JPH0767620A - Fed batch culture of euglena - Google Patents
Fed batch culture of euglenaInfo
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- JPH0767620A JPH0767620A JP31098192A JP31098192A JPH0767620A JP H0767620 A JPH0767620 A JP H0767620A JP 31098192 A JP31098192 A JP 31098192A JP 31098192 A JP31098192 A JP 31098192A JP H0767620 A JPH0767620 A JP H0767620A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、ユーグレナの培養方法
に関する。本発明の方法によると、ユーグレナの収率を
増大させ、その中のリン脂質含量を向上することができ
る。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for culturing Euglena. According to the method of the present invention, the yield of euglena can be increased and the phospholipid content therein can be improved.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ユーグレナは、単細胞の真核生物であっ
て、生物分類学上はミドリムシ植物門に分類される植物
であると共に、原生動物門に分類される動物でもあると
いう特異な生物である。このユーグレナは、淡水中に広
く分布しており、多くは池や沼などのような静水中に生
棲するが、海水中、あるいは汚水中でも生育することが
知られている。そして、ユーグレナは、比較栄養学の材
料生物として有用であって、その生理について多くの研
究がなされている〔ユーグレナ−生理と生化学、北岡正
三郎編、学会出版センター、１９８９年〕。また、ユー
グレナは、アラキドン酸やエイコサペンタエン酸などの
高度不飽和脂肪酸、あるいはビタミンＣ、Ｅ、β−カロ
チンなどのビタミン類、さらには良質の蛋白質や多糖類
などの有用物質を生産することも知られている。BACKGROUND OF THE INVENTION Euglena is a unicellular eukaryotic organism and is a unique organism that is a taxonomically classified plant of the Euglena plant genus and an animal classified as the Protozoan phylum. . This euglena is widely distributed in freshwater, and most of them live in still water such as ponds and swamps, but it is known that they can grow in seawater or sewage. Euglena is useful as a material organism for comparative nutrition, and many studies have been conducted on its physiology [Euglena-Physiology and Biochemistry, edited by Shozaburo Kitaoka, Academic Society Publishing Center, 1989]. Euglena is also known to produce highly unsaturated fatty acids such as arachidonic acid and eicosapentaenoic acid, vitamins such as vitamins C, E, and β-carotene, and useful substances such as high-quality proteins and polysaccharides. Has been.
【０００３】近年、ユーグレナの生産するそれらの成分
を利用する目的で、多くの研究者がユーグレナの培養法
について種々の検討を行っている。例えば、高濃度の酸
素を通気することにより、蝋質物や粘質物などの生成、
分泌を抑制し、不飽和脂肪酸やビタミンＥなどの生産を
促進させる培養方法（特公平４−４８６５号公報）や従
来の回分培養法に比べて同一培養時間で１．５〜１０倍
量のユーグレナを得ることのできる連続培養方法（特開
昭６１−３７０９１号公報）などが知られており、さら
には、閉鎖系暗黒下での培養と開放系光照射下での培養
を組み合わせた培養方法（特開昭６１−４０７８５号公
報）も提案されている。本発明者らも、先にシェア・ス
トレスを軽減し，攪拌力に優れたユーグレナ培養装置
（特開平３−９８５７４号公報）を開発している経緯が
ある。In recent years, many researchers have conducted various studies on the culture method of Euglena for the purpose of utilizing those components produced by Euglena. For example, by aeration of high concentration oxygen, the production of waxy material and mucilage,
1.5 to 10 times the amount of Euglena in the same culture time as the culture method of suppressing secretion and promoting the production of unsaturated fatty acids and vitamin E (Japanese Patent Publication No. 4-4865) and the conventional batch culture method. A continuous culture method (Japanese Patent Application Laid-Open No. 61-37091) capable of obtaining the above is known, and further, a culture method in which culture in a closed dark environment and culture in an open light irradiation are combined ( Japanese Patent Laid-Open No. 61-40785) has also been proposed. The inventors of the present invention have a history of previously developing a Euglena culture device (Japanese Patent Laid-Open No. 98574/1993) that reduces shear stress and is excellent in stirring power.
【０００４】従来、ユーグレナを培養する方法として、
回分培養法が用いられている。この方法では、培養に必
要な栄養分を溶解した発酵槽を滅菌した後、あらかじめ
前培養した細胞を接種し、細胞数及び細胞収率が所定の
水準に到達するまでユーグレナを培養する（特公平４−
４８６５号公報、特開昭６１−４０７８５号公報）。し
かし、この方法で培養した場合、通常の培養期間に得ら
れる細胞収率は、多くても１０ｇ／ｌ程度で非常に少な
いという問題がある。また、滅菌した栄養分を連続的に
発酵槽内に送液して発酵槽内に一定時間滞留させると共
に、細胞懸濁液の一部を回収する連続培養法も提案され
ている（特開昭６１−３７０９１号公報）。しかし、こ
の方法を用いると培養中に細胞の生理状態が変化するた
め、目的の生産物を高含量で得ることが難しく、さらに
は、培養が長期間にわたるため、雑菌に汚染される危険
性が増加するという問題がある。そして、有用物質の回
収が数回にわたって煩雑であること、あるいはそれを避
けるためにまとめて回収作業を行った場合は、保存中に
細胞成分の変化が生じるなどの問題もある。Conventionally, as a method for culturing Euglena,
The batch culture method is used. In this method, after sterilizing a fermenter in which nutrients necessary for cultivation are sterilized, cells precultured in advance are inoculated, and Euglena is cultured until the number of cells and the cell yield reach a predetermined level (Japanese Patent Publication No. −
4865, JP-A-61-40785). However, when cultured by this method, there is a problem that the cell yield obtained during a normal culture period is at most about 10 g / l, which is extremely low. A continuous culture method has also been proposed in which sterilized nutrients are continuously fed into a fermenter to be retained in the fermentor for a certain period of time and a part of the cell suspension is collected (Japanese Patent Laid-Open No. 61-61). -37091). However, when this method is used, it is difficult to obtain a desired product in a high content because the physiological state of cells is changed during the culture, and further, since the culture is performed for a long time, there is a risk of being contaminated with various bacteria. There is a problem of increase. There is also a problem that the collection of the useful substance is complicated several times, or if the collection work is carried out in order to avoid it, the cell components change during storage.
【０００５】一方、リン脂質は生体膜の構成成分であっ
て、通常は食品から摂取される量で十分であることが知
られている。また、生物は必要量に見合ったリン脂質を
生合成することができることも明らかになってきてい
る。しかしながら、近年、生体内の膜リン脂質が、血清
コレステロールの低下作用、血圧降下作用、神経伝達系
の活性化作用など、種々の役割を果たしていることが明
らかとなり、リン脂質の生理活性が見直されつつある現
状にある。そのような中で、ユーグレナが生産するリン
脂質量は、総脂質量の７０％以上を占める場合もあるこ
とが知られている。そして、脂肪酸の大部分がこのリン
脂質画分に含まれ、特に高度不飽和脂肪酸はその傾向が
顕著であることから、高度不飽和脂肪酸含量が高く、特
異的な生理活性を有するリン脂質をユーグレナが生産す
ることも期待される。On the other hand, phospholipids are constituents of biological membranes, and it is known that the amount taken from foods is usually sufficient. It has also become clear that organisms can biosynthesize phospholipids in proportion to the required amount. However, in recent years, it has become clear that membrane phospholipids in vivo play various roles such as serum cholesterol lowering action, blood pressure lowering action, and neurotransmission system activating action, and the physiological activity of phospholipids has been reviewed. It is in the current situation. Under such circumstances, it is known that the amount of phospholipid produced by Euglena may account for 70% or more of the total amount of lipid. Most of fatty acids are contained in this phospholipid fraction, and the tendency of polyunsaturated fatty acids is particularly remarkable. Therefore, eulipena which has a high polyunsaturated fatty acid content and a specific physiological activity is euglena. Is also expected to produce.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上述の
問題点を鑑み、ユーグレナの収率を増大させると共に、
リン脂質含量の高いユーグレナを培養すべく、その方法
について鋭意検討を行ったところ、回分培養法と同様の
方法で培養を開始した発酵槽内に、培養途中の任意の時
期に栄養成分を添加し、一定の細胞数および細胞収量に
なるまで培養を行うことにより、ユーグレナの収率を増
大させると共に、リン脂質含量の高いユーグレナを得ら
れることができることを見出し、本発明を完成するに至
った。したがって、本発明は、ユーグレナの収率を増大
させると共に、その中のリン脂質含量を高めるユーグレ
ナ培養方法を提供することを課題とする。In view of the above-mentioned problems, the present inventors have increased the yield of Euglena, and
In order to cultivate Euglena with a high phospholipid content, we conducted extensive studies on the method and found that the nutrient components were added at any time during the culturing to the fermentation tank that had been cultivated by the method similar to the batch culturing method. The present inventors have completed the present invention by finding that euglena yield can be increased and euglena with a high phospholipid content can be obtained by culturing until a constant cell number and cell yield are achieved. Therefore, it is an object of the present invention to provide a Euglena culture method for increasing the yield of Euglena and increasing the phospholipid content therein.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明は、ユーグレナを
流加基質として炭素源及び窒素源を添加しながら流加培
養を行なうことよりなるユーグレナの流加培養法に関す
る。本発明における炭素源及び窒素源としては特に限定
はないが、通常のユーグレナその他の微生物、細胞等の
培養に用いられる炭素源及び窒素源が用いられる。この
ような炭素源としては、糖類、例えばグルコース、フル
クトース、ガラクトース、キシロース等を、窒素源とし
てはアンモニウム塩、アミノ酸等を挙げることができ
る。アンモニウム塩としてはリン酸アンモニウム、リン
酸水素一アンモニウム、リン酸水素二アンモニウム等が
あり、このうち特にリン酸水素二アンモニウムが好適で
ある。またアミノ酸には、イソロイシン、リジン、バリ
ン、アスパラギン酸、グルタミン酸等、通常のアミノ酸
を挙げることができるが、このうち特に酸性アミノ酸、
就中グルタミン酸が好適である。また、本発明ではこれ
らのアミノ酸のナトリウム塩等の水溶性塩を用いること
もできる。特に窒素源としてグルタミン酸及びリン酸水
素二アンモニウムを併用することがユーグレナの収率や
リン脂質含量の面からみて望ましい。以下、本発明で
は、炭素源としてグルコースを、窒素源としてグルタミ
ン酸及びリン酸水素二アンモニウムを用いた場合につい
て主として説明するが、本発明の炭素源及び窒素源は上
記のように広範囲のものから選択することができ、これ
らに限定解釈されるべきではない。本発明は、先に挙げ
た種々の従来法に比較して、ユーグレナの収率を増大さ
せることができると共に、リン脂質含量の高いユーグレ
ナを得ることができる。本発明の流加培養法は、従来の
回分培養法と同様の方法で培養を開始した発酵槽内に、
培養途中の任意の時期に栄養成分を添加し、一定の細胞
数および細胞収量になるまで培養を行うことにより、ユ
ーグレナの収率を増大させると共に、リン脂質含量の高
いユーグレナを培養できるものである。The present invention relates to a fed-batch culture method of euglena, which comprises performing fed-batch culture while adding a carbon source and a nitrogen source using Euglena as a fed-batch substrate. The carbon source and the nitrogen source in the present invention are not particularly limited, but a carbon source and a nitrogen source which are commonly used for culturing Euglena and other microorganisms, cells and the like are used. Examples of such carbon sources include sugars such as glucose, fructose, galactose, xylose and the like, and examples of nitrogen sources include ammonium salts and amino acids. Examples of the ammonium salt include ammonium phosphate, monoammonium hydrogenphosphate, diammonium hydrogenphosphate and the like, and of these, diammonium hydrogenphosphate is particularly preferable. Examples of the amino acid include isoleucine, lysine, valine, aspartic acid, glutamic acid, and the like, which are ordinary amino acids. Of these, particularly acidic amino acids,
Glutamic acid is especially preferred. Further, in the present invention, water-soluble salts such as sodium salts of these amino acids can also be used. In particular, it is preferable to use glutamic acid and diammonium hydrogen phosphate in combination as the nitrogen source from the viewpoint of the Euglena yield and the phospholipid content. Hereinafter, in the present invention, glucose will be mainly described as the carbon source, and the case where glutamic acid and diammonium hydrogen phosphate are used as the nitrogen source will be mainly described, but the carbon source and the nitrogen source of the present invention are selected from a wide range as described above. And should not be construed as limited to these. The present invention can increase the yield of Euglena and can obtain Euglena having a high phospholipid content as compared with the various conventional methods mentioned above. Fed-batch culture method of the present invention, in a fermenter that started the culture in the same manner as the conventional batch culture method,
By adding nutrients at any time during the culture and culturing until a constant cell number and cell yield are achieved, it is possible to increase the yield of euglena and to culture euglena with a high phospholipid content. .
【０００８】本発明は、ユーグレナ属に属する全ての種
に対して適用することができる。代表的なユーグレナと
しては、Ｅｕｇｌｅｎａ ｇｒａｃｉｌｉｓ、Ｅｕｇｌ
ｅｎａ ｇｒａｃｉｌｉｓ ｖａｒ．ｂａｃｉｌｌａｒ
ｉｓ、Ｅｕｇｌｅｎａ ｖｉｒｉｄｉｓなどが知られて
おり、これらの変異種も用いることができる。The present invention can be applied to all species belonging to the genus Euglena. Typical Euglena include Euglena gracilis , Eugl
ena gracilis var. bacillar
is , Euglena viridis and the like are known, and mutants thereof can also be used.
【０００９】本発明において、ユーグレナを培養する際
に用いる培地は、特に限定されるものではなく、通常、
ユーグレナの培養に用いられている組成のもので良い。
また、文献上知られている公知の培地組成を含め、炭素
源、窒素源、無機化合物及びビタミン類など、種々の組
成を組み合わせたものでも良い。例えば、ハトナー培地
〔ジャーナル・オブ・プロトズーオロジー、第６巻、２
３ページ、１９５９年〕、コレン−ハトナー培地〔ジャ
ーナル・オブ・プロトズーオロジー、第１４巻、１７ペ
ージ、１９６７年〕など、公知の培地を用いることがで
きる。なお、ハトナー培地は、培地１ｌ当たり、リンゴ
酸２ｇ、グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二水素カ
リウム０．４ｇ、リン酸水素二アンモニウム０．２ｇ、
硫酸マグネシウム０．５ｇ、炭酸カルシウム０．２ｇ、
硫酸亜鉛２２ｍｇ、硫酸マンガン５．８ｍｇ、硫酸第一
鉄アンモニウム５．７ｍｇ、モリブデン酸アンモニウム
１．５ｍｇ、硫酸銅１．６ｍｇ、硫酸コバルト１．９ｍ
ｇ、ホウ酸１１．４ｍｇ、ＥＤＴＡ・２ナトリウム５０
ｍｇ及びビタミンＢ1 ２．５ｍｇ、ビタミンＢ12０．０
２ｍｇを含み、ｐＨは３．３である。In the present invention, the medium used for culturing Euglena is not particularly limited, and is usually
The composition used for culturing Euglena may be used.
Further, it may be a combination of various compositions such as a carbon source, a nitrogen source, an inorganic compound and vitamins, including a known medium composition known in the literature. For example, Hatner's medium [Journal of Protozoology, Volume 6, 2
Known media such as Koren-Hatner medium [Journal of Protozoology, Vol. 14, p. 17, 1967] can be used. The Hatner medium was 2 g of malic acid, 5 g of sodium glutamate, 0.4 g of potassium dihydrogen phosphate, 0.2 g of diammonium hydrogen phosphate per liter of the medium.
0.5 g of magnesium sulfate, 0.2 g of calcium carbonate,
Zinc sulfate 22 mg, manganese sulfate 5.8 mg, ferrous ammonium sulfate 5.7 mg, ammonium molybdate 1.5 mg, copper sulfate 1.6 mg, cobalt sulfate 1.9 m
g, boric acid 11.4 mg, EDTA ・ 2 sodium 50
mg and vitamin B 1 2.5 mg, vitamin B 12 0.0
It contains 2 mg and has a pH of 3.3.
【００１０】本発明では、培養開始時の培地に、炭素源
としてグルコースを１０〜２５ｇ／ｌ、好ましくは１３
〜２０ｇ／ｌ、窒素源としてグルタミン酸及びリン酸水
素二アンモニウムをそれぞれ１〜１０ｇ／ｌ及び０．１
〜５ｇ／ｌ、好ましくは２〜７ｇ／ｌ及び０．２〜３ｇ
／ｌ添加し、培養を開始する。この際、培地のｐＨは
２．５〜８．０、好ましくは３．０〜４．５、培養温度
は１０〜３５℃、好ましくは２５〜３２℃に調整し、光
照射下あるいは暗黒下に、２〜１０日間、好ましくは５
〜７日間培養を行う。なお、培養に用いる装置について
は、培養中に流加基質を無菌的に添加できる構造のもの
であれば特に問題はないが、本発明者らの提案したユー
グレナの培養に適した装置（特開平３−９８５７４号公
報）を用いることが好ましい。流加基質は、培養中の任
意の時期、好ましくは培養３日目〜５日目に、炭素源及
び窒素源がほぼ消費されるのでその時期に、炭素源とし
てグルコースを５〜２０ｇ／ｌ、好ましくは８〜１３ｇ
／ｌ、窒素源としてグルタミン酸及びリン酸水素二アン
モニウムをそれぞれ１〜８ｇ／ｌ及び０．５〜５ｇ／
ｌ、好ましくは３〜５ｇ／ｌ及び０．７〜２ｇ／ｌ添加
し、培養を継続する。なお、流加基質にその他の微量無
機化合物を添加する必要は特にない。炭素源及び窒素源
を添加した直後、培地中の溶存酸素濃度が著しく低下す
るので、通気量を高めることが望ましい。本発明の流加
培養法では、通常の回分培養法の培養３日目頃に培地か
ら消失するグルコース及びグルタミン酸を流加基質とし
て補うことにより、ユーグレナの収率を増大させること
ができると共に、リン脂質含量の高いユーグレナを得る
ことが可能となる。In the present invention, glucose as a carbon source is 10 to 25 g / l, preferably 13 in the medium at the start of the culture.
˜20 g / l, glutamic acid and diammonium hydrogen phosphate as nitrogen sources 1 to 10 g / l and 0.1, respectively.
~ 5 g / l, preferably 2-7 g / l and 0.2-3 g
/ L is added to start the culture. At this time, the pH of the medium is adjusted to 2.5 to 8.0, preferably 3.0 to 4.5, and the culture temperature is adjusted to 10 to 35 ° C, preferably 25 to 32 ° C, and the medium is exposed to light or in the dark. 2 to 10 days, preferably 5
Culture for ~ 7 days. It should be noted that there is no particular problem with the apparatus used for the culture as long as the fed-batch substrate can be aseptically added during the culture, but an apparatus suitable for the culture of Euglena proposed by the present inventors 3-98574). The fed-batch substrate consumes almost 5 to 20 g / l of glucose as a carbon source at any time during the culture, preferably on the 3rd to 5th day of the culture, since the carbon source and the nitrogen source are almost consumed. Preferably 8 to 13 g
/ L, glutamic acid and diammonium hydrogen phosphate as nitrogen sources are 1 to 8 g / l and 0.5 to 5 g / l, respectively.
1, preferably 3 to 5 g / l and 0.7 to 2 g / l are added and the culture is continued. It is not particularly necessary to add other trace inorganic compounds to the fed-batch substrate. Immediately after the carbon source and the nitrogen source are added, the dissolved oxygen concentration in the medium is remarkably reduced, so it is desirable to increase the aeration rate. In the fed-batch culture method of the present invention, the yield of euglena can be increased by supplementing glucose and glutamic acid that disappear from the medium around the third day of the culture in the ordinary batch culture method as a fed-batch substrate. It is possible to obtain Euglena having a high lipid content.
【００１１】このようにして培養されたユーグレナは、
遠心分離などの手法を用い、培養液から回収することが
できる。培養されたユーグレナは、そのままあるいは凍
結乾燥、通気乾燥等の乾燥手段をほどこして脂質を抽出
する。脂質の抽出はヘキサン、クロロホルム、ジエチル
エーテル、アセトン、メタノール、エタノールなどの通
常脂質の抽出に用いられている有機溶媒を用い、回収し
たユーグレナから脂質を抽出する。抽出操作は、浸漬、
振盪、あるいは攪拌などで十分である。脂質抽出後、減
圧し、含有成分が分解しない程度の温度で抽出液から溶
媒を留去する。そして、抽出した脂質をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーなどの方法によって分画し、リン
脂質画分を回収することができる。The Euglena thus cultivated is
It can be recovered from the culture broth using a technique such as centrifugation. The cultured euglena is extracted as it is or by subjecting it to a drying means such as freeze-drying or aeration drying. Lipids are extracted from the recovered Euglena using an organic solvent such as hexane, chloroform, diethyl ether, acetone, methanol, and ethanol which is usually used for lipid extraction. The extraction operation is dipping,
Shaking or stirring is sufficient. After the lipid extraction, the pressure is reduced and the solvent is distilled off from the extract at a temperature at which the contained components are not decomposed. Then, the extracted lipid can be fractionated by a method such as silica gel column chromatography to collect the phospholipid fraction.
【００１２】次に実施例を示し、本発明を詳しく説明す
る。Next, the present invention will be described in detail with reference to examples.
【実施例１】容量２ｌの発酵槽に、リンゴ酸に代えてグ
ルコース１８ｇ／ｌ、グルタミン酸３ｇ／ｌ、リン酸水
素二アンモニウム２．５ｇ／ｌを含む改変ハトナー培地
１．３ｌを入れ、同様の培地で前培養したＥｕｇｌｅｎ
ａ ｇｒａｃｉｌｉｓ ＳＭ−ＺＫ株 ５％を接種して
流加培養を行った。なお、培養装置は、特開平３−９８
５７４号公報に開示されているものを用いた。培養
は、、２５℃、６０ｒｐｍで攪拌下に、培養０〜３日は
通気速度０．３２ｌ／ｍｉｎ．、３〜５日は１．３ｌ／
ｍｉｎ．、５〜７日は１．９５ｌ／ｍｉｎ．で通気し、
通気攪拌培養を行なった。そして、流加基質として、培
養３日目及び５日目にグルコース１３ｇ／ｌ、グルタミ
ン酸３ｇ／ｌ、リン酸水素二アンモニウム１．５ｇ／ｌ
をそれぞれ添加した。培養後、遠心分離（３，０００×
ｇ、１０分間）を行ってユーグレナを回収し、凍結乾燥
を行った。得られたユーグレナの収率は３０ｇ／ｌであ
った。Example 1 A fermenter having a capacity of 2 liters was charged with 1.3 liters of modified Hatner's medium containing glucose (18 g / l), glutamic acid (3 g / l) and diammonium hydrogen phosphate (2.5 g / l) instead of malic acid. Euglen pre-cultured in medium
a. gracilis SM-ZK strain 5% was inoculated and fed-batch culture was performed. The culture device is disclosed in Japanese Patent Laid-Open No. 3-98
The one disclosed in Japanese Patent No. 574 was used. The culture was carried out at 25 ° C. under stirring at 60 rpm with an aeration rate of 0.32 l / min. 1.3l / for 3-5 days
min. , 5 to 7 days, 1.95 l / min. Aerate with
Aeration-agitation culture was performed. Then, as a fed-batch substrate, glucose 13 g / l, glutamic acid 3 g / l, diammonium hydrogen phosphate 1.5 g / l on the 3rd and 5th day of culture.
Were added respectively. After culturing, centrifuge (3,000 x
Euglena was recovered by freeze-drying. The yield of Euglena obtained was 30 g / l.
【００１３】一方、容量２ｌの発酵槽に、グルコース３
０ｇ／ｌ、グルタミン酸５ｇ／ｌを含む改変ハトナー培
地１．３ｌを充填し、同様の培地で前培養したＥｕｇｌ
ｅｎａ ｇｒａｃｉｌｉｓ ＳＭ−ＺＫ株 ５％を接種
して回分培養を行った。なお、培養装置は、同様に特開
平３−９８５７４号公報に開示されているものを用い、
２５℃、６０ｒｐｍの条件で、通気速度は、培養０〜４
日が０．３２ｌ／ｍｉｎ．、４〜７日が０．６５ｌ／ｍ
ｉｎ．とした。培養後、遠心分離（３，０００×ｇ、１
０分間）を行ってユーグレナを回収し、凍結乾燥を行っ
た。得られたユーグレナの収率は１６．７ｇ／ｌであっ
た。On the other hand, glucose 3
Eugl prefilled with 1.3 liters of modified Hatner's medium containing 0 g / l and 5 g / l of glutamic acid and pre-cultured in the same medium
ena gracilis SM-ZK strain 5% was inoculated and batch culture was performed. Incidentally, as the culture device, the one disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-98574 is also used,
Under the conditions of 25 ° C. and 60 rpm, the aeration rate was 0 to 4 for culture.
The day is 0.32 l / min. 0.65l / m for 4-7 days
in. And After culturing, centrifuge (3,000 xg, 1
Euglena was collected by performing 0 minutes) and lyophilized. The yield of Euglena obtained was 16.7 g / l.
【００１４】[0014]
【実施例２】実施例１で得られたそれぞれのユーグレナ
からリン脂質を抽出した。溶媒としてクロロホルム：メ
タノール＝２：１を用い、振盪抽出の操作を１０回行っ
た後、得られた抽出液を減圧下３５℃に保持して溶媒を
留去した。次に、溶媒を留去した抽出液をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーに吸着させた後、１０％ジエチ
ルエーテル（ｎ−ヘキサン）、２０％ジエチルエーテル
（ｎ−ヘキサン）、１％メタノール（クロロホルム）、
１０％メタノール（クロロホルム）及び１００％メタノ
ールの溶媒で順次溶出し、それぞれの溶出で得られた画
分をワックスエステル画分、トリグリセリド画分、遊離
脂肪酸画分、少量のリン脂質を含むその他の画分及びリ
ン脂質画分とした。そして、得られたリン脂質画分を薄
層クロマトグラフィー〔吸着剤：ＨＰＴＬＣプレート、
シリカゲル（メルク社製）、展開溶媒：クロロホルム：
ｎ−プロパノール：酢酸エチル：メタノール：０．２５
％塩化カリウム水溶液＝２３：２５：２５：１５：９〕
に供し、Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬陽性のスポ
ットを二波長クロマトスキャナ（（株）島津製作所製）
で定量した。なお、各リン脂質については、標準品と同
じＲｆ値を示すものをその物質として同定し、標準品と
一致しないスポットについては、未知のリン脂質として
定量した。定量の結果、流加培養で得られたユーグレナ
では凍結乾燥物１ｇ当たり３７．９８μｍｏｌの総リン
脂質量であったのに対し、回分培養で得られたユーグレ
ナでは凍結乾燥物１ｇ当たり１８．５８μｍｏｌの総リ
ン脂質量であった。Example 2 Phospholipids were extracted from each Euglena obtained in Example 1. Chloroform: methanol = 2: 1 was used as a solvent, and the shaking extraction operation was performed 10 times, and then the obtained extract was kept under reduced pressure at 35 ° C. to distill off the solvent. Next, after the solvent was distilled off and the extract was adsorbed on silica gel column chromatography, 10% diethyl ether ( n -hexane), 20% diethyl ether ( n -hexane), 1% methanol (chloroform),
Eluted with a solvent of 10% methanol (chloroform) and 100% methanol successively, and fractions obtained by each elution are wax ester fraction, triglyceride fraction, free fatty acid fraction, and other fractions containing a small amount of phospholipid. And phospholipid fraction. Then, the obtained phospholipid fraction was subjected to thin layer chromatography [adsorbent: HPTLC plate,
Silica gel (Merck), developing solvent: chloroform:
n -propanol: ethyl acetate: methanol: 0.25
% Potassium chloride aqueous solution = 23: 25: 25: 15: 9]
The Dittmer-Lester reagent positive spot was subjected to a dual wavelength chromatography scanner (manufactured by Shimadzu Corporation).
Was quantified by. For each phospholipid, a substance showing the same Rf value as the standard product was identified as the substance, and spots that did not match the standard product were quantified as unknown phospholipids. As a result of the quantification, the total phospholipid amount was 37.98 μmol / g of the freeze-dried product in the Euglena obtained by the fed-batch culture, whereas it was 18.58 μmol / g of the freeze-dried product in the Euglena obtained by the batch culture. It was the total amount of phospholipids.
【００１５】[0015]
【発明の効果】本発明の流加培養法を用いてユーグレナ
を培養することにより、従来の回分培養法に比べ、ユー
グレナの収率を増大させることができると共に、リン脂
質含量の高いユーグレナを得ることができる。ユーグレ
ナが生産するリン脂質は、高度不飽和脂肪酸の含量も高
く、特異的な生理活性を有することも期待されるので、
医薬や食品などの素材として有用であるが、本発明によ
ってその素材を大量に提供することができる。By culturing Euglena using the fed-batch culture method of the present invention, the Euglena yield can be increased and Euglena having a high phospholipid content can be obtained as compared with the conventional batch culture method. be able to. The phospholipids produced by Euglena have a high content of polyunsaturated fatty acids and are expected to have specific physiological activities.
Although it is useful as a material for medicines, foods, etc., the present invention can provide a large amount of the material.
Claims (2)
として炭素源及び窒素源を添加しながら流加培養を行っ
てユーグレナの収率及びその中のリン脂質含量を増大せ
しめることを特徴とするユーグレナの流加培養法。1. When culturing Euglena, it is characterized by carrying out fed-batch culture while adding a carbon source and a nitrogen source as a fed-batch substrate to increase the yield of Euglena and the phospholipid content therein. Fed-batch culture of Euglena.
ス、ガラクトース及びキシロースからなる群から選ばれ
る一種以上を、窒素源として酸性アミノ酸及びリン酸ア
ンモニウム塩を用いる請求項１記載の流加培養法。2. The fed-batch culture method according to claim 1, wherein at least one selected from the group consisting of glucose, fructose, galactose and xylose is used as a carbon source, and an acidic amino acid and an ammonium phosphate salt are used as a nitrogen source.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31098192A JPH0767620A (en) | 1992-10-26 | 1992-10-26 | Fed batch culture of euglena |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31098192A JPH0767620A (en) | 1992-10-26 | 1992-10-26 | Fed batch culture of euglena |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0767620A true JPH0767620A (en) | 1995-03-14 |
Family
ID=18011720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31098192A Pending JPH0767620A (en) | 1992-10-26 | 1992-10-26 | Fed batch culture of euglena |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0767620A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100842869B1 (en) * | 2007-04-05 | 2008-07-02 | 한국생명공학연구원 | Culture method by providing nitrogen and carbon source automatically and apparatus therefor |
| JP2019004807A (en) * | 2017-06-27 | 2019-01-17 | 有限会社サンおきなわ | Methods for culturing microalgae |
-
1992
- 1992-10-26 JP JP31098192A patent/JPH0767620A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100842869B1 (en) * | 2007-04-05 | 2008-07-02 | 한국생명공학연구원 | Culture method by providing nitrogen and carbon source automatically and apparatus therefor |
| JP2019004807A (en) * | 2017-06-27 | 2019-01-17 | 有限会社サンおきなわ | Methods for culturing microalgae |
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