JPH08504587A

JPH08504587A - アルカリリパーゼ

Info

Publication number: JPH08504587A
Application number: JP6514709A
Authority: JP
Inventors: みよ子橋田; 尚子池上; 正伸阿保; 由紀子高村
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1992-12-22
Filing date: 1993-12-22
Publication date: 1996-05-21
Anticipated expiration: 2019-03-15
Also published as: US5763383A; EP0675944B1; BR9307711A; EP0675944A1; DE69333065D1; ATE243735T1; DE69333065T2; FI953080A0; WO1994014940A1; CA2152342A1; KR950704467A; FI953080A; JP3507076B2

Abstract

(57)【要約】高アルカリ性の、位置非特異的リパーゼが、ストレプトマイセス（Streptomyces）、クラスター（cluster）１の菌株から得ることができる。ストレプトマイセスのクラスタ−１の菌株が、リパーゼを生産することはこれまで知られていなかった。リパーゼ調製品はpH10.0でその最大活性の50％超を有しそして例えば洗剤中において有用である。

Description

【発明の詳細な説明】アルカリリパーゼ技術分野本発明は、例えば洗剤中において有用である新規な位置非特異性のアルカリリパーゼに関する。本発明は又、新規なリパーゼの製造方法および新規なリパーゼを含んでなる洗剤組成物に関する。背景技術過去５年以内において、菌類フミコララヌギノサ（Humicola lanuginosa）由来の微生物リパーゼが、脂肪の汚れの除去を改善するため多くの商業ブランドの洗剤中に導入されてきている。他の微生物リパーゼがまた洗剤中で使用するため提案された、例えばシュドモナスセパシア（Pseudomonas cepacia）由来の細菌リパーゼ（米国特許4,876,024）である。多くの洗剤は溶液中高pH（例えばpH10付近）を有するアルカリ性でありそして Ca⁺⁺イオンを結合させるためのビルダーを含有する。本発明の目的はCa⁺⁺の不存在下、高pHで高活性を有するリパーゼを提供することである。リパーゼはトリグリセリド中の全てのエステル結合を加水分解し得るため位置非特異性であるべきである。発明の要約驚くべきことに、本発明者等は高アルカリ性の、位置非特異性リパーゼがストレプトマイセス（Streptomyces）、クラスター（cluster）１の菌株から得られることを見出した。ストレプトマイセスのクラスター１の菌株が、リパーゼを生産することはこれまで知られていなかった。従って、その第一の面において、本発明は（１）位置非特異性であり、（２）pH10で活性を有しそしてその活性は最適pHで活性の50％を超えており（両活性を、基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間Ca⁺⁺フリーアッセイにおいて測定するとき）、そして（３）ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１の菌株を培養することにより生産可能である、リパーゼ調製品を提供する。別の面において、本発明は（１）位置非特異性であり、（２）９−11の範囲内のpHで最適活性を有する（基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間測定するとき）、そして（３）ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１に生来の細胞外リパーゼと免疫学的に同一であるか又は部分的に同一である、リパーゼを提供する。第三の面において、本発明は炭素および窒素源並びに無機塩を含有する適当な普通培地中で、ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１のリパーゼ−生産株を培養し、次いでリパーゼ調製品を回収することを含んでなる、リパーゼ調製品の製造方法を提供する。更に他の面において、本発明は本発明のリパーゼを含んでなる洗剤組成物を提供する。図面の簡単な説明本発明を添付の図面を参照して更に説明する。図１−７は、次の菌株から由来する本発明のリパーゼ調製品の活性に対するpH プロフィルを示す：Ｓ．グリセウス（griseus）LB 50１（DSM 7349）、Ｓ．グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）LB 51 1（FERM BP-4236）、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）LB 512（FERM BP-4237）、Ｓ．グリセウス（griseus）LB 524（DSM 8672）、Ｓ．コエリカラー（coelico lor）N 2293（ATCC 23899）およびＳ．パルバス（parvus）N 2300（ATCC12433）。更に詳しくは例６に示される。図８は、（LB 502由来の）本発明のリパーゼ調製品および従来技術の位置特異性リパーゼ（リポラーゼ）を用いたオリーブ油の加水分解後ラトロスカン（latr oscan）からのクロマトグラムを示す。更に詳しくは例８に示される。図９は本発明のリパーゼ調製品の活性に対するCa⁺⁺添加の効果を示す。更に詳しくは例11に示される。発明の詳細な開示微生物本発明で用いられる微生物は、S.T.ウリアム等、Journal of General Microbi ology（1983），129，1743-1813により定義される如き、ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１に属する放線菌目の細菌である。ストレプトマイセスクラスター１の内で、次のサブクラスタ（subclusters ）、種および菌株が好ましい。前記リパーゼを生産し得るその突然変異株および変異株も又本発明において使用できる。前記ATCC株は、アメリカンカルチュアコレクション（米国，メリーランド，ロックビレ，12301 パークローンドライブ）から自由に入手可能である。次の菌株は、特許手続上の微生物の国際的承認に関するブダペスト条約のもとで発明者によって寄託された。菌株は次の如く分類された。ここで、DSMはドイッチェザンムルクフオンミクロオルガニスメンウントツェルカルツレン（DSM）（ドイツ国，3300 ブラウンシュワイクマッシュルオーデルベーク１ｂ）になされた寄託を示す。FERHは通産産業省、工業技術院、生命工学工業技術研究所（NIBHT）（日本国305 茨城県つくば市東１丁目１−３）リパーゼの位置特異性リパーゼの位置特異性は、トリグリセリドの部分加水分解および形成されるジグリセリドの分析によってチェックできる。本発明のリパーゼは１，３−ジグリセリドおよび１，２−ジグリセリドの双方を形成しそして従って位置非特異性であり、すなわち本発明のリパーゼはトリグリセリド中の全ての３個のエステル結合と反応する。アルカリpHでのリパーゼの活性本発明によって提供されるリパーゼ（脂肪分解酵素）は、高アルカリ性である。本発明のリパーゼは、Ca⁺⁺の不存在下基質としてオリーブ油およぴ乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間測定するとき、pH10でその最適活性の50％超（好ましくは80％超）を有することを特徴とする。択一的に、本発明のリパーゼは基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間測定するとき、９又はそれ以上の最適活性を有する。好ましくは、最適pHは９−11の範囲内にあり、例えば9.5又はそれ以上のpHであり、最も好ましくは10又はそれ以上のpH、例えばpH9.5〜pH10.5の範囲内にある。洗剤の存在下でのリパーゼ活性本発明の好ましいリパーゼは、洗剤の存在下で高活性を維持している。本発明のリパーゼは、pH10.2の洗剤溶液中で活性を有することを特徴とし、この活性は pH10のグリシン又はジエタノールアミン緩衝液中50％を超える活性である（双方の活性を基質としてオリーブ油を用い60分の反応時間で測定するときである）、そして洗剤溶液は0.35ｇ／ｌの直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、0.15ｇ／ｌのアルコールエトキシレート、1.25ｇ／ｌのトリポリリン酸ナトリウム、1.00 ｇ／ｌの硫酸ナトリウム、0.45ｇ／ｌの炭酸ナトリウムおよび0.15ｇ／ｌのメタ珪酸ナトリウムから成る。択一的に、好ましいリパーゼはpH7.5の洗剤溶液中で活性を有することを特徴とし、その活性は同じpHの緩衝液中の活性の少なくとも75％である（双方の活性を、基質としてｐ−ニトロフェニルブチラートを用い40℃で30分の反応時間測定する）、緩衝液は0.2Ｍトリス−HClであり、そして洗剤溶液は0.1％アルコールエトキシレート又は直鎖アルキルスルホネートである。洗剤溶液中で示される活性を有するリパーゼは、ストレプトマイセスサブクラスター（Streptomyces subcluster）１Ａ又は１Ｂ、例えば種Ｓ．グリセウス（griseus）、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）又はＳ．パルバス（parvus）、特に菌株Ｓ．グリセウス（griseus）DSM 7349，DSM 7350，DSM 8672、Ｓ．コエリカラー（coelicol or）FERM BP-4236，FERM BP-4237，ATCC 23899又はＳ．パルバス（parvus）ATCC 12433から得ることができる。 Ca⁺⁺の不存在下のリパーゼ活性特に好ましい態様において、本発明のリパーゼは、50mM Ca⁺⁺での活性の50％を超えるCa⁺⁺の不存在下での活性を有する（双方の活性は下記のオリーブ油／PV A法により測定するとき）。 Ca⁺⁺の不存在下で述べられた活性を有するリパーゼを生産し得る微生物菌株は、新規でありそして本発明によって提供される。好ましい菌株は、Ｓ．グリセウス（griseus）DSM 7350である。免疫化学的性質ストレプトマイセスクラスター１の菌株に生来の細胞外リパーゼの免疫学的性質と同一又は部分的同一の免疫学的性質を有しそして高pHで言及された活性を有する位置非特異性リパーゼは、本発明の範囲内である。免疫化学的性質は、免疫学的交差反応同定試験によって測定できる。同定試験は公知のオクテロニー二重免疫拡散法又は双頭交差免疫電気泳動（I.M.ロリット；lmmunology，Gower Me dical Publishing（1985）およびN.X.アレクセン；Handbook of Immunoprecipit ation-in-Gel Techniques，Blackwell Scientific Publications（1983）、５章および14章による）。語句免疫学的同一（抗原同一）および部分的免疫同一（部分的抗原同一）は、アレクセン等同上、５，９および20章およびロリット同上６章に記載されている。免疫学試験において使用するための単一特異性抗血清は、例えばN.H.アレクセン同上の41章又はN.H.アレクセン等、A Manual of Quantitative immuno electr ophoresis，Blackwell Scientific Publications（1973）に記載される如く、例えば家兎において精製されたリパーゼに対して生じ得る。リパーゼ活性の測定リパーゼ活性は、基質としてポリビニルアルコールと共にオリーブ油（容量比１：３のオリーブ油および２％PVA溶液；PVA、ｎ＝1750±50）を用いて測定する。0.1mlのリパーゼ溶液、0.2mlの200mMジエタノールアミン緩衝液および0.2mlのオリーブ油／PVAエマルションの混合物を40℃で10分又は20分間撹拌する。反応は、0．1mlの１Ｎ HClを加えることにより停止する。停止後、内部標準として0.1％のリトコール酸を含有するクロロホルムおよびメタルールの１対１混合物2.0mlを反応媒質に加え、次いでこの媒質を激しく撹拌する。沈降後、溶剤相を除去しそしてTLC-FID分析（ラトスカン（商標））をより遊離した脂肪酸の測定に委ねる。リパーゼの生産本発明のリパーゼは、炭素および窒素源並びに無機塩を含有する、適当な普通培地中で前記微生物の１種を培養し、引き続きリパーゼを回収することによって生産できる。リパーゼは又当業者に公知の方法による組換えDNA工学により、例えばリパーゼをエンコードするDNA断片を単離し、DNA断片を適当なベクター内の適当な発現シグナルと結合させ、ベクター又はその一部を自己複製プラミドとして又は染色体に組込まれたものとして適当な宿主（すなわち、大腸菌、属バシラス、ストレプトマイセス又はサッカロマイセスの一員、又は線維状菌類、好ましくはアスペルギルス属の一員）に導入し、リパーゼの発現に至る条件下で宿主生物を培養し、次いで培地よりリパーゼを回収することにより得ることができる。培養後、リパーゼは常法により、例えば疎水性クロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法およびそれらの組合せにより培養ブロスから回収されそして精製される。リパーゼの適用本発明のリパーゼは、リパーゼの通常の適用において特に高pHで例えば洗たく物および皿洗い用洗剤中、社会のおよび産業上の洗浄において並びに皮革加工において用いることができる。本発明のリパーゼは、位置非特異性であり（すなわち、トリグリセリド中全ての３個のエステル結合を加水分解し得る）そして該リパーゼは油脂の全加水分解に対して使用できる。適当な条件はpH7、60℃であってよい、何故ならリパーゼは中性pH付近でより熱安定であるからである。洗たく物洗剤組成物本発明によれば、リパーゼは典型的には洗剤組成物の一成分であってよい。そのようなものとして、そのリパーゼは無粉塵性粒質物、安定化液体、又は保護された酵素の形態で洗剤組成物に含ましめることができる。無粉塵性粒質物は、例えば米国特許4,106,991および4,661,452（両特許ともノボインダストリーＡ／Ｓに付与）に開示される如く製造されそして所望により当業者に公知の方法で塗布され得る。ワックスの塗布材料の例は、平均モル重量1000〜20000を有するポリ（エチレンオキシド）製品（ポリオキシエチレングリコール、PEG）、16〜1 5個の酸化エチレン単位を有するノニルフェノール；エトキシル化脂肪アルコール（ここにおいてアルコールは12〜20個の炭素原子を有しそしてここにおいて15 〜18個の酸化エチレン単位が存在する）；脂肪アルコール；脂肪酸；および脂肪酸のモノ−およびジ−およびトリグリセリドである。流動床技術により適用に対して適当なフィルム形成性塗布材料の例は、英国特許1483591に示される。流体酵素調製品は、確立された方法に従い、ポリオール例えばポリエチレングリコール、糖もしくは糖アルコール、乳酸もしくはホウ酸を添加することにより安定化できる。他の酵素安定剤は当業者に周知である。保護された酵素は、ヨーロッパ特許238,216に開示される方法に従って調製できる。本発明の洗剤組成物は、如何なる好都合の形態であってよく、例えば粉末、顆粒、ペースト又は液体として存在し得る。液体洗剤は、水性（典型的には70％の水および0−30％の有機溶剤を含有する）、又は非水性である。洗剤組成物は１種又はそれ以上の界面活性剤を含んでなり、それらの各々はアニオン性、カチオン性又は双性イオン性であってよい。洗剤は通常０−50％のアニオン界面活性剤例えば直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（LAS）、α−オレフィンスルホネート（AOS）、アルキルスルフェート（脂肪アルコールスルフェート）（AS）、アルコールエトキシスルフェート（AEOS又はAES）、第二級アルカンスルホネート（SAS）、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル−又はアルケニルコハク酸又は石けんを通常含有するであろう。洗剤は又０−40％の非イオン界面活性剤、例えばアルコールエトキシレート（AEO又はAE）、カルボキシル化アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、アルキル（Ｎ−メチル） −グリコサミド又はポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド（例えば国際公開92／ 06154に記載される如く）を含有できる。洗剤組成物は追加的に１種又はそれ以上の他の酵素、例えばアミラーゼ、クチナーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼおよびオキシダーゼを含んでもよい。洗剤は１−65％の洗剤用ビルダー又は錯化剤例えばゼオライト、ジホスフェート、トリホスフェート、ホスホネート、シトラート、ニトリロトリ酢酸（NTA）、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（DTMPA）、アルキル−又はアルケニルコハク酸、可溶性シリケート、加層シリケート（例えばヘキスト社からのSKS-6）を含有できる。洗剤は又ビルダーを加えなくてもよい、すなわち洗浄用ビルダーが本質的に無くてもよい。洗剤は１種又はそれ以上のポリマーを含んでもよい。そのポリマーの例は、カルボキシメチルセルロース（CMC）、ポリ（ビニルピロリドン）（PVP）、ポリエチレングリコール（PEG）、ポリ（ビニルアルコール）（PVA）、ポリカルボキシレート例えばポリアクリレート、マレイン酸／アクリル酸コポリマーおよびラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーである。洗剤は漂白系を含んでいてもよくその漂白系はＨ₂O₂源例えばパーボレート又はパーカーボネートを含んでよくこれらは過酸−形成漂白活性化剤例えばテトラアセチルエチレンジアミン（TAED）又はノナノイルオキシベンゼンスルホネート（NOBS）と組合せてもよい。択一的に、漂白系は例えばアミド、イミド又はスルホンタイプのペルオキシ酸を含んでいてもよい。本発明の洗剤組成物の酵素は、通常の安定化剤、例えばポリオール例えばプロピレングリコール又はグリセロール、糖もしくは糖アルコール、乳酸、ホウ酸、又はホウ酸誘導体例えば芳香族ボレートエステルを用いて安定化できそして組成物は例えば国際公開92／19709および国際公開92／19708に記載される如く製剤化され得る。洗剤は又他の通常の洗剤成分、例えば粘土を含む布帛柔軟剤、起泡増進剤、起泡抑制剤、耐蝕剤、土壌−沈殿防止剤、抗土壌−再付着剤、染料、殺菌剤、螢光増白剤又は香料を含むことができる。 pH（使用濃度で水性溶液中に測定された）は通常、中性又はアルカリ性、例えば７−11であろう。本発明の範囲内の洗剤組成物の特定の形態には次のものが含まれる：１）以下の成分を含んでなる少なくとも600ｇ／ｌの嵩密度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算）７−12％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばＣ_12-18 アルコール、１−２EO）又はアルキルスルフェート（例えばＣ_16-18）１−４％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_14ー15アルコール、７EO）５−９％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 14−20％ −可溶性シリケート（Na₂O，2SiO₂として）２−６％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 15−22％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）０−６％ −クエン酸ナトリウム／クエン酸（C₆H₅Na₃O₇／C₆H₈O₇ として）０−15％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして） 11−18％ −TAED ２−６％ −カルボキシメチルセルロース０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）０−３％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料、螢光増白剤、光漂白剤）０−５％２）次の成分を含んでなる少なくとも600ｇ／ｌの嵩密度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算）６−11％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばＣ_12-18 アルコール、１−２EO）又はアルキルスルフェート（例えばＣ_16-18）１−３％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_14-15アルコール、７EO）５−９％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 15−21％ −可溶性シリケート（Na₂O，2SiO₂として）１−４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 24−34％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）４−10％ −クエン酸ナトリウム／クエン酸（C₆H₅Na₃O₇／C₆H₈O₇ として）０−15％ −カルボキシメチルセルロース０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）１−６％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料）０−５％３）次の成分を含んでなる少なくとも600ｇ／ｌの嵩密度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算）５−９％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、７EO）７−14％ −脂肪酸としての石けん（例えばＣ_16-22）１−３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 10−17％ −可溶性シリケート（Na₂O，2SiO₂として）３−９％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 23−33％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）０−４％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂0として）８−16％ −TAED ２−８％ −ホスホネート（例えばEDTMPA）０−１％ −カルボキシメチルセルロース０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）１−３％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料、螢光増白剤）０−５％４）次の成分を含んでなる少なくとも600ｇ／ｌの嵩密度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算）８−12％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、７EO） 10−25％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として） 14−22％ −可溶性シリケート（Na₂O，2Si0₂として）１−５％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 25−35％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）０−10％ −カルボキシメチルセルロース０−２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）１−３％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料）０−５％５）次の成分を含んでなる水性液体組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 15−21％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、７EO又はＣ_12-15アルコール、５EO） 12−18％ −脂肪酸としての石けん（例えばオレイン酸）３−13％ −アルケニルコハク酸（Ｃ_12-14）０−13％ −アミノエタノール８−18％ −クエン酸２−８％ −ホスホネート０−３％ −ポリマー（例えばPVP，PEG）０−３％ −ボレート（B₄O₇として）０−２％ −エタノール０−３％ −プロピレングリコール８−14％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば分散剤、起泡抑制剤、香料、螢光増白剤）０−５％６）次の成分を含んでなる水性に組立てられた液体洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 15−21％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、７EO又はＣ_12-15アルコール、５E0）３−９％ −脂肪酸として石けん（例えばオレイン酸）３−10％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 14−22％ −クエン酸カリウム９−18％ −ボレート（B₄O₇として）０−２％ −カルボキシメチルセルロース０−２％ −ポリマー（例えばPEG，PVP）０−３％ −定着ポリマー（anchoring polymer）例えばラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーとして；モル比25：１；MW 3800 ０−３％ −グリセロール０−５％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば、分散剤、起泡抑制剤、香料、螢光増白剤）０−５％７）次の成分を含んでなる少なくとも600ｇ／ｌの嵩密度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −脂肪アルコールスルフェート５−10％ −エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド３−９％ −脂肪酸のような石けん０−３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として）５−10％ −可溶性シリケート（Na₂O，2Si0₂として）１−４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 20−40％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）２−８％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして） 12−18％ −TAED ２−７％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PEG）１−５％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば螢光増白剤、起泡抑制剤、香料）０−５％８）次の成分を含んでなる粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算）８−14％ −エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド５−11％ −脂肪酸のような石けん０−３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として）４−10％ −可溶性シリケート（Na₂O，2Si0₂として）１−４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 30−50％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）３−11％ −クエン酸ナトリウム（C₆H₅Na₃O₇として）５−12％ −ポリマー（例えばPVP、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、PEG）１−５％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば起泡抑制剤、香料）０−５％９）次の成分を含んでなる粒質物として製剤化される洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算）６−12％ −非イオン界面活性剤１−４％ −脂肪酸のような石けん２−６％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₂として） 14−22％ −ゼオライト（NaAlSiO₄として） 18−32％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）５−20％ −クエン酸ナトリウム（C₆H₅Na₃O₇として）３−８％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・H₂Oとして）４−９％ −漂白活性化剤（例えばNOBS又はTAED）１−５％ −カルボキシメチルセルロース０−２％ −ポリマー（例えばポリカルボキシレート又はPEG）１−５％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば螢光増白剤、香料）０−５％ 10）次の成分を含んでなる水性液洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 15−23％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、２−３EO）８−15％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、７EO又はＣ_12-15 アルコール、５EO）３−９％ −脂肪酸のような石けん（例えばラウリン酸）０−３％ −アミノエタノール１−５％ −クエン酸ナトリウム５−10％ −ヒドロトロープ（例えばナトリウムトルエンスルホネート）２−６％ −ボレート（B₄O₇として）０−２％ −カルボキシメチルセルロース０−１％ −エタノール１−３％ −プロピレングリコール２−５％ −酵素０−５％ −少量成分（例えばポリマー、分散剤、香料、螢光増白剤）０−５％ 11）次の成分を含んでなる水性液体洗剤組成物； −直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（酸として計算） 20−32％ −アルコールエトキシレート（例えばＣ_12-15アルコール、７EO又はＣ_12-15アルコール、５EO）６−12％ −アミノエタノール２−６％ −クエン酸８−14％ −ボレート（B₄O₇として）１−３％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、定着ポリマー例えばアウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーおよび CMCとして）０−３％ −グリセロール３−８％ −酵素０−５％ −少量成分（例えばヒドロトロープ、分散剤、香料、螢光増白剤）０−５％ 12）次の成分を含んでなる少なくとも600ｇ／ｌの嵩密度を有する粒質物として製剤化される洗剤組成物； −アニオン界面活性剤（直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルスルフェート、α−オレフィンスルホネート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルカンスルホネート、石けん） 25−40％ −非イオン界面活性剤（例えば、アルコールエトキシレート）１−10％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃として）８−25％ −可溶性シリケート（Na₂O，2Si0₂として）５−15％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄として）０−５％ −ゼオライト（NaAlSi0₄として） 15−28％ −ナトリウムパーボレート（NaBO₃・4H₂Oとして）０−20％ −漂白活性化剤（TAED又はNOBS）０−５％ −酵素０−５％ −少量成分（例えば、香料、螢光増白剤）０−３％ 13）１）−12）で記載されるような洗剤組成物であって直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩の含量又はその一部がアルキルスルフェート（Ｃ₁₂−Ｃ₁₈）により置換されている。 14）１）−13）で記載されるような洗剤組成物であって、追加成分又は既に述べた漂白系の代替物として安定化又は封入された過酸を含有する。 15）３），７），９）および12）で記載される洗剤組成物であって、パーボレートの含量がパーカーボネートにより置換されている。 16）例えば直鎖アルコキシル化一級アルコールのような液体非イオン界面活性剤、ビルダー系（例えばホスフェート）、酵素およびアルカリを含んでなる非水性洗剤液体として製剤化される洗剤組成物。洗剤は又アニオン界面活性剤および／又は漂白系を含んでいてもよい。本発明のリパーゼは好都合には洗剤中で用いられる濃度で配合され得る。今日次のように考えられている；すなわち本発明の洗剤組成物中でリパーゼは洗液１ｌ当たり50〜10,000LU、好ましくは100〜2,000LU／ｌ、又は洗剤１ｇ当たり50〜 50,000LU、好ましくは500〜10,000LU／ｇに対応する量で添加され得る。リパーゼタンパク質の量は、洗液１ｌ当たり0.001〜100mg又は洗剤１ｇ当たり0.001〜100mgであってよい。皿洗い用組成物皿洗い用洗剤組成物は、界面活性剤を含んでなり、これはアニオン、非イオン、カチオン、双性イオン又はこれらのタイプの混合物であってよい。洗剤は、０ −90％の非イオン界面活性剤例えば低−もしくは非−発泡エトキシル化プロポキシル化直鎖アルコールを含有するであろう。洗剤組成物は、無機および／又は有機タイプの洗剤用ビルダー塩を含有してよい。洗剤用ビルダーはリン−含有および／又は非リン−含有タイプであってよい。洗剤組成物は、通常１−90％の洗剤ビルダーを含有する。リン−含有無機アルカリ洗剤用ビルダーの例には、水溶性塩、特にアルカリ金属ピロホスフェート、オルソホスフェート、ポリホスフェート、およびホスホネートが含まれる。非−リン−含有無機ビルダーの例には、水溶性アルカリ金属カーボネート、ボレートおよびシリケート並びに種々のタイプの水不溶性結晶又は非晶質アルミノシリケートが含まれこの内ゼオライトが最も良く知られた代表例である。適当な有機ビルダーの例には、アルカリ金属、アンモニウムおよび置換アンモニウム、シトレート、スクシネート、マロネート、脂肪酸スルホネート、カルボキシメトキシスクシネート、アンモニウムポリアセテート、カルボキシレート、ポリカルボキシレート、アミノポリカルボキシレート、ポリアセチルカルボキシレートおよびポリヒドロキシスルホネートが含まれる。他の適当な有機ビルダーには、ビルダーの性質を有することが知られている高分子量ポリマーおよびコポリマー、例えば適当なポリアクリル酸、ポリマレイン酸およびポリアクリル酸／ポリマレイン酸コポリマーおよびそれらの塩が含まれる。皿洗い用洗剤組成物は、塩素／臭素系又は酸素系の漂白剤を含有できる。無機塩素／臭素系漂白剤の例は、リチウム、ナトリウム又はカルシウムハイポクロライトおよびパイポブラマイト並びに塩素化三ナトリウムホスフェートである。有機塩素／臭素系漂白剤の例は、複素環式Ｎ−ブロモおよびＮ−クロロイミド例えばトリクロロイソシアヌル酸、トリブロモイソシアヌル酸、ジブロモイソシアヌル酸およびジクロロイソシアヌル酸並びに水可溶性カチオン例えばカリウムおよびナトリウムとそれらの塩である。ヒダントイン化合物も又適当である。酸素漂白剤は、無機過塩の形態で、好ましくは漂白剤前駆体と共に又はペルオキシ酸化合物として好ましい。適当なペルオキシ化合物の典型的例は、アルカリ金属パーボレート、四水和物および一水和物の双方、アルカリ金属パーカーボネート、パーシリケートおよびパーホスフェートである。好ましい活性剤の物質は TAEDおよびグリセロールトリアセテートである。本発明の皿洗浄用洗剤組成物は、（１以上の）酵素に対する通常の安定剤、例えばポリオール例えばプロピレングリコール、糖もしくは糖アルコール、乳剤、ホウ酸、又はホウ酸誘導体、例えは芳香族ボレートエステルを用いて安定化できる。本発明の皿洗浄用洗剤組成物は又、他の通常の成分、例えば解膠剤物質、充てん物、発泡抑制剤、耐蝕剤、土壌−沈殿防止剤、金属イオン封鎖剤、抗土壌−再付着剤、脱水剤、染料、殺菌剤、螢光剤、シックナーおよび香料を含有してもよい。最後に、本発明のリパーゼは通常の皿洗浄用洗剤、例えば次の特許公報のいずれかに記載されている任意の洗剤中に用いることができる：ヨーロッパ特許551670、ヨーロッパ特許533239、国際公開9303129、ヨーロッパ特許507404、米国特許5141664、英国特許2247025、ヨーロッパ特許414285、英国特許2234980、ヨーロッパ特許408278、英国特許2228945、英国特許2228944、ヨーロッパ特許387063、ヨーロッパ特許385521、ヨーロッパ特許373851、ヨーロッパ特許364260、ヨーロッパ特許349314、ヨーロッパ特許331370、ヨーロッパ特許318279、ヨーロッパ特許318204、英国特許2204319、ヨーロッパ特許266904、米国特許5213706、ヨーロッパ特許530870、カナダ特許2006687、ヨーロッパ特許 481547、ヨーロッパ特許337760、国際公開93／14183、米国特許5223179、国際公開93／06202、国際公開93／05132、国際公開92／19707、国際公開92／09680、国際公開92／08777、国際公開92／06161、国際公開92／06157、国際公開92／06156 、国際公開91／13959、ヨーロッパ特許399752、米国特許4941988、米国特許4908 148。実施例次の実施例は更に本発明を説明するが、いかなる場合も請求の範囲で請求される本発明の範囲を制限するものではない。例１リパーゼの生産下記の組成（ｇ／ｌ）のワックスマン培地中で菌株LB 501（DSM7349），LB 50 2（DSM 7350），LB 511（FERM BP-4236）、およびLB 512（FERM BP-4237）の各々から、振とうフラスコ中で種培養物を生産した：グルコース 10 ペプトン 5 肉エキス 5 NaCl 5 pHを7.0に調節 30℃でかつ230rpmで２日後、５mlの種培養物を下記の培地（ｇ／ｌ）100mlを含有する振とうフラスコ中で接種した：ファルマメディア（Pharmamedia）（商標）（トラデルスプロテイン、ザプロクターアンドギャンブルオイルシードプロダクツ社より提供） 20ｇコーンスティープパウダー 10ｇグリセロール 10ｇ K₂HPO₄ 1ｇ MgSO₄，７H₂O 0.5ｇオートクレーブ処理前にpHを7.0に調節オートクレーブ処理20分／121℃ ホホバ油１mlを各振とうフラスコに加え、次いでフラスコを27℃で４日間230r pmで培養した。培養ブロスを遠心分離により液体／固体分離に委ねた。上澄みを凍結乾燥しそして粗製粉末調製品を得た。例２リパーゼの調製下記に示すように、次の組成（ml／SFは振とうフラスコ当たりのmlを示す）を有する、ACT-1，ACT-2，ACT-3，ACT-4およびACT-5と表示される培地 100mlを有する 250mlの振とうフラスコ中で菌株を培養した：各菌株を27℃で４日間培養した。培養の終了時に培養ブロスのpHとリパーゼ活性（LU）を測定した。１リパーゼ単位（LU）は、標準条件下（すなわち、30.0℃ で；pH 7.0；およびトリブチリン基質）、毎分当たり１μmol の滴定可能な酪酸を遊離する酵素の量である。結果：例３リパーゼの生産以下に示すように、菌株を培地ACT-1（例２に示す）を含有する振とうフラスコ中で27℃で培養した。培養ブロスのpHおよびリパーゼ活性を３日、４日および５日後に測定した。結果は次の通りであった。例４Ｓ．グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）からリパーゼの生産菌株を以下の組成を有する培地上振とうフラスコ内で27℃で培養した：４日後、収率は約30LU／mlであった。例５リパーゼの精製Ｓ．グリセウス（griseus）LB 501（DSM 7349）からの粗製リパーゼを次の如く、疎水性クロマトグラフィー次いでイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。疎水性クロマトグラフィー：例１で生産された粗製リパーゼ粉末を溶解し次いで 3.5Ｍ CH₃COONH₄に調節した。これをｔ−ブチルマクロペプHIC（バイオラボ社の製品）のカラムに適用し、次いでカラムを同じ濃度の CH₃COONH₄で洗い大部分の色とタンパク質を除いた。公配を開始後、最初に急速に１Ｍに降下させ、次いでゆっくり０Ｍに下げる。２つのピークがクロマトグラム中に見られ、従って２つのプールのリパーゼを採取した。リパーゼ活性の全回収は80％を超えていた。イオン交換クロマトグラフィー：限外濾過による濃縮および脱イオン化後（高粘度のため、回収率60−70％）、各プールをDEAE−トヨパール（Toyopearl）のカラムに適用した。リパーゼ活性を含有する１個の幅広いピークがクロマトグラム上に認められそして集められた。幾分かの色彩を除きそしてリパーゼ活性の回収は80％を超えていた。最後に、各プールを再たび限外濾過した（80％を超える回収率）。出発物質は16,500LUの総リパーゼ活性を有していた。プール１およびプール２は、それぞれ74.4LU／mgタンパク質および43.3LU／mgタンパク質のリパーゼ比活性、並びに3350LUおよび1860LUの総リパーゼ活性を有していた。従って、リパーゼ活性の全体の回収は32％であった。両プールは、5.5又はそれ以下の等電点（等電点電気泳動による）および28〜4 3kDの分子量を有する少なくとも２個のリパーゼを含有することが見出された。例６リパーゼ調製品のpH活性曲線 pHプロフィルを次の菌株からのリパーゼ調製品に対して測定した：菌株：Ｓ．グリセウス（griseus）LB 501（DSM 7349）Ｓ．グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）Ｓ．コエリカラー（coelicolor）LB 511（FERM BP-4236）Ｓ．コエリカラー（coelicolor）LB 512（FERM BP-4237）Ｓ．グリセウス（griseus）LB 524（DSM 8672）Ｓ．コエリカラー（coelicolor）N 2293（ATCC 23899）Ｓ．パルバス（parvus）N 2300（ATCC 12433）リパーゼ調製品のpHプロフィルを、Ca⁺⁺の不存在下基質としてオリーブ油そして乳化剤として PVAを用い、20分の反応時間でpH 8.5 −10.5の緩衝液を用いて測定した。結果をpHに対する相対活性（相対活性％）として図１−７に示す。図より、リパーゼがCa⁺⁺の不存在下約pH９−10に最適活性を有しそしてリパーゼはpH10で最適活性の50％を超えていることが明らかである。例７アルカリpHでリパーゼの活性リパーゼ調製品を、拡散プレート法によりpH６−10でリパーゼ活性に対して試験した。例３で３日および４日培養後に得られたリパーゼ調製品を試験した。拡散プレートを、それぞれpH６，8.5および10で、オリーブ油および PVAを含有する試験培地を用い国際公開88／02775の例11に記載されるように調製し、そして培地のp Hにおけるリパーゼ活性の存在又は不存在をクリアリングゾーン（clearing zo ne）の出現から測定した。結果は、例３からの全てのリパーゼ調製品はpH６，8.5および10で活性を示すことを表わしていた、すなわち全てのリパーゼ調製品はpH10までの高いpHで全て活性であった。例８位置特異性位置特異性をトリグリセリドの加水分解および本発明のリパーゼ調製品で形成されたジグリセリドの分析により測定した。Ｓ．グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）からのリパーゼ調製品を、pH1 0で乳化剤として PVAを用いグリシン緩衝液中、pH10で30分間基質としてのオリーブ油を加水分解するために用い、しかる後加水分解生成物をラトロスカン（la troscan）により分析した。リポラーゼ、すなわちフミコララヌギノサ（Humicola lanugino sa）由来の従来技術の位置特異性リパーゼを比較のため用いた。結果を図８に示す。図より本発明のリパーゼ調製品に関して、より多くの１，３−ジグリセリドが１，２−ジグリセリドよりも形成されており、このことは本発明のリパーゼ調製品は位置非特異性であり、トリグリセリドの１位および３位よりも２位により高い活性を有することを示している。リポラーゼは殆ど１，３ −ジグリセリドの形成を与えず、位置特異的であることが確認される、すなわちリポラーゼはトリグリセリドの１位および３位中にのみ反応する。Ｓ．グリセウス（griseus）LB 524（DSM 8672）、Ｓ．コエリカラー（coelico lor）N 2293（ATCC 23899）およびＳ．パルバス（parvus）N 2300（ATCC 12433 ）からの本発明のリパーゼ調製品は、LB 502と同様の結果を生ぜしめた。例９リパーゼ活性に関する洗剤の効果種々のリパーゼ調製品のリパーゼ活性を、pH7.5で0.1％の非イオン又はアニオン界面活性剤（アルコールエトキシレート又は直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩）の存在下で測定しそして洗剤を含まない対照と比較した。例２のリパーゼ調製品を用いた。各試験において、0.lmlのリパーゼ溶液を、0 .2Ｍのトリス−HCI（pH7.5）に溶解したｐ−ニトロフェルブチラートの 1.0mM 溶液 0.4mlおよび 0.2％洗剤溶液 0.5mlと混合した。対照は洗剤溶液の代わりに水を用いて作成した。混合物を40℃で30分間インキュベートし、次いで加水分解の程度を、415nmで光学濃度を測定することにより測定した。結果を対照と比較して洗剤の存在下で相対活性として表わす。以下の内容は明らかである、すなわちアルコールエトキシレートの存在下、全てのリパーゼ調製品はそれらの活性の50％超、を保持し、大抵は75％超を保持しそして幾つかは90％超の活性を保持する。直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩の存在下、大抵のリパーゼ調製品はそれらの活性の少なくとも50％を保持し、大抵のこれらの菌株は少なくとも75％の活性そして幾つかは90％超の活性を保持する。例 10 洗剤中のリパーゼ活性種々のリパーゼ調製品のリパーゼ活性を、高pHのビルダー入り洗剤溶液中で測定しそして洗剤なしの対照と比較した。各試験において、リパーゼ調製品を次の組成（活性物質として示される）の洗剤溶液に添加した。混合物を40℃で60分間基質としてのオリーブ油および乳化剤として PVAと共にインキュベートし、しかる後形成した遊離酸の量を測定した。対照は、洗剤溶液の代わりに同じpHのグリシン又はジエタノール緩衝剤を用いて作成した。結果は、対照と比較して洗剤の存在下相対活性として表わされる。上記リパーゼ調製品が、対照と比較して洗剤溶液中50％を超える相対活性を有することは明らかである。例 11 リパーゼ活性に対するCa⁺⁺の効果本発明のリパーゼ調製品の活性を、Ca⁺⁺の添加なしでおよび種々の量のCa⁺⁺を添加して測定した。Ｓ．グリセウス（griseus）LB 502（DSM 7350）からのリパーゼ調製品を、pH1 0のジエタノールアミン緩衝液中40℃で10分間基質としてオリーブ油および乳化剤として PVAと共にインキュベートし、しかる後加水分解の程度を測定した。種々の濃度のカルシウム塩を添加して実験を繰り返した。結果を図９に示す。この調製品のリパーゼ活性は、Ca⁺⁺濃度が低下したとき減少しないことが明らかである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年１月９日【補正内容】７．菌株が、Ｓ．グリセウス（griseus） DSM 7349，DSM 7350，DSM 8672、Ｓ．コエリカラー（coelicolor） FERM BP-4236，FBRM BP-4237，ATCC 23899又はＳ．パルバス（parvus） ATCC 12433である、請求の範囲第６項記載のリパーゼ調製品。８．Ca⁺⁺の不存在下で活性を有しそしてその活性は50mMのCa⁺⁺で活性の50％を超えるものである（両活性を基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用いpH10で測定するとき）、請求の範囲第４項記載のリパーゼ調製品。９．菌株がＳ．グリセウス（griseus） DSM 7350である、請求の範囲第８項記載のリパーゼ調製品。 10．無粉塵性粒質物、安定化液体、スラリー又は保護された酵素の形態で洗剤用添加剤として提供される、請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載リパーゼ調製品。 11．（１）位置非特異性であり、（２）９−11の範囲内のpHで最適活性を有する（基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間Ca⁺⁺フリーアッセイにおいて測定するとき）、そして（３）ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１に生来の細胞外リパーゼと免疫学的に同一であるか又は部分的に同一である、リパーゼ。 12．請求の範囲第６項記載のリパーゼ調製品を生産することのできるストレプトマイセスグリセウス（Streptomyces griseus）の菌株。 13．前記リパーゼ調製品を生産することのできるＳ．グリセウス（griseus） DSM 7350又はその突然変異株又は変異株である、請求の範囲第12項記載の菌株。 14．炭素および窒素源並びに無機塩を含有する適当な普通培地中で、ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１のリパーゼ− 生産株を培養し、次いでリパーゼ調製品を回収することを含んでなる、請求の範囲第１〜10項のいずれか１項に記載のリパーゼ調製品の製造方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号４４２／９３ (32)優先日 1993年４月20日 (33)優先権主張国デンマーク（ＤＫ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＢＲ，ＣＡ，ＦＩ，ＪＰ，ＫＲ，ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】１．（１）位置非特異性であり、（２）pH10で活性を有しそしてその活性は最適pHで活性の50％を超えており（両活性を、基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間Ca⁺⁺フリーアッセイにおいて測定するとき）、そして（３）ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１の菌株を培養することにより生産可能である、リパーゼ調製品。２．菌株が、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）、Ｓ．リモサス（limosus）、Ｓ．アルボビリジス（alboviridis）、Ｓ．グリセウス（griseus）、Ｓ．パルバス（parvus）、Ｓ．セトニー（setonii）又はＳ．ニトロスポレウス（nitrospor eus）である、請求の範囲第１項記載のリパーゼ調製品。３．菌株が、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）FERM BP-4236，FERM BP-4237， ATCC 23899、Ｓ．リモサス（limosus）ATCC 19778、Ｓ．アルボビリジス（albov iridis）ATCC 25425、Ｓ．グリセウス（griseus）ATCC 23345、DSM 7349，DSM 7 350，DSM 8672、Ｓ．パルバス（parvus）ATCC 12433、Ｓ．セトニー（setonii） ATCC 25497又はＳ．ニトロスポレウス（nitrosporeus）ATCC 27472である、請求の範囲第２項記載のリパーゼ調製品。４．pH10.2の洗剤溶液中で活性を有しそしてその活性はpH10のジエタノールアミン緩衝液中活性の50％を超えており（両活性を、基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い60分の反応時間で測定した場合）、そして洗剤溶液が0.35ｇ／ｌの直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、0.15ｇ／ｌのアルコールエトキシレート、1.25ｇ／ｌのトリポリリン酸ナトリウム、1.00ｇ／ｌの硫酸ナトリウム、0.45ｇ／ｌの炭酸ナトリウムおよび0.15ｇ／ｌのメタ珪酸ナトリウムから成る、請求の範囲第１項記載のリパーゼ調製品。５．菌株がストレプトマイセスサブクラスター（Streptomyces subcluster ）１Ａ又は１Ｂである、請求の範囲第４項記載のリパーゼ調製品。６．菌株が、Ｓ．グリセウス（griseus）、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）又はＳ．パルバス（parvus）である、請求の範囲第５項記載のリパーゼ調製品。７．菌株が、Ｓ．グリセウス（griseus）DSM 7349，DSM 7350，DSM 8672、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）FERM BP-4236，FERM BP-4237，ATCC 23899又はＳ．パルバス（parvus）ATCC 12433である、請求の範囲第６項記載のリパーゼ調製品。８．Ca⁺⁺の不存在下で活性を有しそしてその活性は50mMのCa⁺⁺で活性の50％を超えるものである（両活性を基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用いpH10で測定するとき）、請求の範囲第４項記載のリパーゼ調製品。９．菌株がＳ．グリセウス（griseus）DSM 7350である、請求の範囲第８項記載のリパーゼ調製品。 10．無粉塵性粒質物、安定化液体、スラリー又は保護された酵素の形態で洗剤用添加剤として提供される、請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載リパーゼ調製品。 11．（１）位置非特異性であり、（２）９−11の範囲内のpHで最適活性を有する（基質としてオリーブ油そして乳化剤としてポリビニルアルコールを用い40℃で20分間測定するとき）、そして（３）ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１に生来の細胞外リパーゼと免疫学的に同一であるか又は部分的に同一である、リパーゼ。 12．請求の範囲第６項記載のリパーゼ調製品を生産することのできるストレプトマイセスグリセウス（Streptomyces griseus）の菌株。 13．前記リパーゼ調製品を生産することのできるＳ．グリセウス（griseus）D SM 7350又はその突然変異株又は変異株である、請求の範囲第12項記載の菌株。 14．炭素および窒素源並びに無機塩を含有する適当な普通培地中で、ストレプトマイセスクラスター（Streptomyces cluster）１のリパーゼ−生産株を培養し、次いでリパーゼ調製品を回収することを含んでなる、請求の範囲第１〜10項のいずれか１項に記載のリパーゼ調製品の製造方法。 15．菌株が、Ｓ．コエリカラー（coelicolor）、Ｓ．リモサス（limosus）、Ｓ．アルボビリジス（alboviridis）、Ｓ．グリセウス（griseus）、Ｓ．パルバス（parvus）、Ｓ．セトニー（setonii）又はＳ．ニトロスセポレウス（nitrosp oreus）である、請求の範囲第14項記載の方法。 16．菌株がＳ．コエリカラー（coelicolor）FERM BP-4236，FERM BP-4237，AT CC 23899、Ｓ．リモサス（limosus）ATCC 19778、Ｓ．アルボビリジス（albovir idis）ATCC 25425、Ｓ．グリセウス（griseus）ATCC 23345、DSM 7349，DSM 735 0，DSM 8672、Ｓ．パルバス（parvus）ATCC 12433、Ｓ．セトニー（setonii）AT CC 25497又はＳ．ニトロスポレウス（nitrosporeus）ATCC 27472又はそれらのリパーゼ−生産突然変異株もしくは変異株である、請求の範囲第１５項記載の方法。 17．界面活性剤および請求の範囲第１〜10項のいずれか１項に記載のリパーゼ調製品を含んでなる、洗剤組成物。 18．更に１〜40％の洗剤用ビルダーを含んでなり、そして水性溶液中で測定してPH7−11を有する、請求の範囲第17項記載の洗剤組成物。 19．ビルダーが、ホスフェートビルダー、ゼオライト又はクエン酸ナトリウムである、請求の範囲第18項記載の洗剤組成物。 20．更にプロテアーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、オキシダーゼおよびペルオキシダーゼから成る群から選ばれる第二の洗剤用酵素を含んでなる、請求の範囲第17〜19項のいずれか１項に記載の洗剤組成物。