JPH08301786A - Preparation for preventing and treating absorption bone disease - Google Patents
Preparation for preventing and treating absorption bone diseaseInfo
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- JPH08301786A JPH08301786A JP7113233A JP11323395A JPH08301786A JP H08301786 A JPH08301786 A JP H08301786A JP 7113233 A JP7113233 A JP 7113233A JP 11323395 A JP11323395 A JP 11323395A JP H08301786 A JPH08301786 A JP H08301786A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は活性化プロテインＣ（以
下、ＡＰＣと略す）および／またはプロティンＣ（以
下、ＰＣと略す）を有効成分とすることを特徴とする骨
粗鬆症、悪性腫瘍等による高カルシウム血症または骨ペ
ージェット病等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、および
骨吸収抑制剤に関する。FIELD OF THE INVENTION The present invention is characterized by containing activated protein C (hereinafter abbreviated as APC) and / or protein C (hereinafter abbreviated as PC) as active ingredients. The present invention relates to a prophylactic / therapeutic agent for absorbable bone diseases such as calcemia or Paget's disease of bone and a bone resorption inhibitor.
【０００２】[0002]
【従来の技術】骨組織は、絶えず代謝回転を続けてお
り、既存骨の一部は破骨細胞により吸収され、一方で
は、骨芽細胞により新生骨が形成されている。骨の形
態、骨量は、この骨代謝回転により維持されている。骨
量は、骨を吸収する破骨細胞群と骨を形成する骨芽細胞
群の機能的総和により決定される（吉川秀樹ら、日本臨
床、５２、２２６２−２２６７、１９９４）。2. Description of the Related Art Bone tissue is constantly undergoing turnover, and a part of existing bone is absorbed by osteoclasts, while osteoblasts form new bone. Bone morphology and bone mass are maintained by this bone turnover. Bone mass is determined by the functional sum of the osteoclast group that absorbs bone and the osteoblast group that forms bone (Hideki Yoshikawa, et al., 52 , 2262-2267, 1994, Japan Clinic).
【０００３】吸収性骨疾患とは、破骨細胞群による骨吸
収量が骨芽細胞群による骨形成量より大となり、結果と
して骨量の減少が生じる疾患である。吸収性骨疾患には
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病があ
る。骨粗鬆症には、退行期骨粗鬆症と続発性骨粗鬆症が
あり、さらに退行性骨粗鬆症は閉経後あるいは卵巣摘出
後に認められるＩ型骨粗鬆症と、老人に認められるII型
骨粗鬆症がある。続発性骨粗鬆症とは、原因が明らかな
骨粗鬆症であり、慢性関節リュウマチ、ステロイド療
法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下症、副甲状腺機能
亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシング症候群、ター
ナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切除、腎不全、腎透
析、骨形成不全症、低アルカリフォスファターゼ血症、
ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制限、寝たきり、ア
ルコール中毒、宇宙飛行などが原因となる。また、原因
が明らかでない特発性若年性骨粗鬆症もある。吸収性骨
疾患はその頻度の高さに加え身体各部の骨折を引き起こ
して、いわゆる「寝たきり老人」に至らしめる原因疾患
として、高齢化社会の進む現在、医療のみならず、社会
問題としても注目されている。The resorbable bone disease is a disease in which the amount of bone resorption by the osteoclast group becomes larger than the amount of bone formation by the osteoblast group, resulting in a decrease in bone mass. Resorbable bone diseases include osteoporosis, malignant hypercalcemia caused by myeloma and lymphoma, and Paget's disease of bone due to local bone resorption. Osteoporosis includes regressive osteoporosis and secondary osteoporosis. Degenerative osteoporosis includes type I osteoporosis observed after menopause or after ovariectomy and type II osteoporosis found in the elderly. Secondary osteoporosis is osteoporosis of which the cause is clear, and rheumatoid arthritis, steroid therapy, hyperthyroidism, hypogonadism, hyperparathyroidism, acromegaly, diabetes, Cushing's syndrome, Turner syndrome, immunity. Administration of inhibitors, gastrectomy, renal failure, renal dialysis, osteogenesis imperfecta, hypoalkaline phosphataseemia,
It can be caused by homocystinuria, malnutrition, restricted movement, bedridden, alcoholism, space flight. There are also idiopathic juvenile osteoporosis of unknown cause. Resorbable bone disease is not only a medical problem but also a social problem as the aging society advances as a causative disease that causes fractures of various parts of the body in addition to its high frequency and leads to so-called "bedridden elderly people". ing.
【０００４】破骨細胞群および骨芽細胞群は、その機能
の発現にあたって、さまざまなホルモンやサイトカイン
などの液性因子や細胞外基質蛋白による調節を受けてい
る。破骨細胞の分化や活性化を直接抑制する因子として
は、カルシトニン、プロスタグランジン、システインプ
ロテアーゼ阻害剤、Ｃ末端副甲状腺関連蛋白質などが知
られており、ビスホスホネート、イプリフラボンなどの
吸収性骨疾患治療剤の開発が進められている。The osteoclast group and the osteoblast group are regulated by their humoral factors such as various hormones and cytokines and extracellular matrix proteins in the expression of their functions. Calcitonin, prostaglandins, cysteine protease inhibitors, C-terminal parathyroid-related proteins and the like are known as factors that directly suppress the differentiation and activation of osteoclasts. Treatment of absorbable bone diseases such as bisphosphonate and ipriflavone The development of agents is underway.
【０００５】ＰＣは肝臓で生成されるビタミンＫ依存性
蛋白質で、血液凝固の制御因子として重要である。ＰＣ
は血液凝固の過程で生成されたトロンビンと血管内皮膜
上のトロンボモジュリンとの複合体によって活性化され
ＡＰＣとなる。生じたＡＰＣは血液凝固因子である活性
化第Ｖ因子および活性化第VIII因子を選択的に限定分解
し失活させることにより凝固カスケードを阻害する［マ
ーラー・アール（Ｍａｒｌａｒ Ｒ．）ら、ブラッド
（Ｂｌｏｏｄ）、５９、１０６７−１０７２、１９８
２、 ベハー・ジー・エー（Ｖｅｈａｒ Ｇ．Ａ．）
ら、バイオケミスロリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ）、１９、４０１〜４１０、１９８０］ことから、Ｐ
ＣおよびＡＰＣは抗凝固薬としての開発が行われてい
る。また、ＡＰＣでは抗炎症作用も報告されており（岡
嶋研二ら、第３２回日本臨床血液学会総会抄録集、ＷＳ
III−１０題、１９９０）その作用機序としては、ＡＰ
Ｃの白血球活性化抑制作用が示唆されている。また、血
管内皮細胞にはＡＰＣに対するレセプターが発現してい
ることも報告されている［フクドメ・ケー（Ｆｕｋｕｄ
ｏｍｅＫ．）ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカ
ル・ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、２６９、
２６４８６−２６４９１、１９９４］が、骨細胞での発
現は確認されていないし、骨組織に対して作用を有する
ことを記載した報告もない。PC is a vitamin K-dependent protein produced in the liver and is important as a regulator of blood coagulation. PC
Is activated by the complex of thrombin generated in the process of blood coagulation and thrombomodulin on the endovascular membrane to become APC. The resulting APC inhibits the coagulation cascade by selectively degrading and inactivating the blood coagulation factors, activated factor V and activated factor VIII [Marlar R. et al., Brad ( Blood), 59 , 1067-1072, 198.
2. Behar G.A.
, Biochemistry (Biochemistr
y), 19 , 401-410, 1980], P
C and APC are under development as anticoagulants. An anti-inflammatory effect was also reported in APC (Kenji Okajima et al., 32nd Annual Meeting of the Japanese Society of Clinical Hematology, WS, WS
III-10, 1990) The mechanism of action is AP
It has been suggested that C inhibits leukocyte activation. It has also been reported that a receptor for APC is expressed in vascular endothelial cells [Fukud.
omeK. ) Et al., The Journal of Biological Chemistry (The Journal of B
iological Chemistry), 269 ,
26486-26491, 1994], its expression in bone cells has not been confirmed, and there is no report that it has an effect on bone tissue.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】これまで、骨粗鬆症等
の吸収性骨疾患の治療には、女性ホルモンの一つであり
骨形成を促進するエストロゲン、骨量減少を改善する活
性型ビタミンＤ3 、補充療法として用いられるカルシウ
ム剤、甲状腺から分泌されるペプチドホルモンで血清の
Ｃａ低下作用を有するカルシトニン、カルシトニンの誘
導体であるエルカトニン、エストロゲンの作用を増強す
るイプリフラボン等が用いられている。しかしながら、
エストロゲンでは子宮出血や、長期投与により血栓症や
癌の発症が報告されており、血栓症および乳癌や子宮癌
などのエストロゲン依存性腫瘍の疑いのある患者には禁
忌とされている。また、活性型ビタミンＤ3 、カルシト
ニン、エルカトニン、イプリフラボンでは悪心、嘔吐等
の胃腸障害、ショック症状、過敏症等の副作用が報告さ
れており、その効果は必ずしも満足のいくものではな
い。骨粗鬆症は治療期間の長い疾患であることからも、
副作用が軽度な、安全な治療薬を開発することは重要な
課題である。So far, for the treatment of absorbable bone diseases such as osteoporosis, estrogen, which is one of the female hormones and which promotes bone formation, active vitamin D 3 , which improves bone loss, Calcium agents used as replacement therapy, calcitonin which is a peptide hormone secreted by the thyroid gland and has a serum Ca lowering effect, elcatonin which is a derivative of calcitonin, and ipriflavone which enhances the action of estrogen are used. However,
Estrogen has been reported to cause uterine bleeding and thrombosis and cancer development after long-term administration, and is contraindicated in patients suspected of having thrombosis and estrogen-dependent tumors such as breast cancer and uterine cancer. In addition, side effects such as gastrointestinal disorders such as nausea and vomiting, shock symptoms, and hypersensitivity have been reported for active vitamin D 3 , calcitonin, elcatonin, and ipriflavone, and their effects are not always satisfactory. Because osteoporosis is a long-term disease,
The development of safe therapeutic drugs with mild side effects is an important issue.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明者は、ＡＰＣの各
種細胞に対する生理作用に関する研究を行っている途
上、ＡＰＣが骨細胞に作用し、骨吸収を抑制することを
見いだし、さらに鋭意研究を重ねて本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventor discovered that APC acts on bone cells and suppresses bone resorption, while conducting research on physiological effects of APC on various cells. The present invention has been completed again.
【０００８】以下に本発明を詳細に説明する。本発明の
第一の態様は、ＡＰＣおよび／またはＰＣを有効成分と
して含有することを特徴とする吸収性骨疾患予防・治療
剤である。吸収性骨疾患には、骨粗鬆症、骨髄腫やリン
パ腫が原因でおこる悪性高カルシウム血症、局所性骨吸
収による骨ページェット病が含まれる。The present invention will be described in detail below. A first aspect of the present invention is a preventive / therapeutic agent for resorbable bone disease, which comprises APC and / or PC as an active ingredient. Resorbable bone diseases include osteoporosis, malignant hypercalcemia caused by myeloma and lymphoma, and Paget's disease of bone due to local bone resorption.
【０００９】本発明の第二の態様は、ＡＰＣおよび／ま
たはＰＣを有効成分とすることを特徴とする骨粗鬆症予
防・治療剤である。骨粗鬆症には、退行性骨粗鬆症、続
発性骨粗鬆症および特発性若年性骨粗鬆症が含まれる。
さらに、退行性骨粗鬆症には閉経後あるいは卵巣摘出後
に認められるＩ型骨粗鬆症と、老人に認められるII型骨
粗鬆症が含まれ、また、続発性骨粗鬆症の原因としては
慢性関節リュウマチ、ステロイド療法、甲状腺機能亢進
症、性腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、末端肥大
症、糖尿病、クッシング症候群、ターナー症候群、免疫
抑制剤の投与、胃切除、腎不全、腎透析、骨形成不全
症、低アルカリフォスファターゼ血症、ホモシスチン尿
症、栄養障害、運動制限、寝たきり、アルコール中毒、
宇宙飛行などが挙げられる。The second aspect of the present invention is a prophylactic / therapeutic agent for osteoporosis, which comprises APC and / or PC as an active ingredient. Osteoporosis includes degenerative osteoporosis, secondary osteoporosis and idiopathic juvenile osteoporosis.
In addition, degenerative osteoporosis includes type I osteoporosis found after menopause or ovariectomy and type II osteoporosis found in the elderly. The causes of secondary osteoporosis are rheumatoid arthritis, steroid therapy, and hyperthyroidism. , Hypogonadism, hyperparathyroidism, acromegaly, diabetes, Cushing's syndrome, Turner's syndrome, immunosuppressant administration, gastrectomy, renal failure, renal dialysis, osteogenesis imperfecta, hypoalkaline phosphataseemia , Homocystinuria, malnutrition, restricted movement, bedridden, alcoholism,
Space flight etc. are mentioned.
【００１０】本発明の第三の態様は、ＡＰＣおよび／ま
たはＰＣを有効成分とすることを特徴とする骨吸収抑制
剤である。骨折後の治癒促進、疲労骨折の予防・治療あ
るいは骨移植の生着率上昇に有用性が期待される。ま
た、研究用試薬としても有用である。A third aspect of the present invention is a bone resorption inhibitor characterized by containing APC and / or PC as an active ingredient. It is expected to be useful for promoting healing after fractures, preventing and treating fatigue fractures, and increasing the survival rate of bone grafts. It is also useful as a research reagent.
【００１１】本発明に用いるＡＰＣは、血液凝固カスケ
ードにおける活性化第Ｖ因子および活性化第VIII因子を
選択的に限定分解し失活させる性質を有する蛋白質であ
る。また、生体内でトロンビン−トロンボモジュリン複
合体によりＡＰＣに変換されるＰＣも本発明の予防・治
療剤においてはＡＰＣと同様の効果が期待される。従っ
て、ＡＰＣおよび／またはＰＣは、天然型あるいは遺伝
子工学的に産生されたいずれでも良く、遺伝子工学手法
により得られる改変型であってもよい。医薬品とする場
合、好ましくはヒト由来のＡＰＣおよび／またはＰＣが
望まれる。更に好ましくはヒト由来のＡＰＣが望まれ
る。このようなＰＣは、天然型については、キシール・
ダブリュー（Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ）の方法［ジャーナル
オブ クリニカル インベスティゲーション（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａ
ｔｉｏｎ）、６４、７６１−７６９、１９７９］等によ
りヒト血漿から製造されたＰＣ、遺伝子組換え型につい
ては特開昭６１−２０５４８７号公報、特開昭６２−１
１１６９０号公報等に開示されているＰＣ、およびＥＰ
４４３８７５号公報、特開平４−２１１３８０号公報等
に開示されているＰＣ誘導体があげられる。また、ＰＣ
を活性化する方法には特に制約はないが、例えば、トロ
ンビンにより活性化する方法［キシール・ダブリュー
（Ｋｉｓｉｅｌ、Ｗ）、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１６、５８２４−５８３１、１９
７７］、固定化したトロンビンにより活性化する方法
（特開平３−９３７９９号公報）により実施できる。ま
た、蛇毒あるいは合成ペプチドにより活性化する方法等
により実施することもできる。The APC used in the present invention is a protein having the property of selectively degrading and inactivating activated factor V and activated factor VIII in the blood coagulation cascade. Further, PC which is converted into APC by a thrombin-thrombomodulin complex in vivo is expected to have the same effect as APC in the prophylactic / therapeutic agent of the present invention. Therefore, APC and / or PC may be either natural type or produced by genetic engineering, or may be modified type obtained by genetic engineering technique. In the case of a pharmaceutical product, preferably human-derived APC and / or PC is desired. More preferably, human-derived APC is desired. For such a PC, the natural type is
W (Kisiel, W) Method [Journal
Of Clinical Investigation (Jour
nal of Clinical Investiga
, 64 , 761-769, 1979] and the like, for the PC and gene recombinant type produced from human plasma, JP-A-61-2205487 and JP-A-62-1.
PC and EP disclosed in Japanese Patent No. 11690, etc.
Examples thereof include PC derivatives disclosed in Japanese Laid-Open Patent Publication No. 443875 and Japanese Laid-Open Patent Publication No. 4-212380. Also, PC
There is no particular limitation on the method for activating the protein, but for example, the method for activating with thrombin [Kisiel W, Biochemistry (Bioc)
Chemistry), 16 , 5824-5831, 19
77], and activation by immobilized thrombin (Japanese Patent Laid-Open No. 3-93799). It can also be carried out by a method of activation with a snake venom or a synthetic peptide.
【００１２】ＡＰＣは、天然型については、例えば、ヒ
ト血漿から製造された凍結乾燥品であるプロテインＣ，
アクチベーテッド，ヒューマン（ＰｒｏｔｅｉｎＣ，Ａ
ｃｔｉｖａｔｅｄ，Ｈｕｍａｎ）（セルビオ ラボラト
リー（Ｓｅｒｂｉｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）社）ある
いはピュアリファイド ＡＰＣ（ＰｕｒｉｆｉｅｄＡＰ
Ｃ）（ダイアグノスティカ スタゴ（Ｄｉａｇｎｏｓｔ
ｉｃａ Ｓｔａｇｏ）社）が市販されている。遺伝子組
換え型については、特開昭６２−１１１６９０号公報に
開示されている活性化プロティンＣ、あるいは、特開平
３−７２８７７号公報に開示されている活性化ヒトプロ
テインＣ誘導体があげられる。APC is a lyophilized product of protein A, which is a lyophilized product produced from human plasma.
Activated, Human (Protein C, A
activated (Human) (Serbio Laboratory) or Pure APC (Purified AP)
C) (Diagnostica Stago (Diagnostic)
ica Stago)) is commercially available. Examples of the gene recombinant type include activated protein C disclosed in JP-A-62-111690 or activated human protein C derivative disclosed in JP-A-3-72877.
【００１３】ＡＰＣおよび／またはＰＣは現在臨床開発
中の抗凝固薬であり、ヘパリンに付随するような出血傾
向などの副作用も少なく、医薬品としての安全性が高い
ことが期待されている。実際、ヒト血液由来ＡＰＣは、
マウスでの単回静脈内投与毒性試験、一般薬理試験、ウ
イルス不活性化試験等によりその安全性が確認されてい
る（特開平６−１８３９９６号公報、青木久美子ら、応
用薬理、４８、２３９−２５０、１９９４）。また、ヘ
パリンおよび低分子ヘパリンでは、その投与により骨量
が減少することが知られている（西山雅彦ら、第６８回
日本薬理学会年会抄録集、Ｐ2２９３題、１９９５）。
一方、本発明に用いるＡＰＣおよび／またはＰＣは骨吸
収を抑制することから、ＡＰＣおよび／またはＰＣはヘ
パリンおよび低分子ヘパリンとは異なり、骨密度を高め
る作用を有する抗凝固薬である。APC and / or PC are anticoagulants currently under clinical development, and there are few side effects such as bleeding tendency associated with heparin, and they are expected to be highly safe as pharmaceuticals. In fact, human blood-derived APC
Its safety has been confirmed by a single intravenous toxicity test in mice, a general pharmacological test, a virus inactivation test, etc. (JP-A-6-183996, Kumiko Aoki et al., Applied Pharmacology, 48 , 239-. 250, 1994). Further, it is known that administration of heparin and low molecular weight heparin reduces bone mass (Masahiko Nishiyama et al., Abstracts of the 68th Annual Meeting of the Japanese Pharmacological Society, P 2 293, 1995).
On the other hand, since APC and / or PC used in the present invention suppress bone resorption, APC and / or PC are anticoagulants having an action of increasing bone density, unlike heparin and low molecular weight heparin.
【００１４】本発明に用いるＡＰＣおよび／またはＰＣ
は、骨吸収抑制作用を有する。従って、種々の吸収性骨
疾患、例えば、骨粗鬆症、骨ページェット病または悪性
腫瘍等に付随する高カルシウム血症などの予防・治療剤
として使用することができる。また、慢性関節リュウマ
チを中心に膠原病では骨の粗鬆化が進行している。従っ
て、種々の膠原病、たとえば慢性関節リュウマチにおけ
る骨破壊、あるいはステロイド療法の副作用の一つであ
る骨量の減少を予防・治療または改善する目的で使用す
ることができ、さらにはこれらの疾患の治療促進が期待
される。さらに、本発明に用いるＡＰＣおよび／または
ＰＣは骨吸収を抑制することから、各部位の骨折後の治
癒の促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨移植の生着
率を上げることが期待される。APC and / or PC used in the present invention
Has an effect of suppressing bone resorption. Therefore, it can be used as a prophylactic / therapeutic agent for various absorbable bone diseases such as hypercalcemia associated with osteoporosis, Paget's disease of bone, malignant tumor and the like. Further, in collagen disease, mainly in rheumatoid arthritis, the bone is becoming coarse. Therefore, it can be used for the purpose of preventing, treating or ameliorating various collagen diseases such as bone destruction in rheumatoid arthritis or bone loss, which is one of the side effects of steroid therapy. Expected to accelerate treatment. Furthermore, since APC and / or PC used in the present invention suppress bone resorption, it is expected to promote healing after fracture of each site, prevention / treatment of fatigue fracture, or increase the survival rate of bone transplantation. .
【００１５】本発明の製剤は有効成分としてＡＰＣおよ
び／またはＰＣを含有していれば良く、公知のいかなる
製剤学的製造法によっても製造することができる。当該
ＡＰＣおよび／またはＰＣは、薬剤として一般的に用い
られる適当な担体または、媒体、例えば滅菌水や生理食
塩水、植物油、鉱油、高級アルコール、高級脂肪酸、無
害性有機溶媒等、さらには必要に応じて賦形剤、着色
剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、溶解補助剤、吸着防
止剤、安定化剤、保存剤、保湿剤、酸化防止剤、緩衝
剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜組合わせて、生体に効
果的に投与するのに適した注射剤、経鼻吸収剤、経口
剤、埋め込み製剤等の医薬品製剤、好ましくは注射剤に
調製することができ、これらの具体例のいくつかについ
ては公知である。注射剤の製剤としては、例えば凍結乾
燥品や、注射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに封入した
形等で提供できる。また、徐放性製剤として、マイクロ
カプセル、マイクロスフェアー、リポソームあるいはナ
ノスフェアーに内包した形態あるいは高分子基剤含有製
剤として投与することもできる。The formulation of the present invention need only contain APC and / or PC as an active ingredient, and can be produced by any known pharmaceutical production method. The APC and / or PC is a suitable carrier or medium generally used as a drug, for example, sterile water or physiological saline, vegetable oil, mineral oil, higher alcohol, higher fatty acid, harmless organic solvent, etc. Excipients, colorants, emulsifiers, suspensions, surfactants, solubilizers, anti-adsorption agents, stabilizers, preservatives, humectants, antioxidants, buffers, isotonic agents, painless Injectables suitable for effective administration to living bodies, nasal absorption agents, oral agents, pharmaceutical preparations such as implantable preparations, preferably injectable preparations, can be prepared by appropriately combining them with agents and the like. Some specific examples of are known. The injection preparation can be provided, for example, as a freeze-dried product, a water solution for injection, or a form enclosed in an osmotic pump. In addition, as a sustained-release preparation, it can be administered in the form of being encapsulated in microcapsules, microspheres, liposomes or nanospheres or as a preparation containing a polymer base.
【００１６】本発明の製剤は、例えば静脈内注射、皮下
注射、筋肉内注射、関節内注射、経口投与等の方法によ
って、例えば、ＡＰＣおよび／またはＰＣ蛋白量として
一日約１〜２０００μｇ／ｋｇ、好ましくは、約１０〜
１０００μｇ／ｋｇとなる量を投与したり、埋め込み製
剤や浸透圧ポンプ等に封入し生体に留置することにより
連続的に投与することができる。The preparation of the present invention can be administered, for example, by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraarticular injection, oral administration, etc., for example, in the amount of APC and / or PC protein of about 1 to 2000 μg / kg per day. , Preferably about 10
The dose can be continuously administered by administering an amount of 1000 μg / kg, or by encapsulating in an implant preparation, an osmotic pump or the like and leaving it in the living body.
【００１７】（実験例）以下に本発明を詳細に説明する
ために実験例により効果を具体的に説明するが、本発明
はこれらによって、なんら限定されるものではない。(Experimental Example) The effect will be specifically described below with reference to an experimental example in order to explain the present invention in detail, but the present invention is not limited thereto.
【００１８】（実験例１：ヒト由来ＡＰＣによる骨吸収
に対する効果）軟部組織を除去したマウス脛骨および大
腿骨をα−ＭＥＭ培地中で細断し、さらにタッチミキサ
ーで撹拌した後、静置して得られた上清画分を破骨細胞
を含む全骨細胞として用いた。次にタカダ・ワイ（Ｔａ
ｋａｄａ Ｙ．）らの方法［ボーン アンド ミネラル
（Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ）、１７、３４７
−３５９、１９９２］に準じ、象牙の切片上での破骨細
胞による吸収窩形成に対する被検薬の阻害効果をしらべ
た。象牙を厚さ約１５０μｍ、直径６ｍｍの円形の象牙
片に調製し、５％ウシ胎児血清を含むα−ＭＥＭ培地の
入った９６穴プレート中でプレインキュベートした。象
牙片上に、破骨細胞を含む全骨細胞を加え３７℃にて２
時間インキュベートした後、非付着細胞を除去し、被検
薬を含むα−ＭＥＭ培地を添加し５日間培養した。な
お、培地は培養開始３日目に交換した。培養５日目に
０．２５Ｍアンモニア水を添加し反応を停止後、超音波
処理により象牙片上に付着した細胞を取り除いた。形成
された吸収窩の面積は酸性ヘマトキシリンで染色した
後、顕微鏡下で測定した。被検薬の効果は被検薬未添加
群と被検薬群の吸収窩の面積より阻害率として算出し
た。結果を図１および図２に示す。図１から明らかなよ
うに、ＡＰＣおよびエルカトニンは象牙片上の吸収窩形
成を用量依存的に抑制した。この象牙片上の吸収窩形成
は骨吸収の指標であり、エルカトニン等の吸収性骨疾患
に用いられている薬剤により抑制される。ゆえに、ＡＰ
Ｃは、吸収性骨疾患の予防・治療作用を有する好ましい
薬剤であると考えられる。(Experimental Example 1: Effect on bone resorption by human-derived APC) Mouse tibia and femur from which soft tissue was removed were shredded in α-MEM medium, further stirred with a touch mixer, and then allowed to stand. The obtained supernatant fraction was used as whole bone cells including osteoclasts. Next, Takada Wai (Ta
kada Y. ) Et al. [Bone and Mineral, 17 , 347.
359, 1992], the inhibitory effect of the test drug on the formation of resorption pits by osteoclasts on ivory slices was investigated. The ivory was prepared into a circular ivory piece having a thickness of about 150 μm and a diameter of 6 mm, and preincubated in a 96-well plate containing α-MEM medium containing 5% fetal bovine serum. Add all osteoclasts including osteoclasts onto the ivory pieces and incubate at 37 ° C for 2
After incubating for a period of time, non-adherent cells were removed, α-MEM medium containing the test drug was added, and the cells were cultured for 5 days. The medium was exchanged 3 days after the start of culture. On the 5th day of the culture, 0.25 M ammonia water was added to stop the reaction, and then the cells adhered on the dentin pieces were removed by ultrasonic treatment. The area of resorption pits formed was measured under a microscope after staining with acid hematoxylin. The effect of the test drug was calculated as the inhibition rate from the area of the resorption pits of the test drug-free group and the test drug group. The results are shown in FIGS. 1 and 2. As is clear from FIG. 1, APC and elcatonin suppressed the resorption pit formation on the ivory pieces in a dose-dependent manner. The formation of resorption pits on the ivory pieces is an index of bone resorption, and is suppressed by drugs used for resorbable bone diseases such as elcatonin. Therefore AP
C is considered to be a preferable drug having a preventive / therapeutic effect on absorbable bone disease.
【００１９】[0019]
【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をより具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto.
【００２０】（実施例１） ＡＰＣ １０ｍｇ 精製ゼラチン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。Example 1 APC 10 mg Purified gelatin 20 mg Sodium phosphate 34.8 mg Sodium chloride 81.8 mg Mannitol 25 mg The above ingredients were dissolved in 10 ml of distilled water for injection and sterile filtered, and 1.0 ml each was divided into sterile vials. It was poured and freeze-dried to prepare a formulation for injection.
【００２１】（実施例２） ＡＰＣ ５０ｍｇ アルブミン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。Example 2 APC 50 mg Albumin 20 mg Sodium Phosphate 34.8 mg Sodium Chloride 81.8 mg Mannitol 25 mg The above components were dissolved in 10 ml of distilled water for injection, sterile filtered, and 1.0 ml each was dispensed into a sterile vial. Then, the preparation for injection was prepared by freeze-drying.
【００２２】[0022]
【発明の効果】本発明のＡＰＣおよび／またはＰＣを有
効成分とする予防・治療剤は、骨吸収抑制作用を有す
る。従って、種々の骨吸収が亢進している疾患、たとえ
ば骨粗鬆症、悪性高カルシウム血症、骨ページェット病
および慢性関節リュウマチ等による骨減少等の吸収性骨
疾患の予防・治療剤、ならびに骨折後の治癒促進や研究
用試薬としての骨吸収抑制剤として用いることができ
る。また、本発明のＡＰＣおよび／またはＰＣは既存薬
に比べ副作用が少ないことが期待され、長期間の投与が
可能な安全な治療薬となりうる。さらに、本発明のＡＰ
Ｃおよび／またはＰＣは、ヘパリンや低分子ヘパリンに
よる治療に付随する出血傾向や骨量減少等の副作用が少
ないため、抗凝固剤や透析用剤として用いる際も安全性
の高いものである。INDUSTRIAL APPLICABILITY The prophylactic / therapeutic agent of the present invention containing APC and / or PC as an active ingredient has a bone resorption inhibitory action. Therefore, various preventive / therapeutic agents for resorbable bone diseases such as osteoporosis, malignant hypercalcemia, Paget's disease of bone and bone loss due to rheumatoid arthritis, etc., as well as various bone diseases after bone fracture, It can be used as a bone resorption inhibitor as a healing reagent or a research reagent. Further, the APC and / or PC of the present invention are expected to have fewer side effects than existing drugs, and can be a safe therapeutic drug that can be administered for a long period of time. Furthermore, the AP of the present invention
Since C and / or PC have few side effects such as bleeding tendency and bone loss associated with treatment with heparin or low molecular weight heparin, they are highly safe when used as anticoagulants or dialysis agents.
【図１】 本発明に用いるＡＰＣおよびエルカトニンの
象牙における吸収窩の形成を抑制する効果を示すグラフ
である。FIG. 1 is a graph showing the effects of APC and elcatonin used in the present invention for suppressing the formation of resorption cavities in ivory.
Claims (3)
ィンＣを有効成分とすることを特徴とする吸収性骨疾患
予防・治療剤。1. A preventive / therapeutic agent for resorbable bone diseases, which comprises activated protein C and / or protein C as an active ingredient.
１記載の予防・治療剤。2. The preventive / therapeutic agent according to claim 1, wherein the absorbable bone disease is osteoporosis.
ィンＣを有効成分とすることを特徴とする骨吸収抑制
剤。3. A bone resorption inhibitor comprising activated protein C and / or protein C as an active ingredient.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7113233A JPH08301786A (en) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | Preparation for preventing and treating absorption bone disease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7113233A JPH08301786A (en) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | Preparation for preventing and treating absorption bone disease |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08301786A true JPH08301786A (en) | 1996-11-19 |
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ID=14606947
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP7113233A Pending JPH08301786A (en) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | Preparation for preventing and treating absorption bone disease |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08301786A (en) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0875252A2 (en) * | 1997-04-28 | 1998-11-04 | Eli Lilly And Company | Activated protein C formulations |
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| US6630137B1 (en) | 1997-04-28 | 2003-10-07 | Eli Lilly And Company | Activated protein C formulations |
| EP1557463A1 (en) * | 1997-04-28 | 2005-07-27 | Eli Lilly & Company | Improved methods for processing activated protein C |
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| US7204981B2 (en) | 2000-03-28 | 2007-04-17 | Eli Lilly And Company | Methods of treating diseases with activated protein C |
-
1995
- 1995-05-11 JP JP7113233A patent/JPH08301786A/en active Pending
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| US6395270B1 (en) | 1997-04-28 | 2002-05-28 | Eli Lilly And Company | Activated protein C formulations |
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| US7638123B2 (en) | 2000-03-28 | 2009-12-29 | Eli Lilly And Company | Methods of treating diseases with activated protein C |
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