JPH08503210A

JPH08503210A - 免疫抑制剤としてのラパマイシンの炭酸エステル

Info

Publication number: JPH08503210A
Application number: JP6512073A
Authority: JP
Inventors: ヒュー，デビッド・チェン
Original assignee: アメリカン・ホーム・プロダクツ・コーポレイション
Priority date: 1992-11-19
Filing date: 1993-10-06
Publication date: 1996-04-09
Also published as: ES2100572T3; HU9501464D0; EP0669923A1; HUT73418A; DK0669923T3; EP0669923B1; DE69309954T2; SG47595A1; AU5322094A; WO1994011380A1; HK109197A; GR3023801T3; ATE151769T1; DE69309954D1; KR950704330A; CA2149669A1; US5260300A

Abstract

(57)【要約】ラパマイシンの４２位における、あるいは、３１位および４２位における炭酸エステルは、免疫抑制性を有し、移植組織片の拒絶反応や自己免疫疾患の治療に有用である。これらのエステルは、式（Ｉ）［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈまたは−ＣＯＯＲ³、ただし、Ｒ¹およびＲ²の両方がＨであることはできず、Ｒ³は、Ｃ₁-Ｃ₆アルキル（ただし、１〜３個の水素は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素で置換されていてもよい）、Ｃ₃-Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₂-Ｃ₆アルケニル、またはＡｒ-(ＣＨ₂)_n-（ただし、ｎは０〜６、Ａｒはフェニル；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ₁-Ｃ₆アルキルまたはＣ₁-Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニル；ピリジニル、インドリル、キノリルまたはフラニル）である］またはその医薬上許容される塩によって表される。

Description

【発明の詳細な説明】免疫抑制剤としてのラパマイシンの炭酸エステル発明の分野本発明は、ラパマイシンの新規な炭酸エステル、治療法におけるそれらの使用、ならびに、その医薬組成物に関する。発明の背景ラパマイシンは、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces h ygroscopicus）によって産生される大環状トリエン系の抗生物質であり、インビボおよびインビトロの両方において、抗真菌活性、特にカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）に対する抗真菌活性を有することが見い出されている［シー・ヴェチーナ（C．Vezina）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J ．Antibiot.）28,721（1975）；エス・エヌ・セーガル（S.N．Seghal）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J．Antibiot.）28,727（1975）；エイチ・エイ・べイカー（H.A．Baker）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J．Antibiot.）31,539（1978）；米国特許第3,929,992号；および米国特許第3 ,993,749号］。ラパマイシンは、単独（米国特許第4,885,171号）またはピシバニルと組み合わせて（米国特許第4,401,653号）、抗腫瘍活性を有することが示されている。アール・マーテル（R．Martel）ら［カナディアン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー（Can．J．Physiol．Pharmacol.）55,48（ 1977）］は、ラパマイシンが実験的なアレルギー性脳脊髄炎モデルや多発性硬化症のモデルにおいて；アジュバント性関節炎モデルや慢性関節リウマチのモデルにおいて有効であり、ＩｇＥ様抗体の形成を効果的に阻害したことを開示した。ラパマイシンの免疫抑制効果は、ファセブ（FASEB）3,3411（1989）に開示されている。ラパマイシンは、移植組織片の拒絶反応を阻害するのに有効であることが示されている（米国特許第5,100,899号）。シクロスポリンＡおよびＦＫ-５０６や、他の大環状分子もまた、免疫抑制剤として有効であり、それゆえ、移植組織片の拒絶反応を防止するのに有用であることが示されている［ファセブ（FA SEB）3,3411（1989）；ファセブ（FASEB）3,5256（1989）；およびアール・ワイ・カルネ（R.Y．Calne）ら、ランセット（Lancet）1183（1978）］。米国特許第5,080,899号は、ラパマイシンを用いて肺炎を治療する方法を開示している。米国特許第5,078,999号は、ラパマイシンを用いて全身性紅斑性狼癒を治療する方法を開示している。ラパマイシンのモノ-およびジ-アシル化誘導体（２８位および４３位でエステル化）は、抗真菌薬として有用であることが示され（米国特許第4,316,885号）、ラパマイシンの水溶性プロドラッグを製造するのに用いられている（米国特許第4,650,803号）。最近、ラパマイシンの番号付けの規約が変更されており；それゆえ、ケミカル・アブストラクツ（Chemical Abstracts）の命名法に従えば、上記エステルは、３１位および４２位におけるものとなる。ラパマイシンの３１ -および／または４２-カルバミン酸エステルの免疫抑制活性、抗真菌活性、および抗腫瘍活性が米国特許第5,118,678号に開示されている。発明の概要ラパマイシンの新規な炭酸エステル誘導体は、以下の式Ｉで示される構造を有する。式Ｉにおいて、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈまたは−ＣＯＯＲ³、ただし、Ｒ¹およびＲ²の両方が同時にＨであることはできない。Ｒ³は、Ｃ₁-Ｃ₆アルキル（ただし、１〜３個の水素は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素で置換されていてもよい）、Ｃ₃-Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₂-Ｃ₆アルケニルまたはＡｒ-(ＣＨ₂)_n- （ただし、ｎは０〜６、Ａｒはフェニル；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ₁-Ｃ₆アルキルまたはＣ₁-Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニル；ピリジニル、インドリル、キノリルまたはフラニル）である。式Ｉはまた、医薬上許容される塩を包含し、かかる塩は、水和物、溶媒和物、および酸付加塩（それらを形成することができる場合）を含む。免疫抑制活性は、リンパ球の増殖（ＬＡＦ）を測定するインビトロでの標準的な薬理学的試験法によって評価された。このインビトロ試験では、ラパマイシン自体はＩＣ₅₀が１．７〜６．３ｎＭであり、本発明の炭酸エステルはＩＣ₅₀が０．３２〜２．５ｎＭの範囲内である。したがって、このアッセイでは、本発明の化合物は、ラパマイシンと同等またはそれ以上のＬＡＦ活性を有しており、それゆえ、ラパマイシンの免疫学的性質を有し、移植時の拒絶反応および自己免疫疾患（例えば、狼瘡、慢性関節リウマチ、真性糖尿病、多発性硬化症、乾癬など）の治療に有用であると期待される。本発明の化合物はまた、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）の数種類の株に対して抗真菌活性を有するラパマイシンや他の類似体と構造的に類似していることから、抗真菌性を有すると期待される。同様に、本発明の化合物は、抗炎症活性を有すると期待される。本発明はまた、式Ｉの化合物を製造する方法を提供する。かかる方法は、ラパマイシンまたは４２-保護化ラパマイシンまたは３１-Ｒ²-置換ラパマイシンを、式：ＣｌＣＯＯＲ³ II ［式中、Ｒ²およびＲ³は上記と同意義］で示されるクロロギ酸エステルでアシル化し、要すれば、４２-保護基を除去することからなる。発明の詳細な説明本発明の化合物は、ラパマイシンをエーテルおよびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）の混合物に溶解し、３当量のピリジンで処理することによって、都合よく製造される。この混合物は、０℃に冷却し、式：ＣｌＣＯ₂Ｒ³［式中、Ｒ³は式Ｉと同意義］で示されるクロロギ酸エステル（３当量）で処理する。適当な時間の後、反応を希酸でクエンチし、炭酸エステルおよび出発原料の単離混合物をシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーに付し、所望の炭酸エステルを得る。４２位での炭酸エステルが主要な反応生成物である。３１,４２-ジ炭酸エステル、および３１-炭酸エステルは、単離すれば、副生成物として得られる。本発明の３１-炭酸エステル化された化合物は、ラパマイシンの４２-アルコールを保護基（例えば、tert-ブチルジメチルシリル基）で保護化した後、上記の方法で３１-位をアシル化することによって製造することもできる。保護基を除去すると、３１-炭酸エステル化された化合物が得られる。tert-ブチルジメチルシリル保護基の場合、脱保護化は穏やかな酸性条件下で実施することができる。３１-位を炭酸エステル化し、４２位を脱保護化した後、３１-アルコールと反応させたものとは異なる炭酸エステルを用いて４２位をアシル化すると、３１位および４２位で異なる炭酸エステル部分を有する化合物を得ることができる。あるいは、上記のように製造された、４２-炭酸エステル化された化合物を、異なるクロロギ酸エステルと反応させ、３１位および４２位で異なる炭酸エステル部分を有する化合物を得ることができる。本発明の化合物を製造するのに用いるクロロギ酸エステルは、市販品を利用するか、あるいは、文献に開示されている方法によって製造することができる。本発明はまた、他のラパマイシン（例えば、２９-デメトキシラパマイシン［米国特許第4,375,464号、Ｃ.Ａ.命名法では３２-デメトキシラパマイシン］；１位、３位および／または５位の二重結合が還元されているラパマイシン誘導体［米国特許第5,023,262号］；２９-デスメチルラパマイシン［米国特許第5,093,33 9号、Ｃ.Ａ.命名法では３２-デスメチルラパマイシン］；７,２９-ビスデスメチルラパマイシン［米国特許第5,093,338号、Ｃ.Ａ.命名法では７,３２-デスメチルラパマイシン］；および１５-ヒドロキシ-および１５,２７-ビスヒドロキシ-ラパマイシン［米国特許第5,102,876号］であるが、これらに限定されない）の類似炭酸エステルを包含する。上で引用した米国特許の開示内容は、出典を示すことによって本明細書の一部とする。合成法の具体例を以下に示す。これらの実施例は、単に例示する目的で与えられるものであって、当該開示内容を限定するものとして解釈すべきではなく、当該開示内容は添付の請求の範囲によってのみ限定される。実施例１（Ａ）３１,４２-Ｏ-ビス（メトキシカルボニル）ラパマイシン（Ｂ）４２-Ｏ-メトキシカルボニルラパマイシン磁気的撹拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（３０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝２：１）中におけるラパマイシン（０.８３ｇ，０.９０８ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０_.２５ｍＬ）３.０９ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間撹拌する。この溶液にクロロギ酸メチル（０．２２ｍＬ、２．８５ミリモル）を１０分間かけて滴下する。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温に加温し、２４時間撹拌する。反応を約５０ｍＬの１ＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで３回抽出した後、酢酸エチルで３回抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（０.８８ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、少なくとも３つの化合物が反応混合物中に存在することを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ-ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）によって分離する。２つの化合物（Ａ＆Ｂ）を分離し、これらの画分を減圧下で濃縮する。化合物Ａ（０.０１４３ｇ、全収率１５％）の分析は、それが３１,４２-Ｏ-ビス（メトキシカルボニル）ラパマイシンであることを示した。 ¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ５.２（ｄ，１Ｈ），４.５-４. ５５（ｍ，１Ｈ），３.８（ｓ，３Ｈ），３.７（ｓ，３Ｈ）元素分析，計算値（Ｃ₅₃Ｈ₈₁ＮＯ₁₅・Ｈ₂Ｏ）：Ｃ，６４.３０％；Ｈ，８.２９％；Ｎ，１.４２％実測値：Ｃ，６４.０８％；Ｈ，８.１３％；Ｎ，１.３５％実施例２（Ａ）３１,４２-Ｏ-ビス（エトキシカルボニル）ラパマイシン（Ｂ）４２-Ｏ-エトキシカルボニルラパマイシン磁気的撹拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（４０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝１：１）中におけるラパマイシン（０.５３ｇ，０.５８０ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０.１５ｍＬ、１.８５ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間撹拌する。この溶液にクロロギ酸エチル（０.１７ｍＬ）１.７８ミリモル）を１０分間かけて滴下する。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温に加温し、２４時間撹拌する。反応を約５０ｍＬの１ＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで３回抽出した後、酢酸エチルで３回抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（０．３８ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、少なくとも３つの化合物が反応混合物中に存在することを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ-ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）によって分離する。２つの化合物（Ａ＆Ｂ）を分離し、これらの画分を減圧下で濃縮する。化合物Ａ（０．０１１ｇ、全収率１.８％）の分析は、それが３１，４２-Ｏ-ビス（エトキシカルボニル）ラパマイシンであることを示した。 ¹Ｈ-ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ５．３８（ｄ，１Ｈ），４.５- ４.５８（ｍ，１Ｈ），４.２（ｑ，２Ｈ），４.１５（ｑ，２Ｈ），１.３（ｔ，３Ｈ），１.２５（ｔ，３Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：１０５７（Ｍ^-），５９０，３９３ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４００，２９１０，１７３５，１６４０，１４５０元素分析，計算値（Ｃ₅₇Ｈ₈₇ＮＯ₁₇）：Ｃ，６４．６９％；Ｈ，８.２９％；Ｎ，１.３２％実測値：Ｃ，６４．６３％；Ｈ，８.１９％；Ｎ，１．２０％化合物Ｂ（０.３０５４ｇ，全収率５３％）は、４２-Ｏ-エトキシカルボニルラパマイシン ¹Ｈ-ＮＭＲ：δ４．５５-４.６（ｍ，１Ｈ），４.２（ｑ，２Ｈ），１.２（ｔ，３Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：９８５（Ｍ^-），５９０，３９３ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４３０，２９１０，１７４０，１６４０，１４５０実施例３４２-Ｏ-（フェニルオキシカルボニル）ラパマイシン磁気的撹拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（３０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝１：１）中におけるラパマイシン（１.０５ｇ，１.１４８ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０.３０ｍＬ、３.７１ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間撹拌する。この溶液にクロロギ酸フェニル（０.５０ｍＬ、３.９９ミリモル）を１２分間かけて滴下する。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温に加温し、３時間撹拌する。反応を約５０ｍＬの１ＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した後、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（０.８４ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、少なくとも２つの化合物が反応混合物中に存在することを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、７５％ＥｔＯＡｃ-ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）によって分離する。主生成物を含有する画分を減圧下で濃縮し、淡黄色発泡体（０.５３ｇ、全収率４７％）を得た。分析は、単離した化合物が４２-Ｏ-（フェニルオキシカルボニル）ラパマイシンの一水和物であることを示した。 ¹Ｈ-ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ７.１８-７.４（ｍ，５Ｈ），４ .５-４.６２（ｍ，１Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：９７１（Ｍ^-），５９０，４４１ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４５０，２９３０，１７２０，１６４０，１４６０元素分析，計算値（Ｃ₅₈Ｈ₈₃ＮＯ₁₅・Ｈ₂Ｏ）：Ｃ，６７.３５％；Ｈ，８.０９％；Ｎ，１.３５％実測値：Ｃ，６４．８８％；Ｈ，７.７６％；Ｎ,１.２９％実施例４Ａ．４２-Ｏ-（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシン磁気的撹拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（３０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝１：１）中におけるラパマイシン（１.１３ｇ，１.２４０ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０.３０ｍＬ）３.７１ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間撹拌する。この溶液にクロロギ酸４-ニトロフェニル（０.７４８ｇ）３.７１ミリモル）を５分間かけて少しずつ添加する。反応混合物を０℃で３０分間撹拌する。反応を約５０ｍＬの１ＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した後、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（１.０５ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、少なくとも２つの化合物が反応混合物中に存在することを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ-ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃへの勾配）によって分離する。主生成物を含有する画分を減圧下で濃縮し、淡黄色発泡体（０．５８ｇ）全収率４３％）を得た。分析は、それが４２-Ｏ-（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシンであることを示した。 ¹Ｈ-ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ８.２（ｄ，２Ｈ），７.４（ｄ，２Ｈ），４.５-４.５８（ｍ，１Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：１０７８（Ｍ^-），５９０，１３８ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４３０，２９３０，１７６０，１７３０，１６４０，１５３０，１４５０Ｂ．３１,４２-Ｏ-ビス（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシン磁気的撹拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（５０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝１：１）中におけるラパマイシン（１.３３ｇ，１.４６ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０.３６ｍＬ、４.４５２ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間撹拌する。この溶液にクロロギ酸４-ニトロフェニル（０.８９６５ｇ、４.４５ミリモル）を５分間かけて少しずつ添加する。反応混合物を０℃で１時間撹拌する。反応を約６０ｍＬのｌＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した後、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（１.４７ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、２つの成分の存在を示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２１ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、６０％ＥｔＯＡｃ-ヘキサン）によって分離する。主成分を含有する画分を減圧下で濃縮し、淡黄色発泡体（１.１２９ｇ、全収率６２％）を得た。分析は、それか３１，４２-Ｏ-ヒス（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシンであることを示した。 ¹Ｈ-ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ８.３５（ｄｄ，４Ｈ），７.５２（ｄ，２Ｈ），７.４５（ｄ，２Ｈ），４.５８（ｄ，１Ｈ），４.３５-４.４２（ｍ，１Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：１２４３（Ｍ^-），１０７８，５９０，４４６，１３８ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４３０，２９３０，１７６０，１７３０，１６４０，１５３０，１４５０実施例５４２-Ｏ-（プロパ-２-エニルオキシカルボニル）ラパマイシン磁気的撹拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（３０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝１：１）中におけるラパマイシン（１.１７ｇ，１.２８ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０.３１ｍＬ、３.７４ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間撹拌する。この溶液にクロロギ酸アリル（０.４１ｍＬ）３.８６ミリモル）を１０分間かけて少しずつ添加する。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温に加温し、３６時間撹拌する。反応を約５０ｍＬの１ＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した後、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（０.５３ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、少なくとも２つの化合物が反応混合物中に存在することを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、２５％ＥｔＯＡｃ-ヘキサンから７５％ＥｔＯＡｃへの勾配）によって分離する。主生成物を含有する画分を減圧下で濃縮し、淡黄色発泡体（０.１８ｇ、全収率１４％）を得た。分析は、単離した生成物が４２-Ｏ-（プロパ-２-エニルオキシカルボニル）ラパマイシンの三水和物であることを示した。 ¹Ｈ-ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ５.８５-５.９５（ｍ，１Ｈ），５.２-５.３５（ｄｄ，２Ｈ），４.３-４.４５（ｍ，１Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：９７１（Ｍ^-），５９０，４０５ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４２０，２９１０，２３７０，１７４０，１６４０，１４５０元素分析，計算値（Ｃ₅₅Ｈ₈₃ＮＯ₁₅・３Ｈ₂Ｏ）：Ｃ，６２.７９％；Ｈ，８. ０６％；Ｎ，１.３３％実測値：Ｃ，６２.４３％；Ｈ，８.０４％；Ｎ，１.３４％実施例６４２-Ｏ-（ベンジルオキシカルボニル）ラパマイシン磁気的攪拌機を装備した２５０ｍＬフラスコに入れたエーテル／ＴＨＦ（４０ｍＬ，エーテル：ＴＨＦ＝１：１）中におけるラパマイシン（１.１４ｇ，１.２５ミリモル）の溶液に、窒素下、室温でピリジン（０.３０ｍＬ）３.７１ミリモル）を滴下する。この溶液を０℃に冷却し、３０分間攪拌する。この溶液にクロロギ酸ベンジル（０.５３ｍＬ、３．７１ミリモル）を１０分間かけて滴下する。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、室温に加温し、３０時間攪拌する。反応を約５０ｍＬの１ＮＨＣｌでクエンチする。有機層を分離し、水層をエーテルで抽出した後、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させる。この溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色粉末（０.４７ｇ）を得る。分析的ＴＬＣによる分析は、少なくとも２つの化合物が反応混合物中に存在することを示した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｍカラム上のシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ-ヘキサン）によって分離する。主生成物を含有する画分を減圧下で濃縮し、淡黄色発泡体（０.３１０ｇ）全収率２３％）を得た。分析は、それが２.５モルの水を含んだ４２-Ｏ-（ベンジルオキシカルボニル）ラパマイシンであることを示した。 ¹Ｈ-ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ５.１５（ｓ，１Ｈ），５.２-５. ３５（ｄｄ，２Ｈ），４.３５-４.４２（ｍ，１Ｈ）ＭＳ（負イオンＦＡＢ）ｍ／ｅ：１０４７（Ｍ^-），５９０，４５５ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４４０，２９２０，１７４０，１６４０，１４５０元素分析，計算値（Ｃ₅₉Ｈ₈₅ＮＯ₁₅・２.５Ｈ₂Ｏ）：Ｃ，６４.８８％；Ｈ，８.２４％；Ｎ，１.２８％実測値：Ｃ，６４.８２％；Ｈ，７.９５％；Ｎ，１.１３％実施例７実施例６で概説した方法に従い、クロロギ酸ベンジルを、以下の：ａ．クロロギ酸４-フルオロフェニルｂ．クロロギ酸ビニルｃ．クロロギ酸２-トリクロロエチルｄ．クロロギ酸４-メトキシフェニルｅ．クロロギ酸アリルｆ．クロロギ酸４-ニトロベンジルｇ．クロロギ酸２-ブロモエチルに代えることにより、それぞれ、以下のものを得た：ａ．４２-Ｏ-（４-フルオロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシンｂ．４２-Ｏ-（ビニルオキシカルボニル）ラパマイシンｃ．４２-Ｏ-（２-トリクロロエチルオキシカルボニル）ラパマイシンｄ．４２-Ｏ-（４-メトキシフェニルオキシカルボニル）ラパマイシンｅ．４２-Ｏ-（アリルオキシカルボニル）ラパマイシンｆ．４２-Ｏ-（４-ニトロベンジルオキシカルボニル）ラパマイシンｇ．４２-Ｏ-（２-ブロモエチルオキシカルボニル）ラパマイシンコウマイトジェン（comitogen）の誘発により胸腺細胞の増殖（ＬＡＦ）を行う方法を、代表的な化合物の免疫抑制効果のインビトロ測定法として用いた。簡単に説明すると、正常ＢＡＬＢ／ｃマウスの胸腺由来の細胞を、ＰＨＡおよびＩＬ-１と共に７２時間培養し、最後の６時間はトリチウム化チミジンでパルスする。細胞は、様々な濃度のラパマイシン、シクロスポリンＡ、または試験化合物を用いて、あるいは、用いずに培養する。細胞を採取し、導入された放射活性を測定する。リンパ球増殖の阻害は、薬剤で処理していない対照に対する１分間あたりのカウント数の変化率（％）で評価する。結果は以下の比率あるいは、濃度１μＭにおけるリンパ球増殖の阻害率（％）またはＩＣ₅₀として表す。本発明の化合物を用いて上記試験で得た薬理学的データを、ラパマイシンを用いた比較結果と共に、表Ｉに示す。医薬組成物上記化合物は、そのままで、あるいは、医薬用担体と共に、それを必要とする哺乳動物に処方すればよい。医薬用担体は、固形または液状のいずれでもよい。固形担体は、香味剤、滑沢剤、可溶化剤、懸濁化剤、充填剤、潤滑剤、圧縮補助剤、結合剤または錠剤崩壊剤としても作用しうる一種またはそれ以上の物質を含有することができる；それはカプセル化材料とすることもできる。散剤の場合、担体は、細かく粉砕された固体であって、やはり細かく粉砕された活性成分と混合されている。錠剤の場合、活性成分は、必要な圧縮性を有する担体と適当な割合で混合され、所望の形状および寸法に成形される。散剤および錠剤は、好ましくは９９％までの活性成分を含有する。適当な固形担体は、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、低融点ワックスおよびイオン交換樹脂を含む。液状担体は、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤および加圧組成物を調製するのに用いられる。活性成分は、医薬上許容される液状担体（例えば、水、有機溶媒、両方の混合物、または医薬上許容される油脂）中に溶解または懸濁させることができる。液状担体は、他の適当な医薬用添加物（例えば、可溶化剤、乳化剤、緩衝化剤、保存剤、甘味料、香味剤、懸濁化剤、増粘剤、着色剤、粘度調節剤、安定化剤または浸透圧調節剤）を含有することができる。経口および非経口投与用の液状担体の適当な例は、水（上記の添加剤、例えば、セルロース誘導体、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液を部分的に含有する）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコール、例えば、グリコールを含む）およびそれらの誘導体、ならびに油（例えば、分別ヤシ油および落花生油）を含む。非経口投与の場合、担体は、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの油状エステルとすることもできる。無菌の液状担体は、非経口投与用の無菌液状組成物に有用である。加圧組成物用の液状担体は、ハロゲン化炭化水素または他の医薬上許容される噴射剤とすることができる。無菌の液剤または懸濁剤である液状医薬組成物は、例えば、筋肉内、腹腔内または皮下への注射によって利用することができる。無菌液剤は、静脈内投与することもできる。上記化合物は、液状または固形のいずれの組成物形態でも、経口投与することができる。本発明の化合物は、従来の坐剤の形態で直腸内に投与してもよい。鼻腔内または気管支内へ吸入または吹入による投与の場合、本発明の化合物は、水溶液または部分的水溶液に処方すればよく、次いで、エアロゾルの形態で利用することができる。本発明の化合物は、活性化合物と、この活性化合物に対して不活性であり、皮膚に対して毒性を有さず、しかも、皮膚を介して全身吸収用薬剤を血流中に送達するような担体とを含有する経皮貼付薬を用いて、経皮的に投与してもよい。担体は、クリーム剤および軟膏剤、パスタ剤、ゲル剤、ならびに密封用具などの数多くの形態をとる。クリーム剤および軟膏剤は、水中油型または油中水型のいずれかのタイプの粘稠液または半固形乳剤であればよい。活性成分を含有する鉱油または親水ワセリン中に分散させた吸収性粉末からなるパスタ剤も適当である。様々な密封用具、例えば、必要に応じて担体と共に活性成分を含有する貯蔵部を覆う半透膜や、活性成分を含有するマトリックスを用いて、活性成分を血流中に放出させればよい。他の密封用具は文献で知られている。好ましくは、上記医薬組成物は、例えば、錠剤またはカプセル剤のような単位投与形態である。このような形態では、かかる組成物は、適当量の活性成分を含有する単位投与量に細分される：単位投与形態は、包装された組成物、例えば、分包散剤、バイアル、アンプル、予め充填したシリンジ、または液体を含有する薬袋とすることができる。単位投与形態は、例えば、カプセル剤または錠剤それ自体としたり、このような組成物を適当数だけ包装した形態とすることもできる。治療に用いるべき用量は、担当の医師によって主観的に決定されねばならない。さらに、本発明の化合物は、医薬上許容される賦形剤が、真菌類に冒された領域に投与すればよい活性化合物を０.１〜５％、好ましくは２％、含有するように処方することによって、液剤、クリーム剤、またはローション剤として用いてもよい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ

Claims

【特許請求の範囲】１．式：［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈまたは−ＣＯＯＲ³、ただし、Ｒ¹およびＲ²の両方がＨであることはできず、Ｒ³は、Ｃ₁-Ｃ₆アルキル（ただし、１〜３個の水素は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素で置換されていてもよい）、Ｃ₃-Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₂-Ｃ₆アルケニル、またはＡｒ-（ＣＨ₂）_n-（ただし、ｎは０〜６、Ａｒはフェニル；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ₁-Ｃ₆アルキルまたはＣ₁-Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニル；ピリジニル、インドリル、キノリルまたはフラニル）である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩。２．３１，４２-Ｏ-ビス（メトキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。３．４１-Ｏ-（メトキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。４．３１,４２-Ｏ-ビス（エトキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。５．４２-Ｏ-（エトキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。６．４２-Ｏ-（フェニルオキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。７．４２-Ｏ-（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。８．３１,４２-Ｏ-ビス（４-ニトロフェニルオキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。９．４２-Ｏ-（プロパ-２-エニルオキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。１０．４２-Ｏ-（ベンジルオキシカルボニル）ラパマイシンである請求項１記載の化合物。１１．臓器および組織移植片の拒絶反応を治療する方法であって、それを必要とする温血動物に治療有効量の式：［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈまたは−ＣＯＯＲ³、ただし、Ｒ¹およびＲ²の両方がＨであることはできず、Ｒ³は、Ｃ₁-Ｃ₆アルキル（ただし、１〜３個の水素は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素で置換されていてもよい）、Ｃ₃-Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₂-Ｃ₆アルケニル、またはＡｒ-(ＣＨ₂)_n-（ただし、ｎは０〜６、Ａｒはフェニル；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ₁-Ｃ₆アルキルまたはＣ₁-Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニル；ピリジニル、インドリル、キノリルまたはフラニル）である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することからなる治療方法。１２．自己免疫疾患を治療する方法であって、それを必要とする温血動物に治療有効量の式：［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈまたは−ＣＯＯＲ³、ただし、Ｒ¹およびＲ²の両方がＨであることはできず、Ｒ³は、Ｃ₁-Ｃ₆アルキル（ただし、１〜３個の水素は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素で置換されていてもよい）、Ｃ₃-Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₂-Ｃ₆アルケニル、またはＡｒ-(ＣＨ₂)_n-（ただし、ｎは０〜６、Ａｒはフェニル；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ₁-Ｃ₆アルキルまたはＣ₁-Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニル；ピリジニル、インドリル、キノリルまたはフラニル）である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩を投与することからなる治療方法。１３．臓器および組織移植片の拒絶反応や自己免疫疾患を治療する医薬組成物であって、医薬用担体および有効量の式：［式中、Ｒ¹およびＲ²は、独立して、Ｈまたは−ＣＯＯＲ³、ただし、Ｒ¹およびＲ²の両方がＨであることはできず、Ｒ³は、Ｃ₁-Ｃ₆アルキル（ただし、１〜３個の水素は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素で置換されていてもよい）、Ｃ₃-Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₂-Ｃ₆アルケニル、またはＡｒ-(ＣＨ₂)_n-（ただし、ｎは０〜６、Ａｒはフェニル；フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ₁-Ｃ₆アルキルまたはＣ₁-Ｃ₆アルコキシで置換されたフェニル；ピリジニル、インドリル、キノリルまたはフラニル）である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩を含有する医薬組成物。