JPH08509001A

JPH08509001A - 炎症をイメージングするためのテクネチウム−９９ｍ標識ペプチド

Info

Publication number: JPH08509001A
Application number: JP7501848A
Authority: JP
Inventors: ディーン，リチャード・ティー; モイヤー，ブライアン・アール
Original assignee: ダイアテック，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-06-07
Filing date: 1994-05-25
Publication date: 1996-09-24
Anticipated expiration: 2014-08-25
Also published as: SG44702A1; GR3031351T3; ZA943984B; US5714579A; DK0702570T3; AU684294B2; ES2135585T3; EP0702570A1; EP0702570B1; WO1994028942A1; AU7045394A; US5561220A; JP2941060B2; DE69419919D1; CA2164707A1; ATE182795T1; DE69419919T2; CA2164707C

Abstract

(57)【要約】本発明は、放射性同位体標識結合部位に共有結合した多塩基性化合物よりなる、放射性同位体標識シンチグラフィーイメージング剤である組成物に関し、該組成物はさらに多硫酸化グリカンよりなる。また、本発明は、かかる組成物の製法および使用方法を提供する。特に、本発明は、生理学的ｐＨにおいて塩基性である少なくとも５つの化学官能基を有する多塩基性化合物および放射性同位体標識結合部位よりなるテクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）標識シンチグラフィーイメージング剤からなる組成物に関し、該組成物はin vivoにて炎症部位に蓄積できる。かかる組成物を作成するためのキット、および哺乳動物体内における感染および炎症部位をイメージするための組成物の使用方法も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】炎症をイメージングするためのテクネチウム-９９ｍ標識ペプチド発明の背景１．発明の分野本発明は、放射性同位体標識したシンチグラフィーイメージング剤である組成物、この組成物の使用方法およびかかる放射性同位体標識組成物の製法に関する。特に、本発明は、ポリ硫酸化グリカンまたはその混合物、およびテクネチウム -９９ｍ（Ｔｃ-９９ｍ）で放射性同位体標識した放射性同位体標識結合部位に共有結合した多塩基性部位よりなる化合物の組成物であるテクネチウム-９９ｍ標識シンチグラフィーイメージング剤に関する。かかる組成物を製造する方法およびそのためのキット、ならびにかかる組成物を用いて哺乳動物体内の感染および炎症の部位をイメージングする方法も提供する。２．従来技術の説明焦点または局所感染および炎症の部位の位置および/または程度を測定できる臨床的な要望がある。実質的な数のケースにおいて、（物理的検査、ｘ-線、ＣＴおよびウルトラソノグラフのごとき）慣用的な診断方法では、かかる部位（例えば、膿瘍）の同定ができない。生検に頼ることもできる、少なくとも既知の位置の膿瘍の原因となる病原菌を同定するのに診断的に適当となるまでは、かかる侵入的な方法は避けるのが好ましい。迅速な位置決定および問題点の同定が効果的な治療的介在に非常に重要であるため、かかる「目に見えない」感染部位を同定することは重要である。核医学の分野においては、病理部位に特異的に蓄積する投与した放射能-標識トレーサー化合物（すなわち、放射性同位体トレーサーまたは放射性医薬）の内部分布をイメージングすることによって、ある種の病理学的状態を位置決定でき、またはかかる状態の範囲を測定することができる。種々の放射性核種が放射性イメージングに有用であることが知られており、それには⁶⁷Ｇａ、^99m Ｔｃ（Ｔｃ-９９ｍ）、¹¹¹Ｉｎ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹⁶⁹Ｙｂおよび¹⁸⁶Ｒｅが含まれる。しかしながら、膿瘍は多くの可能性のある病原菌のうちのいずれか１種によって起こされ得るため、特定の病原菌に特異的な放射性トレーサーでは範囲が限定される。他方、感染は、ほとんど常に、組織障害に対する身体の一般的反応である炎症を伴っている。それゆえ、炎症に特異的な放射性トレーサーは、いずれの病原菌によって起こされる感染部位も位置決定するのに有用であり、他の炎症部位を位置決定するのにも有用であると期待されよう。炎症に関与する主な現象の１つは、白血球（白血球細胞）、通常は単球および好中球の炎症部位における局所集合である。白血球に特異的な放射性トレーサーは、局所化感染部位において白血球を同定するのに有用であろう。最近認可された感染部位をイメージングする核医学方法では、インジウム-１１１標識白血球（¹¹¹Ｉｎ-ＷＢＣ）（例えば、ピータース（Peters）、１９９２年、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン（J.Nucl.Med.）第３３巻：６５-６７頁）またはガリウム-６７（⁶⁷Ｇａ）シトレート（例えば、エブライト（Ebright）ら、１９８２年、アーカイブス・オブ・インターナル・メディシン（Arch.nt.Med.）第１４２巻：２４６-２５４頁）のいずれかを用いる。¹¹¹Ｉｎ-標識ＷＢＣを用いる主な欠点は、放射性トレーサーの調製が多数の技術工程：自己の血液の無菌的な取り出し、該血液からの白血球の無菌的単離、（再注射した場合に、損傷したＷＢＣは細網内皮系によって取り込まれるため）白血球細胞を損傷しない条件を用いての該白血球の無菌的な標識、および（今や標識されている）該白血球の患者への無菌的な返還（再注射）、を要することである。さらに、注射およびイメージングの間の１２〜４８時間の遅延が最適なイメージングを得るために必要である。Ｔｃ-９９ｍ標識白血球を用いればこの遅延期間が短縮されるが（例えば、ボルネ（Vorne）ら、１９８９年、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン（J.Nucl.Med.）第３０巻：１３３２-１３３６頁参照）、身体外標識が依然必要である。好ましい放射性トレーサーは、全血中の白血球を標識するか、または身体外の自己血液成分の取出しおよび操作を要しないかのいずれかであろう。別法として、⁶⁷Ｇａ-シトレートは、静脈内注射によって投与することもできる。しかしながら、この化合物は、感染または炎症の部位に特異的ではない。さらに、放射性トレーサーの注射とイメージングとの間にしばしば７５時間にも上る遅延が必要となる。加えて、⁶⁷Ｇａのγ-（ガンマ）線エネルギーは、通常のガンマカメラによく適していない。ヒト白血球（単球、好中球、顆粒球および他の細胞型を含む）に対して生起させた放射性同位体標識モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が開発されてきた。Ｔｃ-９９ｍ標識抗-顆粒球モノクローナル抗体（例えば、リンド（Lind ）ら、１９９０年、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン（J.Nucl.Med .）第３１巻：４１７-４７３頁参照）および¹¹¹Ｉｎ-標識非特異的ヒト免疫グロブリン（例えば、ラムラグリア（LaMuraglia）ら、１９８９年、ジャーナル・オブ・バスキュラー・サージェリー（J.Vasc.Surg.）第１０巻：２０-２８頁参照）が、感染に従属する炎症の検出につき試験されている。¹¹¹ -Ｉｎ-標識ＩｇＧは、注射および最適なイメージングの間に２４-４８時間を要する点において、¹¹¹Ｉｎ-標識ＷＢＣの不利を有している。加えて、放射性同位体標識抗体は作製するのが困難であり、規制機関によりそれらが生物医薬として通常は分類されるため、長引く認可手続きに直面する。小さくて、容易に合成できる分子が、日常的に用いる放射性医薬として好ましい。全血中の白血球を標識するのに用いることができるか（すなわち、全血の他の成分から白血球を単離する必要がない）、または患者に直接注射でき、かつ白血球が蓄積する部位を位置決定することによって感染および炎症の部位をイメージングするであろう小さな合成分子に対する要望が明らかにある。かかる適用に有用な１種の小さくて、容易に合成できる分子はペプチドである。放射能-標識ペプチドを用いるイメージング方法の感度は、放射能ペプチドの特異的な結合が目的の領域、例えば、炎症部位にわたり放射能シグナルを濃縮するため、当該分野で公知の他の技術よりも遥かに高い。加えて、高-収率のペプチドの化学合成を達成する方法は当該分野でよく知られている。放射性同位体標識ペプチド、特にホルミル-メチオニル-ロイシル-フェニルアラニル（ｆＭＬＦ）-含有ペプチドが従来技術において報告されている。ゾグビ（Zoghbi）ら、１９８１年、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン（J.Nucl.Med.）第２２巻：３２頁（アブストラクト）は、¹¹¹Ｉｎ-標識トランスフェリンに結合する、細菌由来のホルミルペプチド走化性因子（ｆＭＬＦ）を開示している。ジアング（Jiang）ら、１９８２年、ヌクレアールメディツィン（Nuklearmedi zin）第２１巻：１１０-１１３頁は、¹²⁵Ｉで放射性同位体標識した走化性ホルミル化ペプチド（ｆＭＬＦ）を開示している。フィッシュマン（Fishman）ら、１９９１年、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン（J.Nucl.Med.）第３２巻：４８２-４９１頁は、走化性ホルミル化ペプチド（ｆＭＬＦ）-¹¹¹Ｉｎ-標識ＤＴＰＡコンジュゲートに関する。ＥＰＣ９０１０８７３４.６は、走化性ホルミルペプチド（ｆＭＬＦ）-¹¹¹Ｉｎ-標識ＤＴＰＡコンジュゲートに関する。米国特許第４,９８６,９７９号は、放射性同位体標識走化性ホルミルペプチド（ｆＭＬＦ）の、光親和性標識を介して身体外で白血球を放射性同位体標識するための使用に関する。ＰＣＴＷＯ９０/１０４６３は、放射性同位体標識走化性ホルミルペプチド（ｆＭＬＦ）の、光親和性標識を介して身体外で白血球を放射性同位体標識するための使用に関する。前記した技術において公知である標識ｆＭＬＦペプチドの使用は、このペプチドが好中球からのスーパーオキシド放出のごとき不利な生理学的応答を起こすという重大な欠点に苦しめられており（ニーデル（Niedel）およびカトレカサス（ Cuatrecasas）、１９８０年、カレ・トップ・セル・レグ（Curr.Top.Cell.Reg. ）第１７巻：１３７-１７０頁における「白血球およびマクロファージのホルミルペプチド走化性受容体（Formyl Peptide Chemotactic Receptors of Leukocyt es and Macrophages）」）、十分な投与量のこれらの化合物を投与すると白血球減少を起こし得る（ジアング（Jiang）ら、１９８２年、ヌクレアルメディツィン（Nuklearmed.）第２１巻：１１０-１１３頁）。炎症部位-特異的ペプチドのもう１つの供給原は、７８００ダルトンの分子量を有する７０アミノ酸よりなり、かつイン・ビボ（invivo）で炎症および感染部位に関与することが知られている細胞型の好中球および単球に結合することが当該分野で知られている、天然に発生する走化性ペプチドである血小板第４因子である。本発明に関連して興味あることには、ＰＦ４のカルボキシル末端は、ヘパリンのごとき多硫酸化グリカンに結合することが知られている（ロスカルゾ（Lo scalzo）ら、１９８５年、アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Arch.Biochem.Biophys.）第２４０巻：４４６-４５５頁）。加えて、先行技術で知られているｆＭＬＦ化合物に対するＰＦ４の利点は、それが、２０μＭの濃度でおいてさえ好中球からのスーパーオキシドの放出を起こさないという点にある（ベバウィー（Bebawy）ら、１９８６年、ジャーナル・オブ・ロイコサイト・バイオロジー（J.Leukocyte Biol.）第３９巻：４２３-４３４頁）。トルベッケ（Thorbecke）およびツッカー（Zucker）、１９８９年、欧州特許出願番号第８８１１１９６２.２は、免疫調節量の血小板第４因子またはそれ由来のペプチドを投与することよりなる、免疫応答を調節する組成物および方法を開示している。デュエル（Duel）ら、１９７７年、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・イン・ユーエスエイ（Proc.Natl.Acad.Sci. ＵＳＡ）第７４巻：２２５６-２２５８頁は、ヒト血小板第４因子のアミノ酸配列を開示している。デュエル（Duel）ら、１９８１年、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・イン・ユーエスエイ（Proc.Natl.Acad.Sci. ＵＳＡ）第７８巻：４５８４-４５８７頁は、イン・ビトロ（in vitro）で血小板第４因子が好中球および単球に走化性を示すことを開示している。オスターマン（Osterman）ら、１９８２年、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミューニケイションズ（Biochem.Biophys.Res.Com m.）第１０７巻：１３０-１３５頁は、血小板第４因子のカルボキシル末端のトリデカペプチドが走化性特性を有していることを開示している。ホルト（Holt）およびニーウィアロウスキー（Niewiarowski）、１９８５年、セミナーズ・イン・ヘマトロジー（Sem.Hematol.）第２２巻：１５１-１６３頁は、血小板第４因子を含む血小板α-顆粒蛋白質の生化学の概説を提供している。ゴールドマン（Goldman）ら、１９８５年、イムノロジー（Immunol.）第５４巻：１６３-１７１頁は、ｆＭＬＦ受容体媒介取込みが、血小板第４因子およびそのカルボキシル末端ドデカペプチドによってヒト好中球において阻害されることを明らかにしている。ロスカルゾ（Loscalzo）ら、前掲は、血小板第４因子およびヘパリンのごときグルコサミノグリカンとの間の生化学的相互作用を記載している。ベバウィ（Bebawy）ら、前掲は、血小板第４因子が媒介する、イン・ビトロ（ in vitro）における好中球の走化性応答を記載している。マイオネ（Maione）ら、１９８９年、サイエンス（Science）第２４７巻：７- ７９頁は、組換えヒト血小板第４因子およびそのペプチド断片によって脈管形成が阻害されることを開示している。ポリペプチドを放射性同位体標識するためのキレート化剤の使用、およびペプチドおよびポリペプチドをＴｃ-９９ｍで標識する方法は、先行技術で公知であり、米国同時係属出願番号第０７/６５３,０１２号、０７/８０７,０６２号、０７/８７１,２８２号、０７/８８６,７５２号、０７/８９３,９８１号、０７/９５５,４６６号、０８/０１９,８６４号、０８/０４４,８２５号および０８/０７３,５７号、ならびにＰＣＴ国際出願ＰＣＴ/ＵＳ９２/００７５７、ＰＣＴ/ＵＳ９２/１０７１６、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０２３２０およびＰＣＴ/ＵＳ９３/０４７９４に開示されており、ここに、出典明示して本明細書の一部とみなす。発明の概要本発明は、放射能-標識試薬および多硫酸化グリカンよりなる組成物であるシンチグラフィーイメージング剤に関する。本発明の組成物は、イン・ビボ（in v ivo）で炎症部位に蓄積する。本発明の組成物よりなる試薬は、それ自体が、感染または炎症の部位またはその成分を特異的に位置決めできる多塩基性化合物よりなり、ここに、該化合物は、該部位に結合する放射性同位体、好ましくはテクネチウム-９９ｍに共有結合されている。予期せぬことには、本発明により提供されるＴｃ-９９ｍ放射性同位体標識多塩基性化合物と多硫酸化グリカンとの組合せによって、有利には、イン・ビボ（ in vivo）にて感染および炎症の病巣部位のシンチグラフィーイメージを得ることができることが見い出された。この組合せの投与により、Ｔｃ-９９ｍ標識多塩基性化合物単独の投与と比べた場合に、感染部位におけるＴｃ-９９ｍ放射能シグナルの局在性の程度がより大きなものとなる。その結果、この組合せにより生じるかかるシンチグラフィーイメージは、放射性同位体標識多塩基性化合物単独よりなるＴｃ-９９ｍ標識シンチグラフィーイメージ剤を用いて得られるイメージより優れている（後記する実施例３および表II参照）。また、感染部位-対- 血液および感染部位-対-正常組織において検出される放射能の比が放射性同位体標識化合物単独に比較して高いことが、本発明の組成物を用いて発見された。従って、本発明は、イン・ビボ（in vivo）にて炎症部位に蓄積する放射性同位体標識組成物、かかる組成物の製法、およびかかる組成物を哺乳動物身体内の感染および炎症の部位をイメージングするのに使用する方法を提供する。本発明の第１の態様において、哺乳動物体内の炎症部位をイメージングするためのシンチグラフィーイメージング剤が提供され、これは、テクネチウム-９９ｍ結合性基に共有結合した、約５００ダルトン〜約１５,０００ダルトンの分子量を有し、かつ生理学的ｐＨにおいて塩基性である少なくとも５個の残基を有するテクネチウム-９９ｍ標識試薬よりなる組成物からなり、該組成物は、さらに、少なくとも約１０００ダルトンの分子量を有する多硫酸化グリカンよりなり、ここに、該試薬は、テクネチウム-９９ｍで放射性同位体標識されていて、該組成物はイン・ビボ（in vivo）で炎症部位に蓄積することができる。好ましい具体例において、該試薬は、血小板第４因子またはその断片もしくはアナログである５〜１００個のアミノ酸のペプチドである。好ましい具体例において、該多硫酸化グリカンはヘパリン、ヘパラン硫酸、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸またはそれらの誘導体である。本発明の第２の態様において、本発明のシングラフィーイメージング剤の成分類としてＴｃ-９９ｍ標識試薬が提供され、ここに、該試薬は、Ｉ．Ｃｐ（ａａ）Ｃｐ［式中、Ｃｐは保護されたまたは保護されていないシステインであって、（ａａ）はアミノ酸］で示される放射性同位体-結合性部位に共有結合した、多塩基性化合物、好ましくは、血小板第４因子-由来のその断片のペプチドよりなる。好ましい具体例において、該アミノ酸はジリシンである。もう１つの好ましい具体例において、該放射性同位体標識−結合部位は、約１ないし約２０個のアミノ酸を介して該多塩基性化合物に結合している。第３の態様において、本発明により提供されるシンチグラフィーイメージング剤の成分は、以下の構造： II．Ａ−ＣＺ（Ｂ）−［Ｃ（Ｒ¹Ｒ²）］_n−Ｘ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨ、−ＮＨＲ₃、 −Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）、またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；ＸはＳＨまたは −ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）またはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分岐鎖または環状の低級アルキル；ｎは０、１または２；および、（１）Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）である場合、ＸはＳＨであって、ｎは１または２；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または −Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）である場合、ＢはＳＨであって、ｎは１または２；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）− ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであって、ｎは０または１；（４）ＡがＨまたはＲ⁴である場合、ＢがＳＨであれば、Ｘは−ＮＨＲ³または −Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）てあって、ＸがＳＨであれば、Ｂは−ＮＨＲ³または −Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＣＯ、（ペプチド）−ＯＯＣであってＢはＳＨ；（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣ、ＢはＳＨであってｎは０；および（７）ＺがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；および、ここに、チオール基は還元形態である］を有する放射性同位体標識-結合性部位に共有結合した、多塩基性化合物、好ましくは血小板第４因子-由来のその断片のペプチドよりなる試薬である。もう１つの具体例において、式： III．［本発明の目的では、この構造を有する放射性同位体標識−結合部位をピコリン酸（Ｐｉｃ）−ベースの部位という］；または IV．［本発明の目的では、この構造を有する放射性同位体標識−結合部位はピコリンアミン（Ｐｉｃａ）−ベースの部位という］［式中、ＸはＨまたは保護基；（アミノ酸）はいずれかのアミノ酸；放射性同位体標識−結合部位は当該ペプチドに共有結合しており、該放射性同位体標識−結合部位と放射性同位体標識との錯体は電気的に中性である］の放射性同位体標識-結合部位に共有結合した、多塩基性化合物、好ましくは血小板第４因子-由来のその断片のペプチドよりなる試薬からなる本発明のシンチグラフィーイメージング剤が提供される。好ましい具体例において、該アミノ酸はグリシンであって、Ｘはアセトアミドメチル保護基である。さらなる好ましい具体例において、該多塩基性化合物はアミノ酸、最も好ましくはグリシンを介して該放射性同位体標識−結合部位に共有結合しており、該放射性同位体標識はテクネチウム−９９ｍである。本発明のさらにもう１つの具体例において、多塩基性化合物、好ましくは血小板第４因子−由来のペプチドまたはその断片、および該多塩基性化合物に共有結合したビスアミノビスチオール放射性同位体標識−結合部位よりなる試薬である本発明の放射性同位体標識シンチグラフィーイメージング剤の成分が提供される。本発明のこの具体例における該ビスアミノビスチオール放射性同位体標識−結合部位は：Ｖ．［式中、各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；各（ｐｇｐ）^Sは、独立して、チオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは、独立して、２または３；Ａ＝直鎖状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体；およびＸはペプチド］； VI．［式中、各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、または低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニル；ｍ、ｎおよびｐは、独立して、１または２；Ａは線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せもしくは誘導体；ＶはＨまたは−ＣＯ −ペプチド；Ｒ⁶＝Ｈまたはペプチド；但し、ＶがＨである場合、Ｒ⁶はペプチド、およびＲ⁶がＨである場合、Ｖ＝−ＣＯ−ペプチド］［本発明目的では、これらの構造を有する放射性同位体標識−結合部位を「ＢＡＴ」部位という」よりなる群から選択される式を有する。好ましい具体例において、多塩基性化合物はアミノ酸、好ましくはグリシンを介して放射性同位体標識−結合部位に共有結合している。また、本発明は、本発明の組成物を調製するためのキット、本発明の試薬をＴｃ-９９ｍで放射性同位体標識する方法、およびガンマシンチグラフィーによって哺乳動物体内の感染および炎症の部位をイメージングするのに放射性同位体標識組成物を用いる方法からなる。本発明は、本発明の試薬の放射性同位体結合性部位とＴｃ-９９ｍとの錯体よりなるシンチグラフィーイメージング剤である組成物を提供する。これらの試薬をＴｃ-９９ｍで放射性同位体標識する方法も提供する。本発明によって提供される放射性性同位体標識錯体は、還元剤の存在下にて本発明の試薬をＴｃ-９９ｍと反応させることによって形成される。好ましい還元剤には、限定するものではないが、亜二チオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンが含まれる。本発明の錯体は、本明細書に提供されるごとく、予め還元したＴｃ-９９ｍ錯体のリガンド交換法による標識によっても形成される。また、本発明は、多硫酸化グリカンおよび本発明のＴｃ-９９ｍ標識試薬よりなる組成物であるシンチグラフィーイメージング剤を調製するためのキットも提供する。本発明のシンチグラフィーイメージング剤を調製するためのキット（ここに、該放射性同位体標識はＴｃ−９９ｍである）は、所定量の本発明の非標識試薬の具体例および該試薬をテクネチウム-９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とを含有する第１密閉バイアル、ならびに所定量の本発明の多硫酸化グリカンを含有する第２密閉バイアルよりなる。次いで、本発明の組成物は、第１バイアルの内容物をテクネチウム-９９ｍで標識し、次いで、第１バイアルの内容物と第２バイアルの内容物とを混合して当該組成物を得ることによって製造される。別法として、適量の非標識試薬と多硫酸化グリカンを単一のバイアルに含ませることもできる。好ましい具体例において、該多硫酸化グリカンはヘパリン、ヘパラン硫酸、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸またはそれらの誘導体である。本発明は、イン・ビトロ（in vitro）の化学合成によって本発明のシンチグラフィーイメージング剤のペプチドの具体例を調製する方法を提供する。好ましい具体例において、ペプチドは固相ペプチド合成によって合成する。本発明は、イン・ビボ（in vivo）ガンマ・シンチグラフィーイメージを得ることによって哺乳動物体内の炎症および感染部位をイメージングするための、Ｔｃ-９９ｍ標識シンチグラフィーイメージング剤よりなる組成物を用いる方法を提供する。これらの方法は、診断有効量のＴｃ-９９ｍ標識組成物を投与し、次いで哺乳動物体内の炎症部位に局在化したＴｃ-９９ｍ標識によって発せられるガンマ線を検出することよりなる。また、特に、全血を放射性同位体標識し、哺乳動物体内の炎症部位をイメージングするために放射性同位体標識全血よりなる混合物を使用する方法も提供される。かかる１つの具体例は、一定量、好ましくは約１μｇ〜１００ｍｇの多硫酸化グリカンと全血とを混合して混合物を形成させることよりなる。次いで、一定量、好ましくは１μｇ〜１００ｍｇの放射性同位体標識、好ましくはＴｃ-９９ｍ標識された、放射性同位体標識結合部位に共有結合された多塩基性部位よりなる試薬である組成物を第１全血混合物に添加することによって、放射性同位体標識全血混合物が形成される。次いで、この放射性同位体標識全血混合物を、イン・ビボ（in vivo）にて炎症部位を有するか、または有すると疑われるヒトのごとき動物に投与し、本明細書に記載するごとくに放射能シグナルを検出して炎症部位を位置決定する。この方法により、従来技術で公知の白血球を標識する方法以上の利点が提供される。なぜなら、本発明の方法は、全血からの白血球の単離、および全血の大規模な体外操作の付随の必要性を取り除いたからである。また、本発明の試薬は、多価連結部位よりなっていてもよい。本発明の多価連結部位は、多塩基性化合物またはＴｃ-９９ｍ結合部位に共有結合できる、少なくとも２個の同一のリンカー官能基よりなる。好ましいリンカー官能基は、第１級または第２級のアミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基またはチオール反応性基である。好ましい具体例において、該多価連結部位は、ビス-スクシンイミジルメチルエーテル（ＢＳＭＥ）、４-（２,２-ジメチルアセチル）安息香酸（ＤＭＡＢ）、Ｎ-［２-（Ｎ',Ｎ'-ビス（２-スクシンイミドエチル）アミノエチル）］-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス（２-メチル-２-メルカプトプロピル）-６,９-ジアザノナンアミド（ＢＡＴ-ＢＳ）、トリス（スクシンイミジルエチル）アミン（ＴＳＥＡ）、ビス-スクシンイミドヘキサン（ＢＳＨ）、４-（Ｏ-ＣＨ₂ＣＯ-Ｇly-Ｇly- Ｃys.アミド）アセトフェノン（ＥＴＡＣ）、トリス（アセトアミドエチル）アミン、ビス（アセトアミドメチル）アミン、ビス（アセトアミドエチル）アミン、α,ε-ビス（アセチル）リシン、リシン、１,８-ビス-アセトアミド-３,６-ジオキサ-オクタンまたはそれらの誘導体よりなる。本発明の特に好ましい具体例は、ある種の好ましい具体例および請求の範囲の以下のさらに詳細な記載から明らかになるであろう。図面の説明図１は、本発明のＴｃ-９９ｍ/Ｐ３２２Ｈシンチグラフィーイメージング剤を用いた、脾摘８週間後の患者における脾臓床膿瘍（splenic bed abscess）を担持するヒト患者のイン・ビボ（in vivo）シンチグラフィーイメージングを図示している。発明の詳細な説明本発明は、Ｔｃ-９９ｍ標識試薬および多硫酸化グリカンの組成物よりなる、炎症部位に蓄積する哺乳動物体内の標的部位をイメージングするためのシンチグラフィーイメージング剤を提供する。本発明の組成物の試薬は、放射性同位体標識結合部位に共有結合された多塩基性化合物よりなり、ここに該放射性同位体結合部位は放射性同位体に結合する。本発明の目的では、「多塩基性化合物」なる語は、生理学的ｐＨ（すなわち、約ｐＨ７.０±０.５）で塩基性であってカチオン性である少なくとも５個の化学的官能基を有する化学化合物を含み、該化学的官能基は、例えば、限定するものではないが、第１級アミンを包含し、これによって、該多塩基性化合物が生理学的ｐＨにおいてポリカチオン性となる。本発明の多硫酸化グリカンには、限定するものではないが、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸またはそれらの誘導体が含まれる。本発明の組成物は、炎症部位に特異的に局在化する。また、これらの組成物は、白血球、好ましくは単球および好中球、最も好ましくは好中球に結合することができる。本発明の目的では、「白血球に結合する」なる語は、本発明の組成物が哺乳動物体内の感染および炎症の部位に十分に蓄積して、ガンマシンチグラフィーによって該感染または炎症の部位における本明細書に開示した組成物から調製される放射性同位体標識錯体の蓄積が十分に検出することができることを意味する。本発明のシンチグラフィーイメージング剤のペプチドの具体例において、好ましいペプチドには、血小板第４因子およびそれ由来のペプチドが含まれる。本発明の目的では、「それ由来のペプチド」なる語は、血小板第４因子のアミノ酸配列の全部または一部に相同的なアミノ酸配列を有するペプチドを包含することを意味する。また、この語により境界を画されることを意味するのは、天然の血小板第４因子蛋白質の蛋白質加水分解によって、または血小板第４因子のアミノ酸配列の一部の化学合成によって生じたかを問わず、血小板第４因子のペプチド断片であることも意味している。本発明の実施に有用なペプチド断片には、哺乳動物体内の感染および炎症の部位に蓄積することができる断片が含まれる。かかるペプチドの例は、実施例で後記する。Ｃｐが保護されたシステインであるＣｐ（aa）Ｃｐ-含有シンチグラフィーイメージング剤において、Ｓ−保護基は同一または異なり、 −ＣＨ₂−アリール（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルコキシ置換フェニルである）； −ＣＨ−（アリール）₂（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルコキシ置換フェニルである）； −Ｃ−（アリール）₃（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルコキシ置換フェニルである）； −ＣＨ₂−（４−メトキシフェニル）； −ＣＨ−（４−ピリジル）（フェニル）₂； −Ｃ（ＣＨ₃）₃； −９−フェニルフルオレニル； −ＣＨ₂ＮＨＣＯＲ（Ｒは未置換または置換アルキルもしくはアリールである）； −ＣＨ₂ＮＨＣＯＯＲ（Ｒは未置換または置換アルキルもしくはアリールである）； −ＣＯＮＨＲ（Ｒは未置換または置換アルキルまたはアリールである）； −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−フェニル；であり得るが、これらに限定されるものではない。本発明のビスアミノ、ビスチオール部位のごとき、（ｐｇｐ）^Sというシステイン−硫黄保護基よりなる放射性同位体結合部位も、保護基の前記リストによって記載される。好ましい保護基は式-ＣＨ₂-ＮＨＣＯＲ［式中、Ｒは１ないし８個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、または低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、カルボキシもしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニル］を有する。Ｔｃ-９９ｍで標識することは、この放射性同位体の核特性および放射能特性がそれをシンチグラフィーイメージング剤の理想的な成分とするため、本発明の利点である。この放射性同位体は、１４０ＫｅＶの単一フォトンエネルギーおよび約６時間の放射能半減期を有し、かつ⁹⁹Ｍｏ-^99mＴｃジェネレーターから容易に得られる。従来技術で公知の他の放射性核種は、より長い有効半減期（例えば、６７.４時間の半減期を有する¹¹¹Ｉｎ）を有するか、または毒性（例えば、¹² ⁵ Ｉ）である。各多塩基性ペプチドを含有する本発明の具体例は、アミノ酸配列よりなる。本発明で用いるアミノ酸なる語は、天然発生および他の方法による全てのＬ-およびＤ-アミノ酸を包含することを意味する。本発明により提供される多塩基性ペプチドよりなる試薬は、限定するものではないが、以下のものが含まれる（以下のペプチド中のアミノ酸は、特に指摘しない限り、Ｌ-アミノ酸である）：本発明の多塩基性ペプチドの具体例は、イン・ビトロ（in vitro）で化学的に合成することができる。本発明のペプチドは、一般的にペプチド合成器で有利に調製できる。本発明のペプチドは、該放射性同位体標識結合部位がイン・ビトロ（in vitro）化学合成の間に、当業者によく知られている技術を用いて当該ペプチドに共有結合されるように合成できる。合成に際して放射性同位体標識結合部位に共有結合したかかるペプチドは、共有結合の特定部位がそこで決定できるため有利である。本発明の放射性同位体標識結合部位、ペプチド合成の間に、標的特異性の多塩基性ペプチドに導入することもできる。ピコリン酸（Ｐic-）よりなる具体例［例えば、Ｐic-Ｇly-Ｃys（保護基）-］では、該放射性同位体標識結合部位は合成の最後の残基（すなわち、アミノ-末端）として合成できる。加えて、ピコリン酸-含有放射性同位体標識-結合部位は、リシンのε-アミノ基に共有結合させて、例えば、ペプチド鎖のいずれの位置にも導入することができる αＮ（Ｆmoc）-Lys-εＮ［Ｐic-Ｇly-Ｃys（保護基）］を得ることもできる。標的結合ペプチドに簡単な様式で導入できるため、この配列は特に有利である。同様に、ピコリルアミン（Ｐica）-含有放射性同位体標識-結合部位［-Ｃys（保護基）-Ｇly-Ｐica］は、ペプチド鎖のカルボキシル末端に配列［-Ｃys（保護基）-Ｇly-］を含ませることによって、ペプチド合成の間に合成できる。樹脂からペプチドが解離した後に、当該ペプチドのカルボキシル末端が活性化され、ピコリルアミンにカップリングされる。この合成経路には、反応性の側鎖官能基がマスク（保護）されたままであって、ピコリルアミンの連結の間に反応しないことが必要である。本発明は、本発明のシンチグラフィーイメージング剤のＴｃ-９９ｍ放射性同位体標識ペプチド成分が得られる、これらのキレート化剤の実質的にいずれの血小板第４因子-由来ペプチドへの取込みをも提供する。また、本発明は、Ｔｃ-９９ｍで標識することができるビスアミンビスチオール（ＢＡＴ）キレート化剤である、多塩基性で、小さい、合成化合物も提供する。放射性テクネチウム-９９ｍと本発明の試薬との錯体の形成において、テクネチウム錯体、好ましくはＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸の塩を、還元剤の存在下でイメージング剤と反応させる；好ましい具体例において、該還元剤は塩化第一スズである。錯体およびかかる錯体を調製する手段は、所定量の標識すべき本発明の試薬を含有する第１密閉バイアルと、該試薬をＴｃ-９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とよりなるキット形態で簡便に提供される。別法として、該錯体は、本発明の試薬を、テクネチウムとトランスファーリガンドとして公知の他の試薬との予め形成させたラービル錯体とを反応させることによっても形成できる。この工程は、リガンド交換として知られており、当業者にもよく知られている。該ラービル錯体は、かかるトランスファー・リガンドとして、例えばタルトレート、シトレート、グルコネートまたはマンニトールを用いて形成させることもできる。本発明に有用なＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸塩の中には、ナトリウム塩のごときアルカリ金属塩、またはアンモニウム塩もしくは低級アルキルアンモニウム塩が含まれる。有利には、いずれかの具体例を用いて、未標識試薬および還元剤を含有するバイアルに、本発明の組成物の多硫酸化グリカン成分を含有させることもできる。本発明のシンチグラフィーイメージング剤Ｔｃ-９９ｍ過テクネチウム酸または予め形成させたＴｃ-９９ｍラービル錯体との反応は、室温にて水性媒質中にて行うことができる。水性媒質中にアニオン性の錯体が形成された場合、放射性同位体標識錯体は、ナトリウムカチオン、アンモニウムカチオン、モノ-、ジ-もしくはトリ-低級アルキルアミンカチオン、またはいずれかの医薬上許容されるカチオンのごとき適当なカチオンとの塩の形態である。本発明の好ましい具体例において、テクネチウム-９９ｍ標識ペプチドを調製するためのキットが提供される。本発明の試薬のペプチドの具体例は、当業者によく知られ、本明細書に前記した方法および手段を用いて化学的に合成できる。適量のかかる試薬を、当該試薬をＴｃ-９９ｍで標識するのに十分な量の、塩化第一スズまたは固相還元剤のごとき還元剤を含有するバイアル中に導入する。記載した適量の（例えば、タルトレート、シトレート、グルコナートまたはマンニトールのごとき）トランスファーリガンドを含ませることもできる。本発明によるテクネチウム-９９ｍ標識試薬は、適量のＴｃ-９９ｍまたはＴｃ-９９ｍ錯体をバイアルに添加し、次いで、実施例２に記載する条件下にて反応させることによって調製できる。また、該キットは、適量の多硫酸化グリカンを含有する第２密閉バイアルからもなる。効果的な多硫酸化グリカンの例には、限定するものではないが、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸またはそれらの誘導体が含まれる。本発明のＴｃ-９９ｍ標識シンチグラフィーイメージング剤は、第１バイアルからのＴｃ-９９ｍ標識多塩基性成分と、第２バイアルからの多硫酸化グリカンとを混合することによって調製できる。本発明により提供される放射性標識シンチグラフィーイメージング剤は、適量の放射能を有するものとして提供される。Ｔｃ-９９ｍ放射性錯体の形成において、一般的に、約０.０１ミリキュリー（ｍＣｉ）〜１００ｍＣｉ/ｍlの濃度の放射能を含有する溶液中で放射性錯体が形成されるのが好ましい。本発明により提供されるテクネチウム-９９ｍ標識試薬および多硫酸化グリカンよりなるシンチグラフィーイメージング剤よりなる組成物は、膿瘍および「目に見えない」感染の部位を含む炎症部位を視覚化するのに用いることができる。また、Ｔｃ-９９ｍ標識組成物は、炎症性の腸疾患または関節炎のような疾患を含む、組織虚血により生じる炎症部位を視覚化するのも用いることができる。本発明によると、その試薬が錯体または医薬上許容される対イオンとの塩のいずれかで提供される、テクネチウム-９９ｍ標識組成物を単一ユニット注射用量で投与する。滅菌生理食塩水または血漿のごとき当業者に知られているいずれの通常の担体も、放射性同位体標識した後に、本発明による種々の器官、腫瘍等を診断的にイメージングするための注射溶液を調製するのに利用することができる。一般的に、投与すべきユニット用量は、約０.０１ｍＣｉ〜１００ｍＣｉ、好ましくは１ｍＣｉ〜２０ｍＣｉの放射能を有する。ユニット投与量で注射すべき組成物は、約０.０１ｍl〜約１０ｍlである。静脈内投与した後、イン・ビボ（in vi vo）の器官または腫瘍のイメージングは、数分以内に起こすことができる。しかしながら、所望により、患者に注射した後、数時間またはさらに長時間内に、イメージングを起こすこともできる。大部分の例において、十分な量の投与した用量が約０.５時間以内にイメージングすべき領域に蓄積して、シンチフォトを起こすことができるであろう。診断目的のシンチグラフィーイメージングのいずれの慣用的な方法も、本発明で利用することができる。本発明のテクネチウム-９９ｍ標識組成物は、生理食塩水媒質のごとき静脈注射用のいずれかの慣用的な媒質中、または血漿媒質中で静脈内投与してもよい。また、かかる媒質には、例えば、浸透圧を調整するための医薬上許容される塩、緩衝液、保存料等のごとき慣用的な医薬調整物質が含まれていてもよい。好ましい媒質の中には、通常の生理食塩水および血漿がある。また、本発明は、特に、全血を特異的に放射性同位体標識し、かかる放射性同位体標識全血を用いて哺乳動物体内の炎症部位をイメージングする方法を提供する。本発明のこの具体例においては、全血を約１μｇ〜１００ｍｇの量の多硫酸化グリカンと混合して混合物を形成させる。次いで、約１μｇ〜１００ｍｇの量の放射性同位体標識した、好ましくはＴｃ-９９ｍ標識した、放射性同位体標識結合部位に共有結合された多塩基性基よりなる試薬である、組成物を添加して放射性同位体標識混合物を形成させる。次いで、この放射性同位体標識全血混合物を、イン・ビボ（in vivo）にて炎症部位を有するか、または疑われるヒトのごとき動物に投与し、次いで放射性シグナルを検出して本明細書に記載したように炎症部位を位置決定する。この実験具体例で用いるべきヘパリン処理全血は抗原的に適合する必要があり、自己のものが好ましいが必ずしもその必要性はないことが当業者に理解されるであろう。これらの組成物を製造し標識する方法を以下の実施例でさらに十分に説明する。これらの実施例は、前記した方法および有利な結果のある種の態様を説明している。よって、これらの実施例は、例示的なものであって、限定するものではない。実施例１固相ペプチド合成固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、９-フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）アミノ-末端保護を用いて、アプライド・バイオシステムズ（Applied B iosystems）モデル４３１Ａペプチド合成器を用いた０.２５ミリモル（mmol）スケールで行い、カルボキシル-末端の酸にはｐ-ヒドロキシメチルフェノキシメチル-ポリスチレン（ＨＭＰ）樹脂またはカルボキシル末端のアミドにはリンク（R ink）アミドを用いて、ジシクロヘキシルカルボジイミド/ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは２-（１Ｈ-ベンゾトリアゾール-１-イル）-１,１,３,３-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート/ヒドロキシベンゾトリアール（ＨＢＴＵ/ＨＯＢＴ）でカップリングさせた。適当には、樹脂-結合ペプチドをＮ-メチルピロリジノン（ＮＭＰ）中の無水酢酸で処理することによってＮ-α-アセチル基を導入した。樹脂-結合生成物は、室温にて、１００：５：５：２.５：２の比率で調製したトリフルオロ酢酸、水、チオアニソール、エタンジオールおよびトリエチルシランよりなる溶液を用いて３時間でルーチン的に開裂させた。Waters Delta Pak C 18カラムおよびアセトニトリルで修正した水中の０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いるグラジエント溶出を用い、分取用高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって粗ペプチドを精製した。アセトニトリルを溶出した画分から蒸発させ、次いで、これを凍結乾燥した。各生成物の同定は、速原子衝撃質量分析（ＦＡＢＭＳ）によって、または電子スプレイ質量分析（ＥＳＭＳ）によって確認した。実施例２シンチグラフィーイメージング剤の調製実施例１におけるごとくに調製したペプチド（１.０）をリン酸緩衝生理食塩水、０.０５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７.４）または水の１.０ｍｌに溶解させた。Ｔｃ−９９ｍグルセプテートは、Glucoscanバイアル（E.I．Dupont de Nemours，Inc.）を、２００ｍＣｉまでを含有するＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウム１.０ｍｌで復元することによって調製し、室温で１５分間放置した。次いで、Ｔｃ−９９ｍグルセプテート２５０μｌをペプチド試薬に添加し、反応を１００℃または室温にて３０分間進行させ、次いで、０.２μｍフィルターを通して濾過した。Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチド試薬の純度は、後記する表の脚注に記載した条件下でＨＰＬＣによって測定した。放射性成分は、積分レコーダーに連結したイン− ラインラジオメーター検出器によって検出した。Ｔｃ−９９ｍグルセプテートおよびＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウムはこれらの条件下で１および４分の間に溶出し、一方Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドはかなりの時間後に溶出した。以下の表は、本明細書に記載した方法を用い実施例１に従って調製したペプチドの成功したＴｃ−９９m標識を示す。本発明のシンチグラフィーイメージング剤は、多硫酸化グリカンの添加によって、かかるＴｃ−９９ｍ標識ペプチドから調製される。例えば、本発明のシンチグラフィーイメージング剤の特別の具体例は、容量０.１ないし１０ｍｌ中、０．１ないし１０ｍｇペプチド／１ないし２００ｍＣｉＴｃ−９９ｍの濃度にて、前記したごとくに調製したＴｃ−９９ｍ標識ペプチドにヘパリンを添加して、約１０ないし１００ＵＳＰユニット・ヘパリン／ｍＬの最終濃度とすることによって調製される。実施例３Ｔｃ−９９ｍ標識シンチグラフィーイメージング剤を用いるイメージングおよび生体内分布本発明の組成物を用いるin vivoにての炎症部位のシンチグラフィーイメージングの効率は以下のごとくに測定した。New Zealand白色ウサギに、エシェリキア・コリ（Esherichia coli）の能力ある株を左腓に筋肉内投与した。２４時間後、該動物をケタミンおよびキシラジンで筋肉内注射することによって鎮静させた。次いで、該動物に、Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチド（≦１５０μｇペプチド／２ないし１０ｍＣｉＴｃ−９９ｍ）を単独で、あるいは３０Ｕ.Ｓ.Ｐ.ユニット／ｍＬヘパリンを含有する溶液中にて静脈内注射した。該動物をガンマカメラ（ＬＥＡＰコリメーター、Ｔｃ−９９ｍについてフォトピーク）の視野に仰向けに位置させ、注射後の最初の１時間にわたってイメージし、次いで、３時間または１３時間後にわたって約１時間間隔にてイメージした。動物をイメージを得るための時間の間に回復させ、必要に応じて再麻酔した。最終のイメージングが完了したら、静脈内注射によって誘導したフェノバルビタール過剰投与量によって各動物を犠牲にし、解剖して、血液試料および感染したおよび対照の筋肉の試料を得た。これらの組織試料を秤量し、ガンマカウンターを用いて計数した。標準量の注射用量もこのようにして計数した。組織に残存するパーセント注射用量（組織１グラム当たり）をガンマ計数の結果から計算した。感染−対−非感染筋肉組織の１グラム当たりのパーセント注射用量の比、および感染した組織−対−血液の１グラム当たりの注射用量のパーセントの比を計算した；これらの結果は以下の表に示す。式：アセチル-ＫＫＫＫＫＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＰＬＹＫＫＩＩＫＫＬＬＥＳ（P322）アセチル−ＫＫＫＫＫＣＧＣＧＧＰＬＹＫＫＩＩＫＫＬＬＥＳ（P483）、およびアセチル−ＫＫＫＫＫ.［ＢＡＴ］.ＧＧＰＬＹＫＫＩＩＫＫＬＬＥＳ（P514）を有する本発明のＴｃ−９９ｍ標識イメージング剤をウサギに注射した。Ｔｃ− ９９ｍ標識ペプチドとヘパリンとの組合せの結果、標識ペプチド単独を用いて得られたものよりも、感染筋肉で検出された注射用量の大きなパーセント、および正常筋肉に対する、感染した筋肉／検出のおよび感染した筋肉の高い比が得られた（表ＩＩ参照）。実施例４Ｔｃ−９９ｍ標識シンチグラフィーイメージング剤を用いるヒトにおけるin v ivoでのイメージングＰ３２２Ｈを用い、ヒトにおけるin vivoでの炎症部位のシンチグラフィーイメージングの効率を測定した。Ｐ３２２Ｈは、３０Ｕ／ｍｌないし１０−２０ｍＣｉＴｃ−９９ｍ標識Ｐ３２２ペプチド（約１ｍｇのペプチドよりなる）の最終濃度までヘパリンを添加することによって調製されたシンチグラフィーイメージング剤であり、式：アセチル−ＫＫＫＫＫＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＰＬＹＫＫＩＩＫＫＬＬＥＳを有する。このシンチグラフィーイメージング剤は、４人のヒト患者でテストし、各人は（コンピューター−アシステッド・トモグラフィー（computer-assited tomography）、外科および／または臨床表示を含めた）通常の診断技術を用いて確認された感染部位を有していた。静脈内注射によって１０−２０ｍＣｉＴｃ−９９ｍ／Ｐ３２２Ｈを各患者に投与した。ガンマシンチグラフィーを注射と同時に開始し、次いで、高分解能コリメーター（１４０ｋｅＶにフォトピーク、±２０％ウィンドウ）を装備した大視野ガンマカメラを用いて、注射後約２時間にわたって前方および後方シンチグラフィーイメージを得た。最初に、高度のイメージング活性が肺で観察され、その活性は実験の間にわたって実質的に減少した。脾臓、肝臓および骨髄の摂取も観察された。深大腿膿瘍、虫垂炎、腹膜炎および脾臓床膿瘍（splenic bed abscess）の診断がＴｃ−９９ｍ／Ｐ３２２Ｈイメージングスキャンからなされた；これらの診断は他の理由に基づいてなされた確信的診断と合致した。１のかかるイメージングスキャンの例を図１に示し、そこでは、１の患者における脾臓床膿瘍が成功裏にイメージされた。矢印は、患者の脾臓の外科的除去８週間後における患者における脾臓床膿瘍のイメージを示す。これらの実験は、ヒトにおけるin vivoインチグラフィーイメージングについての本発明のシンチグラフィーイメージング剤の利用を示す。前記したのは本発明のある特別の具体例を強調したものであり、そのすべての修飾または変形も添付した請求の範囲に記載した本発明の範囲内のものであることが理解されるべきである。

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物体内の炎症部位をイメージングするためのシンチグラフィーイメージング剤よりなる組成物であって、テクネチウム−９９ｍ結合部位に共有結合した、約５００ダルトンないし約１５０００ダルトンの分子量を有し、かつ生理学的ｐＨにおいて塩基性である少なくとも５個の化学的官能基を有する多塩基性化合物からなる剤よりなり、さらに、少なくとも約１０００ダルトンの分子量を有する多硫酸化グリカンよりなり、ここに、該組成物はin vivoにて炎症部位に蓄積できる該組成物。２．該多塩基性化合物が、血小板第４因子またはその断片である５ないし１００個のアミノ酸のペプチドである請求項１記載の組成物。３．該多硫酸化グリカンがヘパリン、ヘパリン硫酸、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸またはそれらの誘導体である請求項１記載の組成物。４．該テクネチウム−９９ｍ結合部位が：Ｉ．Ｃｐ（ａａ）Ｃｐ［式中、Ｃｐは保護されたまたは保護されていないシステインであって、（ａａ）はアミノ酸］ＩＩ．Ａ−ＣＺ（Ｂ）−［Ｃ（Ｒ¹Ｒ²）］_n−Ｘ［式中、ＡはＨＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨ、−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）、またはＲ⁴；ＸはＨ、ＳＨ、−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは低級の直鎖もしくは分岐鎖または環状のアルキル；ｎは０、１または２；および、Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）である場合、ＸはＳＨであって、ｎは１または２；Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）である場合、ＢはＳＨであって、ｎは１または２；ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであって、ｎは０または１；ＡがＨまたはＲ⁴である場合、ＢがＳＨであれば、Ｘは−ＮＨＲ³または −Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）であって、ＸがＳＨであれば、Ｂは−ＮＨＲ³または −Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）；ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＣＯ、（ペプチド）−ＯＯＣであってＢはＳＨ；Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣ、ＢはＳＨであってｎは０；ＢがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；および、ここに、チオール基は還元形態であり］、ＩＩＩ．ＩＶ．［式中、Ｘ＝Ｈまたは保護基；（アミノ酸）＝いずれかのアミノ酸］Ｖ．［式中、各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅; 各（ｐｇｐ）^sは、独立して、チオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは、独立して、２または３；Ａ＝直鎖状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体］ＶＩ．［式中、各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、または低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニル；ｍ、ｎおよびｐは、独立して、１または２；Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せもしくは誘導体；Ｖ＝Ｈまたは−ＣＯ−ペプチド；Ｒ⁶＝Ｈまたはペプチド；および、ここに、Ｖ＝Ｈである場合、Ｒ⁶＝ペプチド、およびＲ⁶＝Ｈである場合、Ｖ＝−ＣＯ−ペプチド｝よりなる群から選択され、ここに、放射性同位体標識結合部位は放射性同位体とで錯体を形成し、該錯体は電気的に中性である請求項１記載の組成物。５．該多塩基性化合物および放射性同位体標識結合部位が約１ないし約２０個のアミノ酸を介して共有結合している請求項１記載の組成物。６．式Ｉを有する放射性同位体標識結合部位の保護されたシステインが式： −ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ［式中、Ｒは１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、２−、３−、４− ピリジル、フェニル、または低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、もしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニル］で示される保護基を有する請求項４記載の組成物。７．式Ｃｐ（ａａ）Ｃｐの放射性同位体標識結合部位が式：を有する請求項４記載の試薬。８．該多塩基性化合物が配列ＰＬＹＫＫＩＩＫＫＬＬＥＳまたはＫＫＩＩＫＫＬＬＥＳよりなるアミノ酸配列を有するペプチドである請求項２記載の試薬。９．該試薬が、さらに、多数の該多塩基性化合物に共有結合し、かつ多数のテクネチウム−９９ｍ結合部位に共有結合した多価連結部位よりなって、多量体多価シンチグラフィーイメージング剤を形成し、ここに、多量体多価シンチグラフィーイメージング剤の分子量が約２０,０００ダルトン未満である請求項１記載の試薬。１０．該多価連結部位がビス−スクシンイミジルメチルエーテル、４−（２，２−ジメチルアセチル）安息香酸、Ｎ−［２−（Ｎ’,Ｎ’−ビス（２−スクシンイミドエチル）アミノエチル）］−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド、トリス（スクシンイミジルエチル）アミン、ビス−スクシンイミドヘキサン、４−（Ｏ−ＣＨ₂ＣＯ−Ｇｌｙ− Ｇｌｙ−Ｃｙｓアミド）アセトフェノン、トリス（アセトアミドエチル）アミン、ビス（アセトアミドメチル）アミン、ビス（アセトアミドエチル）アミン、α, ε−ビス（アセチル）リシン、リシン、１,８−ビス−アセトアミド−３,６−ジオキサ−オクタンまたはその誘導体である請求項９記載の多量体多価シンチグラフィーイメージング剤。１１．放射性医薬製剤を調製するためのキットよりなる製品であって、該キットが所定量の請求項１記載の非標識試薬およびテクネチウム−９９ｍで試薬を標識するための十分量の還元剤を含有する第１の密閉バイアルよりなる該製品。１２．該第１の密閉バイアル中の該還元剤が亜二チオン酸イオン、第一スズイオン、または第一鉄イオンの群から選択される請求項１１記載の製品。１３．所定量の多硫酸化グリカンを含有する第２の密閉バイアルよりなり、ここに、請求項１記載の組成物が、第１のバイアル中の一定量をテクネチウム−９９ｍで標識し、次いで、第１のバイアルの内容物を第２のバイアルの内容物と混合することによって作成される請求項１１記載の製品。１４．該非標識試薬および多硫酸化グリカンが単一のバイアルに含有される請求項１３記載の製品。１５．請求項１記載のシンチグラフィーイメージング試薬の、診断有効量の請求項１記載の組成物を投与し、次いで、炎症部位に局在化したＴｃ−９９ｍからの放射能シグナルを検出することよりなる哺乳動物体内の炎症部位をイメージングするための医薬の製造における使用。１６．該試薬がin vitroにて化学合成される請求項１記載の試薬の製法。１７．該多塩基性化合物がペプチドであって、該ペプチドが固相ペプチド合成によって合成される請求項１７記載の試薬の製法。１８．該放射性同位体標識結合部位がin vitro化学合成の間にペプチドに共有結合される請求項２記載の試薬。１９．該放射性同位体標識結合部位が固相ペプチド合成の間にペプチドに共有結合される請求項１８記載の試薬。２０．式：を有する組成物。２１．テクネチウム−９９ｍで標識された請求項２０記載の組成物。２２．請求項２１記載のテクネチウム−９９ｍ標識試薬および多硫酸化グリカンよりなる組成物。２３．該多硫酸化グリカンがヘパリンである請求項２２記載の組成物。２４．請求項２２記載のテクネチウム−９９ｍ放射性同位体標識試薬の、全血を、約１マイクログラムないし１００ミリグラムの多硫酸化グリカンと混合して混合物が得られ、さらに該混合物に、請求項１記載のテクネチウム−９９ｍ放射性同位体標識試薬よりなる約１マイクログラムないし１００ミリグラムの組成物を添加して放射性同位体標識結合部位が得られ、該放射性同位体標識混合物をin vivoにて炎症部位を有する哺乳動物に投与し、次いで、炎症部位に局在化したＴｃ−９９ｍからの放射能シグナルを検出することよりなる、哺乳動物体内の炎症部位をイメージングするための医薬製品の製造における使用。２５．請求項１記載のシンチグラフィーイメージング剤および医薬上許容される担体よりなる医薬組成物。２６．請求項２２記載のシンチグラフィーイメージング剤および医薬上許容される担体よりなる医薬組成物。