JPH0832720B2 - タフトシン類似体、その製法及び医薬組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、下記一般式Ｉで表される部分的にレトロ逆
転された（retro−inverted）新規なタフトシン類似体
及び薬物学的に許容される相当する塩、エステル及びア
ミドに係り、さらにこれら新規化合物の製法及びこれら
を含有する医薬組成物にも係る。

一般式Ｉ （式中、Ｒはトレオニンの側鎖（−CH（OH）CH₃）、メ
チオニンの側鎖（−CH₂−CH₂−Ｓ−CH₃）又はロイシン
の側鎖（−CH₂−CH(CH₃)₂）であり；R¹はロイシンの側
鎖（−(CH₂)₄−NH₂）又はアルギニンの側鎖（−(CH₂)₃
−NH−C(NH)NH₂）であり；R²は水素又は代謝反応におい
て活性なアシル基であり；不斉炭素原子はすべてがＳ−
又はＲ−配置であるか、又はＮ−末端残基から１番目、
３番目及び４番目の不斉炭素がＳ−配置で、２番目の炭
素がＲ−又は（R,S）−配置である。） この明細書において「代謝反応において活性な（meta
bolically）アシル基」とは、代謝系の第１段階におい
て迅速に開裂され、相対的に無毒性であって、良好な生
物活性を呈する用量において哺乳動物に対して無害であ
る各種のアシル基を意味する。

本発明の化合物の好適なものは、一般式Ｉにおいて、
Ｒ及びR¹が前記の如くであり、R²が水素原子である化合
物、及び薬物学的に許容される相当の塩、エステル及び
アミドである。

本発明の化合物のうち特に好適なものは、一般式Ｉに
おいて、Ｒが前記の如くであり、R¹がリシンの側鎖であ
り、R²が水素である化合物、及び薬物学的に許容される
相当の塩、エステル及びアミドである。

本発明の化合物のうち最も好適なものは、一般式Ｉに
おいて、Ｒがトレオニンの側鎖であり、R¹がリシンの側
鎖であり、R²が水素である化合物、及び薬物学的に許容
される相当の塩、エステル又はアミドである。

タフトシンは、配列 Thr−Lys−Pro−Arg によって特徴ずけられる天然のテトラペプチドであり、
1970年、Najjarらによって単離されたものである（Najj
ar及びNisioka「ネーチャー（Nature）」第228巻、p672
（1970））。

この物質は、特殊な免疫グロブリン（ロイコキニン）
から、２種類の酵素、すなわちタフトシン−エンドカル
ボキシペプチダーゼ（ロイコキニンの環化に作用し、タ
フトシンのカルボキシ末端のArg−Glu結合を切断する脾
内酵素）及びロイコキニナーゼ（Lys−Thr結合を切断し
て、タフトシンのアミノ末端をフリーにする好中球、単
核球及びマクロファージの膜性酵素）の作用によって遊
離される。その主な生物活性は、貧食細胞、主としてマ
クロファージを活性化させることにあるが、キャリヤー
であるロイコキニン分子から遊離された場合にのみ充分
な活性を示す（Najjar「アドバンシーズ・イン・エンザ
イモロジー（Advances in Enzymology）」41,129−78
（1974）;Najjar「J.Pediatr.」87,1121−24（197
5））。タフトシンは貪食細胞の外膜上の特殊なレセプ
ターに結合し、その後、内在化し、細胞質内酵素の作用
に対して感受性となる。最も活性な酵素は、トレオニン
残基を開裂して、トリペプチド Lys−Pro−Arg （タフトシン活性の阻害剤である）を生ずるアミノペプ
チダーゼである（Spirerら「ジャーナル・オブ・クリニ
カル・インベスティゲーション（J.Clin.Invest.）」5
5,198−200（1975）及びFridkinら「ビオシミカ・エ・
ビオフィジカ・アクタ（Bio−chim.Biophys.Acta）」49
6,203−11（1977））。

1970年以降、特に過去10年間でタフトシンは完全に研
究された。特にタフトシンの生物活性は解明されてお
り、この化合物のさらに詳細な薬物学的特徴が見出され
ている。さらに、各種のタフトシン類似体も合成され、
構造−活性及び構造−安定性の関係も明らかにされてい
る。生物活性の解明に関しては、タフトシンは、貪食作
用だけでなく、抗菌活性（Martinezら「Eur.J.Med.Che
m.−Chim.Ther.」12,511−６（1977））及びマクロファ
ージの殺腫瘍性活性（Nisioka「Br.J.Cancer」39
（３）,342−45（1979）;Najjar及びLinehan「タフトシ
ンの殺腫瘍性活性」p314（1982））をも促進せしめ、こ
れにより、非常に有望な免疫促進、抗菌及び抗腫瘍薬と
して臨床的に使用される可能性を有していることが認め
られた。さらに類似体の合成等に関しては、構造−活性
の関係に係る研究により、タフトシン配列の１位のトレ
オニンをメチオニン又はロイシンで交換でき、この場合
にも貪食作用の促進性が保持されることが観察されてい
る（Matsuuraら「ケミカル・アブストラクッ（Chem.Abs
t.）」83 114937 e）。しかしながら、これらの化合物
はタフトシンと同じく安定性に係る問題を有している。
事実、タフトシンによるマクロファージの抗菌活性の促
進が感染の初期段階（15分）において非常に増進される
こと、及びこの促進効果はタフトシンが細胞酵素によっ
て迅速に破壊されるため持続しないことが観察されてい
る。さらに、多量のタフトシンは、インビボでのマクロ
ファージの免疫機能を低下させかつマウスにおける抗体
の反応を抑制することによって、その活性を阻害するこ
とも観察されている。これは、タフトシンの迅速な代謝
崩壊の結果、より安定なトリペプチド Lys−Pro−Arg を遊離されるとの事実によって説明される。なお、この
トリペプチドはタフトシンの阻害剤であり、細胞レセプ
ターに関してテトラペプチドと競合するものであること
が報告されている（Florentinら、タフトシンの特性−
テトラペプチドタフトシンの抗癌性、免疫原性及び他の
効果：天然マクロファージアクチベーター「アンナール
ズ・オブ・ザ・ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイ
エンシーズ（Annals of the New York Academy of Scie
n−ces）」Najjar及びFridkin編、第419巻、1983）。

上記問題を解消し、タフトシン類似体の酵素安定性を
高めるため、完全にレトロ逆転したタフトシン誘導体を
合成することが試みられているが、これら誘導体は不活
性であることが証明されている（Hisatsuneら「ケミカ
ル・アンド・ファーマスーティカル・ブレティン（Che
m.Pharm.Bull.）26,1006−７（1978））。

発明者らは、１位のアミノ酸残基と２位のアミノ酸残
基との間のペプチド結合のみを逆転させることによって
得られる一般式Ｉで表される化合物が、かかるペプチド
結合が逆転されていない元の化合物と同じ薬理特性を保
有すると共に、酵素による崩壊に対してより安定である
ことを見出し、本発明に至った。

本発明の新規な化合物は、一般式II （式中、R¹′はそれぞれアミノ基又はグアニジノ基が適
当に保護されたリシン又はアルギニンの側鎖であり、Ｐ
は容易に除去されるカルボキシル保護基であり、Ｐ′は
容易に除去されるグアニジノ保護基であり、不斉炭素の
配置が上述の如くである）で表されるマロン酸誘導体
と、一般式III （式中、Ｒ′は必要により官能基が適当に保護されたト
レオニン、メチオニン又はロイシンの側鎖である）で表
されるアミドとを、カップリング剤の存在下で縮合さ
せ、これにより得られた一般式IV （式中、Ｒ′、R¹′、Ｐ及びＰ′は前記と同意義であ
る）で表される化合物を（1,1−ビス−トリフルオロア
セトキシ）ヨードベンゼン（TIB）と反応させて末端カ
ルバミル基を第１級アミノ基に変換し、必要があれば末
端アミノ官能基を代謝反応において活性なアシル基でア
シル化し、保護基を除去することによって調製される。
R²が水素である一般式Ｉの化合物が望まれ、従って、ア
シル化が必要とされない場合には、アミド／アミン変換
及び脱保護の処理の順番は適当に替えられる。実際、本
発明の好適な具体例によれば、R²が水素原子である一般
式Ｉの化合物が望まれる場合、一般式II及びIIIの化合
物を縮合させることによって得られた一般式IVの化合物
をまず脱保護し、ついでTIBと反応させて一般式Ｉで表
される所望のレトロ逆転ペプチドを生成している。

本発明の他の目的は、一般式IV（式中、Ｒ′、R¹′、
Ｐ及びＰ′は上述のとおりである）で表される新規な中
間体、及び保護基を適当に除去した相当する誘導体にあ
る。特にこれら生成物は中間体として有用である以外に
も、タフトシン自体に匹敵する免疫促進活性を有するこ
とも証明されている。

上述の製法をさらに詳述する。第１の工程は、文献に
おいて公知の各種ペプチド合成法に従って簡便に実施さ
れる。収率及び生成物の純度の点で最適な結果は、たと
えばわずかに過剰のＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（HOBT）を一般式IIの酸の溶液に添加することによって
カルボン酸（II）の活性化エステルを調製し、ついで活
性化エステルをカップリング剤（代表的にはジシクロヘ
キシルカルボジイミド（DCCI））と接触させ、最後に一
般式IIIの反応体と接触させることによって得られる。
この縮合の際、反応体を溶解させうると共に、反応の進
行を妨げない一般的な極性の非プロトン性有機溶媒を使
用する。反応は室温で有利に実施される。使用できる溶
媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロルエ
タン等のハロゲン化炭化水素であり、ジメチルホルムア
ミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル等の如き
さらに極性の有機溶媒と混合されてもよい。

縮合反応が終了した後（反応の進行はTLCによって容
易に監視される）、一般的な回収法に従って一般式IVで
表される中間体を回収する。特に、カップリング剤とし
てDCCIを使用した場合には、溶媒の留去、残渣のテトラ
ヒドロフランへの溶解、反応混合物の冷却、過による
シクロヘキシル尿素沈殿物の除去、液の弱塩基性及び
弱酸性水溶液による充分な洗浄及び有機溶媒の留去によ
る処理法で回収を行なう。

ついで、このようにして得られた生成物とTIBとの反
応を、特開昭58−146538号に記載の方法（水／不活性有
機溶媒混合物、たとえば水／ジメチルホルムアミド、水
／アセトニトリル等において、アミド化合物をわずかに
過剰のTIBと反応させる）に従って行なう。かかる反応
は、不活性ガスを反応混合物中で発泡させ、反応の進行
をTLCで監視しながら行なわれる。

反応終了後、有機溶媒を除去し、凍結乾燥によって生
成物を回収する。ついで、たとえばｐ−ニトロフェニル
又は2,4,5−トリクロロフェニルエステルの如き酸R²COO
Hの活性エステルを使用して、この生成物のアシル化を
行なう。その後、公知の方法に従って脱保護を行なう。
一般に、カルボキシル保護基及びトレオニンのヒドロキ
シル保護基としてｔ−ブチル又はｔ−アミル基の如き一
般的な保護基を使用する場合、又はアミノ保護基として
第３級ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル
等を使用する場合には、これらの基は温和な酸性条件下
における酸分解、たとえば生成するｔ−ブチル、ｔ−ア
ミル又はベンジルカーボネートを捕そくするスカベンジ
ャーとして使用される各種割合のアニソール、チオアニ
ソール、又はレゾルシノールの存在下における酢酸中の
希塩酸、トリフルオロ酢酸又はトリフルオロ酢酸／塩化
メチレン混合物による酸分解によって簡単に除去され
る。

脱保護の後、一般式Ｉの所望生成物を回収し、従来の
クロマトグラフィー法によって精製する。この目的に
は、逆転相クロマトグラフィーが特に適する。

このようにして得られた生成物の均質性はTLC及びHPL
Cによってチェックされ、純度はアミノ酸分析及びNMR分
光法によってテストされる。

上述の如く、R²が水素である一般式Ｉの化合物が望ま
れる場合、アミド／アミン変換及び脱保護の操作の順番
は好ましくは逆転される。しかし、各工程を実施する一
般法は同じである。

一般式II及びIIIで表される原料化合物は、市販の化
合物を原料として、又は公知の方法又はペプチド合成化
学及び有機合成化学の分野において公知の方法に類似の
方法によって調製した化合物を原料として容易に調製さ
れる。さらに詳述すれば、一般式IIのマロニル誘導体
は、マロニル誘導体Ｖ （式中、R¹′は前記と同意義である）を原料として、文
献において公知であり、部分的にレトロ逆転したペプチ
ドの合成において広く使用されている方法に従って行な
われる一連の縮合／脱保護工程によって調製される。

一方、このマロニル誘導体Ｖは、相当するジエステル
を制御したアルカリ性条件下で部分的に加水分解するこ
とによって容易に調製される。ジエステルは、マロン酸
ジ低級アルキルエステルのアルカリ塩と、適当に選択さ
れた一般式 R¹′−Ｘ （式中、R¹′は前記と同意義であり、Ｘは好ましくは塩
素である）で表されるハロゲン化物との反応を介して得
られる。さらに詳述すれば、マロン酸ジ低級アルキルエ
ステルをアルカリ金属のアルカノール溶液に添加し、つ
いで反応体R¹′−Ｘを添加する。反応終了後、水で洗浄
し、有機溶媒を留去することにより所望の生成物を回収
する。このようにして得られた中間体の部分的加水分解
（代表的にはエタノール/KOH中で行なわれる）を行な
い、一般式Ｖのモノエステルを生成する。

本発明の化合物は分子中に少なくとも４個の不斉炭素
原子（下記一般式中の＊印で示す）を有するため、多数
の異性体が存在しうる。

しかしながら、上述の方法は立体特異的方法、すなわ
ち各原料化合物の立体配置が各工程において保持される
方法（ラセミ化合物として使用される２−置換マロニル
残基を除く）である。

本発明の好適な具体例によれば、末端アミノ酸Pro−A
rgの絶体配置はＬ−形であり、一般式IIの原料化合物の
調製の際、適当なＬ−プロリン及びＬ−アルギニン誘導
体を使用することによって、少なくとも２個の不斉炭素
原子がＬ−形配置である一般式Ｉの化合物を容易に得る
ことができる。

上記方法において２−置換マロニル残基を使用する場
合には、一般式Ｉの異性体の混合物が生成するため、必
要に応じて、一般に逆転相HPLCによって混合物を各異性
体にラセミ分割できる。

本発明の一般式Ｉで表される化合物は、各種の無機又
は有機の塩基又は酸と塩基性又は酸性の塩を生成しう
る。かかる塩基性塩としては、たとえばアルカリ金属塩
（ナトリウム、カリウム）又はアルカリ土類金属塩（カ
ルシウム又はマグネシウム）があり、一方、酸性塩とし
ては、無機酸（HCl,HBr,H₂SO₄，H₃PO₄）、スルホニック
有機酸及び酢酸、シコウ酸、ピバル酸等の如きカルボキ
シル有機酸の酸付加塩がある。このような薬物学的に許
容される塩も、後述するように、治療において有効であ
るため好適である。しかしながら、必ずしも薬物学的に
許容されない塩であっても、一般式Ｉの化合物を単離及
び精製には使用できる。このような塩は、生成する塩が
不溶であるか又は容易に回収されうる溶媒中において、
一般式Ｉの化合物を適当に選択した酸又は塩基と反応さ
せることによって容易に調製される。特に好適には、こ
の塩の生成を水中で行ない、このようにして得られた塩
を凍結乾燥によって回収する。

一般式Ｉの化合物の相当するエステル及びアミドも、
本発明の範囲内に包含される。かかる誘導体としては、
アルキル、ジー（アルキル）アミノアルキル、アシルア
ミノアルキル、アシロキシアルキル、ベンジル及び置換
ベンジルエステル、及びベンジル、フェネチル、及びモ
ノ−及びジ−Ｎ−アルキルアミドがある。この誘導体の
中で好適なものは、エステル基が酸性条件下で容易に加
水分解されるもの（たとえばｔ−ブチル又はｔ−アミル
エステル）である一般式Ｉの化合物のエステルである
（これら化合物は中間体として使用される）。

一般式Ｉの化合物（薬物学的に許容されるエステル、
アミド及び塩を含む）は、免疫促進剤として活性であ
る。この活性は、マクロファージ（Ｍφ）貪食促進検定
によってインビトロで証明される。この検定（タフトシ
ンと比較して行なわれる）は、Bar−Shavitらの方法
（「ジャーナル・オブ・セルラー・フィジオロジー（J.
Cell.Physiol.）100,55（1979））の変形法に従って実
施される。さらに詳述すれば、正常なC3H/HeNマウスの
腹腔Ｍφを腹腔内を洗浄することによって回収し、「ジ
ャーナル・オブ・イミュノロジー（J.Immunol.）」132,
1987（1984）に記載の如く付着法によって精製する。付
着腹腔細胞１×10⁶の単層（形態及びラテックス貪食作
用によって判定して、単核球−Ｍφシリーズの95−98
％）を、ゲンタマイシン50μg/ml、25mM HEPES緩衝剤、
2mM L−グルタミン及び10％加熱不活性化胎児性ウシ血
清（FBS）を補充したRPMI−1640培養基において、37℃
で20時間培養する。インキュベーション終了後、Ｍφを
洗浄し、培地単独（ブランク）、又はタフトシン又は本
発明の化合物を各種濃度で含有する培地1.3ml/プレート
上に37℃で15分間露出する。ついで、各プレートに死滅
酵母細胞（Zymosan）の1.5×10⁸細胞/ml懸濁液（0.2m
l）を添加する。Ｍφを37℃で60分間インキュベート
し、ついで洗浄し、固定し（PBS中２％グルタルアルデ
ヒド、30分、４℃）及び染色する。100×液浸対物レン
ズを具備する光学顕微鏡を使用して、貪食性Ｍφの割合
及び摂取されたザイモサン細胞の数を測定する。

タフトシンの活性を実施例１の相当するレトロ逆転類
似体のものと比較するための代表的な実験では、すべて
のＭφが上記条件下でザイモサンを貪食しうることが観
察された。しかし、タフトシン又は実施例１の化合物の
存在下では、摂取された酵母細胞の数が明らかに増加
し、ペプチドの濃度に直線的に比例する。特に、実施例
１の化合物が濃度３×10^-7Mで存在する場合には、100マ
クロファージ当りの摂取されたザイモサン細胞の数は2.
2×10³（コントロールの170％）であり、濃度10^-6Mで
は、100マクロファージ当りの摂取されたザイモサン細
胞の数は2.44×10³（コントロールの188％）であった。

タフトシンが治療の際にあまり利用されていない理由
が、安定性が低いこと及びこのため生物活性が急速に失
われることにあるため、溶液中、４℃に14日間保存した
タフトシンの活性及び実施例１のレトロ逆転類似体の活
性を比較する貪食検定を行なった。これらの条件下で
は、予想したように、タフトシンは活性を失っており、
これに対し、実施例１の化合物によって生ずる貪食促進
作用は先の場合より劣ってはいてもなお明らかであっ
た。事実、濃度10^-6Mでは、実施例１の化合物は、100マ
クロファージ当りの摂取されたザイモサン細胞の数1.8
×10³を示した（コントロールの136％に相当する免疫賦
活効果を有する）。

従って、本発明の化合物は、病原菌又は腫瘍細胞に対
する防御機構を促進させる必要があるいかなる場合にも
使用される。病状等に応じて４−８日毎に投与を行なう
治療計画が使用される。その際の用量（病状及びその重
篤度、投与方法及び付随する治療措置に左右される）は
一般に体重kg当り有効成分0.001ないし5mg、好ましくは
0.01ないし2mg/Kgである。

一般式の化合物は、注射により（特に静脈注射又は腹
腔内注射）又は経口的に投与される。従って、適当な固
状又は液状の剤形、たとえば経口投与のための錠剤、カ
プセル剤又はエリキシル剤、及び非経口投与のための無
菌液又は懸濁液に処方される。これらの剤形（好ましく
は有効成分として１剤形当り一般式Ｉの化合物0.01ない
し300mgを含有すると共に、一般的なビヒクル、医薬品
添加物、保存剤等を含有する）は公知の方法に従って調
製される。

本発明の化合物は、他の有効成分との混合物としても
処方される。たとえば、免疫機能の障害を伴う細胞感染
の患者の治療には、感染症を起こす微生物に対して有効
な抗菌剤以外に、一般式Ｉの免疫促進化合物を適当量含
有する処方を利用することが望ましい。

下記の実施例は、本発明の代表的な化合物の調製をさ
らに詳細に説明するためのものであって、本発明の精神
を限定するものではない。

この明細書では、簡略化のため、以下の省略記号を使
用している。

Ｚ＝ベンジルオキシカルボニル；Bu^t＝第３級ブチル;
Boc＝第３級ブトキシカルボニル;AcOEt＝酢酸エチル;Mt
r＝（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニル）スル
ホニル;EtO＝エトキシ;Bz＝ベンジル;NMM＝Ｎ−メチル
モルホリン;HOBT＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール;
DMF＝ジメチルホルムアミド;DCCI＝ジシクロヘキシルカ
ルボジイミド;EtOH＝エチルアルコール;THF＝テトラヒ
ドロフラン;DCU＝ジシクロヘキシル尿素;TFA＝トリフル
オロ酢酸；Et₂O＝エチルエーテル;TIB＝（1,1−ビス−
トリフルオロアセトキシ）ヨードベンゼン 実施例 ｛（2R,S）−２−〔Ｎ−（１−アミノ−２−ヒドロキシ
プロピル）カルバミル〕−６−アミノ｝ヘキサノイル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニン（gThr−（R,S）mLys−
Ｌ−Pro−Ｌ−Arg−OH） ａ） Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−第３級ブチ
ル−Ｄ−トレオニンアミド（Ｚ−Ｄ−Thr（Bu^t）−N
H₂） 濃H₂SO₄（0.1ml）及びイソブチレン（35ml,390ミリモ
ル）を、ドライアイスで冷却した耐圧容器内に収容した
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−トレオニンアミド
（4.2g,16.6ミリモル）の塩化メチレン（35ml）懸濁液
に添加した。反応容器を密閉し、温度を室温まで上昇さ
せた。４日後、過剰のイソブチレンを留去し、有機溶液
を５％Na₂CO₃水溶液（３×30ml）、５％クエン酸水溶液
（20ml）で洗浄し、さらにpH6となるまで水で洗浄し
た。有機相をMgSO₄で乾燥し、濃縮乾固して標記化合物
を透明な油状物として得た（4.62g,90％）。

NMR及び質量分光法によって構造を確認した。HPLC及
びTLCによって生成物が単一であることを確認した。

ｂ） Ｏ−第３級ブチル−Ｄ−トレオニンアミド（Ｈ−
Ｄ−Thr（Bu^t）−NH₂） 10％Pd/C（1.5g）を、工程ａ）で得られた化合物のMe
OH（200ml）溶液に添加し、反応混合物中に水素を1.5時
間発泡させ、その間、原料化合物の消失をTLCで監視し
た。反応が終了した後、混合物中に窒素流を通すことに
よって過剰の水素を除去し、反応混合物をシーライト上
で過し、液を濃縮乾固してＯ−第３級ブチル−Ｄ−
トレオニンアミド（2.55g,99％）を得た。質量及びNMR
スペクトルによって構造を確認した。

ｃ） （2R,S）−２−〔（４−ｔ−ブトキシカルボニル
アミノ）ブチル〕マロン酸モノエチルエステル（OEt−
（R,S）mLys（Boc）−OH） ジオキサン／水（2/1,v/v）（100ml）中に４−クロロ
ブチルアミン塩酸塩（14.38g,0.1モル）を含有する溶液
を、激しく撹拌しながら、ジー（第３級ブチル）カーボ
ネート（24g,0.11モル）、1NNa₂CO₃（100ml）及びジオ
キサン／水（2/1,v/v）（200ml）の混合物（０℃に冷
却）にゆっくりと添加した。添加終了後、反応混合物を
室温でさらに１時間撹拌し、減圧下でジオキサンを除去
し、水相を酢酸エチルによって数回抽出した。有機相か
らＮ−〔（第３級ブトキシ）カルボニル〕−４−クロロ
ブチルアミンを油状生成物（21g）として回収した。

一方、金属ナトリウム（0.28g,0.012モル）を、窒素
雰囲気下で無水エチルアルコール（9ml）に溶解させ
た。混合物を60℃に加熱し、マロン酸ジエチルエステル
（3.8g,0.024モル）をゆっくりと滴加した。ついで、得
られた混合物にＮ−〔（第３級ブトキシ）カルボニル〕
−４−クロロブチルアミン（2.5g,0.012モル）を室温で
徐々に添加した。反応混合物を室温で２時間、ついで還
流温度で６時間撹拌し、酢酸エチル／水（1/1,v/v）（1
00ml）中に注加した。有機相を回収し、水で数回洗浄
し、MgSO₄で乾燥した。減圧下（0.5ミリバール）、100
℃で有機溶媒を除去して、粗性の油状生成物を得た後、
RP−18樹脂を使用し、CH₃CN（45容量％）を含有する水
相で溶出する逆転相HPLCによって精製した。このように
して、（2R,S）−２−〔（４−第３級ブトキシカルボニ
ルアミノ）ブチル〕マロン酸ジエチルエステル（1.31
g）を純粋な生成物として得た。

KOHのエタノール溶液（4.31ml,0.417M）を、（2R,S）
−２−〔（４−第３級ブトキシカルボニル−アミノ）ブ
チル〕マロン酸ジエチルエステル（1.2g,3.6ミリモル）
の無水エチルアルコール（7ml）溶液に非常にゆっくり
と添加した。反応混合物を１夜静置し、ついで水で希釈
し、エタノールを留去した。５％NaHCO₃溶液を添加する
ことによってpHを８とし、反応混合物をAcOEt（４×50m
l）で抽出して、未反応の原料化合物を回収した。クエ
ン酸を添加することによって水溶液をpH3とし、AcOEt
（６×50ml）で抽出した。有機抽出フラクションを併わ
せ、pH6となるまで水で洗浄し、濃縮乾固して標記化合
物を無色油状物（1.6g,88％）として得た。質量及びNMR
スペクトルは予想した構造と一致した。

ｄ） Ｎ^α−ベンジルオキシカルボニル−N^G−（2,3,6
−トリメチル−４−メトキシフェニル）スルホニル−Ｌ
−アルギニン第３級ブチルエステル（Ｚ−Arg（N^G−Mt
r）−OBu^t） 窒素雰囲気下、−５℃に冷却した第３級ブチルアルコ
ール（100ml）中にＮ^α−ベンジルオキシカルボニル−N
^G−（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニル）スル
ホニル−Ｌ−アルギニン（3.6g,7ミリモル）及びピリジ
ン（6.94ml,86ミリモル）を含有する溶液に、POCl₃（7.
06ml,77ミリモル）を添加した。反応混合物を室温にて
１夜静置し、酢酸エチル／水混合物（1/1）で希釈し
た。有機相を分離し、まず５％NaHCO₃水溶液（16×100m
l）で洗浄し、ついで中性pHとなるまで水で洗浄した。
有機相をMgSO₄で乾燥し、溶媒を留去して、Ｎ^α−ベン
ジルオキシカルボニル−N^G−（2,3,6−トリメチル−４
−メトキシフェニル）スルホニル−Ｌ−アルギニン第３
級ブチルエステル（1g,25％）を得た。

ｅ） N^G−（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニ
ル）スルホニル−Ｌ−アルギニン第３級ブチルエステル
（Ｈ−Arg（N^G−Mtr）−OBu^t） 前記工程ｂ）と実質的に同様にして、ただし前記工程
ｄ）で得られた化合物を原料として操作を行ない、N^G−
（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニル）−スル
ホニル−Ｌ−アルギニン第３級ブチルエステル（612mg,
81％）を白色の泡状物として得た。▲〔α〕²⁰ _D▼＝−
0.84°（ｃ＝1.18％CH₂Cl₂） ｆ） 〔（2R,S）−２−エトキシカルボニル−６−第３
級ブトキシカルボニルアミノ〕ヘキサノイル−Ｌ−プロ
リンベンジルエステル（EtO−（R,S）mLys（Ｎ^ε−Bo
c）−Ｌ−Pro−OBz） 前記工程ｃ）で得られた化合物（0.6g,1.98ミリモ
ル）をCH₂Cl₂（40ml）に溶解し、これにHOBT（0.325g,
2.4ミリモル）のDMF（2ml）−CH₂Cl₂（3ml）溶液を添加
した。反応混合物を０℃に冷却し、この温度において、
DCCI（0.495g,2.4ミリモル）のCH₂Cl₂（5ml）溶液を添
加した。反応混合物を０℃で30分間、ついで室温でさら
に20分間撹拌した。このようにして調製した活性化エス
テルを、プロリンベンジルエステル塩酸塩（0.532g,2.2
ミリモル）のCH₂Cl₂（60ml）溶液を収容する反応フラス
コに直接過し、これに塩酸の除去に必要なNMM（0.242
ml,2.2ミリモル）を添加した。混合物を室温で１夜撹拌
し、ついで溶媒を留去し、油状残渣を少量のAcOEtで抽
出し、25℃に１時間維持した。過により沈殿物を除去
し、液を少量のAcOEtで希釈し、５％NaHCO₃水溶液
（５×100ml）、５％クエン酸水溶液（３×50ml）で洗
浄し、最後にpH6−6.5となるまで水で洗浄した。有機相
をMgSO₄で乾燥し、ついで減圧下、濃縮乾固して〔（2R,
S）−２−エトキシカルボニル−６−第３級ブトキシカ
ルボニルアミノ〕ヘキサノイル−Ｌ−プロリンベンジル
エステルを黄色油状物（0.88g,90％）として得た。質量
及びNMRスペクトルによって構造を確認した。

ｇ） 〔（2R,S）−２−エトキシカルボニル−６−（第
３級ブトキシカルボニルアミノ）〕ヘキサノイル−Ｌ−
プロリン（OEt−（R,S）mLys（Ｎ^ε−Boc）−Ｌ−Pro−
OH） 前記工程ｂ）と実質的に同じ操作法により、前記工程
ｆ）で得られた化合物の水素化分解を行ない、標記化合
物を得た。

このようにして得られた生成物（91％）は、▲〔α〕
²⁰ _D▼＝−38.18°（ｃ＝1.32％CH₂Cl₂）を有する。

ｈ） 〔（2R,S）−２−エトキシカルボニル−６−（第
３級ブトキシカルボニルアミノ）〕ヘキサノイル−Ｌ−
プロリル−（N^G−2,3,6−トリメチル−４−メトキシフ
ェニルスルホニル）−Ｌ−アルギニン第３級ブチルエス
テル（EtO−（R,S）mLys（Ｎ^ε−Boc）−Ｌ−Pro−Ｌ−
Arg（N^G−Mtr）−OBu^t） HOBT（0.261g,1.93ミリモル）のCH₂Cl₂（3ml）−DMF
（0.5ml）溶液を、前記工程ｇ）で得られた化合物（0.6
6g,1.64ミリモル）のCH₂Cl₂（50ml）溶液に添加し、得
られた混合物を０℃に冷却し、これにDCCI（0.398g,1.9
3ミリモル）を添加した。ついで、反応混合物を０℃で3
0分間、室温でさらに20分間撹拌した。このようにして
得られた活性化エステルを、前記工程ｅ）の化合物（0.
590g,1.3ミリモル）のCH₂Cl₂（60ml）溶液を収容する反
応フラスコに直接過した。反応終了後（反応の進行は
TLCによって用意に監視される）、溶媒を留去し、残渣
を少量のAcOEtで抽出し、−25℃に１時間冷却した。
過によって沈殿物を除去し、液をAcOEt（100ml）で希
釈し、５％NaHCO₃水溶液（４×100ml）、飽和NaCl溶液
で洗浄し、最後に中性pHとなるまで水で洗浄した。有機
溶液をMgSO₄で乾燥し、溶媒を減圧下で留去して、所望
の化合物（0.857g,80％）を黄色の油状物として得た。

ｉ） 〔（2R,S）−２−カルボキシ−６−（第３級ブト
キシカルボニルアミノ）〕ヘキサノイル−Ｌ−プロリル
〔N^G−（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニル）
スルホニル〕−Ｌ−アルギニン第３級ブチルエステル
（HO−（R,S）mLys（Ｎ^ε−Boc）−Ｌ−Pro−Ｌ−Arg
（N^G−Mtr）−OBu^t） ０℃に冷却した無水エタノール（10ml）中に前記工程
で得られた化合物（0.857g,1.04ミリモル）を含有する
溶液に、撹拌しながら、1M KOHの無水エタノール溶液
（2ml,2ミリモル）を添加し、反応混合物を１夜撹拌し
た。ついで、混合物を水で希釈し、エタノールを留去
し、クエン酸を添加してpHを３とした。酸性混合物をAc
OEt（４×60ml）で抽出し、有機抽出フラクションを併
わせ、飽和NaCl水溶液で洗浄し、ついで中性pHとなるま
で水で洗浄し、有機相をMgSO₄で乾燥し、有機溶媒を留
去して、〔（2R,S）−２−カルボニル−６−（第３級ブ
トキシカルボニルアミノ）〕ヘキサノイル−Ｌ−プロリ
ル〔N^G−（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニ
ル）スルホニル〕−Ｌ−アルギニン第３級ブチルエステ
ル（1.03g）を得た。

ｊ） ｛（2R,S）−２−〔Ｎ−（１−カルバミル−２−
第３級ブトキシプロピル）−カルバミル〕−６−第３級
ブトキシカルボニルアミノ｝ヘキサノイル−Ｌ−プロリ
ル−〔N^G−（2,3,6−トリメチル−４−メトキシフェニ
ル）スルホニル〕−Ｌ−アルギニン第３級ブチルエステ
ル（H₂N−Ｄ−Thr（Bu^t）−（R,S）mLys（Ｎ^ε−Boc）
−Ｌ−Pro−Ｌ−Arg（N^G−Mtr）−OBu^t） CH₂Cl₂（30ml）中に前記工程で得られた化合物（1.03
g,1.3ミリモル）を含有する溶液（過したもの）に、H
OBT（0.194g,1.43ミリモル）のDMF（1ml）−CH₂Cl₂（2m
l）溶液を添加した。ついで、反応混合物を０℃に冷却
し、DCCI（0.268g,1.3ミリモル）を添加した。混合物を
０℃で30分間、室温で20分間撹拌した。かかる混合物
を、CH₂Cl₂（30ml）中に前記工程ｂ）で得られた化合物
（0.333g,1.9ミリモル）を含有する溶液を収容する反応
容器に直接過し、１夜撹拌した。溶媒を留去して乾固
し、残渣をTHF（10ml）で抽出し、溶液を−17℃に２時
間冷却した。沈殿したDCUを過により除去し、溶液を
乾固させ、透明な淡黄色の油状物を得た。これをAcOEt
（6ml）に溶解し、５％NaHCO₃水溶液（４×100ml）、５
％クエン酸水溶液で洗浄し、ついで中性pHとなるまで水
で洗浄した。有機相をMgSO₄で乾燥し、溶媒を留去し
て、白色の泡状物（1.25g）を得た。この生成物を、シ
リカカラムを使用し、60％ｎ−ヘキサン／アセトンで溶
出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製し
た。このようにして得られた生成物を凍結乾燥し、次工
程にそのままで使用した。

ｋ） ｛（2R,S）−２−〔Ｎ−（１−カルバミル−２−
ヒドロキシプロピル）カルバミル〕−６−アミノ｝ヘキ
サノイル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニン（H₂N−Ｄ−T
hr（R,S）mLys−Ｌ−Pro−Ｌ−Arg−OH） 前記工程で得られた化合物を、６％チオアニソールを
含有するTFA（20ml）に溶解させ、このようにして得ら
れた溶液を室温で４時間撹拌した。ついで、混合物中に
窒素流を通ずることによってTFA及びチオアニソールを
留去し、残渣をCH₃CNで抽出し、減圧下で濃縮乾固し
た。残渣を、CH₃CN数滴を含有する水で再び抽出した。E
t₂O（２×30ml）で洗浄し、水相からEt₂Oを留去し、つ
いで凍結乾燥させた。

このようにして得られた粗生成物をCH₃COONH₄２×10
^-2M／CH₃CN0.5％で溶出するカラムクロマトグラフィー
によって精製した。

ｌ） ｛（2R,S）−２−〔Ｎ−（１−アミノ−２−ヒド
ロキシプロピル）カルバミル〕−６−アミノ｝ヘキサノ
イル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニン（gThr−（R,S）m
Lys−Ｌ−Pro−Ｌ−Arg−OH） 前記工程で得られた化合物（0.02ミリモル）のDMF溶
液をTIB（0.024ミリモル）のDMF/H₂O（4/1）（10ml）溶
液に添加し、得られた混合物を窒素流中20℃に16時間維
持した。ついで、DMFを除去し、水相を凍結乾燥させ
た。このようにして得られた生成物を、Lichroprep RP
−18カラム（40g）において、まずH₂O/TFA1％／CH₃CN３
％（540ml）により、ついでH₂O/TFA1％／CH₃CN75％（36
0ml）によって溶出する逆転相クロマトグラフィー処理
し、溶出されたフラクションをHPLCでチェックすること
によって精製した。所望の生成物のみを含有するフラク
ションを併わせた。これから得られた生成物（TLC及びH
PLC分析の結果から明らかなように単一の生成物であ
る）は、下記のアミノ酸組成を有していた（118℃,18時
間での酸加水分解の場合）。

Thr Pro Arg / 1.01 1.00 上記実施例に記載の方法と実質的に同様に操作して、
又は実施例の記載以前の説明の部分で述べた一般的方法
に従って操作して、一般式II及びIIIで表される相当す
る化合物を原料として反応を行なうことにより下記の化
合物が得られた。

gThr−（R,S）mArg−Pro−Arg−OH gThr−（Ｓ）mArg−Pro−Arg−OH gThr−（Ｓ）mArg−Pro−Arg−OMe gThr−（Ｓ）mLys−Pro−Arg−ONa gMet−（R,S）mLys−Pro−Arg−OH gMet−（Ｓ）mLys−Pro−Arg−OH gLeu−（Ｓ）mLys−Pro−Arg−OH For−gLeu−（Ｓ）mLys−Pro−Arg−ONa For−gThr−（Ｓ）mLys−Pro−Arg−OH

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＺ Ｃ０７Ｋ 1/06 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＺ (72)発明者 アントネルロ・ペッシ イタリー国ローマ市ビア・マッサチュッコ リ 19 (72)発明者 フランコ・カルディナーリ イタリー国オスチアリード市 ビア・ルベ ーガ 18 (72)発明者 ディアナ・ボラッキ イタリー国カステルヌオボ・ベラルデンガ 市 ピアネルラ，キエーザ・サン・レオナ ルド・ア・カチニャーノ（番地なし) (72)発明者 ステファーノ・チェンジーニ イタリー国セッレ・ディ・ラポラーノ市 ビア・デラ・トルレー ７ (72)発明者 ロマーノ・ディトラパーニ イタリー国モンテロトンド市 ビア・コル シカ 28

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式Ｉ （式中、Ｒはトレオニン、メチオニン又はロイシンの側
   鎖であり、R¹はリシン又はアルギニンの側鎖であり、R²
   は水素原子又は代謝反応において活性なアシル基であ
   る）で表される部分的にレトロ逆転されたタフトシン類
   似体及び薬物学的に許容される相当する塩、エステル及
   びアミド。
2. 【請求項２】R²が水素である、特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。
3. 【請求項３】R¹がリシンの側鎖である、特許請求の範囲
   第２項記載の化合物。
4. 【請求項４】Ｒがトレオニンの側鎖である、特許請求の
   範囲第３項記載の化合物。
5. 【請求項５】｛２−［Ｎ−（１−アミノ−２−ヒドロキ
   シプロピル）カルバミル］−６−アミノ｝ヘキサノイル
   −プロリル−アルギニンである、特許請求の範囲第４項
   記載の化合物。
6. 【請求項６】一般式Ｉ （式中、Ｒはトレオニン、メチオニン又はロイシンの側
   鎖であり、R¹はリシン又はアルギニンの側鎖であり、R²
   は水素原子又は代謝反応において活性なアシル基であ
   る）で表される部分的にレトロ逆転されたタフトシン類
   似体及び薬物学的に許容される相当する塩、エステル及
   びアミドの製法において、一般式II （式中、R¹′はアミノ基又はグアニジノ基がそれぞれ適
   当に保護されたリシン又はアルギニンの側鎖であり、Ｐ
   は容易に除去されるカルボキシル保護基であり、Ｐ′は
   容易に除去されるグアニジノ保護基である）で表される
   マロン酸誘導体と、一般式III （式中、Ｒ′は必要により官能基が適当に保護されたト
   レオニン、メチオニン又はロイシンの側鎖である）で表
   されるアミドとを、カップリング剤の存在下で縮合さ
   せ、これにより得られた一般式IV （式中、Ｒ′、R¹′、Ｐ及びＰ′は前記と同意義であ
   る）で表される化合物を（1,1−ビス−トリフルオロア
   セトキシ）ヨードベンゼンと反応させて末端アミド基を
   第１級アミノ基に変換し、必要であれば末端アミノ官能
   基を代謝反応において活性なアシル基でアシル化し、保
   護基を除去し、必要であれば、このようにして得られた
   前記一般式Ｉの化合物を薬物学的に許容される相当する
   塩、エステル及びアミドに変換させることを特徴とす
   る、部分的にレトロ逆転されたタフトシン類似体等の製
   法。
7. 【請求項７】特許請求の範囲第６項記載の製法におい
   て、前記一般式ＩにおけるR²が水素である化合物の製造
   に当たり、一般式II （式中、R¹′はアミノ基又はグアニジノ基がそれぞれ適
   当に保護されたリシン又はアルギニンの側鎖であり、Ｐ
   は容易に除去されるカルボキシル保護基であり、Ｐ′は
   容易に除去されるグアニジノ保護基である）で表される
   マロン酸誘導体と、一般式III （式中、Ｒ′は必要により官能基が適当に保護されたト
   レオニン、メチオニン又はロイシンの側鎖である）で表
   されるアミドとを、カップリング剤の存在下で縮合さ
   せ、これにより得られた化合物を（1,1−ビス−トリフ
   ルオロアセトキシ）ヨードベンゼンと反応させ、必要で
   あれば、このようにして得られたR²が水素である前記一
   般式Ｉの化合物を薬物学的に許容される相当する塩、エ
   ステル及びアミドに変換させる、化合物の製法。
8. 【請求項８】一般式Ｉ （式中、Ｒはトレオニン、メチオニン又はロイシンの側
   鎖であり、R¹はリシン又はアルギニンの側鎖であり、R²
   は水素原子又は代謝反応において活性なアシル基であ
   る）で表される部分的にレトロ逆転されたタフトシン類
   似体及び薬物学的に許容される相当する塩、エステル及
   びアミドを、単独で又は薬物学的に許容されるキャリヤ
   ーと組合せて、免疫促進に有効な量で含有してなる医薬
   組成物。
9. 【請求項９】一般式IV （式中、Ｒ′，R¹′、Ｐ及びＰ′は特許請求の範囲第６
   項と同様である）で表される化合物及び保護基が除去さ
   れた相当する誘導体。
10. 【請求項１０】｛２−［Ｎ−（１−カルバミル−２−ヒ
    ドロキシプロピル）カルバミル］−６−アミノ｝ヘキサ
    ノイル−Ｌ−プロピル−Ｌ−アルギニンである、特許請
    求の範囲第９項記載の化合物。