JPH0778075B2 - 免疫機構の機能を仰制する新規ペプチド、それらを含む医薬組成物、並びに前記ペプチド及び医薬組成物の調製方法 - Google Patents

免疫機構の機能を仰制する新規ペプチド、それらを含む医薬組成物、並びに前記ペプチド及び医薬組成物の調製方法

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JPH0778075B2 JP1148522A JP14852289A JPH0778075B2 JP H0778075 B2 JPH0778075 B2 JP H0778075B2 JP 1148522 A JP1148522 A JP 1148522A JP 14852289 A JP14852289 A JP 14852289A JP H0778075 B2 JPH0778075 B2 JP H0778075B2
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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、次の式（１）〜（16）の新規ペプチド： Ｄ−Arg−Lys−Ｄ−Asp （１） Arg−Ｄ−Lys−Asp （２） Ｄ−Arg−Ｄ−Lys−Ｄ−Asp （３） Arg−Ｄ−Lys−Ｄ−Asp （４） Ｄ−Arg−Lys−Asp （５） Ｄ−Arg−Ｄ−Lys−Asp （６） Arg−Lys−Ｄ−Asp （７） Arg−Lys−Ｄ−Asp−Val （８） Arg−Lys−Asp−Ｄ−Val （９） Ｄ−Arg−Lys−Asp−Val （10） Arg−Ｄ−Lys−Asp−Val （11） Lys（Arg）−Asp （12） Lys（Arg）−Ｄ−Asp （13） Arg−Lys（Arg）−Asp （14） Arg−Lys−Asp（Val） （15）および Arg−Lys−Ｄ−Asp（Val） （16）； それらの酸付加塩；並びにそれらのペプチドを含む医薬
組成物に関する。
本発明の別の観点によれば、式（１）〜（16）の新規ペ
プチドおよびそれらを含む医薬組成物の調製方法が提供
される。
上式（１）〜（16）のペプチドは、免疫機構のある種の
部分的な過程を阻害することができる。
本発明は更に、前記ペプチドまたはそれらを含む医薬組
成物を使うことにより免疫機構の機能を抑制するため
に、ヒト以外の哺乳動物を処置する方法に関する。
〔従来の技術およびその課題〕
本発明に係る化合物は、チモポイエチンの活性中心の誘
導体およびジアステレオマーである。しかしながら、チ
モポイエチンの活性中心であると考えられている既知の
ペプチドArg−Lys−Asp,Arg−Lys−Asp−Val（ハンガリ
ー国特許第185,263号明細書）およびArg−Lys−Asp−Va
l−Tyr（ハンガリー国特許第183,579号明細書）は、有
意な免疫刺激作用を及ぼす〔Drugs of Future，11,764
（1986）；およびDrugs of Today，22,17（1986）〕一
方、本発明に係るペプチドは反対の作用を示す。
幾つかの病気の原因またはそれに伴う症候群は、免疫機
構の動的機能の障害までさかのぼることができることが
知られている。免疫刺激薬は、遺伝的な免疫不全症、生
来の免疫不全症（出産後または分娩後、老齢）および後
天性の免疫不全症（例えば注射後および手術後、AIDS、
等）の治癒に使われている。しかしながら、免疫機構の
増大した機能または一時的に望ましくない機能が生体の
防御機構の自発的変化に起因するであろう多数の病気ま
たは状態が存在する。自己免疫疾患の場合は、防御機構
が“自身”と“異種”とを識別できず、従って、自身の
抗原に対しても抗体を生産することにより保護し、それ
により苛酷な結果が生じる。アレルギー症は、外来物質
により引き起こされる増大された抗体産生を伴う。器官
移植後の拒絶反応もまた、生体の正常な且つ健全な機能
の結果であるけれども、移植された外来器官をその生体
に組み入れることを可能にするためには一次的に抑制さ
れるべきである。
自己免疫疾患の治癒に使われるシクロホスファミド即ち
２−〔ビス（２−クロロエチル）アミノ〕−テトラヒド
ロ−2H−1,3,2−オキサザホスホリン−２−オキシド、
アザチオプリン即ち６−（１−メチル−４−ニトロ−５
−イミダゾリルチオ）プリンおよびコルチコステロイ
ド、並びにアレルギーを治癒するのに使われるＨ−１リ
セプター遮断性抗ヒスタミン薬、並びに器官移植に不可
欠であるシクロスポリンは、免疫機構の増大された機能
を抑制するかまたは正常の機能を弱める免疫抑制薬に属
する。
付随する副作用が多いことは、該免疫抑制薬の治療指数
が比較的低い（＜10）ことにより説明される。従って、
それらは精密な医療制御下でのみ、そして一般に限定さ
れた期間の間でのみ投与し得る。ペプチドタイプの活性
物質の特定の利点は、それらの比較的高い治療指数（＞
100〜1000）にあり、即ち、有害な作用を導く用量がそ
れらの有効量よりもずっと高いオーダーにあり；生理的
条件下では、生体内で非常に速く分解されそして蓄積さ
れないことである。それらの効果は、短い寿命の間に高
い高率で複雑な事柄を開始する能力に基づいている。
免疫刺激性ペプチドArg−Lys−AspおよびArg−Lys−Asp
−ValのＤ−アミノ酸含有ジアステレオマーである式
（１）〜（16）の新規ペプチド、更にリジンのα−また
はα−およびε−アミノ基上にアルギニンを担持してい
るイソペプチド並びにアスパラギン酸のβ−カルボキシ
ル基上にバリンを有するイソペプチドが、幾つかの免疫
学的試験において抑制効果を示すことを見出した。しか
し、本発明者らの現在までに入手可能な知見（例えば米
国特許第4,505,853号明細書を参照のこと）によれば、
この２つのタイプの変更は、普通むしろ酵素に対する耐
性の増大、ペプチドの安定性の増加およびもとの生物学
的効果の持続期間の延長を伴う。
〔課題を解決するための手段〕
本発明の式（１）〜（16）の新規ペプチドは、ペプチド
化学において知られている活性エステル法および／また
は混合無水物法の縮合段階、更にα−アミノ基および／
またはα−およびβ−アミノ基の脱保護段階をうまく使
って、 （ａ）水素添加またはアシドリシスにより除去可能な基
によりエステル化されたカルボキシル基、所望により保
護された側鎖アミノ基および／または水素添加もしくは
アシドリシスにより除去可能な基によりエステル化され
た側鎖カルボキシル基、並びに遊離アミノ基を有するカ
ルボキシ端のアミノ酸誘導体を使って開始し、カルボキ
シル基がエステル化されておりそしてペプチド結合に関
与しないアミノ基に保護基Bocおよび／またはＺを含む
式（１）〜（16）の新規ペプチドの誘導体を調製し； （ｂ）次いで、触媒的水素添加および／または酸処理に
より存在する保護基を除去し；そして （ｃ）所望であれば、酸との処理により式（１）〜（1
6）の遊離ペプチドをそれの酸付加塩に変換する； ことによって、溶液中での段階的な鎖−伸長法により調
製される。
保護基の組合せを使用するような合成においては、アミ
ノ保護基を選択的に除去し、次に合成の最後にできる限
り１回の単一段階において保護基を全て除去できるよう
にする。ペプチド結合を形成せしめるためには、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミドエステル〔−Ｏ−Su〕（E.Wuns
ch;Synthesevon Peptiden,第２巻、Georg Thieme Vela
g,Stuttgart,1974,第149頁）、ペンタフルオロフェニル
エステル（ハンガリー国特許第168,431号明細書）、ま
たは混合無水物（ハンガリー国特許第183,579号明細
書）を利用する方法が使われる。
アミノ部分を保護するためにはBocまたはＺ基、カルボ
キシル基を保護するためにはtert.−ブチルアルコー
ル、ベンジルアルコールまたはニトロベンジルアルコー
ルによるエステル化が好ましく使われる。
合成の終了後、こうして得られた保護ペプチドから、所
望により存在する保護基が除去され、次に、所望であれ
ば、酸との処理により遊離ペプチドがそれの酸付加塩に
変換される。保護基を除去するためには、触媒的水素添
加またはアシドリシスが使われる。
得られた遊離ペプチドは普通、療法的使用に十分適する
程純粋であり、そして更なる精製を全く必要としない。
しかしながら、所望であれば、シリカゲル上でのクロマ
トグラフィーにより精製することができる。溶液の形で
得られたペプチドは、溶液の蒸発または凍結乾燥により
単離できる。遊離のペプチドは適当な塩に変換できる
が、医薬上許容される酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、
酢酸およびクエン酸、を使って酸付加塩に変換すること
が好ましい。
調製された化合物の免疫抑制効果は、以下に記載の方法
を使って研究された。
1. 抗体産生細胞における効果 この研究はCanninghamの方法（Handbook of Experiment
al Immunology,D.M.Weir編、第２巻、Blackwell,Oxford
−London,第285頁、1978年）に従って、新生ラットから
得られた脾細胞を用いて行われた。同腹子の12匹のWist
arラットを、生後12時間以内に25μｇの試験物質で腹腔
内（i.p.）処置した。生後14日目に、５％ヒツジ赤血球
を含む懸濁液0.5mlによりこの動物をi.p.免疫処置し、
次いで７日後断頭により出血させた。この動物から得ら
れた脾細胞から、前記ヒツジ赤血球懸濁液および補体と
共に均一懸濁液を調製し、次いでこれを単層細胞層を得
るのに適したチャンバーに入れた。抗体を産生している
脾細胞の周りに、溶解領域、いわゆる溶血斑が形成され
た。第１表に要約されているデータは、抑制性物質での
処置の効果を示している。処置の効果のもとでの溶血斑
形成細胞のカウントの変化は、表においては％で示され
ている。（未処置の動物から得られた細胞カウントを対
照として使った。）既知の免疫刺激性物質（第１表の化
合物“A",“B"および“C"を見よ）の場合は、この比率
が有意に増加している。
2. 一次抗体産生における効果 この実験は、23〜30gの体重を有する雄のCFLP（LATI）
マウスにおいて行った。この動物を、３回洗浄された１
％のヒツジ赤血球を含有する懸濁液0.5mlにより腹腔内
（i.p.）免疫処置し、次いでこの動物を100mg/kgの用量
の試験物質でi.p.処置した。この処置の３日後に、この
動物から0.60〜0.70mlの血液を各々採取した。30分放置
後、遠心により血清を分離し、そしてTaka′tsyの方法
〔Acta Microbiol.Acad.Sci.Hung.,３,191（1955）〕に
従って血球凝集力価を測定した。データは第２表に要約
されており、未処置の動物に比較した一次抗体産生にお
ける抑制（阻害）効果の比率（％）を示す。免疫刺激性
化合物“B"および“C"は、同じテストにおいて逆の作用
を有する。
3. 静止マクロファージの貧食能力における効果 この実験は、J.Immunopharmacol.,４,265（1982−198
3）に記載された方法に従って、生後６ヵ月の雄のNZB
（OLAC−SzKB）マウスにおいて行った。この動物を４日
間の間毎日1mg/kgの用量の試験物質で皮下（s.c.）処置
した。この動物を出血させた後、各々10IUのヘパリンを
含むPBS緩衝液（pH7.2）8mlで腹膜を洗浄した。腹膜か
ら洗い出された細胞懸濁液を蒸留水でショッキングする
ことにより赤血球を遊離させ、次いでPBS緩衝液で３回
洗浄した。２回の洗浄過程の間の沈降は、1000rpmで５
分間遠心することにより行われた。次に、各細胞懸濁液
の濃度を106細胞数/mlに調製し、そしてその懸濁液を、
５％の二酸化炭素を含む大気中37℃のBoyden−チャンバ
ー中に30分間固定した。ガラス壁に付着したマクロファ
ージの上に、オプソニン処理された酵母を重層させた。
貧食されなかった粒子を除去した後、マクロファージに
より取り込まれたものを各セルにおいてカウントした。
第３表において、貧食された酵母細胞のカウントの減少
率は、対照としての未処置の動物から単離されたマクロ
ファージに比較して与えられている。
4. 接触皮膚炎の抑制 この研究は、Evansらの方法〔Br.J.Pharmacol.,43,403
（1971）〕を使って、20〜22gの体重を有する雄のBALB/
c（LATI）マウスに関して行った。この動物の脇腹から
毛を除去し、次いで各動物の裸の腹部の皮膚をヒマワリ
油中の２％オキサゾロン溶液0.1mlにより感作した。１
週間後、このマウスを1.0mg/kg用量の試験物質（生理食
塩水中に溶解したもの）でi.p.処置し、次いで２％オキ
サゾロンを含むアセトン溶液10μでこの動物の右耳を
直接処置し、一方アセトン10μで左耳を処置した。24
時間後、この両耳を切断し、そして計量した。動物の処
置された耳の重量と未処置の耳の重量との差を、試験物
質で処置された動物と生理食塩水のみで処置された動物
でそれぞれ観察された差と比較した。耳の重量の差は接
触皮膚炎の程度に比例するとみなされ、一方試験物質で
処置されない動物において測定された値を対照として取
り、第４表に示される比率で表わされるような試験物質
の皮膚炎減少効果を得た。
本発明に係るペプチドおよびそれらの酸付加塩を療法的
使用のための普通の医薬組成物において配合し、免疫機
構の活性を減少させることができる。この新規化合物を
使用する利点は、使用する用量範囲において全く副作用
がないのでほとんど完全な安全性を有することにある。
式（１）〜（16）のペプチドは、それらの遊離形または
酸付加塩の形で単独に、しかし安全には医薬製剤の形で
使用される。それらの製剤は、固体、液体または半液体
であることができ、そして充填剤、希釈剤、安定剤、pH
−および浸透圧−作用剤、並びにそのような製剤におい
て常用されている製剤を促進する添加剤を使うことによ
り調製できる。
固体の医薬組成物は、注射液を調製するのに適当な、例
えば粉末アンプルであることができる。注射可能な組成
物および注入液は液体である。
本発明に係る医薬組成物は、所望の効果を達成するのに
必要な用量の活性成分を含む量で患者に投与される。こ
の用量は、病気の重さ、患者の体重、活性成分に対する
患者の感受性、投与の経路および毎日の処置の回数に依
存する。どの場合でも使用すべき用量は、処置すべき患
者を熟知している医者により定められ得る。
単純な投与については、該医薬組成物は１回投与すべき
活性成分を含有する用量単位、またはそれの半分、３分
の１もしくは４分の１または数倍量から成る。
本発明に係る組成物は、普通投薬単位当り１〜100mgの
活性成分を含む。しかしながら、もちろん幾つかの組成
物においては、活性成分の量が前に定義された限界より
も多くても少なくてもよい。
〔実施例〕
本発明を次の非−限定的な例により詳細に説明する。こ
の記載で使用する略号は、一般に文献〔Biochem.J.,21
9,345（1984）〕のものと一致する。通例によれば、指
示されたアミノ酸についてのみ“D"立体配置が記号で示
されており；他のアミノ酸は“L"の立体配置を有する。
融点はDr.Tottoli装置（Buchi,Switzerlandにより製
造）で測定された。薄層クロマトグラフィー実験は、す
ぐ使用できる吸着剤（DC−Fertigplatten,Merck社、FRG
により製造）および下記の溶媒混合物（ここで、“原
液”はピリジン／酢酸／水の20:6:11混合物である）を
使って実施した。
1. 酢酸エチル／原液 19:1; 2. 酢酸エチル／原液 9:1; 3. 酢酸エチル／原液 6:1; 4. 酢酸エチル／原液 7:3; 5. ｎ−ブタノール／原液 3:7; 6. ｎ−ブタノール／原液 1:4; 7. ｎ−ブタノール／酢酸／酢酸エチル／水 1:1:1:1。
（比は体積比の値で示されている。） クロマトグラムは、ニンヒドリンにより、または塩素化
後、ヨウ化カリウム／トリジン試薬により検出した。
高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）分析は、可変波
長のLabor MIM 308型UV検出器、Labor−MIMループイン
ジェクター、Gilson 802Cおよび302ユニットから成る供
給ポンプ、圧力測定器並びにRadelkis OH 827型レコー
ダーを装備した装置を使うことにより行った。分離のた
めには、長さ150cmおよび内径4.6mmで、粒子サイズ６μ
ｍのC18−相Labor−MIM型装填材を使った。濃度10％の
アンモニア溶液の添加によりpH8に調製された濃度0.2％
のリン酸水溶液をトリペプチドの溶離用に使用し、一方
テトラペプチドの溶離用には、この溶離液に10重量％の
アセトニトリルを補充した。測定は、溶液の吸光度を21
2nmで検出する場合、1ml/分の流速で行った。クロマト
グラムは面積標準化法により評価された。目的の化合物
の純度は、HPLCおよび薄層クロマトグラフィー（TLC）
分析に基づくと95％よりも高かった。
比旋光度はPerkin−Elmer 241型旋光計において測定さ
れた。全ての溶媒は、40℃の湯浴中でBuchiロータリー
エバポレーターにおいて除去または蒸発された。
中間体および目的化合物の1H−NMRおよび13C−NMRスペ
クトルは、Varian XLA 400型装置において測定された。
目的化合物は、その場合でもD2O中に溶解された。スペ
クトルは、予想される構造と一致した。
目的化合物のアミノ酸分析は、Biotronic LC 5001型装
置において行った。試料を６モル濃度の塩酸中110℃で2
4時間加水分解した。分析結果は、どの場合でも、±５
％の誤差範囲内にあった。
合成の出発物質は、一般に文献で知られている。Ｄ−対
掌体は、Ｌ−対掌体と同じ方法においてＤ−アミノ酸を
使って出発して合成した。
例１ Arg−Lys−Ｄ−Aspの調製（方法“A"） 4.06ml（29.0ミリモル）のトリエチルアミンを、60mlの
酢酸エチル中に6.60g（13.8ミリモル）のＺ−Lys（Bo
c）−OSuおよび4.86g（14.5ミリモル）のＨ−Ｄ−Asp
（OtBu）−OtBuシュウ酸塩を含む混合物に添加し、次い
でこの混合物を一晩放置しておく。次に、それを水20ml
で１回、１モルの塩酸各20mlで３回、５％の炭酸水素カ
リウム水溶液各20mlで３回、および最後に水20mlで１
回、順次洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾
燥し、そして減圧下で蒸発させる。
油状生成物（重量6.5g,Rf 2＝0.8）、すなわち保護ジペ
プチドである蒸発残渣を70mlのメタノール中に溶解し、
1.5gのパラジウム・カーボン（Pd/C）を添加し、撹拌下
で懸濁液に２時間水素ガスをバブリングする。混合物を
濾過し、そして1.45g（11.5ミリモル）のシュウ酸二水
和物を濾液に添加する。蒸発後、残渣をエーテルで粉砕
し、そして得られた懸濁液を濾過すると4.80gの遊離のL
ys−Ｄ−Aspシュウ酸塩を得る。m.p.:118−121℃，▲
〔α〕20 D▼＝11.0゜（ｃ＝１、メタノール）,Rf 2＝0.2
5。
−10℃に冷却した20mlのジメチルホルムアミド（DMF）
中に1.98g（6.0ミリモル）のBoc−Arg（・HCl）−OH・H
2Oおよび0.67ml（6.0ミリモル）のＮ−メチルモルホリ
ンを含む溶液に、0.78ml（6.0ミリモル）のイソブチル
クロロホルメートを滴加する。こうして得られた混合無
水物を−10℃で10分間撹拌し、次に、−10℃に冷却した
DMF15ml中に前記のようにして調製されたLys−Ｄ−Asp
シュウ酸塩3.27g（5.8ミリモル）およびＮ−メチルモル
ホリン1.28ml（11.6ミリモル）を含む溶液を添加する。
その後、反応混合物を室温まで加温し、そして一晩放置
する。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を50mlのクロロホ
ルム中に溶解し、そして１モルの塩酸各20mlで３回およ
び水20mlで順次洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウム上で
乾燥する。懸濁液を濾過した後、濾液を減圧下で蒸発さ
せる。ジイソプロピルエーテルの添加により、油状の残
渣を固体にする。懸濁液を濾過し、そして濾液を減圧蒸
発すると、3.20g（4.18ミリモル）の非晶質のBoc−Arg
（・HCl）−Lys（Boc）−Ｄ−Asp（OtBu）−OtBuトリペ
プチドエステル塩を得る。Rf 3＝0.10,Rf 4＝0.45,▲
〔α〕20 D▼＝−6.4゜（ｃ＝１、メタノール）。
上記のようにして調製された他の保護ペプチドは第５表
に示されている。
上記のようにして得られた保護トリペプチドエステル塩
1.60g（2.08ミリモル）を20mlのトリフルオロ酢酸で２
時間処理し、次いで減圧下で蒸発させる。エーテルの添
加により残渣を固体にした後、懸濁液を濾過し、そして
沈澱物をエーテルで徹底的に洗浄する。得られたトリフ
ルオロ酢酸塩を20mlの水に溶かし、そして5mlのアセテ
ート型のDowex2×８イオン交換樹脂（Dow Chemical Co.
により製造）を添加する。30分後、懸濁液を濾過し、濾
液を減圧下で蒸発せしめ、メタノールの添加により蒸発
残渣を固体にすると、1.0gの非晶質のArg−Lys−Ｄ−As
p・CH3COOHトリペプチド酢酸塩を得る。▲〔α〕20 D▼
＝＋1.0゜（ｃ＝1.0,10％酢酸）。アミノ酸分析:D−Asp
＝1.03,Lys＝1.00,Arg＝0.98。
上記のようにして調製した式（１）〜（16）の目標化合
物の物理定数は第６表に要約されている。
例２ Lys（Arg）−Aspの調製（方法“B"） 60mlの酢酸エチル中に4.77g（10.0ミリモル）のBoc−Ly
s（Ｚ）−OSuおよび3.69g（11.0ミリモル）のＨ−Asp
（OtBu）−OtBuシュウ酸塩を含む混合物に、3.08mlのト
リエチルアミンを添加し、そして混合物を一晩反応させ
る。次に、この混合物を水20mlで１回、１モルの塩酸各
20mlで３回、５％の炭酸水素カリウム水溶液で３回、そ
して最後に水20mlで１回順次洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ム上で乾燥し、次いで減圧下で蒸発させる。
オイルとして得られた保護ジペプチド（Rf 4＝0.85）5.6
gを60mlのメタノールに溶解し、そしてパラジウム・カ
ーボン（Pd/C）触媒1.0gを添加した後、撹拌下で２時間
懸濁液に水素ガスをバブリングする。次いで懸濁液を濾
過し、濾液に1.1gのシュウ酸二水和物を添加し、そして
溶媒を蒸発させる。エーテル中に結晶残渣を懸濁し、濾
過し、そして乾燥して4.4gのBoc−Lys−Asp（OtBu）−O
tBuシュウ酸塩を得る。m.p.:135−138℃,Rf 4＝0.35。
得られた前記シュウ酸塩を、例１に記載したような混合
無水物縮合法によりLysのε−アミノ基の所でアシル化
し、次いで例１に記載したようにして、得られた保護ト
リペプチドから保護基を除去する。
上記のようにして得られた保護ペプチドおよび遊離ペプ
チドの物理定数は第５表および第６表に要約されてい
る。
例３ Arg−Lys（Arg）−Aspの調製（方法“C"） 1.85g（5.5ミリモル）のＨ−Asp（OtBu）−OtBuシュウ
酸塩を振盪漏斗中の50mlのエーテル中に懸濁し、そして
５％炭酸水素カリウム溶液20mlをこの懸濁液に添加す
る。完全に溶解するまで混合物を振盪し、水相を分離
し、エーテル相を20mlの５％炭酸水素カリウム溶液およ
び20mlの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、
そして20mlの容量まで減圧濃縮する。保護リジンＺ−Ly
s（Ｚ）−OH2.49g（6.0ミリモル）を添加しそして０℃
に冷却した後、1.20g（5.8ミリモル）のジシクロヘキシ
ルカルボジイミドを添加する。この混合物を０℃で30分
間維持し、次いで室温で一晩放置する。ジシクロヘキシ
ル尿素沈澱物を濾別し、濾液を各10mlの１モル塩酸で３
回、各10mlの５％炭酸水素ナトリウム溶液で３回、そし
て最後に20mlの水で１回、順次洗浄し、そして無水硫酸
ナトリウム上で乾燥後、減圧下で蒸発させる。
油状の蒸発残渣として得られた3.0gの保護ジペプチド
（Rf 2＝0.80）を50mlのメタノールに溶解し、そして1.0
gのパラジウム・カーボン（Pd/C）触媒を添加した後、
懸濁液に水素ガスを２時間バブリングする。触媒の濾別
の後、濾液に1.18g（9.34ミリモル）のシュウ酸二水和
物を添加し、そして混合物を10mlまで減圧濃縮する。こ
うして得られた懸濁液をエーテルの添加により100mlに
希釈し、沈澱物を濾過しそしてエーテルで洗浄する。こ
うして、1.49gのＨ−Lys−Asp（OtBu）−OtBuシュウ酸
塩（Rf 5＝0.25）が得られ、例１に記載の混合無水物縮
合法を使うことにより、これのリジン部分の２つのアミ
ノ基ともアシル化する。こうして得られた保護テトラペ
プチドから例１に記載のようにして保護基を除去する。
保護テトラペプチドおよび遊離テトラペプチドの物理定
数は、第５表および第６表に要約されている。
例４ Ｄ−Arg−Lys−Asp−Valの調製（方法“D"） 110mlのジメチルホルムアミド中の6.3g（30ミリモル）
のＨ−Val−OtBu・HClおよび11.2g（26.8ミリモル）の
Ｚ−Asp（OtBu）−OSuの懸濁液に、4.2ml（30ミリモ
ル）のトリエチルアミンを添加した後、この混合物を一
晩放置し、次いで減圧下で蒸発させる。油状の蒸発残渣
を200mlの酢酸エチルに溶解し、そして各40mlの１モル
塩酸で２回、40mlの水、40mlの５％炭酸水素ナトリウム
溶液、そして再び40mlの水で順次洗浄する。無水硫酸ナ
トリウム上での乾燥の後、溶液を濾過し、そして濾液を
減圧下で蒸発させる。
蒸発残渣として得られた13.0gの保護ジペプチド（Rf 1＝
0.80）を100mlのメタノールに溶解し、1.5gのパラジウ
ム・カーボン触媒を添加した後、撹拌下で懸濁液に２時
間水素ガスをバブリングする。触媒を濾別した後、濾液
を減圧下で蒸発させる。油状の蒸発残渣を100mlのエー
テル中に溶解し、そしてpHが５になるまでメタノール性
塩化水素溶液（HCl/MeOH）を添加する。得られた懸濁液
を５時間冷却し、次いで濾過し、沈澱物をエーテルで洗
浄し、そして乾燥すると9.0g（88.0ミリモル）のＨ−As
p（OtBu）−Val−OtBu・HCl,m.p.:187−189℃,Rf 1＝0.4
0を得る。
その先は、例１に記載の方法に従う。
こうして得られた保護および遊離のテトラペプチドの物
理定数は第５表および第６表に要約されている。
例５ Arg−Lys−Asp（Val）の調製（方法“E"） 25mlのDMF中に2.58g（12.0ミリモル）のＨ−Val−OtBu
・HClおよび4.62g（11.0ミリモル）のＺ−Asp（OSu）−
OtBuを含む懸濁液に、1.68ml（12.0ミリモル）のトリエ
チルアミンを添加した後、混合物を一晩反応させ、次い
で減圧下で蒸発させる。50mlの酢酸エチル中の蒸発残渣
の溶液を、20mlの水で１回、各20mlの１モル塩酸で３
回、各20mlの５％炭酸水素ナトリウム溶液で３回、そし
て最後に20mlの水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウ
ム上で乾燥し、そして減圧下で蒸発させると、4.3g（8
1.7％）の保護ジペプチドを得る。m.p.:86.5−87.0℃,R
f 1＝0.85。
40mlのメタノール中に上記のようにして得られた保護ジ
ペプチド4.07g（8.5ミリモル）を含む溶液に1.0gのパラ
ジウム・カーボン触媒を添加した後、２時間の間撹拌し
ながら懸濁液に水素ガスをバブリングすることより水素
添加する。触媒を濾別した後、濾液を減圧下で蒸発させ
る。蒸発残渣を50mlのエーテル中に溶解し、そして3ml
のメタノール中に溶解された0.76g（8.5ミリモル）のシ
ュウ酸二水和物を添加すると、3.37g（91.6％）の遊離
ジペプチド・シュウ酸塩（m.p.:142−143℃,Rf 1＝0.1
5）を得、次いで例１に記載のようにしてこれをアシル
化する。
こうして得られた保護および遊離のテトラペプチドの物
理定数は、第５表および第６表に要約されている。
フロントページの続き (72)発明者 ラースロー デネス ハンガリー国，1173 ブダペスト，ペステ ィ ウート 95 (72)発明者 ジョールジィ ハヨーシュ ハンガリー国，1026 ブダペスト，ガーボ ル ウート 59 (72)発明者 ラースロー スポルニイ ハンガリー国，1114 ブダペスト，スアボ ルチェカ エム．ウッツァ ７

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】免疫機構の機能を抑制する式（１）〜（1
    6）のペプチド： Ｄ−Arg−Lys−Ｄ−Asp （１）， Arg−Ｄ−Lys−Asp （２）， Ｄ−Arg−Ｄ−Lys−Ｄ−Asp （３）， Arg−Ｄ−Lys−Ｄ−Asp （４）， Ｄ−Arg−Lys−Asp （５）， Ｄ−Arg−Ｄ−Lys−Asp （６）， Arg−Lys−Ｄ−Asp （７）， Arg−Lys−Ｄ−Asp−Val （８）， Arg−Lys−Asp−Ｄ−Val （９）， Ｄ−Arg−Lys−Asp−Val （10）， Arg−Ｄ−Lys−Asp−Val （11）， Lys（Arg）−Asp （12）， Lys（Arg）−Ｄ−Asp （13）， Arg−Lys（Arg）−Asp （14）， Arg−Lys−Asp（Val） （15）および Arg−Lys−Ｄ−Asp（Val） （16） 並びにそれらの酸付加塩。
  2. 【請求項２】免疫機構の機能を抑制する医薬組成物であ
    って、希釈剤、充填剤、安定剤、pH−および浸透圧−作
    用剤並びに医薬産業において常用されている製剤を促進
    する添加剤および補助物質との混合物において、活性成
    分として療法的に有効な量において遊離形または酸付加
    塩の形で１または複数の請求項１に記載の式（１）〜
    （16）のペプチドを含んで成る医薬組成物。
JP1148522A 1988-06-14 1989-06-13 免疫機構の機能を仰制する新規ペプチド、それらを含む医薬組成物、並びに前記ペプチド及び医薬組成物の調製方法 Expired - Lifetime JPH0778075B2 (ja)

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