した結果、０．５３ｇの粗
活性画分を得た。
【００３４】このＡＣＡＴ阻害活性を示す成分は、更に
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（３：１）を展開溶媒とした
分取薄層クロマトグラフィー（メルク社製：シリカゲル
６０Ｆ254，Ａｒｔ．５７１７）によって精製を行っ
た。最後に活性成分をヘキサン−酢酸エチル中で再結晶
させることにより、無色柱状の結晶２６７mgを得た。そ
の純度は高速液体クロマトグラフィーによる分析で９５
％以上であった。
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（３：１）を展開溶媒とした
分取薄層クロマトグラフィー（メルク社製：シリカゲル
６０Ｆ254，Ａｒｔ．５７１７）によって精製を行っ
た。最後に活性成分をヘキサン−酢酸エチル中で再結晶
させることにより、無色柱状の結晶２６７mgを得た。そ
の純度は高速液体クロマトグラフィーによる分析で９５
％以上であった。
【００３５】以上のようにして得られた活性物質の理化
学的性状は、以下に示す通りであった。 （１）分子式：Ｃ15Ｈ16Ｏ3 （２）分子量：２４４（マススペクトルによりｍ／ｚ２
４４（Ｍ+）が観察された。） （３）紫外線吸収スペクトル（エタノール中）：第１図
の通り。 （４）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ中）：第２図の通
り。 （５）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトニトリル、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン
に可溶、水に不溶。 （６）塩基性、酸性、中性の区別：中性。 （７）物質の色、形状：白色、粉末。 （８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第３図の通り。1 H-NMR(DMSO-d6,400MHz,37c)δ：1.67(3H,s), 1.84(3H,
s),3.54(2H,d,J=8Hz), 3.92(3H,s),5.22(1H,t,J=8Hz),
6.22(1H,d,J=8Hz),6.83(1H,d,J=8Hz), 7.28(1H,d,J=12H
z),7.60(1H,d,J=12Hz). （９）化学構造：
学的性状は、以下に示す通りであった。 （１）分子式：Ｃ15Ｈ16Ｏ3 （２）分子量：２４４（マススペクトルによりｍ／ｚ２
４４（Ｍ+）が観察された。） （３）紫外線吸収スペクトル（エタノール中）：第１図
の通り。 （４）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ中）：第２図の通
り。 （５）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトニトリル、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン
に可溶、水に不溶。 （６）塩基性、酸性、中性の区別：中性。 （７）物質の色、形状：白色、粉末。 （８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第３図の通り。1 H-NMR(DMSO-d6,400MHz,37c)δ：1.67(3H,s), 1.84(3H,
s),3.54(2H,d,J=8Hz), 3.92(3H,s),5.22(1H,t,J=8Hz),
6.22(1H,d,J=8Hz),6.83(1H,d,J=8Hz), 7.28(1H,d,J=12H
z),7.60(1H,d,J=12Hz). （９）化学構造：
【００３６】
【化３】
【００３７】以上より、本活性物質はオストールと同定
された。
された。
【００３８】 実施例１ 錠剤 オストール ４０ｇ ラクトース ３６０ｇ ステアリン酸タルク ４０ｇ デンプン ６０ｇ 以上を混合機で混和し、打錠して０．５ｇの錠剤１００
０個を得た。
０個を得た。
【００３９】
【発明の効果】オストールは、小腸、肝臓及びマクロフ
ァージのＡＣＡＴの活性を特異的に阻害する。従って、
これを有効成分とする本発明ＡＣＡＴ阻害剤は、コレス
テロールの吸収抑制剤又は動脈硬化症もしくはこれに起
因する動脈硬化性病変の予防・治療剤として有用であ
る。
ァージのＡＣＡＴの活性を特異的に阻害する。従って、
これを有効成分とする本発明ＡＣＡＴ阻害剤は、コレス
テロールの吸収抑制剤又は動脈硬化症もしくはこれに起
因する動脈硬化性病変の予防・治療剤として有用であ
る。
【図面の簡単な説明】
【図１】蛇床子より抽出されたＡＣＡＴ阻害活性を示す
物質（オストール）の紫外線吸収スペクトルを示す図で
ある。
物質（オストール）の紫外線吸収スペクトルを示す図で
ある。
【図２】蛇床子より抽出されたＡＣＡＴ阻害活性を示す
物質（オストール）の赤外線吸収スペクトルを示す図で
ある。
物質（オストール）の赤外線吸収スペクトルを示す図で
ある。
【図３】蛇床子より抽出されたＡＣＡＴ阻害活性を示す
物質（オストール）のプロトン核磁気共鳴スペクトルを
示す図である。
物質（オストール）のプロトン核磁気共鳴スペクトルを
示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 渡辺 常一 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 (72)発明者 横倉 輝男 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内
Claims (4)
- 【請求項１】 次式（１） 【化１】 で表されるオストールを有効成分とするＡＣＡＴ阻害
剤。 - 【請求項２】 蛇床子の抽出エキスを有効成分とするＡ
ＣＡＴ阻害剤。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載のＡＣＡＴ阻害剤を
含有するコレステロール吸収抑制剤。 - 【請求項４】 請求項１又は２記載のＡＣＡＴ阻害剤を
含有する動脈硬化予防・治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20335194A JP3577110B2 (ja) | 1994-08-29 | 1994-08-29 | Ａｃａｔ阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20335194A JP3577110B2 (ja) | 1994-08-29 | 1994-08-29 | Ａｃａｔ阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0859461A true JPH0859461A (ja) | 1996-03-05 |
| JP3577110B2 JP3577110B2 (ja) | 2004-10-13 |
Family
ID=16472596
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20335194A Expired - Fee Related JP3577110B2 (ja) | 1994-08-29 | 1994-08-29 | Ａｃａｔ阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3577110B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005530697A (ja) * | 2002-02-27 | 2005-10-13 | 楊利平 | 乾癬を治療するための医薬の調製におけるジャショウシの全クマリン類の使用 |
| JP2013510140A (ja) * | 2009-11-11 | 2013-03-21 | ジョン ヒュン ナム | 脂肪肝改善剤組成物 |
| CN104758806A (zh) * | 2015-03-07 | 2015-07-08 | 李传伟 | 一种治疗冠心病的煎膏剂及其制备方法 |
| CN105136935A (zh) * | 2015-09-18 | 2015-12-09 | 陕西科技大学 | 一种蛇床子素的快速检测方法 |
| JP2018058792A (ja) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | サッポロホールディングス株式会社 | Ｐｃｓｋ９阻害剤及びコレステロール代謝改善用食品組成物 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101455203B (zh) * | 2008-12-28 | 2012-05-02 | 王英姿 | 蛇床子素和多菌灵的复配组合物及其应用 |
-
1994
- 1994-08-29 JP JP20335194A patent/JP3577110B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005530697A (ja) * | 2002-02-27 | 2005-10-13 | 楊利平 | 乾癬を治療するための医薬の調製におけるジャショウシの全クマリン類の使用 |
| JP2013510140A (ja) * | 2009-11-11 | 2013-03-21 | ジョン ヒュン ナム | 脂肪肝改善剤組成物 |
| CN104758806A (zh) * | 2015-03-07 | 2015-07-08 | 李传伟 | 一种治疗冠心病的煎膏剂及其制备方法 |
| CN105136935A (zh) * | 2015-09-18 | 2015-12-09 | 陕西科技大学 | 一种蛇床子素的快速检测方法 |
| JP2018058792A (ja) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | サッポロホールディングス株式会社 | Ｐｃｓｋ９阻害剤及びコレステロール代謝改善用食品組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3577110B2 (ja) | 2004-10-13 |
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