JPH08269061A - Antitumor substance epolactaene - Google Patents
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- JPH08269061A JPH08269061A JP6925595A JP6925595A JPH08269061A JP H08269061 A JPH08269061 A JP H08269061A JP 6925595 A JP6925595 A JP 6925595A JP 6925595 A JP6925595 A JP 6925595A JP H08269061 A JPH08269061 A JP H08269061A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、新規化合物であるエポ
ラクタエン及びその製造方法、並びにその用途に関す
る。さらに詳しくは、本発明は新規なエポラクタエン、
ペニシリウム属に属し該エポラクタエンを産生するカ
ビ、該カビを用いて該エポラクタエンを製造する方法、
並びに該エポラクタエンを有効成分とする神経分化誘導
剤及び抗腫瘍剤に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a novel compound, epolactaene, a method for producing the same, and uses thereof. More specifically, the present invention relates to a novel epolactaene,
A mold belonging to the genus Penicillium and producing the epolactaene, a method for producing the epolactaene using the mold,
And a nerve differentiation inducer and an antitumor agent containing the epolactaene as an active ingredient.
【０００２】[0002]
【従来の技術】抗腫瘍剤としては、従来、アドリアマイ
シン、マイトマイシンＣ、またはブレオマイシン等が知
られている。これらは、インターカレーション、架橋形
成、またはDNA 鎖切断等の作用機構によってDNA の構造
や機能に対して直接的な作用を及ぼして核酸合成系を阻
害するものであり、増殖速度の速い腫瘍細胞に対して細
胞毒性を発揮する。しかしながら、これらの薬剤は腫瘍
細胞に対しての特異性が十分ではなく、増殖のさかんな
骨髄細胞などの正常細胞に対しても毒性を示すので、治
療に際して重篤な副作用を伴うという問題があった。2. Description of the Related Art As an antitumor agent, adriamycin, mitomycin C, bleomycin and the like are conventionally known. These inhibit the nucleic acid synthesis system by exerting a direct effect on the structure or function of DNA by an action mechanism such as intercalation, cross-link formation, or DNA strand breakage, and inhibit tumor cells with a high growth rate. Exhibits cytotoxicity to However, these drugs do not have sufficient specificity for tumor cells and are toxic to normal cells such as bone marrow cells that are very proliferative. Was.
【０００３】一方、腫瘍細胞に対して特異的に分化誘導
作用を有する化合物は抗腫瘍剤として有用であることが
期待されており、従来、血球系の腫瘍に対する分化誘導
療法の検討が数多くなされている。神経系の腫瘍に対し
ては、ジブチリルサイクリックAMP が神経細胞に対して
神経分化特有の樹状突起の形成を促進する作用を有する
ことが知られている。しかしながら、神経系の腫瘍に対
する分化誘導療法の検討は上記のもの以外はほとんどな
されていないのが現状である。また、近年、老人人口の
増加に伴って老人性痴呆症などの脳疾患における有効な
治療法の確立が求められているが、これらの疾患に対し
て有効な薬剤は知られていない。On the other hand, compounds having a differentiation-inducing effect specifically on tumor cells are expected to be useful as antitumor agents, and many studies have been conducted on differentiation-inducing therapies for blood cell tumors. I have. For nervous system tumors, it is known that dibutyryl cyclic AMP has an effect on nerve cells to promote the formation of dendrites specific to nerve differentiation. However, at present, there are few studies on differentiation induction therapy for nervous system tumors other than those described above. In recent years, with the increase in the aging population, it has been required to establish effective treatments for brain diseases such as senile dementia, but no effective drugs for these diseases have been known.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、腫瘍
細胞に対して高い特異性を示す新規な抗腫瘍剤を提供す
ることにあり、別の観点からは、特に神経系の腫瘍等に
対して分化誘導作用に基づく抗腫瘍作用を発揮する新規
な抗腫瘍剤を提供することにある。また、本発明の別の
目的は、脳神経などの神経細胞に対して分化誘導作用を
有し、老人性痴呆等の脳疾患に対して有効な神経分化誘
導剤を提供することにある。さらに本発明は、上記の抗
腫瘍剤及び神経分化誘導剤の有効成分である化合物の製
造方法を提供することを目的としている。より具体的に
は、上記の化合物を産生する新規なカビ、および該カビ
を用いて該化合物を製造する方法を提供することも本発
明の目的の一つである。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a novel antitumor agent having high specificity for tumor cells. From another viewpoint, the present invention is particularly applicable to nervous system tumors and the like. Another object of the present invention is to provide a novel antitumor agent which exhibits an antitumor effect based on a differentiation inducing effect. Another object of the present invention is to provide a nerve differentiation-inducing agent which has a differentiation-inducing effect on nerve cells such as cranial nerves and is effective against brain diseases such as senile dementia. Another object of the present invention is to provide a method for producing a compound that is an active ingredient of the above-mentioned antitumor agent and nerve differentiation inducer. More specifically, it is an object of the present invention to provide a novel mold that produces the above compound, and a method for producing the compound using the mold.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記の課題
を解決すべく鋭意努力した結果、ペニシリウム属に属す
る新規なカビが産生する新規化合物が細胞分化誘導作用
を有しており、特に神経細胞に対して優れた分化誘導作
用を有することを見いだした。また、本発明は、上記の
化合物が抗腫瘍剤及び神経分化誘導剤として極めて有用
であることを見出した。本発明は上記の知見を基にして
完成されたものである。The present inventors have made intensive efforts to solve the above-mentioned problems, and as a result, a novel compound produced by a novel mold belonging to the genus Penicillium has a cell differentiation-inducing effect. They have been found to have an excellent differentiation-inducing effect on nerve cells. In addition, the present invention has found that the above compounds are extremely useful as antitumor agents and agents for inducing neuronal differentiation. The present invention has been completed based on the above findings.
【０００６】すなわち本発明は、下記の式：That is, the present invention provides the following formula:
【化２】 で示されるエポラクタエンを提供するものである。本発
明の別の態様によれば、上記エポラクタエンを有効成分
とする神経分化誘導剤；神経疾患の治療・予防剤；及び
抗腫瘍剤、並びに神経腫瘍の治療及び／又は予防に用い
る上記抗腫瘍剤が提供される。Embedded image The present invention provides an epolactaene represented by According to another aspect of the present invention, a neuronal differentiation-inducing agent comprising the above-mentioned epolactaene as an active ingredient; a therapeutic / prophylactic agent for a neurological disease; and an antitumor agent, and the antitumor agent used for treating and / or preventing a neuronal tumor Is provided.
【０００７】本発明のさらに別の態様によれば、ペニシ
リウム属に属し上記のエポラクタエンを産生するカビが
提供される。その好ましい態様として、ペニシリウム・
エスピー・BM1689-P株が提供される。さらに、上記産生
菌を培養し培養物からエポラクタエンを採取することを
特徴とする、上記エポラクタエンの製造方法も提供され
る。ペニシリウム・エスピー・BM1689-P株を産生菌とし
て用いる方法は上記発明の好ましい態様である。According to still another aspect of the present invention, there is provided a mold belonging to the genus Penicillium and producing the above-mentioned epolactaene. As a preferred embodiment, penicillium
SPBM1689-P strain is provided. The present invention also provides a method for producing epolactaene, which comprises culturing the above-mentioned producing bacteria and collecting epolactaene from the culture. A method using the Penicillium sp. BM1689-P strain as a producing bacterium is a preferred embodiment of the present invention.
【０００８】本発明のエポラクタエンは３個の不斉炭素
を有しており、これら３個の不斉中心に基づく光学異性
体またはジアステレオ異性体が存在するが、本発明のエ
ポラクタエンには上記立体異性体の全てが包含される。
また、光学的あるいはジアステレオ的に純粋な上記立体
異性体のほか、光学異性体の任意の割合の混合物やラセ
ミ体、あるいはジアステレオ異性体の任意の割合の混合
物なども全て本発明の範囲に包含される。The epolactaene of the present invention has three asymmetric carbons, and there are optical isomers or diastereoisomers based on these three asymmetric centers. All isomers are included.
In addition to the stereoisomers that are optically or diastereomerically pure, mixtures and racemates of any ratio of optical isomers, and mixtures of any ratio of diastereoisomers are all within the scope of the present invention. Included.
【０００９】本発明のエポラクタエンは、内浦湾の海底
102 m から採取された土壌から分離されたカビBM1689-P
株を培養した培養物から分離採取された。下記の生物学
的性質に基づき、本発明の放線菌BM1689-P株はペニシリ
ウム(Penicillium) 属に属するカビであることが判明し
た。なお、ペニシリウム・エスピー・BM1689-P株は、平
成７年３月24日付けで工業技術院生命工学工業技術研究
所に受託番号FERM P-14856 として寄託されている。[0009] The epolactaene of the present invention is located on the seabed of Uchiura Bay.
Mold BM1689-P isolated from soil collected from 102 m
It was isolated from the culture in which the strain was cultured. Based on the following biological properties, the actinomycete BM1689-P strain of the present invention was found to be a mold belonging to the genus Penicillium. The Penicillium sp. BM1689-P strain was deposited on March 24, 1995 with the Research Institute of Biotechnology and Industrial Technology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology under the accession number FERM P-14856.
【００１０】本発明のエポラクタエンを生産するカビ B
M1689-P 株は、以下の生物学的性質を有する。 (1) 形態学的特徴 (i) 分生子柄 110 〜200 × 1.8〜3.5 μm で滑面、微細な突起を有す
る。また、複輪生のペニシリを形成する。 (ii) メトレ 10.0〜13.0×2.3 〜3.0 μm で4 〜8 本が束生する。 (iii) フィアライド 11.0〜15.0×1.8 〜2.5 μm で輪生体となる。 (iv) 分生子 3.5 〜4.2 ×2.6 〜3.5 μm で滑面、亜球形から楕円型
である。 (2) 培養性状Mold B for Producing Epolactaene of the Present Invention
The M1689-P strain has the following biological properties. (1) Morphological features (i) Conidiophores 110-200 × 1.8-3.5 μm with smooth surface and fine projections. In addition, it forms penicili of double wheels. (ii) Metres 10.0 to 13.0 × 2.3 to 3.0 μm, 4 to 8 clumps grow. (iii) Fialide 11.0-15.0 × 1.8-2.5 μm. (iv) Conidia 3.5-4.2 × 2.6-3.5 μm, smooth surface, subspherical to elliptical. (2) Culture properties
【００１１】各種寒天培地を用い、25℃で７日間培養し
た場合の生育的特徴を示す。The growth characteristics when cultured at 25 ° C. for 7 days using various agar media are shown.
【表１】 培 地 集落の直径(mm) 集落の色 集落裏面の色 集落の状態 ─────────────────────────────────── ツァベック寒天培地 18 〜21 緑褐色 白色 ビロード状 ツァベック酵母エキス 20 〜22 暗緑色 茶色 ビロード状 寒天培地 麦芽エキス寒天培地 27 〜39 暗緑色 淡黄色 ビロード状 ───────────────────────────────────[Table 1] Culture area Diameter of settlement (mm) Color of settlement Color of back of settlement Condition of settlement ──────────────────────────── ─────── Tsavek agar 18-18 Green-brown white velvety Tsavek yeast extract 20-22 Dark green Brown velvety agar Malt extract agar 27-39 Dark green Pale yellow velvety ────── ─────────────────────────────
【００１２】いずれの培地でも分生子形成は良好で、分
泌液は認められない。また、37℃での培養時、未熟な菌
核状組織が形成される場合がある。なお、本菌株の生育
温度範囲は10〜38℃、生育至適温度は32℃である。以上
の菌学的諸性質より、BM1689-P株をペニシリウム・エス
ピー(Penicilliumsp.) と同定した。[0012] Conidia formation is good in any medium, and no secretion fluid is observed. Further, when cultured at 37 ° C., immature sclerotium-like tissue may be formed. The growth temperature range of this strain is 10 to 38 ° C, and the optimum growth temperature is 32 ° C. Based on the above mycological properties, the strain BM1689-P was identified as Penicillium sp.
【００１３】本発明のエポラクタエンを製造するには、
上記のペニシリウム・エスピー・BM1689-P株の他、ペニ
シリウム属に属するエポラクタエン産生菌を用いること
ができる。このような菌のうち、BM1689-P株は好ましい
菌株である。このようなペニシリウム属に属するエポラ
クタエン産生菌を培養して培養物から本発明のを分離採
取するには、当業者に周知の方法によればよい。その一
例として以下に実施例を示すが、本発明のエポラクタエ
ンの製造方法はこれらの例に限定されることはなく、当
業者により種々の改変や修飾が可能であることはいうま
でもない。To produce the epolactaene of the present invention,
In addition to the above Penicillium sp. BM1689-P strain, Epolactaene-producing bacteria belonging to the genus Penicillium can be used. Among such bacteria, the strain BM1689-P is a preferred strain. In order to culture such an epolactaene-producing bacterium belonging to the genus Penicillium and separate and collect the present invention from the culture, a method well known to those skilled in the art may be used. Examples are shown below as examples, but the method for producing epolactaene of the present invention is not limited to these examples, and it goes without saying that various alterations and modifications can be made by those skilled in the art.
【００１４】本発明のエポラクタエンは抗腫瘍作用を有
しているので、本発明のエポラクタエンを有効成分とし
て含む医薬は、ヒトを含む哺乳類の各種の腫瘍の治療に
有用である。特に、本発明の抗腫瘍剤は脳神経などの神
経系の腫瘍の治療に有用である。また、本発明のエポラ
クタエンは、脳神経などの神経系細胞に対して分化誘導
作用を有するので、神経分化誘導剤として有用である。
なお、本明細書で神経という場合には、脳神経などの中
枢神経の他、末梢神経などの神経系の全てが含まれる。Since the epolactaene of the present invention has an antitumor effect, the medicament containing the epolactaene of the present invention as an active ingredient is useful for treating various tumors in mammals including humans. In particular, the antitumor agent of the present invention is useful for treating tumors of the nervous system such as cranial nerves. Further, the epolactaene of the present invention has a differentiation-inducing effect on neural cells such as cranial nerves, and thus is useful as a nerve differentiation-inducing agent.
In this specification, the term “nerve” includes all central nervous systems such as cranial nerves and nervous systems such as peripheral nerves.
【００１５】本発明の医薬としては、有効成分である上
記のエポラクタエンをそのまま患者に投与してもよい
が、上記の化合物の１種あるいはそれ以上を有効成分と
して含む医薬組成物を製剤添加物を用いて製造し、医薬
組成物の形態で患者に投与することが好適である。本発
明の医薬の有効成分としては、上記の一般式に包含され
る遊離形態の化合物の他、任意の水和物を用いてもよ
い。本発明の医薬の投与形態は特に制限されず、経口的
又は非経口的に投与することができる。上記の医薬組成
物の製造に用いる薬理学的、製剤学的に許容しうる添加
物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助
剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、
基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、pH調節剤、
安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を挙げることができ
る。As the medicament of the present invention, the above-mentioned epolactaene which is an active ingredient may be administered to a patient as it is, but a pharmaceutical composition containing one or more of the above-mentioned compounds as an active ingredient may be used as a pharmaceutical additive. It is preferred that it is prepared and administered to a patient in the form of a pharmaceutical composition. As the active ingredient of the medicament of the present invention, any hydrate may be used in addition to the free form compound included in the above general formula. The administration form of the medicament of the present invention is not particularly limited, and it can be administered orally or parenterally. The pharmacologically and pharmaceutically acceptable additives used in the production of the above pharmaceutical composition include, for example, excipients, disintegrants or disintegration aids, binders, lubricants, coating agents, pigments, Diluent,
Base, solubilizer or solubilizer, tonicity agent, pH adjuster,
Stabilizers, propellants, adhesives and the like can be mentioned.
【００１６】経口投与に適する製剤の例としては、例え
ば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、
又はシロップ剤等を挙げることができる。また、非経口
投与に適する製剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、
坐剤、吸入剤、又は貼付剤等を挙げることができる。経
口投与に適する製剤には、薬理学的、製剤学的に許容し
うる添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、D-マンニ
トール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カ
ルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシ
メチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助
剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラ
チン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク
等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白
糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーテ
ィング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレング
リコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、
又はハードファット等の基剤を用いることができる。Examples of preparations suitable for oral administration include, for example, tablets, capsules, powders, fine granules, granules, liquids,
Or syrups and the like can be mentioned. In addition, preparations suitable for parenteral administration include, for example, injections, drops,
Suppositories, inhalants, patches and the like can be mentioned. Formulations suitable for oral administration include pharmacologically and pharmaceutically acceptable excipients, for example, excipients such as glucose, lactose, D-mannitol, starch, or crystalline cellulose; carboxymethylcellulose, starch, or Disintegrant or disintegration aid such as calcium carboxymethylcellulose; binder such as hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, or gelatin; lubricant such as magnesium stearate or talc; hydroxypropylmethylcellulose, sucrose, polyethylene glycol or Coating agents such as titanium oxide; petrolatum, liquid paraffin, polyethylene glycol, gelatin, kaolin, glycerin, purified water,
Alternatively, a base such as hard fat can be used.
【００１７】経皮又は経粘膜投与に適する製剤は、例え
ば、フロン，ジエチルエーテル、又は圧縮ガス等の噴射
剤；ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコー
ル、メチルセルロース、ポリイソブチレン、ポリブテン
等の粘着剤；木綿布又はプラスチックシート等の基布等
の製剤用添加物を用いて製造することができる。注射あ
るいは点滴用に適する製剤には、注射用蒸留水、生理食
塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解
型注射剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ
糖、塩化ナトリウム、D-マンニトール、グリセリン等の
等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等の
pH調節剤等の製剤用添加物を添加して製造してもよい。Formulations suitable for transdermal or transmucosal administration include, for example, propellants such as freon, diethyl ether and compressed gas; adhesives such as sodium polyacrylate, polyvinyl alcohol, methylcellulose, polyisobutylene and polybutene; cotton cloth Alternatively, it can be produced using a pharmaceutical additive such as a base cloth such as a plastic sheet. Formulations suitable for injection or infusion include solubilizers or solubilizers that can constitute aqueous or ready-to-use injections, such as distilled water for injection, physiological saline, and propylene glycol; glucose, sodium chloride, D-mannitol , Glycerin and other tonicity agents; inorganic acids, organic acids, inorganic bases or organic bases, etc.
It may be produced by adding a pharmaceutical additive such as a pH adjuster.
【００１８】本発明の抗腫瘍剤は、胃癌、肺癌、肝臓
癌、腎臓癌、脳腫瘍、大腸癌、食道癌などの固形癌、あ
るいは悪性リンパ腫、白血病などのあらゆる種類の癌の
治療にに用いることができるが、特に、神経腫瘍、例え
ば脳腫瘍の治療に用いることが好ましい。また、本発明
の神経分化誘導剤は、老人痴呆症などの脳疾患の治療及
び／又は予防に有用である。もっとも、本発明の医薬の
適用対象は上記のものに限定されることはなく、また、
一般的に悪性腫瘍や神経疾患の治療に用いられる他の薬
剤と併用してもさしつかえない。本発明の抗腫瘍剤及び
神経分化誘導剤の投与量は特に制限されず、投与形態、
年齢、体重、症状等に応じて適宜選択すればよい。例え
ば、経鼻投与の場合には、成人１日あたり有効成分量と
して1 〜100 mg/Kg 、好ましくは 2〜10 mg/Kgを投与す
ればよい。投与は１日あたり１回もしくは数回に分けて
もよく、投与期間も、年齢、症状等に応じて任意に定め
ることができる。The antitumor agent of the present invention can be used for the treatment of gastric cancer, lung cancer, liver cancer, kidney cancer, brain tumor, colon cancer, esophagus cancer and other solid cancers, or all kinds of cancers such as malignant lymphoma and leukemia. However, it is particularly preferable to use it for the treatment of a nerve tumor, for example, a brain tumor. The agent for inducing neuronal differentiation of the present invention is useful for treating and / or preventing brain diseases such as senile dementia. However, the application of the medicament of the present invention is not limited to the above, and
In general, it may be used in combination with other drugs used for the treatment of malignant tumors and neurological diseases. The dosage of the antitumor agent and the neuronal differentiation inducer of the present invention is not particularly limited,
What is necessary is just to select suitably according to age, weight, a symptom, etc. For example, in the case of nasal administration, 1 to 100 mg / Kg, preferably 2 to 10 mg / Kg, of the active ingredient per adult may be administered per day. Administration may be performed once or several times a day, and the administration period may be arbitrarily determined according to age, symptoms, and the like.
【００１９】[0019]
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定される
ことはない。 (A) 製造例 グルコース(3.5%)、可溶性澱粉(1%)、肉エキス(0.5%)、
ポリペプトン(0.5%)、酵母抽出液(0.3%)、食塩(0.2%)、
リン酸第二カリウム(0.05%) 、硫酸マグネシウム(0.05
%) 、及び大豆粉(2%)の組成の培地（pH 5.8）にペニシ
リウム・エスピー・BM1689-P株を接種し、 28 ℃で48時
間振蘯培養を行った。この培養液140 mlを同組成の培地
18 リットルに接種し、28℃で50時間にわたって毎分７
リットルの通気を行いながら、毎分 300回転の振盪培養
を行った。EXAMPLES The present invention will be described more specifically with reference to the following examples, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. (A) Production example glucose (3.5%), soluble starch (1%), meat extract (0.5%),
Polypeptone (0.5%), yeast extract (0.3%), salt (0.2%),
Potassium phosphate (0.05%), magnesium sulfate (0.05%
%) And soybean flour (2%) were inoculated with Penicillium sp. BM1689-P strain at pH 5.8, and cultured with shaking at 28 ° C. for 48 hours. Add 140 ml of this culture to a medium of the same composition
Inoculate 18 liters, 7 minutes per minute for 50 hours at 28 ° C
Shaking culture was performed at 300 revolutions per minute while ventilating liters.
【００２０】上記培養液を遠心分離機（6,000 回転／
分）で菌体と上清に分離し、菌体を80% アセトン 5リッ
トルを用いて抽出した。減圧濃縮後、得られた水溶液を
pH 7.0に調整し、5 リットルの酢酸エチルで2 回抽出を
繰り返した。抽出後、全ての酢酸エチルを合わせて減圧
濃縮し、褐色のシロップ 4.7 gを得た。このシロップを
クロロホルム 10 mlに溶解し、クロロホルムで調製した
シリカゲルカラム (直径 4 cm, 長さ 60 cm) に浸潤さ
せた。最初にクロロホルム 1リットルで溶出した後、配
合割合を順次変えたクロロホルム−メタノール溶液 (10
0:1, 100:2, 100:5, 100:10, 100:20, 100:50)各 500 m
l ずつで溶出し、最後にメタノール 1リットルで溶出し
た。活性成分はクロロホルム−メタノール溶液 (100:5
から100:10) の画分に溶出した。この分画を減圧濃縮す
ることにより、1.6 g の褐色シロップを得た。The above culture solution was centrifuged (6,000 rpm /
), And the cells were extracted with 5 liters of 80% acetone. After concentration under reduced pressure, the resulting aqueous solution was
The pH was adjusted to 7.0, and extraction was repeated twice with 5 l of ethyl acetate. After the extraction, all the ethyl acetates were combined and concentrated under reduced pressure to obtain 4.7 g of a brown syrup. This syrup was dissolved in 10 ml of chloroform and infiltrated into a silica gel column (4 cm in diameter, 60 cm in length) prepared with chloroform. First, elution was performed with 1 liter of chloroform, and then the chloroform-methanol solution (10
0: 1, 100: 2, 100: 5, 100: 10, 100: 20, 100: 50) 500 m each
The mixture was eluted in 1 l steps and finally with 1 liter of methanol. The active ingredient is a chloroform-methanol solution (100: 5
To 100: 10). The fraction was concentrated under reduced pressure to obtain 1.6 g of a brown syrup.
【００２１】さらにこの褐色シロップ 0.8 gをクロロホ
ルム−メタノール溶液(1:1) に溶解し、同じ溶液で調製
したセファデックス LH-20 (ファルマシア社製）カラム
（直径 2 cm, 長さ 65 cm) に吸着させ、クロロホルム
−メタノール溶液(1:1) で溶出した。各10 ml ずつ分取
し、主な活性画分であるフラクションを集めて減圧濃縮
し、260 mgの褐色のシロップを得た。次に ODSカラム
(直径 2 cm, 長さ 25 cm; カプセルパック, 資生堂社
製）を用いて高速液体クロマトグラフィーによる分取
（80% メタノール、流速 8 ml/分) を行い、無色アモル
ファス状物質 15 mgを得た。最後に ODSカラム (直径 2
cm, 長さ 25 cm; カプセルパック, 資生堂社製）を用
いて高速液体クロマトグラフィーによる分取（60% メタ
ノール、流速 8 ml/分) を行い、無色アモルファス状物
質 5 mg を得た。Further, 0.8 g of this brown syrup was dissolved in a chloroform-methanol solution (1: 1) and applied to a Sephadex LH-20 (Pharmacia) column (diameter 2 cm, length 65 cm) prepared with the same solution. It was adsorbed and eluted with a chloroform-methanol solution (1: 1). Fractions, which were the main active fractions, were collected in 10 ml portions, and concentrated under reduced pressure to obtain 260 mg of a brown syrup. Next, ODS column
(2% in diameter, 25 cm in length; Capsule Pack, manufactured by Shiseido Co., Ltd.), fractionated by high performance liquid chromatography (80% methanol, flow rate 8 ml / min) to obtain 15 mg of a colorless amorphous substance. . Finally, the ODS column (diameter 2
Separation by high performance liquid chromatography (60% methanol, flow rate 8 ml / min) using a Capsule Pack (manufactured by Shiseido Co., Ltd.) gave 5 mg of a colorless amorphous substance.
【００２２】1.物質の性状：無色アモルファス状 2.比旋光度： [α] D +32 °(26 ℃, c=0.1, MeOH) 3.分子量、分子式: 高分解能EIマススペクトル分析によ
り MW=389, C21H27NO6 4.溶解性: メタノール、エタノール、ジメチルスルホキ
シドに易溶。ヘキサン、水に不溶 5.呈色反応: 硫酸、ニンヒドリン、ヨウ素に陽性 6.紫外線吸収スペクトル：λmax (MeOH) (ε): 232 nm
(21800), 280 nm(sh,15600) 7.赤外線吸収スペクトル：ν(KBr): 3420, 2920, 1720,
1640, 1435, 1270, 1135, 970, 965 8.核磁気共鳴スペクトル(1H-NMR 及び13C-NMR)：CD3OD
中, 1H-NMR: 600 MHz, 13C-NMR: 100 MHz, δ ppm, 内
部標準 TMS1. Property of substance: colorless amorphous 2. Specific rotation: [α] D + 32 ° (26 ° C., c = 0.1, MeOH) 3. Molecular weight, molecular formula: MW = by high resolution EI mass spectrum analysis 389, C 21 H 27 NO 6 4. Solubility: Easily soluble in methanol, ethanol and dimethyl sulfoxide. Insoluble in hexane and water 5. Color reaction: positive for sulfuric acid, ninhydrin and iodine 6. Ultraviolet absorption spectrum: λ max (MeOH) (ε): 232 nm
(21800), 280 nm (sh, 15600) 7. Infrared absorption spectrum: ν (KBr): 3420, 2920, 1720,
1640, 1435, 1270, 1135, 970, 965 8. Nuclear magnetic resonance spectrum ( 1 H-NMR and 13 C-NMR): CD 3 OD
Medium, 1 H-NMR: 600 MHz, 13 C-NMR: 100 MHz, δ ppm, internal standard TMS
【００２３】[0023]
【化３】 Embedded image
【００２４】[0024]
【表２】 [Table 2]
【００２５】(B) 試験例 マウス神経芽腫細胞 Neuro 2A 細胞は、公知の神経分化
誘導剤であるジブチリルサイクリックAMP により分化が
誘導され、神経突起を伸長する(J. Antibiotics, 44, 1
13, 1991) 。一方、ヒト神経芽腫細胞 SH-SY5Y細胞にお
いても、ジブチリルサイクリック AMPを添加すると神経
分化特有の樹状突起を形成した。そこで、本発明のエポ
ラクタエンについて、ヒト神経芽腫細胞 SH-SY5Y細胞に
対する樹状突起形成促進作用を上記の方法により検討し
た。結果を表３に示す。表中、樹状突起形成率は、全細
胞数に対する樹状突起形成細胞数の割合を示す。(B) Test Example Mouse neuroblastoma cells Neuro 2A cells are induced to differentiate by a known neuronal differentiation inducer, dibutyryl cyclic AMP, and extend neurites (J. Antibiotics, 44, 1).
13, 1991). On the other hand, also in human neuroblastoma cells SH-SY5Y cells, dendrites characteristic of neural differentiation were formed when dibutyryl cyclic AMP was added. Thus, the effect of epolactaene of the present invention on dendritic formation promoting action on human neuroblastoma cells SH-SY5Y cells was examined by the method described above. Table 3 shows the results. In the table, the dendrite formation rate indicates the ratio of the number of dendritic cells to the total number of cells.
【００２６】[0026]
【表３】 [Table 3]
【発明の効果】本発明のエポラクタエンは、例えば神経
腫瘍などの治療に用いる抗腫瘍剤、並びに、例えば神経
疾患等の治療及び／又は予防に用いる神経分化誘導剤と
して有用である。本発明により提供される新規微生物な
らびに製造方法は、上記のエポラクタエンを効率的に製
造するために有用である。The epolactaene of the present invention is useful as an antitumor agent for use in treating, for example, neuronal tumors, and as an agent for inducing neuronal differentiation used in, for example, treating and / or preventing neurological diseases and the like. The novel microorganism and the production method provided by the present invention are useful for efficiently producing the above-mentioned epolactaene.
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:80） Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Agency reference number FI Technical display location C12R 1:80)
Claims (10)
エポラクタエンを産生するカビ。2. A mold which belongs to the genus Penicillium and produces the epolactaene according to claim 1.
ある請求項２記載のエポラクタエン産生菌。3. The bacterium according to claim 2, which is a Penicillium sp. BM1689-P strain.
のエポラクタエン産生菌を培養し、培養物から該エポラ
クタエンを採取することを特徴とする、請求項１に記載
のエポラクタエンの製造方法。5. The method for producing epolactaene according to claim 1, wherein the epolactaene-producing bacterium according to claim 1 belonging to the genus Penicillium is cultured, and the epolactaene is collected from the culture.
培養する請求項５記載の方法。6. The method according to claim 5, wherein the Penicillium sp. BM1689-P strain is cultured.
成分とする神経分化誘導剤。7. An agent for inducing neuronal differentiation, comprising the epolactaene according to claim 1 as an active ingredient.
成分とする神経疾患の治療・予防剤。8. A therapeutic or preventive agent for a neurological disease, comprising the epolactaene according to claim 1 as an active ingredient.
成分とする抗腫瘍剤。9. An antitumor agent comprising the epolactaene according to claim 1 as an active ingredient.
る請求項９に記載の抗腫瘍剤。10. The antitumor agent according to claim 9, which is used for treating and / or preventing a nerve tumor.
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1995
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