JPH08245393A - Apoptosis adjusting agent - Google Patents

Abstract

PURPOSE: To obtain subject adjusting agent containing 2,3-dihydro-1H-indene derivative (salt) as an active ingredient, useful for the prevention and treatment of Huntington's chorea, Parkinsonian disease, amyotrophic lateral sclerosis and HIV related dysmnesia. CONSTITUTION: This apoptosis adjusting agent contains 1-70wt.% derivative (salt) of the formula (R<1> to R<4> are each a lower alkyl; R<5> is a lower alkoxy; A is a lower alkylene) e.g.; 1-[4-(3-methoxyphenyl)-1-piperazinyl] acetylamino-2, 3-dihydro-7-hydroxy-2,2,4,6-tetramethyl-1H-indene}. The adjusting agent can be also used as a cytokine production suppressing agent.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、アポトーシス調整
剤に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an apoptosis regulator.

【０００２】[0002]

【課題を解決するための手段】一般式[Means for Solving the Problems] General formula

【０００３】[0003]

【化２】 Embedded image

【０００４】〔式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は、同一又
は異なって低級アルキル基を示す。Ｒ⁵は低級アルコキ
シ基を示す。Ａは低級アルキレン基を示す。〕で表わさ
れる２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその
塩は既知の化合物であり、例えば特公平４−７７７４０
号公報に記載されている。またこの２，３−ジヒドロ−
１Ｈ−インデン誘導体及びその塩が酸素不足状態やこれ
に伴う症状を改善する作用を有しており、従って低酸素
症改善剤として、より具体的には例えば脳賦活薬、健忘
症薬、老人性痴呆症薬、青酸カリ中毒に伴う呼吸停止及
び低酸素症改善薬、酸素不足に起因する不整脈や心不全
予防薬等として有効に使用されることも公知である。[In the formula, R ¹ , R ² , R ³ and R ⁴ are the same or different and each represents a lower alkyl group. R ⁵ represents a lower alkoxy group. A represents a lower alkylene group. ] The 2,3-dihydro-1H-indene derivative represented by the formula and salts thereof are known compounds, for example, JP-B-4-77740.
No., published in Japanese Unexamined Patent Publication No. Also this 2,3-dihydro-
The 1H-indene derivative and its salt have an action of improving an oxygen deficiency state and symptoms associated therewith, and therefore, as hypoxia improving agents, more specifically, for example, brain activating agents, amnestic agents, and senile agents. It is also known to be effectively used as a dementia drug, a drug for improving respiratory arrest and hypoxia associated with potassium cyanide poisoning, a drug for preventing arrhythmia and heart failure due to lack of oxygen, and the like.

【０００５】本発明者は、上記一般式（１）で表わされ
る２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩
につき更に研究を重ねた結果、これら各化合物が有して
いる上記の薬理作用からは予測困難なアポトーシス調整
作用（抑制乃至促進作用）を有していることを見い出し
た。本発明は、斯かる知見に基づき完成されたものであ
る。The present inventor has conducted further studies on the 2,3-dihydro-1H-indene derivative represented by the above general formula (1) and salts thereof, and as a result, the above-mentioned pharmacological action of each of these compounds has been demonstrated. From this, it was found that it has an apoptosis regulation action (suppression or promotion action) that is difficult to predict. The present invention has been completed based on such knowledge.

【０００６】即ち、本発明は、上記一般式（１）で表わ
される２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びそ
の塩から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有
するアポトーシス調整剤に係る。That is, the present invention relates to an apoptosis regulator containing, as an active ingredient, at least one selected from the 2,3-dihydro-1H-indene derivative represented by the above general formula (1) and a salt thereof.

【０００７】従来より、細胞死は２つのタイプのメカニ
ズムにより起こるとされている。その一つは壊死と呼ば
れてきた古典的細胞死である。これは形態学的には、ミ
トコンドリアの著しい膨化、細胞質の膨化、核の変性と
それに続く細胞の崩壊及び自己融解により特徴付けら
れ、受動的及び偶発的に生じる。組織壊死は、細胞に対
する物理的外傷や化学的毒物等により一般に認められ
る。It has been traditionally believed that cell death occurs by two types of mechanisms. One is classical cell death, which has been called necrosis. It is morphologically characterized by marked mitochondrial swelling, cytoplasmic swelling, nuclear degeneration followed by cell disruption and autolysis, and occurs passively and accidentally. Tissue necrosis is generally recognized by physical trauma to cells, chemical poisons, and the like.

【０００８】もう一つのタイプはアポトーシス（プログ
ラムされた細胞死）と呼ばれる（Kerr,J.F.R. and Wyll
ie,A.H., Br.J.Cancer, 26, 239(1972)）。これは生理
学上の種々の条件下に起こるとされている。その形態学
的特徴としては、周囲の細胞との接触の欠乏、細胞質の
濃縮化、エンドヌクレアーゼの活性に関連したクロマチ
ンの凝縮及び核凝縮、核の分節化等を挙げることがで
き、更に細胞表面の微絨毛の消失、細胞表面の平滑化
（細胞表面の水疱形成：membrance blebbing）等も観察
され、またエンドヌクレアーゼ活性により、ＤＮＡのヌ
クレオソーム単位が１８０〜２００塩基長のＤＮＡに断
片化する現象も観察され、アポティック体の細胞の最終
断片は隣接する細胞により貧食される機構として論じら
れている（Duvall,E. and Wyllie,A.H., Immunology To
day, 7(4), 115-119(1986) : Science, 245, 301-305(1
989)）。上記ウイリーはまたグルココルチコイドにより
誘発される胸腺細胞のアポトーシスが、細胞内のエンド
ヌクレアーゼの活性化を伴うことを報告している（Wyll
ie,A.H., Nature, 284,555-556(1986)）。エンドヌクレ
アーゼ活性によりアポトーシスを受ける細胞のＤＮＡ
は、オリゴヌクレオチドレベルまで断片化され、これは
アガロースゲル電気泳動を行なうことにより容易に確認
できる。Another type is called apoptosis (programmed cell death) (Kerr, JFR and Wyll
ie, AH, Br.J. Cancer, 26 , 239 (1972)). This is said to occur under various physiological conditions. Its morphological features include lack of contact with surrounding cells, cytoplasmic enrichment, chromatin condensation and nuclear condensation associated with endonuclease activity, nuclear segmentation, and more. Of microvilli, cell surface smoothing (cell surface blistering: membrance blebbing), etc. are observed, and due to endonuclease activity, a nucleosome unit of DNA is fragmented into a DNA having a length of 180 to 200 bases. Observed and discussed as a mechanism by which the final fragment of apoptotic cells is phagocytosed by neighboring cells (Duvall, E. and Wyllie, AH, Immunology To.
day, 7 (4), 115-119 (1986): Science, 245 , 301-305 (1
989)). Willy also reported that glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is accompanied by activation of intracellular endonucleases (Wyll
ie, AH, Nature, 284 , 555-556 (1986)). DNA of cells undergoing apoptosis by endonuclease activity
Is fragmented to the oligonucleotide level, which can be easily confirmed by performing agarose gel electrophoresis.

【０００９】上記アポトーシスとは、発生や分化や組織
のターンオーバーの過程でみられる、予めプログラムさ
れた細胞死であると考えられる（Wyllie,A.H., et al.,
Int.Rev. Cytol., 68,251-306(1980)）。The above-mentioned apoptosis is considered to be pre-programmed cell death observed in the process of development, differentiation and tissue turnover (Wyllie, AH, et al.,
Int. Rev. Cytol., 68 , 251-306 (1980)).

【００１０】また、胸腺細胞ではカルシウムイオノファ
でカルシウム濃度を上昇させたり、ｃＡＭＰ濃度を上昇
させたりすると、上記アポトーシスに特徴的なＤＮＡの
断片化が促進される（Wyllie,A.H., et al., J.Patho
l., 142,67-77(1984) ）ことから、アポトーシスのメカ
ニズムに、カルシウムイオンやｃＡＭＰの関与が推測さ
れている。更にレチノイン酸やカルシウムイオノファに
より分化誘導されるＨＬ−６０細胞のアポトーシスが、
上記の例として報告されている（Martin,S.J., et al.,
J.Immunol.,145,1859-1867(1990) : Martin,S.J., et
al., Clin. Exp.Immunol., 79,448-453(1990) ）。Further, in thymocytes, when the calcium concentration or the cAMP concentration is increased by calcium ionophore, the fragmentation of DNA characteristic of the apoptosis is promoted (Wyllie, AH, et al., J.Patho
, 142 , 67-77 (1984)), the involvement of calcium ions and cAMP in the mechanism of apoptosis is presumed. Furthermore, apoptosis of HL-60 cells, which is induced to differentiate by retinoic acid or calcium ionophore,
Reported as an example of the above (Martin, SJ, et al.,
J. Immunol., 145 , 1859-1867 (1990): Martin, SJ, et
al., Clin. Exp. Immunol., 79 , 448-453 (1990)).

【００１１】上記アポトーシスは、胚発生過程や正常の
細胞回転の盛んな細胞（例えば肝、副腎皮質、前立腺
等）にみられる生理的細胞死から、グルココルチコイド
処理、サイトトキシック−Ｔ細胞による細胞障害、ホル
モン依存性組織の萎縮、放射線照射、ＮＫ細胞、キラー
細胞、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、リンホトキシン（Ｌ
Ｔ）等のサイトカイン類等によっても誘導されると報告
されている（Wyllie,A.H.,et al., Int.Rev.Cytol.,68,
251(1980) : Duvall,E. and Wyllie,A.H., Immunology
Today, 7,115-119(1986) : Sellins,K.S., et al., J.I
mmunol., 139,3199(1987) : Yamada,T., et al., Int.
J.Radiat. Biol.,53,65(1988) : Wyllie,A.H., Nature,
284,555(1980) : Schmid,D.S., et al., Proc.Natl.Ac
ad.Sci., USA, 83,1881-1885(1986) : John,C., et a
l., J.Immunol., 129 (4),1782-1787(1982) : Howell,
D.M., et al., J.Immunol., 140,689-692(1988) : Gill
ian, B.,et al., Eur.J.Immunol,17,689-693(1987)）。
その他に、ある種の抗体、例えば抗ＣＤ３抗体、抗ＡＰ
Ｏ−Ｉ抗体、抗Ｆａｓ抗体等（Trauth,B.C., et al., S
cience, 245,301-305(1989) : Smith,C.A., et al., Na
ture, 337,181-184(1989): Tadakuma,T., et al., Eur.
J. Immunol., 20,779(1990)）でもアポトーシスが誘導
され、悪性腫瘍での自然退縮（中村保夫他、臨床皮膚
科, 35(4), 289-295(1981)）の所見においてもアポトー
シスが確認されている。The above-mentioned apoptosis is caused by physiological cell death observed in cells in which embryonic development and normal cell turnover are active (eg, liver, adrenal cortex, prostate, etc.), glucocorticoid treatment, and cytotoxicity due to cytotoxic-T cells. , Hormone-dependent tissue atrophy, irradiation, NK cells, killer cells, tumor necrosis factor (TNF), lymphotoxin (L
It is also reported to be induced by cytokines such as T) (Wyllie, AH, et al., Int. Rev. Cytol., 68 ,
251 (1980): Duvall, E. And Wyllie, AH, Immunology
Today, 7 , 115-119 (1986): Sellins, KS, et al., JI
mmunol., 139 , 3199 (1987): Yamada, T., et al., Int.
J.Radiat. Biol., 53 , 65 (1988): Wyllie, AH, Nature,
284 , 555 (1980): Schmid, DS, et al., Proc.Natl.Ac
ad.Sci., USA, 83 , 1881-1885 (1986): John, C., et a
l., J. Immunol., 129 (4), 1782-1787 (1982): Howell,
DM, et al., J. Immunol., 140 , 689-692 (1988): Gill
ian, B., et al., Eur. J. Immunol, 17 , 689-693 (1987)).
In addition, certain antibodies such as anti-CD3 antibody and anti-AP
O-I antibody, anti-Fas antibody, etc. (Trauth, BC, et al., S
cience, 245 , 301-305 (1989): Smith, CA, et al., Na
ture, 337 , 181-184 (1989): Tadakuma, T., et al., Eur.
J. Immunol., 20 , 779 (1990)) also induced apoptosis, and apoptosis was also observed in spontaneous regression in malignant tumor (Yasuo Nakamura et al., Clinical Dermatology, 35 (4), 289-295 (1981)). Has been confirmed.

【００１２】一方、上記アポトーシスを抑制するものと
しては、ＲＮＡ合成阻害剤であるアクチノマイシンＤ
（Actinomycin D)、蛋白合成阻害剤であるサイクロヘキ
シミド（Cycloheximide)、カルシウムイオン（Ｃａ²⁺）
キレート剤等が報告されており、その他に免疫抑制剤で
あるサイクロスポリンＡ、造血系サイトカイン（ＩＬ−
３、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ等）、ＩＬ−２、ｂｃｌ
−２遺伝子産物等もアポトーシスを抑制すると報告され
ている（Cohen,J.J. J.Immunol., 132,38(1984): Wylli
e,A.H., et al., J.Pathol., 142,67(1984) :Shi,Y., e
t al., Nature,339,625(1989) : Williams, G.T.，et a
l., Nature, 343,76(1990) : Nielo,M.A.,J.Immunol.,
143,4166(1989) : Vaux,D.L., et al., Nature, 335,44
0(1988)）。但し、上記サイクロヘキシミドは急性白血
病細胞に、アクチノマイシンＤは小腸陰窩細胞に、両者
がＨＬ−６０細胞にそれぞれアポトーシスを誘導する報
告（Martin,S.J., et al., J.Immunol., 145,1859-1867
(1990)）がある。逆にサイクロヘキシミドは、Ｘ線照射
前に存在し、Ｘ線照射により増加したリンパ球系腫瘍細
胞のアポトーシスを抑制し、アクチノマイシンＤが上記
アポトーシスを増加させる旨の報告もあり、アポトーシ
スの抑制又は促進には、細胞の種類や条件、その他の機
序の関与も示唆されている（五十嵐忠彦ら、日本血液学
会誌、51(2),144(1988) ）。いずれにせよ、細胞の分
化、増殖、成熟がアポトーシスと密接な関係にあり、之
等細胞の分化、増殖等に関与する作用を有する物質がア
ポトーシスにも関係すると考えられている。On the other hand, actinomycin D, which is an RNA synthesis inhibitor, is a substance that suppresses the apoptosis.
(Actinomycin D), protein synthesis inhibitor cycloheximide (Cycloheximide), calcium ion (Ca ²⁺ ).
Chelating agents and the like have been reported, and other immunosuppressants such as cyclosporin A and hematopoietic cytokines (IL-
3, GM-CSF, G-CSF, etc.), IL-2, bcl
-2 gene product is also reported to suppress apoptosis (Cohen, JJJ Immunol., 132 , 38 (1984): Wylli
e, AH, et al., J. Pathol., 142 , 67 (1984): Shi, Y., e
t al., Nature, 339 , 625 (1989): Williams, GT, et a
l., Nature, 343 , 76 (1990): Nielo, MA, J.Immunol.,
143 , 4166 (1989): Vaux, DL, et al., Nature, 335 , 44
0 (1988)). However, cycloheximide induces apoptosis in acute leukemia cells, actinomycin D induces intestinal crypt cells, and both induce apoptosis in HL-60 cells (Martin, SJ, et al., J. Immunol., 145 , 1859-1867
(1990)). On the other hand, cycloheximide is present before X-ray irradiation and suppresses apoptosis of lymphoid tumor cells increased by X-ray irradiation, and there is a report that actinomycin D increases the apoptosis. It has been suggested that cell types, conditions, and other mechanisms are involved in the suppression or promotion (Tadahiko Igarashi et al., Journal of the Hematological Society of Japan, 51 (2), 144 (1988)). In any case, the differentiation, proliferation, and maturation of cells are closely related to apoptosis, and it is considered that substances having an action related to the differentiation, proliferation, etc. of such cells are also involved in apoptosis.

【００１３】また最近、アポトーシスに関連する治療法
として、抗Ａｐｏ−Ｉ抗体による癌の治療も試みられて
いる。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の内で、汎血球減少
が主体である不応性貧血（ＲＡ）及び鉄芽球性貧血（Ｒ
ＡＲＳ）では、造血細胞の分化誘導剤としてのレチノイ
ン酸や活性型ビタミンＤ₃と、血小板産生細胞の過剰ア
ポトーシスを抑制するアポトーシス調節剤としてのＧＭ
−ＣＳＦやＩＬ−３の併用が望ましく、また同ＭＤＳの
内、芽球の増殖が優勢なＲＡＥＢや該ＲＡＥＢの移行期
（ＲＡＥＢ−ｔ）では、上記レチノイン酸や活性型ビタ
ミンＤ₃が、造血細胞の芽球への分化を誘導する分化誘
導剤として、またエトポジド（etoposide ）やアクラル
ビシン（aclarubicin ）が芽球の増殖を抑制（アポトー
シス促進）するアポトーシス調節剤として、それぞれ働
くとされている（Shibuya,T., J.Clinical and Experim
ental Medicine，160 (5),319-323(1992) ）。Recently, as a therapeutic method related to apoptosis, treatment of cancer with anti-Apo-I antibody has been attempted. Among myelodysplastic syndromes (MDS), pancytopenia-based refractory anemia (RA) and sideroblastic anemia (R)
In ARS), retinoic acid or active vitamin D ₃ as a hematopoietic cell differentiation inducer and GM as an apoptosis regulator that suppresses excessive apoptosis of platelet-producing cells.
-CSF or IL-3 is preferably used in combination, and in RAEB in which the proliferation of blasts is predominant in the MDS and in the transitional period of RAEB (RAEB-t), the retinoic acid and active vitamin D ₃ are hematopoietic. It is said to act as a differentiation inducer that induces the differentiation of cells into blast cells, and as an apoptosis regulator that suppresses blast proliferation (promotes apoptosis) by etoposide and aclarubicin (Shibuya). , T., J. Clinical and Experim
ental Medicine, 160 (5), 319-323 (1992)).

【００１４】また、ムラカミらは抗赤血球自己抗体を発
現しているトランスジェニックマウスの約半数が自己の
トレランスの消失により自己免疫疾患を発症するとし、
正常マウスのような自己抗原と自己抗体産生細胞の反応
によるアポトーシス誘導による自己抗体産生細胞の除去
能の欠如によると報告している（Murakami,M., et al.,
Nature,357,77-80(1992) ）。Further, Murakami et al. Said that about half of transgenic mice expressing anti-erythrocyte autoantibodies develop autoimmune disease due to loss of self tolerance.
It has been reported to be due to the lack of ability to eliminate autoantibody-producing cells by inducing apoptosis by the reaction of autoantigen-producing cells with those in normal mice (Murakami, M., et al.,
Nature, 357 , 77-80 (1992)).

【００１５】ワタナベ−フクナガらはＭＲＬｌｐｒ／ｌ
ｐｒマウスにおいては、アポトーシスに関与するＦａｓ
分子に異常があり、胸腺における自己反応性Ｔ細胞のネ
ガティブセレクション（アポトーシス）機構がうまく作
動せず、その結果自己免疫疾患が発症すると示唆してい
る（Watanabe-Fukunaga,R., et al., Nature, 356, 314
- 317(1992) ）。Watanabe-Fukunaga et al. MRLlpr / l
Fas involved in apoptosis in pr mice
It has been suggested that there is an abnormality in the molecule and that the negative selection (apoptosis) mechanism of autoreactive T cells in the thymus does not work well, resulting in the development of autoimmune disease (Watanabe-Fukunaga, R., et al.,. Nature, 356 , 314
-317 (1992)).

【００１６】モンタニエらは、ＨＩＶ−感染患者からの
Ｔリンパ球抽出物中には、ＤＮＡのアポプテッイックな
バンドが観察され、この現象は無症候群のＨＩＶ感染患
者の９０％、ＡＩＤＳとＡＲＣ患者の１００％に観察さ
れ、アポトーシスの誘導がＨＩＶ感染患者においても亢
進していると報告している（Montagnier,L., et al.,Si
xieme Colloque des Cent Gardes, 9-17(1991) ）。Montagne et al. Observed an apoptotic band of DNA in T lymphocyte extracts from HIV-infected patients, a phenomenon which was observed in 90% of HIV-infected patients without syndrome and in 100% of AIDS and ARC patients. %, And the induction of apoptosis is also enhanced in HIV-infected patients (Montagnier, L., et al., Si.
xieme Colloque des Cent Gardes, 9-17 (1991)).

【００１７】ニワトリ発生期の細胞死において、ニワト
リ胚にＮＧＦ（nerve growth factor ：神経細胞の神経
節で細胞の肥大と神経繊維の伸長を促進する蛋白質）を
前投与すると、この発生過程の神経細胞死は完全に抑制
され（Hamburger,V., et al., J.Neurosci., 1,60(198
1) ）、逆にＮＧＦに対する抗体を投与すると、幼若な
交感神経細胞の約９０％が失われてしまうと報告されて
いる（Levi-Montalchini,R. and Booker,B., Proc.Nat
l. Acad.Sci.,USA,46,384(1960)）。During cell death during chick development, pre-administration of NGF (nerve growth factor: a protein that promotes cell hypertrophy and nerve fiber elongation in the ganglion of nerve cells) to the chicken embryo leads to the development of these nerve cells. Death was completely suppressed (Hamburger, V., et al., J. Neurosci., 1 , 60 (198
1)), conversely, it is reported that about 90% of juvenile sympathetic neurons are lost when an antibody against NGF is administered (Levi-Montalchini, R. and Booker, B., Proc.Nat).
L. Acad. Sci., USA, 46 , 384 (1960)).

【００１８】クラークは自然に起こる神経細胞死を３つ
のタイプに区別し、その中のタイプＩの形態学的特徴が
アポトーシスと一致し、更に成長因子除去による細胞死
ではタイプＩの細胞死が起こり、ＤＮＡの断片化も起る
ことから、これをアポトーシスと考えている（Clark,P.
G.H., Anat Embryol., 181,195(1990) : J.Neurosci.,
1,60(1981) :Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,46,384(1960) :
Rawson,C. L., et al., J.Cell.Biol., 113,671(1991)
）。Clark distinguishes naturally occurring neuronal cell death into three types, of which the type I morphological features are consistent with apoptosis, and growth factor ablation cell death leads to type I cell death. , Fragmentation of DNA also occurs, so this is considered to be apoptosis (Clark, P.
GH, Anat Embryol., 181 , 195 (1990): J. Neurosci.,
1 , 60 (1981): Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 46 , 384 (1960):
Rawson, CL, et al., J. Cell. Biol., 113 , 671 (1991)
).

【００１９】エドワーズらはＮＧＦにより交感神経細胞
のプログラム死を抑制できると報告しており、アポトー
シスがＮＧＦにより抑制できると考えられる（Edwards,
S.N., et al., J.Neurochemistry, 57(6),2140-2143(19
91) ）。Edwards et al. Reported that NGF can suppress programmed death of sympathetic nerve cells, and it is considered that apoptosis can be suppressed by NGF (Edwards,
SN, et al., J. Neurochemistry, 57 (6), 2140-2143 (19
91)).

【００２０】フィッシャーらの報告によれば、老化して
学習障害を持ったラットにＮＧＦを投与すると、アルツ
ハイマー病で障害を受けることが知られている前脳基底
野コリン作動性神経細胞に該ＮＧＦが作用して、学習障
害の回復がみられる（Fischer,W., et al., Nature, 32
9,65(1987) : Barde Y-A, Neuron, 2,1525(1989) : Hat
anaka, H., Develop Brain Res.,30,47(1986) : Hatana
ka, H., et al., Develop Brain Res., 39,85(1988)
）。畠中らは、上記ＮＧＦが分化、成熟、生存維持、
老化の防止に有効で、神経細胞の障害に対する保護回復
作用、脳の老化に伴う神経疾患、特にアルツハイマー病
での神経細胞死の防止作用を示す可能性を示唆している
（畠中寛、代謝、28,891-899(1991)）。[0020] According to the report of Fischer et al., When NGF is administered to aged and learning-impaired rats, it is known that cholinergic neurons of the basal forebrain are known to be damaged by Alzheimer's disease. And the recovery of learning disabilities is observed (Fischer, W., et al., Nature, 32
9 , 65 (1987): Barde YA, Neuron, 2,1525 (1989): Hat
anaka, H., Develop Brain Res., 30 , 47 (1986): Hatana
ka, H., et al., Develop Brain Res., 39 , 85 (1988)
). Hatanaka et al.
It is effective in preventing aging, and suggests that it may have a protective and restoring effect on nerve cell damage, and a neurodegenerative disease associated with aging of the brain, especially in preventing neuronal cell death in Alzheimer's disease (Hanaka Hatake, metabolism, metabolism, 28, 891-899 (1991)).

【００２１】アルツハイマー病の発症機構との因果関係
を考える上で重要なβ−アミロイド蛋白質、神経伝達物
質の一つであるグルタミン酸や、パーキンソン病モデル
として知られる１−メチル−４−フェニルピリジニウム
イオン（ＭＰＰ⁺）によるニューロン死、或いはプリオ
ン蛋白質による神経疾患等は、アポトーシスが関与して
いることが示唆されている（榎戸靖，畠中寛、癌と化学
療法、 21(5),615-620(1994), Gianluigi Forloni et.a
l., Neuro Report, 4 (5),523-526(1993))。更に、筋萎
縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハ
イマー病等の神経変性疾患の一次的原因には多因子が関
与するが、それら変性疾患の二次的原因は神経発育因子
の機能低下によるアポトーシスであるという報告もある
（AndrewEisen and Charles Krieger,Can.J. Neurol. S
ci.20(4),286-296(1993))。またパーキンソン病の黒質
ニューロン変性には、ドーパミンにより誘導されたアポ
トーシスが関与していることが示唆されるという報告も
ある（Ilan Ziv et.al., Neuroscience Letters,170 ,1
36-140(1994)）。また筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に
おいても、酸素ストレスとニューロン障害との関係が注
目されており、酸素によって誘導されるニューロン死が
細胞内に備わる自殺メカニズムを介したアポトーシスと
類似の機構によって誘導されることが示唆されている
（榎戸靖，畠中寛、癌と化学療法、21(5),615-620(199
4) ）。In considering the causal relationship with the pathogenic mechanism of Alzheimer's disease, β-amyloid protein which is important, glutamic acid which is one of neurotransmitters, and 1-methyl-4-phenylpyridinium ion (known as Parkinson's disease model ( It has been suggested that apoptosis is involved in neuronal death due to MPP ⁺ , or neurological disease due to prion protein (Yasushi Enokido, Hiroshi Hatanaka, Cancer and Chemotherapy, 21 (5), 615-620 (1994). ), Gianluigi Forloni et.a
L., Neuro Report, 4 (5), 523-526 (1993)). Furthermore, although multiple factors are involved in the primary causes of neurodegenerative diseases such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS), Parkinson's disease, and Alzheimer's disease, the secondary cause of these degenerative diseases is the function of nerve growth factor. There is also a report that it is apoptosis due to decrease (Andrew Eisen and Charles Krieger, Can.J. Neurol. S
ci. 20 (4), 286-296 (1993)). Also in the substantia nigra neurons degeneration of Parkinson's disease, reported that the apoptosis induced by dopamine is involved is suggested also (Ilan Ziv et.al., Neuroscience Letters, 170, 1
36-140 (1994)). Also in amyotrophic lateral sclerosis (ALS), attention has been paid to the relationship between oxygen stress and neuronal damage, and oxygen-induced neuronal death is a mechanism similar to apoptosis via a suicide mechanism provided in the cell. Have been suggested to be induced by Yasushi Enokido, Hiroshi Hatanaka, Cancer and Chemotherapy, 21 (5), 615-620 (199
Four) ).

【００２２】更に薬剤耐性ウィルス性肝炎の肝障害にお
いては、薬剤又はウィルス感染により、直接的又は免疫
的機序を介するアポトーシス亢進が、肝障害に関与して
いると考えられている（Bursh,W., et al., TiPS, 13,2
45-251(1992)）。Further, in the liver injury of drug-resistant viral hepatitis, it is considered that, due to drug or virus infection, the promotion of apoptosis via direct or immunological mechanism is involved in the liver injury (Bursh, W. ., et al., TiPS, 13 , 2
45-251 (1992)).

【００２３】一方、肝臓ではマイトジェンによって肝細
胞が増殖し、過形成状態をもたらすことが知られてお
り、この状態は肝細胞の脱落壊死、即ちアポトーシスに
より正常化される（Kerr,J.F. et al., Br.J.Cancer,2
6, 239-257 (1972)）。該アポトーシスは肝臓におい
て、過形成肝、過形成性結節及び肝癌等で認められてお
り（Columbano,A., et al., Lab.Invest., 52, 670-675
(1985) : Columbano,A. et al., Am.J.Pathol., 116, 4
41-446(1984)）、ケラーらはアポトーシスは炎症や線維
増殖を伴わないと述べている（Kerr,J.F., et al., Lan
cet,2,827-828(1979)）。之等のことから、急性及び慢
性肝炎に対してアポトーシスを抑制することができれ
ば、之等肝炎の治療が可能と考えられる。また慢性肝炎
が肝硬変、肝癌に移行していく過程では、上記アポトー
シスは抑制状態にあり、これがサイトトキシックＴ細胞
による肝細胞の炎症に続く線維化、肝硬変へと進展する
ものと考えられ、該アポトーシスを促進させることがで
きれば、肝炎の抑制及び肝硬変への進展が防止できると
考えられる。On the other hand, in the liver, it is known that hepatocytes proliferate due to mitogen and lead to a hyperplastic state, and this state is normalized by desquamatory necrosis of hepatocytes, that is, apoptosis (Kerr, JF et al. , Br.J.Cancer, 2
6 , 239-257 (1972)). The apoptosis is observed in the liver in hyperplastic liver, hyperplastic nodule, liver cancer and the like (Columbano, A., et al., Lab.Invest., 52 , 670-675).
(1985): Columbano, A. et al., Am.J.Pathol., 116 , 4
41-446 (1984)), Keller et al. State that apoptosis is not associated with inflammation or fibrosis (Kerr, JF, et al., Lan.
cet, 2 , 827-828 (1979)). From these facts, if it is possible to suppress apoptosis for acute and chronic hepatitis, it is considered that such hepatitis can be treated. In the process of chronic hepatitis transitioning to liver cirrhosis and liver cancer, the above-mentioned apoptosis is in a suppressed state, and it is considered that this progresses to fibrosis and liver cirrhosis following inflammation of hepatocytes by cytotoxic T cells. It is considered that the suppression of hepatitis and the development of liver cirrhosis can be prevented if it can be promoted.

【００２４】本発明によれば、上記一般式（１）で表わ
される２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びそ
の塩から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有
するアポトーシス調整剤が提供される。According to the present invention, there is provided an apoptosis regulator containing as an active ingredient at least one selected from the 2,3-dihydro-1H-indene derivative represented by the above general formula (1) and a salt thereof. .

【００２５】本発明アポトーシス調整剤は、アポトーシ
ス調整能を有しており、この作用に基づいて、前述した
ように各種の疾患の治療及び予防に有用である。より具
体的には、本発明調整剤は、例えば、癌；ＡＩＤＳ、Ａ
ＲＣ（ＡＩＤＳ関連疾患）、ＡＴＬ（成人Ｔ細胞白血
病：Adult T-cell leucemia ）、毛様細胞性白血病（Ha
iry cell leucemia ）、脊髄症（ＨＡＭ／ＴＳＰ）、呼
吸器障害（ＨＡＢ／ＨＡＢＡ）、関節症（ＨＡＡＰ）、
ブドウ膜炎（ＨＡＵ）等のＨＩＶ又はＨＴＬＶ−１関連
疾患やＣ型肝炎等のレトロウイルス関連疾患；ＳＬＥ
（全身性エリテマトーデス）や慢性関節リウマチ（Ｒ
Ａ）等の膠原病、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、
原発性胆汁性肝硬変、突発性血小板減少性紫斑病（Idio
pathic Thrombocytopenic Purapura: ITP) 、自己免疫
性溶血性貧血、重症筋無力症、橋本病、インスリン依存
型（Ｉ型）糖尿病等の自己免疫疾患；骨髄異形成症候群
（ＭＤＳ）、周期性血小板減少症、再生不良性貧血、突
発性血小板減少症、汎発性血管内凝固症等の血小板減少
を伴う各種疾患；Ｃ型、Ａ型、Ｂ型、Ｆ型等のウイルス
性や薬剤性の肝炎及び肝硬変等の肝疾患；アルツハイマ
ー病及びアルツハイマー型老年痴呆症；パーキンソン
病；ハンチントン病；プリオン疾患；心筋炎；、ＡＲＤ
Ｓ（成人呼吸急迫症候群）；筋萎縮性側索硬化症（ＡＬ
Ｓ）；感染症；前立腺肥大症；子宮筋腫；気管支喘息；
動脈硬化症；各種先天性奇形症；腎炎；老人性白内障；
慢性疲労症候群（Chronic Fatigue syndrome: CFS)及び
筋ジストロフィー（Myotonic dystrophy）；ＨＩＶ関連
記憶障害等の記憶障害等の各種疾患に好適に適用でき、
医薬品分野で有効である。The apoptosis-regulating agent of the present invention has an apoptosis-regulating ability, and based on this action, it is useful for the treatment and prevention of various diseases as described above. More specifically, the regulator of the present invention is, for example, cancer; AIDS, A
RC (AIDS related disease), ATL (Adult T-cell leucemia), Hairy cell leukemia (Ha
iry cell leucemia), myelopathy (HAM / TSP), respiratory disorder (HAB / HABA), arthropathy (HAAP),
HIV or HTLV-1 related diseases such as uveitis (HAU) and retrovirus related diseases such as hepatitis C; SLE
(Systemic lupus erythematosus) and rheumatoid arthritis (R
Collagen diseases such as A), ulcerative colitis, Sjogren's syndrome,
Primary biliary cirrhosis, idiopathic thrombocytopenic purpura (Idio
pathic Thrombocytopenic Purapura: ITP), autoimmune hemolytic anemia, myasthenia gravis, Hashimoto's disease, insulin-dependent (type I) diabetes and other autoimmune diseases; myelodysplastic syndrome (MDS), cyclic thrombocytopenia, Various diseases associated with thrombocytopenia such as aplastic anemia, idiopathic thrombocytopenia, generalized intravascular coagulation; viral and drug-induced hepatitis and cirrhosis such as C type, A type, B type, F type, etc. Diseases of Alzheimer's disease and senile dementia of the Alzheimer's type; Parkinson's disease; Huntington's disease; prion disease; myocarditis ;, ARD
S (Adult respiratory distress syndrome); Amyotrophic lateral sclerosis (AL
S); infection; benign prostatic hyperplasia; uterine fibroids; bronchial asthma;
Arteriosclerosis; various congenital malformations; nephritis; senile cataract;
Chronic Fatigue syndrome (CFS) and muscular dystrophy (Myotonic dystrophy); suitable for various diseases such as memory disorders such as HIV-related memory disorders,
Effective in the pharmaceutical field.

【００２６】[0026]

【発明の実施の形態】上記一般式（１）において示され
る各基は、より具体的にはそれぞれ次の通りである。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION More specifically, each group represented by the above general formula (1) is as follows.

【００２７】低級アルキル基としては、メチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、tert−ブチル、
ペンチル、ヘキシル、１−メチルプロピル、２−メチル
プロピル、１，１−ジメチルプロピル、１−メチルブチ
ル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２，２−ジ
メチルプロピル、２，３−ジメチルプロピル、１−メチ
ルペンチル、１，１−ジメチルブチル、１−エチルブチ
ル基等の炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖状のアルキル基
を例示できる。As the lower alkyl group, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, tert-butyl,
Pentyl, hexyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, 1,1-dimethylpropyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 2,2-dimethylpropyl, 2,3-dimethylpropyl, 1-methyl Examples thereof include linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms such as pentyl, 1,1-dimethylbutyl and 1-ethylbutyl groups.

【００２８】低級アルコキシ基としては、例えばメトキ
シ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキ
シ、tert−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ
基等の炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を
例示できる。Examples of the lower alkoxy group include linear or branched alkoxy groups having 1 to 6 carbon atoms such as methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy, pentyloxy and hexyloxy groups. it can.

【００２９】低級アルキレン基としては、例えばメチレ
ン、エチレン、トリメチレン、２−メチルトリメチレ
ン、２，２−ジメチルトリメチレン、１−メチルトリメ
チレン、メチルメチレン、エチルメチレン、テトラメチ
レン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン基等の炭素数１
〜６の直鎖又は分枝鎖状アルキレン基を例示できる。Examples of the lower alkylene group include methylene, ethylene, trimethylene, 2-methyltrimethylene, 2,2-dimethyltrimethylene, 1-methyltrimethylene, methylmethylene, ethylmethylene, tetramethylene, pentamethylene and hexamethylene. Number of carbon atoms such as 1
Examples of the straight chain or branched chain alkylene group of 6

【００３０】本発明の有効成分の内、１−〔４−（３−
メトキシフェニル）−１−ピペラジニル〕アセチルアミ
ノ−２，３−ジヒドロ−７−ヒドロキシ−２，２，４，
６−テトラメチル−１Ｈ−インデン又はその塩が特に好
適である。Among the active ingredients of the present invention, 1- [4- (3-
Methoxyphenyl) -1-piperazinyl] acetylamino-2,3-dihydro-7-hydroxy-2,2,4.
6-Tetramethyl-1H-indene or a salt thereof is particularly suitable.

【００３１】本発明アポトーシス調整剤は、その有する
アポトーシス調整能に加えて、細胞の分化誘導作用、癌
細胞の増殖抑制作用、制癌作用、抗レトロウィルス作
用、記憶障害改善作用、サイトカイン産生抑制作用等を
有しており、例えば制癌剤、癌転移抑制剤、ＨＩＶ関連
記憶障害等の記憶障害改善剤、アルツハイマー病の治療
及び予防剤、抗レトロウィルス剤、サイトカイン産生抑
制剤等として、殊に好適に使用することができる。The apoptosis-regulating agent of the present invention has, in addition to its apoptosis-regulating ability, a cell differentiation-inducing action, a cancer cell growth-inhibiting action, a carcinostatic action, an antiretroviral action, a memory disorder-improving action, and a cytokine production-inhibiting action. And the like, and is particularly preferably used as, for example, an anticancer agent, a cancer metastasis suppressor, a memory disorder improving agent such as HIV-related memory disorder, a therapeutic and preventive agent for Alzheimer's disease, an antiretroviral agent, a cytokine production inhibitor, etc. Can be used.

【００３２】本発明アポトーシス調整剤は、例えば制癌
剤として用いる場合、その投与により、癌細胞を分化さ
せた後又は分化させることなく直接に、アポトーシスの
誘導を促進又は抑制でき、かくして制癌作用を発揮す
る。またこの場合、本発明調整剤は、その製剤形態及び
投与経路にかかわらず、例えばこれを癌の化学療法剤と
して知られている他の各種の制癌剤や放射線療法と併用
することができる。かくして、本発明の有効成分化合物
は優れた制癌効果を奏し得るため、併用する他の制癌剤
の効果を一層助長し、相乗効果を発揮させることができ
る。従って、併用する制癌剤を通常用いられる量よりか
なり少量とする場合でも、充分な癌治療効果が得られ、
これにより併用制癌剤の副作用の軽減化をはかることが
できる。かかる化学療法剤としては、例えば５−フルオ
ロウラシル（５−ＦＵ、協和発酵工業株式会社製）、マ
イトマイシン（Mitomycin-C 、同上社製）、フトラフー
ル（ＦＴ−２０７、大鵬薬品工業株式会社製）、エンド
キサン（Endoxan 、塩野義製薬株式会社製）、トヨマイ
シン（Toyomicin 、武田薬品工業株式会社製）等を例示
できる。When the apoptosis-regulating agent of the present invention is used as, for example, a carcinostatic agent, its administration can promote or suppress the induction of apoptosis directly after or without differentiating cancer cells, thus exerting a carcinostatic action. To do. In this case, the regulator of the present invention can be used in combination with, for example, various other anticancer agents or radiotherapy known as chemotherapeutic agents for cancer, regardless of the formulation form and administration route. Thus, since the active ingredient compound of the present invention can exhibit an excellent anticancer effect, it can further promote the effects of other anticancer agents used in combination and exert a synergistic effect. Therefore, even if the amount of the anticancer drug used in combination is considerably smaller than the amount usually used, a sufficient cancer therapeutic effect can be obtained,
This can reduce the side effects of the combined anticancer drug. Examples of such chemotherapeutic agents include 5-fluorouracil (5-FU, manufactured by Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.), mitomycin (Mitomycin-C, manufactured by Dojo Co., Ltd.), futrafur (FT-207, manufactured by Taiho Pharmaceutical Co., Ltd.), endoxan. (Endoxan, manufactured by Shionogi Pharmaceutical Co., Ltd.), toyomycin (Toyomicin, manufactured by Takeda Pharmaceutical Co., Ltd.), and the like.

【００３３】本発明アポトーシス調整剤は、ハンチント
ン病、パーキンソン病、ＡＬＳの治療及び予防剤として
も有用である。本発明の調整剤は、アポトーシスの抑制
により、上記治療及び予防効果を発揮する。The apoptosis regulator of the present invention is also useful as a therapeutic and preventive agent for Huntington's disease, Parkinson's disease and ALS. The regulator of the present invention exerts the above-mentioned therapeutic and prophylactic effects by suppressing apoptosis.

【００３４】本発明アポトーシス調整剤は、アルツハイ
マー病の治療及び予防剤としても有用である。この場
合、例えば古典的なアルツハイマー病やアルツハイマー
型老年痴呆症患者において、本発明アポトーシス調整剤
はアポトーシスの抑制によりＮＧＦ様作用を示し、かく
して上記治療及び予防効果を発揮する。またこの場合、
本発明アポトーシス調整剤は従来公知の脳循環改善剤や
脳代謝改善剤等のアルツハイマー病治療剤と併用するこ
とができ、之等の効果を助長し、之等による副作用を軽
減できる場合がある。The apoptosis regulator of the present invention is also useful as a therapeutic and preventive agent for Alzheimer's disease. In this case, for example, in patients with classic Alzheimer's disease and senile dementia of the Alzheimer's type, the apoptosis regulator of the present invention exhibits an NGF-like action by suppressing apoptosis, thus exerting the above-mentioned therapeutic and preventive effects. Also in this case,
The apoptosis-regulating agent of the present invention can be used in combination with a conventionally known therapeutic agent for Alzheimer's disease such as a cerebral circulation-improving agent and a cerebral metabolism-improving agent, and in some cases, it can promote the above-mentioned effects and reduce the side effects due to the other.

【００３５】また本発明アポトーシス調整剤は、抗レト
ロウィルス作用を有しており、前述した各種のＨＩＶ又
はＨＴＬＶ−Ｉ関連疾患やＣ型肝炎等のレトロウィルス
関連疾患に有用な抗レトロウィルス剤として好適に利用
できる。The apoptosis-regulating agent of the present invention has an antiretroviral activity and is useful as an antiretroviral agent useful for the above-mentioned various HIV- or HTLV-I-related diseases and retrovirus-related diseases such as hepatitis C. It can be used suitably.

【００３６】更に本発明アポトーシス調整剤は、アポト
ーシスを制御することにより、ＨＩＶ関連記憶障害等の
記憶障害の治療及び予防剤として利用することができ
る。Furthermore, the apoptosis regulator of the present invention can be used as a therapeutic and prophylactic agent for memory disorders such as HIV-related memory disorders by controlling apoptosis.

【００３７】また、本発明アポトーシス調整剤は、サイ
トカインの産生抑制作用を有し、サイトカインの異常産
生を伴う各種疾患、殊に細菌や寄生虫の感染症〔医学の
あゆみ，159, (8), 467-470, 471-474, 1991参照〕、Ｒ
Ａ〔Arthritic Rheum., 31,1041, 1988; 同34, 1125, 1
991; J.Immunol., 145, 4154, 1990;, 同22, 1907,199
2; Bri.J.Rheum., 31, 293, 1992; Eur.J.Immunol.,18,
1797, 1989等参照〕、ＡＲＤＳ〔Nature, 324, 73, 19
86 〕、ウィルス性肝炎の劇症化〔Lancet, ii, 72, 198
6〕、ＣＳＦ〔日本臨床，50 (11), 51-55, 1992; J. In
fectious Diseases, 165, 994-1000, 1992 等参照〕、
高γ−グロブリン血症、急性期蛋白質の増加を伴う心房
内粘液腫やキャストルマン（Castleman ）症候群〔Bloo
d,74, 1360, 1989; Eur. J. Immunol., 18, 1797, 198
9〕、メサンギウム増殖性腎炎（ＰＧＮ）〔治療学，24
(1), 49, 1990〕及び前述した各種の自己免疫疾患やＨ
ＩＶ又はＨＴＬＶ−１関連疾患に、サイトカイン産生抑
制剤として、好適に利用される。The apoptosis-regulating agent of the present invention has a cytokine production inhibitory action, and is associated with various diseases accompanied by abnormal production of cytokines, especially infectious diseases of bacteria and parasites [medical progress, 159 , (8), 467-470, 471-474, 1991], R
A [Arthritic Rheum., 31 , 1041, 1988; ibid 34 , 1125, 1
991; J. Immunol., 145 , 4154, 1990 ;, ibid 22 , 1907, 199.
2; Bri.J.Rheum., 31 , 293, 1992; Eur.J.Immunol., 18 ,
1797, 1989, etc.], ARDS [Nature, 324 , 73, 19
86], fulminant viral hepatitis [Lancet, ii, 72 , 198
6], CSF [Nippon Clinic, 50 (11), 51-55, 1992; J. In
fectious Diseases, 165 , 994-1000, 1992, etc.),
Hyper-γ-globulinemia, intraatrial myxoma with increased acute phase protein, and Castleman syndrome [Bloo
d, 74 , 1360, 1989; Eur. J. Immunol., 18 , 1797, 198
9], mesangial proliferative nephritis (PGN) [Therapeutics, 24
(1), 49, 1990] and various autoimmune diseases and H mentioned above.
It is preferably used as a cytokine production inhibitor for IV or HTLV-1 related diseases.

【００３８】本発明の上記一般式（１）で表わされる
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体には、光学異
性体も当然に包含される。The 2,3-dihydro-1H-indene derivative represented by the above general formula (1) of the present invention naturally includes optical isomers.

【００３９】本発明の上記一般式（１）で表わされる
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体は、医薬的に
許容される酸を作用させることにより容易に酸付加塩と
することができる。酸としては、例えば塩酸、硫酸、リ
ン酸、臭化水素酸等の無機酸、酢酸、シュウ酸、コハク
酸、マレイン酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエ
ン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、安息香酸等の有機
酸等を例示できる。本発明においては、これらの塩もま
た遊離形態の一般式（１）の化合物と同様に有効成分化
合物として用いることができる。The 2,3-dihydro-1H-indene derivative represented by the above general formula (1) of the present invention can be easily converted to an acid addition salt by reacting a pharmaceutically acceptable acid. Examples of the acid include inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and hydrobromic acid, acetic acid, oxalic acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, malonic acid, methanesulfonic acid, Examples thereof include organic acids such as benzoic acid. In the present invention, these salts can also be used as the active ingredient compound in the same manner as the compound of the general formula (1) in the free form.

【００４０】一般式（１）の化合物又はその塩は、これ
らを有効成分として医薬として利用するに当っては、通
常、一般的な医薬製剤の形態で用いられる。製剤は通常
使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、
表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤を用いて
調製される。この医薬製剤としては各種の形態が治療目
的に応じて選択でき、この代表的なものとして錠剤、丸
剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、
坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）、軟膏剤等が挙げられ
る。錠剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの
分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白
糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸
カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦
形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブ
ドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチ
ルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カ
リウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプ
ン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン
末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナ
トリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳
糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素
添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウ
リル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デン
プン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナ
イト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステ
アリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑
沢剤等が例示できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮
を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被
錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠と
することができる。丸剤の形態に成形するに際しては、
担体としてこの分野で従来公知なるものを広く使用で
き、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化
植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム
末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、
ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等が例示できる。坐剤
の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のも
のを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カ
カオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル
類、ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げることがで
きる。カプセル剤は常法に従い通常有効成分を上記で例
示した各種の担体と混合して硬質ゼラチンカプセル、軟
質ゼラチンカプセル等に充填して調製される。注射剤と
して調製される場合には、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌
され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これら液
剤、乳剤及び懸濁剤の形態に成形するに際しては、希釈
剤としてこの分野において慣用されているものを全て使
用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレングリ
コール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオ
キシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレン
ソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。
尚、この場合等張性の溶液を調製するに充分な量の食
塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有せ
しめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化
剤等を添加してもよい。更に必要に応じて着色剤、保存
剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を医薬製剤中
に含有せしめてもよい。ペースト、クリーム及びゲルの
形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば白色ラ
セリン、パラフィン、グリセリン、セルロース誘導体、
ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト等を
使用できる。The compound of the general formula (1) or a salt thereof is usually used in the form of a general pharmaceutical preparation when it is used as a drug as an active ingredient. Formulations are commonly used fillers, fillers, binders, moisturizers, disintegrants,
It is prepared using a diluent or excipient such as a surface active agent and a lubricant. As this pharmaceutical preparation, various forms can be selected according to the therapeutic purpose, and typical examples thereof include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules,
Examples include suppositories, injections (solutions, suspensions, etc.), ointments and the like. In the case of molding in the form of tablets, those conventionally known in this field can be widely used as carriers, for example, lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, starch, calcium carbonate, kaolin, crystalline cellulose, silicic acid, etc. Forming agents, water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution, gelatin solution, carboxymethylcellulose, shellac, methylcellulose, potassium phosphate, polyvinylpyrrolidone and other binders, dry starch, sodium alginate, agar powder, laminaran powder , Sodium hydrogen carbonate, calcium carbonate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, sodium lauryl sulfate, stearic acid monoglyceride, starch, disintegrants such as lactose, sucrose, stearin, cocoa butter, disintegration inhibitors such as hydrogenated oil, Quaternary ammonium bases, absorption promoters such as sodium lauryl sulfate, humectants such as glycerin and starch, adsorbents such as starch, lactose, kaolin, bentonite and colloidal silicic acid, purified talc, stearates, boric acid powder, Lubricants such as polyethylene glycol can be exemplified. Further, the tablet may be a tablet coated with a usual coating, if necessary, such as a sugar-coated tablet, a gelatin-coated tablet, an enteric-coated tablet, a film-coated tablet, a double tablet, or a multi-layer tablet. When molding in the form of pills,
As the carrier, those conventionally known in this field can be widely used, for example, excipients such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, kaolin, talc, etc., binders such as gum arabic powder, tragacanth powder, gelatin and ethanol. ,
Examples thereof include disintegrating agents such as laminaran and agar. In the case of molding in the form of suppositories, conventionally known carriers can be widely used, and examples thereof include polyethylene glycol, cocoa butter, higher alcohols, esters of higher alcohols, gelatin, and semisynthetic glycerides. Capsules are usually prepared by mixing active ingredients with the various carriers exemplified above and filling hard gelatin capsules, soft gelatin capsules and the like. When prepared as an injection, the solution, emulsion and suspension are preferably sterilized and isotonic with blood, and when formed into a form of these solution, emulsion and suspension, a diluent is used. Any of those commonly used in this field can be used as the above, and examples thereof include water, ethyl alcohol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxylated isostearyl alcohol, and polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters.
In this case, a sufficient amount of sodium chloride, glucose or glycerin to prepare an isotonic solution may be contained in the pharmaceutical preparation, and a usual solubilizing agent, buffer, soothing agent, etc. may be added. May be. Further, if necessary, a coloring agent, a preservative, a flavoring agent, a flavoring agent, a sweetening agent, and other pharmaceuticals may be contained in the pharmaceutical preparation. When formed into a paste, cream and gel form, for example, white racein, paraffin, glycerin, a cellulose derivative as a diluent,
Polyethylene glycol, silicone, bentonite, etc. can be used.

【００４１】本発明の一般式（１）の化合物又はその塩
を医薬製剤中に含有させるべき量は、特に限定されず広
範囲内から適宜選択されるが、通常医薬製剤中に１〜７
０重量％とするのがよい。The amount of the compound of the general formula (1) of the present invention or a salt thereof to be contained in the pharmaceutical preparation is not particularly limited and may be appropriately selected from a wide range.
It is preferable to set it to 0% by weight.

【００４２】上記医薬製剤の投与方法は特に制限はな
く、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾
患の程度等に応じた方法で投与される。例えば錠剤、丸
剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合
には経口投与される。また注射剤の場合には単独である
いはブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈
内投与され、更に必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮
下もしくは腹腔内投与される。坐剤は直腸内投与され
る。また軟膏剤の場合は塗布される。The administration method of the above-mentioned pharmaceutical preparation is not particularly limited, and it is administered according to various preparation forms, patient's age, sex and other conditions, degree of disease and the like. For example, tablets, pills, solutions, suspensions, emulsions, granules and capsules are orally administered. In the case of an injection, it may be administered alone or mixed with an ordinary replenisher such as glucose or amino acid, and then intravenously administered. Further, if necessary, it may be administered intramuscularly, intradermally, subcutaneously or intraperitoneally. Suppositories are administered rectally. In the case of an ointment, it is applied.

【００４３】上記医薬製剤の投与量は用法、患者の年
齢、性別その他の条件、疾患の程度等により適宜選択さ
れるが、通常有効成分である一般式（１）の化合物又は
その塩の量は１日当り体重１ｋｇ当り約０．２〜２００
ｍｇ程度とするのがよい。The dose of the above-mentioned pharmaceutical preparation is appropriately selected depending on the usage, the age and sex of the patient, other conditions, the degree of disease and the like, and the amount of the compound of the general formula (1) or a salt thereof which is usually the active ingredient is About 0.2 to 200 per 1kg body weight per day
It is good to set it to about mg.

【００４４】[0044]

【実施例】以下に製剤例及び薬理試験例を掲げる。EXAMPLES The following are preparation examples and pharmacological test examples.

【００４５】 製剤例１ １−〔４−（３−メトキシフェニル）−１−ピペラジニル〕アセチル アミノ−２，３−ジヒドロ−７−ヒドロキシ−２，２，４，６− テトラメチル−１Ｈ−インデン ２００ｍｇ ブドウ糖 ２５０ｍｇ注射用蒸留水 適 量 全 量 ５ｍｌ 注射用蒸留水に本発明の化合物及びブドウ糖を溶解させ
た後、５ｍｌのアンプルに注入し、窒素置換後１２１℃
で１５分間加圧滅菌を行なって上記組成物の注射剤を得
る。Formulation Example 1 1- [4- (3-Methoxyphenyl) -1-piperazinyl] acetyl amino-2,3-dihydro-7-hydroxy-2,2,4,6-tetramethyl-1H-indene 200 mg Glucose 250 mg Distilled water for injection Appropriate amount 5 ml Dissolved the compound of the present invention and glucose in distilled water for injection, poured into a 5 ml ampoule, and replaced with nitrogen 121 ° C.
After autoclaving for 15 minutes, an injection of the above composition is obtained.

【００４６】 製剤例２ １−〔４−（３−メトキシフェニル）−１−ピペラジニル〕アセチル アミノ−２，３−ジヒドロ−７−ヒドロキシ−２，２，４，６− テトラメチル−１Ｈ−インデン １００ｇ アビセル（商標名、旭化成（株）製） ４０ｇ コンスターチ ３０ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ ＴＣ−５（商品名、信越化学工業（株）製、 ヒドロキシプロピルメチルセルロース） １０ｇ ポリエチレングリコール−６０００ ３ｇ ヒマシ油 ４０ｇメタノール ４０ｇ 本発明の化合物、アビセル、コンスターチ及びステアリ
ン酸マグネシウムを取り混合研磨後、糖衣Ｒ１０ｍｍの
キネで打錠する。得られた錠剤をＴＣ−５、ポリエチレ
ングリコール−６０００、ヒマシ油及びメタノールから
なるフィルムコーティング剤で被覆を行ない、上記組成
のフィルムコーティング錠を製造する。Formulation Example 2 1- [4- (3-Methoxyphenyl) -1-piperazinyl] acetyl amino-2,3-dihydro-7-hydroxy-2,2,4,6-tetramethyl-1H-indene 100 g Avicel (trade name, manufactured by Asahi Kasei Co., Ltd.) 40 g Konstarch 30 g Magnesium stearate 2 g TC-5 (trade name, manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd., hydroxypropylmethylcellulose) 10 g Polyethylene glycol-6000 3 g Castor oil 40 g Methanol 40 g Present invention The compound, Avicel, corn starch and magnesium stearate are taken and mixed and polished, and then tableted with a sugar-coated R 10 mm kine. The obtained tablets are coated with a film coating agent consisting of TC-5, polyethylene glycol-6000, castor oil and methanol to produce a film coated tablet having the above composition.

【００４７】薬理試験例 供試薬物として１−〔４−（３−メトキシフェニル）−
１−ピペラジニル〕アセチルアミノ−２，３−ジヒドロ
−７−ヒドロキシ−２，２，４，６−テトラメチル−１
Ｈ−インデン（以下「供試化合物１」という）を用い、
下記の薬理試験を実施した。Example of Pharmacological Test As a reagent, 1- [4- (3-methoxyphenyl)-
1-Piperazinyl] acetylamino-2,3-dihydro-7-hydroxy-2,2,4,6-tetramethyl-1
Using H-indene (hereinafter referred to as "test compound 1"),
The following pharmacological tests were carried out.

【００４８】薬理試験１（ヒト骨髄性白血病細胞株ＨＬ
−６０に対する増殖抑制作用） 継代培養によって得られた細胞を２５℃、１２００回
転、５分間遠心洗浄（０５ＰＲ−２２型、日立製作所社
製）後、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ、Lot.41K1295,GIBC
O 社製）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（GIBCO 社製）
に懸濁した。生細胞数は、０．２％トリパンブルー（和
光純薬社製）溶液にて染色して、光学顕微鏡（ＢＨ−
２，オリンパス光学工業社製）下で計測し、１．２×１
０⁵セル／ｍｌに希釈調製した。Pharmacological test 1 (human myeloid leukemia cell line HL
Proliferation inhibitory effect on −60) The cells obtained by the subculture were washed by centrifugation at 25 ° C., 1200 rpm for 5 minutes (05PR-22 type, manufactured by Hitachi Ltd.), and then 10% fetal bovine serum (FBS, Lot.41K1295). , GIBC
RPMI-1640 medium (manufactured by O company) (manufactured by GIBCO)
Suspended in water. The number of viable cells was stained with a 0.2% trypan blue (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) solution, and an optical microscope (BH-
2, made by Olympus Optical Co., Ltd.), 1.2 × 1
The cells were diluted to 0 ⁵ cells / ml.

【００４９】９６ウェルマイクロプレート（CORNING 社
製，コード２５８６０）上の各穴に培養液（１０％ＦＢ
Ｓを含むＲＰＭＩ−１６４０培地）を０．１ｍｌ／ウェ
ルずつ添加した。次にマイクロプレートのＡ列に４０μ
ｇ／ｍｌに希釈調製した供試薬物を０．１ｍｌずつ加
え、２倍段階希釈をＨ列まで繰り返した。このように希
釈系列を作った９６ウェルマイクロプレートの全てのウ
ェルにＨＬ−６０細胞浮遊液（１．２×１０⁵セル／ｍ
ｌ）を０．１ｍｌずつ加えた。このマイクロプレートを
３７℃、５％ＣＯ₂条件下で３日間ＣＯ₂インキュベータ
ー（ナプコ社製）で培養した。培養後、２．５ｍｇ／ｍ
ｌＭＴＴ（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）
−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイ
ド、和光純薬社製）を含むＰＢＳ（−）溶液（Nissui P
harmaceutical 社製）を各ウェルに０．０１ｍｌ／ウェ
ルずつ加え、更に３７℃、５％ＣＯ₂条件下３時間培養
した。その後溶出液（１０％ＳＤＳを含む０．０１Ｎ塩
酸，和光純薬社製）を各ウェルに０．１ｍｌ／ウェルず
つ添加し、Ｏ．Ｄ．５８０ｎｍの吸光度（タイターテッ
クマルチスキャンＭＭＣ，Flow Laboratories 社製）を
測定した。この吸光度から、生細胞に取り込まれた色素
量を測定し、下記式に従って、細胞増殖抑制率（％）を
求めた。A culture solution (10% FB) was placed in each well of a 96-well microplate (CORNING, code 25860).
RPMI-1640 medium containing S) was added at 0.1 ml / well. Next, add 40μ to column A of the microplate.
0.1 ml of each of the reagents to be diluted to g / ml was added, and 2-fold serial dilution was repeated up to the H row. The HL-60 cell suspension (1.2 × 10 ⁵ cells / m 2) was added to all the wells of the 96-well microplate thus serially diluted.
l) was added in 0.1 ml increments. This microplate was cultured in a CO ₂ incubator (manufactured by Napco) for 3 days under the conditions of 37 ° C. and 5% CO ₂ . 2.5 mg / m after culturing
IMTT (3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl)
PBS (-) solution (Nissui P) containing -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
(Harmaceutical) was added to each well at 0.01 ml / well, and the cells were further cultured at 37 ° C. under 5% CO _{2 for} 3 hours. After that, the eluate (0.01N hydrochloric acid containing 10% SDS, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to each well at 0.1 ml / well, and O. D. The absorbance at 580 nm (Titer Tech Multiscan MMC, manufactured by Flow Laboratories) was measured. From this absorbance, the amount of pigment taken into the living cells was measured, and the cell growth inhibition rate (%) was calculated according to the following formula.

【００５０】 細胞増殖抑制率（％）＝（１−Ｍ／Ｃ）×１００ ここで、Ｍは供試薬物投与群の細胞に取り込まれた色素
量を、Ｃはコントロール群の細胞に取り込まれた色素量
である。Cell growth inhibition rate (%) = (1−M / C) × 100 Here, M is the amount of dye incorporated into the cells of the test substance administration group, and C is the incorporation of cells into the control group. The amount of pigment.

【００５１】結果を表１に示す。The results are shown in Table 1.

【００５２】[0052]

【表１】 [Table 1]

【００５３】薬理試験２（Ｈｅｐ ３Ｂ（Ｈｕｍａｎ）
細胞株に対する増殖抑制作用） 継代培養によって得られた細胞をＰＢＳ（−）溶液（Ni
ssui Pharmaceutical社製）で２回洗浄し、０．０５％
トリプシン（Flow Laboratories 社製）で細胞を剥がし
た後、ピペッティングにより、ダルベッコＭＥＭ培地
（Flow Laboratories 社製）、１％非必須アミノ酸（Fl
ow Laboratories 社製）及び２ｍＭ Ｌ−グルタミン
（Flow Laboratories 社製）の培地に細胞を懸濁した。
２５℃、１２００回転、５分間遠心（０５ＰＲ−２２
型、日立製作所社製）にて２回洗浄した後、再び同培地
に懸濁した。生細胞数は、０．２％トリパンブルー（和
光純薬社製）溶液にて染色して、光学顕微鏡（ＢＨ−
２，オリンパス光学工業社製）下で計測し、３×１０⁴
セル／ｍｌに希釈調製した。９６ウェルマイクロプレー
ト（CORNING 社製，コード２５８６０）全てのウェル
に、Ｈｅｐ ３Ｂ細胞浮遊液（３×１０⁴セル／ｍｌ）
を０．１ｍｌずつ加え、３７℃、５％ＣＯ₂条件下で２
４時間培養した。次に最終濃度が０μｇ／ｍｌ、０．１
μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ及び１０μｇ／ｍｌになるよ
うに供試薬物を０．１ｍｌ／ウェルずつ添加した。この
マイクロプレートを３７℃、５％ＣＯ₂条件下で４８時
間ＣＯ₂インキュベーター（ナプコ社製）で培養した。
培養後、２．５ｍｇ／ｍｌＭＴＴ（３−（４，５−ジメ
チル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−
テトラゾリウムブロマイド、和光純薬社製）を含むＰＢ
Ｓ（−）溶液（Nissui Pharmaceutical社製）を各ウェ
ルに０．０１ｍｌ／ウェルずつ加え、更に３７℃、５％
ＣＯ₂条件下で３時間培養した。その後溶出液（１０％
ＳＤＳを含む０．０１Ｎ塩酸，和光純薬社製）を各ウェ
ルに０．１ｍｌ／ウェルずつ添加し、Ｏ．Ｄ．５８０ｎ
ｍの吸光度（タイターテックマルチスキャンＭＭＣ，Fl
ow Laboratories 社製）を測定した。この吸光度から、
生細胞に取り込まれた色素量を測定し、下記式に従っ
て、細胞増殖抑制率（％）を求めた。尚、統計学的処理
は、コントロール群を対照にしてスチューデントのｔ検
定により実施した。Pharmacological test 2 (Hep 3B (Human)
Proliferation Inhibitory Action on Cell Lines) Cells obtained by subculturing cells in PBS (-) solution (Ni
Washed twice with ssui Pharmaceutical), 0.05%
After removing the cells with trypsin (manufactured by Flow Laboratories), by pipetting, Dulbecco's MEM medium (manufactured by Flow Laboratories), 1% non-essential amino acid (Fl
ow Laboratories) and 2 mM L-glutamine (Flow Laboratories) media were suspended.
25 ° C, 1200 rpm, 5 minutes centrifugation (05PR-22
Type, manufactured by Hitachi, Ltd.) and then suspended again in the same medium. The number of viable cells was stained with a 0.2% trypan blue (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) solution, and an optical microscope (BH-
2, made by Olympus Optical Co., Ltd.), and measured 3 × 10 ⁴
A cell / ml solution was prepared. Hep 3B cell suspension (3 × 10 ⁴ cells / ml) in all wells of 96-well microplate (CORNING, code 25860)
0.1 ml each, and add 2 at 37 ° C. under 5% CO ₂ condition.
Cultured for 4 hours. Then the final concentration is 0 μg / ml, 0.1
Reagents were added at 0.1 ml / well so that the concentrations were 1 μg / ml, 1 μg / ml, and 10 μg / ml. This microplate was cultured in a CO ₂ incubator (manufactured by Napco) for 48 hours under the conditions of 37 ° C. and 5% CO ₂ .
After culturing, 2.5 mg / ml MTT (3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-
PB containing tetrazolium bromide, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
Add 0.01 ml / well of S (-) solution (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) to each well and further at 37 ° C., 5%
It was cultured under CO ₂ condition for 3 hours. Then eluate (10%
0.01 N hydrochloric acid containing SDS, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to each well in an amount of 0.1 ml / well. D. 580n
Absorbance of m (Titer Tech Multiscan MMC, Fl
ow Laboratories). From this absorbance,
The amount of pigment taken into the living cells was measured, and the cell growth inhibition rate (%) was determined according to the following formula. The statistical processing was performed by Student's t-test with the control group as a control.

【００５４】 細胞増殖抑制率（％）＝（１−Ｍ／Ｃ）×１００ ここで、Ｍは供試薬物投与群の細胞に取り込まれた色素
量を、Ｃはコントロール群の細胞に取り込まれた色素量
である。Cell growth inhibition rate (%) = (1−M / C) × 100 Here, M is the amount of dye taken up by cells in the test substance administration group, and C is taken up by cells in the control group. The amount of pigment.

【００５５】結果を表２に示す。The results are shown in Table 2.

【００５６】[0056]

【表２】 [Table 2]

【００５７】上記薬理試験１及び薬理試験２の結果よ
り、本発明の化合物は、種々の細胞株に対して増殖抑制
作用を有し、アポトーシス誘導作用を発現することが判
る。From the results of the pharmacological test 1 and the pharmacological test 2 described above, it is understood that the compound of the present invention has a growth inhibitory action on various cell lines and exhibits an apoptosis inducing action.

【００５８】薬理試験３（１−メチル−４−フェニル−
１，２，３，６−テトラヒドロピリジンによるドパミン
神経変性に対する作用） 試験動物としてＩＣＲ系雄性マウス（１０週齢）を使用
し、薬物として１−メチル−４−フェニル−１，２，
３，６−テトラヒドロピリジン塩酸塩（ＭＰＴＰ，フナ
コシ社製）を使用した。ＭＰＴＰは生理食塩水（ソルベ
ント，solvent ）に溶解し、１０ｍｌ／ｋｇの投与容量
に調製して腹腔内投与した。また供試薬物は５％アラビ
アゴム−生理食塩液（ビヒクル，vehicle ）に懸濁し、
１０ｍｌ／ｋｇの投与容量に調製して経口投与した。Pharmacological test 3 (1-methyl-4-phenyl-
Effect of 1,2,3,6-tetrahydropyridine on Dopamine Neurodegeneration) Male ICR mice (10 weeks old) were used as test animals, and 1-methyl-4-phenyl-1,2,2 was used as a drug.
3,6-Tetrahydropyridine hydrochloride (MPTP, manufactured by Funakoshi Co., Ltd.) was used. MPTP was dissolved in physiological saline (solvent), adjusted to a dose volume of 10 ml / kg, and intraperitoneally administered. Also, the test reagents were suspended in 5% gum arabic-physiological saline solution (vehicle, vehicle),
The dose was adjusted to 10 ml / kg and orally administered.

【００５９】試験動物を１群１０匹として、次の４群、
即ち、対照（ビヒクル及びソルベント）群、ＭＰＴＰ単
独投与（ビヒクル及びＭＰＴＰ２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．
ｐ．）群、供試薬物及びＭＰＴＰ併用投与（供試薬物３
０ｍｇ／ｋｇ ｐ．ｏ．及びＭＰＴＰ２０ｍｇ／ｋｇ
ｉ．ｐ．）群並びに供試薬物単独投与（供試薬物３０ｍ
ｇ／ｋｇ ｐ．ｏ．及びソルベント）群に分けた。ＭＰ
ＴＰ（２０ｍｇ／ｋｇ）は１日１回７日間連続腹腔内投
与し、供試薬物（３０ｍｇ／ｋｇ）は１日１回ＭＰＴＰ
投与３０分前に経口投与した。最終投与後、翌日に次の
方法で、線条体中のドーパミン（ＤＡ）、３，４−ジヒ
ドロキシフェニル酢酸（ＤＯＰＡＣ）及びホモバニリン
酸（ＨＶＡ）を定量した。マウスにマイクロウェーブを
照射することにより、マウスを屠殺した。マウスを冷却
後、マウスの頭部より全脳を摘出し、氷冷中で線条体を
切り出した。直ちに、線条体の組織重量を測定した後、
その組織に０．１Ｎ過塩素酸溶液を加え、氷冷下で超音
波破砕機によりその組織をホモゲナイズした。そのホモ
ジネートを４℃、２００００ｇで１５分間遠心分離し、
上清を得た。上清中のＤＡ、ＤＯＰＡＣ及びＨＶＡを電
気化学検出器付のＨＰＬＣで定量した。４群間の有意差
検定には両側ｔ検定を使用した。There were 10 test animals in each group, and the following 4 groups were used:
That is, control (vehicle and solvent) group, MPTP alone administration (vehicle and MPTP 20 mg / kg i.p.
p. ) Group, test article and MPTP combined administration (test article 3)
0 mg / kg p. o. And MPTP 20 mg / kg
i. p. ) Group and individual test substance administration (test reagent 30 m
g / kg p. o. And solvent). MP
TP (20 mg / kg) was intraperitoneally administered once a day for 7 consecutive days, and the test substance (30 mg / kg) was once daily MPTP
Oral administration was performed 30 minutes before administration. On the next day after the final administration, dopamine (DA), 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) and homovanillic acid (HVA) in the striatum were quantified by the following method. Mice were sacrificed by irradiating them with microwaves. After cooling the mouse, the whole brain was removed from the head of the mouse, and the striatum was cut out in ice cooling. Immediately after measuring the tissue weight of the striatum,
A 0.1N perchloric acid solution was added to the tissue, and the tissue was homogenized with an ultrasonic homogenizer under ice cooling. Centrifuge the homogenate at 20000 g for 15 minutes at 4 ° C,
A supernatant was obtained. DA, DOPAC and HVA in the supernatant were quantified by HPLC with an electrochemical detector. Two-tailed t-test was used for the significance test between the 4 groups.

【００６０】結果を表３に示す。The results are shown in Table 3.

【００６１】[0061]

【表３】 [Table 3]

【００６２】上記表３から、本発明化合物は、ＭＰＴＰ
による線条体中のＤＡ、ＤＯＰＡＣ及びＨＶＡ含量の低
下をほぼ完全に抑制すること並びに本発明化合物の単独
投与では線条体中のＤＡ、ＤＯＰＡＣ及びＨＶＡ含量に
対して有意な影響を及ぼさないことが判る。これらの結
果は、本発明化合物がＭＰＴＰによるドパミン神経変性
を抑制したことを示すものである。従って本発明化合物
はパーキンソン病の進行を抑制できるものと考えられ
る。From Table 3 above, the compounds of the present invention are
Almost completely suppress the decrease in the DA, DOPAC and HVA contents in the striatum and that the administration of the compound of the present invention does not significantly affect the DA, DOPAC and HVA contents in the striatum. I understand. These results show that the compound of the present invention suppressed dopamine neurodegeneration induced by MPTP. Therefore, it is considered that the compound of the present invention can suppress the progression of Parkinson's disease.

【００６３】薬理試験４（インターフェロンγ産生抑制
作用） 健常人の末梢血をリポポリサッカライド（ＬＰＳ）で刺
激した時に遊離されるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）
に対する影響を以下の通り検討した。Pharmacological test 4 (inhibition of interferon γ production) Interferon γ (IFNγ) released when peripheral blood of healthy subjects is stimulated with lipopolysaccharide (LPS).
The effects on the above were examined as follows.

【００６４】供試薬物は、ジメチルスルホキシドに溶解
し、更にＲＰＭＩ−１６４０培地で所定濃度に希釈して
用いた。対照としてはジメチルスルホキシドのみを同様
に希釈したものを用いた。The reagents to be used were dissolved in dimethyl sulfoxide and further diluted with RPMI-1640 medium to a predetermined concentration for use. As a control, dimethyl sulfoxide alone was similarly diluted and used.

【００６５】ＲＰＭＩ−１６４０培地（ペニシリン１０
０単位／ｍｌ及びストレプトマイシン０．１μｇ／ｍｌ
を含む）に、１０％健常人末梢血（ヘパリン添加）、供
試薬物及びＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ ０５５：Ｂ５、１μ
ｇ／ｍｌ）を加え、５％ＣＯ₂インキュベーター内で３
７℃下に１８〜２４時間培養し、この培養上清を遠心操
作にて回収し、これを培養上清サンプルとした。このサ
ンプル中のＩＦＮγを酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）に
より測定し、ＩＦＮγの標準曲線より、サンプル中のＩ
ＦＮγ量を求めた。尚、ＩＦＮγの測定限界は２０ｐｇ
／ｍｌであった。RPMI-1640 medium (penicillin 10
0 unit / ml and streptomycin 0.1 μg / ml
10% of normal human peripheral blood (with heparin added), reagent and LPS (E. coli 055: B5, 1 μ)
g / ml) and added 3% in a 5% CO ₂ incubator.
It was cultured at 7 ° C. for 18 to 24 hours, the culture supernatant was collected by centrifugation, and this was used as a culture supernatant sample. IFNγ in this sample was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and I in the sample was determined from the IFNγ standard curve.
The amount of FNγ was determined. The IFNγ measurement limit is 20 pg
/ Ml.

【００６６】ＩＦＮγの遊離抑制率（％）は次式で求め
た。The release inhibition rate (%) of IFNγ was calculated by the following formula.

【００６７】 遊離抑制率（％）＝（１−Ｔ÷Ｃ）×１００ ここで、Ｔは供試薬物を加えた時のＩＦＮγ量を、Ｃは
ＩＦＮγ量を示す。Release inhibition rate (%) = (1−T ÷ C) × 100 Here, T represents the amount of IFNγ when the reagent was added, and C represents the amount of IFNγ.

【００６８】供試薬物（供試化合物１）の最終濃度を３
０μｇ／ｍｌとした時、遊離抑制率（％）は６９％であ
った。The final concentration of the reagent (test compound 1) was set to 3
The release inhibition rate (%) was 69% at 0 μg / ml.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 市川 弘之 徳島県徳島市中昭和町２丁目100番地 (72)発明者 小野 幸久 徳島県板野郡北島町鯛浜字川久保41番地の 18 (72)発明者 中井 哲 徳島県板野郡松茂町広島字南川向67番地の ４ ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Hiroyuki Ichikawa 2-100, Nakashowa-cho, Tokushima City, Tokushima Prefecture (72) Inventor Yukihisa Ono 18 41, Kawakubo, Taihama, Kitajima-cho, Itano-gun, Tokushima Prefecture (72) Inventor Satoshi Nakai 4 of 67 Minamikawako, Hiroshima-shi, Matsushige-cho, Itano-gun, Tokushima

Claims (7)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 一般式 【化１】 〔式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は、同一又は異なって低
級アルキル基を示す。Ｒ⁵は低級アルコキシ基を示す。
Ａは低級アルキレン基を示す。〕で表わされる２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩から選ばれ
た少なくとも１種を有効成分として含有するアポトーシ
ス調整剤。1. A compound of the general formula [In the formula, R ¹ , R ² , R ³ and R ⁴ are the same or different and each represents a lower alkyl group. R ⁵ represents a lower alkoxy group.
A represents a lower alkylene group. ] 2,3-
An apoptosis regulator containing, as an active ingredient, at least one selected from a dihydro-1H-indene derivative and a salt thereof. 【請求項２】 有効成分が１−〔４−（３−メトキシフ
ェニル）−１−ピペラジニル〕アセチルアミノ−２，３
−ジヒドロ−７−ヒドロキシ−２，２，４，６−テトラ
メチル−１Ｈ−インデン及びその塩から選ばれた少なく
とも１種である請求項１に記載のアポトーシス調整剤。2. The active ingredient is 1- [4- (3-methoxyphenyl) -1-piperazinyl] acetylamino-2,3.
The apoptosis regulator according to claim 1, which is at least one selected from -dihydro-7-hydroxy-2,2,4,6-tetramethyl-1H-indene and salts thereof. 【請求項３】 請求項１又は請求項２に記載の２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩から選ばれ
た少なくとも１種を有効成分として含有するハンチント
ン病の予防及び／又は治療剤。3. The 2,3- according to claim 1 or claim 2.
A preventive and / or therapeutic agent for Huntington's disease, comprising at least one selected from dihydro-1H-indene derivatives and salts thereof as an active ingredient. 【請求項４】 請求項１又は請求項２に記載の２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩から選ばれ
た少なくとも１種を有効成分として含有するパーキンソ
ンの予防及び／又は治療剤。4. The 2,3- according to claim 1 or claim 2.
A preventive and / or therapeutic agent for Parkinson containing at least one selected from dihydro-1H-indene derivatives and salts thereof as an active ingredient. 【請求項５】 請求項１又は請求項２に記載の２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩から選ばれ
た少なくとも１種を有効成分として含有する筋萎縮性側
索硬化症の予防及び／又は治療剤。5. The 2,3- according to claim 1 or claim 2.
A preventive and / or therapeutic agent for amyotrophic lateral sclerosis containing as an active ingredient at least one selected from a dihydro-1H-indene derivative and a salt thereof. 【請求項６】 請求項１又は請求項２に記載の２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩から選ばれ
た少なくとも１種を有効成分として含有するＨＩＶ関連
記憶障害の予防及び／又は治療剤。6. The 2,3- according to claim 1 or claim 2.
An agent for preventing and / or treating HIV-related memory disorders, which comprises, as an active ingredient, at least one selected from dihydro-1H-indene derivatives and salts thereof. 【請求項７】 請求項１又は請求項２に記載の２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インデン誘導体及びその塩から選ばれ
た少なくとも１種を有効成分として含有するサイトカイ
ン産生抑制剤。7. The 2,3- according to claim 1 or claim 2.
A cytokine production inhibitor containing at least one selected from a dihydro-1H-indene derivative and a salt thereof as an active ingredient.