JPH0779786A - Transesterification with lipase - Google Patents
Transesterification with lipaseInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、溶媒を使用しないでエ
ステル交換を行う、リパーゼを用いたエステル交換法に
関するものである。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a transesterification method using lipase for transesterification without using a solvent.
【０００２】[0002]
【従来の技術】エステル交換反応は、動植物油脂類の改
質をはじめ、各種脂肪酸のエステル、糖エステルやステ
ロイドの製造法として重要な技術である。このエステル
交換反応の触媒として、油脂加水分解酵素であるリパー
ゼを用いることにより、化学反応に比べ副反応の抑制や
エネルギーコストが低減でき、さらには触媒としてのリ
パーゼが天然物であることから安全性も高いという利点
が得られている。また、その基質特異性や位置特異性に
より目的物を効率よく生産することができるといった利
点もある。ところが、リパーゼを用いてエステル交換反
応を行う場合、室温ないし約７０℃程度までの温和な条
件下でしか反応が進行しないため、有機溶媒等の非存在
下に例えば９０℃を超えるような高融点の油脂類やワッ
クス等をリパーゼを用いてエステル交換することは事実
上不可能であった。アルカリゲネス属リパーゼについて
も同様であり、名糖産業社製リパーゼＰＬを用いたエス
テル合成に関する特許（特開昭６２−１０４５８９号）
においても、通常は２０〜６０℃の温度範囲で反応を行
うとしており、実施例では４０℃でエステル合成反応を
行っている。このように、従来は、高融点の油脂類やワ
ックス等をエステル交換する際には化学反応による手段
が用いられてきたため、反応がランダムに進み、所望の
目的物、たとえば基質特異性、位置特異性を必要とする
エステル交換反応物を高純度に得ることは困難であっ
た。一方、リパーゼを用いるエステル交換反応では、１
００℃前後の高温反応は実質的に不可能であった。2. Description of the Related Art The transesterification reaction is an important technique as a method for producing various fatty acid esters, sugar esters and steroids, including the modification of animal and vegetable oils and fats. By using lipase, which is a fat and oil hydrolase, as a catalyst for this transesterification reaction, side reactions can be suppressed and energy costs can be reduced compared to chemical reactions. Furthermore, since lipase as a catalyst is a natural product, it is safe. The advantage is that it is also high. Further, there is also an advantage that the target product can be efficiently produced due to its substrate specificity and position specificity. However, when the transesterification reaction is carried out using lipase, the reaction proceeds only under mild conditions from room temperature to about 70 ° C., and therefore, in the absence of an organic solvent, for example, a high melting point exceeding 90 ° C. It was practically impossible to transesterify the oils and fats, waxes and the like of the above using lipase. The same applies to Alcaligenes lipase, and a patent relating to ester synthesis using Lipase PL manufactured by Meito Sangyo Co., Ltd. (JP-A-62-104589).
Also in the above, the reaction is usually performed in the temperature range of 20 to 60 ° C., and the ester synthesis reaction is performed at 40 ° C. in the examples. As described above, conventionally, when transesterifying high-melting oils and waxes, etc., a means by a chemical reaction has been used, so that the reaction proceeds randomly and a desired target substance such as substrate specificity or position specificity is obtained. It was difficult to obtain a transesterification reaction product requiring high properties in high purity. On the other hand, in the transesterification reaction using lipase, 1
High temperature reaction around 00 ° C was practically impossible.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、位置特異性
等を有するリパーゼの利点を有効に活用し、かつ無溶媒
下で、高融点の油脂類などを効率的にエステル交換する
方法を提供することを目的とする。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention provides a method for effectively transesterifying fats and oils having a high melting point in the absence of a solvent, by effectively utilizing the advantages of lipase having regiospecificity and the like. The purpose is to do.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明は、特定のリパー
ゼを用い、実質的に無溶媒かつ無水条件下で、エステル
交換反応を８１〜１３０℃で行うと、上記課題を解決で
きるとの知見に基づいてなされたものである。すなわ
ち、本発明は、溶融したエステル交換用有機原料に、実
質的に無溶媒かつ無水条件下で、アルカリゲネス属に属
する微生物から得られるリパーゼを、８１〜１３０℃で
作用させることを特徴とするエステル交換法を提供す
る。ここで、エステル交換とは、例えば、カルボン酸と
アルコールとのエステルから選ばれる１種もしくは２種
以上のエステル、あるいはこれにカルボン酸またはアル
コールを共存させ、前記エステルのカルボン酸残基若し
くはアルコール残基を交換することである。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention finds that the above problems can be solved by carrying out a transesterification reaction at 81 to 130 ° C. under a substantially solvent-free and anhydrous condition using a specific lipase. It was made based on. That is, the present invention is characterized in that the molten organic raw material for transesterification is treated with lipase obtained from a microorganism belonging to the genus Alcaligenes at 81 to 130 ° C. under substantially solvent-free and anhydrous conditions. Provide exchange method. Here, transesterification means, for example, one or more kinds of ester selected from esters of carboxylic acid and alcohol, or carboxylic acid or alcohol coexisting with the ester, and carboxylic acid residue or alcohol residue of the ester. It is to exchange the groups.
【０００５】上記カルボン酸としては、例えば、炭素数
２〜５０の飽和または不飽和、直鎖状または側鎖状の脂
肪族一塩基酸いわゆる脂肪酸、脂肪族二塩基酸および三
塩基酸が好適なものとしてあげられる。かかる脂肪族一
塩基酸としては、酢酸、酪酸、カプリル酸、イソオクチ
ル酸、イソノナン酸、カプリン酸、ラウリン酸、パルミ
チン酸、パルミトオレイン酸、ヘプタデカン酸、ステア
リン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、エライジン
酸、１０−ヒドロキシステアリン酸、１２−ヒドロキシ
ステアリン酸、リシノール酸、リノール酸、リノレン
酸、エルシン酸、ベヘン酸、アラキドン酸、エイコサペ
ンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、セロチン酸、モンタ
ン酸、ノナコサン酸、メリシン酸、ペンタトリアコンタ
ン酸、ヘキサトリアコンタン酸、ヘキサテトラコンタン
酸等を例示でき、脂肪族二塩基酸としてはコハク酸、リ
ンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、グルタル酸、
アゼライン酸、セバシン酸、１，１２−ドデカジカルボ
ン酸等を例示でき、また脂肪族三塩基酸としてはクエン
酸等を例示できる。As the above-mentioned carboxylic acid, for example, a saturated or unsaturated C1 to C50 linear or side chain aliphatic monobasic acid, so-called fatty acid, aliphatic dibasic acid and tribasic acid are preferable. It is given as a thing. Such aliphatic monobasic acids include acetic acid, butyric acid, caprylic acid, isooctylic acid, isononanoic acid, capric acid, lauric acid, palmitic acid, palmitooleic acid, heptadecanoic acid, stearic acid, isostearic acid, oleic acid, elaidic acid. 10-hydroxystearic acid, 12-hydroxystearic acid, ricinoleic acid, linoleic acid, linolenic acid, erucic acid, behenic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, docosahexaenoic acid, cerotic acid, montanic acid, nonacosanoic acid, melissic acid, Pentatriacontanoic acid, hexatriacontanoic acid, hexatetracontanoic acid and the like can be exemplified, and as the aliphatic dibasic acid, succinic acid, malic acid, fumaric acid, maleic acid, tartaric acid, glutaric acid,
Azelaic acid, sebacic acid, 1,12-dodecadicarboxylic acid and the like can be exemplified, and citric acid and the like can be exemplified as the aliphatic tribasic acid.
【０００６】また、アルコールとしては、例えば、炭素
数１〜５０の飽和または不飽和、直鎖状または側鎖状の
脂肪族一価アルコール、及び二価〜六価アルコールが好
適なものとしてあげられる。これらのアルコール類の例
として、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコ
ール、ヘキサノール、イソオクタノール、イソノナノー
ル、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアル
コール、イソステアリルアルコール、オレイルアルコー
ル、ベヘニルアルコール、オクタコサノール、米国ペト
ロライト社製のユニリンアルコール４２５（平均分子
量：５１０）、同ユニリンアルコール５５０（平均分子
量：６６０）、同ユニリンアルコール７００（平均分子
量：８５０）等の一価アルコール、エチレングリコー
ル、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジ
プロピレングリコール、１，８−オクタンジオール、
１，１０−デカンジオール等の二価アルコール、グリセ
リン、ジグリセリン、トリグリセリン、ポリグリセリ
ン、ペンタエリスリトール、ネオペンチルグリコール、
トリメチロールエタン、トリメチロールプロパン、キシ
リトール、ソルビトール、マンニトール等の三価以上の
アルコールを挙げることができる。さらに、アルコール
類として、キシロース、フラクトース、ガラクトース、
グルコサミン、グルコース、β−メチルグルコサイド、
マルトース、ラフィノースなどの糖類、コレステロー
ル、ラノステロール、テストステロン、アントドロスタ
ンディオール、ナンドロロン、エルゴカルシフェノー
ル、コレカルシフェノール、２，２−ジヒドロエルゴス
テロール、ジモステロールなどのステロール類やスフィ
ンゴシン、リグノセリールスフィンゴシンなどもあげら
れる。Suitable alcohols include, for example, saturated or unsaturated, linear or side chain aliphatic monohydric alcohols having 1 to 50 carbon atoms, and dihydric to hexahydric alcohols. . Examples of these alcohols include methanol, ethanol, isopropyl alcohol, hexanol, isooctanol, isononanol, lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol, isostearyl alcohol, oleyl alcohol, behenyl alcohol, octacosanol, uniline alcohol manufactured by Petrolite Co. 425 (average molecular weight: 510), uniline alcohol 550 (average molecular weight: 660), uniline alcohol 700 (average molecular weight: 850), and other monohydric alcohols, ethylene glycol, diethylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol, 1 , 8-octanediol,
Dihydric alcohols such as 1,10-decanediol, glycerin, diglycerin, triglycerin, polyglycerin, pentaerythritol, neopentyl glycol,
Examples include trihydric or higher alcohols such as trimethylolethane, trimethylolpropane, xylitol, sorbitol, and mannitol. Further, as alcohols, xylose, fructose, galactose,
Glucosamine, glucose, β-methylglucoside,
Sugars such as maltose and raffinose, cholesterol, lanosterol, testosterone, antodrostandiol, nandrolone, ergocalciphenol, cholecalciphenol, sterols such as 2,2-dihydroergosterol and dimosterol, and sphingosine and lignoceryl sphingosine. Can also be given.
【０００７】かかるカルボン酸とアルコールのエステル
は、動物、植物、魚介類、微生物、鉱物等の天然物から
抽出し、あるいは常法によりエステル合成して得ること
ができる。本発明におけるエステルの好適例は油脂およ
びワックスである。本発明では、このうち、融点が８１
〜１３０℃にあるものを使用するのが好ましいが、２種
以上のエステル交換用有機原料を使用する場合には、そ
れらの融点が８１〜１３０℃の範囲内でなくとも、該エ
ステル交換用有機原料の混合物が８１〜１３０℃で溶融
すればよい。特に好ましくは９１〜１２０℃である。本
発明では前記のエステルを原料基質とし、これにアルカ
リゲネス属に属する微生物由来のリパーゼを添加して８
１〜１３０℃、好ましくは９１〜１２０℃にてエステル
交換反応させるものであり、エステルは単独あるいは混
合して用いることができる。さらに必要に応じて前記し
たカルボン酸の１種あるいは２種以上、またはアルコー
ルの１種あるいは２種以上を原料基質として前記エステ
ルに共存させることもできる。The ester of carboxylic acid and alcohol can be obtained by extracting from natural products such as animals, plants, seafood, microorganisms and minerals, or by ester synthesis by a conventional method. Suitable examples of the ester in the present invention are fats and oils and waxes. In the present invention, of these, the melting point is 81
It is preferable to use a transesterification organic material having a melting point of 81 to 130 ° C. when two or more kinds of transesterification organic raw materials are used. The raw material mixture may be melted at 81 to 130 ° C. Particularly preferably, it is 91 to 120 ° C. In the present invention, the above-mentioned ester is used as a raw material substrate, and lipase derived from a microorganism belonging to the genus Alcaligenes is added to
The transesterification reaction is carried out at 1 to 130 ° C, preferably 91 to 120 ° C, and the ester can be used alone or in a mixture. Further, if necessary, one or two or more of the above-mentioned carboxylic acids or one or two or more of alcohols can be made to coexist with the ester as a raw material substrate.
【０００８】本発明において使用するリパーゼは、アル
カリゲネス属に属する微生物の生産するリパーゼであっ
て、実質的に無水条件下でかつ８１〜１３０℃でエステ
ル交換活性を有するものであればいずれのものでも使用
できる。このうち好ましいリパーゼは、アルカリゲネス
エスピー（Alcaligenes sp. ）菌株から得られるのリ
パーゼである。具体的には、特公昭５８−３６９５３号
公報に記載され、微工研菌寄第２９８５号（ＦＥＲＭ
Ｐ−３１８７：ＦＥＲＭ ＢＰ−２９８５）として寄託
されているリパーゼ生産菌名糖ＰＬ−２６６号が生産す
るリパーゼＱＬ（名糖産業（株）製）である。このリパ
ーゼはグリセリドの１位および３位に対して位置特異性
を有し、アルカリ側に至適ｐＨを有する胆汁賦活性リパ
ーゼであり、特公昭５８−３６９５３号公報に記載の酵
素的性質を有する。本発明では、アルカリゲネス エス
ピー（Alcaligenes sp. ）菌株から得られる上記とは別
のリパーゼＰＬ（名糖産業（株）製）も使用することが
できる。本発明の方法により、エステル交換反応を行う
には、次のようにすればよい。すなわち前記原料基質に
水分を添加することなく、上記リパーゼを加え、溶媒の
不存在下、８１〜１３０℃、好ましくは９１〜１２０
℃、より好ましくは９１〜１１０℃、最も好ましくは９
５〜１００℃に加熱し、静置、攪拌または振とうして所
定の時間、例えば、１０分〜１００時間反応を行う。反
応終了後、常法により反応物を回収、精製してエステル
交換反応物を得ることができる。The lipase used in the present invention may be any lipase produced by a microorganism belonging to the genus Alcaligenes, as long as it has transesterification activity at 81 to 130 ° C. under substantially anhydrous conditions. Can be used. Among them, the preferred lipase is a lipase obtained from Alcaligenes sp. Strain. Specifically, it is described in JP-B-58-36953, and is included in Micro-industrial Research Institute No. 2985 (FERM).
P-3187: FERM BP-2985), which is a lipase QL (manufactured by Meito Sangyo Co., Ltd.) produced by the lipase producing bacterium name sugar PL-266. This lipase is a bile-stimulating lipase that has regiospecificity to the 1- and 3-positions of glycerides and has an optimum pH on the alkaline side, and has the enzymatic properties described in JP-B-58-36953. . In the present invention, a lipase PL (manufactured by Meito Sangyo Co., Ltd.) other than the above obtained from an Alcaligenes sp. Strain can also be used. The transesterification reaction can be carried out by the method of the present invention as follows. That is, without adding water to the raw material substrate, the above lipase was added, and in the absence of a solvent, 81 to 130 ° C, preferably 91 to 120 ° C.
° C, more preferably 91-110 ° C, most preferably 9
The mixture is heated to 5 to 100 ° C., and allowed to stand, stir or shake to carry out the reaction for a predetermined time, for example, 10 minutes to 100 hours. After completion of the reaction, the reaction product can be recovered and purified by a conventional method to obtain a transesterification reaction product.
【０００９】本発明では、エステル交換反応は実質的に
無水の状態で反応を行うことが重要である。従来のリパ
ーゼを用いるエステル交換反応におけるような、例えば
反応中の含水率が０．１％程度もしくはそれ以上になる
と、本発明の方法では反応性が低下し、またトリグリセ
リドからジグリセリド、モノグリセリドを生成するよう
な副反応を伴うので好ましくない。つまり、本発明で
は、もともと基質に溶解している不連続状態の水、酵素
もしくは固定化酵素に含まれる僅かな自由水もしくは結
合水を含めて水分含量を０．１％未満とするのが好まし
い。系内水分がこの条件を越える恐れのある場合は、事
前に有機原料や酵素の水分を除いて使用するのが良い。
反応は、閉鎖系、開放系のいづれでも行えるが、系内初
発水分は反応と共に蒸発もしくは一部のエステルの加水
分解により消費され、序々に減少していくが、８１℃〜
１３０℃の範囲でエステル交換反応が進行する限りにお
いて１ｐｐｍであっても、本発明の実質的に無水条件の
範囲に含まれる。In the present invention, it is important that the transesterification reaction is carried out in a substantially anhydrous state. When the water content in the reaction is about 0.1% or more, as in the conventional transesterification reaction using lipase, the reactivity of the method of the present invention decreases, and diglyceride and monoglyceride are produced from triglyceride. Such side reactions are not preferable. That is, in the present invention, the water content is preferably less than 0.1% including the discontinuous state of water originally dissolved in the substrate and a small amount of free water or bound water contained in the enzyme or the immobilized enzyme. . If the water content in the system may exceed this condition, it is recommended to remove the water content of the organic raw materials and the enzyme before use.
The reaction can be performed in either a closed system or an open system, but the initial water content in the system is consumed by evaporation or hydrolysis of a part of the ester along with the reaction, and gradually decreases, but 81 ° C ~
Even if it is 1 ppm as long as the transesterification reaction proceeds in the range of 130 ° C., it is included in the range of substantially anhydrous conditions of the present invention.
【００１０】なお本発明において用いる酵素の形態とし
ては、酵素粉末、又は珪藻土やイオン交換樹脂に固定し
た酵素があげられる。エステル交換反応を行う方法は、
カラムに充填した酵素を使用する連続反応法や反応液中
に酵素を分散させるバッチ法などを使用することができ
る。反応液中で分散状態となっているリパーゼ粒子を、
精密膜濾過、遠心分離、不活性有機溶媒による洗浄等の
方法で回収することができ、これを再び新たなエステル
交換反応に供することができる。The enzyme used in the present invention may be in the form of enzyme powder, diatomaceous earth or an enzyme immobilized on an ion exchange resin. The method for conducting the transesterification reaction is
A continuous reaction method using an enzyme packed in a column or a batch method in which an enzyme is dispersed in a reaction solution can be used. The lipase particles in a dispersed state in the reaction solution,
It can be recovered by a method such as microfiltration, centrifugation, washing with an inert organic solvent, and the like, which can be again subjected to a new transesterification reaction.
【００１１】[0011]
【発明の効果】本発明によれば、リパーゼの利点を有効
に活用して高融点の油脂類などを効率的にエステル交換
することができる。そして、本発明の方法では、溶媒を
使用しないので、最終生成物の分離が良好で、簡易に高
純度の生成物を得ることができる。次に実施例により本
発明を説明する。According to the present invention, the advantages of lipase can be effectively utilized to efficiently transesterify fats and oils having a high melting point. Further, in the method of the present invention, since no solvent is used, the final product is well separated, and a highly pure product can be easily obtained. Next, the present invention will be described with reference to examples.
【００１２】[0012]
実施例１ モンタンワックスの分解脂肪酸（ヘキスト社製、商品
名：Ｓワックス）のエチルエステル５０ｇ、カプリル酸
／カプリン酸＝７５／２５の中鎖脂肪酸トリグリセリド
（日清製油（株）製、商品名：ＯＤＯ）５０ｇ、および
アルカリゲネスエスピー（Alcaligenes sp. ）由来のリ
パーゼ（名糖産業（株）製、商品名：リパーゼＱＬ）１
ｇを、マグネチックスターラーを用い攪拌速度３００rp
m で攪拌してエステル交換反応を行った。反応温度はモ
ンタンワックスの融点以上である９５℃とし、７時間反
応した。反応物のガスクロマトグラフィー分析の結果か
ら、モンタンワックス脂肪酸の８３％がトリグリセリド
であるＯＤＯ中へ導入されたことが確認された。このこ
とから、９５℃という高温でリパーゼを用い、高融点脂
質の一種であるワックスを無溶媒下に、実質的に無水状
態でエステル交換反応できることがわかる。Example 1 50 g of ethyl ester of a decomposed fatty acid of montan wax (Hoechst, trade name: S wax), caprylic acid / capric acid = 75/25 medium chain fatty acid triglyceride (manufactured by Nisshin Oil Co., Ltd., trade name: ODO) 50 g, and lipase derived from Alcaligenes sp. (Manufactured by Meito Sangyo Co., Ltd., trade name: Lipase QL) 1
g using a magnetic stirrer, stirring speed 300 rp
The transesterification reaction was carried out by stirring at m 2. The reaction temperature was 95 ° C., which is higher than the melting point of montan wax, and the reaction was carried out for 7 hours. From the result of the gas chromatography analysis of the reaction product, it was confirmed that 83% of the montan wax fatty acid was introduced into the triglyceride ODO. From this, it is understood that the lipase can be used at a high temperature of 95 ° C. and the transesterification reaction of the wax, which is one of the high melting point lipids, can be carried out in a substantially anhydrous state without a solvent.
【００１３】実施例２ 炭素数１４の二塩基酸（日鉱共石（株）製、商品名：テ
トラデカンジオイックアシッド）２０ｇ、グリセリンと
ブタン酸のトリエステルであるトリブチリン（和光純薬
（株）製、商品名：トリブチリン）８０ｇ、および実施
例１で使用したリパーゼＱＬ１ｇをマグネチックスター
ラーを用い、攪拌速度３５０rpm で攪拌してエステル交
換反応を行った。反応温度は、前記二塩基酸を溶解させ
るため１２０℃とし、６．５時間反応した。反応物のガ
スクロマトグラフィー分析による結果から、前記長鎖二
塩基酸の９３％がトリブチリン中へ導入されていること
が確認された。このことから、１２０℃という高温でリ
パーゼを用い、高融点脂質の一種である長鎖二塩基酸を
無溶媒下に、実質的に無水状態でエステル交換できるこ
とがわかる。Example 2 20 g of a dibasic acid having 14 carbon atoms (manufactured by Nikko Kouseki Co., Ltd., trade name: tetradecanedioic acid), tributyrin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) which is a triester of glycerin and butanoic acid. , Trade name: tributyrin), and 1 g of lipase QL used in Example 1 were stirred at a stirring speed of 350 rpm using a magnetic stirrer to carry out a transesterification reaction. The reaction temperature was 120 ° C. for dissolving the dibasic acid, and the reaction was conducted for 6.5 hours. From the result of gas chromatography analysis of the reaction product, it was confirmed that 93% of the long-chain dibasic acid was introduced into tributyrin. From this, it is understood that the long-chain dibasic acid, which is a kind of high melting point lipid, can be transesterified in a substantially anhydrous state by using lipase at a high temperature of 120 ° C.
【００１４】実施例３ カルナウバロウ１２０ｇ、グリセリン１０ｇおよび実施
例１で使用したリパーゼＱＬ１ｇをマグネチックスター
ラーを用い攪拌速度３００rpm でエステル交換反応を行
った。反応温度はカルナウバロウの融点以上である９０
℃にて３６時間反応した。反応物のガスクロマトグラフ
ィー分析結果から、１−モノグリセリドおよび１，３−
ジグリセリドの生成を確認した。このことから、９０℃
という高温で、リパーゼを用い、高融点ワックスを無溶
媒下に、実質的に無水状態で、しかも該リパーゼの位置
特異性を維持してエステル交換できることが示された。Example 3 Carnauba wax (120 g), glycerin (10 g) and the lipase QL (1 g) used in Example 1 were subjected to a transesterification reaction using a magnetic stirrer at a stirring speed of 300 rpm. The reaction temperature is above the melting point of carnauba wax 90
The reaction was carried out at 36 ° C for 36 hours. From the results of gas chromatography analysis of the reaction product, 1-monoglyceride and 1,3-
Generation of diglyceride was confirmed. From this, 90 ℃
It was demonstrated that, at a high temperature, lipase can be used for transesterification of a high-melting-point wax in the absence of a solvent in a substantially anhydrous state, while maintaining the regiospecificity of the lipase.
【００１５】実施例４ 実施例１で使用したリパーゼＱＬを常法により粒状ケイ
ソウ土に固定化したもの（凍結乾燥品）８０ｇを内径２
cm、長さ１５cmのガラス管に充填し、固定化リパーゼ充
填カラムを調製した。カルナウバロウ２０ｇ、グリセリ
ンと酢酸のトリエステルであるトリアセチン（和光純薬
（株）製、商品名：トリアセチン）８０ｇの混合物を毎
時２．０mlカラムに流し、１００℃にて連続的にエステ
ル交換反応を行った。反応物のガスクロマトグラフィー
分析の結果から、トリグリセリドであるトリアセチン中
へのカルナウバロウ脂肪酸の導入が確認された。このこ
とから、１００℃という高温でリパーゼを用い、高融点
脂質の一種であるワックスを無溶媒下に、実質的に無水
状態で連続エステル交換反応できることがわかる。Example 4 80 g of the lipase QL used in Example 1 immobilized on granular diatomaceous earth by a conventional method (freeze-dried product) has an inner diameter of 2
A glass tube having a length of 15 cm and a length of 15 cm was packed to prepare an immobilized lipase packed column. A mixture of 20 g of carnauba wax and 80 g of triacetin (trade name: triacetin, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), which is a triester of glycerin and acetic acid, is passed through a 2.0 ml column per hour to continuously perform a transesterification reaction at 100 ° C. It was From the results of the gas chromatography analysis of the reaction product, it was confirmed that the carnauba wax fatty acid was introduced into the triglyceride triacetin. From this, it is understood that a continuous transesterification reaction can be carried out at a high temperature of 100 ° C. using a lipase, which is a kind of high melting point lipid, in a substantially anhydrous state without a solvent.
【００１６】比較例１ 実施例１の原料に加水し、水分を１．０％とした。これ
を実施例１と同様の操作で反応を行い、反応物を分析し
た。その結果、加水分解に伴う副反応物を生成し、モン
タンワックス分解脂肪酸残基を有するグリセリドの生成
はほとんど認められず、酵素の熱安定性も低下した。 比較例２ 実施例２において反応温度を５０℃とした以外は同じ条
件で実施例２を繰り返した。その結果、長鎖二塩基酸の
１５％しかトリブチリン中へ導入されなかった。Comparative Example 1 The raw material of Example 1 was hydrated to a water content of 1.0%. This was reacted in the same manner as in Example 1 and the reaction product was analyzed. As a result, a side reaction product was generated due to hydrolysis, glyceride having a montan wax-decomposing fatty acid residue was scarcely observed, and the thermal stability of the enzyme was decreased. Comparative Example 2 Example 2 was repeated under the same conditions except that the reaction temperature in Example 2 was 50 ° C. As a result, only 15% of the long-chain dibasic acid was introduced into tributyrin.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鈴木 順子 神奈川県横浜市保土ヶ谷区星川３−７−37 Ａ−202 (72)発明者 無類井 建夫 東京都大田区西蒲田５−13−７ (72)発明者 国生 純孝 東京都国立市谷保7026−３ (72)発明者 角田 昭 東京都福生市武蔵野台１−27−５ ルネ福 生Ａ−103 (72)発明者 大島 章夫 東京都日野市多摩平６−10−４ 日野寮 403号 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Junko Suzuki 3-7-37 Hoshikawa Hodogaya-ku Yokohama-shi Kanagawa A-202 (72) Inventor Tsuneo Murai 5-13-7 Nishi-Kamata, Ota-ku, Tokyo (72) Inventor Sumitaka Kokusei 7026-3 Taniho, Kunitachi, Tokyo (72) Inventor Akira Tsunoda 1-27-5 Musashinodai, Fussa, Tokyo Rene Fussa A-103 (72) Inventor, Akio Oshima 6 Tamahei, Hino, Tokyo −10-4 Hino Dormitory No.403
Claims (2)
質的に無溶媒かつ無水条件下で、アルカリゲネス属に属
する微生物から得られるリパーゼを、８１〜１３０℃で
作用させることを特徴とするエステル交換法。1. A transesterification characterized in that a melted organic raw material for transesterification is allowed to act with lipase obtained from a microorganism belonging to the genus Alcaligenes at 81 to 130 ° C. under substantially solvent-free and anhydrous conditions. Law.
０℃である請求項１記載のエステル交換法。2. The temperature applied to lipase is 91 to 12
The transesterification method according to claim 1, which is 0 ° C.
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