JPH08507765A

JPH08507765A - 合成粒子状ベクターおよび調製方法

Info

Publication number: JPH08507765A
Application number: JP6519654A
Authority: JP
Inventors: サマン，ダニエル; デルリユー，パスカル; ジビラロ，ジヨエル; デイルソン，ローズリヌ; セルビラ，モニク; ド・ミゲル，イグナシオ; デイング，リ; グエン，フレデリク; スレ，ナデイーヌ; ソレル，コリヌ
Original assignee: バイオベクター・セラピユーテイクス・ソシエテ・アノニム
Priority date: 1993-03-02
Filing date: 1994-03-01
Publication date: 1996-08-20
Also published as: DK0782851T3; EP0782851B1; PT782851E; EP0787479A1; EP0782851A1; DE69405718T2; GR3025476T3; EP0687173B1; DE69431807D1; ATE228352T1; WO1994020078A1; FR2702160B1; US6013284A; ES2186815T3; ES2108432T3; DE69431807T2; EP0687173A1; US20020168408A1; DK0687173T3; KR100317751B1

Abstract

(57)【要約】非脂質の親水性核、ならびに少なくとも部分的に両親媒性化合物からできていて、かつ疎水性相互作用および／またはイオン結合によりその核と組合わさる外部層を含む合成粒子状ベクター。イオン化可能な活性成分を被包化することにより粒子状ベクターを調製するための方法、前記方法を通して取得されるベクター、およびこのようなベクターを含む薬剤学的、化粧品学的、もしくは食品組成物も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】合成粒子状ベクターおよび調製方法本発明は、単独で、もしくは様々な化合物用のベクターとして使用することができる新規の種類の粒子に関する。本発明はまた、活性成分の充填化の調節の改善を可能にする粒子状ベクターの製造のための方法にも関する。超分子バイオベクターすなわちＳＭＢＶは身体の内因性ベクターの生物疑似物であり、かつ具体的には製薬学的、化粧品的、もしくは農事産業的使用のための多大な数の活性成分を被包化および担持することが可能な粒子である。最初の種類のＳＭＢＶは欧州特許第３４４，０４０号明細書に記載されていた。これらの構造は、結果として特にそれらのサイズ、およびその分子もしくは輸送される分子に従うそれらの組成、およびそれらの利用法を変化させることの可能性からベクターの役目には非常に良く適している。ＳＮＢＶは、以下に示す３つの連続段階において合成され、それらは − イオン性の基により誘導でき、かつ特に超粉砕により所望のサイズ（所望の用途に従い１０ナノメーターと数ミクロンとの間）にすることができる、例えば架橋天然多糖から構成されている中心核の合成、 − その中心核の周囲にその内部の親水性を保持させながら中心核に周辺疎水性を付与する目的で、中心核の周辺へ単に共有結合的にグラフトされた脂肪酸のコロナの確立、 − 特に、リン脂質もしくはセラミドで構成され、時としては生物学的な膜の構成成分を例とする他の構成成分の添加を伴う、一つもしくは複数の外部脂質ラメラの安定化、である。活性成分はそれらの物理化学的特性に従い、外部脂質ラメラ内（親油性もしくは両親媒性化合物の場合）、あるいは親水性核の中（極性化合物の場合）のいずれかに輸送することができる。極性の性質の活性成分の被包化は後者の構造に従い、脂肪酸コロナの形成前、もしくはこの段階と外部ラメラの安定化との間のいずれかに実施することができる。多くの用途へのそれらの適性にもかかわらず、ＳＭＢＶの合成は時としては問題を生じることがあり、そしてそれらは特に、 − 不確実な段階である脂肪酸コロナのグラフトを調節することを必要とし、 − 核の周辺でのみ実施されるこのグラフトは均一に実施する必要があり、そしてこれは特に非常に特異的な条件下での前乾燥段階を必要とし、 − この活性成分を脂肪酸コロナのグラフト前に被包化する場合には、それらの被包化後に核の周辺に局在するそれら分子のうちの幾つかのものは脂肪酸により誘導化されて、この活性成分の特性の改変を生じることがあり、 − この活性成分を脂肪酸コロナのグラフト後に被包化する場合には、脂肪酸は親水性核内への活性成分の浸透にとって有害である可能性がある、ということである。本出願人らは、驚くべきことに特定の適用法においては脂肪酸コロナを架橋親水性核の周辺にグラフトさせないことによりこの反応機構を縮小することが可能であることを見い出した。本出願人らは、このようにして取得される多糖粒子がそのまま使用できることを見い出した。そしてそれらを、超分子バイオベクターとの類似性によりＰＳ− タイプのＳＭＢＶと命名した。本出願人らは、たとえ小さいサイズであったとしても適切な充填化プロトコールを適用させればこの多糖粒子を使用することができることをさらに見い出した。これらはまた、天然の両親媒性化合物、特にはリン脂質と組み合わせても使用することができ、そして本出願人らは、外部脂質ラメラがＳＭＢＶの場合のようなグラフトされた脂質コロナの非存在下でこの核の周辺に整列させることが可能であることを見い出した。これらの粒子は超分子の性質を有し、そしてＬ−タイプのＳＭＢＶとして知られている。これが、本発明の主題が合成粒子状ベクターであることの理由であり、この合成粒子状ベクターは、 − 非液体の親水性核、 − 疎水性相互作用および／またはイオン結合を介して核と組合わされるか、あるいは親水性核の外部コロナによるか、あるいはこのコロナ内における活性成分の被包化を回避し、そしてその核の内部に活性成分を濃縮する特定の方法を用いることによって少なくとも部分的に両親媒性化合物から構成されている外部層、を含むことを特徴とする。この事例においてはベクターの概念は広い意味で理解されるべきであり、すなわちその概念は、そういったものとしてか、あるいは活性化合物の輸送、提示、および／または安定化のためかのいずれかで、例えばある組成物中にそれらが取り込まれる場合などに支持体の役割を有する粒子を含むということである。非液体の親水性核（もしくはマトリックス）は親水性ポリマーであることができる。この親水性マトリックスは具体的には天然もしくは化学的に架橋された多糖もしくはオリゴ糖から構成することができる。多糖は、デキストラン、デンプン、セルロース、およびそれらの誘導体から選択されることが好ましい。２種類の相互作用が、例えば、イオン性の基によりその容積全体が誘導化されている架橋多糖で構成された核上でのリン脂質の安定化を説明することができ、これらの相互作用は疎水性タイプの相互作用か、あるいはイオン性タイプの結合かのいずれかであり、この２つの様式がこれらのラメラの安定化に共同作用することが可能である。実際のところ、リン脂質はグリセロール単位を基にする際には、場合によっては様々な極性基により誘導化される強力な陰イオン性電荷を有するリン酸基を含む極性ヘッド、ならびに親水性テイルを構成する２本の脂肪酸からできている。この極性ヘッドは、リン酸基を介してか、あるいはリン脂質のリン酸上にグラフトされたイオン性の基を介してのいずれかで、多糖マトリックスにグラフトされたイオン性の基とのイオン性相互作用によりそれ自体に結合する能力を有する。その上、多糖は総体的に親水性の性質を有するが疎水性の溝を有することが知られており、その溝は、極性ヒドロキシル基が所定の方向に向いていて、疎水性の性質の炭素−炭素結合からなる糖の基本構造へのアクセスを可能にするという理由で存在する。Ｌ−タイプのＳＭＢＶの核を構成する多糖粒子の場合には、リン脂質のような化合物の安定化は２つの結合様式の間の共同作用現象に起因することがある。リン脂質／多糖核の組み合わせは、蛍光エネルギー移動技術により確認することができる。エネルギー移動の論理は、第一発蛍光団（Ｆ１）の放射バンドが第二発蛍光団（Ｆ２）の放射バンドに重なる際に２つの発蛍光団の間に存在する相互作用に基づく。この２つの構成成分が接近する場合には、発蛍光団Ｆ１により吸収される光量子のエネルギーを発蛍光団Ｆ２に移動させることができ、このＦ２はその後にはそれが直接励起された場合と同様に蛍光を発するであろう。その後にＦ１の蛍光は完全に消滅するまで減少することがある。従って２つの発蛍光団の間のエネルギー移動効率はそれぞれの空間的間隔に依存する。ローダミンイソチオシアネートを用いて多糖核を、そしてニトロベンゾジアゾール（ＮＢＤ）を用いてリン脂質をラベル化した後には、１μｍ、２００ｎｍ、もしくは２０ｎｍのＬ−タイプのＳＭＢＶのいずれの場合であってもこの２つの発蛍光団の間にエネルギー移動を示すことができる。この移動は４℃、３７℃、そして１００℃ においてさえインキュベーションの後安定であり続ける。親水性核は数々の方法により取得することができ、そして特に、多糖の性質の核である場合には、分岐したもしくは直線の生物分解可能な多糖を用いることにより取得することができる。この多糖は、例えばデンプンもしくはその誘導体の内の一つであることができる。架橋方法は当業者に知られており、そしてこれを、エピクロロヒドリンもしくは塩化ホスホリルのような二官能性もしくは三官能性試薬により実施することができる。外部脂質ラメラの安定化およびイオン性活性成分の被包化のために重要な酸性もしくは塩基性のイオン性官能基によりその糖を置換することによって多糖の特性を改変することができる。親水性活性成分の被包化は合成のこの段階において実施することができる。合成段階中に取得されるゲルをその後に洗浄し、そして遠心分離技術を例とする手法により部分的に脱水し、その後に活性成分の存在下に持って行き、そしてゆっくりと再水和させる。ゲルが水で膨潤する能力を有するため活性成分は多糖網状構造内に運ばれ、その網状構造内ではその活性成分はゲル内のグラフトされた基とイオン結合により固定することができる。被包化される化合物を含んでいてもいなくても、取得されるゲルは、所望されるサイズの粒子を取得する目的で機械的に粉砕する必要がある。超粉砕方法は当該技術分野において既知であり、そして特に、ホモジナイザーを用いる高圧噴出を伴うことがある。Ｌ−タイプのＳＭＢＶ内への親水性化合物の被包化は、一般的にはこの段階に実施される。このためにはこの粒子懸濁液を、凍結乾燥もしくは噴霧のような乾燥方法を使用することにより事前に乾燥される。この乾燥粒子を例えば、やはり乾燥形態である活性成分と混合する。漸進的再水和はゲルの場合と同様に活性成分を溶解し、そしてその後にはそれをその粒子内に担持することを可能にし、その粒子内ではその活性成分はイオン性結合により固定される。Ｌ−タイプのＳＭＢＶの外部脂質ラメラはリン脂質およびセラミドを初めとする様々な種類の天然もしくは合成脂質ばかりでなく、ミセルとして整列させることが可能なイオン性もしくは非イオン性界面活性剤を用いて作成することもでき、これらに対して、コレステロール、脂肪酸、もしくは油溶性ビタミンのような脂質化合物もしくは両親媒性化合物のいずれかである他の化合物も添加することもできる。このラメラはリポソームの製造に用いられる方法、すなわち逆相調製法、洗剤透析、もしくは高圧押出を使用することにより取得することが好ましい。Ｌ−タイプのＳＭＢＶの表面に担持するかもしくは予め存在させる活性成分は、界面活性剤と混合することでこの段階の間に取り込ませることができる。本発明の他の主題は、ａ）少なくとも一つの塩基性イオン化可能活性成分を、酸性リガンドがグラフトされた架橋親水性マトリックス内に、その活性成分のｐＫ_a以下のｐＨで被包化すること、ｂ）溶媒のｐＨをその活性成分のｐＫ_a以上の値に増加させること、ｃ）前記マトリックスの中心に主に局在する活性成分を含む親水性マトリックスを回収すること、を特徴とする粒子状ベクターの調製のための方法である。実際のところ、親水性核の荷電に適切なプロトコールを選択することで荷電のトポロジーを調節することが可能になる。親水性マトリックスは天然にもしくは化学的に架橋結合される多糖もしくはオリゴ糖で構成されていることが好ましい。ＳＭＢＶと共に使用することができるこの方法は、外部脂質ラメラが減少しているか（Ｌ−タイプのＳＭＢＶ）、あるいは除去されている（ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ）粒子を利用することが、先に記載される方法に関してはより具体的な意味で重要である。本出願人らは、従来の充填方法を用いては、イオン性活性成分の被包化のためのベクターとして脂質ラメラが減少しているこのようなＳＭＢＶを使用することが困難であるとの所見を得た。実際、活性成分の分子が核の周辺に維持されながらも核の多糖粒子と結合する場合には、このことにより粒子懸濁液内の不安定性がもたらされることがあり、活性分子に起因する粒子内結合によりそれらの粒子が相互に凝集する可能性がある。この現象は活性粒子の低レベル充填にとっては比較的少規模で済む一方、活性粒子の高レベル充填にとっては非常に重要になる。同様に、粒子のサイズが非常に重要である。大きなサイズの粒子（例えば１００ナノメーターを上回る大きさ）に関しては、その粒子の内部容積に対する表面積の比率は非常に低く、この理由のために被包化される活性成分の総量と比較するとその粒子の周辺に結合する活性成分の量は非常に低く、このことが粒子間結合の可能性を制限する。それとは対照的に、粒子のサイズが非常に小さい場合にはこの凝集現象は非常に顕著となる。核にグラフトされた脂肪酸の層を有し、そのために粒子間相互作用から孤立するように働くＳＭＢＶに関してはこの現象は非常に顕著という訳ではないことも銘記すべきである。これを克服する目的で、本出願人らは、被包化のイオン性条件を調節することにより粒子内への活性成分の侵入をトポロジカルに調節することが可能であることを見い出した。多糖核を多電解質マトリックスとして見なすことができ、そしてそれらはそれ自体、粒子の内側と外側との間にｐＨ差を有する。この現象は、対イオンの多少は有意な解離、および多糖網状構造上のイオン性官能基の固定化に起因する。この特性は、内部だけでの被包化、あるいは核の表面もしくは別の場合では周辺のみにおける被包化を生じることにより、取り込まれるべき活性成分の局在化の調節を可能にする。取り込まれるべき活性成分がそれ自体塩基性である場合には、そのｐＫ_a以下のｐＨを有する媒体中における可溶性のために活性成分はイオン化形態で存在するようになり、そしてそのため活性成分は多糖核上にグラフトされた陰イオン性の基に付着できるようになる。ｐＨがｐＫ_a以上に上昇する場合には、活性成分は脱イオン化形態をとり、このため活性成分がマトリックスと相互作用することができなくなる。従って、被包化される活性成分の局在化を調節する目的でその粒子の内側と外側との間に存在するｐＨ差を利用すると、外部媒体が過度に高いｐＨを有する場合には活性成分は核の周辺に局在するイオン性の基とは相互作用することができない。酸性リガンドにより誘導化された核の内部ｐＨが外部ｐＨよりも低い場合には、脱イオン化形態の粒子内に入り込んでいる活性成分は再度イオン性となり、そしてそのためＬ−タイプのＳＭＢＶの陰イオン性基に結合する。この特異的な事例においては、活性成分は周辺領域を除外してその粒子の中心にのみ局在するであろう。従って、この種類の被包化は粒子の至適分散にとって非常に好ましい。酸性の活性成分の場合には、以下に示す、ａ）少なくとも一つの酸性イオン化可能な活性成分を、塩基性イオン性リガンドがグラフトされた架橋親水性マトリックス内に、その活性成分のｐＫ_a以上のｐＨで被包化する段階、ｂ）その媒体のｐＨを活性成分のｐＫ_a以下の値に低下させる段階、ｃ）前記マトリックスの中心に主に局在する活性成分を含む親水性マトリックスを回収する段階、に従って、塩基性リガンドにより誘導化される核を用いる方法を対称的に適用させることが可能である。多糖核内の活性成分の局在化のトポロジカルな調節を伴うこの種の充填は、外部脂質ラメラが減少している（Ｌ−タイプのＳＭＢＶ）もしくは除去されている（ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ）ＳＭＢＶを用いるベクター法の適用にとって特に有利であるが、充填の程度を増大させるか、あるいは認識単位を例とする、そして特にアポ蛋白質であるマクロ分子の外部付着の場合には外部リン脂質ラメラの構造に起因する障害を最小限に抑える目的では、先の特許において既に記載されるＳＭＢＶもまた適切でありかつ所望される。本発明の他の目的はイオン性基がグラフトされた架橋親水性核で構成されている粒子状ベクターであり、そしてこれは本明細書ではＰＳ−タイプのＳＭＢＶと称される。このイオン性基は、例えば、リン酸塩、コハク酸塩、もしくはカルボキシメチレートのような陰イオン性の基、あるいは第四級アンモニウムもしくはアミンを例とする陽イオン性の基であることができる。このＰＳ−タイプのＳＭＢＶのサイズは２０ｎｍと２００ｎｍとの間であることが好ましい。架橋親水性核は、天然もしくは化学的に架橋された天然もしくは合成のポリマーで構成することができる。特に、デンプン、デキストラン、セルロース、およびそれらの誘導体のような多糖もしくはオリゴ糖を利用する。活性成分をマトリックスの中央に主に局在するＰＳ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化すると有利であり、この核の外部部分は実質的には活性成分を欠損しており、このことにより一般的に小サイズの粒子に生じる凝集現象を回避することが可能となる。従って本発明の主題の一つは、活性成分を含む架橋多糖マトリックスで構成されている粒子状ベクターであって、前記活性成分がこのマトリックスの中心に主に局在することが好ましい。更に他の態様に従うと、本発明の主題は、懸濁液の形態であることができる完全なＳＭＢＶ、ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ、もしくはＬ−タイプのＳＭＢＶ内に活性成分を被包化することを可能にする充填方法である。充填は粒子状ベクター上で実施され、このベクター上には、適切であらば様々な脂質および／または両親媒性層が固定される。これを行うためには、親水性核がイオン性の基を含む必要がある。従ってこの方法は以下に示す、ａ）イオン性基が固定された架橋親水性核を調製する段階、ｂ）場合によっては、例えば脂肪酸のような脂質化合物をこの架橋核上に固定し、そして／または両親媒性ラメラ（例えばリン脂質ラメラ）を、場合によってはアシル化された核上に形成する段階ｃ）活性成分をこの活性成分に適するｐＨで、かつエネルギーを補給しながらこのベクター内に充填する段階ｄ）活性成分を取り込ませてから、そのベクターを回収する段階、を必要とする。ＰＳ−タイプのＳＭＢＶの場合には、イオン性活性成分を取り込ませるために通常の充填方法を使用することは困難である。トポロジカルな調節を伴う方法がこの問題を克服することを可能にすることは事実である。しかしながらトポロジカルな調節は、活性成分とベクターとに適合する必要があるｐＨの厳密な調節を必要とする。普通のＳＭＢＶもしくはＬ−タイプのＳＭＢＶの場合には、今日までに開発されている方法は核内への活性成分の取り込みおよびその後のリン脂質ラメラの形成を含む。これらの方法は確かに非常に有利な取り込み結果を生じるが、その調製方法のすべての段階において活性成分を取り扱う必要がある。非常に毒性が強いか、あるいは非常に高価な活性成分の場合には、これらの方法は安全性もしくは価格という理由のために推奨することができない。従って本出願人らは、これらの問題を克服するための別法を開発した。ベクターの多糖網状構造内にグラフトされたイオン性リガンドが、反対の電荷のイオン性活性成分への有意な親和性をもたらす。しかしながら取り込みの際には、ベクターの凝集を回避し、そして活性成分が主にその粒子内に局在することを可能にする目的でその親和性を調節する必要がある。予備充填のためにはこの調節はｐＨの厳密な調節もしくは低レベルの取り込みを必要とする。この凝集は大半は表面上での活性成分の局在化に起因しており、この局在化はそれ自体、粒子表面におけるリガンドの存在に起因する。この新規の種類の充填化を成し遂げるには、ａ）活性成分の取り込みを提供する目的での、活性成分のそのベクターに対する有意な親和性（この親和性は架橋ポリマー内にグラフトされた酸性もしくは塩基性のイオン性リガンドにより作成され、このリガンドの密度および濃度は活性成分に従って調節することができる）、ｂ）凝集を亢進させる粒子間の相互作用を回避させる目的での、取り込みの際のベクターの有意な分散（この分散は、粒子間相互作用を減少させるのに十分な濃度であるばかりでなく、薬剤学的適用法にも適合する濃度の反応培地中でのベクターの希釈により提供することができる）、ｃ）ベクター内への活性成分の侵入を亢進するためのいずれかの方法の使用（撹拌もしくは加熱を例とする形態でのエネルギーの寄与は活性成分の侵入の速度を加速させるであろうが、ベクターの分散をも亢進させるであろう。活性成分の適切な形態は、活性成分を付着させることを可能にするのに十分なイオン性を帯びているばかりでなく、表面相互作用を回避する目的で最小電荷状態である必要がある）、という３つの因子を作用させる。ＳＭＢＶ、あるいはＬ−タイプもしくはＰＳ−タイプのＳＭＢＶについては、これらの必要条件に相当する取り込みプロトコールを使用することが可能である。架橋ポリマー内のグラフトされたイオン性リガンドの存在はこれら３つの種への活性成分の付着を提供する。ベクターの分散は水中にＰＳ−タイプのＳＭＢＶを懸濁させることにより実施することができる。ＳＭＢＶもしくはＬ−タイプのＳＭＢＶは、アシル化させたもしくはさせていない多糖核、および水性媒体中に予め分散させてあるリン脂質から調製し、そしてその後にこれを水中に懸濁させる。撹拌もしくは加熱の形態を例とするエネルギーの寄与はＳＭＢＶに損傷を与えることがない。ｐＨを変化させ、そしてこの種類の充填化に適合するｐＨ領域を特定することが可能である。ＳＭＢＶおよびＬ−タイプのＳＭＢＶの場合には、脂質および／またはリン脂質ラメラは活性成分が横断しなければならない障壁を表す。しかしながら記述される充填化方法においては２つの追加的な因子がこの横断を亢進させるために介在し、それらは、ａ）脂質およびリン脂質ラメラを流動化させ、そしてベクター内への活性成分の侵入の速度を増加させることができるエネルギーの寄与、ｂ）ベクターの内側と外側との間に存在する濃度勾配の存在に起因して非常に弱いイオン性を示すことがある活性成分の形態、である。加えて、活性成分と架橋多電解質ポリマーとの間の強力な親和性が活性成分の連結を提供し、そして強度の分散がベクター同士の凝集を回避させる。この新規の方法は、元のベクターのサイズを保持しながらも活性成分が充填されるいずれかの種類のＳＭＢＶを調製することを可能にし、そして多くの利点を有する。この方法は取り込み前の活性成分を伴わない空のベクターを調製することであり、このことによりベクターに適し、そして活性成分に依存しない条件に従って空のベクターを処理し、そしてその後に充填を行うことが可能になる。従って、これらの条件は多少徹底したものであることがある。これらはまた、元の実体として空のベクターの特徴決定を行うことを可能にもする。取り込み段階はこの方法の最終段階であり、これは毒性を示しそして高価であることが可能な活性成分をこの方法の内の唯一の段階で取り扱うようにする。従ってこの方法は、活性成分の取り扱いおよび可能な損失を減少させる。そのため、この方法は安全性に関してより確実であるばかりでなく、より有益であること可能にする。その上幾つかの活性成分にとっては、取り込み条件は比較的単純であることがあり、このことは使用時にその活性成分でベクターを充填するという企画を可能にする。使用時における調製の方法は、液体状態での保存の問題を排除することができる。この新規の充填方法は、ベクターとイオン性活性成分との間の有意な親和性ばかりでなく、ベクターおよびイオン性形態の活性成分の分散による取り込みの単純な調節にも基づいている。この方法は、活性成分に依存しない空のベクターの調製、単一段階のみにおける活性成分の取り扱い、および使用時の調製の可能性、という非常に立派な利点を有している。本発明の他の主題は、内側から外側にかけて、イオン化可能な活性成分を含む架橋多糖マトリックス、共有結合によりそのマトリックスに固定される第一脂質層、および蛋白質もしくはペプチド分子が場合によってはグラフトされている両親媒性化合物の第二層を含む粒子状ベクターである。本発明に従う粒子状ベクターは、１０ｎｍと５μｍとの間の直径、およびより好ましくは２０ｎｍと７０ｎｍとの間の直径を有することが好ましい。これらの粒子状ベクターは、生物学的活性を保持する一つもしくは複数の分子をその表面に担持するかもしくはそれがその表面に存在することを意図する。これらの分子は中でも、 − 抗生物質および抗ウイルス剤、 − 蛋白質、プロテオグリカン、ペプチド、 − 多糖、リポ多糖、 − 抗体、 − 抗原、 − 殺虫剤および殺カビ剤、 − 心臓血管系に作用する化合物、 − 抗癌剤、 − 抗マラリア剤、 − 喘息薬、 − 皮膚における効果を有する化合物、 − 乳製品の脂質小球体の構成成分、を記載する必要があるが、このリストは制限ではない。以下の実施例においては、それらの特徴に従う様々な製品の充填化の記載がなされ、そしてそれらは具体的には、 − 全身投与を意図する小サイズの親水性製品、 − 抗癌活性を保持する活性成分の製品、 − 抗菌活性を保持する２つの酵素、ラクトパーオキシダーゼおよびグルコースオキシダーゼの製品、 − 酸化防止剤活性を保持するプロシアニドール（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｏｌ）オリゴマーからなる植物抽出物の製品、 − 牛乳の脂肪小球体の構成成分からなる製品、である。グラフトされた脂肪酸のコロナを有するＳＭＢＶと同様に、Ｌ−タイプのＳＭＢＶを濾過もしくはオートクレーブ処理のいずれかにより安定化させることができる。これらはまた、例えば添加物の存在下で凍結もしくは凍結乾燥を行うか、あるいは別法では噴霧することもできる。Ｌ−タイプもしくはＰＳ−タイプのＳＭＢＶの利点は、具体的には、 − 担持もしくは存在すべき産物への適用を可能にするモジュラー式構造法、 − リポ蛋白質もしくは乳製品の脂質小球体のような天然の構造に関する生物模倣性、 − 脂肪酸コロナを含むＳＭＢＶに関する合成および産業化のより高い簡便性、 − 核の高分子構造に起因する高い化学的安定性および熱安定性、 − 特定のサイズおよび非常に小さいサイズ（２０ｎｍ）を均一に取得することの可能性、 − 核内に被包化される化合物、および具体的には酵素もしくは酸化防止剤化合物を安定化させるそれらの能力、である。従って本発明の主題は、本発明に従う粒子状ベクターおよびその投与のための薬剤学的に許容される支持体を含むことを特徴とする薬剤学的組成物である。本発明に従うベクターは、具体的には、治療および免疫学的適用法に有用である。本発明の他の主題は、既述の粒子状ベクターおよび化粧品学的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする化粧品学的組成物である。最後に、本発明に従う粒子状ベクターを含む食品組成物が本発明の一部分を形成する。以下の実施例は本発明の範囲を制限することなく本発明を詳細に説明することが意図される。これらの実施例においては、以下の図に対する引用が行われるであろう。図１：２種類の蛍光リガンドでラベル化されるＬ−タイプのＳＭＢＶにおけるエネルギー移動。多糖核をローダミンを用いてラベル化し、そしてリン脂質層をＮＢＤを用いてラベル化する。図２：ローダミンを用いてラベル化されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶとＮＢＤを用いてラベル化されるリポソームとの間のエネルギー移動。図３：２種類の蛍光リガンドでラベル化されるＳＭＢＶについてのエネルギー移動。アシル化させた核をローダミンを用いてラベル化し、そしてリン脂質層をＮＢＤを用いてラベル化する。実施例１：塩化ホスホリルによるデキストリンの二重架橋結合による平均直径２０ナノメーターの多糖粒子の調製１００ｇのデキストリン（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社）を３リットルのジャケット形反応器内に導入し、そして３５０ｍｌの脱イオン水および１００ｍｌの１０Ｎ水酸化ナトリウムに溶解する。均一化後に３５．３ｍｌのＰＯＣｌ₃および２２５ｍｌの１０Ｎ水酸化ナトリウムを同時に添加する。反応物の添加終了後に、この反応混合物を更に１５分間撹拌し、そしてその後に塩酸の添加により中和する。このゲルを２リットルの脱イオン水中に希釈し、そして高圧ホモジナイザー（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ社）を使用して９００バール下で均質化する。この段階は平均直径２０ｎｍのマトリックスを取得することを可能にする。このマトリックスをその後に塩を除去する目的のエタノールでの沈殿により洗浄し、そしてその後に３０ｇ／ｌのマトリックスおよび２０ｇ／ｌの重炭酸アンモニウムの濃度での凍結乾燥により乾燥させる。７５ｇの凍結乾燥化マトリックスが回収される（反応収率７５％）。実施例２：陽イオン性第四級アンモニウム基がグラフトされた多糖マトリックスの調製２００グラムのアミロペクチン（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社、Ｌｉｌｌｅ、Ｆｒ．）を５リットルの反応器内の５００ミリリットルの２Ｎ水酸化ナトリウム中に分散させる。この溶液が良好に均一化された時点で、０．５等量／グルコース残基に相当し、１５０ミリリットルの水中に溶解される９３．６グラムの塩化グリシジルトリメチルアンモニウム（Ｆｌｕｋａ社、ＣＨ）、および０．１等量／グルコース残基に相当する１１．４グラム（すなわち９．７ミリリットル）のエピクロロヒドリン（Ｆｌｕｋａ社、ＣＨ）を同時に導入する。この混合物を１〜２時間均一化させ、そしてその後に８時間放置する。重合化したデンプン調製物をその後に酢酸の添加によりｐＨ６にする。得られるゲルはその後に、全ての塩および反応副産物が除去されるまで蒸留水で複数回洗浄する。凍結乾燥後に２４４グラムの架橋ゲルが取得され、これはすなわち反応収率８０％である。実施例３：カルボキシメチルタイプ（「ＣＭ−タイプ」）の陰イオン性の基がグラフトされた多糖マトリックスの調製２００グラムのデキストリン（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社）を５リットルの反応器内の３００ミリリットルの７Ｎ水酸化ナトリウムに溶解する。この溶液が良好に均質化された時点で、０．１等量／グルコース残基に相当する９．６ミリリットルのエピクロロヒドリン（Ｆｌｕｋａ社、ＣＨ）および８０ミリリットルの水中に溶解される１１７．２グラムの塩酸を同時に導入する。１時間の撹拌後、９．６ミリリットルのエピクロロヒドリンおよび１５０ミリリットルの２０Ｎ水酸化ナトリウムを激しく撹拌しながら添加する。添加終了後にこの調製物を６時間均一化させ、そしてその後に一晩放置する。このようにして得られるゲルを１リットルの水に懸濁させ、そして２Ｎの塩酸の添加によりｐＨ３〜４に酸性化する。その後にこのゲルを濾過し、そして蒸留水で洗浄する。凍結乾燥後に２７６グラムのカルボキシメチルタイプのゲルが取得され、これはすなわち８０％を上回る収率である。実施例４：塩化ホスホリルによるデンプンの架橋化による平均直径１μｍの親水性マトリックスの調製１００ｇの小麦デンプン（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社）を３リットルのジャケット形反応器内に導入し、そして３７５ｍｌの脱イオン水および１００ｍｌの１０Ｎ水酸化ナトリウムに溶解する。この混合物を１５分間室温で撹拌する。この混合物が均一化されたら、１１ｍｌのＰＯＣｌ₃および５０ｍｌの１０Ｎ水酸化ナトリウムを同時に添加する。これらの反応物の添加終了後にこの混合物を更に１５分間撹拌し、そしてその後に酢酸の添加によりｐＨ７に中和する。このゲルは蒸留水を用いて３０分間遠心機（Ｒｏｕｓｓｅｌｅｔ社）内で洗浄して余剰な塩および反応副産物を除去する。このようにして取得されるゲルをその後に高圧下（５００バール、Ｗｅｓｔｆａｌｉａ社のミニラボ（ｍｉｎｉｌａｂ）ホモジナイザー）で均一化する。この段階は平均サイズ１μｍのマトリックスを取得することを可能にする。自動滴定機（Ｍｅｔｈｒｏｍ６８２タイトロプロセッサー（ｔｉｔｒｏｐｒｏｃｅｓｓｏｒ））を用いる１ｇの架橋結合化ゲルの滴定により、架橋結合化ゲルのグラム当たり０．３モル等量（ｍｅｑ）のホスホジエステル官能基の架橋結合の度合いが示される。直径１μｍのＰＳ−タイプのＳＭＢＶはこのようにして取得される。実施例５：２００ナノメーターのイオン性多糖粒子の生成実施例２に従って取得されるゲルもしくは実施例３に従って取得されるＣＭ− タイプのゲルの１５グラムを５００ミリリットルの蒸留水中に分散させ、そしてラニーミニラボ（ＲａｎｎｉｅＭｉｎｉＬａｂ）１２−５１ホモジナイザー（ＡＰＶＲａｎｎｉｅ社、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＤＫ）により均一化する。適用させる均一化圧は６００バールを１２分間である。塩基性もしくは酸性架橋多糖粒子の液体懸濁液が取得され、カルターＮ４ＭＤナノサイザー（ＣｏｕｌｔｅｒＮ４ＭＤＮａｎｏｓｉｚｅｒ）で測定される粒子サイズは２００ナノメーター付近に集中する。このナノ粒子をその後に２０グラム／リットルの重炭酸アンモニウムの存在下での凍結乾燥により乾燥させる。直径２００ｎｍのＰＳ−タイプのＳＭＢＶはこのようにして取得され、これをそのまま、もしくはＬ−タイプのＳＭＢＶに変換させて使用することができる。実施例６：２０ナノメーターの粒子からのＬ−タイプのＳＭＢＶの調製空のＬ− タイプのＳＭＢＶの調製１０ｍｇの２０−ｎｍ多糖核を２ｍｌの５０ｍＭのオクチルグルコピラノシドＯＧＰ（Ｆｌｕｋａ社）中に分散させる。これらを超音波下で、２ｍｌの５０ｍＭＯＧＰ内に分散される精製卵黄レシチン（Ｓｉｇｍａ社）とコレステロール（Ｓｉｇｍａ社）との８０／２０混合物の溶液１０ｍｇと混合する。その後にこの調製物を超音波下で急激に５ｍＭの最終ＯＧＰ質量モル濃度に希釈し、そしてその後に４８時間長期的に透析する。サイズの分析はカルターＮ４ナノサイザー（ＣｏｕｌｔｅｒＮ４Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ）を用いて実施し、９７％の粒子が２３ｎｍの直径を有することが示される。実施例７：２０ナノメーターのＬ−タイプのＳＭＢＶ上でのエネルギー移動による特性決定Ａ− 蛍光によりラベル化されるＬ−タイプのＳＭＢＶの調製ａ− ローダミン（λ ｅｘ５４０ｎｍ−λ ｅｘ５８０ｎｍ）でラベル化される多糖核の調製実施例６に従って調製される５０ｍｇの２０−ｎｍ多糖核を１ｍｌの１００ｍＭ、ｐＨ１０の重炭酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社）中に分散させる。ジメチルホルムアミド（ＳＤＳ）中に溶解される０．５ｍｇのローダミンＢイソチオシアン酸エステル（Ｓｉｇｍａ社）を添加するが、これはすなわち多糖核の重量に関して１％のローダミンである。室温での１８時間の撹拌後、未反応のローダミンを除去する目的でエタノールでの複数回の洗浄を実施する。その後にこの核を凍結乾燥により乾燥する。ｂ− ニトロベンゾジアゾール（ＮＢＤ）（λ ｅｘ４７０ｎｍ−λ ｅｘ５３０ｎｍ）でラベル化されるリン脂質ラメラの形成＊蛍光多糖核からローダミンイソチオシアン酸エステルを用いてラベル化される２０ｎｍの核の１０ｍｇを２ｍｌの５０ｍＭのオクチルグルコピラノシドＯＰＧ（Ｆｌｕｋａ社）の存在下で分散させる。２ｍｌの５０ｍＭＯＧＰ中に分散される精製卵黄レシチン（Ｓｉｇｍａ社）、コレステロール（Ｓｉｇｍａ社）、およびホスファチジルエタノールアミンのニトロベンゾジアゾールＮＢＤ（Ｓｉｇｍａ社）でラベル化される１０ｍｇの７９／２０／１混合物をその後にその懸濁液中に導入するが、これはすなわち多糖核に関して１００％のリン脂質混合物である。この溶液をその後に超音波下で急激に５ｍＭの最終ＯＧＰ質量モル濃度に希釈し、そしてその後に４８時間長期的に透析する。＊非蛍光多糖核からＬ−タイプのＳＭＢＶを非蛍光多糖核以外は同一の様式で調製する。この調製物を対照として使用し、これはエネルギー移動のゼロレベルを表す。Ｂ− 対照蛍光多糖核の調製：ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ１０ｍｇの２０−ｎｍ蛍光核を２ｍｌの５０ｍＭＯＧＰの存在下に分散させる。この溶液をその後に超音波下で急激に５ｍＭの最終ＯＧＰ質量モル濃度に希釈し、そしてその後に４８時間長期的に透析する。Ｃ− 対照蛍光リポソームの調製１０ｍｇの先のリン脂質混合物を２ｍｌの５０ｍＭＯＧＰ中に分散させる。この溶液を超音波下で急激に５ｍＭの最終ＯＧＰ質量モル濃度に希釈し、そしてその後に４８時間長期的に透析する。Ｄ− 対照ＳＭＢＶの調製２種類の蛍光リガンドでラベル化させるＳＭＢＶ（ローダミンを用いてラベル化されるアシル化核およびＮＢＤを用いてラベル化されるリン脂質）、ならびに非蛍光アシル化核およびＮＢＤを用いてラベル化されるリン脂質層を保持するＳＭＢＶを先の特許（欧州特許第３４４，０４０号）内に記載される方法に従って調製した。このエネルギー移動はＮＢＤの蛍光（５３０ｎｍの放射波長）の減少により定量化される。リン脂質層のみが蛍光的にラベル化されるＬ−タイプのＳＭＢＶに関しては、２種類の蛍光リガンドでラベル化されるＬ−タイプのＳＭＢＶにおいて２０％の蛍光エネルギー移動が示された（図１）。この移動は４℃での４時間のインキュベーション後、ならびに１００℃での２時間のインキュベーション後にも安定のままである。このことは、リン脂質および多糖核は空間的に近接していることを示すのに役立つ。密接なリン脂質／多糖核の組み合わせが確認される。対照蛍光多糖核（ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ）と対照蛍光リポソームとの単純な混合化では先のインキュベーション条件下であっても２つの発蛍光団の間のエネルギー移動は生じない。Ｌ−タイプのＳＭＢＶについて観察されるこのエネルギー移動は、同じ実験条件下でのＳＭＢＶについて観察されるエネルギー移動に矛盾しない（図３）。実施例８：２００ナノメーターの多糖粒子からのＬ−タイプのＳＭＢＶの調製実施例５に従って調製されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶの１０グラムを５００ミリリットルの蒸留水中に分散させ、そして３００バールの圧力下、１０リットル／時間の流速でのラニーミニラボ（ＲａｎｎｉｅＭｉｎｉＬａｂ）１２−５１ホモジナイザー（ＡＰＶＲａｎｎｉｅ社、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＤＫ）内に入れる。０．５グラムの水素化ダイズホスファチジルコリン（Ｎａｔｔｅｒｍａｎｎ社、Ｆｒ．）をホモジナイザー内に循環される懸濁液中に直接注入する。この調製物を１２分間均一化する。得られる懸濁液は分散される約２００ｎｍのＬ−タイプのＳＭＢＶを含む。実施例９：実施例４に従って調製される親水性マトリックスの表面への牛乳の蛋白質およびリン脂質構成成分の付着実施例４に従って調製される親水性マトリックス１００ｇを３リットルのミキサー内に入れる。１０ｇの蛋白質およびリン脂質構成成分を添加する。１リットルの水を累進的に、かつ撹拌しながら添加する。この全混合物を８０Ｌ／時間の割合および２００バール下で均一化する（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ社のホモジナイザー）。クリーム状の調製物が取得され、これは遊離の蛋白質およびリン脂質構成成分をほとんど含んでおらず、そして２つの対照実験を蛋白質およびリン脂質構成成分のみを用いて実施する。対照（Ｎｏ．１）および調製物を遠心分離する。未遠心対照、遠心した対照の上清、および調製物の上清中の蛋白質のレベルをブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）法により測定する。分析は１００ｍｌについて実施する。０．５ｇの蛋白質が遠心した対照の上清中に測定され、そして０．０５ｇが調製物の上清中に測定される。これらの結果から、対照Ｎｏ．１の遠心物中に存在する蛋白質の量が演繹され、これはすなわち０．０５ｇであり、そしてその結果、親水性マトリックスに結合した蛋白質量はすなわち０．４ｇである。連結される蛋白質のパーセンテージは最初に取り込まれる蛋白質の量に関して８０％である。その上、この調製物の遠心物を乾燥させ、そしてその後にクロロホルムでの濾過により洗浄してリン脂質を抽出する。その後にクロロホルムを蒸発させ、そして残存するリン脂質の重量測定を行う。測定により０．４ｇが示され、これはつまり最初に取り込まれるリン脂質構成成分の量に関して８０％である。実施例１０：Ｌ−タイプのＳＭＢＶ内への酵素グルコースオキシダーゼ（ＧＯ）の取り込みグルコースオキシダーゼ（ＧＯ）は３．５の等電点および１８０，０００ダルトンの平均分子量を有する酸性蛋白質である。実施例２およびその後に実施例５に従って取得されるＱＡＥ−タイプの核０．３グラムならびに０．６グラムのＧＯを乾燥状態で混合する。この混合物をその後に、ＧＯのｐＩ以上のｐＨ７の緩衝液１．５ミリリットルの添加により、室温で撹拌しながら累進的に水和させ、そしてその後に冷蔵庫内（４℃）で一晩撹拌させたままにする。その後にｐＨをＧＯのｐＩ以下の３に調節し、そして追加的に３０分間インキュベートする。その後にこの調製物を４８．５ミリリットルの蒸留水中に分散させ、ｐＨを７に調節し、そして重炭酸アンモニウムの存在下で凍結乾燥する。このようにして取得されるＧＯが充填される核を粉末の水素化ダイズホスファチジルコリン（Ｎａｔｔｅｒｍａｎｎ社、Ｆｒ．）０．１５グラムと混合する。この混合物を１５０ミリリットルの蒸留水で水和し、そしてラニーミニラボ（ＲａｎｎｉｅＭｉｎｉＬａｂ）１２−５１ホモジナイザー（ＡＰＶＲａｎｎｉｅ社、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＤＫ）内、３００バールの圧力下で均一化する。ＧＯが充填されるＬ−タイプのＳＭＢＶはこのように取得され、懸濁液の限外濾過後に２７８ｎｍのＵＶにより定量的に決定したところ、被包化収率は９２％であり、そして核の重量に関して１８４％の取り込み度合いである。実施例１１：ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ内への酵素ラクトパーオキシダーゼ（ＬＰ）の取り込みラクトパーオキシダーゼ（ＬＰ）は抗菌性の酵素である。これは９．６の等電点および約８０，０００ダルトンの平均分子量を有する塩基性蛋白質である。実施例３およびその後に実施例５に従って取得される陰イオン性（ＣＭ）のＰＳ−タイプのＳＭＢＶの０．５グラムを、２５０ｍｌの丸底フラスコ内のＬＰのｐＩ以下のｐＨ７に調節される緩衝液１００ミリリットル中に懸濁させる。１ミリリットルの水に溶解される０．５ｇのＬＰ（ＢｉｏＳｅｒａｅ社）をその後に撹拌しながら導入する。この混合物を冷蔵庫（４℃）内で一晩撹拌する。その後にｐＨをＬＰのｐＩ以上の９．８に調節し、そして３０分間インキュベートする。その後にｐＨを７に戻し、そしてその後にこの懸濁液を重炭酸アンモニウム（２０グラム／リットル）の存在下で凍結乾燥する。ＬＰが充填されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶは４１２ｎｍのＵＶによる定量的決定から、９９％の充填化収率および核の重量に関して９９％の取り込み度合いで取得される。実施例１２：ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化されるＬＰとＬ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化されるＧＯとの混合物の抗菌活性＊インビトロでの定量的な活性の決定１ｍｌの１Ｍグルコース溶液、０．２ｍｌのオルト−フェニレンジアミン溶液（クエン酸緩衝液中の１ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ５．６、１０ｍＭ濃度）、および１．６ｍｌのクエン酸緩衝溶液（１０ｍＭ、ｐＨ５．６）を混合する。その上、実施例１１に従って調製されるラクトパーオキシダーゼを含む０．２ｍｇのＰＳ−タイプのＳＭＢＶ、および実施例１０に従って調製されるグルコースオキシダーゼを含む１．８ｍｇのＬ−タイプのＳＭＢＶを１ｍｌの水中で混合する。この懸濁液の０．２ｍｌを先に調製される２．８ｍｌに添加し、そして撹拌を室温で２分間実施する。展開される発色反応を１ｍｌの２Ｎ硫酸で停止させ、そしてその発色を、ＳＭＢＶを含まないブランクに対して４９０ｎｍで計測する。強い輝度の発色の存在は、Ｌ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化される２つの酵素がそれぞれの活性を保持することを示す。被包化される酵素の活性の定量的測定は、同一条件下での水溶液中の酵素で取得されるものに匹敵する結果を生じる。＊大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）のある株に対する抗菌活性ゲロースアガー（ｇｅｌｏｓｅａｇａｒ）と混合させたＬＢグルコース培養培地を調製し、そして耐性記録用皿内に注ぎ入れる。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の株を２００μｌ／皿の率でゲロースの表面に接種する。被包化させた酵素もしくは被包化させていない酵素を滅菌した濾紙ディスクに染み込ませ、そして接種させた皿のゲロース上に乗せる。この皿を２４時間、３７℃でインキュベートさせたままにし、そしてディスク周辺の阻害直径を測定する。ディスクに０．０５ｍｇ／ｍｌから１０．６ｍｇ／ｍｌまで変化する酵素濃度のＬＰおよび０．８ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌまで変化する酵素濃度のＧＯを染み込ませた。阻害直径は１２ｍｍから２０ｍｍまで変化し、そしてこれは酵素が被包化されていてもいなくても同程度である。実施例１３：ＳＭＢＶ内に被包化される酵素の抗菌活性の安定化グルコースオキシダーゼの３つのバッチを調製した。バッチ１は０．２ｍｇ／ｍｌのＧＯ水溶液で構成され、バッチ２は先の特許に従って調製されるＳＭＢＶ中に被包化され、粒子の重量に関しては２００％の被包化の度合いを有するＧＯの水性懸濁液（そしてこの懸濁液中ではＧＯ濃度は０．２ｍｇ／ｍｌである）で構成され、そしてバッチ３は実施例１０に従うＬ−タイプのＳＭＢＶ中に被包化されるＧＯの水性懸濁液（そしてこの懸濁液中でもＧＯ濃度は０．２ｍｇ／ｍｌである）で構成される。これらの３つの懸濁液を４℃に放置し、そして毎週そしてその後には毎月、実施例１２に記載される方法により定量的決定を行う。ＧＯ溶液の活性は時間と共に減少し、そして２５０日後にはゼロになる。それとは対照的に、ＳＭＢＶもしくはＬ−タイプのＳＭＢＶのいずれかの中に被包化されるＧＯの２つの懸濁液の活性は定常状態に落ち着いており、そして３２０日後にも当初の活性の１００％に等しいままである。その上、０．１ｍｇ／ｍｌのラクトパーオキシダーゼ水溶液、ならびに実施例１１に従って調製されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶ中に被包化され、そしてＬＰ濃度がやはり０．１ｍｇ／ｍｌであるＬＰの懸濁液も調製する。これらの２つの懸濁液を４℃に放置し、そして毎週そしてその後には毎月、実施例１２に記載される方法により定量的決定を行う。ＬＰ溶液の活性は時間と共に減少し、そして９０日後では当初の活性の３５％に過ぎないものとなる。それとは対照的に、ＰＳ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化されるＬＰの懸濁液の活性は定常状態に落ち着いており、そして９０日後にも当初の活性の１００％に等しいままである。実施例１４：Ｌ−タイプもしくは完全なＳＭＢＶ中のプロシアニドールオリゴマー（ＰＣＯ）の取り込みＡ− 第四級アンモニウムタイプのゲル内へのＰＣＯの取り込みプロシアニドールオリゴマー（ＰＣＯ）は加水分解可能なタンニン一族（フラボノイド類）の酸化防止剤である。これらは遊離ラジカルを駆除するための特性を有する。それらの平均分子量は約２０００ダルトンである。これらは７以下のｐＨで水に可溶性となる。５グラムのＰＣＯを最低量の蒸留水（約５ミリリットル）に溶解し、そして実施例２に従って調製される第四級アンモニウムタイプのゲル１０グラムを取り込ませる。この混合物を、均一なペーストを取得する目的でＰＣＯの平均ｐＫａ以上のｐＨ６の緩衝液の１８０ミリリットルで撹拌しながら水和させる。この混合物を一晩撹拌させたままにする。その後にｐＨをＰＣＯの平均ｐＫａ以下の３．５にもってゆき、３０分間撹拌しながらインキュベートしたままにさせ、そしてその後に遊離のＰＣＯを除去する目的で遠心分離により蒸留水で洗浄する。この懸濁液中の遊離のＰＣＯの量を２８０ｎｍのＵＶにより定量的に決定する。８２％の披包化収率およびゲルの重量に関する４１％の充填の度合いが得られる。この充填化ゲルをその後に５００ミリリットルの蒸留水中に分散させ、そしてラニーミニラボ（ＲａｎｎｉｅＭｉｎｉＬａｂ）１２−５１ホモジナイザー（ＡＰＶＲａｎｎｉｅ社、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＤＫ）内、６００バールの圧力下で１５分間、１０リットル／時間のＵＶ流速で均一化する。２００ｎｍ付近に集中するサイズであってＰＣＯで充填されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶの懸濁液が取得される。Ｂ− ＰＣＯが充填される２００ｎｍのＬ−タイプのＳＭＢＶの産生先に取得されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶ懸濁液を３００バールの圧力下でラニーミニラボ（ＲａｎｎｉｅＭｉｎｉＬａｂ）１２−５１ホモジナイザー内に入れる。０．５グラムの水素化ダイズホスファチジルコリン（Ｎａｔｔｅｒｍａｎｎ社、Ｆｒ．）をその後には３００バールの圧力下でのホモジナイザー内で再循環している懸濁液内に直接注入し、そして均一化を１０リットル／時間の流速で１２時間実施する。取得される懸濁液は約２００ｎｍの分散粒子を含む。Ｃ− ＰＣＯが充填される２００ｎｍの「完全な」ＳＭＢＶの産生「完全な」ＳＭＢＶは、ＰＣＯが充填されるＰＳ−タイプのＳＭＢＶによって、乾燥化（凍結乾燥）、有機溶媒中の部位選択的アシル化、および外部リン脂質ラメラの形成により既述のように調製される。Ｄ− Ｌ−タイプのＳＭＢＶ内のプロシアニドールオリゴマー（ＰＣＯ）の安定化油中水型の種類の乳液を調製し、そしてこれを３つのバッチに分割する。ＰＣＯを０．０５％の最終濃度で第一バッチに取り込ませる。Ｌ−タイプのＳＭＢＶ中に被包化されるＰＣＯを第二バッチに取り込ませ、そして「完全な」ＳＭＢＶ中に被包化されるＰＣＯを第三バッチに取り込ませる。ＰＣＯ中のこれらの後二つのバッチの最終濃度もやはり０．０５％である。これらの３つの乳液は均一な乳白色を有する。この３つのバッチの各々の試料をＵＶランプ（２５４ｎｍ）下に４８時間置き、そしてその後に遮光放置する。１０日後、遊離のＰＣＯを含む乳液は非常に強い輝度の茶色を有し、Ｌ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化されるＰＣＯを含む乳液はやや強い輝度の乳白色を有する一方で、「完全な」ＳＭＢＶ中に被包化されるＰＣＯを含む乳液は変化を示さなかった。同じ様式で３つの乳液中のＰＣＯの安定性を４０℃で６カ月間にわたり検査する。「完全な」ＳＭＢＶ中に被包化されるＰＣＯを含むクリーム状物は発色において有意には変化せず、Ｌ−タイプのＳＭＢＶ内に被包化されるＰＣＯを含むものはややより強い輝度の色を有する一方で、遊離のＰＣＯを含むものは茶色味を帯びるようになる。実施例１５：トポロジカルな調節による充填方法を用いることによるＬ−タイプのＳＭＢＶ中への抗癌性抗生物質ドキソルビシンの取り込みドキソルビシンはアントラサイクリン一族に属する抗癌性抗生物質である。ドキソルビシンは、その分子に特徴的な蛍光特性を付与するポリ芳香族性アグリコン、ならびにアミノ糖ダウノサミンを特徴とする両親媒性産物である。塩酸物の分子量は５８０であり、そしてそのｐＫａは８．５である。先のように調製される多糖核を用いる。１− トポロジカルな調節を伴わないドキソルビシンの取り込み水溶液中のドキソルビシン（０．１ｇ）を磁石撹拌を行いながら多糖核（０．５ｇ）に累進的に添加する。得られる懸濁液をその後に室温で１７時間、撹拌しながら遮光放置する。このようにしてドキソルビシンが充填される多糖核は完全に沈殿した。セッケンおよびリン脂質の存在下であってもこれらは２０ｎｍのサイズで正しく分散することができない。トポロジカルな調節を伴わないドキソルビシンの取り込みにより多糖核の完全凝集がもたらされ、そしてこれを２０ｎｍのＬ−タイプのＳＭＢＶを形成するのに用いることはできない。２− トポロジカルな調節を伴うドキソルビシンの取り込み水溶液中のドキソルビシン（０．１ｇ）を磁石撹拌を行いながら多糖核（０．５ｇ）に累進的に添加する。ｐＨは、添加中にドキソルビシンのｐＫａ以下の７に調節する。得られる懸濁液を室温で１７時間、遮光撹拌する。その後にｐＨをドキソルビシンのｐＫａ以上の９に調節し、そして３０分間インキュベートする。多糖核の懸濁液をその後に２つに分割し、一つの部分を多糖核として分析し、そしてその多糖核のもう一方の部分をＬ−タイプのＳＭＢＶとして調製する。ａ− ＰＳ−タイプのＳＭＢＶｐＨ９におけるインキュベーション段階後、得られる懸濁液を１Ｌの水に希釈し、そしてｐＨ７にする。このように充填される核を分析すると、０．２μｍを通すその懸濁液の濾過により９５％を上回るドキソルビシンの収率が示され、このことはこの多糖核のサイズが２０ｎｍであることを示し、そして上清のアリコートの遠心式限外濾過により遊離のドキソルビシンの不在が証明される。この結果は限外濾過物中の４ｍｇのドキソルビシンおよび多糖核中の４６ｍｇのドキソルビシンの存在を示し、これは９２％の収率およびドキソルビシンの内の１８％の被包化の度合いに相当する。０．２μｍを通す得られる懸濁液の濾過により９５％を上回る収率が示され、これはＳＭＢＶのサイズが２０ｎｍであることを示す。ｂ− Ｌ−タイプのＳＭＢＶ多糖核をその後に１０ｇ／Ｌの濃度で５０ｍＭのヘカメグ（ｈｅｃａｍｅｇ）中に予め分散させてあるリン脂質（０．２５ｇ）（８０／２０のＥＹＰＣ／コレステロール重量比）と共に分散させる。得られる懸濁液を急激に１Ｌの水に希釈する。その後に洗剤を限外濾過により除去する。その後に限外濾過物中および得られるＳＭＢＶ中のドキソルビシンを定量的に決定する。この結果により、限外濾過物中の２．５ｍｇのドキソルビシンおよびＳＭＢＶ中の４７．５ｍｇのドキソルビシンの存在が示され、これは９５％のドキソルビシン収率および多糖核に関する１９％のドキソルビシンの被包化の度合いに相当する。０．２μｍを通す得られる懸濁液の濾過により９５％を上回る収率が示され、これはＳＭＢＶのサイズが２０ｎｍであることを示す。実施例１６：多糖核中のドキソルビシンの後充填ドキソルビシンはアントラサイクリン一族に属する抗癌性抗生物質である。ドキソルビシンは、その分子に特徴的な蛍光特性を付与するポリ芳香族性アグリコン、ならびにアミノ糖ダウノサミンを特徴とする両親媒性産物である。塩酸物の分子量は５８０であり、そしてそのｐＫａは８．２〜８．５である。＊多糖核中へのドキソルビシンの取り込み用いられる多糖核を架橋結合化させ、かつＰＯＣＩ₃により官能基付加を施してあり、そして２０ｎｍのサイズを有する。これらのイオン強度は１．５９モル等量のＰＯ₄／ｇである。多糖核（１０ｍｇ）を超音波下で水（１０ｍｌ）中に分散させる。この核懸濁液のｐＨを０．１ＮのＮａＯＨで７に調節する。水中の５ｍｇ／ｍｌ溶液としてのドキソルビシン（４．６ｍｇ）を、２０μｌづつ超音波処理を施しながらゆっくりと添加する。必要であらば、０．１ＮのＮａＯＨでｐＨを７に調節する。このように充填される多糖核は、 − ０．２μｍを通して濾過される能力：濾過収率は濾過後および濾過前の濃度の比率により決定される。取り込み後には、充填される多糖核の懸濁液１００μ Ｌをドキソルビシン濃度を決定する目的で取り出す。残りの懸濁液を０．２μｍの気孔率の膜を通して濾過する。１００μｌのアリコートを、ドキソルビシンの定量的決定のために再度取り出す。ドキソルビシンは多糖核の放出後にＨＰＬＣにより定量的に決定する。 − 遠心式限外濾過により決定される未取り込みの分画。濾過後には、１／２に希釈してある多糖核の懸濁液１ｍｌを遠心式限外濾過系（Ｍｉｃｒｏｓｅｐ社）上に置き、そしてその後に７５００ｇで３０分間遠心する。得られる限外濾過物は、ＨＰＬＣによるドキソルビシンについての定量的測定を行う。濾過収率は９７％であり、そして未取り込みの分画は５％より少なく、これにより取り込み収率が９９％であることが導かれる。＊多糖核内およびＳＭＢＶ内に取り込まれるドキソルビシンの生理学的条件下での挙動の比較ドキソルビシン、ポリ多糖核、もしくはＳＭＢＶ内に後充填される粒子を５０ μｇ／ｍｌのドキソルビシン濃度で３７℃下、ＰＢＳ中でインキュベートする。０時間目および４時間目に１ｍｌの粒子懸濁液を取り出し、そして放出されるドキソルビシン分画を決定する目的でミクロセップ（Ｍｉｃｒｏｓｅｐ）で遠心する（７５００ｇ、３０分）ことによる限外濾過を行う。得られる限外濾過物はその後に、ＨＰＬＣによりドキソルビシンについての定量的測定を行う。結果を以下の表に示す。後充填によりドキソルビシンを取り込ませてある多糖核およびＳＭＢＶの生理学的条件下での挙動得られる結果はこれらの２種類の粒子中に取り込まれるドキソルビシンの挙動における差を示し、ドキソルビシンはＳＭＢＶ中と比較すると多糖核内に取り込まれた状態をより強く保つ。実施例１７：ＳＭＢＶ中のドキソルビシンの後充填＊ＳＭＢＶ（Ｌ−タイプもしくはそうでないもの）中へのドキソルビシンの取り込みＳＭＢＶは、リン脂質ラメラ（１００重量％）を洗剤法により形成するアシル化核から調製される。簡潔に述べると、８０／２０のＥＹＰＣ／コレステロール（重量比）の組成を伴うリン脂質（１０ｍｌ）を５０ｎＭのヘカメグ（２ｍｌ）中に分散させる。アシル化核（１０ｍｇ）をこのリン脂質に添加し、そして５分間超音波浴に供する。得られる懸濁液を蒸留水８ｍｌ中に希釈して２０ｎＭであるヘカメグのＣＭＣ以下にさせ、そしてその後に長期的に透析する。得られるＳＭＢＶを０．２μｍｌを通して濾過し、そして滅菌条件下に保存する。Ｌ−タイプのＳＭＢＶは、アシル化核の代わりに多糖核を用いることによるということを除外しては同一のプロトコールに従って調製する。ＳＭＢＶ（２０ｍｇ）懸濁液のｐＨを、０．１ＮのＮａＯＨで７に調節する。水中の５ｍｇ／ｍｌ溶液としてのドキソルビシン（４．６ｍｇ）を２０μｌづつ超音波処理しながらゆっくりと添加する。必要であらばこのｐＨを０．１ＮのＮａＯＨで７に調節する。このようにして充填されるＳＭＢＶは、 − ０．２μｍを通して濾過される能力：濾過収率は濾過後および濾過前の濃度の比率により決定される。取り込み後には、充填されるＳＭＢＶの懸濁液１００ μｌをドキソルビシン濃度を決定する目的で取り出す。残りの懸濁液を０．２μ ｍの気孔率の膜を通して濾過する。１００μｌのアリコートを、ドキソルビシンの定量的決定のために再度取り出す。ドキソルビシンは多糖核の放出後にＨＰＬＣにより定量的に測定する。 − 遠心式限外濾過により決定される未取り込みの分画。濾過後には、１／２に希釈してあるＳＭＢＶの懸濁液１ｍｌを遠心式限外濾過系（Ｍｉｃｒｏｓｅｐ社）上に置き、そしてその後に７５００ｇで３０分間遠心する。得られる限外濾過物は、ＨＰＬＣによるドキソルビシンについての定量的測定を行う。濾過収率は９５％であり、そして未取り込みの分画は５％より少なく、これにより取り込まれた収率が９９％であることが導かれる。＊Ｌ−タイプのＳＭＢＶ中に取り込まれるドキソルビシンの生理学的条件下での挙動ドキソルビシン、Ｌ−タイプのＳＭＢＶ、もしくはＳＭＢＶを後充填させてある粒子を、５０μｇ／ｍｌのドキソルビシン濃度で３７℃下、ＰＢＳ中でインキュベートする。０時間目および４時間目に１ｍｌの粒子懸濁液を取り出し、そして放出されるドキソルビシン分画を決定する目的でミクロセップ（Ｍｉｃｒｏｓｅｐ）上で遠心する（７５００ｇ、３０分）ことによる限外濾過を行う。得られる限外濾過物はその後に、ＨＰＬＣによるドキソルビシンについての定量的測定を行う。結果を以下の表に示す。後充填によりドキソルビシンを取り込ませてあるＬ−タイプのＳＭＢＶもしくはＳＭＢＶの生理学的条件下での挙動得られる結果は、ドキソルビシンが充填されるＬ−タイプのＳＭＢＶはＳＭＢＶのものに類似する生理学的条件下での挙動を有することを示す。図１の説明文： ◆ ３７℃ □ １００℃図２の説明文： ◆ ３７℃ □ １００℃ ◇ ３７℃、超音波図３の説明文： ◆ ３７℃ □ １００℃

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ジビラロ，ジヨエルフランス国エフ―37000トウール・リユジロド199 (72)発明者デイルソン，ローズリヌフランス国エフ―33550カピアン・ドメヌドラビル（番地なし) (72)発明者セルビラ，モニクフランス国エフ―31400トウルーズ・シユマンドペシユビユスク100 (72)発明者ド・ミゲル，イグナシオフランス国エフ―31400トウルーズ・リユアンリ―ド―サユク28 (72)発明者デイング，リフランス国エフ―31400トウルーズ・リユデユガイトウルーアン14 (72)発明者グエン，フレデリクフランス国エフ―17640ボ―シユール―メール・シユマンドシヨシヤン12 (72)発明者スレ，ナデイーヌフランス国エフ―11410サル―シユール― レル・フアジヤクラルランク（番地なし) (72)発明者ソレル，コリヌフランス国エフ―66140カネ―アン―ルシヨン・リユジユイダルノ１

Claims

【特許請求の範囲】１． − 非液体の親水性核、 − 疎水性相互作用および／またはイオン結合を介してその核と組合わさっている両親媒性化合物で少なくとも部分的に構成された外部層、を含むことを特徴とする合成粒子状ベクター。２．親水性核が天然もしくは化学的に架橋された多糖もしくはオリゴ糖のマトリックスでできていることを特徴とする、請求の範囲１に記載の粒子状ベクター。３．イオン性リガンドが親水性核にグラフトされていることを特徴とする、請求の範囲１および２に記載の粒子状ベクター。４．外部層の両親媒性化合物が、リン脂質、セラミド、イオン性界面活性剤、もしくは非イオン性界面活性剤を含む群から選択される、請求の範囲１〜３の内の一つに記載の粒子状ベクター。５．外部層が追加的に、コレステロール、天然脂肪酸、および油溶性ビタミンを含む群から選択される少なくとも一つの脂質化合物を含むことを特徴とする、請求の範囲１〜４の内の一つに記載の粒子状ベクター。６．核内もしくは外部層内に位置する活性成分を追加的に含むことを特徴とする、請求の範囲１〜５の内の一つに記載の粒子状ベクター。７．架橋された多糖マトリックスで構成されていることを特徴とする合成粒子状ベクター。８．活性成分を含むことを特徴とする、請求の範囲７に記載の粒子状ベクター。９．活性成分がマトリックスの中心に主に局在するイオン化可能分子であることを特徴とする、請求の範囲７および８のいずれかに記載の粒子状ベクター。１０．１０ｎｍと５μｍとの間の直径を有することを特徴とする、請求の範囲１〜９の内の一つに記載の粒子状ベクター。１１．２０ｎｍと２００ｎｍとの間の直径を有することを特徴とする粒子状ベクター。１２． − 抗生物質および抗ウイルス剤、 − 蛋白質、プロテオグリカン、ペプチド、 − 多糖、リポ多糖、 − 抗体、 − 抗原、 − 殺虫剤および殺カビ剤、 − 心臓血管系に作用する化合物、 − 抗癌剤、 − 抗マラリア剤、 − 喘息薬、 − 皮膚における効果を有する化合物、 − 乳製品の脂質小球体の構成成分、を含む群から選択される活性成分を含むことを特徴とする、請求の範囲１〜１１の内の一つに記載の粒子状ベクター。１３．ａ）酸性もしくは塩基性イオン化可能な活性成分を、その活性成分のものに相補的なイオン種のリガンドがグラフトされた架橋親水性マトリックス内に、その活性成分がイオン化形態であるｐＨで被包化すること、ｂ）培地のｐＨを、その活性成分のｐＫ_aに関してその活性成分がイオン性形態をとらない値にまで変化させること、ｃ）前記マトリックスの中心に主に局在する活性成分を含む親水性マトリックスを回収すること、を特徴とする粒子状ベクターの調製のための方法。１４．ａ）少なくとも一つの塩基性イオン化可能な活性成分を、酸性イオン性リガンドがグラフトされた架橋親水性マトリックス内に、その活性成分のｐＫ_a 以下のｐＨで被包化すること、ｂ）その培地のｐＨを、その活性成分のｐＫ_a以上の値にまで増加させること、ｃ）前記マトリックスの中心に主に局在する活性成分を含む親水性マトリックスを回収すること、を特徴とする請求の範囲１３に記載の粒子状ベクターの調製のための方法。１５．ａ）少なくとも一つの酸性イオン化可能な活性成分を、塩基性イオン性リガンドがグラフトされた架橋親水性マトリックス内に、その活性成分のｐＫ_a 以上のｐＨで被包化すること、ｂ）その培地のｐＨを、その活性成分のｐＫ_a以下の値にまで低下させること、ｃ）前記マトリックスの中心に主に局在する活性成分を含む親水性マトリックスを回収すること、を特徴とする請求の範囲１３に記載の粒子状ベクターの調製のための方法。１６．親水性マトリクスが天然もしくは化学的に架橋された多糖もしくはオリゴ糖でできていることを特徴とする、請求の範囲１３〜１５の内の一つの記載の方法。１７．その後に活性成分を含むマトリックスに脂質コロナを共有結合により固定することを特徴とする、請求の範囲１３〜１６の内の一つの記載の方法。１８．両親媒性化合物の層を、共有結合により固定される第一脂質層を場合によっては含み、段階ｃ）の完結の際に取得されるマトリックスに固定することを特徴とする、請求の範囲１３〜１７の内の一つの記載の方法。１９．請求の範囲１３〜１８の内の一つに記載の方法により取得することができるような粒子状ベクター。２０．内側から外側にかけて、イオン化可能な活性成分、共有結合によりマトリックスに固定される第一脂質層、および蛋白質もしくはペプチド分子が場合によっては連結する両親媒性化合物の第二層を含む架橋結合化多糖マトリックスを含むことを特徴とする、請求の範囲１９に記載の粒子状ベクター。２１．ａ）ｉ）イオン性リガンドが固定された架橋結合化親水性核、およびｉｉ）場合によっては、脂質化合物の層および／または両親媒性化合物、で構成されている粒子状ベクターを調製すること、ｂ）活性成分がややイオン化するｐＨの溶液内に粒子状ベクターを懸濁させること、ｃ）活性成分を、エネルギーを供給しながら段階ｂ）の懸濁液に添加すること、ｄ）この溶液を取り出し、そして活性成分が充填される粒子状ベクターを回収すること、を特徴とする、活性成分が充填される粒子状ベクターの調製のための方法。２２．請求の範囲１〜１２に記載のベクターの調製に用いられることを特徴とする、請求の範囲１９に記載の方法。２３．請求の範囲１〜１２の内の一つに記載の、もしくは請求の範囲１３〜２２の内の一つに記載の方法により取得される粒子状ベクター、ならびにその投与のための薬剤学的に許容される支持体を含むことを特徴とする薬剤学的組成物。２４．請求の範囲１〜１２の内の一つに記載の、もしくは請求の範囲１３〜２２の内の一つに記載の方法により取得される粒子状ベクター、ならびに化粧品学的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする化粧品学的組成物。２５．請求の範囲１〜１２の内の一つに記載の、もしくは請求の範囲１３〜２２の内の一つに記載の方法により取得されるベクターを含むことを特徴とする食品使用のための組成物。２６．請求の範囲１〜１２の内の一つに記載の、もしくは請求の範囲１３〜２２の内の一つに記載の方法により取得されるベクターの医療薬としての使用。