JPH08301783A - Preparation for preventing and treating absorption bone disease - Google Patents
Preparation for preventing and treating absorption bone diseaseInfo
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- JPH08301783A JPH08301783A JP7113232A JP11323295A JPH08301783A JP H08301783 A JPH08301783 A JP H08301783A JP 7113232 A JP7113232 A JP 7113232A JP 11323295 A JP11323295 A JP 11323295A JP H08301783 A JPH08301783 A JP H08301783A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明はトロンボモジュリン（以
下、ＴＭと略す）を有効成分とすることを特徴とする骨
粗鬆症、悪性腫瘍等による高カルシウム血症または骨ペ
ージェット病等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、および
骨吸収抑制剤に関する。The present invention relates to thrombomodulin (hereinafter abbreviated as TM) as an active ingredient for the treatment of osteoporosis, hypercalcemia due to malignant tumors or resorbable bone diseases such as Paget's disease of bone. The present invention relates to a preventive / therapeutic agent and a bone resorption inhibitor.
【０００２】[0002]
【従来の技術】骨組織は、絶えず代謝回転を続けてお
り、既存骨の一部は破骨細胞により吸収され、一方で
は、骨芽細胞により新生骨が形成されている。骨の形
態、骨量は、この骨代謝回転により維持されている。骨
量は、骨を吸収する破骨細胞群と骨を形成する骨芽細胞
群の機能的総和により決定される（吉川秀樹ら、日本臨
床、５２、２２６２−２２６７、１９９４）。2. Description of the Related Art Bone tissue is constantly undergoing turnover, and a part of existing bone is absorbed by osteoclasts, while osteoblasts form new bone. Bone morphology and bone mass are maintained by this bone turnover. Bone mass is determined by the functional sum of the osteoclast group that absorbs bone and the osteoblast group that forms bone (Hideki Yoshikawa, et al., 52 , 2262-2267, 1994, Japan Clinic).
【０００３】吸収性骨疾患とは、破骨細胞群による骨吸
収量が骨芽細胞群による骨形成量より大となり、結果と
して骨量の減少が生じる疾患である。吸収性骨疾患には
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病があ
る。骨粗鬆症には、退行期骨粗鬆症と続発性骨粗鬆症が
あり、さらに退行期骨粗鬆症は閉経後あるいは卵巣摘出
後に認められるＩ型骨粗鬆症と、老人に認められるII型
骨粗鬆症がある。続発性骨粗鬆症とは、原因が明らかな
骨粗鬆症であり、慢性関節リュウマチ、ステロイド療
法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下症、副甲状腺機能
亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシング症候群、ター
ナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切除、腎不全、腎透
析、骨形成不全症、低アルカリフォスファターゼ血症、
ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制限、寝たきり、ア
ルコール中毒、宇宙飛行などが原因となる。また、原因
が明らかでない特発性若年性骨粗鬆症もある。吸収性骨
疾患はその頻度の高さに加え身体各部の骨折を引き起こ
して、いわゆる「寝たきり老人」に至らしめる原因疾患
として、高齢化社会の進む現在、医療のみならず、社会
問題としても注目されている。The resorbable bone disease is a disease in which the amount of bone resorption by the osteoclast group becomes larger than the amount of bone formation by the osteoblast group, resulting in a decrease in bone mass. Resorbable bone diseases include osteoporosis, malignant hypercalcemia caused by myeloma and lymphoma, and Paget's disease of bone due to local bone resorption. Osteoporosis includes regressive osteoporosis and secondary osteoporosis. Further, regressive osteoporosis includes type I osteoporosis observed after menopause or after ovariectomy and type II osteoporosis found in the elderly. Secondary osteoporosis is osteoporosis of which the cause is clear, and rheumatoid arthritis, steroid therapy, hyperthyroidism, hypogonadism, hyperparathyroidism, acromegaly, diabetes, Cushing's syndrome, Turner syndrome, immunity. Administration of inhibitors, gastrectomy, renal failure, renal dialysis, osteogenesis imperfecta, hypoalkaline phosphataseemia,
It can be caused by homocystinuria, malnutrition, restricted movement, bedridden, alcoholism, space flight. There are also idiopathic juvenile osteoporosis of unknown cause. Resorbable bone disease is not only a medical problem but also a social problem as the aging society advances as a causative disease that causes fractures of various parts of the body in addition to its high frequency and leads to so-called "bedridden elderly people". ing.
【０００４】破骨細胞群および骨芽細胞群は、その機能
の発現にあたって、さまざまなホルモンやサイトカイン
などの液性因子や細胞外基質蛋白による調節を受けてい
る。破骨細胞の分化や活性化を直接抑制する因子として
は、カルシトニン、プロスタグランジン、システインプ
ロテアーゼ阻害剤、Ｃ末端側副甲状腺関連蛋白質などが
しられており、ビスホスホネート、イプリフラボンなど
の骨吸収抑制剤の開発が進められている。The osteoclast group and the osteoblast group are regulated by their humoral factors such as various hormones and cytokines and extracellular matrix proteins in the expression of their functions. As factors that directly suppress osteoclast differentiation and activation, calcitonin, prostaglandins, cysteine protease inhibitors, C-terminal parathyroid-related proteins and the like are known, and bone resorption inhibitors such as bisphosphonate and ipriflavone. Is being developed.
【０００５】ＴＭは１９８１年にエスモンらにより血管
内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発見され、
その後１９８７年に鈴木らによりその全一次構造が明ら
かにされた糖蛋白質であり、トロンビンと結合してトロ
ンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロンビンに
よるプロテインＣ活性化を著しく促進させる。ＴＭは効
率よく凝固系を抑制することから、播種性血管内凝固症
候群（以下、ＤＩＣと略す）、各種血栓症等の予防や治
療に有用であることが示唆されている。一方、メイラー
ド・シー（Ｍａｉｌｌａｒｄ Ｃ．）らは骨芽細胞にお
いてＴＭが発現されていることを報告している〔エンド
クリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）、１３
３、６６８−６７４、１９９３〕が、ＴＭが骨組織に対
して作用を有することを記載した報告はこれまで知られ
ていない。TM was discovered by Esmon et al. In 1981 as an anticoagulant present on the surface of vascular endothelial cells.
Then, in 1987, Suzuki et al. Revealed the entire primary structure of the glycoprotein, which binds to thrombin to suppress thrombin's procoagulant action and remarkably promotes activation of protein C by thrombin. Since TM efficiently suppresses the coagulation system, it has been suggested that TM is useful for the prevention and treatment of disseminated intravascular coagulation (hereinafter abbreviated as DIC) and various thrombosis. On the other hand, Maillard C. et al. Reported that TM was expressed in osteoblasts [Endocrinology, 13
3 , 668-674, 1993] has not been known so far, which describes that TM has an action on bone tissue.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】これまで、骨粗鬆症等
の吸収性骨疾患の治療には、女性ホルモンの一つであり
骨形成を促進するエストロゲン、骨量減少を改善する活
性型ビタミンＤ3 、補充療法として用いられるカルシウ
ム剤、甲状腺から分泌されるペプチドホルモンで血清の
Ｃａ低下作用を有するカルシトニン、カルシトニンの誘
導体であるエルカトニン、エストロゲンの作用を増強す
るイプリフラボン等が用いられている。しかしながら、
エストロゲンでは子宮出血や、長期投与により血栓症や
癌の発症が報告されており、血栓症および乳癌や子宮癌
などのエストロゲン依存性腫瘍の疑いのある患者には禁
忌とされている。また、活性型ビタミンＤ3 、カルシト
ニン、エルカトニン、イプリフラボンでは悪心、嘔吐等
の胃腸障害、ショック症状、過敏症等の副作用が報告さ
れており、その効果は必ずしも満足のいくものではな
い。骨粗鬆症は治療期間の長い疾患であることからも、
副作用が軽度な、安全な治療薬を開発することは重要な
課題である。So far, for the treatment of absorbable bone diseases such as osteoporosis, estrogen, which is one of the female hormones and which promotes bone formation, active vitamin D 3 , which improves bone loss, Calcium agents used as replacement therapy, calcitonin which is a peptide hormone secreted by the thyroid gland and has a serum Ca lowering effect, elcatonin which is a derivative of calcitonin, and ipriflavone which enhances the action of estrogen are used. However,
Estrogen has been reported to cause uterine bleeding and thrombosis and cancer development after long-term administration, and is contraindicated in patients suspected of having thrombosis and estrogen-dependent tumors such as breast cancer and uterine cancer. In addition, side effects such as gastrointestinal disorders such as nausea and vomiting, shock symptoms, and hypersensitivity have been reported for active vitamin D 3 , calcitonin, elcatonin, and ipriflavone, and their effects are not always satisfactory. Because osteoporosis is a long-term disease,
The development of safe therapeutic drugs with mild side effects is an important issue.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明者は、ＴＭの各種
細胞に対する生理作用に関する研究を行っている途上、
ＴＭが骨細胞に作用し、骨吸収を抑制することを見いだ
し、さらに鋭意研究を重ねて本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventor is in the process of studying physiological effects of TM on various cells.
It was found that TM acts on bone cells and suppresses bone resorption, and further earnestly conducted research to complete the present invention.
【０００８】以下に本発明を詳細に説明する。本発明の
第一の態様は、ＴＭを有効成分とすることを特徴とする
吸収性骨疾患予防・治療剤である。吸収性骨疾患には、
骨粗鬆症、骨髄腫やリンパ腫が原因でおこる悪性高カル
シウム血症、局所性骨吸収による骨ページェット病が含
まれる。The present invention will be described in detail below. The first aspect of the present invention is a preventive / therapeutic agent for absorbable bone diseases, which comprises TM as an active ingredient. Resorbable bone disease includes
Includes osteoporosis, malignant hypercalcemia caused by myeloma and lymphoma, and Paget's disease of bone due to local bone resorption.
【０００９】本発明の第二の態様は、ＴＭを有効成分と
することを特徴とする骨粗鬆症予防・治療剤である。骨
粗鬆症には、退行期骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症および特
発性若年性骨粗鬆症が含まれる。さらに、退行期骨粗鬆
症には閉経後あるいは卵巣摘出後に認められるＩ型骨粗
鬆症と、老人に認められるII型骨粗鬆症が含まれ、ま
た、続発性骨粗鬆症の原因としては慢性関節リュウマ
チ、ステロイド療法、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下
症、副甲状腺機能亢進症、末端肥大症、糖尿病、クッシ
ング症候群、ターナー症候群、免疫抑制剤の投与、胃切
除、腎不全、腎透析、骨形成不全症、低アルカリフォス
ファターゼ血症、ホモシスチン尿症、栄養障害、運動制
限、寝たきり、アルコール中毒、宇宙飛行などが挙げら
れる。The second aspect of the present invention is a prophylactic / therapeutic agent for osteoporosis, which comprises TM as an active ingredient. Osteoporosis includes regressive osteoporosis, secondary osteoporosis and idiopathic juvenile osteoporosis. In addition, regressive osteoporosis includes type I osteoporosis observed after menopause or ovariectomy, and type II osteoporosis found in the aged. The causes of secondary osteoporosis are rheumatoid arthritis, steroid therapy, and hyperthyroidism. , Hypogonadism, hyperparathyroidism, acromegaly, diabetes, Cushing's syndrome, Turner's syndrome, immunosuppressant administration, gastrectomy, renal failure, renal dialysis, osteogenesis imperfecta, hypoalkaline phosphataseemia , Homocystinuria, malnutrition, restricted movement, bedridden, alcoholism, space flight, etc.
【００１０】本発明の第三の態様は、ＴＭを有効成分と
することを特徴とする骨吸収抑制剤である。骨折後の治
癒促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨移植の生着率
上昇に有用性が期待される。また、研究用試薬としても
有用である。本発明に用いるＴＭは、トロンビンと結合
してトロンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロ
ンビンによるプロテインＣ活性化を著しく促進させる蛋
白性物質をすべて含む。従って、天然型あるいは遺伝子
工学的に産生されたいずれでも良く、遺伝子工学手法に
より得られる改変型あるいはキメラ型であってもよい。
医薬品とする場合、好ましくはヒト由来のＴＭが望まれ
る。さらに好ましくは、天然型のヒト尿由来の可溶性Ｔ
Ｍもしくは遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭがよい。A third aspect of the present invention is a bone resorption inhibitor characterized by containing TM as an active ingredient. It is expected to be useful for promoting healing after fractures, preventing and treating fatigue fractures, and increasing the survival rate of bone grafts. It is also useful as a research reagent. The TM used in the present invention includes all protein substances that bind to thrombin to suppress the coagulation promoting action of thrombin and to markedly promote protein C activation by thrombin. Therefore, it may be either a natural type or a genetically engineered type, and may be a modified type or a chimeric type obtained by a genetic engineering technique.
When the drug is used, human-derived TM is preferable. More preferably, soluble T derived from natural human urine
M or transgenic human soluble TM is preferred.
【００１１】このようなＴＭは、天然型については、例
えば、ヒト尿由来の可溶性ＴＭとして、特開平３−８６
９００号公報に開示されている非還元状態での分子量が
５５，０００〜５８，０００および６０，０００〜６
５，０００の可溶性ＴＭおよび特開平３−２１８３９９
号公報に開示されている非還元状態での分子量が７２，
０００±３，０００および７９，０００±３，０００の
可溶性ＴＭがあげられる。遺伝子組換え型については、
例えば、遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭとして、特開平１
−６２１９号公報に開示されている少なくともアミノ末
端から３４５−４６２番目のアミノ酸配列を含む可溶性
ＴＭおよびＷＯ０９２／００３２５号公報に開示されて
いる少なくともアミノ末端から４−４４６番目のアミノ
酸配列を含む可溶性ＴＭがあげられる。また、特表平４
−５０５５５４号公報に開示されているヒト組織プラス
ミノーゲンアクチベーター等のアミノ酸配列の一部を含
んでいてもよい可溶性ＴＭ、ＷＯ９１／０４２７６号公
報に開示されているコンドロイチン及び／又はコンドロ
イチン硫酸を含む糖鎖を有する可溶性ＴＭおよび特開平
６−２７９４９７号公報に開示されているウシＴＭ由来
の酸性アミノ酸配列を含む配列を付加した可溶性ＴＭが
あげられる。Such a TM is a natural type, for example, soluble TM derived from human urine, which is disclosed in JP-A-3-86.
The molecular weights in the non-reduced state disclosed in Japanese Patent Publication No. 900 are 55,000-58,000 and 60,000-6.
5,000 soluble TM and JP-A-3-218399
The molecular weight in the non-reduced state is 72,
000 ± 3,000 and 79,000 ± 3,000 soluble TM are mentioned. For genetically modified types,
For example, as a recombinant human soluble TM, Japanese Patent Laid-Open No.
Soluble TM containing at least the amino acid sequence of 345 to 462 from the amino terminus disclosed in JP-6219 and soluble TM containing at least the amino acid sequence of 4 to 446 from the amino terminus disclosed in WO092 / 00325. Can be given. In addition, special table flat 4
-505555, soluble TM which may contain a part of amino acid sequence such as human tissue plasminogen activator disclosed in JP-A-505554, and chondroitin and / or chondroitin sulfate disclosed in WO91 / 04276. Examples thereof include soluble TM having a sugar chain and soluble TM added with a sequence containing an acidic amino acid sequence derived from bovine TM disclosed in JP-A-6-279497.
【００１２】ＴＭは現在臨床開発中のＤＩＣ治療薬であ
り、ヘパリンによる治療に付随するような出血傾向など
の副作用も少なく、医薬品としての安全性が高いことが
期待されている（保坂義隆ら、第５６回日本血液学会抄
録集、７９１題、１９９４）。また、ヘパリンおよび低
分子ヘパリンでは、その投与により骨量が減少すること
が知られている（西山雅彦ら、第６８回日本薬理学会年
会抄録集、Ｐ2 ２９３題、１９９５）。一方、本発明に
用いるＴＭは骨吸収を抑制することから、ＴＭはヘパリ
ンおよび低分子ヘパリンとは異なり、骨密度を高める作
用を有する抗凝固薬である。また、ＴＭは生体内半減期
が長く、医薬品として好ましい体内動態を示すことが確
認されている。[0012] TM is a DIC therapeutic drug currently under clinical development, and it is expected to have high safety as a drug with few side effects such as bleeding tendency associated with the treatment with heparin (Yoshitaka Hosaka et al. 56th Annual Meeting of the Japanese Society of Hematology, 791 titles, 1994). Further, it is known that administration of heparin and low molecular weight heparin reduces bone mass (Masahiko Nishiyama et al., Abstracts of the 68th Annual Meeting of the Japanese Pharmacological Society, P 2 293, 1995). On the other hand, since TM used in the present invention suppresses bone resorption, TM is an anticoagulant having an action of increasing bone density, unlike heparin and low molecular weight heparin. Further, it has been confirmed that TM has a long half-life in vivo and exhibits favorable pharmacokinetics as a drug.
【００１３】本発明に用いるＴＭは、骨吸収抑制作用を
有する。従って、種々の吸収性骨疾患、例えば、骨粗鬆
症、骨ページェット病または悪性腫瘍等に付随する高カ
ルシウム血症などの予防・治療剤として使用することが
できる。また、慢性関節リュウマチを中心に膠原病では
骨の粗鬆化が進行している。従って、種々の膠原病、た
とえば慢性関節リュウマチにおける骨破壊、あるいはス
テロイド療法の副作用の一つである骨量の減少を予防・
治療または改善する目的で使用することができ、さらに
はこれらの疾患の治療促進が期待される。さらに、本発
明に用いるＴＭは骨吸収を抑制することから、各部位の
骨折後の治癒の促進、疲労骨折の予防・治療あるいは骨
移植の生着率を上げることが期待される。The TM used in the present invention has a bone resorption inhibiting effect. Therefore, it can be used as a prophylactic / therapeutic agent for various absorbable bone diseases such as hypercalcemia associated with osteoporosis, Paget's disease of bone, malignant tumor and the like. Further, in collagen disease, mainly in rheumatoid arthritis, the bone is becoming coarse. Therefore, various collagen diseases such as bone destruction in rheumatoid arthritis, or reduction of bone mass which is one of the side effects of steroid therapy are prevented.
It can be used for the purpose of treatment or amelioration, and further, promotion of treatment of these diseases is expected. Further, since the TM used in the present invention suppresses bone resorption, it is expected to promote healing after fracture of each site, preventive / treatment of fatigue fracture, or increase the survival rate of bone graft.
【００１４】本発明の製剤は有効成分としてＴＭを含有
していれば良く、公知のいかなる製剤学的製造法によっ
ても製造することができる。当該ＴＭは、薬剤として一
般的に用いられる適当な担体または、媒体、例えば滅菌
水や生理食塩水、植物油、鉱油、高級アルコール、高級
脂肪酸、無害性有機溶媒等、さらには必要に応じて賦形
剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、溶解補助
剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、保湿剤、酸化防止
剤、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜組合わせて、
生体に効果的に投与するのに適した注射剤、経鼻吸収
剤、経口剤、埋め込み製剤等の医薬品製剤、好ましくは
注射剤に調製することができ、これらの具体例のいくつ
かについては公知である。注射剤の製剤としては、例え
ば凍結乾燥品や、注射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに
封入した形等で提供できる。また、徐放性製剤として、
マイクロカプセル、マイクロスフェアー、リポソームあ
るいはナノスフェアーに内包した形態あるいは高分子基
剤含有製剤として投与することもできる。The formulation of the present invention need only contain TM as an active ingredient and can be produced by any known pharmaceutical production method. The TM is a suitable carrier or medium generally used as a drug, such as sterile water or physiological saline, vegetable oil, mineral oil, higher alcohol, higher fatty acid, harmless organic solvent, or the like, and if necessary, shaped. Agents, colorants, emulsifiers, suspensions, surfactants, solubilizers, anti-adsorption agents, stabilizers, preservatives, humectants, antioxidants, buffers, isotonic agents, soothing agents, etc. Combining properly
It can be prepared into a pharmaceutical preparation such as an injection, a nasal absorption agent, an oral preparation, and an implant preparation, preferably an injection suitable for effective administration to a living body, and some of these specific examples are known. Is. The injection preparation can be provided, for example, as a freeze-dried product, a water solution for injection, or a form enclosed in an osmotic pump. In addition, as a sustained release formulation,
It can also be administered in the form of being encapsulated in microcapsules, microspheres, liposomes or nanospheres or as a polymer-based preparation.
【００１５】本発明の製剤は、例えば静脈内注射、皮下
注射、筋肉内注射、関節内注射、経口投与等の方法によ
って、例えば、ＴＭ蛋白量として一日約０．０１〜１０
００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、約０．１〜１００
μｇ／ｋｇとなる量を投与したり、埋め込み製剤や浸透
圧ポンプ等に封入し生体に留置することにより連続的に
投与することができる。The preparation of the present invention can be administered, for example, by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraarticular injection, oral administration and the like, for example, as a TM protein amount of about 0.01 to 10 per day.
00 μg / kg, more preferably about 0.1-100
The dose can be continuously administered by administering an amount of μg / kg or by encapsulating in an implantable preparation, an osmotic pump or the like and leaving it in the living body.
【００１６】（取得例）以下にＴＭの取得例を挙げて、
本発明をより具体的に説明するが、本発明に用いるＴＭ
はこれらに限定されるものではない。(Acquisition Example) An example of TM acquisition will be given below.
The present invention will be described more specifically, but TM used in the present invention
Is not limited to these.
【００１７】（可溶性ＴＭの取得例１） ヒト尿由来可溶性ＴＭの製造 特開平３−２１８３９９号公報に記載された方法に準じ
て調製した。すなわち、原尿１００Ｌをアクリル繊維で
濾過して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限
外濾過膜を使用して脱塩濃縮した。次いで、ＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビ
ン−アガロースクロマトグラフィーおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムを用いて順次精製し、活性画分を採取した（以下ＵＴ
Ｍ０と略す）。(Example 1 of Obtaining Soluble TM) Production of Soluble TM Derived from Human Urine It was prepared according to the method described in JP-A-3-218399. That is, 100 L of raw urine was filtered through an acrylic fiber to adsorb and remove urokinase in the urine, and the passed urine was desalted and concentrated using an ultrafiltration membrane. Then, the product was sequentially purified using a DEAE cellulose (manufactured by Whatman) column, DIP-thrombin-agarose chromatography and a Sephacryl S-300 (manufactured by Pharmacia Fine Chemical Co.) column, and an active fraction was collected (hereinafter UT).
(Abbreviated as M0).
【００１８】（可溶性ＴＭの取得例２） 遺伝子組換え型ヒト可溶性ＴＭの製造 ＷＯ９２／００３２５号公報の方法に準じて製造した。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４９８残基よりなる
可溶性ＴＭを発現するベクターを調製し、これをＣＨＯ
細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行って高発現株を得
た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−トロンビン−アガ
ロースカラムとゲル濾過により精製し、アミノ酸配列は
同一であるが分子量の異なる２種類のＴＭ（ＲＴＭ１、
ＲＴＭ２）を得た。(Example 2 of Obtaining Soluble TM) Production of Recombinant Human Soluble TM It was produced according to the method of WO92 / 00325.
That is, the amino acid sequence at the amino terminus was Ala using DNA obtained from a human placenta cDNA library.
A vector expressing soluble TM consisting of 498 amino acid residues, which is -Pro-Ala-, was prepared and
After incorporation into cells, gene amplification was performed to obtain a high expression strain. The culture fluid of this highly expressing strain was purified by a DIP-thrombin-agarose column and gel filtration, and two types of TM (RTM1, which have the same amino acid sequence but different molecular weights)
RTM2) was obtained.
【００１９】（実験例）以下に本発明を詳細に説明する
ために実験例により効果を具体的に説明するが、本発明
はこれらによって、なんら限定されるものではない。(Experimental Example) The effect will be specifically described below with reference to an experimental example in order to explain the present invention in detail, but the present invention is not limited thereto.
【００２０】（実験例１：ＴＭによる骨吸収に対する効
果）軟部組織を除去したマウス脛骨および大腿骨をα−
ＭＥＭ培地中で細断し、さらにタッチミキサーで撹拌し
た後、静置して得られた上清画分を破骨細胞を含む全骨
細胞として用いた。次にタカダ・ワイ（Ｔａｋａｄａ
Ｙ．）らの方法〔ボーン・アンド・ミネラル（Ｂｏｎｅ
ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ）、１７、３４７−３５９、
１９９２〕に準じ、象牙の切片上での破骨細胞による吸
収窩形成に対する被検薬の阻害効果を調べた。象牙を厚
さ約１５０μｍ、直径６ｍｍの円形の象牙片に調製し、
５％ウシ胎児血清を含むα−ＭＥＭ培地の入った９６穴
プレート中でプレインキュベートした。象牙片上に、破
骨細胞を含む全骨細胞を加え３７℃にて２時間インキュ
ベートした後、非付着細胞を除去し、被検薬を含むα−
ＭＥＭ培地を添加し５日間培養した。なお、培地は培養
開始３日目に交換した。培養５日目に０．２５Ｍアンモ
ニア水を添加し反応を停止後、超音波処理により象牙片
上に付着した細胞を取り除いた。形成された吸収窩の面
積は酸性ヘマトキシリンで染色した後、顕微鏡下で測定
した。被検薬の効果は被検薬未添加群と被検薬群の吸収
窩の面積より阻害率として算出した。結果を図１および
図２に示す。図１から明らかなように、ＵＴＭ０は象牙
片上の吸収窩形成を用量依存的に抑制した。また、図２
から明らかなように、エルカトニン、遺伝子工学で作製
されたＲＴＭ１およびＲＴＭ２も象牙片上の吸収窩形成
を抑制した。また、ＷＯ９２／００３２５号公報の実施
例６−（２）の方法と同様にして作製された組換えヒト
尿ＴＭ（ｒｕＴＭ−Ａｌａ）も同様の効果が認められ
た。この象牙片上の吸収窩形成は骨吸収の指標であり、
エルカトニン等の吸収性骨疾患に用いられている薬物に
より抑制される。ゆえに、ＵＴＭ０、ＲＴＭ１、ＲＴＭ
２およびｒｕＴＭ−Ａｌａ等のＴＭは、吸収性骨疾患の
予防・治療作用を有する好ましい薬剤であると考えられ
る。(Experimental Example 1: Effect of TM on bone resorption) The tibia and femur of a mouse from which soft tissues were removed were α-
The supernatant fraction obtained by shredding in MEM medium, further stirring with a touch mixer, and then leaving still was used as whole osteoclasts including osteoclasts. Next, Takada Wai
Y. ) Et al. [Bone and Mineral (Bone
and Mineral), 17 , 347-359,
1992], the inhibitory effect of the test drug on the formation of resorption pits by osteoclasts on ivory slices was examined. The ivory was prepared into a circular ivory piece having a thickness of about 150 μm and a diameter of 6 mm,
Pre-incubation was performed in 96-well plates containing α-MEM medium containing 5% fetal bovine serum. After adding all the osteoclast-containing osteoclasts to the ivory piece and incubating at 37 ° C. for 2 hours, non-adherent cells were removed and α-containing the test drug was added.
MEM medium was added and the cells were cultured for 5 days. The medium was exchanged 3 days after the start of culture. On the 5th day of the culture, 0.25 M ammonia water was added to stop the reaction, and then the cells adhered on the dentin pieces were removed by ultrasonic treatment. The area of resorption pits formed was measured under a microscope after staining with acid hematoxylin. The effect of the test drug was calculated as the inhibition rate from the area of the resorption pits of the test drug-free group and the test drug group. The results are shown in FIGS. 1 and 2. As is clear from FIG. 1, UTM0 suppressed the formation of resorption cavities on the ivory pieces in a dose-dependent manner. Also, FIG.
As is clear from the above, elcatonin, genetically engineered RTM1 and RTM2 also suppressed the formation of resorption pits on the ivory pieces. Similar effects were also observed with recombinant human urine TM (ruTM-Ala) produced in the same manner as in Example 6- (2) of WO92 / 00325. The formation of resorption pits on this piece of ivory is an indicator of bone resorption,
It is suppressed by drugs used for absorbable bone diseases such as elcatonin. Therefore, UTM0, RTM1, RTM
TMs such as 2 and ruTM-Ala are considered to be preferable drugs having a preventive / therapeutic effect on absorbable bone diseases.
【００２１】[0021]
【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をより具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto.
【００２２】（実施例１） ＵＴＭ０ ５ｍｇ 精製ゼラチン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。(Example 1) UTM0 5 mg Purified gelatin 20 mg Sodium phosphate 34.8 mg Sodium chloride 81.8 mg Mannitol 25 mg The above ingredients were dissolved in 10 ml of distilled water for injection, and after sterile filtration, divided into 1.0 ml sterile vials. It was poured and freeze-dried to prepare a formulation for injection.
【００２３】（実施例２） ＵＴＭ０ ５ｍｇ アルブミン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。Example 2 UTM0 5 mg Albumin 20 mg Sodium Phosphate 34.8 mg Sodium Chloride 81.8 mg Mannitol 25 mg The above ingredients were dissolved in 10 ml of distilled water for injection, sterile filtered, and then dispensed 1.0 ml into sterile vials. Then, the preparation for injection was prepared by freeze-drying.
【００２４】（実施例３） ＲＴＭ１ １０ｍｇ 精製ゼラチン ２０ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解、無菌濾過した
あとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾燥
して注射用製剤を調整した。(Example 3) RTM1 10 mg Purified gelatin 20 mg Sodium phosphate 34.8 mg Sodium chloride 81.8 mg Mannitol 25 mg The above ingredients were dissolved in 10 ml of distilled water for injection and sterile filtered, and 1.0 ml each was divided into sterile vials. It was poured and freeze-dried to prepare a formulation for injection.
【００２５】[0025]
【発明の効果】本発明のＴＭを有効成分とする予防・治
療剤は、骨吸収抑制作用を有する。従って、種々の骨吸
収が亢進している疾患、たとえば骨粗鬆症、悪性高カル
シウム血症、骨ページェット病および慢性関節リュウマ
チ等による骨減少等の吸収性骨疾患の予防・治療剤、な
らびに骨折後の治癒促進や研究用試薬としての骨吸収抑
制剤として用いることができる。また、本発明のＴＭは
既存薬に比べ副作用が少ないことが期待され、長期間の
投与が可能な安全な治療薬となりうる。さらに、本発明
のＴＭは、ヘパリンや低分子ヘパリンによる治療に付随
する出血傾向や骨量減少等の副作用が少ないため、抗凝
固剤や透析用剤として用いる際も安全性の高いものであ
る。The preventive / therapeutic agent containing TM as an active ingredient of the present invention has a bone resorption inhibitory action. Therefore, various preventive / therapeutic agents for resorbable bone diseases such as osteoporosis, malignant hypercalcemia, Paget's disease of bone and bone loss due to rheumatoid arthritis, etc., as well as various bone diseases after bone fracture, It can be used as a bone resorption inhibitor as a healing reagent or a research reagent. Further, the TM of the present invention is expected to have fewer side effects than existing drugs, and can be a safe therapeutic drug that can be administered for a long period of time. Furthermore, since the TM of the present invention has few side effects such as bleeding tendency and bone loss accompanying the treatment with heparin or low molecular weight heparin, it is highly safe when used as an anticoagulant or a dialysis agent.
【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]
【図１】 本発明に用いるＴＭ（ＵＴＭ０）の象牙にお
ける吸収窩の形成を抑制する効果を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the effect of suppressing the formation of absorption cavities in ivory of TM (UTM0) used in the present invention.
【図２】 本発明に用いるＴＭ（ＲＴＭ１およびＲＴＭ
２）およびエルカトニンの象牙における吸収窩の形成を
抑制する効果を示すグラフである。FIG. 2 shows the TM (RTM1 and RTM used in the present invention.
It is a graph which shows the effect which suppresses the formation of the resorption cavity in ivory of 2) and elcatonin.
Claims (3)
を特徴とする吸収性骨疾患予防・治療剤。1. A prophylactic / therapeutic agent for resorbable bone disease, which comprises thrombomodulin as an active ingredient.
１記載の予防・治療剤。2. The preventive / therapeutic agent according to claim 1, wherein the absorbable bone disease is osteoporosis.
を特徴とする骨吸収抑制剤。3. A bone resorption inhibitor, which comprises thrombomodulin as an active ingredient.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7113232A JPH08301783A (en) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | Preparation for preventing and treating absorption bone disease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7113232A JPH08301783A (en) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | Preparation for preventing and treating absorption bone disease |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08301783A true JPH08301783A (en) | 1996-11-19 |
Family
ID=14606921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7113232A Pending JPH08301783A (en) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | Preparation for preventing and treating absorption bone disease |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08301783A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013179910A1 (en) | 2012-05-31 | 2013-12-05 | 学校法人近畿大学 | Agent for preventing and/or treating peripheral neuropathic pain caused by anti-cancer drug |
| CN114786702A (en) * | 2019-12-20 | 2022-07-22 | 宝血纯化科技股份有限公司 | Thrombomodulin functional domains for promoting osteoblast function and bone healing |
| US11497795B2 (en) | 2018-09-28 | 2022-11-15 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Medicament for mitigating conditions and/or suppressing onset of peripheral neuropathy induced by anti-malignant tumor agent |
-
1995
- 1995-05-11 JP JP7113232A patent/JPH08301783A/en active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013179910A1 (en) | 2012-05-31 | 2013-12-05 | 学校法人近畿大学 | Agent for preventing and/or treating peripheral neuropathic pain caused by anti-cancer drug |
| KR20150004855A (en) | 2012-05-31 | 2015-01-13 | 갓코 호진 긴키 다이가쿠 | Agent for prophylactic and/or therapeutic treatment of peripheral neuropathic pain caused by anticancer agent |
| US10709767B2 (en) | 2012-05-31 | 2020-07-14 | Kinki University | Agent for prophylactic and/or therapeutic treatment of peripheral neuropathic pain caused by anticancer agent |
| US11497795B2 (en) | 2018-09-28 | 2022-11-15 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Medicament for mitigating conditions and/or suppressing onset of peripheral neuropathy induced by anti-malignant tumor agent |
| CN114786702A (en) * | 2019-12-20 | 2022-07-22 | 宝血纯化科技股份有限公司 | Thrombomodulin functional domains for promoting osteoblast function and bone healing |
| EP4076491A4 (en) * | 2019-12-20 | 2024-02-07 | Blue Blood Biotech Corp | Thrombomodulin functional domains for use in promoting osteoblast functions and bone healing |
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