JPH07509721A - 組織形成因子誘導による神経の再生と修復 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ４、上記を員傷が神経切断からなる請求項３の発明。 ５、上記モルフォゲンが上記損傷に対して先に上記細胞に供給されている請求項 ３の発明。 ６、上記１員傷が上記細胞の脱ミニリン化によるものである請求項３の発明。 ７、上記損傷が細胞性毒物に対して上記細胞が露出したことによるものである請 求項３の発明。 ８、上記毒物がエタノールからなる請求項７の発明。 ９、上記細胞がニューロパシーのため瀕死の状態にあるところの請求項１または ２の発明。 １０、上記ニューロパシーの病因が代謝、感染、毒物、自己免疫、栄養、虚血性 である請求項９の発明。 １１、上記ニューロパシーが、パーキンソン病、ハンチントンｎ踏病、筋萎縮性 側索硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病である請求項１０の発明。 １２、上記細胞が上記細胞からなる神経組織に関連した腫瘍性病変のため死のリ スクにあるところの請求項１または２の発明。 １３　上記病変が神経由来の細胞からなるｌＩ！瘍によりもたららされたもので ある請求項１２の発明。 １４、上記腫瘍が神経芽細胞腫または網膜芽細胞腫ある請求項１３の発明。 １５、上記病変がダリア細胞からなる！Ｉ瘍からもたらされたものである請求項 １２の方法。 １６、上記瀕死の細胞が中枢神経系の部分からなるるところの請求項１または２ の発明。 １７、上記細胞が線条体基底神経節ニューロンからなる請求項１６の発明。 １日、上記細胞が異質ニューロンからなる請求項１６の発明。 １９、瀕死の細胞が末梢神経系の部分である請求項１または２の発明。 ２０、上記モルフォゲンが上記細胞において細胞接着分子の生産を促進させると ころの請求項１または２の発明。 ２１、上記細胞接着分子が神経細胞接着分子である請求項２゜の発明。 ２２、神経細胞接着分子が、Ｎ−ＣＡＭ　−１２０，Ｎ−ＣＡＭ　−１４０，Ｎ −ＣＡＭ１８０からなる群から選択されたものであるである請求項２１の発明。 ２３、上記モルフォゲンが、０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２．Ｖｇｌ（ｆｘ） 、Ｖｇｒ（ｆｘ）。 ＤＰＰ（ｆｘ）、ＧＤＦ（ｆｘ）、６０Ａ（ｆｘ）からなる群から選択された配 列の一つと少なくとも７０χのアミノ酸配列ホモロジーを有しているものからな る請求項１または２の発明。 ２４、上記モルフォゲンが、０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２．Ｖｇｌ（ｆｘ） 、Ｖｇｒ（ｆｘ）。 ＤＰＰ（ｆｘ）、ＧＤＦ（ｆｘ）、６０Ａ（ｆｘ）からなる群から選択された配 列の一つと少なくとも８０χのアミノ酸配列ホモロジーを有しているものからな る請求項２３の発明。 ２５、上記モルフォゲンが、配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１ ３９で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列 からなるものである請求項２４の発明。 ２６、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列か らなるものである請求項２５の発明。 ２７、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列であって対立形質遺伝子および種変異体を含むものからなる ものである請求項２２の発明。 ２日、哺乳動物の瀕死の状態にある神経細胞の生存性を増強するための方法であ って、内因性モルフォゲンの生産を刺激することのできる物質の有効量を上記哺 乳動物に投与するステップからなる方法。 ２９、上記’ｌ！７１譬が上記神経細胞からなるｍ織の内因性モルフォゲンの生 産を刺激するところの請求項２８の方法。 ３０、哺乳動物の神経回路を維持するために充分な時間と濃度で上記経路を特定 するニューロンにモルフォゲンを供給することからなる神経回路維持のための方 法。 ３１、上記モルフォゲンがあらかしめ上記回路に傷害に対して供給されている請 求項３０の方法。 ３２、上記モルフォゲンが損傷した神経回路の修復促進のために充分て供給され ている請求項３０の方法。 ３３、上記損傷した神経回路が上記回路に対して物理的化学的損傷により起こっ たものである請求項３２の方法。 ３４、上記損傷が神経切断である請求項３３の方法。 ３５、上記損傷が上記回路で特定されるニューロンの脱ミニリン化である請求項 ３３の方法。 ３６　上記損傷が細胞性毒物に対して、上記回路で特定する細胞の露出からおこ るものである請求項３３の方法。 ３７、上記毒物がエタノールである請求項３６の方法。 ３８、上記ダ頃傷した神経回路が上記回路で特定される細胞のニューロパシーか らもたらされたものである請求項３０の方法。 ３９、上記ニューロパシーの病因が代謝、感染、毒物、自己免疫、栄養、虚血性 である請求項３日の方法。 ４０、上記二ニーロバシーが、パーキンソン病、ハンチントンＦＪｎ病、筋萎縮 性遅発性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病である請求項３９の方法。 ４１、上記ニューロパシーが軸索の変性である請求項３８の方法。 ４２、上記ニューロパシーが脱ミニリン化ニューロパシーである請求項３日の方 法。 ４３、上記損傷した神経回路が腫瘍性病変によるものである請求項３０の方法。 ４４、上記腫瘍性病変が神経芽腫またはグリオマーによっておこるものである請 求項４３の方法。 ４５、上記モルフォゲンが上記回路で特定される細胞において細胞接着分子の生 産を促進させるところの請求項３０の方法。 ４６、上記細胞接着分子が神経細胞接着分子であるところの請求項４５の方法。 ４７、神経細胞接着分子がＮ−ＣＡＭ−１２０、Ｎ−ＣＡ門−１４０、Ｎ−ＣＡ Ａｌ２Ｏ２らなる群から選択されたものであるである請求項４６の方法。 ４日、上記モルフォゲンが０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２．Ｖｇｌ（ｆｘ）、 Ｖｇｒ（ｆｘ）。 ＤＰＰ（ｆｘ）、ＧＤＦ（ｆｘ）、６０Ａ（ｆｘ）からなる群から選択された配 列の一つと少なくとも７０χのアミノ酸配列ホモロジーを有しているものからな る請求項３０または４５の方法。 ４９、上記モルフォゲンが０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２．Ｖｇｌ（ｆｘ）、 Ｖｇｒ（ｆｘ）。 ＤＰＰ（ｆｘ）、ＧＤＦ（ｆｘ）、６０八（ｆｘ）からなる群から選択された配 列の−つと少なくとも８０χのアミノ酸配列ホモロジーを有しているものからな る請求項４日の方法。 ５０、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列か らなるものである請求項４９の方法。 ５１、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列か らなるものである請求項５０の方法。 ５２、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義されたアミノ酸配列であって、その対立形質および種変異体を含むもの からなるものである請求項５１の方法。 ５３、上記モルフォゲンが配列表配列番号１６のヌクレオチド１０３６−１３４ １または配列表配列番号２０のヌクレオチド１３９０−１６９５まで定義された ＤＮＡ配列と厳密な条件でハイブリダイズする核酸によってコードされたポリペ プチド鎖からなるものである請求項１．２．３０または４６の発明。 ５４、上記モルフォゲンが、モルフォゲンファミリーまたは対立型、種特異型ま たはその他配列の変異体のプロドメインからなるペプチドとコンプレックスを形 成した二量体蛋白質種からなるものである請求項１．２．２６．３０．４５また は５１の発明。 ５５、上記二量体モルフォゲンが、上記ペプチドと非共有的に結合したものであ る請求項５４の発明。 ５６、上記二量体モルフォゲンが、上記の２ペプチドと結合したものである請求 項５４または５５の発明。 ５７、上記ペプチドが少なくとも、上記プロドメインドメインを特定する配列の 少なくとも最初の１８アミノ酸からなる請求項５４または５５の発明。 ５８、上記ペプチドが上記プロドメインの全長型である請求項５７の発明。 ５９、上記ペプチドが配列表配列番号１６のヌクレオチド１３６−１９２または 配列表配列番号２０のヌクレオチド１５７−２１１で定義されたＤＮＡ配列と厳 密な条件でハイブリダイズする核酸によってコードされたポリペプチド鎖からな るものである請求項５４または５５の発明。 ６０、上記コンプレックスが塩基性アミノ酸、界面活性剤、キャリアー蛋白質で 安定化されているものである請求項５４または５５の発明。 ６１、神経回路を特定する細胞に内因性モルフォゲンの生産を促進させることが できる物質の有効量を哺乳動物に投与することからなる哺乳動物で神経回路を維 持する方法。 ６２、以下のことからなる哺乳動物の損傷部位に神経回路の再生を促進させるた めの組成物； インビボでその部位に蛋白質を保持させるために、適切な生体内適合性、生体内 吸収性キャリアーおよび、上記キャリアーに散布し上記損傷部位に供給した時上 記のモルフォゲンのようなモルフォゲンが上記部位に神経回路の再生促進させる 。 ６３、上記キャリアーが軸索の成長の方向性を助けるために構造的に充分である ところの請求項６２の組成物。 ６４、上記キャリアーが高分子材料である請求項６３の組成物。 ６５、上記キャリアーがラミニンまたはコラーゲンである請求項６３の組成物。 ６６、神経回路の切断部を修復するための器具であって下記の内容からなる器具 ： 生体内適合性のあるチューブ状ケーシングが内部表面と外部表面にあり神経突起 が再生する回路を特定し、上記器具はなめらかで神経経路の切断を覆うために充 分な容積を持ち、切断神経の末端をその開口部に受入れ、そして上記チューブ状 管によって特定できる回路にモルフォゲンを散布し、神経経路の切断を特定する 切断された神経を補助し、モルフォゲンが神経経路の再生を促進するように、上 記回路に配置した場合に上記神経末端を補助することができる。 ６７、上記モルフォゲンが、インビボでの部位に蛋白質を保持するために適した 生体内適合性、生体内吸収性キャリアーと共に上記導管に散布されるところの請 求項６６の器具。 ６８、上記キャリアーが、上記導管内で軸索成長の方向性を補助するための充分 な構造をとるところの請求項６７の器具。 ６つ、上記クーンングの外部表面が基本的に不浸透性である請求項６７の器具。 ７０、上記キャリアーがポリマーである請求項６６の器具。 ７１、上記キャリアーがラミニンまたはコラーゲンである請求項６７の器具。 ７２、神経由来の形質転換細胞の細分化を誘導するための方法であって、下記の ステップからなる方法：非形質転換神経細胞に特徴的な形態へ上記細胞の再分化 を誘導するために充分な濃度と時間モルフオゲン組成物を上記形質転換細胞に接 触させる。 ７３、上記非形質転換神経細胞に特徴的な形態が神経突起の外成長の形成を含む 請求項７２の方法。 ７４、上記非形質転換神経細胞に特徴的な形態が細胞凝集と細胞接着を含む請求 項７２の方法。 ７５　上記モルフオゲン組成物が上記細胞において神経細胞接着分子の生産誘導 である請求項７２の方法。 ７６、上記誘導神経細胞接着分子がＮ−ＣＡＭ−１８０、Ｎ−ＣＡＭ−１４０、 Ｎ−ＣＡＭ−１２０請求項７２の方法。 ７７、上記形質転換細胞がニューロプラスドーマである請求項７２の方法。 ７Ｂ、ｌ１ｌｔｌｌｌのニューロパシーの検出のためと哺乳動物のニューロパシ ーを処置するための治療の有効性の評価とのキットであって、以下からなるキッ ト； ａ）ｆｆｊＨ乳動吻から得られた細胞または体液サンプルを採取するための手段 ； ｂ）結合蛋白質−モルフォゲンコンブレノクスの形成のために上記サンプルにモ ルフォゲン特異的に結合する結合蛋白質；Ｃ）上記コンプレックス検出手段 ７９、上記結合蛋白質がモルフオゲンのプロドメインの一部または全部によって 特定されたエピトープに特異性を有している請求項７日のキット。 ８０、＃ｉ乳動物の二ニーロバシーを検出するための方法であって、以下のステ ップからなる方法： 上記哺乳動物血清または脳を髄液中のモルフオゲンの生理学的濃度の変動を検出 し、上記変動を神経細胞死の増加の指標とする。 ８１、＠乳動物のニューロパシーを検出するための方法であって、以下のステッ プからなる方法： 上記哺乳動物血清または脳を髄液中のモルフオゲン抗体のタイターの出現濃度の 変動を検出し、上記変動を神経細胞死の増加の指標とする。 ８２、上記ニューロパシーが神経変性疾患、神経膜ミニリン化、ミニリン機能不 全、神経性腫瘍、神経損傷等によるものである請求項７８．８０または８１の発 明。 ８３、以下のステップからなる＆１１織中の細胞接着分子の生産促進の方法 上記＆ｉＩ織の細胞の細胞接着性分子の生産を誘導するために充分な濃度と時間 上記組織にモルフォゲンを供給する。 ８４、上記細胞接着性分子が神経細胞接着分子である請求項８３の方法。 ８５、上記細胞がニューロンである請求項８４の方法。 ８６、上記モルフォゲンが０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２．Ｖｇｌ（ｆｘ）、 Ｖｇｒ（ｆｘ）。 ＤＰＰ（ｆｘ）、ＧＤＦＯｘ）、６０Ａ（ｆｘ）からなる群から選択された配列 の一つと少なくとも７０χのアミノ酸配列ホモロジーを有しているものからなる 請求項７８．８０または８１の方法。 ８７、上記モルフォゲンが０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ２．Ｖｇｌ（ｆｘ）、 Ｖｇｒ（ｆｘ）。 ＤＰＰ（ｆｘ）、ＧＤＦ（ｆｘ）、６０Ａ（ｆｘ）からなる群から選択された配 列の一つと少な（とも８０χのアミノ酸配列ホモロジーを有しているものからな る請求項８６の方法。 ８日、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈｏｐ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列か らなるものである請求項８７の方法。 ８９、上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列か らなるものである請求項８８の方法。 ９０４上記モルフォゲンが配列表配列番号５　（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義されたアミノ酸配列であって、その対立形質および種変異体を含むもの からなるものである請求項８９の方法。 ９１、上記モルフォゲンが配列表配列番号１６のヌクレオチド１０３６−１３４ １または配列表配列番号２０のヌクレオチド１３９０−１６９５まで定義された ＤＮＡ配列と厳密な条件でハイブリダイズする核酸によってコードされたポリペ プチド鎖からなるものである請求項７８．８０または８１の方法。 ９２、脳血液関門を通過する上記モルフォゲンの移送を促進することのできる分 子に結合したモルフォゲンからなる、瀕死の神経細胞の生存性を増強するだめの 組成物。 ９３、上記キャリアーが脳組織由来細胞外マトリックスである請求項６２または ６７の発明。 明　細　言 ′５　沃　による　の　と　′ 光皿皇背旦 本発明は、インビボで神経細胞の生存性を増強する方法、及びインビボで神経回 路を維持するための方法、組成物と器具に関する。特に、本発明は、瀕死の細胞 の生存性を促進させる方法であって、神経の母細胞を形質転換させて再分化させ るだめの方法を包含する方法、および分化した神経細胞に形質発現を維持させる ための方法を提供する。さらにまた、本発明は、傷害を受けた神経回路を修復す るための手段を提供する。この手段には長い距離にわたる軸索の成長を促進する ための方法を含んでおり、さらに免疫学的に関連している神経組織傷害を軽減す るための方法を提供するものである。本発明の代表的な実施態様としては、細胞 中の細胞接着性分子の発現であって、特に、神経細胞中の神経細胞接着性分子の 発現を促進する方法を提供するものである。最終的には、本発明は神経組織のけ 血状態を評価し、哺乳動物における神経系の機能不全を評価するための手段を提 供するものである。 哺乳動物の神経系は、末梢神経系（ＰＮＳ）および中枢神経系（ＣＮＳ、　脳お よびを髄からなる）からなっており、二種類の代表的な細胞から構成されている 。これはニューロンとダリア細胞である。ダリア細胞はニューロンの間を満たし ており、それを保護し、その機能を調節している。　ＰＮＳ中のシュワン細胞と ＣＮＳ中の寡突起神経膠細胞のような、ある種のダリア細胞は、神経軸索を取り 巻き、保護している保護性ミニリン鞘を形成する。 神経軸索は、ニューロン細胞本体から延びて、ニューロンの電気的なインパルス を伝達してゆく突起である。末梢神経系では、複数のニューロンの長軸索が束に なって、神経または神経繊維を形成している０次にこれらが何本か組みあわさっ て、神経束になる。ここにおいて神経繊維は、神経内の血管補充と一緒になって 、保護性の複層式鞘を結合させたゆるやかなコラーゲンマトリックス中に埋め込 まれた状態の神経束を形成している。 中枢神経系では、ニューロン細胞本体は、これらのミニリン鞘化された突起とは 視覚的に見分けかつ（、そして夫々灰色と白のＴｈｆとして言及されている。 成長中には、中枢神経系と末梢神経系からの分化したニューロンは、軸索を発生 させる。二〇軸索は成長し、目的の標的細胞に接続する。ある場合には、成長し た軸索は、相当な距離までとどく必要がある。あるものは、末梢にまで成長して ゆ（のに対して他のものは中枢神経系中にとどまる。哺乳動物において、神経発 生の段階は、胎芽期間に完成し、神経細胞は、一旦十分に分化すると増殖するこ とはない。 従って、例えばニューロンが機械的あるいは化学的損傷をうけた場合、さらには また回路を形成するニューロンを死の危険にさらすに十分な神経病変が起こった 場合は、哺乳動物の神経系は、特別に危険な状態になる。ある亜集団または末梢 或いは中枢神経系において神経の系統のみに影響を与えるような多くの神経病変 にニューロパシー）が、今日までに認識されている。 神経細胞それ自身またはそれに付随するダリア細胞が影響を受けているニューロ パシーは、細胞代謝機能不全、感染、毒性物質に対する露出、自己免疫性機能不 全、栄養不全あるいは虚血などの原因によって起こる。それ以外にも、細胞の機 能不全が直接的な細胞死を誘発することがあると考えられている。その他の場合 として、ニューロパン−は、生体の免疫／炎症系を促進することで完全な組織壊 死を引き起こすと考えられている。 さらに最初の神経性障害に対する免疫応答メカニズムが、ニューロンおよびこれ らのニューロンによって特定されている神経伝達系を破壊する。 現在、これらのニューロパシーによって引き起こされた下記の損傷を修復するた めの、満足すべき方法は存在していない。 この損傷としては多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン 舞踏病、アルツハイマー病、パーキンソン病（パーキンソン症）および肝性脳症 のような代謝由来疾患などがある。近年、激しい外傷性病変あるいは脳及び／ま たはを髄の神経変性病変を阻止することを目的とする、欠失したり、欠損のある ニューロンを機能的に他のものと換えるか、またはそのようなニューロンを補償 するような試みにおいて、胎児ニューロンの移植が今日迄では第−量的なものと なっている。しかし、ヒト胎児細胞の移植研究は厳しく制限されている。さらに また神経成長因子およびインシュリンライクグロースファクターのような神経栄 養因子を投与することによってＣＮＳ内の神経成長を促進させることが提藁され ている（Ｌｕｎｄｂｏｒｇ、１９８７．Ａｃｔａ　０ｒｔｈｏｐ、　５ｃａｎｄ 、　５８：１４５−１６９および米国特許第５，０９３，３１７号等を参照）、 　ＣＮＳに神経栄養因子を投与するには、脳−血液バリアーを通過させる必要が ある。バリアーは、直接注入によって、又は化学的な変性や抱合のような、バリ アー通過を促進するために分子を変性することによって、又は分子トランケーシ ョンによって通過させることができる。さらにシュワン細胞が、損傷をうけた神 経突起の成長を促進し、維持することを目的にＣＮＳ病変部位にｆ多植されてい る。　（Ｐａｉｎｏ　ｅｔ　ａｌ、、１９９１．Ｅｘｐ、Ｎｅｕｒｏｌ。 ｇｙ、　１１４（２）　＋２５４−２５７）。 神経経路障害は、ＣＩＪＳの軸索の障害によりおこるものの場合、自己末梢神経 の移植が、中枢神経系の病巣をつなぎ合わせ、その正常なターゲット領域に軸索 を戻させている。Ｃｌｌ５ニユーロンとは対照的に、末梢神経系ニューロンは、 軸索性の障害に反応して新しい末梢突起を伸長させることができる。末梢神経系 軸索のこの再往機能があることは、Ｃｈｉｓ軸索に対するを髄分節の移植を可能 にするものと予想される。しかしながら、好ましい移植は、細胞本体に近接して 得られる満足すべき移植に関係した複数の因子によって制限されている。この制 限因子としては、バイパスを形成させるべきＣＮＳの軸素障害の長さ、ＣＮＳ神 経性細胞本体から移植部位への距離がある。 末梢神経系においては、ニューロンの細胞再生機能は、ダメージを受けた神経回 路に対して機能修復する能力に限定されている。特に、新しい軸索は、ランダム に伸長し、しばしば方向を誤まり、そして異常な機能を引き起こすような不適切 なターゲットに接続することがある。たとえば、自律神経が障害を受けた場合、 再生した軸索は、麻痺をもたらす誤った筋肉に接続する場合がある。さらに切断 された神経突起が、数ミリメーター以上、例えば１０ｍ５＋以上の長さののギャ ップを形成する場合、好ましい神経再生とはならず、神経突起が必要な長さに伸 長しないか、方向違いの軸索の伸長となる場合がある。外科的な手法によって末 梢神経の障害を修復する試みは、特に障害が広い範囲にわたる場合には色々な結 果が生じる。場合によっては、切断された神経末端の適切な配列を得るために行 われる縫合操作は、軸索の再生を阻害すると考えられる傷痕組織の形成を促進す る。たとえ傷痕の組織形成が元に戻ったしても、神経案内通路あるいはそれ以外 の管状プロテーゼを用いる場合、再生がうまくゆくのは一般的に、１０ＩＩｓ以 下の長さの神経損傷に限られている。さらに、末梢ニューロンの修復能力は、障 害や二ニーロバシーが細胞本体自身に影響を与えるか、あるいはまた末端軸索の 拡大性変性をもたらす場合には極端に抑制されてしまう。 さらにまた、哺乳動物の神経回路はｔｉ瘍性の病巣によって引き起こされる障害 によってもリスクにさらされる。ニューロンとダリア細胞両方の異常増殖が確認 されている。一般的には、神経由来の形質転換細胞は、正常な分化したＩＢ胞の しめす機能を喪失しており、そしてその機能喪失によって神経回路を破壊する。 さらに腫瘍の増殖は、正常な神経組織を破壊し、神経を圧迫して経路の阻害を行 い、脳を髄液や血液の通過を阻害し、および／または生体の免疫反応を促進する ことによって、病巣を発生させる。さらにまた、脳およびを髄内の腫瘍性病巣の 重要な原因である転移性の！Ｉｌ瘍は、神経回路に障害を与え、神経細胞の死を 引き起こす。 神経細胞の成長、分化および発達に関連のある形態形成正常化分子の一つのタイ プは細胞接着性分子（ＣＡ？Ｉ）であり、特に特徴的なものとして神経細胞接着 性分子（Ｎ−ＣＡＭ）である、　ＣＡＭ　４ま免疫グロブリンスーパーファミリ ーに属し、特異的な結合即ち並んでいる細胞同士のＣＡ？Ｉ−ＣＡ？Ｉ結合を通 じて、発達中のそして成熟した組織内での細胞と細胞のインターラクションを媒 介している。現在までに多くの異なったＣＡＭが特定された。これらの内で、も っとも徹底して研究されたものはＮ−ＣＡｌ１とＬ−ＣＡＭ（肝臓細胞接着分子 ）であり、いずれも様々な成熟した組織におけると同様に、発達の初期段階にお ける全ての細胞から同定された。神経組織の発達において、Ｎ−ＣＡｌ’ｌの発 現は、＆ｌｌｌｌ底形成経の遊走、神経−筋肉Ｍｉ織接着、網膜形成、シナプス 形成そして神経変性等において重要であると考えられてしする６さらにまた、Ｎ −ＣＡＭの発現の低下は神経機能不全と係わってしすること力く予想されている 。例えば、少なくとも１つのＮ−ＣＡＭ　、　Ｎ−ＣＡ？ｌ−１８０型の発現は 、ミニリン形成不全マウスで低下している（Ｂｈａｔ、１９８８、Ｂｒａｉｎ　 Ｒｅｓ、、４５２：３７３−３７７）、またＮ−ＣＡＭのレベルの低下は正常な 圧力の水頭症と関連付けられており（Ｗｅｒｄｅｌｉｎ、　１９８９．＾ｃｔａ Ｎｅｕｒｏ１．５ｃａｎｄ、、７９：１７７−１８１）、タイプＩＩ精神***病 についても同様である（Ｌｙｏｎｓ　ｅｔ　ａｌ、、１９８Ｂ、Ｂｊｏｌ、　Ｐ ｓｙｃｈｉａｔｒｙ、２３ニア６９−７７５）。 さらに、Ｎ−ＣＡＭに対する抗体は、障害を受けた神経の機能回復を妨げること が確認された（Ｒｅｍｓｅｎ、１９９０．Ｅｘｐ、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ、１１０ ：２６Ｂ−２７３）。 本発明の目的の一つは、哺乳動物において死のリスクを持つニューロンの生存性 を増強するための方法を提供することである。さらに別の目的は、物理的化学的 外傷、ニューロパシーまたはＬ１瘍性病巣等による神経＆［Ｉ織の損傷又はそれ に続くダメージの危険にさらされている神経回路をインビボで維持するための方 法を提供することにある。さらに別の目的は、末梢神経系の神経回路のギャップ を修復するための組成物または器具を提供することにある。さらにその他の目的 としては、神経回路を特徴付けている形質転換細胞であって特に神経由来の形質 転換細胞を再分化させるための手段を提供することである。別の目的は細胞にお けるＣＡＭの発現であって、特にＮ−ＣＡＭの発現を促進するための方法を提供 するところにある。さらにまた別の目的は神経組織、血清及び／または脳を髄液 中に存在する蛋白質のレベルの変動をモニターすることによって神経組織の状態 をモニタリングする方法を提供することである０本発明のこれらの目的と方法は 以下に示す説明、図およびクレームから明白となるはずである。 発凱皇１打 本発明は、神経細胞の生存性を増強するための方法を含み、インビボで哺乳動物 の神経回路を維持するための方法と組成物を提供する。 一つの態様では、本発明は、神経回路の障害あるいはこのような障害が予見され る場合に対して、障害を受けた経路の修復あるいはそれらのが層のダメージを抑 制することを含む神経回路を維持するために十分な濃度と回数で、ここに定義す る形態形成蛋白質（モルフオゲン）の治療上を効な量を哺乳類に投与するための ステップからなる治療方法および組成物を特徴としている。 別の態様において、本発明は組成物および治療方法を特徴としており、この治療 法と組成物とは、神経回路に障害を有しているかまたはこのような障害をうける ことが予見されている。 哺乳類に対して特定の化合物を投与することを含むような、ダメージをうけた神 経回路を修復したり、ダメージの進行を抑制することを含むインビボで哺乳類の 神経回路を維持するためのものである。上記の化合物は、哺乳類の生体において 神経回路を保持するために十分な内因性のモルフォゲンの治療上有効な濃度を誘 発するようなものである。これらの化合物は、ここではモルフォゲン促進剤と呼 び、哺乳動物に投与した場合に、モルフォゲンを生産するかまたはモルフォゲン の生産が可能であり及び／またはモルフオゲンを分泌する組織や臓器に作用する 物質を包含するものであり、または、モルフォゲンの生体内濃度を変化させるも のであると理解される。 例えばこの薬剤は内因性モルフォゲンの発現および／又は分泌を刺激することに より作用する。 特に、本発明は瀕死のニューロンの生存を増強するための方法を提供ものであり 、神経の傷害に対する生体の免疫／炎症反応に関連した組織破壊性の作用からニ ューロンを保護する方法を含んでいる。さらにまた、本発明は分化した表現型を 維持するようにニューロンを刺激するための方法を提供するものであり、神経由 来形質転換細胞を再分化させて非形質転換ニューロンの形態学的特性を示すよう に誘導する方法を含んでいる。一つの実施態様において、本発明は細胞内の細胞 接着分子、特にニューロンの神経細胞付着分子（Ｎ−ＣＡＭ　）の生産を促進す るための手段を提供する。さらにまた、本発明は障害を受けたニューロンと神経 回路の細胞修復を促進する方法、組成物、器具を提供する。この修復促進は、末 梢および中枢神経系の障害を受けた軸索を再生させることをふくんでいる。さら にまた、本発明は哺乳動物の血清または脳を髄液に存在すモルフォゲンや内因性 モルフォゲン抗体の濃度の変動をモニターすることによって、哺乳類の神経組繊 の状態を評価したり、ニューロパシーを検出してモニターするための手段を提供 するものである。 ここに使用する“神経回路”とは、刺激側から標的細胞側へ電気的信号を通過さ せるための神経回路を意味している０回路とは、電気的インパルスが伝達される ニューロンを含み、相互接続しているニューロンの群、さらに束ねられた状態の 神経軸索によって形成されている神経繊維及びニューロンを取り巻き、ニューロ ンに関係したダリア細胞を含むものである。 本発明の実施態様において、ここに説明するモルフオゲンとは末梢神経系の障害 を受けた神経回路の修復に有用である。特に、モルフォゲンは障害を受けた回路 を修復するために有用である。この回路としては、神経それ自身または神経とシ ナプス後細胞のギャップを長い距離にわたって橋渡しして、神経突起とくに軸索 の再生をさせることが必要な切断や障害を受けた神経繊維（神経）をも含む。特 にここで述べられているモルフオゲンは、保護性ミニリン鞘の脈管形成と再構成 を含む完全な軸素性神経再生を促進できるものである。モルフオゲンは、好まし くは投与部位においてモルフオゲンを保持できる生体内適合性であって生体喋収 性のキャリアー物質中に分散させて、障害の部位に供給される。そして必要な場 合には、切断されたニューロンまたは神経の近位側から遠位末端側に、軸索の成 長が向かうような方法で供給される。例えば軸索の成長を方向づける方法は、１ ０１以上の長い距離にわたって神経再生を誘導させる場合に必要であるかもしれ ない。これらの機能を備えた多数のキャリアーが想定されている０例えば有用な キャリアーとしては、以下に示すような基本的に不熔解性の物質又は以下に開示 されているように調製された粘性溶液を含む、これらは、ラミニン、ヒアルロン 酸、コラーゲン、あるいはポリ乳酸、ボリク゛リコール酸、ポリ酪酸及び／また はこれらの共重合体のような適当な合成された生体内適合性のあるポリマー物質 である。最近供給されているキャリアーとしては、現在好まれてし）る実例を上 げると、例えばマウスザルコマ−細胞由来の細胞外マトリックス組成物がある。 また特に有用性が予想されるものとしては、脳組織由来細胞外マトリックスがあ る。 特に好ましい実施態様としては、モルフオゲンは障害を受けた回路の距離にまた がっている神経案内導管中にモルフオゲンが分配する器具の部品として局所投与 される０回路は、軸索のような神経突起の成長を誘導するために、保護的なカッ く−として、そして物理学的手段としても作用する。を用な回路番よ、生体内適 合性膜またはケーシングからなっており、チューフ″状＋算造をとり、修復され る神経のギャップまたは切断箇所を結びつけるのに十分な大きさを有しており、 分断された神経末端を受け入れるために開口されている。ケーシングまた番よ膜 番よソ１ノコンのような生体内適合性で、非刺激性の素材また番よポリエチレン やポリエチレンビニール酢酸のような生体内適合性ポリマーで作られる。さらに また、ケーシングは、例えばコラーゲン、ヒアルロン酸、ポリ乳酸、ポリグリコ ール酸、ポリ酪酸を含む生体内適合性、生体吸収性ポリマーから構成される。 特に好ましい実施態様としては、回路の外部表面は基本的には不浸透性である。 　モルフォゲンは生体内適合性のキャリアー物質を使用して導管中に分配される 。この場合モルフォゲンが、分断された神経の末端に接触できるように、米国特 許５．Ｏｌｌ　、　４８６号に記載されたように、ケーシングの内部表面に吸着 させるかまたはその他の方法で結合させておく必要がある。さらに、ここに述べ た神経案内導管は、一般的には形状としてはチューブ状であれば、種々の異なっ た形状を採用できることは当業者には明白である。案内導管の内腔が、例えば断 面では長円形または方形であっても良い、さらに案内導管が、神経切断端を結び 付けるように２またはそれ以上のパーツをつなぎあわせて構築されていても良い 。神経の末端は、フィブリングルーのような生体内適合性のある接着物質による 縫合手段か、あるいはまた医学的な技術として公知の手段によって、神経案内導 管を確実に結合させてお（。 またここに述べたモルフォゲンは、障害を受けたりまたは分離した網膜、視神経 に対するその他の障害の修復のように、中枢神経系内に障害を受けた神経回路の バイパスを形成させるために、自己の末梢神経分節を移植する際に有用であると 推測される。ここでモルフォゲンは移植部位で軸索の成長を促進させるために接 続部位に投与される。特に、バイパスを形成させるべきダメージを受けた軸索の 分節が、神経細胞本体から離れて発生する場合に投与される。 さらにまた、ここで述べたモルフオゲンは、瀕死の神経細胞の生存性を増大させ 、それによって神経回路に対するダメージを予防し、限定しあるいは抑制するの に有用である。非有糸***性のニューロンは、死のリスクをもっており、この死 はニューロパシーの結果、または細胞死を誘発するニューロンあるいはダリア細 胞の機能不全によって起こるか、細胞またはその細胞を取り巻く組織に対する化 学的または物理的傷害に引き続いておこる。化学的な傷害は公知の毒性物質に由 来しており、この毒性物質はタバコの煙と阿片中の毒性物質と同様に鉛、エタノ ール、アンモニア、ホルムアルドヒトおよび複数のを機溶媒を含むものである。 さらにまたグルタミン酸塩のような興奮性アミノ酸もまた、神経細胞死の原因と して作用している（Ｆｒｅｅｓｅｅｔ　ａｌ、、１９９０．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ 、、５２１：２５４−２６４）　、神経細胞死もまた、多くの神経変性疾患にお いて明らかな寄与因子になると考えられている。神経変性疾患にはアルツハイマ ー病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、筋萎縮性遅延型硬化症、多発性硬 化症等がふくまれる。これらのニューロパシーの病因は、肝性脳症性、感染性、 毒物性、自己免疫性、栄養あるいはまた虚血性などを原因とする代謝性のものと 考えられる。さらにエタノールといくつかの毒物は、神経変質性疾患においては 明らかな寄与性因子であるとして確認されている。ここで述べているモルフォゲ ンは、瀕死の細胞に対して、それらの細胞の生存性を増大させて、神経回路の完 全性を保護するために投与することができる０モルフオゲンはその部位に直接投 与するか、または全身的に投与することもできる。さらにまた、上記に示したよ うに、好ましくは目的とする神経組織に関与している細胞内において、内因性の モルフオゲンの発現および／または分泌を促進する物質を哺乳動物に投与するこ とができる。 本発明の別の実施態様において、開示されている方法は、モルフォゲン処置細胞 が非形質転換細胞の形態学的特性を示すように、形質転換細胞、特に神経または ダリア細胞由来の形質転換細胞を再分化させるために有用である。形質転換細胞 が神経由来の細胞である場合、モルフォゲン処理は好ましくは細胞を丸くし、細 胞を凝集させ（クランピングさせ）細胞−細胞の接着をおこさせ、神経突起の外 成長と伸長を引き起こし、Ｎ−ＣＡＭを生産させる。ここで述べた方法で、基本 的に神経組織中で神経細胞ｔｔｉの発生および／または増殖を阻害または減少さ せることが期待されている０本発明の方法は、網膜芽腫、神経芽腫、神経膠腫、 神経膠腫等の神経組織由来の種々の腫瘍の作用を基本的に抑制する目的に有用で あろうことが予測される。さらに本方法は、転移性Ｍｉ礒によっておこる腫瘍性 の病変を抑制する目的にもを効であると考えられる。転移性腫瘍はＣＮＳの最も 普通の腫瘍の一つであって、血流を介して頭蓋内室へ到達する。 転移性腫瘍は、例えば正常神経組織の構造を破壊し、神経を圧迫し、脳組織に栄 養供給している脳を髄液や血液の流れをブロックし、および／または生体の免疫 反応を促進することによって、神経回路に障害を与える。 本発明の別の実施態様において、ここに述べたモルフォゲンは、神経組織に最初 におこる損傷に対する生体の免疫／炎症反応に由来した神経回路の傷害を緩和す るための、神経保護効果を提供する目的に有用である。このような反応は、神経 組織の損害にひきつづいて起きる。神経組繊の損傷はたとえば自己免疫性機能不 全、腫瘍性病巣、感染、化学的または物理的外傷、ニューロンまたはダリア細胞 への血流の停止による疾患（例えば虚血性または低酸素性によるもの）さらには 神経あるいは神経周囲の器官に対する傷害などによって起きる０例えば、閉塞性 卒中のように神経への血液供給が閉塞したことによっておこる低酸素または虚血 −再潅流によっておこる一次的な傷害は、免疫的に発生すると考えられている。 さらに多くの初期的な脳腫瘍に伴なう傷害の少なくとも一部分は、免疫学的に関 連しあっていることが認められている。治療される細胞に直接モルフォゲンを投 与するか、哺乳動物に経静脈的にあるいは経口投与によって間接的な方法で全身 的にモルフオゲンを投与することは、神経傷害に対する免疫学的に関連した反応 を緩和及び／または抑制するために使用される。さらにまた、好ましくは傷害の 部位に、インビボでモルフオゲンの発現及び／または分泌を促進できる物質を投 与することも採用できる。外科手術やその他の積極的な医療的処置でで傷害が発 生する場合には、モルフォゲンまたは作用薬はリスクにある神経組織に対して神 経保護的作用を与えるために傷害の誘発より前に投与することもできる。 本発明のさらに別の態様では、ここに説明した発明は、ニューロンにその発現型 を発現させ続けることを含む、分化型ニューロンの成長と維持を支援するための 方法をも提供する。この活性は、神経＆［Ｉ織の疾病の治療に特に有用であると 考えられる。 神経組織の疾病とは、細胞加齢によって発生し、アルツハイマー病で明らかにさ れていると考えれているような、細胞の代謝機能を減少又は喪失、さらに細胞が 老化し静止した状態になることによって発生する機能喪失をさす、治療されるべ きに細胞に直接モルフオゲンを投与したり、非経口的にまた番よ経口的に投与す ることによって行う全身的供給は、あきら力・に細胞イ（謝機能不全の作用を抑 制および／または逆転させ、それによってリスクを持った神経回路を維持するこ とによって、これらの細胞にその発現型を発現させ続けるように促進する。さら にまた、インビボで内因性モルフオゲンの発現および／またζよ分泌を促進でき る物質の投与も行っても良い。 本発明のさらに別の態様では、本発明は細胞内のＣＡＭの発現レヘル、特にニュ ーロン中のＮ−ＣＡＭ発現を促進するための方法を提供する。　ＣＡＭは組織形 成のために必須の細胞−細胞間のインターラクシヨンを行わせる分子として特定 される。　ＣＡＭは組織境界形成、胚誘導および遊走を含む＆ｌｌ織発達と組織 の安定化と再生において、基本的なな制御作用を担当していると考えられている 。　ＣＡＭのレベル変化は先天性疾患、腫瘍および変性疾患を含む組織変性の多 くに関連している。 特に、Ｎ−ＣＡＦＩの発現は、網膜形成、シナプス形成および神経−筋肉組織接 着を含む正常な神経細胞の発達と分化に関係している。　Ｎ−ＣＡＭの異性体の １またはそれ以上の抑制は、正常な組織の発達を抑制することが知られている。 　Ｎ−ＣＡＭ発現レベルの変化は、正常な内圧の水頭症とタイプＩＩの***病を 含む複数のニューロパシーと同様に、神経芽腫を含む腫瘍と関係している。 治療するべきに細胞に直接モルフォゲンを投与したり、非経口的にまたは経口的 に投与することによって行う全身的供給は、１またはそれ以上のＣＡＭ　、特に Ｎ−ＣＡＦＩの細胞性発現を誘導する目的で使用することができる。さらにまた 、インビボでのモルフォゲンの発現及び／または分泌を刺激するような物質を、 好ましく傷害の部位に投与して、ＣＡＭの生産を誘導することができる。 ＣＡ旧よまた、形質形成制御経路の一部であると仮定されている。 この経路の活性は、まだ特定されていない分子によって誘導される（Ｅｄｅｌｍ ａｎ、Ｇ、Ｍ、、１９８６．Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｃ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、２：８ １−１１６を参照のこと）、どの特定のセオリーに制限されることなく、ここで 説明したモルフォゲンはこの経路の物質として作用する。 最終的に、内因性モルフォゲンレベルの変化は神経ａｍＯ機能不全を検出する方 法の一部としてモニターすることができる。 特に内因性モルフォゲンレベルの変化は、神経組織の変化を反映しているものと 予想される０モルフォゲンの発現はバイオプシーした細胞、脳を髄液、血清から 直接測定できる。さらにまた、モルフォゲンレベルはモルフォゲンに対する内因 性抗体のレベル変化を検出することで評価できる０例えば、哺乳動物から血清サ ンプルを採取し、先行技術として公知の標準的な蛋白質検出手段によって溶液中 のモルフォゲンまたは抗体の含有量を検出できる。−例としては、抗モルフォゲ ン抗体のような目的のモルフォゲンに特異的に作用する結合蛋白質は、標準的な イムノアッセイにおいてモルフォゲン検出の目的に使用可能である。検出された モルフォゲンレベルは、検出レベルの変化をもちいて組織の状態を示すために、 あらかじめ決定された標準または参照レベルと比較することができる。 本発明の好ましい実施態様において、モルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤は 、経口または非経口的に全身的に投与される０本発明のその他の実施態様では、 モルフォゲンは脳を髄液または神経組織内に注入することによって神経組織に直 接投与できる。 本発明のどの治療方法においても、「モルフォゲンの投与」とはモルフォゲン単 独またはそれ以外の分子と組み合わせて投与することを示している０例えば、モ ルフォゲンの成熟型は、プレカーサである「プロ」ドメインを含む形で供給され るが、これは蛋白質の溶解性を促進することが知られている。蛋白質の溶解性を 促進することが知られているその他の有用な分子としては、種々の血清蛋白質と 同様にカゼインおよび乳成分が含まれる０モルフォゲンまたはモルフォゲン促進 剤に関連したその他のを用な分子としては、神経＆ｌ！織に対してモルフオゲン またはモルフォゲン促進剤を直接送り込むことのできる組織ターゲンティング分 子が含まれる０本発明の治療プロトコールにおいて有用であると考えられる組織 ターゲツティング性分子としては、抗体、抗体フラグメントある−いは神経組繊 細胞の表面分子と特異的に作用する結合性蛋白質が含まれる。 また別の有用な組織ターゲティング分子はモルフォゲンのプレカーサ、「プロ」 ドメイン、特に０Ｐ−１またはＧＤＦ−１の「プロ」ドメインの一部または全部 である。これらの蛋白質は天然には神経組織に関連して見出されるが、その他の 組織で合成されて、そして合成された組織から分泌後に神経組織に移送される。 例えば、この蛋白質は骨組織中で活性であることが見出されており、０Ｐ−１合 成の一部ソースは泌尿器系の組織（腎臓および膀胱組ｔａ）であるらしい、第二 の発現レベル箇所は脳、心臓、肺（下記）にあることがわかっている、さらにこ の蛋白質は血清、唾液、種々の乳中から分離されている。さらにこの蛋白質の分 泌型は、完全型のモルフォゲン配列のプロドメインと共に成熟型二量体からなっ ている。従って関連したモルフォゲンのプロドメインはインビボでは異なった組 織に特異的なモルフォゲンを輸送するために作用している。 さらにまた関連した組織ターゲツティングあるいは溶解性−増強分子は、酸−不 安定性結合をもっていて、一般的な化学的手段でモルフォゲンに共有的に結合し ている。この結合は、骨の再構成部位の酸性条件下において選択的に切断される 。 最後に、ここで提供されるモルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤は神経成長因 子および抗炎症剤などを含む神経回路を維持するに有用であることが知られてい るその他の分子と組み合わせて投与することができる。 モルフォゲンをＣＮＳの障害を治療する目的で用いようとする場合には、付随的 な問題を考慮しなければならない。いわゆる「脳−血液バリアー」と呼ばれてい る脳の毛細血管壁の構造を通過しなければならない、この構造は、血液中に存在 する分子の種類を選別して、脳内への通過を予防する。脳−血液バリアーは、脳 内へのモルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤の直接１人によって、効果的にバ イパスさせることができる。さらにまたモルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤 は、脳血液バリアーを超えて移送されやすくするために修飾することもできる。 例えば、モルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤の切断型は最も有望と考えられ る。 さらにモルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤は、より親油性に変更するために （１飾することができ、また自然にバリアーを通過することのできるその他の分 子と当業者には公知の標準的手段を用いて共有結合させることができる。このよ うな技術としてはＰａｒｄｒｉｄｇｅ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｒｅｖｅｗ　７： ３１４−３３０（１９８０）や米国特許４，８０１．５７５に記載された技術を 例示することができる。 従って、モルフォゲンの機能的な「アナログ」の用語は、蛋白質が形質形成性の 生物活性を有しているが、ここに定義したモルフォゲンと比較して付加的な構造 的な違いを有するものをさす０例えばモルフォゲンの一部分が一般的でない付加 的な化学成分を有しているものである。このような成分（例えば例を上げて示す と、アシル化、アルキル化、陽イオン化、グリコジル化反応あるいはその他モル フォゲンにこの成分を共有結合させるための手段）は分子の溶解性、吸収性、生 物学半減期あるいは脳−血液バリアーを超えた移送などを改善すると考えられる 。 本発明における有用なモルフォゲン木来は骨形成蛋白質として特定される蛋白質 である。０Ｐ−１，０Ｐ−２、およびＣＢＭ　Ｐ蛋白質、同様なアミノ酸配列を 持つ蛋白質として、ＤＰＰ（ンヨウジョウバエ由来）、Ｖｇｌ（ツメガエル由来 ）、Ｖｇｒ−１（マウス由来、米国特許５，０１１，６９１　、Ｏｐｐｅｒｍａ ｎ　他）、ＧＤＦ−１（７ウス由来、Ｌｅｅ　（１９９１）　ＰＮＡＳ　８８： 　４２５０−４２５４）、これらの蛋白質の配列は配列表配列番号５−１４と表 ２に示した）、そして最近６０Ａの蛋白質が特定された（ショウジヨウバエ由来 、配列表配列番号２４、Ｗｌ＋ａｒｔｏｎ他、１９９１、ＰＮＡＳ　８８：９２ １４−９２１８）、蛋白質のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーを含むこの ファミリーのメンバーは、Ｃ末端領域のアミノ酸配列に高いホモロジーを有する 。この蛋白質は、典型的には３゜残基より少ないＮ末端シグナルペプチド配列を 持つ前駆体として翻訳され、次いで「プロ」ドメインとなり、それが切断されて 成熟配列となる。シグナルペプチドは、翻訳俊速やかに切断され、Ｖｏｎ　Ｈｅ １ｊｎｅの方法（１９８６，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　 １４：４６８３−４６９１）を用いて特定のアミノ酸配列を予想することができ る。 以下の表■は、今日特定されている種々のモルフォゲンを示す。 そのここで使用されている学名と配列番号、配列表に含まれない全長蛋白質のア ミノ酸配列を記載した出典を示しているが、これらの文献の開示内容は、引用に よって本発明と一体化され０Ｐ−１０Ｐ−１蛋白質をコードするＤＮＡ配列の全 てまたは一部から発現された形態形成活性蛋白質のグループを総称的にさす。対 立形質型および種の変異型を含む。 例えばヒｌ−０Ｐ−１（ｈＯＰ−１，配列表配列番号５、成熟蛋白質アミノ酸配 列）マウスＯＰ−１（ｉｏＰ−１、配列表配列番号６、成熟蛋白質アミノ酸配列 ）保存された７個のシスティン骨格が配列表配列番号５．６の３８から１３９番 目の残基によって特定されている。蛋白質の全長をコードするｃＤＮＡ配列と全 アミノ酸が配列表配列番号１６と１７（ｈＯＰ−１）および配列表配列番号１８ と１９（ｍＯＰ−１）に示されている。成熟蛋白質は残基２９３−４３１（ｈＯ Ｐ−１）と２９２−４３０（−〇Ｐ−１）によって特定されている。 そこが切断されることにより成熟蛋白質が得られる。 蛋白質のプロ領域は開裂して、成熟で、形態形成活性を有する蛋白質を生じるが 、本質的に残基３Ｏ−２９２（ｈＯＰ−１）と残基３０−２９１　（ｍＯＰ−１ ）よって本質的に特定される。 ＯＰ　−２０Ｐ−２蛋白質をコードするＤＮＡ配列の全てまたは一部から発現さ れた活性蛋白質のグループを総称的にさす、対立形質型および種変異型を含む０ 例えばヒト０Ｐ−２（ｈＯＰ−２，配列表配列番号７、成熟蛋白質アミノ酸配列 ）マウスＯＰ−２（ｍ（ＩＰ−２，配列表配列番号８、成熟蛋白質アミノ酸配列 ）、保存された７個のシスティン骨格が配列表配列番号７．８の３８から１３９ 番目の残基によって特定されている。蛋白質の全長をコードするｃＤＮＡ配列と 全アミノ酸が配列表配列番号２０と２１　（ｈＯＰ−２）および配列表配列番号 ２２と２３（−〇Ｐ−２）に示されている。成熟蛋白質は残基２６４−４０２（ ｈＯＰ−２）と２６１−３９９（ｗＯＰ−２）によって特定されている。蛋白質 のプロ領域は開裂して、成熟で形態形成活性を有する蛋白質が生じるが、本質的 に残基１Ｂ−２６３（ｈＯＰ−２）と残基１Ｂ−２６０（＋１ＯＰ−１）よって 本質的に特定される。 （両方の０Ｐ−２蛋白質とも上流２１残基に別の開裂部位を有する。） ＣＢ　Ｍ　Ｐ　２ 特表平７−５０９７２１　（９） ＣＢＭＰ２蛋白質をコードするＤＮＡ配列から発現された形態形質活性蛋白質を 総称的にさす、対立形質型おヨヒ種変異型を含ム、　ヒ）ＣＢＭＰ２Ａ（ＣＢＭ Ｐ２Ａ（ｆｘ）配列表配列番号９、ヒトＣＢＭＰ２Ｂ−ＤＮＡ（ＣＢＭＰ２Ｂ（ ｆｘ）配列表配列番号１０．全長の蛋白質のアミノ酸配列はＢＭＰ２Ａおよび８ ＭＰ２Ｂあるいは８４Ｐ２およびＢＭＰ４として文献、Ｗｏｚｅｎｙ、ｅｔ　ａ ｌ、（１９８Ｂ）　５ｃｉｅｎｃｅ　匠１５２８−１５３４に示されている。　 ＢＭＰ２（ＢＭＰ２Ａ）のプロドメインは残基２５−２４８または残基２５−２ ８２を含む、成熟蛋白質は残基２４９−３９６または残基２８３−３９６を含む 、　ＢＭＰ４（Ｂ？ＩＰ２Ｂ）のプロドメインは残基２５−２５６または残基２ ５−２９２を含み成熟蛋白質は残基２５７−４０８または残基２９３−４０８を 含む。 ＤＰＰ（ｆｘ） ショウジョウバよりＰＰ遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保 存された７個のシスティン骨格（配列表配列番号１１）で特定される。全長の蛋 白質のアミノ酸配列はＰａｄｇｅｔｔ、ｅｔ　ａｌ、（１９Ｂ？）　Ｎａｔｕｒ ｅ　３２５：８１−８４に示されている。プロドメインはシグナルペプチドの開 裂箇所がら残基４５６までである。 成熟蛋白質の領域は残基４５７−５８８で特定されている。 Ｖｇｌ（ｆＸ） ツメガエルＶｇｌ遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保存され た７個のシスティン骨格（配列表配列番号１２）で特定される。全長の蛋白質の アミノ酸配列はＷｅｅｋｓ（１９８７）　Ｃｅ１ｌ　５１：８６１−８６７に示 されている。プロドメインはシグナルペプチド開裂部位から残基２４６までであ る。成熟蛋白質は残基２４７−３６０で特定されている。 Ｖｇｒ−Ｈｆｘ） マウスシｇｒ−１遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保存され た７個のシスティン骨格（配列表配列番号１３）で特定される。全長の蛋白質の アミノ酸配列はＬｙｏｎｓ、　ｅｔ　ａｌ、　（１９８９）　ＰＮＡＳ　８６： ４５５４−４５５８に示されている。プロドメインはのシグナルペプチド開裂部 位から残基２９９までである。成熟蛋白質は残基３０３−４３８で特定されてい る。 ＧＤＦ−１（ｆｘ） ヒ）ＧＤＦ−１遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保存された ７個のシスティン骨格（配列表配列番号１．１）で特定される。全長蛋白質に対 するｃＤＮＡとコードされるアミノ酸配列が配列表配列番号３２に示される。プ ロドメインはシグナルペプチド切断部位から基５２−１４内までである。成熟蛋 白質残基２１５−３７２で特定されている。 ６０４　６０４　ｉ白質（全長蛋白質に対するｃＤＮＡとコードされるアミノ酸 配列が配列表配列番号２４に示されている）をコードしているＤＮＡ配列（ショ ウジヨウバエ６０Ａ遺伝子）の一部または全部より発現された形態形成性活性蛋 白質をさす、６０Ａ（ｆｘ）は保存された７個のシスティン骨格（配列表配列番 号２４の残基３５４がら４５５）で特定される蛋白配列をさす。プロドメインは 、シグナルペプチド開裂部位から残基３２４までである。 成熟蛋白質は残基３２５−４５５で特定される。 ＢｆｆｌＰ３　（ｆＸ） ヒトＢＭＰ３遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保存されてい る７個のシスティン骨格で特定される（配列表配列番号２６）、全長の蛋白質の アミノ酸配列は−ｏｚｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８Ｂ）　５ｃｉｅｎｃｅ匠 １５２Ｂ−１５３４に示されている。プロドメインはシグナルペプチド開裂部位 がら残基２９０までである。 成熟蛋白質は残基２９１−４７２で特定されている。 ＢＭＰ５（ｆｘ） ヒトＢＭＰ５遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保存されてい る７個のシスティン骨格で特定される（配列表配列番号２７）、全長の蛋白質の アミノ酸配列はＣｅ１ｅｓｔｅ、ｅｔ　ａｌ、　（１９９１）ユ旦　鉦：９８４ ３−９８４７に示されている。プロドメインはシグナルペプチド開裂部位から残 基３１６までである。成熟蛋白質は残基３１７−４５４で特定されている。 ＢＩＰ６（ｆｘ） ヒトＢＭＰ６遺伝子によってコードされている蛋白質配列をさし、保存されてい る７個のシスティン骨格で特定された（配列表配列番号２日）、全長の蛋白質の アミノ酸配列はＣｅ１ｅｓｔｅ、ｅｔ　ａｌ、　（１９９０）　ＰＮＡＳ　８１ ：９８４３−９８４７に示されている。プロドメインはシグナルペプチド開裂部 位から残基３７４までである。成熟蛋白質は残基３７５−５１３で特定されてい る。 ０Ｐ−２蛋白質はこのファミリーのその他の蛋白質とおなし保存されたシスティ ン骨格に加えて、この碩ｙｉ（配列表配列番号７および８の残基４）に付加的な ンスティン残基を持つ、　Ｇｌ）Ｆ−１蛋白質は保存された骨格（配列表配列番 号１４の残基４４−４７）に４個のアミノ酸が挿入されている。しかしこの挿入 は、折りたたみ構造においてはシスティンの相互関係を阻害しないようだ。さら にＣＢＭＰ２蛋白質はシスティン骨格からアミノ酸残基１個が失なわれている。 モルフォゲンは還元すると失活する。しかし、酸化してできるホモダイマーは活 性だし、本発明の他のモルフォゲンと組み合わせて酸化すると活性化される。こ こに示したように、モルフォゲンは一対のポリペプチド鎖からなる２量体蛋白質 であり、それぞれのポリペプチド鎖は、配列表配列番号５の残基４３−１３９に よって特定されるＣ末端側の少なくとも６個のシスティン骨格からなるが、これ らのシスティンと機能的には等しいアレンジメントを含む（即ち、配列中のシス ティンの直線的な配置を変えるようなアミノ酸の挿入や欠失を行っても折りたた み構造におけるンステイン相互間の関係は変わらない）、すなわち、ポリペプチ ド鎖が折りたたまれる時、ポリペプチド鎖の１対からなっている２１体蛍白質種 は、適当な３次元構造をとる。この場合、ここに定義するようにモルフオゲンと して蛍白質が活性であるように、鎖間または鎖内で適当なジスルヒド結合を含ん でいる。特徴的なことには、モルフォゲンは、通常、形態形成的に許容される環 境では、次の生物学的機能をの全てをそなえている。未分化細胞の増殖促進、未 分化細胞の分化促進０分化細胞の増殖促進０分化細胞の成長と維持の補助、さら に、これらのモルフォゲンは、好ましい環境条件に拘束された細胞の再分化を誘 導できることが期待される。 好ましい一つの実例において、本発明のモルフオゲンは一般的なアミノ酸配列の ２種の内の１つを含む、一般配列１（配列表配列番号１）または−所配列２（配 列表配列番号２）である、　Ｘａａは２０の天然型し一型αアミノ酸またはその 誘導体の一つを示している。一般配列１は保存された６つのシスティン骨格から なり、そして一般配列２は０Ｐ−２で確り召される付加的なシスティンを付けた 保存された６つのシスティン骨格からなる（配列表配列番号２、残基３６）、別 の好ましい実例では、この配列はＮ末端に次の付加配列を結合させたものからな る。 Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　（配列表配列番号１５）上記の一般 配列中の好ましいアミノ酸配列は次のものを含む。 一般配列３（配列表配列番号３）、一般配列４（配列表配列番号４）、−Ｓ配列 ５（配列表配列番号３０）、一般配列６（配列表配列番号３１）、列リストは以 下に示す。これらの一般配列は、表ＩＩに示したこのモルフォゲンファミリーの 種々の好ましいメンバーの中で共存されるホモロジーを、それらのアミノ酸配列 に変化を加えたものと同様に含んでいる。特に一般配列３と４は表Ｉ＋に表され 配列表配列番号５−１４で特定される次の蛋白質の複合アミノ酸配列である。ヒ ト０Ｐ−１（ｈＯＰ−１、配列表配列番号５および１６−１７）、マウス０Ｐ− １（ｓＯＰ−１，配列表配列番号６および１８−１９）、ヒトおよびマウス０Ｐ −２（配列表配列番号７．８および２Ｏ−２２）、ＣＢＭＰ２Ａ（配列表配列番 号９）、ＣＢＭＰ２Ｂ　（配列表配列番号１０）　、　ＤＰＰ（シラウジヨウバ エ由来、配列表配列番号１１）　、Ｖｇｌ（ツメガエル由来、配列表配列番号１ ２）　、Ｖｇｒ−Ｈマウス由来、配列表配列番号１３）ＧＤＦ−１（マウス由来 、配列表配列番号１４）。一般配列は、配列中の可変位置の可変性残基と同様に 、表ＩＩの配列によって明示されたアミノ酸配列を含んでいる。これらの一般配 列は、一般配列３または４の４１または４６位に分子間又は分子内ジスルヒド結 合を形成することができる適当なシスティン骨格を提供するような付加的システ ィンを加えることができるし、蛋白質の三次元構造に影響を及ぼすある種の臨界 的なアミノ酸を含む。 一般配列３ Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ　ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔ ｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘａａｓ０ Ｘａａ　Ａｌａ　Ｐｒｏχａａ　Ｇｌｙχａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ　Ｔｙｒ 　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａＸａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　 Ｘａａ　Ｘａａχａａ　ＸａａχａａＸａａχａａ　Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　 Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘ ａａ　Ｘａａｓ０ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘ ａａ　Ｐｒｏχａａ×ａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　 Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘ ａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａｓ０ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａχａａ　ｎｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａｓ５９０ Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　ＸａａここでＸａａは以下に示すｌ又はそれ 以上のアミノ酸の群から他とは無関係に、選択されたものである。　Ｒｅｓ、は 残基ｒｅｓｉｄｕｅを意味している。ｒｅｓ、４でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ、　Ａ ｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、６でのＸａａ＝（Ａｒｇ＋Ｇｌｎ、Ｓｅｒまた はＬｙｓ）。ｒｅｓ、７でのＸａａ＝　（ＡｓｐまたはＧｌｕ）ａ　ｒｅｓ、８ でのＸａａ＝（ＬｅｕまたはＶａｌ）、ｒｅｓ、１１でのＸａａ＝（Ｇｌｎ、ｌ 、ｅｕ。 Ａｓｐ、Ｉ（ｉｓ、またはＡ３ｎ）、　ｒｅｓ、１２でのＸａａ□　（Ａｓｐ、 　Ａｒｇ＋　またはＡｓｎ）。 ｒｅｓ、１４でのＸａａ＝（ＩｌｅまたはＶａｔ）、　ｒｅｓ、１５でのＸａａ ＝　（Ｉ　ＩｓまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、１８でのχａａ＝（Ｇｌｕ、Ｇｌｎ ＋Ｌｅｕ＋Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、２０でのＸａａ＝　（Ｔ ｙｒまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ、２１でのχａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｍ ｅｔ、Ｈｉｓ、ＬｅｕまたはＧｌｎ）、　ｒｅｓ、２３でのＸａａ＝　（Ｔｙｒ 、　Ａｓｎ　ｆ、たはＰｈｅ）、　ｒｅｓ。 ２６でのＸａａ＝（Ｇｌｕ＋Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、ＡｓｐまたはＧｉｎ）、　ｒｅｓ 、２８でのＸａａ−（Ｇｌｕ。 Ｌｙｓ、ＡｓｐまたはＧｌｎ）。ｒｅｓ、３０でのＸａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｒ、 ＰｒｏまたはＧｌｎ）。 ｒｅｓ、３１でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　ＬｅｕまたはＴｙｒ）、　ｒｅｓ、３ ３でのＸａａ＝　（ＬｅｕまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、３４でのＸａａ＝（Ｉｌ ｓｎ、Ａｓｐ＋ＡｌａまたはＴｈｒ）、　ｒｅｓ、３５でのχａａ＝（Ｓｅｒ、 Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＬｅｕまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、３６でのＸａａＪＴｙｒ、Ｃ ｙｓ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒまたはｌ１ｅ）。ｒｅｓ、３７でのＸａａ＝（Ｍｅｔ、Ｐ ｈｅ、ＧｌｙまたはＬ　ｅ　ｕ　）　＊ｒｅｓ、３８でのＸａａｓ　（Ａｓｎま たは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、３９でのＸａａ＝　（＾ｌａ、ＳｅｒまたはＧｌｙ） 、　ｒｅｓ、４０でのＸａａ＝　（Ｔｈｅ、　Ｌｅｕまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ 、４４でのＸａａｓ（ＩｌｅまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、４５でのＸａａ＝（Ｖａ ｌまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、４６でのＸａａ＝（Ｇｉｎまたは八ｒｇ）。ｒｅ ｓ、４７でのＸａａ＝（Ｔｈｒ、Ａｌａまたは””ｒ）ｅ　ｒｅｓ、４９でのχ ａａ＝（ＶａｌまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、５０でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡ ｓｎ）　＠ｒｅｓ、５１でのＸａａ＝（Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｌ ａまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５２でのＸａａ＝（ｌｌｅ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ａ ｌａまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、５３でのＸａａ−（Ａｓｎ＋Ｌｙｓ＋＾１ａまた は［、ｌｕ）、　ｒｅｓ、５４でのＸａａ＝　（Ｐｒｏまたは５ｅｒ）、　ｒｅ ｓ、５５でのＸａａ　＝（Ｇ　Ｉ　ｕ　＋へｓｐ、Ａｓｎ＋　またはＧｌｙ）。 ｒｅｓ、５６でのＸａａ＝　（Ｔｈｒ、　Ａ１ａ＋　Ｖａｌ＋　Ｌｙｓ、Ａｓｐ 、Ｔｙｒ、ＳｅｒまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、５７でのＸａａ＝（Ｖａｔ、Ａｌａ ＋　またはＬｙｓ）。ｒｅｓ、５８でのＸａａ＝　（ＰｒｏまたはＡｓｐ）。ｒ ｅｓ、５９でのＸａａ＝　（ＬｙｓまたはＬｅｕ）。ｒｅｓ、６０でのＸａａ＝ 　（ＰｒｏまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、６３でのＸａａ−（ＡｌａまたはＶａｌ） 。ｒｅｓ、６５でのＸａａ＝　（ＴｈｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、６６でのＸ ａａ＝（ＧＩｎ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、６７でのＸａａ＝ （Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＶａｌ）、　ｒｅｓ、６８でのＸａａｇ　（Ａｓｎ、 　ＳｅｒまたはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、６９でのＸａａ・（Ａｌａ、Ｐｒｏまたは ５ｅｔ）、　ｒｅｓ、７０でのＸａａｓ　（Ｉ　ｌｅ、　ＴｈｒまたはＶａｔ） 、　ｒｅｓ。 ７１でのＸａａ−（ＳｅｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、１２でのＸａａ富（Ｖａ ｔまたはＭｅ　Ｌ）　＊「ｅｓ、１４でのＸａａ−（ＴｙｒまたはＰｈｅ）、　 ｒｅｓ、７５でのＸａａｇ　（Ｐｈｅ、　ＴｙｒまたはＬｅｕ）、ｒｅｓ、７６ でのＸａａｇ（ＡｓｐまたはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、７７でのＸａａ−（Ａｓｐ＋ Ｇｌｕ、Ａｓｎまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、７８でのＸａａｇ　（Ｓｅｒ、　Ｇ Ｉｎ＋　ＡｓｎまたはＴｙｒ）　。 ｒｅｓ、７９でのＸａａｚ　（Ｓｅｒ、　Ａｓｎ＋　ＡｓｐまたはＧｌｕ）、　 ｒｅｓ、８０でのＸａａ−（Ａｓｎ。 ＴｈｒまたはＬｙｓ）、ｒｅｓ、８２でのＸａａ−（Ｉ　ｌｅまたはＶａｌ）、 　ｒｅｓ、８４でのＸａａ＝　（ＬｙｓまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、８５でのＸ ａａｇ（Ｌｙｓ＋＾ｓｎ、Ｇｉｎまたは旧ｓ）。 ｒｅｓ、８６でのＸａａ＝　（Ｔｙｒまたは旧ｓ）、　ｒｅｓ、８７でのＸａａ □（Ａｒｇ、ＧｌｎまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、８８でのＸａａ＝　（＾ｓｎ、 ＧｌｕまたはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、９０でのＸａａ−（Ｖａｌ、ＴｈｒまたはＡ ｌａ）、　ｒｅｓ、９２でのＸａａ−（Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｓｐまたは Ｇｌｕ）。ｒｅｓ、９３でのＸａａ＝　（Ａ　ｌａ　、　Ｇ　ｌｙまたはＧｌｕ ）、　ｒｅｓ、９７でのＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｒｇ）　。 一般配列４ Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ　 ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘ ａａｇ５ Ｘａａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ　Ｔ ｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａｓ０３５ Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａχａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ 　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａｇ５ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘ ａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　にａａ　Ｘａａ　χａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｖａｌ 　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａｇ５ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａｓ０　９５ Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　ＸａａここでＸａａは以下に示すアミノ酸の １またはそれ以上の群から他とは無関係に、選択されたものである。　Ｒｅｓ、 は残基ｒｅｓｉｄｕｅを意味している。　ｒｅｓ、２でのＸａａ＝　（Ｌｙｓま たはＡｒｇ）　、　ｒｅｓ、３でのＸａａｇ　（ＬｙｓまたはＡｒｇ）　ａ　ｒ ｅｓ、４でのＸａａｇ（ＨｉｓまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、５でのＸａａ−（Ｇ ｌｕ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、ＡｒｇまたはＰｒｏ）＊　ｒｅｓ、９でのＸａ ａ＝　（Ｓｅｒ、　ＡｓｐまたはＧｌｕ）、ｒｅｓ、１１でのＸａａ＝（Ａｒｇ 、Ｇｌｎ、Ｓｅｒまたはｔ、ｙｓ）、　ｒｅｓ、１２でのＸａａ＝　（Ａｓｐま たはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、１３でのＸａａｔ　（ＬｅｕまたはＶａｌ）、　ｒｅ ｓ、１６でのＸａａ＝（Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、ＨｉｓまたはＡｓｎ）、　ｒ ｅｓ、１７でのＸａａ＝　（Ａｓｐ、　ＡｒｇまたはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、１９ でのＸａａ＝　（Ｉ　ｌｅまたはＶａｌ）。 ｒｅｓ　、　２０でのＸａａ＝　ＣＩ　ｌｅまたはＶａｔ）、　ｒｅｓ、２３で のＸａａＪＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ。 Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、２５でのＸａａｇ　（ＴｙｒまたはＰ ｈｅ）、　ｒｅｓ、２６でのＸａａ＝　（Ａｌａ、　Ｓｅｒ、　Ａｓｐ、　Ｍｅ ｔ、　）Ｉｉｓ、　ＬｅｕまたはＧｌｎ）、　ｒｅｓ、２８でのＸａａ＝　（Ｔ ｙｒ、　ＡｓｎまたはＰｈｅ）。ｒｅｓ、３１でのＸａａ＝（Ｇ１ｕ＋Ｈ４ｓ＋ Ｔｙｒ、ＡｓｐまたはＧｌｎ）、　ｒｅｓ、３３でのＸａａ＝　（Ｇｌｕ、　Ｌ ｙｓ、　ＡｓｐまたはＧｌｎ）。ｒｅｓ、３５でのＸａａ−（Ａｌａ、Ｓｅｒま たはＰｒｏ）。ｒｅｓ、３６でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　ＬｅｕまたはＴｙｚ） ＊ｒｅｓ、３ＢでのＸａａ＝　（ＬｅｕまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、３９でのＸ ａａ＝（Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＡｌａまたはＴｈｒ）、　ｒｅｓ、４０でのＸａａ＝ （Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕまたは＾ｌａ）、　ｒｅｓ、４１でのＸａａ −（Ｔｙｒ＋Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒまたは１ｉｅ）、　ｒｅｓ、４２でのＸａ ａ＝　（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＧｌｙまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、４４でのＸａａｇ （ＡＩａ＋ＳｅｒまたはＧｒｙ）。 ｒｅｓ、４５でのＸａａ＝（Ｔｈｒ、Ｌｅｕまたは５ｅｒ）＊　ｒｅｓ、４９で のＸａａ−（Ｉ　ｌｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５０でのＸａａ＝（Ｖａｌま たはＬｅｕ）、ｒｅｓ、５１でのＸａａ−（ＧｉｎまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、 ５２でのＸａａ−（Ｔｈｒ、Ａｌａまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、５４でのＸａａ ＝（ＶａｌまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、５５でのＸａａｔ（ｆｌｉｓまたはＡＳ ｎ）、ｒｅｓ、５６でのＸａａ−（Ｐｈｅ＋Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｌａま たはＶａｔ）、　ｒｅｓ、５７でのＸａａｌｌ（■ｌｅ１Ｍｅｔ、Ａｓｎ＋ＡＩ ａまたはＶａｌ）。ｒｅｓ、５ＢでのＸａａ−（Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｌａまたは Ｇｌｕ）、　ｒｅｓ、５９でのＸａａｚ　（Ｐｒｏまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、 ６０でのＸａａ−（Ｇｌｕ。 ＡｓｐまたはＧｌｙ）、ｒｅｓ、６１でのＸａａ＝（Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、 Ｌｙｓ＋Ａｓｐ＋Ｔｙｒ、ＳｅｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、６２でのＸａａｇ 　（Ｖａｌ、　Ａｌａまたはｌ１ｅ）、　ｒｅｓ、６３でのＸａａ＝　（Ｐｒｏ またはＡｓｐ）。ｒｅｓ、６４でのＸａａ＝　（ＬｙｓまたはＬｅｕ）、　ｒｅ ｓ。 ６５でのＸａａ＝　（ＰｒｏまたはＡｌａ）。ｒｅｓ、６８でのＸａａｇ　（八 ｌａまたはＶａｌ）。 ｒｅｓ、７０でのＸａａ−（ＴｈｒまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、７１でのＸａａ ＝（Ｇｌｎ＋Ｌｕｓ、ＡｒｇまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、７２でのＸａａ＝（Ｌ ｅｕ　ＭｅｔまたはＶａｔ）、　ｒｅｓ、７３でのＸａａ＝（Ａｓｎ、Ｓｅｒま たはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、７４でのＸａａ＝　（Ａ　Ｉａ　＋　Ｐｒｏまたは５ ｅｒ）　＊ｒｅｓ、７５でのＸａａ＝（Ｉｌｅ、ＴｈｒまたはＶａｌ）、　ｒｅ ｓ、７６でのＸａａ−（ＳｅｔまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、７７でのＸａａ＝（ ＶａｔまたはＭｅｔ）。ｒｅｓ、７９でのＸａａｇ　（ＴｙｒまたはＰｈｅ）、 　ｒｅｓ、８０でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ、　ＴｙｒまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、 ８１でのχａａ＝（ＡｓｐまたはＡｓｎ）＊　ｒｅｓ、８２でのＸａａ＝（Ａｓ ｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎまたは５ｅｒ）　＊ｒｅｓ、８３でのＸａａ＝（Ｓｅｒ、Ｇ ｌｎ、ＡＳｎまたはＴｙｒ）、　ｒｅｓ、８４でのＸａａ獄（Ｓｅｒ。 Ａｓｎ、　ＡｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、８５でのＸａａ＝　（Ａｓｎ＋　 ＴｈｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、８７でのＸａａ−（ｌｉｅまたはＶａｌ）、 　ｒｅｓ、８９でのＸａａ＝　（ＬｙｓまたはＡｒｇ）。 ｒｅｓ、９０でのＸａａ＝（Ｌｙｓ、八ｓｎ＋Ｇｌｎまたは旧Ｓ）。ｒｅｓ、９ １でのＸａａ−（ＴｙｒまたはＸｉ’ｓ）、　ｒｅｓ、９２でのＸａａ＝　（Ａ ｒｇ、　ＧＩｎまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、９３でのＸａａ＝（八ｓｎ、Ｇｌｕ または八ｓｐ）、　ｒｅｓ、９５でのχａａ＝　（Ｖａ　Ｉ　＋　Ｔｈｒまたは Ａｌａ）。 ｒｅｓ、９７でのＸａａ＝（Ａｒｇ＋Ｌｙｓ、Ｖａｔ、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、 　ｒｅｓ、９８での、　Ｘａａ＝（Ａｌａ、ＧｌｙまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、 １０２でのＸａａ−（ｔｌｉ５またはＡｒｇ）　＊同様に一般配列５（配列表配 列番号３０）と−設配列６（配列表配列番号３１）は、表ＩＩに示したモルフォ ゲン蛋白質のファミリーメンバーの間に共有されるホモロジーを含んでいる。特 に−設配列５および６は次のアミノ酸配列の複合である。ヒトＯＰ−１（ｈ（Ｉ Ｐ−１，配列表配列番号５および１６−１７）、マウス０Ｆ−１（ａ＋０Ｐ−１ ゜配列表配列番号６および１Ｂ−１９）、ヒトおよびマウス０Ｐ−２（配列表配 列番号７．８および２Ｏ−２２）　、ＣＢｌ’１Ｐ２Ａ（配列表配列番号９）、 ＣＢＭＰ２Ｂ　（配列表配列番号１０）　、［１ＰＰ（ショウジヨウバエ由来、 配列表配列番号１１）　、Ｖｇｌ（ツメガエル由来、配列表配列番号１２）、Ｖ ｇｒ−１（７ウス由来、配列表配列番号１３）　、ＧＤＦ−１（マウス由来、配 列表配列番号１４）、ヒＩ−ＢＭＰ３　（配列表配列番号２Ｇ）、ヒトＢＭＰ５ （配列表配列番号２７）、ヒトＢＭＰ６（配列表配列番号２８）　、６０（Ａ） （ショウジヨウバエ由来、配列表配列番号２４−２５）、−設配列は、配列中の 可変位置の可変性残基と同様に、６および７個のシスティン骨格（−設配列５と ６に対応する）によって特定され、そしてＣ末端ドメイン中のこれらの配列と同 一のアミノ酸配列を含んでいる。−設配列３と４、−設配列５と６において、４ １位（−設配列５）あるいは４６位（−設配列６）にシスティンを更に付加する ことができ、適当なシスティン骨格を提供すると、分子間に又は分子内にジスル ヒド結合を形成させることができる。システィンは付加物はその蛋白質の３次構 造に影響を与えるある種の臨界的なアミノ酸を含んでいる。 一般配列５ Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＰｈｅＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔ ｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘａａｓ０ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ　Ｔ ｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａＸａａ　Ｐｒｏ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａｓ５ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｓｎ　１ｌｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　 Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａｓ０ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘ ａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａｓ５ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘ ａａ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａｓ０ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａｓ５９０ Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａｓ５ ここでＸａａは以下に示すアミノ酸の１またはそれ以上の群か独立的に、選択さ れたものである。Ｒｅｓ　、は残基ｒｅｓｉｄｕｅを意味している。　ｒｅｓ、 ２でのＸａａ−（ＴｙｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、３でのＸａａｌｌ（ｖａｌ または１ｌｅＬ　ｒｅｓ、４でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ、　ＡｓｐまたはＧｌｕ） 、　ｒｅｓ、６でのＸａａ＝（Ａｒｇ、ＧＩｎ＋ＳｅｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅ ｓ、７でのＸａａ＝　（Ａｓｐ、　ＬｙｓまたはＧｌｕ）。ｒｅｓ、８でのＸａ ａ＝　（Ｌｅｕ、　ＩｌｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、１１でのＸａａｇ（Ｇｉ ｎ、　Ｌｅｕ、　Ａｓｐ、　Ｈａｓ、　Ｓｅｒ　またはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、１ ２でのＸａａ−（Ａｓｐ＋Ａｒｇ＋Ｇｌｕまたは八ｓｎ）、　ｒｅｓ、１４での Ｘａａ＝　（［ｌｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、１５でのＸａａ＝　（Ｉ　ｌｅ またはＶａｌ）、　ｒｅｓ、１６でのＸａａｇ　（ＡＩａまたは５ｅｒ）、ｒｅ ｓ、１８でのＸａａ＝（Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ＋Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＡｒｇ ）、ｒｅｓ、１９でのＸａａ＝（Ｇｌｙまたは５ｅｒ）。ｒｅｓ、２０でのＸａ ａ＝　（ＴｙｒまたはＰｈｅ）、　ｒｅｓ、２１でのＸａａ＝　（Ａｌａ、　Ｓ ｅｒ、　Ａｓｐ、　Ｍｅｔ、　Ｈｉｓ＋　ＬｅｕまたはＧｌｙ）、　ｒｅｓ、２ ３でのＸａａ−（Ｔｙｒ、ＡｓｎまたはＰｈｅ）、　ｒｅｓ、２６でのＸａａ＝ （ＧＩｕ、Ｈ４ｓ＋Ｔｙｒ＋Ａｓｐ、ＳｅｒまたはＧｌｎ）、ｒｅｓ、２８での χａａ＝（Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、ＡｌａまたはＧｉｎ）、　ｒｅｓ。 ３０でのＸａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｔ、Ｐｒｏ＋ＡｓｎまたはＧｉｎ）、　ｒｅｓ 、３１でのＸａａ＝　（Ｐｈｅ。 ＬｅｕまたはＴｙｒ）、　ｒｅｓ、３３でのχａａ＝（Ｌｅｕ、ＭｅｔまたはＶ ａｔ）、ｒｅｓ、３４でのＸａａ＝（Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、ＰｒｏまたはＴ ｈｒ）、　ｒｅｓ、３５でのＸａａ＝　（Ｓｅｔ＋　Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、 ＬｙｓまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、３６でのＸａａ＝（Ｔｙｒ、Ｃｙｓ＋１ｌｉ ｓ＋Ｓｅｒまたは１ｉｅ）、　ｒｅｓ、３７でのＸａａ＝（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｇ ｌｙまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、３８でのＸａａ＝　（Ａｓｎ　＋　Ｌｙｓまた は５ｅｒ）、　ｒｅｓ、３９でのχａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｔ、ＰｒｏまたはＧｌ ｙ）、　ｒｅｓ、４０でのＸａａ＝　（Ｔｈｒ、　Ｌｅｕまたは５ｅｒ）、　ｒ ｅｓ、４４でのＸａａ＝（Ｉｌｅ、ＶａｌまたはＴｈｒ）、　ｒｅｓ、４５での Ｘａａ＝（Ｖａｌ、ＩｌｅまたはＬｅｕ）　＊ｒｅｓ、４６でのＸａａ＝（Ｇｉ ｎまたはＡｒｇ）。ｒｅｓ、４７でのＸａａ＝（Ｔｈｒ、Ａｌａまたは５ｅｒ） 、　ｒｅｓ、４８でのχａａ＝　（Ｌｅｕまたはｌ１ｅ）。ｒｅｓ、４９でのχ ａａ＝（ＶａｌまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、５０でのＸａａｇ（Ｈｉｓ、Ａｒｇ またはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、５１でのχａａ＝（Ｐｈｅ、Ｌｅｕ＋Ａｓｎ、Ｓｅ ｒ、ＡｌａまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５２でのＸａａ−（Ｉ　ｌｅ、　Ｍｅｔ 、Ａｓｎ、Ａｌａ＋ＬｅｕまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５３でのＸａａｓ（Ａｓ ｎ＋Ｌｙｓ、ＡＩａ、Ｇｌｙ。 ＰｈｅまたはＧｌｕ）、ｒｅｓ、５４でのＸａａ＝（Ｐｒｏ、Ｖａｌまたは５ｅ ｒ）、　ｒｅｓ、５５ｈｒ、へｌａ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、へｓｐ、　Ｔｙｒ、　Ｓ ｅｒ、　Ｐｒｏ、　１ｌｉｓまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、５１でのＸａａ＝（Ｖ ａｌ、ＡＩａ、　またはｌ１ｅ）。ｒｅｓ、５８でのＸａａ＝（ＰｒｏまたはＡ ｓｐ）。 ｒｅｓ、５９でのＸａａ＝（Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、６０で のＸａａ＝　（ＰｒｏまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、６３でのＸａａ＝（Ａｌａま たはＶａｌ）、　ｒｅｓ、６５でのＸａａ＝　（Ｔｈｒ。 ＧｌｕまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、６６でのＸａａ−（Ｇｉｎ、Ｌｙｓ＋Ａｒｇ またはＧｌｕ）、　ｒｅＳ、６７でのＸａａ−（Ｌｅｕ＋Ｍｅｔ＋　またはＶａ ｌ）、　ｒｅｓ、６ＢでのＨａｓ軍（Ａｓｎ、Ｓｅｒ＋ｃｒｙまたはＡｓｐ）。 ｒｅｓ、６９でのＸａａ＝（Ａｌａ、Ｐｒｏまたは５ｅｒ）、ｒｅｓ、７０での Ｘａａ＝（［Ｉｅ、Ｔｈｒ、ＬｅｕまたはＶａｔ）。ｒｅｓ、７１でのＸａａ＝ 　（Ｓｅｒ、　ＰｒｏまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、７２でのＸａａ＝（Ｖａｌ＋ 　ｌｉｅまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、７４でのＸａａ＝　（ＴｙｒまたはＰｈｅ ）、　ｒｅｓ、７５でのＸａａ−（Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　ＨｉｓまたはＬｅｕ） 　＊ｒｅｓ　、　７６でのＸａａ＝　（Ａｓｐ、　ＬｅｕまたはＡｓｎ）、　ｒ ｅｓ、７７でのＸａａ−（Ａｓｐ、ＧＩｕ。 Ａｓｎまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、７８でのＸａａｌＩ（Ｓｅｒ＋Ｇｌｎ、Ａｓ ｎ、ＡｓｐまたはＴｙｒ）ｒｅｓ、７９でのＸａａ＝　（Ｓｅｒ、　Ａｓｎ、　 Ａｓｐ、　ＬｙｓまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、８０でのＸａａ＝（Ａｓｎ、Ｔｈ ｒまたはＬｙｓ）、ｒｅｓ、８２でのＸａａ−（Ｉ　１ｅＡｓｎまたはＶａｌ） 、　ｒｅｓ、８４でのＸａａｇ　（ＬｙｓまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、８５での χａａ−（Ｌｙｓ、Ａｓｎ＋Ｇｌｎ、ＶａｌまたはＨｉｓ）、　ｒｅｓ、８６で のＸａａ＝　（Ｔｙｒまたは旧ｓ）、　ｒｅｓ、８７でのＸａａ＝（Ａｒｇ、Ｇ ｉｎ、ＰｒｏまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、８８でのＸａａ＝　（Ａｓｎ、　Ｇｌ ｕまたはＡｓｐ）、　ｒａｓ、９０でのＸａａ−（Ｖａｌ、Ｔｈｒ、　Ｉｌｅま たはＡｌａ）、　ｒｅｓ、９２でのＸａａ−（Ａｒｇ、　Ｌｙｓ、　Ｖａｌ、　 ＡｓｐまたはＧｌｕ）、ｒｅｓ、９３でのＸａａ−（Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕま たは５ｅｒ）、　ｒｅｒ、９５でのＸａａｌＩｌｌ（ＧｌｙまたはＡｌａ）、　 ｒｅｓ、９７でのＸａａｇ（ＨｉｓまたはＡｒｇ）。 一般配列６ Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　 Ｐｈｅ５１Ｏ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　 ’Ｘａａ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＡｌａＸａａ　 Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａｓ０３５ Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　χａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘ ａａ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａｓ５ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＣｙｓＣｙｓ　Ｘ ａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　χａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｖａｔ 　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａａｓ５ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　Ｘａａ　Ｖａｌ　Ｘａａｓ０９５ Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　ＸａａここでＸａａは以下に示すアミノ酸の １またはそれ以上の群から他とは無関係に、選択されたものである。　Ｒｅｓ、 は残基ｒｅｓｉｄｕｅを意味している。　ｒｅｓ、２でのＸａａ−（Ｌｙｓ、Ａ ｒｇ、ＡｌａまたはＰｒｏ）、　ｒｅｓ、３でのχａａ；（Ｌｙｓ＋＾ｒｇまた はＭｅｔ）、　ｒｅｓ、４でのにａａ富（旧ｓ、ＡｒｇまたはＧｌｎ）、ｒｅｓ 、５でのＸａａ＝（ＧＩｕ＋Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ、Ａｒｇ＋Ｐｒｏ＋Ｔｈｒ 、Ｔｙｒ）　＠ｒｅｓ、７でのχａａ−（ＴｙｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、８ でのＸａａ−（ＬｅｕまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、９でのＸａａ＝（Ｓｅｒ、Ａ ｓｐまたはＧｌｕ）　、　ｒｅｓ、１１でのＨａｓ電（Ａｒ　ｇ　＋　Ｇ　ｌ　 ｕ　＋　Ｓ　ｅ　ｒ　＋　Ａ　ｌ　ａまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、１２でのＸａ ａｇ（Ａｓｐ、ＧＩｕまたはＬＶｓ）、　ｒｅｓ、１３でのＸａａｍ（Ｌｅｕ＋ 　ＩｌｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、１６でのＸａａｍ（Ｇｌｎ。 Ｌｅｕ、＾ｓｐ、　Ｈｉｓ、　Ａｓｎまたは５ｅｒ）、　ｒｅｓ、１７でのＸａ ａｍ（Ａｓｐ＋Ａｒｇ＋ＡｓｎまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、１９でのＸａａ−（ Ｉ　ｌｅまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、２０でのＸａａｍ　（１１ｅまたはｔ／ａ １）、　ｒｅｓ、２１でのＸａａｍ（Ａｌａまたは５ｅｔ）、　ｒｅｓ、２３で のＸａａｘ（Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＡｒｇ）　、　ｒ ｅｓ、２４でのＸａａ−（ＧＩｙまたは５ｅｒ）　、　ｒｅｓ、２５でのＸａａ ｍ　（ＴｙｒまたはＰｈｅ）　、　ｒｅｓ、２６でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｓｅｒ 、Ａｓｐ、Ｍｅｔ、）Ｉｉｓ、Ｇｌｎ、ＬｅｕまたはＧｌｙ）、　ｒｅｓ、２Ｂ でのＸａａｍ（Ｔｙｒ、　ＡｓｎまたはＰｈｅ）、　ｒｅｓ、３１でのＸａａｍ （ＧＩｕ、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｉｎまたは５ｅｒ）　、　ｒｅｓ、３３ でのＸａａｍ（ＧＩｕ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｎまたは５ｅｒ）　＊ｒｅｓ、３ ５でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｓｅｔ、Ｐｒｏ、ＧｉｎまたはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、 ３６でのＸａａｍ（Ｐｈｅ、　ＬｅｕまたはＴｙｒ）、　ｒｅｓ、３８でのＸａ ａｍ（Ｌｅｕ、ＶａｌまたはＭｅｔ）　。 ｒｅｓ、３９でのＸａａ−（Δｓｎ、Ａｓｐ、八ｌａ、ＴｈｒへたはＰｒｏ）　 、　ｒｅｓ、４０でのＸａａｍ（Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕｌｅｕ、Ａｌａまたは Ｌｙｓ））　、　ｒｅｓ、４１でのＸａａｇ　（Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、Ｈｉｓ＋Ｓ ｅｒまたはｌ１ｅ）　、　ｒｅｓ、４２でのＸａａ−（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ またはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、４３でのＸａａｍ（Ａｓｎ、ＳｅｒまたはＬｙｓ） 　、　ｒｅｓ、４４でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｓｅｔ、ＧｌｙまたはＰｒｏ）、　 ｒｅｓ、４５でのＸａａｍ　（Ｔｈｒ、　Ｌｅｕまたは５ｅｒ）　ｅｒｅｓ、４ ９でのＸａａｍ　（Ｉ　ｌｅ、　ｌ／ａｌまたはＴｈｒ）、　ｒｅｓ、５０での Ｘａａ−（Ｖａｌ＋Ｌｅｕまたはｌ１ｅ）　、　ｒｅｓ、５１でのＸａａｍ（Ｇ ｉｎまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、５２でのＸａａｍ（Ｔｈｒ、Ａｌａまたは５ｅ ｒ）、　ｒｅｓ、５３でのＸａａｍ　（Ｌｅｕまたは１ｉｅ）、　ｒｅｓ。 ５４でのＸａａｍ（ＶａｔまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、５５でのＸａａ−（ｔｌ ｉｓ、　ＡｓｎまたはＡｒｇ）、　ｒｅｓ、５６でのＸａａｍ（Ｐｈｅｉｅｕ＋ Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、５７でのＸａａｍ　（Ｉ　 Ｉｓ、門ｅｔ、Ａｓｎ、Ａｌａ、ＶａｌまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、５８でのＸ ａａａ　（Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、ＧｌｙまたはＰｈｅ）、　ｒｅｓ 、５９でのＸａａｘ　（Ｐｒｏ＋　ＳｅｒまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、６０での Ｘａａｍ（Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、ＶａｌまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ、６１で のＸａａｍ（Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｔ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ａｌ ａ、Ｐｒｏまたは旧Ｓ）。 ｒｅｓ、６２でのＸａａｍ　（Ａｌａ、　Ｖａｌまたはｌ１ｅ）。ｒｅｓ、６３ でのＸａａｍ　（ＰｒｏまたはＡｓｐ）。ｒｅｓ、６４でのＸａａｍ　（Ｌｙｓ 　、　ＬｅｕまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、６５でのＸａａｍ（ＰｒｏまたはＡｌ ａ）、　ｒｅｓ、６８でのＸａａｍ（ＡｌａまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、１０で のＸａａｍ（Ａｌａ、丁ｈｒまたはＧｌｕ）、ｒｅｓ、７１でのＸａａ−（Ｇｉ ｎ、Ｌｙｓ、八ｒｇまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、７２でのＸａａｍ（Ｌｅｕ、Ｖ ａｌまたはＭｅｔ）、　ｒｅｓ、７３でのＸａａ−（Ａｓｎ、Ｓｅｒ、＾ｓｐま たはＧｌｙ）。ｒｅｓ、７４でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｐｒｏまたは５ｅｔ）、ｒ ｅｓ、７５でのＸａａｍ（ｒｌｅ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＬｅｕ）、　ｒｅｓ、 ７６でのＸａａ−（Ｓｅｒ、ＡＩａまたはＰｒｏ）、　ｒｅｓ、７７でのＸａａ ｍ　（νａｌ＋Ｍｅｔまたは１ｉｅ）、　ｒｅｓ、７９でのＸａａｍ　（Ｔｙｒ またはＰｈｅ）、　ｒｅｓ、８０でのＸａａｍ　（Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ＋　Ｌｅｕ または旧ｓ）、　ｒｅｓ、８１でのＸａａｍ　（Ａｓｐ、　ＡｓｎまたはＬｅｕ ）　、　ｒｅｓ、８２でのＸａａｍ（Ａｓｐ、Ｇ１ｕ＋Ａｓｎまたは５ｅｒ）、 　ｒｅｓ、８３でのＸａａ□（Ｓｅｒ、Ｇｉｎ、ＡｓｎＴｙｒまたはＡｓｐ）、 　ｒｅｓ、８４でのＸａａｍ（Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＧｌｕまたはＬｙｓ） 　６ｒｅｓ、８５でのＸａａｘ　（Ａｓｎ、　ＴｈｒまたはＬｙｓ）、　ｒｅｓ 、８７でのＸａａｍ（１１ｅ、ＶａｌまたはＡｓｎ）、　ｒｅｓ、８９でのＸａ ａｍ　（Ｌｙｓまたは＾ｒｇ）、　ｒｅｓ、９０でのＸａａｍ（Ｌｙｓ、Ａｓｎ 、Ｇｉｎ、　ＨｉｓまたはＶａｌ）、　ｒｅｓ、９１でのＸａａ−（Ｔｙｒまた は旧ｓ）、　ｒｅｓ、９２でのＸａａｍ（Ａｒｇ、　Ｇｉｎ、ＧｌｕまたはＰｒ ｏ）、ｒｅｓ、９３でのＸａａｍ（Ａｓｎ、ＧｌｕまたはＡｓｐ）、　ｒｅｓ、 ９５でのＸａａｍ（Ｖａｌ、Ｔｈｒ、ＡｌａまたはＩＩｅ）、　ｒｅｓ、９７で のＸａａｍ（Ａｒｇ、Ｌｙｓ＋Ｖａｌ、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、　ｒｅｓ、９８ でのＸａａｍ（Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕまたは５ｅｔ）、　ｒｅｓ、１００での Ｘａａｍ（ＧＩＹまたはＡｌａ）、　ｒｅｓ、１０２でのＸａａｍ（Ｈｉｓまた はＡｒｇ）　＊本発明においてモルフォゲンとして使用するために特に有用な配 列は、Ｃ末端ドメインを含むものである。この配列は次のものをさす、少なくと も保存された６または７個のシスティン骨格を含むもの全てで、６０Ａ、　ＢＭ Ｐ３．　ＢＭＰ５およびＢＭＰ６　（配列表配列番号２４−２８）のＣ末端ドメ インからなる蛋白質と同様のＶｇｌ。 シｇｒ−１．ＤＰＰ、０Ｐ−１，０Ｐ−２，ＣＢＭＰ−２Ａ、ＣＢＭＰ−２８， ＧＤＦ−１（配列慶祝列番号５−１４および表ＩＩ）のＣ末端９６−１０２アミ ノ酸残基を持つものである。さらに、米国特許５，０１１，６９１号に開示され ているＣ０Ｐ−１，３−５，７，１６のように一般配列からデザインされた生物 的合成物は有用性がある。その他の配列としては、インヒビン／アクチビン蛋白 質（米国特許４．９６８，５９０．５，０１１．６９１号を参照）が含まれる。 さらにまた、その他の有用性のある蛋白質は上記の配列のいずれかと少なくとも ７０％のアミノ酸配列ホモロジー「相似性」を好ましくは８０％ホモロジーか相 似性を持ち、形態形成活性を示す、これらの物質は、このモルフォゲン蛋白質フ ァミリーの新規メンバーと同様に、自然発生的であろうと生合成的に製造された ものであろうと対立形変異、種特異型およびその他の配列変異型（「ミューティ ン」または「ミュータント」蛋白りをもつことが予想される。 ここにおいて用いている「アミノ酸配列のホモロジー」はアミノ酸配列の相イ以 性を意味していると理解される。ホモローカ′スの配列は同一または相似のアミ ノ酸を有し、相似性のアミノ酸はＤａｙｏｆｆらによって、Ａｔ１ａｓ　ｏｆ　 Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｅ　ｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ：ｖｏｌ、５ ．５ｕｐｐ１．３＋ｐｐ、３４５−３６２（Ｍ、０．Ｄｙｏｆｆ、ｅｄ、、Ｎａ ｔｌ　ＢｉｏＭｅｄ。 ｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｄｎ、、ＷａｓｈｉｎｇＬｏｎ、Ｄ、Ｃ，１９７８）に定義 されたような保存性アミノ酸である。このように参照配列と７０％のアミノ酸酉 己列のホモロジーを持つ候補配列は、参照アミノ酸配列に続し１て候補アミノ酸 配列を並べてみた場合、候補配列中のアミノ酸の７０％は、参照配列のアミノ酸 配列に一致して０る力）、ある０は保存性アミノ酸変化を構成していることが必 要とされる。 「アミノ酸配列同一性」は、二つの一連をなす配列の間でアミノ酸の同一性が必 要であることと理解される。このように参照配列に対して候補配列が６０％の同 一性を有するとむ）うこと番よ、参照アミノ酸配列と候補アミノ酸配列を並べた とき、候補アミノ酸配列中のアミノ酸の６０％が参照アミノ酸の配ＪＩＪに一致 することが必要である。 ここで使用したホモロジーと同一性の計算に番よ参照配列として０Ｐ−１を用い た。またここで使用した配列１、ホモロジーと同一性の計算のためにＮｅｅｄｌ ｅｍａｎ　らの方法（１９７０，Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、４８：４４３−４５３ ＞を使用して配列が並べられ、アラインプログラム（ＤＮ＾５ｔａｒ＋　Ｉｎｃ ）で同一性を計算した。金側において、並べられた時の候補配列中の内部欠落と アミノ酸の挿入は、ホモロラー／同一性計算を行っている時には無視した。 現在、本発明のモルフォゲンとして有用な最も好ましい蛋白質の配列は、ｈＯＰ Ｉの６個の保存されたシスティン骨格（例えば配列表配列番号５の残基４３−１ ３９）で特定されているアミノ酸配列と６０％以上の同−性好ましくは６５％以 上の同一性を持つもつもである。これらの最も好ましい配列は、ショウジヨウバ エ６０Ａ蛋白質を含む０Ｐ−１と０Ｐ−２蛋白質の対立形質型と種変異型の両方 を含む、さらにまた、本発明の別の好ましい観点において、有用なモルフォゲン は、ｒＯＰＸ　ｊとしてここに示した一般アミノ酸配列を有するポリペプチド鎖 の種類から構成される、活性な蛋白質を含んでいる。このＯＰＸは、ＯＰＩおよ び０Ｐ２（配列表配列番号２９）の色々な同定された種とホモロジーを持つ。 本発明の別の好ましい観点において、有用なモルフオゲンは、以下のＤＮＡ又は ＲＮＡ配列に厳密なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸に よってコードされるポリペプチド鎖から成る活性蛋白質を含む、このＤＮＡ又は ＲＮＡ配列は、ＯＰｌ又はＯＦ２の消耗されるンステインドメインを特定するＣ −末端配列をコードするもので、夫々配列表配列番号１６と２０のヌクレオチド １０３６〜１３４１．ヌクレオチド１３９０〜１６９５である。 ここで用いている厳密なハイブリダイゼーション条件とは、４０χホルムアミド 、５　Ｘ５ＳＰＥ、　５　ＸＤｅｎｈａｒｄｔ’ｓ　５ｏｌｕｔｉｏｎ　、およ び０．１χ５ＤＳ３７°Ｃ−晩の条件によるハイブリダイゼーション、そして０ ．Ｉ　Ｘ５ＳＰＥ、　０．１χＳＤＳ　５０＠Ｃの条件による洗浄として特定さ れる条件のことである。 本発明の装置、方法、組成物に有用なモルフオゲンは、上記のポリペプチド鎖の いずれかから構成される蓋白質であり、天然の原料から単離されるか、あるいは 遺伝子組換えＤＮＡまたはその他の合成方法で調製される。更にこれらの蛋白質 の対立形質型と種変異型、それらの自然発生的な又は生合成的な突然変異株、種 々の切断または融合形成物を含む欠失または付加変異体も活性ををすると予恐さ れ、これらは保存性Ｃ末端システィン骨格を変更していても、折りたたみ構造に おいてこれらのシスティンの相互関係を機能的に妨げないような骨格変更であれ ばそれらも含まれる。さらにまた、このような活性型は、ここに開示し特徴的に 述べられている構成物と等質であると考えられる。蛋白質は、次のような変異形 態を含む、異なるグリコシレージョンパターン、異なるＮ末端、アミノ酸配列ホ モロジーの領域を有する関連蛋白質のファミリー、天然あるいは宿主細胞で遺伝 子組換えＤＮＡの発現によって調製した生物合成蛋白質の活性化切断型又は変異 型などである。 形態形成性蛋白質は、原核細胞または真核宿主細胞中で、完全または切断ｃＤＮ Ａあるいは合成りＮＡから発現させることができる。そして精製、切断、リフォ ールディング、形態形成的活性組成物を構成するために二重化される。現在好ま しい宿主細胞としては、大腸菌、ＣＨＯ、ＣＯＳ　、ＢＳＣ細胞のような哺乳動 物細胞がある０本発明の方法、組成物および装置に有用なモルフオゲンの詳細な 説明は、１９９１年３月１１日出［６６７，２７４および１９９１年８月３０日 出１１１７５２，７６４の米国特許出願に開示されており、ここに引用すること によって一体化して開示される。 本開示を考慮すると、熟練した遺伝子技術者は、種々の異なる種のｃＤＮＡまた はゲノムライブラリーから適切なアミノ酸配列をコードしている遺伝子を単離す ることができる。またオリゴヌクレオチドからＤＮＡを構築し、原核細胞と真核 細胞の両方を含む種々のタイプの宿主で発現させ、哺乳動物の神経回路を維持す ることのできる活性な蛋白質を大量に生産することができる。この神経回路保護 には、瀕死のニューロンの生存性を増強するヒトを含む色々な哺乳動物における 神経の再生と修復を促進することを包含するものである。 本発明の先に示した目的、特性、利点はその他の目的と特性および利点と共に、 以下に示す詳細な説明がらより一層明白なものとなるであろう。 ２血凹呈棗賑所 本発明それ自身と同しく、本発明の前述の及び他の目的と特性および利点は、添 付されている図とともに読むことによって、以下の説明からより一層理解できる であろう。 図１（ＡおよびＢ）は、形質転換された神経芽腫Ｘグリオマー細胞（ＩＡ）を再 分化させて、非形質転換二ニーロンの形態形成特性をひきだすモルフォゲン（Ｏ Ｐ−１）の作用（ＩＢ）を示した微小写真である。 図２Ａは、モルフォゲン処理されたＮＧ１０８−１５細胞の１８０ｋＤａと１４ ０ｋＤａのＮ−ＣＡＭ異性体の誘導に対する容量反応曲線である。 図２Ｂは、モルフォゲン処理されたＮＧ１０８−１５細胞からの全細胞抽出物の Ｎ−ＣＡ？ｌ特異的抗体によるウェスタンプロット写真である。 図３は、モルフォゲン濃度の函数として、ランダムに選択した２０の領域中の細 胞凝集の平均数をプロットしたものである。 図４はヒト血清中の０Ｐ−１の存在をイムノプロ、トで確認した写真である。 又所立用皮星脱里 ここに説明した蛋白質はニューロンの生存性を増強するための有効物質であり、 特に瀕死のニューロンに有効である。そして哺乳類の神経回路を維持するために 有効である。ここに開示したように、これら蛋白質（「モルフォゲン」）は非分 裂性ニューロンの生存性を増強することができ、神経細胞性ＣＡＭの発現を刺激 し、分化したニューロンの表現型発現を維持し、神経由来の形質転換細胞の再分 化を誘導し、そして神経突起の破壊部分、特に遠位軸索の大きなギャ７プを超え て軸索成長を促進する。さらにまた、この蛋白質は、免疫学的に関係した神経組 織の損傷に伴なう＆１１織破壊作用を緩和するために神経保護作用を与えること ができる。最後に蛋白質は哺乳動物の神経組織の生存性をモニターするための方 法の一部分として使用できる。 投与および使用方法、複数の限定されない実施例と同様に本発明の方法、組成物 と装置において有用な適切なモルフォゲンの詳細な説明が以下に開示される。ｌ ）死のリスクを持った神経細胞の生存性を増強し、哺乳動物の神経回路を維持す るための治療剤としてここに説明するモルフォゲンおよびモルフォゲン促進剤の 適合性を説明し、２）モルフォゲンとモルフォゲン促進剤としての候補物質の有 効性を評価する分析方法を提供する。 １、有用なモルフォゲン 細胞及び分子の発達性カスケードを誘導して新しい臓器特異的組織の形成を導き 、保存された少なくともＣ末端の６個のシスティン骨格又はそれと機能的に等価 のもの（上記参照）から構成されているものであるならば、ここに定義するよう に、その蛋白質は形態形成性である。特に、モルフォゲンは一般的には、形態形 成可能環境においては、次の生物学的ｍ能全てを示すことができる。始原細胞増 殖促進、始原細胞分化促進、分化細胞増殖促進、分化細胞の成長と維持を手助け する。 本発明の方法において有用なモルフォゲンが、最初にどのように特定されたかは 、モルフォゲンをどのように製造し、使用し、モルフォゲン活性を試験するかと 同様に国際出願ＵＳ９２１０１９６８　（Ｗ０９２／１５３２３）に開示されて おり、引用により本発明と一体化する。ここに開示するように、モルフォゲンは 天然の原料や、ここに開示した遺伝子配列を用いた遺伝子操作による原核宿主細 胞や真核宿主細胞の生産物から精製できる。さらにまた、新規モルフォゲン性配 列がここに開示した方法に従って特定できる。 特に有用な蛋白質は、表ＩＩに開示した天然由来の配列からなるものである。そ の他有用な配列は、米国特許５，０１１，６９１に開示されているような生物合 成物である。この開示は引用により本発明と一体化される（ＣＯＰ−１，Ｃ０Ｐ −３，Ｃ０Ｐ−４，Ｃ０Ｐ−５，Ｃ０Ｐ−７Ｃ０Ｐ−１６等） さらに、本発明の方法と組成物において有用なモルフォゲンは、上に述べた配列 のいずれかと、そのアミノ酸配列のホモロジー（相似性）が７０χ、好ましくは ８０χである。形態発生的に活性の蛋白質として記述される。ここで「ホモロジ ー」は上記に定義したものである。 本発明の方法において有用なモルフォゲンは、また、ここに記述した６個の一般 配列（一般配列１．２．３，４．５．６）で記述できるものである。−線配列１ と２はＮ末端に次の配列を含む。 Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａχａａ　Ｘａａ　（配列表配列番号１５）以下にしめし た表ＩＩは天然蛋白質の活性領域のアミノ酸配列を比較したもので、それはモル フォゲンとして特定され、次のものを含む、ヒト０Ｐ−１（ｈＯＰ−１，配列表 配列番号５および１６−１７）、マウスＯＰ−１（ｍＯＰ４．配列表配列番号６ および１８−１９）、ヒトおよびマウス０Ｐ−２（配列表配列番号７．８および ２Ｏ−２３）　、ＣＢＭＰ２Ａ（配列表配列番号９）、ＣＢＭＰ２Ｂ　（配列表 配列番号１０）　、ＢＭＰ３（配列表配列番号２６）　、ＤＰＰ（ショウジヨウ バエ由来、配列表配列番号１１）　、Ｖｇｌ（ツメガエル由来、配列表配列番号 １２）　、Ｖｇｒ−０７ウス由来、配列表配列番号１３）　、ＧＤＦ−１（マウ ス由来、配列表配列番号１４．３２および３３）　、６０（Ａ）蛋白質（ショウ ジヨウバエ由来、配列表配列番号２４−２５）　、ＢＭＰ５（配列表配列番号２ ７）　、Ｂ門Ｐ６（配列表配列番号２８）、配列はＮｅｅｄｌｅｉａｎ　らの方 法（１９７０，Ｊ。 Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、４８：４４３−４５３）を使用して、直列に並ベアラインプ ロゲラＪａ　（ＤＮＡｓｔａｒ、　Ｉｎｃ）で同一性を計算した０表中の３つの ドツト（、、、）は、その位１のアミノ酸はｈＯＰ−１のアミノ酸と同しである ことを示している。３つのダッシュは、その位置にはアミノ酸がないことを示し 、かつホモロジーを説明するために含まれている１例えば、ＣＢｌＩＰ−２Ａ　 とＣＢＭＰ−２８の残基６０は欠失している。 もちろんこの領域の両方のアミノ酸配列は＾５ｎ−５ｅｒ（残基５８．５９）か らなり、ＣＢＭＰ−２Ａでは次にＬｙｓ　とｌｉｅが、ＣＢＭＰ−２ＢではＳｅ ｒとＩｌｅが続く。 表　ｌＩ ｈｏＰ−Ｉ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａ ｌ＋５ＯＰ−２、、、Ａｒｇ　Ａｒｇ　、、、、、、、、、、、、、、。 ＤＰＰ　、、、Ａｒｇ　Ａｒｇ　、、、Ｓｅｔ　００．．６９．。 Ｖｇｌ　、、、、、、Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｍｉｘ　、、、、、−、、。 Ｖｇｒ−１、、、、、、、、、、、、Ｇｌｙ　、、、□９．．。 ＣＢＭＰ−２Ａ　、、、　−１，人ｒｇ　、、、　Ｐｒｏ　、、、　−０−−− ９ＣＢＭ’Ｐ−２Ｂ　、、、　ムｒｇ　Ａｒｇ　、、、Ｓｅｔ　、、、、、−、 、。 ＢＩｉＰ３　、、、ｕｓ　Ａｒｇ　ムｒｇ　Ｔｙｒ　、、、Ｌｙｓ　、、。 ＧＤＦ−１、、、ムｒｇ　ｕａ゛ムｒｇ　Ａｒｇ　、、、、、、、、。 ６０人　、、、　Ｇｌｎ　Ｍａｔ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　、、、　、、、　−−−Ｑ ５ ＢＭＰ６　、、、Ａｒｇ　、、、、、、、、、、−、、−１，−特表千７−５０ ９７２１　（１５） ｈＯＦ−Ｉ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｇｉ ｎ　ＡｓｐｈＯ？−２、、、、、、Ｇｉｎ　、、、、、、、、、　、、、Ｌｅｕ 　、、。 ｍ０Ｐ−２Ｓｅｒ　、、、、、、　、、９．、、、、、、、、＋＋ｅｕ　、、。 ＤＰＰ　人ｉｐ　、、、Ｓｅｔ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、Ａｓｐ　、、。 Ｖｇｌ　Ｇｌｕ　、、、Ｌｙｓ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、、、、ＡｓｎＶｇ ｒ−１、、、、、、Ｇｉｎ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、、、、、、。 ＣＢ？ＩＰ−２Ａ　Ａｓｐ　、、、Ｓｅｔ　、、、Ｖａｌ　、、、、、、Ａｓｎ 　、、。 ＧＤＦ−１、、、、、、、、、Ｇｌｕ　ｌ／ａｌ　、、、、、、Ｈｌｓ　Ａｒｇ ６０Ａ　Ａｓｐ　、、、Ｌｙｓ　、、、、、、、、、、、、Ｈｌｓ　、、。 ＭＰ５ ＢＭＰ６　、、、　、、、　Ｇｉｎ　、、、　−、−、、−０００，−−−−９ ｈＯＰ−１Ｔｒｐ　ＩＩｓ　１１ｅ　Ａｌｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ 　Ａｌａ＋１０Ｐ−１ ｈＯＰ−２、、、Ｖａｌ　、、、、、、、、、Ｇｉｎ　、、、、、、ＳｅｔｍＯ Ｐ−２、、、Ｖａｌ　、、、、、、、、、Ｇｉｎ　、、、、、、５ｅｒＤＦ？　 、、、’、、、Ｖａｌ　、、、、、、Ｌｅｕ　、、、、、、ＡｓｐＣ！ｌ？１Ｆ −２Ｂ　、、、、、、Ｖａｌ　、、、、、、Ｐｒｏ　、、、、、、Ｇ１ｎＢ１ｆ ｆ３　、、、、、、、、、Ｓｅｔ　、、、Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　ＡｓｐＧＤ Ｆ−１、、、Ｖａｌ　、、、、、、、、、Ａｒｇ　、、、Ｐｈｅ　ＬｅｕＢ）Ｉ Ｆ６　、、、　、、、、．０．、、．１．　Ｌ）’Ｓ−，，０，６，。 ｈＯＰ−１ｕａ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　 ＡｌａＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、ｔｈｅ　、、、、、、Ｈｌｇ　、、、Ａｓｐ　、 、、Ｐｒ。 ｍＭＰ３　、、、、、、、、、、、、Ｓｅｔ　、、、Ａｌａ　、、、ＧｉｎＧＤ Ｐ−１、、、ムｓｎ　、、、、、、Ｇｉｎ　、、、Ｇｌｒ＋　、、、、、。 ６０Ａ　、、、Ｐｈｅ　、、、、、、　Ｓａｒ　、、−１０，−−−ムｓｎＢＭ Ｐ５　、、、Ｐｈｅ　、、、、、、ムＨｐ　、、、、、、、、、ＳｓｒＢＭＰ６ 　、、、Ａｓｎ　、、、、、、Ａｓｐ　、、、、、、、、、ＳｅｔｈＯＰ−Ｉ　 Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｍｅｔ　Ａｓｎ　人１１ｈ ＯＰ−２、、、、、、、、、Ａｓｐ　、、、Ｃｙｓ　、、、　、、−１、。 鴎０Ｐ−２、、、、、、、、、人ｓｐ　、、、　Ｃ７Ｍ　、、、　０．、−ＤＰ Ｐ　、、、、、、、、、Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｈｌｓ　Ｐｈｅ　、、、ＳｉｒＶｇｌ 　Ｔｙｒ　、、、、、、Ｔｈｒ　Ｃ１ｕ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　、、、ＧｌｙＣＢＭ Ｐ−２Ｂ　、、、、、、、、、Ａｌａ　Ａｓｐ　ＨＬｓ　Ｌｅｕ　、、、５ｅｒ ＧＤＦ−Ｉ　Ｌｓｕ　、、、　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅ ｒ＊＊、、。 ＢＩ′ＩＦ３　、、、、、、Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ 　Ｐｒ。 ６０人　、１．　、、、　、、、　、、、　Ａｌａ　Ｈｌｓ　、＋＋　、＋＋　 ＋＋。 ＢＭＰ５　、、、、、、、、、、、、Ａｌａ　Ｈｉｓ　Ｎｅｔ　、、、、、。 ＢＭＦ６　、、、　．１１１１９００．　ムｌａ　ＨＬｓ　）ｌｅｔ　、、、、 、。 ｈＯＰ−１Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｈｌｓ　ｕａ　Ｘ１ｅ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　 ＬｅｕＣＢと？−２Ｂ　、、、、、１９００．０．０４．、．００１．１８．、 、。 ＢＭＰ３　Ｓｅｒ　、、、　、、、　、、、　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　、、、　Ｓｅｒ 　ｌ１ａＧＤＦ−Ｉ　Ｌｅｕ　、、、　、、、　、、、Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ 　Ａｌａ　、、。 ＭＰ５ ｈＯＰ−Ｉ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｔｈ ｒ　ＶａｌｍＯＦ−１、、、、、、、、、、、、、、、、、、人ｓｐ　、、、　 、、。 ｈＯＰ−２、、、Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　、、、Ａｓｎ　Ａｌａ　、 、。 ｍ０Ｐ−２、、、Ｈｌｓ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　、、、Ａｓｐ　Ｍａｌ　、 、。 ＤＰＰ　、、、Ａｌｎ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　、、、　、、、Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　、、 。 Ｖｇｌ　、、、、、、Ｓｅｔ　、、、Ｇｌｕ　、、、、、、Ａｓｐ　ＩｌｅＶｇ ｒ−１、、、、、、Ｍａｌ　ＩＩｅｔ　、、、、−０，−Ｔｙｒ　、−ＣＢＭＰ −２Ａ　、、、Ａｌｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　、、、Ｓｅｒ　−−−Ｌｙｓ　Ｉｌｅ ＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　、、、Ｓｅｒ　−−−Ｓｅｒ 　ＸｌｅＢＭＰ３　、、、Ａｒｇ　Ａｌａ＊＊Ｇｌｙ　Ｍａｌ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ 　Ｇｌｙ　ｌ１ｅＧＤＦ−Ｉ　Ｍｅｔ　、、、　人１ａ　人１ａ　Ａｌａ　、、 、　Ｇｌｙ　Ａｌａ　＾１息６０Ａ　、、、　、、、　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ 　、、、　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　、、。 ！１ＭＰ５　、、、　、、、　Ｌｅｕ　Ｗｅｔ　Ｐｈｅ　、、、Ａｓｐ　Ｈｌｓ 　、、。 ＢＩＩＰ６　、、、　、、、　Ｌｓｕ　Ｍｅｔ　、、、　、−６００，Ｔｙｒ　 −１−ｈＯＰ−Ｉ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　人ユａ　Ｐｒｏ 　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ０Ｐ−１ ｈＯＰ−２、、、、、、Ａｌａ　、、、、、、　、、、−−−０，−ＬｙｓｄＰ −２、、、、、、人１ａ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　ＬｙｓＤ ＰＦ　、、、　、、、Ａｌａ　、、、　、、、Ｖａｌ　、、、　、、−、、。 ＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、、、、Ａｌａ　、、、、、、Ｖａｌ　、、、０．　（、 ｌｕ！１ＭＦ３　、、、　Ｃ１ｕ　、、、　、、、　、、、　Ｖａｌ　、、、　 Ｇｌｕ　ＬｙｓＧＤＦ−Ｉ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　、、、、、、、、、Ｖａｌ　、、 、ム１ｍ　ムｒｇ６０Ａ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　 、、、　、、、　Ａｒｇ開Ｐ５　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　、 、、　、、、　、、、　ＬｙｓＢＭＰ６　、、、　、、、　、、、　、、、　、 、、　、、、　、、、　、、、　ＬｙｓｈＯＰ−Ｉ　Ｌｅｕ　人ｓｎ　Ａｌａ　 ＩＩｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌ＠ｕ　Ｔｙｒ　ＰｈｅｈＯＰ−２、、、Ｓｅｔ　、 、、τｈｌ　、、、　、、、　、、、　、、、　ＴｙｒＩＩＩＯ？−２、、、Ｓ ｅｔ　、、、　Ｔｈｒ　、、、　、、、、、、、　、、、　ＴｙｒＶｇｌ　１１ ｅｔ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　、、、、、、Ｍｅｔ　、、、Ｐｈｅ　ＴｙｒＶｇｒ−Ｉ 　Ｖａｌ　、、、　、、、　、、、　、、、−−１−９−−１−０，。 ＤＰＰ　、、、Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　−、、、、、Ｌｅｕ Ｃ！ＩＭＰ−２人　、、、　Ｓｅｔ　、、、　、、、　、、、　Ｍｅｔ　、、、 　、、、　ＬｅｕＣＢＩＩＰ−２Ｂ　、、、　Ｓｅｔ　、、、　、、、　、、、 　Ｎｅｔ　、、、　、、、　ＬｅｕＢＭＰ３　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ 　、、、　工Ｉｓ　、、、　Ｐｈｅ　ＴｙｒＩＩＩＦ−１、、、Ｓｅｔ　Ｐｔｏ 　、、、　、、、　、、、　、、、　Ｐｈｅ　、、。 ６０＾　、、、Ｃ１ｙ　、、、Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　、、、、、、、、、ＨｉｓｈＯ Ｉ’−Ｉ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ 　Ｌｙｓｍ）？−２、、、Ｓｅｔ　、；、　Ａｓｎ　、、、　、、−１，−１８ ，＾ｒｇＤＰＰ　Ａｓｎ　、、、　Ｇｉｎ　、、、　Ｔｈｒ　、、、　Ｖａｌ　 、、、　、、。 Ｖｇｌ　、、、Ａｓｎ　Ａｓｎ　ＡＬＰ　、、、１１１１１１　Ｖａｌ　、、、 ムｒｇＶｇｒ−１、、、、、、Ａｓｎ　、、、　、、、　、、、　、−０，−６ −０ＣＢＭＰ−２Ａ　、、、　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　、、、　Ｖａ ｌ　−−−・−・ＣＢＭＰ−２Ｂ　、、、Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　、 、、Ｖａｌ　、、、、−。 ＢＭＰ３　、、、　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　、、、　、、、　Ｍａｌ　、、、 　、、。 （、ＤＦ−１、、、ムｓｎ　、、、Ａｓｐ　、、、　、、、Ｖａｌ　、、、ムｒ ｇ６０＾　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　、、、　、、、Ａｓｎ　、、、　 、、。 ＢとＰ５ ｈＯＰ−Ｉ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｇｎ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　ムｒ ｇｈＯＰ−２、、、Ｈｌｓ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　Ｌｙｓ ＋ｄＰ−２、、、Ｈｌｇ　、、、　、、、　、、、　、、、、、、、　ＬｙｓＤ ＰＩ’　Ａｓｎ　、、、　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　、、、　Ｔｈｒ　、、、　ＶａｌＶ ｇｌ　ＨＬｓ　、、、Ｇｌｕ　、、、　、、、Ａｌａ　、、、Ａｓｐｇｒ−１ ＧＷ−２＾　Ａｓｎ　、、、Ｇｉｎ　Ａｓｐ　、、、、、、、、、ＧｌｕＣＢＭ Ｐ−２８Ａｓｎ　、、、　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　、、、　、、、　、、、　Ｇｌｕ４ ６１　Ｖａｌ　、、、　Ｐｒｏ　、、、　、、、　Ｔｈｒ　、、、　ＧｌｕＧＤ Ｆ−Ｉ　Ｃ１ｎ　、’、、　Ｃ１ｕ　Ａｓｐ　、、、　、、、　、、、　人５ｐ ６０Ａ　、、、　、、、　、、、　、、、　、、、　Ｉｌｅ　、、、　ＬｙｓＢ とＰ６　、、、　、、、　、、、　丁ｒｐ　、、、　、、、　、、、　、、−ｈ ＯＰ−Ｉ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　ＨｌｓｆｌＰＰ　Ｇｌｙ　、、、 　、、、　、、、＾ｒｇＶｇｌ　Ｇｌｕ　、、、　、、、　、、−人ｒｇｇｒ− １ ＣＢＭＰ−２Ａ　Ｇｌｙ　、、、　、、、　、、、＾ｒｇＣＢＭＰ−２８Ｇｌｙ 　、、、　、、、　、、、ＡｒｇＢＭＰ３　Ｓｅｔ　、、、　Ａｌｉ　、、、Ａ ｒｇＧＤＦ−Ｉ　Ｇｌｕ　・・・　・・・　・・・　＾τｇ６０Ａ　Ｓｅｔ　・ １．　・・・　・・・　・・・ＢＭＰ５　Ｓｅｒ　、、、　、、、　、、、　、 、。 事寧ＢＭＰ３の残基５６と５７の間はＶａｌ残基である。 ＧＤＦ−１の残基４３と４４の間には、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ− Ｐｒ。 がある 先のアミノ酸配列の比較から明白になったように、意味のあるアミノ酸の変更を 、モルフオゲン活性を保持しつつ一般配列の範囲で行なうとか可能である。例え ば、表ＩＩに示したＧＤＦ−１蛋白質の配列は、ここに説明したｈＯＰｌと５０ ％位しかアミノ酸の同一性を持たないにもかかわらず、ＧＤＦ−１ｕ列は、ｈＯ Ｐ−１ｕ列と７０％以上のアミノ酸配列のホモロジ−（或いは相似性）を持つ。 ここで言う「ホモロジー」、「相似性」は、Ｄａｙｏｆ　ｆらにより、Ａｔ１ａ ｓ且ｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｓｅ　ｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ：ｖ ｏｌ、５，５ｕｐｐｌ。 ３、　ｐｐ、３４５−３６２（門、Ｏ，Ｄｙｏｆｆ、ｅｄ、、Ｎａｔｌ　Ｂｉｏ Ｍｅｄ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆｄｎ、、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ、ｃ、　１９ ７９）　に示されている方法によって特定される、配列中の許容された保存性ア ミノ酸の変化を含む。 本発明のモルフオゲンとして有用な特に好ましし）配列１、ｈ。 Ｐｉ（配列表配列番号５の残基４３−１３９）の保存された６個のシスティン骨 格で特定されるアミノ酸配列と６０％以上、さらに好ましくは６５％以上の同一 性をもつ、これらの最も好ましし）５己列番よ、ソヨウジヨウバエ６０Ａ蛋白質 、０Ｐ−１、０Ｐ−２の対立形質および種変異体の双方を含む。さらに、他の好 ましい観点に椙１て、本発明は、７個のシスティン骨格を持ち、種々の特定され たマウスおよびヒトのＯＰＩ　、ＯＦ２　Ｗ白質に共通する、ｒ、ＯＰＸ　Ｊと シテここに示した一般アミノ酸配列を有するポリペプチドの種力１らなるモルフ オゲンを含む。ＯＰＸは配列表配列番号２９に示して（する、そこに記載するよ うに、夫々のＸａａはその位置で、マウスまたはヒ）　ＯＰＩまたはＯＦ２のＣ 末端配列（配列表配列番号５−８及び／または配列表配列番号１６−２３）の相 当する位置で得られる残基から他とは無関係に選択される。 Ｉｌ、汁２、′ヒーするための賢肌支立迭モルフォゲンは好ましい方法で個体に 投与される。投与は好ましくは直接的（神経組織への注射のように局部的に）ま たは全身的（非経口与または経口投与）である０モルホゲンは非経口的に投与で きる。静脈内、皮下、筋肉、限窩、目、頭蓋、関節嚢、心室、脳槽、腹膜、頬、 直腸、膣、鼻腔内又はエアロゾール投与をあげることができる０モルホゲンは好 ましくは水溶液にすることもできる。溶液は患者に対して所望のモルフォゲンを 与えるのに加え、患者の電解質と容易バランスに負の影響を与えないので生理的 に受容可能である。モルフォゲンの水性媒体は通常の生理食塩水（９，８５χ食 塩、０．１５Ｍ）ｐＨ７−７，４である。 モルフォゲンを含有する水性溶液は、−例を上げると、０．１χトリフロロ酢酸 （ＴＦＡ）または０．１χ塩酸含有アセトニＩ・リルの５０χエタノール溶液、 あるいは同等の溶媒に蛋白質を溶解させて調製することができる。得られた溶液 １容量に１０容量のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を加え、さらに０．１−０．２ Ｘヒト血清アルブミン（）ＩＳＡ）を加えてもよい。得られた溶液は、好ましく は持続的に攪拌する。必要であれば、与えられたモルフォゲンはその他の適切な 分子とを結合させて溶解度をあげることができる０例えばモルフォゲンのプロド メインを成熟２量体と結合させると、蛋白質の溶解性を相当あげることができる 。（下記セクション１１．１を参照）。実際、内因性蛋白質はこの形態で移送さ れると考えられる。溶解性を促進するものとして、特に経口投与に有用なその他 の分子は、カゼインをあげることができる０例えば、０．２χカゼインの添加は ０Ｐ−１の成熟活性型のン容解度を８０χ増加させる。牛乳及び／または種々の 血清蛋白質に見出されるその他の成分も有用である。 非経口的投与に有用な溶液は、製薬技術として公知の方法で、例えばＲｅｍｎｇ ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ（Ｇａｎｎａｒｏ 、Ａ＋ｅｄ、）Ｍａｃｋ　Ｐｕ１．．１９９０に記載されている方法で調製でき る。製剤化材料としては、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリ コール、植物油、水素添加したフタレンおよび類似物があげられる。特に、直接 投与製剤は、グリセロールと高い粘度をもつ池の組成物を含む０例えばヒアルロ ン酸、コラーゲン、トリカルシウムリン酸塩、ポリブチレート、ラクチド、ラク チド／グリコリド共重合ポリマーなどを含む生体内適合性、好ましくは生体吸収 性ポリマーがモルフオゲンのインビボ放出を制御する賦型剤として有用である。 このモルフオゲンを非経口的に投与するシステムとして特に有用なものは、エチ レンビニル酢酸共重合体粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み式注入システム、リボゾ ームなどを含む、ラクトースを賦型剤として含有する吸入式投与のための処方は 、例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココレート、デオ キシコレートを含有する水性溶液あるいは油性溶液であって鼻腔内にゲルとして 投与するかあるいは、鼻腔に滴下する形態のものである。非経口的処方はバッカ ル投与のためにグリコレートを含有するか、直腸内投与のためメトキシサリチレ ートを含有するか、膣内投与のためカットリック酸を含有するものである。 さらにまた、ここに説明したモルフオゲンは経口的に投与できる。一般的に、治 療薬として蛋白質を経口投与することは、殆ど行われていない、大部分の蛋白質 は、哺乳動物の消化器系で消化酵素と酸によってすくに分解されて、血液中に吸 収されない、しかし、ここに述べたモルフォゲンは、典型的に酸に安定でプロテ アーゼ抵抗性がある（たとえば米国特許４，９６８，５９０を参照のこと）。さ らに、少なくとも一つのモルフォゲン、０Ｐ−１は乳腺分泌物で、初乳および５ ７日めの乳から同定されている。 さらに乳腺分泌物から精製した０Ｐ−１はモルフォゲンの活性を有しでいる。特 に、米国特許４，９６８．５９０に開示されている、標準的に採用されているイ ンビボ骨アッセイ法を使用して、適切なマトリックス素材と共に皮下に移植した 場合、この蛍白質は哺乳動物の軟骨形成を誘導する。さらに、モルフォゲンは血 流から検出される（下記実施例９を参照）、最終的に、溶解型モルフォゲン、例 えばプロドメインと結合させた成熟モルフォゲンは哺乳類の神経経路を維持する 作用をを有している（下記実施例４および６を参照のこと）、これら知見は、経 口および非経口投与物は、個体に対して投与した場合、モルフォゲンが生物活性 を示すことを意味している。さらに、ここに示したモルフォゲンの成熟型は、典 型的には非常に低い溶解性を示すが、乳（および乳腺分泌物と初乳）に見出され るモルフォゲンの形態は、非常にとけやすい、恐らく成熟型のモルフォゲン活性 形が、完全な配列のプロドメインの一部又は全部と結合するか、１つ又はそれ以 上の乳成分と結合しているかによるのであろう、したがって、ここで提供される 化合物はインビトロ、インビボでその溶解性を促進できる分子と結合させてもよ い。 ここで提供される化合物は、神経組織に対してモルフォゲンまたはモルフォゲン 促進物質をターゲツティングすることができる分子と結合させることもできる０ 例えば、神経またはダリア細胞を含む神経＆１ｌＶｓ細胞上の表面分子に特異的 に作用する抗体、抗体フラグメント、他の結合蛋白質は使用可能である。有用な ターゲツティング分子は、米国特許５，０９１，５１３に開示された一本鎮結合 部位技術を用いて、デザインすることができる。 上記したように、ここで提供されるモルフォゲンはＣ末端活性ドメインの配列に ホモロジーが高い、比較すると、プロドメインとして定義される配列では配列は かなり異なっている。したがって、プロドメインはモルフォゲン特異的といえる 。今日迄に同定されているモルフォゲンは、異なる組織で特異的に発現されるこ とが公知である。さらに、どのような既存の理論に制限されることなく、体内で の自然条件下では、一定の組織には、特に選択されたモルフォゲンが典型的に作 用しているらしい、さらに、溶液中のモルフォゲンの活性型と結合していること が確認されたプロドメインの一部まは全部が、ここに記載したモルフォゲンに対 するターゲント化物質として使用できる。 例えば、プロドメインは、ターゲット組織の１又はそれ以上の分子と特異的に反 応するのでプロドメインと結合したモルフォゲンをその組織に方向づけることか できる。さらにまた、神経組織に対してモルフォゲンをターゲツティングさせる ための別な有用な分子は、モルフォゲンブロドメインの１部または全部であり、 特に、自然に神経組織に結合することが確認されている０Ｐ−１またはＧＤＦ− １のプロドメインの一部または全部はである。 最後に、ここで提供されるモルフォゲンまたはモルフォゲン促進剤は単独で投与 するか、または神経経路の維持に有効であることが知られている神経成長因子と 抗炎症剤とを含むその他の分子と組み合わせて投与できる。 ここで提供される化合物は、薬剤学的に受容されうる無毒性の賦型剤およびキャ リアーと混合して製剤化できる。上記のように、このような組成物は以下のよう な投与のために調製できる。非経口的投与、特に溶液あるいは懸濁液の形態；経 口投与、特に錠剤あるいはカプセル剤の形態；鼻腔的投与、特に粉末、鼻腔的滴 下剤またはエアロプール。 組成物は、治療上有効な量をヒトまたはその他の哺乳動物に非経口的または経口 的に投与するための形態に調製できる。治療上有効な量は、患者の病理学的な状 態を除去するか低減するために十分な時間にわたって適切な濃度で提供できる量 であり、上記に述べた神経学的な病気や障害を治療するのに十分な量である。さ らにまたこの量は、神経組織に対する傷害が予測される時に神経細胞の佳作性を 増強し、そして／またニューロンと神経経路を保護することができる量である。 当業者には理解できるように、治療用組成物中に説明した化合物の濃度は多くの 因子によって変動する。この因子は投与する薬剤の投与量、使用する化合物の化 学的特性（疎水性など）、投与経路などである。投与する薬剤の好ましい投与量 もまた、以下のような変動因子に依存している。これらの変動因子としては神経 学的な疾患のタイプとその進行の程度、個々の患者の全体的な健康状態、選定し た化合物の相対的な生物学的な有効性、化合物賦型剤の配合そしてその投与経路 などである。一般的に言えば、本発明の化合物は、非経口的投与のためには、約 ０．１−１０χ−／Ｖの化合物を含有する水溶性の生理学的緩衝液として製造さ れる６代表的な投与範囲は一日体重１ｋｇ当たり１０１ｇから１ｇである。好ま しい投与範囲は一日体重１ｋｇ当たり０．１　μから１００＋ａｇである。最適 には、全ての場合において投与されるモルフォゲンの量は、−日患者の体重１ｇ 当たり２−２０μの間である。 ２１日間連続して正常な成長期のラットに毎日成熟型モルフォゲン（ＯＰ−１， ２０１Ｉｇ）を投与した時、ＯＰ−１による生理学的問題はなにも認められない 、さらに、正常な新生マウスに１０日間毎日モルフォゲン（ＯＦ−１）を１０μ ｇ全身的に注射したところ、どのような異常も発生しなかった。 脳血液関門を通過するための蛋白質および蛋白質フラグメントが脳−血液バリア を通過する能力は、そのサイズ、親油性またはその実際のイオンチャージに関係 しているため、標準的な公知の方法を用いて、バリアを通過する機能を増強させ るためにモルフォゲンの適切な変換をすることができる（フェニルアラニンをペ ンタフロロフェニルアラニンに置換するかまたはアルブミンのような陽イオン化 された蛋白質と共役結合させる）。 例えば以下のものを参照のこと、Ｋａｓｔｉｎ　ｅｔ　ａｌ、＋Ｐｈａｒｍａｃ 、　Ｂｉ。 ｃｈｅｍ、Ｂｅｈａｖ、、１９７９，１１ニア１３−７１６；　Ｒａｐｏｐｏｒ ｔ　ｅｔ　ａｌ、、５ｃｉｅｎｃｅ＋１９８０゜２０７：８４−８６；Ｐａｒｄ ｒｉｇｅ　ｅｔ　ａｌ、＋１９８７＋Ｂｉｏｃｈｅｗ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ 、Ｃｏａｎｕｎ、。 １４６：３０７−３１３；　Ｒｉｅｋｋｉｎｅ　ｅｔ　ａｌ、、１９８７．Ｉ” ｅｐｔｉｄｅｓ、８，２６１−２６５．これらの機能的アナログの有効性は、た とえばこれらの化合物が、ここに示した実施例に記述されているように、形質転 換細胞の再分化を誘導したり、４死のニューロンの生存性を増強したりする能力 を測定することによって評価できる。 本発明の方法において全身的にモルフォゲンを投与する場合に、好ましくは大容 量の負荷投与量が治療の初めに採用される。 次いで治療は維持量で持続される。それに続く投与は血液中のモルフォゲンレベ ルを一定間隔でモニターして決定することができる。 神経経路のニューロンに対する傷害が、例えば外科的な方法の一部として慎重に 引き起こされる場合、好ましくはモルフォゲンは傷害の誘発のほんの少し前に投 与しておくか、傷害の誘発と同時に投与される。好ましくは、モルフォゲンは手 術の準備中に予防的に投与しておく。最適な条件では、全ての場合に投与される モルフォゲンの量は愚者の体重キログラム当たり２−２０μｇである。 さらにまた、内因性モルフォゲンレヘルを促進できる物質のを動量は上記に説明 したどの様な投与経路であっても投与可能である０例えば、神経Ｍｉ繊細胞から のモルフォゲンの生産及び／または分泌を促進する物質を、哺乳動物に対して与 えることができるが、これは治療されるべき神経組織に結合しているダリア細胞 に対してモルフォゲンを直接投与して行なう、一定の組織中の内因性モルフォゲ ンのレベルを変更させることのできる物質の特定と試験を行うための方法は、こ こでは実施例１３に一般的に説明しであるが、国際出＠［５９２１０７３５９（ Ｗ０９３１０１５１７２）に詳細に説明してあり、引用によってここに一体化し て開示される。要約すれば、候補化合物は、試験組織の細胞によって生産される モルフォゲンの生産、即ち発現及び／または分泌にその化合物が影響を与えるの に十分な時間、試験組織またはその細胞と共にインビトロで試験化合物をインキ ュベートすることによって、同定し試験することができる。ここで適切な組織ま たは培養された組繊細胞は、このましくはニューロン及び／またはダリア細胞か らなっている０例えば、試験のための適切な＆［］織は異質、下垂体ダリア細胞 および類似組織から単離された培養細胞を含んでいる。 候補化合物に対してさらされたとき、生成するモルフォゲンのレベルを測定する ための特に好ましい検出方法としては、モルフォゲンに対して特異的に反応し、 さらにモルフォゲンとのコンブレンクスの一部として検出される抗体あるいは結 合性蛋白質を用いたイムノアッセイがあげられる。イムノアッセイは、公知の一 般的な技術とモルフォゲンに対して培養され、そのモルフォゲンに特異的である 抗体を使用して行われる。ここに述べたように、モルフォゲンは天然の原料物質 から単離するか、遺伝子操作によって調製できる。内因性モルフォゲンを促進で きる物質はここで説明するように製剤学的な方法によって製剤化され、投与され る。 モルフォゲンを軸索の再生を促進するためにある部位に投与する場合には、好ま しくはモルフォゲンは、インビボでその部位に蛋白質を保持できる適切な生体内 適合性で好ましくは生体吸収性のある、それを通して神経突起が再生するところ のキャリアーと共に投与する。現在、好ましいキャリアーは、軸索の成長を方向 づけるのを助けるのに十分な構造をもったものからなっている。現在好ましいキ ャリアーとしては、コラーゲン、ヒアルロン酸、ラミニン及び／またはポリ乳酸 、ポリグリコール酸、ポリ酪酸のような合成ポリマーまたは合成共重合体のよう な構造性分子である。現在もっとも好ましいキャリアーは、組繊細胞外マトリッ クスからなるものである。これらは、市販されている。さらにまた、脳組織由来 細胞外マトリックスは、引用によって本発明と一体化している国際出願ｔｌｓ９ ２１０１９６８　（ＷＯ９２／１５３２３）に記載の手段、及び／またはその他 の公知手段によって調製できる。 神経経路特に末梢神経系の経路の切断を修復するための現在の好ましい手段とし ては、切断を覆うために十分な大きさを持ち、切断神経末端を受け入れることが できる開口部を有する生体内適合性の隔膜またはケーシングを含む器具の一部分 としてその部位にモルフォゲンを供給することを含んでいる。モルフォゲンはケ ーシングに配置され、好ましくは適切なキャリアー全体に分散され、そして切断 された神経の末端に接触可能である。さらにまた、モルフォゲンはケーシングの 内部表面に吸着されるか、そこに結合する。さらに現在の好ましいケーシングは 不透過性の外表面を有している。ケーシングは神経の案内回路として作用し、さ らに軸索成長の方向付けを補助する。さらにまた、ケーシングは傷痕ＩＪｌ織の 形成を助ける免疫関連物質から）員傷をうけた神経を保護する。適切な回路とケ ーシングの素材は、シリコンあるいはコラーゲン、ヒアルロン酸、ラミニン、ポ リ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ酪酸および類似物質等の生体吸収性物質を含む 、さらに、ここに一般的に説明した神経案内回路は、形状がチューブ状であるが 、種々のその他の形状が使用され得ることが当業者には明らかである。案内回路 の内腔は、例えば横断面が長円または方形であっても良い、さらにまた案内回路 は、神経の切断端を守るようにしっかりと結びつけられた２またはそれ以上のパ ーツで構築しても良い、神経末端はフィブリングルーのような生体内適合性の接 着物質で縫合するかあるいはその他公知の医学的手段で神経案内回路に結び付け られる。 ＋＋、１　可溶性モルフォゲンコンブレノクス水溶液の溶解性が改善され、本質 的にアミノ酸で構成されている、治療用の製剤として有用なモルフオゲンの好ま しい形態は、少なくとも１００のアミノ酸ペプチド配列からなる二量体モルフォ ゲン蛋白質又はその対立形質体、種変異体又は他の配列変異体である。このアミ ノ酸ペプチド配列は、モルフォゲンファミリーのメンバーのプロ領域の一部又は 全部からなるペプチドと複合したモルフォゲンファミリーに特徴的な、７又はそ れ以上のシスティン残基のパターンを持つ、また対立形質、種特異的あるいはそ れらの変異体からなるものである。好ましくは、二量体モルフォゲン蛋白質は２ つのペプチドと複合している。 さらにまた、二量体モルフオゲン蛋白質は、好ましくは非共有的にプロ領域ペプ チドまたはペプチドと複合している。また、プロ領域ペプチドは、好ましくはも とのモルフオゲンプロ領域を特定するＮ末端側１Ｂアミノ酸を少くとも持ってい る。もつとも好ましい実施態様では、実質的にプロ領域の全長を特定するペプチ ドが使用される。 その他のモルフォゲンの溶解型は、これらの蛋白質の切断されていないプロ型の 二量体、二量体の一つのサブユニットは蛍白質の切断されないプロ型であり、そ してもう一方のサブユニットは蛍白質の成熟型である「半二量体」、さらにそれ らの切断型を含んでおり、好ましくは切断されたプロドメインペプチドに非共有 的に結合している。 上記に示したように、有用なプロドメインは、プロ領域の全長または種々のこれ らの切断型を含んでいる。特にこの切断型はＡｒｇ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇの プロテアーゼ開裂部位で切断されるようになっている０例えば、０Ｐ−１におい ては可能性のあるプロ配列は残基３Ｏ−２９２（全長型）、４８−２９２および １５８−２９２によって特定される配列を含む、溶解性ｏｐ−ｉコンプレックス の安定性は、プロ領域が４８−２９２切断型のような切断型であるよりも、むし ろ全長型である時に増強される。なぜなら残基３０−４７は他のモルフォゲンの Ｎ末端部分と配列のホモロジーを示していて、全てのモルフォゲン対してコンプ レックスの安定性を増強するので有用性が高いと考えられている。したがって、 一般的に好ましいプロ配列は、与えられたモルフォゲンのプロ領域の全長をコー ドしたものである。有用性のあることが期待されているその他のプロ配列は生物 合成プロ配列であって、特に１またはそれ以上のモルフォゲンブロ配列のＮ末端 部に由来した配列を組み込んだものである。 当業者には容易に理解されるように、プロ領域をコードする有用な配列は、公知 のモルフォゲンをコードする遺伝子配列から得ることができる。さらにまた、キ メラのプロ領域は１またはそれ以上の公知のモルフォゲンの配列から構築するこ とができる。更にまた、別の可能性としては、１またはそれ以上の公知のプロ領 域の合成配列の変異体をつくり出すことである。 別の好ましい実施８ｉ様においては、有用なプロ領域ペプチドは核酸配列によっ てコードされるアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖をふくんでいる。この核酸 は、配列表配列番号１６および２０ノヌクレ−ｔナト１３６−１９２と１５２− ２１１　ニ夫々対応するＯＰＩまたはＯＦ２のプロ領域配列の少なくともＮ末端 の１８アミノ酸をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列と厳密な限定条件下でハイ ブリダイズするものである。 Ａ、立゛　たは　Ａ゛の口ｒ　モルフォ　゛ンコンプレ・クス生至離− モルフォゲンは可溶性コンプレックスとして哺乳動物細胞に発現される。しかし 、通常コンプレックスは、精製溶液中にしばしば添加される界面活性剤、アルコ ール、有機溶媒、カオトロピック剤及び溶液のｐＨ低下のために添加される化合 物等の変質剤にさらされることによって、精製中に触離する。以下に示すものは 、非変質条件下で調製された培地（または場合により、血清、脳を髄液あるいは 腹膜液のような体液）から可溶性蛋白質を精製するための一般的に好ましいプロ トコールである０本方法は、素早く、再現可能であり、そして実質的に純粋な状 態で単離された可溶性モルフォゲンコンプレックスを産出する。 可溶性モルフォゲンコンプレックスは、変性剤の存在下で行なわれる簡単な３ス テツプのクロマトグラフィプロトコールを使用して調製培地から単離することが できる。プロトコールには培地（あるいは体液）をアフィニティーカラムに流し 、続いてイオン交換とゲル濾過クロマトグラフィーを通過させることからなって いる。ここに述べたアフィニティーカラムはＺｎ−ＩＭＡＣカラムである０本プ ロトコールはモルフォゲンの変異体の精製にも一般的には適用可能である。なお 、変異体全てが以下に説明するプロトコールのマイナーな変更を行うだけで単離 できると予想される。さらにまた他のプロトコールは与えられたモルフォゲンの プロドメイン（例えばプロティンＡ結合セファロースカラムに対して結合した） に対して特異的に結合する抗体を用いるなどの標準的な手法で作られたイムノア フィニティ力ラムにおいて有用性を持つことが想定している。イムノアフィニテ ィ力ラムを調製するためのプロトコールは先行技術に開示されている（例えばＧ ｉｅｄｅ　ｔｏ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、　Ｍ、Ｄｅｕｔ ｓｃｈｅｒ、ｅｄ、、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、１ ９９０．のセフシランＶｌｌ　とＸＩを特に参照のこと）。 本実験において、０Ｐ−１は先行技術（例えば国際用１１ｉＵｓ９０１０５９０ ３（ＷＯ９１１５８０２））に開示されたように哺乳動物細胞であるＣＨＯ（ｃ ｈｉｎｅｓｅ　ｈａｍｓｔｅｒ　ｏｖａｒｙ）細胞で発現させた。　０．５ＸＦ ＢＳを含むＣＩＯ細胞調整培地は最初にＩａｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　Ｍｅｔａｌ− Ｉｏｎ　Ａｆｆｊｎｉｔｙ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｆｙ（ＩＭＡＣ）を使用し て精製した。調製培地からの可溶性ｏｐ、１は非常に選択的にＺｎ−ＩＭＡＣ樹 脂に結合し、高濃度のイミダゾール（５ｈ門・イミダゾールｐ）１８．０）で結 合したコンプレックスを効率的に）客用した。　Ｚｎ−ＩＭＡｃのステップでは 、フロースルーと３５＋ａＭイミダゾールで洗浄したフラクションに溶は出す汚 染性の血清蛋白質のブルクと可溶性０Ｐ−１とを分離する。 Ｚｎ−ＩＭＡｃで精製した可溶性０Ｐ−１は、次いで５０ｍＭＮａＣ１を含む２ ０ｍＭＮａＰＯａ（ｐＨ７，０）で平衡化したＳ−セファロース　陽イオン交換 樹脂カラムにかける。このＳ−セファロ−スステップはさらに精製を行い、そし て次のゲル濾過ステップのための前処理として可溶性ＯＰ−１コンプレツクスを 濃縮する。蛋白質はＴＢＳで平衝化したセファクリルＳ−２００１（Ｒカラムに かける。基本的には同一のプロトコールを用いて、可溶性のモルフオゲンを血清 、脳を髄液、腹腔内液などの工またはそれ以上の体液から単離することができる 。 ＩＭＡＣは、カラムの３倍容量の０．２Ｍ　Ｚｎ５（）、でチャージしたキレー ト化セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を使用して行う、調製培地はｐＨ７ ，０に調整し、５００ｍＭ　ＮａＣ１含有２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７，０） で平衡化したＺｎ−ＩＭＡＣ樹脂に直接負荷した。　Ｚｎ−ＴＭＡＣｌ！＋脂は 、樹脂１ａ１あたり調製培地８０ｍ　ｌを負荷させる。負荷後カラムを平衡化緩 衝液で洗浄し、混入している他の蛍白質の大部分を３５ｍＭイミダゾールを含む 平衡化緩衝液（ｐｆ１７．ｏ）で溶出した０次いで可溶性０Ｐ−１コンフ゛レン クスを５０ｍＭイミダイミダゾ−ル８．０）を含む２０ａ＋ＭＨＥＰＥＳ−５０ ０１Ｍ食塩溶液で溶出した。 可溶性ｏｐ−ｉコンプレックスを含む５０ｍＭイミダゾール溶出液は２０ｍＭＮ ａＰＯ，（ｐＨ７，０）　９倍容量で希釈し、５０ｍＭ　ＮａＣ１を含む２０＋ ｓＭ　ＮａＰＯ，（、）Ｈ７，Ｏ）で平衡化したＳ−セファロース（Ｐｈａｒｍ ａｃｉａ製）カラムにかけた。Ｓ−セファロース樹脂は、樹脂１ｍｌあたり調製 培地８００１を負荷した。負荷後、Ｓ−セファロースカラムを平衡化緩衝液で洗 浄し、１００ｍＭ　ＮａＣ１で溶出し、続いて３００１１Ｍ、および５００ＩＩ Ｍ　ＮａＣ１を含む２０＋ｗＭ　ＮａＰＯ，（１）Ｈ７，０）で溶出した。　３ ００ｍＭ　ＮａＣ１のプールはさらにゲル濾過クロマトグラフィーで精製した。 　３００＋＊ＭＮａＣ１溶出液５０ｍ１を、トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）　・５ ０ａ＋Ｍ　Ｔｒｉｓ　・１５ｈＭ　ＮａＣ１（ｐｉ４７．４）で平衡化した５、 ０　Ｘ　９０ｃｍ　セファクリルＳ−２００ＨＲ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）に通 用した。カラムは５ｓ１７分の流下速度で溶出し、１０慣１ずつ分画した。見た ところでは溶性０Ｐ−１の分子は蛋白質分子量標準と比較して決定した０分子量 標準はアルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１５０ｋＤａ）、ウシ血清アルブミ ン（ＢＳＡ　６８ｋＤａ＞　、カルボニックアンヒドラーゼ（ＣＡ　３０ｋＤａ ）およびチトクロームＣ（ｃｙｔ　Ｃ１２，５ｋＤａ）である、　Ｓ−２００カ ラムのフラクションの精製度は標準的な１５％ＳＯＳポリアクリルアミドゲルの クーマシーブルー染色による分離によって決定した。成熟０Ｐ−１とブロドメイ ンの特定は、標準的な逆相Ｃｌ８ＨＰＬＣを用いてプロドメインから成熟ｏｐ− ｘを分離してＮ末端アミノ酸配列を分析して決定した。 可溶性ｏｐ−ｔコンプレックスはおよそ１１０ｋＤａの分子量で溶出される。こ れは、２つのプロドメイン（各３９ｋＤａ）に１つの成熟０Ｐ−１二量体（３５ −３６ｋＤａ）が結合したという可溶性ｏｐ−１コンプレックスの組成の予想値 に一致した。最終的なコンプレックスの純度は還元型１５χポリアクリルアミド ゲルに適切なフラクシジンを流下させて証明することができる。 コンプレックスのコンポーネントは、Ｓ−２００またはＳ−２００）ＩＲカラム からのコンプレックスを含むフラクシッンを、標準的な手法によるアセトニトリ ルのグラジェント（０，１ｘＴＦＡ中）で逆相Ｃｌ８ＨＰＬＣかラムにかけ、溶 出して決定できる。コンプレックスはこのステップで解離し、プロドメインと成 熟種は分離した種として溶出する。ついでこれらの分離した種は標準的な手法（ 例えばＧｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｍ、　 Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ＋ｅｄ、。 Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、１９９０．特に６０２− ６１３ページを参照）を用いてＮ末端配列を決定する。そして分離した３６ｋＤ ａと３９ｋＤａの蛋白質は夫々成熟モルフォゲンおよび単離され、切断されたプ ロドメインであることが確認された。哺乳動物細胞の生産した０Ｐ−１からの単 離したプロドメインのＮ末端配列は、プロ領域の２つの型を示していた。これは 完全型（配列表配列番号１６の残基３０からはしまる）と切断型（配列表配列番 号１６の残基４８からはじまる）である。単離した成熟種のポリペプチドサブユ ニットのＮ末端配列は成熟配列のＮ末端が配列表配列番号１６の残基２９３．３ ００．３１３．３１５．３１６および３１８からはじまっていることを明らかに した。さらにこれらのすべてが標準的な骨誘導分析法で活性を示していた。 Ｂ、インビトロの可ｒ　モルフォゲンコンプレックスＭ培養培地または体液から 可溶性コンプレックスを精製するがわりに、可溶性コンプレックスを精製したプ ロドメインと成熟型二量体種から構築することもできる。明らかに、上手なコン プレックス形成は、ＳＳ結合に影響しないように、これらの分子の折り畳み構造 を緩めるのに十分な変性条件の下で成分を結合させることが必要となる。好まし くは、変性条件は、切断されたプロドメインが、緩められた折り畳み条件下で成 熟型二量体種と結合する機会を持つように細胞内小嚢の条件に十分に似せておく 、そのときの溶液中の変質剤の濃度は、二量体とプロドメインの結合を維持する 一方で、二量体とプロ領域とが適切なりフォールディングを行えるように、好ま しくは段階的にコントロールして減らしていく、有用な変質剤は、ｐＨ４−１０ ，好ましくはｐＨ６−８の緩衝溶液中に４−６ＦＩ尿素またはグアニジン塩酸塩 （ＧｕＨＣｌ）を含むものである。そのとき可溶性コンプレックスは、透析で制 御するか、または尿素あるいはＧｕＨＣＩの０．１−２？Ｉ以下、好ましくは１ 〜針以下の最終変質剤濃度に溶液を希釈することで形成される。尿素あるいはＧ ｕＨＣＩ濃度は、好ましくは生理的な緩衝液で希釈する。蛋白質の精製／再生手 段と要件は先行技術に開示されており、適切な再生プロトコールを開発するため の詳細は、当業者によって容易に決定することができる。この問題に対する一つ の有用なテキストは、Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｐｕｒｉ工１９且１ １旦ｎ、Ｍ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ＋ｅｄ、、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｓ ａｎ　Ｄｉｅｇｏ、１９９０゜とくにセクションＶをあげることができる。コン プレックス形成はまた、１またはそれ以上のシャペロン蛋白質を加えることで補 助される。 Ｃ６可？″−モルフォゲンコンブレソクスの一生理学的緩衝液、例えばトリス緩 衝食塩水（ＴＢＳ）及びリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の高純度可溶性モルフォ ゲンコンブレンクスの安定性は、多くの手段のうちどれでもで増強できる。一般 的に好ましい方法は、少なくともプロ配列の最初の１８アミノ酸配列表配列番号 １６の叶−１の残基３Ｏ−４７）からなるプロ領域を使用することであり、プロ 領域の全長を使うことは特に好ましい。 残５３０−４７はその他のモルフォゲンのＮ末端部分と配列にホモロジーがあり 、そして全てのモルフォゲンにとってコンフ゛レンクス安定性を増強するために 詩に有用であると考えられている。 可溶性モルフォゲンコンブレノクスの安定性を増強するためのその他の有用な手 段は、３種類の添加物を含む、これらの添加物は塩基性アミノ酸（Ｌ−アルギニ ン、リジンおよびベクィン等）、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ−８０また はＮｏｎ１ｄｅｔ　ｐ−１２０）およびキャリアー盃白質（血清アルブミンおよ びカゼイン等）を含む。 これらの添加物の存効濃度は塩基性アミノ酸の場合１−１００ｍＭ、好ましくは ５０ｍＭを含む１０−７０ｍＭであり、非イオン性界面活性剤の場合０．０１− １．０！　、好マＬ　＜　ハ０．ＩＸ（ｖ／ｖ）を含む０．０５−０．２χ、キ ャリアー蛋白質の場合０．０１−１．０χ、好ましくは０．１！（賀／Ｖ）を含 む０．０５−０．２χである。 このアミノ酸ペプチド配列は、モルフォゲンファミリーのメンバーのプロ領域の 一部又は全部からなるペプチドと複合したモルフォゲンファミリーに特徴的な、 ７又はそれ以上のシスティン残基のパターンを持つ。 旦旦実茄朋 実施例１１モルフォゲン発現組織の同定モルフォゲンの組織分布を測定すること は、得られた組織で発現した異なるモルフォゲンを、関連するモルフォゲンと同 様に、同定するために使用される。組織分布は、候補モルフォゲン誘導物質のス クリーニングと同定の為に有用なモルフォゲン生産組織を同定するのに使用され る。＆［Ｉ織分布はさらに候補モルフォゲン誘導物質をスクリーニングし同定す る為に有用なモルフォゲン産生＆［ｌ織を同定するのに使用されるモルフォゲン （あるいはｍＲＮＡの転写）は、発現が低い組織でも、標準的な手法と一部変法 を用いて異なった組織で容易に同定される０例えば、蛋白質の分布は標準的なウ ェスタンプロットや免疫蛍光操作とモルフォゲンあるいは目的のモルフォゲン群 に特異的な抗体で同定できる。同様にモルフォゲンｍＲＮＡの分布は、標準的な ノーザンハイプリダイセーション法とｍＲＮＡ特異的プローブを用いて特定され る。 ＪＮＡに特異的にハイブリダイズし、ｍＲＮＡに関連したその他の者から目的の ｍＲＮＡを区別するプローブを使用できる。なぜならば、ここでいうモルフォゲ ンはその活性Ｃ末端ドメインと高いホモロジーを以ているため、特異的なモルフ ォルゲンーＲＮＡの組織識別が未成熟蛋白質のプロドメイン、および／または成 熟蛋白質のＮ末端領域をプローブを用いて識別できる。その他の有用な初刊は３ ゛非コード領域のフランキングとそれに続く明らかなストップコドンである。配 列のこの部分は、本発明のモルフォゲンの間でも、実質的に異なっている。そし てそれゆえに蛋白質特異的である０例えば特に有用なＶｇｒ−１特異的プロ一ブ 配列は、Ｐｖｕｌｌ−５ａｃｌ断片であり、非翻訳プロドメインと成熟Ｎ末端領 域の両方をコードする２６５ｂｐのフラグメントからなる（Ｌｙ。 ｎｓ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）ＰＮＡＳ　８６：４５５４−４５５８にｃＤＮ Ａ配列が記載されている。同様に、特にを用なａ＋０Ｐ−１特異的プロ一ブ配列 がＢｓｔＸＩ−ＢｇＩ＋断片であり、Ｎ０Ｐ−１のプロ領域の殆ど２−３番目を カバーしている０、６８ｋｂの配列である。５ｔｕｌ−５ｔｕｌ断片、７システ インドメインの直前の上流配列０．２ｋｂ　、　Ｅａｒｌ−ＰｓＬＩ　フラグメ ント、３゛非翻訳配列の部分を含む０．３ｋｂフラグメント（配列表配列番号１ ８、プロ領域は残基３０〜２９１で必須として特定されている）、同様のアプロ ーチが使用され、例えばｈＯＰ−１（配列表配列番号１６）、ヒトまたはマウス ０Ｐ−２（配列表配列番号２０及び２２）に使用。 合成操作あるいはクローン化した配列から得たこのモルフォゲン特異的プローブ を使い、従来技術として良く知られている手法により、モルフォゲン転写を哺乳 動物組織から同定した。 要約すると、全ＲＮＡは種々の成熟マウス組織（肝臓、腎臓、翠丸、心臓、脳、 胸腺、胃）から、Ｃｈｏｍｅｚｙａｓｋ　ｉ　らの方法（１９８７、Ａｎａｌ、 　Ｂｉｏｃｈｅｍ　１６２：１５６−１５９）及び以下に示した方法のような標 準的な方法で調製した。ポリ（Ａ）＋ＲＮＡはオリゴ（ｄｔ）−セルロースクロ マトグラフィー（ファルマシアＩＪＢバイオテクノロジーＩｎｃ、）を用いて！ Ｐｌ製した。各組織からのポリ（Ａ）＋ＲＮＡ（通常１５μｇ）を１χアガロー ス／ホルムアルデヒドゲルで分離し、Ｎｙｔｒａｎ膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　 ＆　５ｃｈｕｅｌｌ）に移した。転移に続いて、メンプランは８０°Ｃに加温し 、ＲＮＡはＵＶ光で架橋させた（通常１ａｗ／ａ！で３０秒間）、ハイブリダイ ゼーションに先立ち、加熱により適当なプローブを変性させた。 ハイブリダイゼーションはローラーボトル中で回転しているルーサイト製シリン ダー中で行った。　１ｒｅｖ／分、３７°Ｃ１５時間、４０χフオルムアミド、 ５　ＸＤｅｎｈａｒｄｔｓ　、　５　Ｘ５ＳＰＥ、　Ｏ１１χＳＤＳの条件とし た。ハイブリダイゼーションに引き続いて、５０°Ｃで０．１χＳＯＳ　、０． ｌＸ５ＳＰＥでフィルターの非特異的カウントを洗浄した。 種々のモルフォゲンの組織分布を実施例に示している。　Ｖｇｒ−１，０Ｐ−１ ，８門Ｐ２．ＢＭＰ３．Ｂ門Ｐ４．Ｂ門Ｐ５．ＧＤＦ−１，０Ｐ−２について行 い、成人Ｍｉ織について米国出１ｉ１１１１ＳＳＮ　７５２．７２６４に開示し 、また０ｚｋａｙｎａｋｅｔ　ａｌ、　１９９１．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏ ｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｎ、　１７９：１１６−１２３＋および０ｚｋ ａｙｎａｋ　ｅｔ　ａｌ、　１９９２．ＪＢＣ（印刷中）に開示しており、引用 により本発明と一体化する。ここに記載した通常のプローブ技術を用いて、脳、 肺臓、肺、心臓、肝臓及び腎臓組織に対するこれらのモルフォゲンに特異的なプ ローブを使ったノーザンブロノトハイブリダイゼーションは、腎臓関連組織が０ Ｐ−１の最大の発現ソースであることを示しており、脳、心臓、肺組織が第二の ソースであることを示している。　０Ｐ−１ｍＲＮＡもまた、このプローブ法に よって唾液腺、特にラット耳下腺中に特定されている。肺Ｕ織は、シｇｒ−１． ＢＭＰ５．ＢＭＰ４およびＢＭＰ３の最大の組織発現ソースであるとおもわれる 。　Ｖｇｒ−１の低レベルは腎臓と心臓＆ｌＩｗ７＜に認められ、一方、肝臓は ＢＭＰ５の第二の発現ソースであり、肺臓はＢＭＰ４の第二の発現ソースである ことが示された。 ＧＤＦ−１は脳中で一番多（発現されている。今日ではＯＦ２は、初期の栓塞＆ ［ｌ織において一番多く発現していることが確認されている。特異的にマウス胚 と出生後６日めの動物のノーザンブロノトでは、８日めの胚にＯＦ２の発現が認 められた０発現は１７日口の胚で顕著に減少し、出生後の動物では検出されなか った。 実施例２．７、のモルフォゲンの モルフォゲンは成長中および成熟ラットの脳およびを髄組織に特定されており、 成長期および成熟ラットの神経組織（上記実施例１）から抽出したｍＲＮＡにた いしてモルフオゲン特異的プローブのノーチンプロット法と免疫組織学的研究法 によって特定されている０例えば、成長期ラット組織のノーザンプロット分析で はＣＮＳ中で明らかに０Ｐ−１ｍＲＮＡの転写発現が確認されている（国際出願 ＵＳ９２１０１９６８（Ｗ０９２／１５３２３）、０ｚｋａｙｎａｋ　ｅｔ　ａ ｌ、＋１９９１、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏ＋ｗａ＋ 、、１７９：１１６２３．０ｚｋａｙｎａｋ、ｅｔ　ａｌ、。 １９９２、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２６７：２５２２０−２５２２７　）　 、　ＧＤＦ−１ｍＲＮＡは成長期および成熱ラットの神経＆［ｌ織で最も多く発 現することが確認されている。特に小脳および脳幹を含む脳、を髄および末梢神 経でｋｉｉＵされている（Ｌｅｅ、Ｓ、、１９９１．ＰＮＡＳ　８８：４２５０ −４２５４）　、　ＢＭＰ２Ｂ（ＢＭＰ４として先行技術を参照）およびＶｇｒ −１の転写は神経組織で発現することが報告されている（Ｊｏｎｅｓ　ｅｔ　ａ ｌ、＋１９９１＋Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１１１：５３１−５４２）　、　シ かし神経組織ではこれらの遺伝子の初期発現組織は知られていない（０ｚｋａｙ ｎａｋ、ｅｔ　ａｌ、＋１９９２＋Ｊ、Ｂｉｏｌ。 Ｃｈｅｉ、、２６７：２５２２０−２５２２７　）　、特にＣＢＭＰ２の転写は 、下垂体の発達に伴って間脳の領域で発現することが知られており、Ｖｇｒ−１ のｍＲＮＡは、発達中の神経管の底板にきわめて隣接した細胞中と同様に、発達 中の神経管の上衣板を含む、ＣＮＳの腹背軸で報告されている。老齢ラットでは 、Ｖｇｒ−１のｍＲＮＡが、発達した海馬Ｍｉ織で報告されている。さらに０Ｐ −１とＢＭＰ−２を本来的にコードする遺伝子は、ヒト海馬ｃＤＮＡライブラリ ーをプローブして特定された。 公知技術の一般的な方法とここに一体化されている国際出願ＵＳ９２１０１９６ Ｂ（讐０９２／　１５３２３）の開示内容を用いて免疫ｍ識学的研究は、成長期 と成熟ラットの脳およびをｕＭｉ織の特定の領域に０Ｐ−ＩＮＯ発現が極在化し ていることを確認した。公知の先行技術による標準的な抗体のプロトコールを用 いて作成し、好ましくＧよ０Ｐ−１アフイニテイーカラムで精製した標準的なモ ルフオゲン特異的抗血清を用いて、特にウサギ抗−〇ＰＩ抗血清を用し）で、特 異的にｏｐ−ｉｉ白質の発現が、成Ｐ（２−３力月齢）マウスおよび５−６日齢 胎児性神経＆ｌｌ織で評価されている。抗体それ自身番ま標準的な蛍光ラベル化 技術を用いてラベルし、ある（１番よラベルイヒ抗つサギＩｇＧ分子が結合０Ｐ −１抗体を視覚化するために用（為られてし）る。 図ＩＡと図ＩＢに示すように、免疫蛍光染色によって成塾うット中拒神経系（Ｃ ＮＳ）に０Ｐ−１の存在を示すことができる。同一のそして広い範囲に染色が、 脳（ＩＡ）とをｕ（ＩＢ）に認められた。　０Ｐ−１は、灰白質（神経細胞体） の細胞外マトリックスに一番多く分布していることが確認されており、細胞体そ れ自身を除いて全体に明らかに存在している。ミニリン鞘化した神経繊維で主に 形成された白質には、染色は神経膠星状細胞（ダリア細胞）限定されていること が確認された。さらにまた同様の染色パターンが新生う７）（１０日齢）の脳部 分に観察された。 さらにまた、０Ｐ−１は特異的に！４質に分布しており、晶質は線条体基底節、 大脳皮質に結合している副運動ニューロン系および皮質を髄を構成している。こ れらのサブボピュレーシツンあるいはニニーロンの系の機能不全はハンチントン ｎ′ｔ＠病とパーキンソン病を含む多くのニューロパシーと関係している。 ０Ｐ−１はまたアデンデマグリア細胞に分布している。これは脳を髄液中に各種 の因子を分泌することが知られており、成長期および成熟ラフトの心室弁、コロ イド溝、脳の中心溝の周辺でみられる。 最終的に、成長期の胚のモルフオゲンの抑制が神経組織の発達を抑制している。 特に、標準的な条件でインビトロで培養している９−８目のマウス胚細胞を、遺 伝子操作で調製し、精製し、免疫源として用いて調製した０Ｐ−１特異的モノク ローナル抗体の存在下および非存在下でインキユベートを行った。抗体は先行技 術と実施例１３に一般的に開示した標準的な抗体生産手段で生産した。２日後に 成長期の胚への抗体の作用を組織学的に観察して評価した。組織学的試験によっ て測定したところ、０Ｐ−１特異的抗体は、特異的に、成長期の胚において眼薬 の形成を阻害した。特に間脳の外成長が発達しなかった。さらに心臓は奇形化し 、肥大化した。さらにまた、ラベル化した０Ｐ−１特異的抗体を用いて胚の断面 の免疫組織学的研究方法で分離したところ、０Ｐ−１特異的抗体は神経上皮に分 布した。 神経細胞に作用する内因性モルフォゲンは、神経組繊細胞例えばニューロン及び ／またはニューロンに結合するダリア細、胞によって発現し分泌され、脳を髄液 および／または血流によってニューロンへ移送される。最近、０Ｐ−１はヒト血 液中に確認された（下記実施例９）、さらに、最近になって移送されたシュワン 細胞が、少なくとも、いくつかの新しい神経突起の周辺に管腔形成とミニリン鞘 形成誘導することを含む、ラットを髄の神経繊維形成を促進することが発見され た（Ｒｕｎｇ、　１９９１．　Ｅｘｐ、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、１１４：２５４− ２５７）　、　、：れらの細胞の再生能力は’、ｔｓｒ）ン細胞によるモルフォ ゲンの分泌によって媒介させることができる。 実施例３０モルフォゲンによる　−性１８１彊ここに述べたモルフォゲンは細胞 の生存性を増強するが、特に瀕死の神経細胞の生存性を増強する０例えば、十分 に分化したニューロンは非***性であり、公知の合成培地あるいは低血清培地を 用いて、標準的な哺乳動物細胞培養条件下で培養した時、インビトロでは死滅す る（Ｃｈａｒｎｅｓｓ、１９８６．Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２６：３１６４ −３１６９　、Ｆｒｅｅｓｅ　ｅｔ　ａｌ、、１９９０．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、 、５２１：２５４−２６４を参照のこと）、シかし、もし非***性神経細胞の初 代培養がモルフォゲンで処理されたばあい、これらの細胞の生存性は大幅に増強 される０例えば、成熟ラット脳の黒質から単離された線条体基底節の初代培養は 、標準的な方法を使用して行われた。 即ち晶質組織をパスツールピペットを使って均質化して分離し、標準的なＭｉ織 培養プロトコールをを使用し、低血清培地、例えば５０％　Ｄ？ＩＥＭ（Ｄｕｌ ｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　ｍｅｄｉｕｍ）、　５０ χＦ−１２培地、ペニシリン／ストレプトマイシン添ｔＪｕ不動化馬血清、４ｇ ／ｌのグルコース　を用いて増殖させた。標準的な培養条件の下では、これらの 細胞は無血清培地で培養した時３週間で明らかに死滅していった。細胞死は、細 胞接着性の不活性化とその超微細構造的な特徴の変化例えばクロマチン凝集とオ ルガネラ崩壊などにより、形態学的に明らかな事実であった。 この例においては、培養基底節は、０．１−１１００ｎ／＋＊ｌの０Ｐ−１を配 合した合成培地で処理した。新鮮なモルフオゲンー調製培地は、３−４日ごとに 細胞に供給した。細胞の生存性は明らかに増強され、添加した０Ｐ−１のレベル に依存していた。　０Ｐ−１の濃度が細胞培養中で増加したとき、明らかに細胞 死が減少した。特異的に、細胞は接着性を残し、生存分化二ニーロンの形態学的 特性の保持が持続した０モルフォゲン処理がない場合には、培養細胞の殆どが解 離し、細胞壊死をきたした。 晶質の基底節の機能不全は、インビボではハンチントン舞踏病とパーキンソン病 に関係している。ここで説明するニューロンの生存性を増強できるモルフォゲン の機能は、このモルフオゲンがニエーロバシまたは化学的、物理的傷害のため、 インビボで、瀕死の神経性細胞の生存性を増強する治療の一部分として有用であ ることを明示している。ｖＳ床応用のためには、モルフオゲンを投与するか、あ るいはまたモルフオゲン産生刺激剤を投与することができる。 Ｊｍ例４．　ノ　−　のモルフオ　゛ン′　１況止ここに述べたモルフオゲンは 形質転換細胞を、非形質転換細胞に特徴的な形態学的特性への再分化を誘導する 。特にモルフォゲンは神経由来の形質転換細胞を非形譬転換ニューロンの形態学 的特性への再分化を誘導することができる。神経由来の形質転換ヒトＮＧ１０５ −１５株の再分化を誘導したモルフオゲンについて、以下に示す実施例で詳細を 説明する。また形質転換細胞のモルフォゲン誘導再分化はマウス神経芽腫細胞（ ＮＩＥ−１１５）およびヒト胎児力ルンノーマ細胞についてである（国際出願ｕ ｓ９２１０１９６８（Ｗ０９２／１５３２３）を参照）。 ＮＧ１０８−１５は神経芽腫とグリオマー細胞を融合させて作製した形質転換融 合細胞株であり（Ａｍｅｒｉｃａ　Ｔｙｐｅ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ、 Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＯから人手）、形質転換胎児ニューロンの形態学的特徴 を有している。即ち繊維芽細胞の形態学性を有している。詩に細胞はポリゴナル な細胞体を有し、短い、スノぐイタ様の突起を有し、近接細胞にまれに接触する （図ＩＡ）。ＮＧ１０８−１５細胞を無血清の合成培地中で０．１から３００ｎ ｇ／ｍｌの０Ｐ−１をいれて４時間インキュベーションすると、確実に濃度依存 性の細胞形態学的変化が誘導される。 実験中ＮＧ１０８−１５細胞は、ポリし一リジンコートの６穴プレートで予備培 養した。各ウェルには２．５ｍｌの合成培地中に細胞を４０−５０．０００個を 含有させた。３日めに０．０２５χのトリフルオロ酢酸を含む６０χエタノール に０Ｐ−１２，５μｌを各ウェルに添加した。 ０Ｐ−１の濃度はＯｏ−３００ｎ／ｍｌで試験を行った０通常、培地は新しく１ ０Ｐ−１のアリコートで毎日交換し、さらにモルフオゲン番よ、０Ｐ−１での４ 時間のインキュベーションによって誘導できた。さらに０Ｐ−１の濃度を１０ｎ ｇ＃ｏｌ　にすることで再分化を十分誘導した。１日後に、ｈＯＰ−］処理細胞 は明らかにその細胞の超微細構造力く変化した。その変化は細胞体の周囲を含ん でおり、相の鮮や力１さが増加しそして短い神経突起が長くなった。２日後、０ Ｐ−１で処理した細胞は上皮性シートを形成し始めた。このコートよ処理後３日 日にはじまる多Ｎ凝集成長の基を供給して０る。４日日までに０Ｐ−１処理細胞 の殆どが密着した多層凝集状態に結合した（図ＩＢ）　、図２は、モルフオゲン 濃度の作用として、６つの独立した実験群からランダムに選択した２０の視野中 の多層凝集あるいは細胞凝集の平均数をプロットしたものである。４０ｎｇ／ｍ ｌの０Ｐ−１は細胞凝集の最大値の半分を誘導した。 モルフォゲン誘導の再分化が、ＤＮＡ合成、細胞***、または細胞の生存性など の、どのような変化ももたらさずに起こり、これは、形態学的変化が細胞の分化 あるいはｈＯＰ−１の毒性作用にとって２次的なものではないということを示し ている。さらにＯＰ　−Ｉ　Ｅａ　Ｅｌ性形態形成は、形ｉｋ：換細胞の分化を 増強することがわかっている酪酸塩、ＤＭＳＯ、レチノイン酸、フォルスコリン のようなその他の分子とは異なり、トリチウムチミジンの取り込みによって測定 したように、細胞***を阻害しなかった。データは、０Ｐ−１が細胞の安定性と 生存性を再分化誘導後も維持できることを示している。さらに効果はモルフォゲ ンに特異的であって、ＮＧ１０８−１５細胞を０．１１−４０ｎ／ｍｌのτＧＦ −βでインキュベートした時には再分化は誘導されなかった。 また、實験は高純度可溶性モルフォゲン（成熟型０Ｐ−１とそのプロドメインを 結合させたもの等）を用いて行い、これはまた特異的にＮＧ１０８−１５細胞の 再分化を誘導した。 従って、ここに述べたモルフオゲンは神経系のｌ［Ｉ瘍或いは腫瘍性病変の処置 の、特に網膜芽腫瘍および神経膠腫を含む神経芽腫の処置において、有用な治療 剤を提供する０モルフオゲンそれ自身を投与することもできるし、さらにモルフ ォゲン産生刺激剤を投与することもできる。 実施例５、皿Ｌ・１　からの　の　ｉ 正常細胞の生存性を増強し、再分化細胞の細胞凝集および細胞−細胞接着を誘導 するここに説明するモルフオゲンの機能は、モルフォゲンが化学的に引き起こさ れた損傷から回路を保護している細胞を保護していることによって、神経回路を 維持するだめの治療剤として有用であることを示している。特にモルフォゲンは ニューロンを保護することができる。これは、二二一ロンの増殖と遁走を阻害し 、細胞と細胞の接着を邪魔することが知られている毒物の作用からニューロンを 保護して発達させることを含んでいる。このような毒物の例としてはエタノール が含まれ、タバコの煙中に含まれる１またはそれ以上の毒物および種々の阿片化 合物がある。ニューロンの発達におよぼすエタノールの毒性作用は、胎児性アル コール症候群であきらかにされた神経学的損傷を誘発させる。モルフォゲンはま た、グルタミン酸塩のような興奮性アミノ酸に関連した細胞毒性からニューロン を保護することができる。 例えば、エタノールは、モルフォゲン処理したＮＧ１０８−１５細胞の細胞−細 胞接着作用に対して、これらの細胞に２Ｏ−５０ａ＋Ｍ濃度で与えた時、これを 阻害する。最大阻害の半ｐＩｋ（！は５−１０１１Ｍエタノール濃度であること が試験されている。この濃度は一本のアルコール飲料を飲んだ後の成人の血液中 のアルコール濃度である０モルフォゲン誘導Ｎ−ＣＡＭ　レベルがエタノールに よって影響されないので、むしろエタノールはＣＡ？ｌの誘導より細胞とＣＡ？ １の特異的な結合を恐らく障害している。さらに、抑制的な作用はモルフォゲン 濃度に逆比例している。従って、エタノールのような毒物に露出することからの 損害のリスクにあるニューロンであって、特に発達中のニューロンに対してモル フォゲンまたはモルフォゲン促進剤を投与することは、毒物の阻害作用を回復す ることによって神経組織の損害からこれらの細胞を保護することになると予悲さ れる。ここに述べたモルフォゲンは、これらの毒物に露出して誘導されたニュー ロパシーからもたされる損傷した神経経路を処置するための治療に有用である。 実施例６．　モルフォゲンｉ禾ＣＡ門 ここに説明したモルフォゲンは、形態形成誘導の一部としてＣＡＰ　の発現を誘 導し、特にＮ−ＣＡＭ発現を誘導する。　（：ＡＭは組織発達の必須段階として 、全ての組織から同志された形態形成制御分子である。Ｎ−ＣＡ？Ｉは少なくと も３種の異性体からなっており（Ｎ−ＣＡ門−１８０、Ｎ−ＣＡＭ−１４０、Ｎ −ＣＡＭ−１２０、ここで１８０．１４０．１２０はポリアクリルアミドゲル電 気泳動で測定したおよその分子量である）少なくとも、一時的に発達中の組織で 発現されており、そして神経Ｍｉ織では永続的である。Ｎ−ＣＡＭ−１８０、Ｎ −ＣＡパー１４０どちらの異性体も発達中の組織と成熟組織両方で発現している 。Ｎ−ＣＡＭ−１２０は、成熟組織のみで見出される。他に中間型Ｃ静であるＬ ｌがある。 Ｎ−ＣＡＭは通切な神経の発達に組み込まれている。この発達は適切な神経胚形 成、神経細胞凝集、東北、シナプス形成等を含む。Ｎ−ＣＡＭ特異的抗体を用い て分子を複合化することによるＮ−ＣＡｌ１生産の阻害は網膜の形成を阻害する 。網膜の形成阻害には網膜の軸索の凝集、標的の筋細胞への軸索の接合のような 末梢神経系での軸索形成がある。さらに、物理学的あるいは化学的ニューロンの 損傷、癌性形質転換およびなんらかの遺伝性神経灰色が、細胞の接着性と凝集性 を変更する、ＣＡＭの発現における変化によって組み合わさっていることが明白 な事実として示されている。特にＮ−ＣＡＭ　レベル増加はハンチントンｎ踏病 の線条体（線条体基底節など）で増加し、接着性減少はアルツハイマー疾患で記 録されている。 ここで説明したモルフォゲンはＣＡＭの生産、特にＮ−ＣＡＭ分子の全ての異性 体を含むＮ−ＣＡＭとＬｌの生産を刺激することが可能である０例えば、Ｎ−Ｃ ＡＭの発現はモルフォゲン処理ＮＧ１０８−１５細胞では顕著に促進されている 。未処理ＮＧ１０８−１５細胞は繊維芽細胞性の、あるいはほんの少しだけ分化 した形態学的特性を示し通常は分化細胞に見られるＮ−ＣＡＭの１８０と１４０ のみを発現する。 モルフォゲン処理に引き続いて、これらの細胞は成熟ニューロンの形、活学的特 性を示し、Ｎ−ＣＡＭの３種の異性体すべての発現レベルが増強された。下記の 実施例に示したと同様なプロトコールを用いると、さらにまたモルフオゲン処理 ＮＧ１０８−１５細胞のし１発現が誘導された。 本実施例においてＮＧ１０８−１５細胞を０Ｐ−１を添加して濃度が増加した状 態で４日間培養し、そして標準的なウェスタンプロ・ントを全細胞抽出物につい て行った。Ｎ−ＣＡ？ｌ異性体が、３種の異性体全てに交差反応する抗体ｍＡｂ 　Ｈ２Ｓ、１２３を用いたところ検出された。抗体はＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃ ａｌ　Ｃｏ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓから入手できる。異なった異性体はゲル電気泳動 の異なった移動度によって区別することができる。対照のＮＧ１０８−１５細胞 （未処理）は、１１００ｕの蛋白質を用いてウェスタンプロットを行って確認し た所、１４０　ｋＤａと１８０　ｋＤａの異性体を発現しているが、１２０　ｋ Ｄａは発現していない、　０Ｐ−１処理ＮＧ１０８−１５細胞は、１２０　ｋＤ ａ異性体を誘導すると同時に、濃度に依存して１８０　ｋＤａと１４０　ｋＤａ の異性体の発現が増加する。図２Ａ、図２ＢではｉＡｂ　）１２８．１２３をプ ローブとして行った０Ｐ−１処理ＮＧ１０８−１５細胞抽出物のウェスタンプロ ・ソトを示しており、３つの異性体全ての誘導が認められる０図２Ａはモルフォ ゲン濃度の作用としてＮ−ＣＡＭ−１８０とＮ−ＣＡＭ−１４０の容量反応曲線 をである。Ｎ−Ｃ１Ｍ−１２０はグラフ中に認められず、対照細胞中では定量で きなった。しかし図２へのウェスタンプロットであきらかなように、Ｎ−ＣＡＭ −１２０はモルフオゲン処理に応答して誘導されている。　Ｎ−ＣＡ？ｌ−１８ ０とＮ−ＣＡＭ−１４０の異性体に認められる誘導の違いは、１４０異性体の構 成的発現が最大値に近く、ことによるものと考えられる。 Ｎ−ＣＡＭ発現の増加は、多細胞凝集のモルフオゲン誘導に応答していた。図２ Ａと図３Ｂを比較した０図３は６つの独立した実験でランダムに選択した２０の フィールド当たりのモルフオゲン濃度に対する、多層性凝集（凝集）の平均数を グラフ化したものである。１２０異性体の誘導はモルフォゲン誘導された形質転 換細胞の再分化は形質転換された発現型細胞からの細胞の再分化を促進するだけ でなく、成熟細胞へ作用して発現型への分化も促進したことを示している０モル フォゲン処理細胞にｍＡｂ　Ｈ２Ｂ。 １２３を用いて行った免疫組織学的研究では、末梢と処理細胞の神経突起を結び つけるＮ−ＣＡＭクラスター形成が認められ、未処理細胞では反応していなかっ た。さらにまた、モルフォゲン処理は、細胞数の計数またはトリチュウムチミジ ンの取り込みによって測定したところ、細胞***は抑制しなかった。最後に、フ ォルスコリンとジメチルスルフォキンドのような公知の化学的分化剤はＮ−ＣＡ Ｍ生産を誘導しなかった。 さらに、ＮＧ１０Ｂ−１５細胞に対する０Ｐ−１の細胞凝集作用は抗Ｎ−ＣＡｎ 抗体またはアンチセンスＮ−ＣＡＦＩオリゴヌクレオチドで抑制できる。アンチ センスオリゴヌクレオチドは公知技術の一般的な手段でヌクレオチドシンセサイ ザーを使用して合成できる。好ましくはホスホロチオレートオリゴヌクレオチド （Ｓ−オリゴ）を調製して、細胞膜のヌクレオチドの透過を促進させる。　Ｎ− Ｃ＾ｉ誘導を阻害するために十分なＮ−ＣＡ？ｌ抗体とＮ−ＣＡＭアンチセンス オリゴヌクレオチドの両者の濃度は、多層化細胞凝集の形成をも阻害する。特に ０．３−３　μ門のＮ−ＣＡＭアンチセンスＳ−オリゴ、５−５００　μ６非修 飾Ｎ−ＣＡＭアンチセンスオリゴあるいはまた１０μｇ／ｍｌ　ｍＡｂ　Ｈ２Ｓ 、１２３とモルフォゲン処理細胞をインキュベーションすると、明らかに細胞の 凝集が抑制される。阻害が完全でない場合には、モルフオゲンがその他のＣＡＭ を増強させるらしい。 可溶性モルフォゲン（プロドメインを結合させた成熟０Ｐ−１）を用いて行った 実験でも特異的にＣＡＭ発現が誘導された。 ここに述べたモルフォゲンは、ＣＡＭ　レベル、特にＮ−ＣＡ？Ｉ　レベルを変 えて、神経学的障害、例えばハンチントンｎ踏病およびアルツハイマー病それら の類似疾患を治療するための治療剤として有用である。臨床的な応用ではモルフ ォゲンそれ自身を投与するか、あるいはまたモルフォゲン産生刺激剤を投与する 。　−ここに記載したＮ−ＣＡ？Ｉ発現に影響するモルフォゲンの有効性は、適 切な細胞とここに示した方法を用いて、インビトロで評価できる。さらに形質転 換細胞株に対するＮ−ＣＡＭの発現は、ここに記載した方法に従って、神経性細 胞またはダリア細胞の初代培養で評価できる。インビボでのＮ−ＣＡＭ発現にお けるモルフォゲン処置の有効性は、以下の実施例９で述べたような組織バイオプ シーと、実施例１１で述べた動物モデルを用いるがｎ＋Ａｂ　Ｈ２Ｓ、１２３の ようなＮ−ＣＡと特異的抗体で１１−ＣＡＭ分子を検出することで評価できる。 さらに、脳を髄液または血清のＮ−ＣＡＭ蛋白質レベルまたは蛋白フラグメント の存在レベルは、モルフォゲン処置の効果を評価して検出できる。　Ｎ−ＣＡＭ 分子は細胞表面から脱落することが知られており、血清および脳を髄液の両方か ら検出できる。さらに、可溶性Ｎ−ＣＡＭのレベルの変化は、正常圧の水頭症と タイプＩｆの***病に関係している。１４−ＣＡＭの体液レベルは実施例９に述 べた方法とｍＡｂ　Ｈ２Ｓ、１２３ｎのようなＮ−ＣＡＭ特異抗体を用いること で検出できる。 実施例７．天西フォゲン峰　ギヤツブ虻復護」蛋−ここに述べたモルフォゲンは また、損傷神経回路の修復と再生を行って、引き離された距離を超えて末梢神経 系の軸索の成長を促進させる。末梢神経系のニューロンは誘導なしに、損傷の後 に新しい神経突起を発生させることができる一方で、この発生が適切に結合しな いと死滅する。切断の長さは５または１０１１１１の場合には、再生は困難であ るか、まったく不可能である。 本実施例ではモルフォゲンによる神経再生はラット座骨神経モデルを用いて評価 する。ラット座骨神経は、５翔−のギャップ、特別な場合には１０ｍｍのギャッ プを越えて自発的に再生する。この特別な場合とは、生理食塩を満たした神経誘 導集雪に切断末端を挿入しギャップ中におく、この実験では神経の再生は１２ｍ ｍのギヤノブを越えて試験された。 体重２３０−２５０ｇの成熟雌性のスプラグ−ドーリューラット（Ｃｈａｒｌｅ ｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、）をベントパルビタール ナトリウム（３５ｍｇ／ｋｇ体重）の腹腔的投与によって麻酔させた。皮膚の切 開は、大腿骨に対して平行させ、そして、ちょうど後方側で行った。外側床筋と 膝腓筋肉との間の無血管筋肉内平面が、座骨神経を取り巻く疎性線維輪紋状組織 に対してくみこまれ、そして続いている。疎性組織が縦に分割されており、どの 部分においても血流遮断なしに、座骨神経を十分に引き離してフリーにすること ができる。外科手術顕微鏡下で座骨神経を微小鋏を用いて−ｉｄ−ｔｈｉｇｈで 切断し、１２ｍｍに神経切断端を分離して、ｏｐ−１ゲル片を移植した。移植部 分は、モルフォゲン溶液を満たした内部直径１．５ｍｍ　、長さ２０ａ＋ａのシ リコンチューブで包み込んだ。 特に、チューブの中心１２ｍ５＋は、門ＡＴＲＩＧＥＬ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔ ｉｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ、、ＢｅｄｆｏｒｄＪＡ）の約１００μｌで ＣＩＯで遺伝子組換え生産した精製０Ｐ−１を１−５μｇ＠混合して調製したＯ Ｐ−１ゲルがらなっている。なおＭＡＴＲＩＧＥＬはマウス肉腫組織から抽出し た細胞外マトリックスで、可溶化した組織基底膜を含有している。可溶化＆ｌＩ 織基底膜はリン酸緩衝生理食塩水中にラミニン、タイプＩＶコラーゲン、ヘパリ ン硫酸塩、プロテオグリカン、エンタフチン等を含んでいる。０Ｐ−１を満たし たチューブは、損傷部分に直接移植し、神経の切断端を、チューブそれぞれの末 端に４１１＋ｗを入れる。両切断端は０Ｐ−１ゲルに接しており、そして東保護 鞘を神経上膜を通して市販の外科用１０−０ナイロンで３針縫って、シリコンチ ューブ中にしっかりと固定してお（。 さらに０Ｐ−１ゲル移植に対して、空のシリコンチューブ、ゲルのみを満たした チューブ、および「反転」自己移植、これは動物の座骨神経の１２１切断断片を 縫合の前に１８０度回転させたものであり、対照として移植した。全ての実験は ４回繰り返した。 すべての傷はきずクリップでとめて塞ぎ、１０日後に除去した。 全ラットとも両脚に移植を行った。３週間目に動物を層殺し、移植域を取り外し 、すぐにドライアイスで凍結させた０次に凍結片の移植箇所を細かく切断し、フ ルロセイン（Ｓｉｇｎ＋ａ　ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、から入手）でラベルした抗 神経フィラメント抗体を用いて免疫蛍光染色によって軸索の再生を試験した。 ギヤノブが０Ｐ−１ゲルで満たされている移植箇所の全長１２ｍｍにわたり、坐 骨神経の再生が起こっていた。これとは対照的に、空のシリコンチューブ及び反 転自己移植は神経再生が起こらず、ゲル含有の１移植箇所のみが軸索再生を示し た。 実施例８．　モルフォゲン悸　ギヤ・ブの　′（ＣＮＳ）インビボでの軸索の損 傷に引き続き、ＣＮＳニューロンは再生ができない。さらにＣＮＳ神経ｍ織の損 傷、を髄、視神経と網膜を含む損傷はこれらの細胞によって特定される神経回路 の激しい障害と破壊を引き起こす。末梢神経の移植はＣＮＳ軸索の損傷をバイパ スするためにも存効に使われる。成功した自己移植修復は一般的には、移植部位 がＣＮＳニューロン細胞体の近傍にあることが必要であり、そしてＣＮＳ軸索切 除の最初の結果は神経細胞死である。ここでＣＮＳ神経修復において説明したモ ルフォゲンの有効性は、Ｂｉｇｎａｍｉ　らによって説明され、引用によってこ こに一体化した開示内容（Ｂｉｇｎａｍ　ｅｔ　ａｌ、、１９７９．　Ｅｘｐ、 Ｅｙｅ、Ｒｅｓ。 ２計６３−６９）のように、ラットの砕けた視神経モデルを用いて評価できる。 最近それらに述べられているように、実験ラット（Ｃｈａｒｓｅ　Ｒｉｖｅｒ　 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を標準的な実験手 法で麻酔し、眼窩がら眼を丁寧に摘出して引っ張ることで視神経を押しつぶした 。即ち眼球の後ろに時計用鉗子を挿入し、１５秒間鉗子で視覚神経を絞り、３０ 秒間間隔をおいて１５秒間さらに鉗子を絞った。ラットは時間をおいた後屠殺し た。その間隔は手術後４８時間、３．４．１１．１５．１８日である。視覚神経 の修復手術に対するモルフォゲンの効果は、２回の繰り返し実験で評価した。そ の実験はモルフォゲンまたはＰＢＳ　（２５μｌの溶液と２５μｇのモルフォゲ ン）を操作前、操作中および操作後一定の間隔で視覚神経に与えて評価した。 治療なしで、神経を押しつぶすことで外科的にダリアに傷をつけ、ダリアの傷の マーカー蛋白質であるダリア線維化酸性蛋白質（ＧＦＡ）を免疫蛍光染色して、 組織学的に判断した。旧ｇｎａ■ｅｔ　ａｌ、、１９７４．　Ｊ、Ｃｏｍｐ、Ｎ ｅｕｒ、１５３：２７−３８に記載されたように、市販の入手可能なＧＦＡに対 する抗体Ｃ５ｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、ＳＬ。 Ｌｏｕｓ）を使用して、空気乾燥によってクリオスタット切片の間接的蛍光染色 を行った。　ＧＦＡ　レベルの減少がモルフォゲン処理動物で認められた。これ はモルフォゲンの作用はダリアの傷形成阻害と視覚神経の再生を促進しているこ とを表している。 実施例９．押世Ｕ刀り所 神経組織のモルフォゲンの分布は神経の破壊またはニューロパシーを診断する方 法の一部分として利用可能である。この方法は脳組織のニューロパシーを診断す るのに特に有利である。 特にバイオプシーによる脳組織は、公知技術を使用して患者のリスクを見ること に使う、バイオプシーした組織のモルフォゲンノ発現は、モルフォゲン特異的抗 血清またはモノクローナル抗体を使った標準的な免疫蛍光技術を使用した一般的 な方法で評価できる。特に、バイオプシー組織は公知技術によって薄く切片を作 り、蛍光ラベル化した（あるいは別の検出方法）抗体と組織を特異的な抗原−抗 体コンブレ７クス形成させることのできるような条件でインキュベートする。形 成したコンプレックスの存在と量を測定し、あらかじめ得た標準または参照値と 比較する０組織のモルフォゲン変化レベルの検出は組織機能の指標として使用で きる。さらにまた、モルフォゲンレベルの変動はモルフォゲンｔｌＮＡに対して 特異的にハイブリダイズするラベル化プローブを用い、先行技術に記載されたＩ １１！的なハイブリダイゼーションプロトコールで、標準ノーザンプロット分析 またはインサイチューハイブリダイゼーシッンによって、モルフォゲンの転写レ ベルをモニターすることで評価できる。 脳を髄液または血液中のモルフォゲンレヘルの変動は組織の生物活性を評価する ために使用できる０例えばモルフォゲンは下垂体細胞に関連して検出され、これ は脳を髄液中に各種の因子を分泌することが知られている。そして一般的にはダ リア細胞細胞に結合しており、細胞外マトリックスにはあるが神経細胞体には結 合していない、したがって脳を髄液はモルフォゲン移送の自然の手段である。さ らにモルフォゲンは脳を髄液中の死細胞から放出される。さらに０Ｐ−１はは最 近ではヒト血液中に検出されており、血液もまた移送の手段でありそして／また 死細胞の内容物の環納所でもある。 を髄液は、公知の医学的な方法を用いて標準的な腰椎穿刺によって得ることがで きる。同様に血清サンプルは静脈穿刺によって血液を得て、３０００１１１ＰＭ 　１０分間遠心分離して血清を調製する。 血清または脳を髄液のモルフォゲンの存在は一般的なウェスタンプロット（イム ノプロット）、ＥＬＩＳＡまたはｌ？ＩＡ法によって評価できる。簡単には例え ばＥＬＩＳＡの場合サンプルは適切な緩ｄｉｄで希釈して、この緩衝液はリン酸 緩衝生理食塩水など、そして５０μＩアリコートをモルフォゲン特異的抗体を用 いてプロコートしたマイクロタイタープレートのウェルの底に吸着させ、そして ４°Ｃで１８時間インキュベートする０次いでプレートは標１！緩衝液で洗浄し 、適切な緩衝液中のビオチンのような検出剤をコンジユゲートさせた第二〇モル フォゲン特異抗体の液を５０μＩ加えて室温で９０分間インキュベートする０モ ルフォゲンー抗体コンプレックスは一般的な方法で検出する。 さらにモルフォゲン特異的アフィニティカラムは、カラムマトリックスに吸着さ せたモルフォゲン特異的抗体を用いて作製することができる。そして目的のモル フォゲンを選択的に抽出するためにマトリックスに液体サンプルを通過させる。 適切な溶出緩衝液は、最初にコントロール（例えば精製した遺伝子組換え生産モ ルフォゲン）と結合および溶出条件を予測して測定することによって、経験的に 定めることができる０次いでフラクシヨンは標準的なイムノプロットによってモ ルフォゲンの存在を試験し、Ｎ末端配列により確認する。血清あるいはその他の 体液中のモルフォゲン濃度は、吸光光度法、ＥＬＩＳＡあるいはＲＩＡによる抗 体分析法を含む、標準的な蛋白質定量方法を使用して測定する。この方法により ０Ｐ−１が血液中から特定された。 ヒト血液中から以下の分析方法によってｏｐ−ｉが検出された。 実施例１３に記載され、公知技術である免疫学的手法を用いて、遺伝子操作によ って生産されだ哺乳動物細胞のモルフォゲンに対して結合するモノクローナル抗 体を、活性化アガロースゲル（Ａｆｉ−Ｇｅｌ　Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ、Ｉｉｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡメーカーの使用説明に従って調製）を 通過させて固定化し、精製０Ｐ−１を血清から得るのに使用した。ヒト血清を次 いでカラムに通過させ、３ＭＫ−チオシアン酸塩でｌ６出した。に−チオシアン 酸塩のフラクシヨンは６Ｍ尿素、２０ｍＭ　ＰＯ，、ｐＨ１，０中で透析し、Ｃ ＢＨＰＬＣカラムにかけ、２０分で２５−５０χアセトニトリル１０．ｌχＴＦ Ａのグラシュエンドで溶出した。遺伝子組み換え生産成熟型０Ｐ−１のホモダイ マーは２Ｑ−２２分で？ｇ出された。次いでフラクションを回収し、０Ｐ−１の 存在をイムノプロットで試験した０図４は還元条件と酸化条件のヒト血清中の０ Ｐ−１のイムノプロットを示した０図においてレーン１　とレーン４は０Ｐ−１ の標準であり、酸化条件（レーン１）、１元条件（レーン４）で流した。レーン ５は、１７．２７．３９ｋＤａの分子ｔａｒｓである。レーン２とレーン３はヒ ト血清０Ｐ−１であり、酸化条件下（レーン２）、還元条件下（レーン３）であ る。 モルフォゲンは、体液のモルフオゲンレベルの変動を神経組織の状態の変化とし て示す０体液サンプル中のモルフオゲンの量を予め得た対照値と比較して診断応 用に使用することができる。さらにまた内因性モルフオゲン抗体レベルの変動は この方法で測定でき、特に好ましくは血清中であり、内因性モルフオゲン抗体に 特異的に結合するその他の蛋白質や抗体を使用する。 内因性抗体レベルの変動の検出は組織状態の変化の指標とするここに示したモル フオゲンは神経Ｕ織の免疫学的に関連した損傷を軽減するために使用できる。こ の損傷の詳細と損傷を軽減するためのモルフオゲンの使用は国際出願ＵＳ９２１ ０７３５８　（ＷＯ９３１０４６９２）に開示されている。神経組織に対するこ のような損傷の最も重要な原因は、神経回路に対する低酸素症と血液供給の虚血 −再潅流である。これは血栓または手術操作によっておこる。 国際出願ＵＳ９２１０７３５８　（Ｗ０９３１０４６９２）に開示されているよ うに、モルフォゲンは！織に対する血液供給の虚血−再潅流につづく心筋組織に 対する障害を軽減できることをしめしてし）る、神経組織に対する免疫学的に関 連した損傷を軽減することに関してモルフォゲンの効果は先行技術と公知技術に よる方法とモデルを用いて評価できる。 例えばウサギ栓塞モデルは、脳虚血と再ｉ流に続く組織損傷に対するモルフォゲ ンの作用を評価するための有用な方法である。以下に開示したプロトコールは、 本質的にＰｈ１ｌｌｉｐｓ（Ｐｈｉｌｉｐｓ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９．Ａｎａ ｌｓ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２５，２８１−２８５）　らの方法であり、 引用と公知の先行技術によってここに一体化している。 要約すると、白色ニューイングランド　ウサギ（２−３ｋｇ）麻酔し、人工呼吸 器を取りつけた０次いで頭蓋的循環を選択的にセリンジャーの方法でカテーテル 化した。ヘースラインの脳血管造影をデジタル基本ユニットによって行った。遠 位内部頚動脈あるいはその技血管を、１８時間経過した自己血栓の０．０３５ｍ １を使用して選択的に閉塞させた。動脈性の閉塞は、栓塞後にただちに繰り返し 血管造影をおこなって記録した。脳梗塞を発生させるために十分な時間経過後（ １５分または９０分）　、ＴＰＡアナログＦＢ−ＦＢ−ＣＦ　（０，８ｍｇ／ｋ ｇ以上２分間）のような再潅流剤を投与して、血流を再開させた。 脳梗塞に対するモルフオゲンの効果は、０Ｐ−１のようなモルフォゲンを種々の 濃度で、血栓の形成および／または再潅流に続いて異なった時間で投与して評価 できる。ウサギは栓塞後３−１４日めに層殺し、その脳を神経病理学的試験の目 的で１０χの　中性緩衝液へ少なくとも２週間の液浸によって固定化して調製し た。脳は冠状平面で２−３ｍ−間隔で切片を作り番号をつけ、標準的な病理組織 学的手段でパラフィンで処理し、神経組織の壊死の程度を肉眼的に測定した０モ ルフオゲン処理動物は、非処理動物との病理学的比較により、試験動物の脳虚血 〜再潅流のあとに起こる神経組織の壊死を減少させるか、あるし）は明らかに抑 制させると考えられた。 実施例１１．インビボでのモルフォ　ンの　六　發・　るため葛監惣至デ土 ここに述べたモルフォゲンのインビボ活性は、ここに述べた動物モデルで速やか に評価できる。好ましくは、適切な動物モデルは神経組織の損傷を示しており、 例えば遺伝的あるいは環境的に誘発される。このモデルにｐＨ１のリン酸ｉ衝食 塩水のような適切な治療用製剤中の有効量のモルフォゲンを脳室内に直接注射す る。好ましくは、モルフォゲンは損傷ニューロンの領域に注入する。損傷組織は 次の時点で切除し、そして組織は形態学的に評価し、そして／または適切な生化 学マーカーの評価を行う（例えばモルフォゲンまたはＮ−ＣＡＭの分布、ＣＮＳ 神経栄養活性またはＣＮＳ　＆［ｌ織損傷の生化学的マーカーによる投与量依存 性効果の測定、なお、例えばマーカーとしてはダリア線維性酸性蛋白質等を使用 する）、投与量とインキュベーション時間は試験する動物で変化する。異なる壇 への適切な投与範囲は、樹立した動物モデルを比較して決定できる。以下に示し たものはラットの５９刺モデルのための見本的なプロトコールである。 要約すると、雄性　ロングエバンス系ラット、これは市場で−Ｃ的に購入でき、 これを麻酔し、頭の部分を手術用に準備する０頭蓋冠は標準的な外科手法で露出 させ、そして穴を両耳の中心部にドリルであけ、０．０３５にのワイヤーを頭蓋 上に通す０モルフォゲン（ＯＰ−１２５μｇ）またはＰＢＳのいずれかを含む２ ５μ】の溶液をハミルトンシリンジで穴に注入する。溶液は表面から３Ｉｌ−の 深さまでいれ、下にある皮質、脳粱及び海馬に注入する。 皮膚は縫合し、動物を回復させる。 手術の３日後に、ラットは話頭で層殺し、脳の病理切片を作成した。傷痕＆ｉＩ 織の形成を定性的に、ダリア傷痕のマーカー蛋白質であるダリア線維化酸性蛋白 質を免疫蛍光染色して評価した。ダリア線維化酸性蛋白質抗体は市販されている （Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、＋Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ１ＭＯ）ｅ切片は また０Ｐ−１の存在を確認するため抗０Ｐ−１抗体でプローブされる。ダリア線 維化酸性蛋白質のレベルの減少は、モルフォゲン処理動物の組織切片においてモ ルフォゲンの作用がダリアの傷痕形成を抑制し、神経再生を促進した証拠と考え られた。 脳血液バリアを容易に通過するモルフォゲン種を選別する能力を評価するための インビトロの方法を以下に説明する。モデルとプロトコールの詳細な説明はＡｕ ｄｕｓ　らによって示されており（Ａｕｄｕｓ　ｅｔ　ａｌ、、１９８７．Ａｎ ｎ、　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、５０７：９−１８）、引用によってここ に一体化されている。 要約すると、微小血管内皮細胞を新鮮なウシの脳の大脳灰白色賞から単離する。 脳は地方の屠殺場から入手し、そして抗生物質を含む氷で冷却した最小必須培地 （ＭＥ？Ｉ）に入れて実験室まで輸送する。無菌条件でおおきな表面の血管と髄 膜を標準的な手法で除去する。皮質の灰白質を吸引によって除き、１■−の大き さの立方体状に切断した。刻んだ灰白質は、振盪ウォータバス中で３７＠Ｃ３時 間、０．５χのディスパーゼ（ＢＭＢ　ＩｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓＩＮ）　とイ ンキュベートした。３時間消化した後、混合液を遠心分離（１０００Ｘｇ　１０ 分）して濃縮し、１３χデキストランに再度懸濁し、５８００　ｘ　ｇで１０分 間遠心分離した。上清の脂肪、細胞破片、ミニリンは捨て、クルードな微小血管 ペレットを１Ｉｌｇ／ｍｌのコラゲナーゼ／ディスパーゼに再懸濁させ、振盪ウ ォータバス中で３７°Ｃ５時間、インキュベートした。５時間消化した後、微小 血管Ｑｆｉ液は、予備調整した５０χパーコルグラジエントにいれ、＋０００　 ｘ　ｇで１０分間遠心分離した。精製した内皮細胞（グラジェントの上から２番 目の層）を含むバンドを回収して、培養液（５０χＭＥＭ１５０χＦ−１２培地 の混合）で２回洗浄した。細胞は後で使用するため、１０′＆ウマ血清と２０χ ＤＭＳＯを含む培地で凍結させた（−８０＠Ｃ）０分離した後、およそ５　Ｘ１ ０’ｃｅｌｌｓ／　ｃｄで、培養皿または、コラーゲンとフィブロネクチンでコ ートした５−１２ｍμのポアサイズのポリカーボネートフィルターに播種した。 細胞を播種後１０−１２日目に、セルの単層膜が顕微鏡でコンフルエントになっ たことを検査する。 これらの細胞の形態学的、組織学的、生化学的性質は、これらの細胞が脳血液バ リアを通過するという顕著な特性を有していることを示していた。これらの特徴 は以下の通りである０強固な細胞間結合、膜の開口部がなく、低レベルの細胞飲 作用活性、ガンマ−グルタミルトランスペプチダーゼ、アルカリホスファターゼ 活性の存在、ファクターＶＩＴＩ抗原活性。 極性結合または移送のモデルが必要な場合に、培養細胞は多方面の実験に使用で きる。マルチウェルプレート中の細胞をプレート化することによって、大分子と 小分子のレセプター結合と非レセプター結合を誘導することができる。移送内皮 細胞のフラックス測定を行うために、細胞はポーラスなポリカーボネート（Ｎｕ ｃｌｅｏｐｏｒｅ、　Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、　ＣＡ）膜フィルターで成長する 。大きなポアサイズのフィルター（５−１２ｍ　ν）が、分子フラックスに対す る律速障害にならないよう使用された。大きなボアフィルターの使用はフィルタ ーの下で細胞が成育することを受け入れないし、細胞単層の視覚検査ができる。 一度細胞がコンフルエントに達すると、それは平行放散細胞装置（Ｃｒｏｗｎ　 Ｇｌａｓｓ、ＳｏＩｌｍｅｒｖｉｌｅ、ＮＪ）に置き換える。フラックス測定の ため、拡散細胞の供給チャンバーは、試験物質でパルス化して、次いで種々の時 間にパルスを流し、アリコートは分析のためチャンバーから回収する。放射能活 性または蛍光ラベル化した物質は、分子のフラックスの信顛できる定量ができる 。 単層のインテグリテイは、しょ垢やイヌリンのような非移送性試験物質の添加に よって同時に測定され、そして少なくとも４回の繰り返し測定は統計的有意差を 保証するために行われる。 実施例１３．内因性モルフォゲンレベルを変化させる候補化合物のスクリーニン グ法 本来のモルフォゲンレベルに影響させるために投与することのできる候補物質は 以下のスクリーニング方法を用いて見いだすことができる。測定可能なレベルの モルフォゲンを生産する細胞によって生産されるモルフォゲンのレベルは、細胞 への化合物の作用を評価するために、培養細胞を化合物をインキュベートし、そ して化合物を除去してインキュベートすることで測定される。これは蛋白質また はＲＮＡ　レヘルのいずれかによってモルフォゲンを検出することによってもで きる。また詳細な説明は国際出［ｕｓ９ｚ１０７３５Ｂ（ｗｏ９２１０５１２） 　ニ開示されている。 １３．１培養中の細胞増殖 腎臓、副腎、膀胱、脳、あるいはその他臓器の細胞培養は文献に開示されたよう にして行うことができる０例えば、腎臓は出産直後、新生、若い、成熟蓋歯頚（ マウスまたはラット）から移植でき、そして腎臓全体または切片（１−４■ｍ） として器官培養に使用できる。 腎臓、副腎、膀胱、脳、***、あるいはその他の組織由来の初代培養組織または 樹立細胞株は、マルチウェルプレート（６または２４ウエル）中で、従来の細胞 培養技術を使って樹立し、そして一定時間（１−７日間）血清添加または無添加 で培養を行う。例えば、細胞はＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅｓ ５ｅｎｔｉａｌ培地（ＧｉｂＣｏ、　Ｌｏｎｇ　ｌ５ｌａｎｄ、ＮＹ）あるいは 無血清培地、必要によっては合成培地（インシュリン、トランスフェリン、グル コース、アルブミン、あるいはその他の成長因子を含む）中で培養する。 モルフォゲンの生産レベルを試験するサンプルは培養上清または細胞溶解液を含 み、定期的に回収を行い、０Ｐ−１の生産をイムツブＯ−／ト分析（Ｓａｍｂｒ ｏｃｋ　ｅｔ　ａ＋、、ｅｄｓ、＋１９８９＋門ｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉ ｎｇ＋　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐ ｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）によって評価した。あるいはまた細胞培養それ 自身の一部を定期的に回収してＲＮＡ分析のためにｐｏｌｙ　Ａ＋ＲＮＡを調製 して使用した。 新しい０Ｐ−１合成をモニターするために、培養物は３＄３メチオニン１　：Ｓ Ｓンステイン混合物を用いて従来技術によって６−２４時間ラベル化し、次いで 従来の免疫沈降法によって０Ｐ−１の合成を評価した。 １３．２形態形成蛋白質レベルの測定 細胞型による形態形成蛋白質の生産を定量するために、イムノアッセイをモルフ オゲンの検出に使用し、抗体は蛋白質に対する特異的ポリクローナルまたはモノ クローナル抗体を用いた。 例えば以下のようなＥＬＩＳＡで０Ｐ−１特異的抗体を用いて０Ｐ−１の検出を 行った。 ０Ｐ−１特異的アフイニテイ精製ポリクロ一ナルウサギＩｇＧの１μｇ／ｌｏｏ 　μｌを９６ウエルプレートの各ウェルに加え、３７°Ｃで１時間インキュベー トした。ウェルは、０．１χＴｗｅｅｎ２０を含むｐｉ＋８．２の０．１５門Ｎ ａＣｌ−０，１６７Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ＢＳＢ）で４回洗浄した。非特 異的吸着を最小化するため、ウェルは０．１χウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を 含むＢＳＢで洗浄し、３７＠Ｃで１時間インキュベートした０次いでウェルは０ ．１Ｘ　Ｔｗｅｅｎ２０を含むＢＳＢで４回洗浄した。試験サンプルの細胞培養 上清を適当に希釈した溶？ａ　１００　μｌをトリプレットで各ウェルに加え、 ３７６Ｃで３０分インキュベートした。インキュベーション後１００ｕｌのビオ チン化つサギ抗−０Ｐ−１血清（保存溶液は約１ｇ／＋＋ｌ　、使用直前に１＄ ＢＳＡをＢＳＢ　テ１：４００　ニ希釈）を各ウェルに加え、３７°Ｃ”ｉ”３ ０分インキュベートした０次いでウェルは０．１χＴｗｅｅｎ２０を含むＢＳＢ で４回洗浄した。１００　μ　アルカリ性ストレパビジン（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢ ｉｏｔｈｅｃｎｏｌｏｇｙ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ、　Ｂｉｒｍｉｎｇ ｈａｍ、Ａｌａｂａｍａ使用直前に０．ＩＴｗｅｅｎ　２０を含むＢＳＢで１　 ：　４００に希釈）を各ウェルに加え、３７＠Ｃで３０分インキュベートした。 プレートは０．５Ｍ　Ｔｒｉｓ　ＩＩ衝生理食塩水（ＴＢＳ）　ｐＨ７，２’ｔ ’４回洗浄した。５０μｌの基質（ＥＬＩＳＡＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｓ ｙｓｔｅｍ　Ｋｉｔ、Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＋Ｉｎｃ、、ＢｅＬ ｈｅｓｄａ。 ＭＤ）を各ウェルに加え、室温で１５分インキュベートした。５０μｌのアンブ リファイア−（同じアンプリフィケーションキットから）を各ウェルに加え、室 温で１５分インキュベートした０反応は５０μ■の０．３ＦＩ硫酸を添加して停 止させた。各ウェルの溶液を４９Ｏｎ−〇〇Ｄを測定した。培養液中の０Ｐ−１ を定量するために、０Ｐ−１の検量線を試験サンプルと平行して作製した。 ポリクローナル抗体は以下のようにして調製した。各ウサギに、フロイントの完 全アジュバント５００μｌを含む０．１ｘＳＤＳ液に入った０Ｐ＝１モノマー（ 配列表配列番号５の３２８−４３１のアミノ酸配列）を生産する大腸菌１００μ ｇ１５００μｌで一次免疫した。 抗原は動物の背と脇腹の複数箇所に皮下投与した。ウサギはフロイントの不完全 アジュバントを用いて同じ方法で一ケ月後にブースター処理した。試験のため耳 静照から７日後に採血を行った。　０Ｐ−１に対する抗体がＥｌ、ＩＳＡ分析で 血清中に検出されるまで、２回の追加ブースター投与と試験採血が一カ月の間隔 をおいて行われた０次いでウサギはｌＯＯμｇの抗原でブースター処理し、ブー スター処理後７ロ目と１００回目採血した（１回１５ｍ１）　。 モルフォゲンに特異的な抗体は以下のように調製できる。マウスに０Ｐ−１生産 大腸菌を２回注射した。最初の注射ではフロインどの完全アジュバント中に１０ ０μｇの０Ｐ−１を含む液を皮下に注射した。２回目には、フロイントの不完全 アジュバント中に５０μｇの０Ｐ−１を含む液を腹腔内に注射した。マウスには 次いで８力月間に４回腹腔内投与し全量で２３０μｇのｏｐ−１（配列表配列番 号５の３０７−４３１のアミノ酸配列）を投与した。融合に一週間先んして、マ ウスの腹腔内に１００μｇの０Ｐ−１（３０７−４３１）　とシスティンにウソ 血清アルブミンをＳＭＣＣ交差結合剤を用いて結合させた３００　μｇのＮ末端 ペプチド（Ｓｅｒ２ｖｓ−Ａｓｎ−ｘｏｗｃ）’Ｓ）をブースター投与した。ブ ースター投与は融合の前５日（ＩＰ）、４日（ＩＰ）、３日（ＩＰ）、１日（［ Ｖ）に行った。マウス肺臓はミエローマ（例えば６５３）細胞と１：１の比率で ＰＥＧＬ５００（Ｂｏｈｅｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて融合させ 、融合細胞はプレート化し、抗原として０Ｐ−１（３０７−４３１）を用いて０ Ｐ−１特異的抗体を選択した。融合細胞と抗体のスクリーニングは先行技術で広 く利用可能な標準的な方法によって行った。 本発明は、その精神と必要な特性から外れることなくその特徴的な形態で実施可 能である０本発明の実施は、全てに関連して説明のように理解され、発明の範囲 は上記説明によってよりむしろ添付されたクレームによって示され、そして限定 はされない、さらにクレームに均等な手法と範囲から来る全ての変更は、これら の実施を改良することである。 配列表 （１）一般情報 （ｉｉ）発明の名称二組織形成因子誘導による神経再生と修復（ｉ　ｉ　ｉ）配 列の数：３３ （ｉν）連絡先： （Ｂ）　ファクシミリ：６１７／２４８−７１００（２）配列番号１に関する情 報 （ｉｉ）分子種；蛋白質 （ｘｉ）配列；配列番号Ｉ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　工ａａ　Ｃａａ　Ｘａａ　Ｘｘａ　Ｘｙ　Ｘ ａａ　工ａａ　Ｘｍ　ズａａ　Ｘａａ　Ｃａａ　工ａ１工ａａ　！ａａ工ａａ　 Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｃａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃａａ　Ｃ ７ｓ　Ｘａａ　Ｘｈｈ工１１Ｘａａ　Ｘａｈ　Ｘａａ工！！　ＸａａＸａａ　Ｘ ａａ　Ｃａａ　ＸａａＸａａ　Ｘ直り工１ａ工１ａ工ａｘ　Ｘａａ　！ａａ！ａ ａ　Ｘａａ　Ｃａａ　Ｃａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｚａａ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｃａａ　Ｃａａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｘｘａ　ＸａｈＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａｈ　Ｘａａ　Ｘａａ　ｈａ　 ＸａａＸａａ　Ｘａａ　！ａａＸａａ工１！工ａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘ ａａ工１ユム息工ａａ　Ｘａａ　Ｘｈａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｃｐｓ（２ ）配列番号２に関する情報 （ｉ　ｉ）分子Ｍ：蛋白質 （ｘｉン配′ＰＪ：配列番号２ ”　ＸｈＩＬＸａｘχａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　！ａａ工ａｘ　Ｘａａ　Ｃｙｓ工 ａａ　Ｘａｈ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘｚａ　Ｘａａ　Ｘａａ賑 （２）配列番号３に関する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （χ工）配列：配列番号３ Ｌｓｕ　Ｔ’）ｒｒ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｐｈｅ　Ｃａａ　Ｘａａ　Ｘｘａ　にｌ ｙ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａτｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ａｌ■ ｌ　５　１０　１５ Ｐｒｏ　Ｘｘａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｘａａ　ｕｎ　Ｃａａ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓχａ ｘ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａｎ　Ｃａａ　Ｐｒ。 Ｘａａｘ＆直工１１工ａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａｈ　Ｘａａ　Ｘａａ Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｔ　ｈａ　Ｆｒ。 ５０　５５　６０　’ Ｖ＆ｌ　Ｘａａ　Ｌａｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍｅｔ　 Ｘａｎ　Ｖａｎ　Ｘｈａ　Ｘａａ　ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ（２）配列番号４に 関する情報 （ｉｉ）分子Ｍ：蛋白質 （Ｘ］）配列：配列番号４ Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｃａａ　Ｘａａ　Ｘｎａ　Ｌｅｕ　Ｔ）ｒｒ　Ｖａｎ　Ｘａｘ 　Ｐｂａ　Ｘａａ　！！！　：Ｃａａ　ＧｌｙτＱ　Ｘａａ’　５　１０　１５ ！ａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｐｒｏ　Ｘａａ工１１工ａａ　Ｘａｘ工ｍ　 Ｘｘａ　Ｃａａ　Ｘａａ　ｋｉｎ　Ｂ１５社１３５　４０　４！１ 工ａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｌａｕ　Ｃａａ　Ｃａａ　Ｘｘｈ　Ｘａａ　Ｘ ａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘｈｎ工ａａ　Ｘａａ　Ｘｈｘ！ａａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　 Ｘａｈ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘｈａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　 Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｘａｘ　Ｘｘ１ｇ５　７０　７５　８０ Ｉａａ　Ｘａｎ　Ｘａａ　Ｘａｉ　Ｘｘｘ　ＶａｌＸｘｘ　Ｌｅａ　Ｃａａ　Ｚ ａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　１ａｓｔ　Ｘｘｚ　ｆｉ１（２）配列番号５に関 する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号５ Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｌｚ　 Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ａｉｎ　ｊｕａ　ｌｌ５Ｚｏｏ　１０５　１ １０ Ｓｅｒ　Ｖｉｌ　Ｌｓｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 Ａｊｎ　Ｖａｌ　Ｘｂ　Ｌｅｕ　’Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒムｒｇ　Ａｊｎ　Ｍ ｅｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　１１ｇ（２ ）配列番号６に関する情報 （ｉ　ｉ）分子１１＝蛋白質 （ｘｒ）配列：配列番号６ Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　にＧｌｙ　Ｇ１７　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　ＧコＪ Ｉ　Ａｓｓ　Ａｒｇ　ｓａｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｌ凾■ Ｌ　！＋　１０　１５ ＡＪｎ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕムｌａ　Ｌｅｕムｒｇ　’ｌｉｅ：　１１１　Ｓｅｔ” ｉｄ五１．ａ　にｌｕ　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　５ｅｒムｓｐＧｉｎＡｒｇＧ ｉｎＡｌａＣｙｓＬｙｓＬｙｓＨ１ｓＧｌｕＬｅｕ丁ｙｒＶａＬＳａｒｔｈｅム ＦＫＡｊｐ　Ｌａｕ　Ｇｕｙ　Ｔｒｐ　Ｇｉｎ　ｈｓｐ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｉｌ ｅ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　ＡｌａＴｐＴｙｒＣｙ ｓＧｌｕＣ１ｙＧｌｕＣｙｓ人１ａＰｈｅＰｒｏＬｅｕム５ｎＳｅｒ丁ｙτＨ１ ムＭＱＡｓｐ　Ｔｈｒ　Ｖｄ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｌ ｘ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｌｓ＋ｕ　Ａｇｎ　Ａｉｍ　ｌ１ａｅＳｅｒ　Ｖ ｄ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　ＡＬＰ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　ＡＪＩＩ　Ｖ ａｌ　ｒｌｅムｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒτ　社ｇ　ＡＪｎ　Ｍｅｔ　ｖａｌ 　Ｖａｎ　Ａｒｇ　Ａｌａ　（７ｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　）Ｉｉｓ１３０ヱ３５ （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号７ Ａｉｍ　Ｙａｌ　Ｊｙｚ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　ｂｚ社寥ムｒｇ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　 Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｓｓｒ　Ｊｕｎ　にｌｕ　ｔａｕｌ　５　１０　１５ Ｆｒｏ　Ｇｌｎ　ＡｌｏｎＡｒｇ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｚｌｅ　Ｆｈｅ　 ｈｓｐ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　ＨＬｓ　にＧｌｙ　５ａｒＢｉｓ　Ｇｌｙ　社ｌ―ｖ ａｌ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　ＨＬｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　”ｉ社Ｓｅ ｒ　Ｐｂｅ　Ｇｌｘ３５す４５ ｉｓｐ、　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ａｊｐ　Ｔｈ１ｒ　Ｖａｎ　Ｘｌ ａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓｉｒ　ｍ５０　５５　６゜ Ｔｙｘ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　にｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　ｒｈｅ　 Ｆｒｏ　Ｌａｕムｐ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｗｅｔ　Ａ１ｎ６５　７０　７５　ｌ１ ｌ） Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｒｌｇ　、ｋｌａ　Ｘｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｂｓ　Ｓｅｒ 　Ｌａｕ　Ｖ’ａｌ　Ｆｉｉｓ　Ｌｅｕ　Ｍξｔ　ｌ７ｌ　窒秩B Ｓｅｔ　Ｍａｌ　Ｌｅｕ　Ｔ７Ｔ　ＴＮＴ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　５ｅｒ　ムｓｎ　 Ａｓｎ　Ｖａｎ　Ｚｌｅ　Ｌｅｕ　人ｒｇ　Ｌｙｓ　８１ｇ（２）配列番号８に 関する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｌ）配列：配列番号８ 出出ムｒｇ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｌ、 ｙｓ　Ｌｙｔ　Ｔｈｒ　Ａｊｎ　Ｇｌｕ　Ｌａｕｌ　５　１０　１５ Ｐｒｏ　Ｆｉｉｓ　Ｐｒｏ　ＡｓＱ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｈｅ　 Ｐｂｅ　Ａｓｐ　ＡＪｐ　Ｇｌｙ　１！ｉｓ　Ｇｌｙ　５ｅ■ ムｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　（ｌｕ　ＶａｌＣｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｕｓ　Ｇ ｌｕ　Ｉａｕ　Ｔｙｒ　”Ｉｄ　Ｓｅｒ　Ｆｈｅ　Ａｘｚコ５　４０　４５ Ａｊｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　ｕｐ　Ｔｒｐ　、Ｖｄ　Ｉｌｅ　Ａ ｌａ　Ｆｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｈｅｒ　ＡｌａＴｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙ ｓ　Ｇｌｕ　ＧｌＦ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｓ ｐ　Ｓａｔ　Ｃｙｓ　Ｍａｃ　ｂｎＡｌａ　Ｔｈｒ　Ａｊｎ　ｌ１ｉｓ　Ａｌａ 　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｈ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　１ｌｉｓ　Ｌａｕ　Ｍａｔ 　Ｌｙｓ　ＰｒB Ａｊｐ　ＶａｌＭａｌ　ｌ’ｒｏ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｑａ　Ｐ ｒｏτｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　ｕａτｈｒＳ！ｒ　Ｖａｌ　Ｌ＠ｕ　Ｔ ｙｒ　Ｔｙｒ　人ｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　ムｓｎ　ＡＪｎ　Ｖｉｌ　ｌｉｅ　Ｌ ｓｕ　ムｒｇ　Ｌｙｌ　ｌ１ａムｒｇ　ＡＪｎ　ｌｉ＠ｔ　Ｍａｌ　Ｖａｌ　Ｌ ｙｇ　Ａｌａ　Ｃ７Ｓ　Ｇ１７　Ｃ７Ｓ　Ｈ１ｓ１コ０１３５ （２）配列番号９に関する情報 （ｉ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号９ Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　ＨＬｓ　Ｐｒｏ　ＩＪｕ　Ｔｙｒ　ＶａｌＡｌｐ　Ｐ ｈａ　Ｓｅｒ　Ａｌｐ　ｖａｌＧｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｊｎｌ　５　１０　１５ Ａｊｐ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　 Ｈｌｓ　ｕｎ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　ＨＬｓ　ＧｌｙＧｌｕ　Ｃｙｓ　Ｐｒ ｏ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏシｕ　ｕａ　Ａｉｐ　ｌ１ｉｓ　Ｌｅｕ　Ａｉｍ　Ｓｅｒ　 Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｈｌｔ　Ａｎｔ３５　旬　４５ １１ｅ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｎムｓｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｎ　Ａ Ｊ（ｌ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　ｒｌｇ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　ＡｌａＧｌｕ　Ａｊｎ　Ｇ ｌｕ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｊｎ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ａ ＪＰ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ（２）配列番号１０に関する情報 （ｉｉ）分子Ｍ：蛋白質 （ｘｌ）配列：配列番号１゜ Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　５ｉｅｒ　Ａｌａ 　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　馳ｔ　Ｌａｕ　Ｔ７ｒ　Ｌａｕ　ｕｐ６５　７Ｇ　７５　Ｓ 。 Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　ＡＪＰ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　ＶａＸＬｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｊｏ　Ｔ ｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　！ｌｅｃ　’ｉａｌ　Ｗａｌ　Ｇｌ■ （２）配列番号１１に関する情報 （ｉ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｘｌ）配列：配列番号１１ Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　ＵＳ　Ｓｉｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　ムｓｐ　Ｐ ｈｅ　Ｓｅｒ　ムｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　ムｓｐＡＪＰ　Ｔｒｐ　Ｉｌ ｅ　’ｉａｌ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒムｓｐ　Ａｌａ　Ｔｙ ｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｚ　Ｈｌｓ　ＧｌｙＬｙｓ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ 　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｈｉｓ　Ｐｈｅ　ｂｎ　ｓａｒ　Ｔｈｒムｉｎ　Ｈ Ｌｓ　ｕａ”１ＬＩＶａｎ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｎ　Ａｓ＋ｚ　Ａｓ ｎ　Ａｘｎ　Ａｘｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　Ｌｙ■ Ａｌｘ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｘｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ 　Ｓｓｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　１１れシｕ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕムｓ！ＩＡｊｐ　Ｇｉ ｎ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　ムｓｎ　Ｔｙｒ　Ｇｉ ｎ　Ｇｌｕ　五ｅセ　Ｔｈｒ　Ｖｄ（２〕配列番号１２に関する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号１２ （２）配列番号１３に関する情報 （ｉ　ｉ）分子Ｎ：蛋白質 （ｘｉ）配列；配列番号１３ Ｃ’７ｓ　Ｌ、ｙｓ　Ｌｙｓ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　？’７ｒ　Ｖｄ　Ｓｅ ｒ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　ｕｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙτｒｐ　Ｇｈｌ　５　１０　１５ ムｓｐ　Ｔｒｐ　工ｌｓ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔ７ｒ　 ＡムＡｌａ　ＡＪｎＴ）ＩＴ　Ｃｙｚ　ＡＪＰ　Ｇｌｙ（２）配列番号１４に関 する情報 （ｉｉ）分子［：蛋白質 （ｉｆｉ）ハイポセティカル：Ｎ０ （ｉｖ）アンチセンス＝ＮＯ （ｘｉ）配列：配列番号１４ ムｒｇ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　ｌｉｅ　ｕａ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｈｓ　Ｌ ｅｕ　Ａｌａ　ＡＪＩＩＩ　Ｔｙｒ　Ｃｙｇ　Ｇｌｘｒ　Ｇ撃■ Ｇｉｎ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｎ　Ａｌａ　Ｌｓｕ　５ｅｒ　 Ｇｌｙ　５ｅｒＧｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　ＡｌａＬｅｕ　Ａｓｎ　Ｈｌ ｓ　Ａｌａ　Ｖａｌ　ｔＪｕムＴｇ　Ａｌａ　Ｌａｕ　ｍｅｔ　１ｌｉｓ　Ａｌ ａ　Ａｌａ　ｊＬｌａ　Ｐｒｏ　Ｇ１V Ａｌａ　Ａｌｌ　Ａｊｐ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｚ　Ｖａｌ　Ｆｒｏ　 ｍｈムｒｇ　Ｌｅｕ　ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｉｌｓ　５ａｔ６５　７０　７５　ｇ。 （２）　ｌＩｉ！列番号１５に関する情報（ｉ　ｉ）分子種：ペプチド （χＬ）配列：配列番号１５ Ｃｙｓ　ｈａ　Ｘｍ　Ｘ！　Ｘａｘ （２）配列番号１６に関する情報 （ｉ　ｉ）分子１１：　ｃＤＮＡ （ｉｉｉ）ハイボセティカル＝ＮＯ （１ｖ）アンチセンス二Ｎ０ （ｘｉ）配列：配列番号１６ （２）配列番号１７に関する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号１７ Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　ｕａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｓ ｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｕａん＋ｐ　Ｐｈｇ　５ａｒ２０　２５　コ０ Ｌｅｕ　ｈｐ　Ａｊｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　１ｌｉｓ　５ｅｒＳｅｔ　Ｆｂｅ　Ｉ ｈ　五ｉｓ　社ｇムｒｇムｕ　ムｒｇ　５ｅｒＧｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｒｚムｒｇ　 Ｇｌｕ　１１ｅｔ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ 　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　ＬｅｕＰｒｏ　ｌ１ｉｓ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　ｈｘｇ　Ｐｒｏ 　！Ｉｉｓ　Ｌｅａ　Ｇ１１ｌ　Ｇ１７　Ｌｙｘ　Ｈｌｓ　ｋｉｎ　５ｅｒ　Ａ ｈａ　oｒ。 Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　 Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　Ａｈａ　Ｍａｌ　Ｐｈｇ　５ａｒτｈｒ　Ｇｉｎ　Ｇ ｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｓａｔ　Ｌｔｕ　Ｇｌｘｒ　Ａｓｐ　 ５ｅｒ胆ｓ　ＰｂａムｕＴｈｒＡｓｐ　人ユｚ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　Ｍｅ ｔ　Ｓｉｒ　Ｐｈａ　Ｙａｌ　ムｓｎ　Ｌｓｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｈｌｓ　人ｓ ｐ　ＬｙｓＧｌｕ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　五Ｌｓ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｈｌｓ 　Ｈｌｓ　ムｒｇ　Ｇｌｕ　Ｆｂｅ　ムｒｇ　Ｐｈｓ　Ａｓｐ　Ｌ＊ｕＳｅｒ　 Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｕｙ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　 ｍ０ｎ！　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｉｌ＊Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　ｈｓｐ　Ｔｙｒ　 Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｆｈｅ　Ａｓｐ　ｕｎ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒデｈ ｅムｒｇ　Ｚｌｓｌｇｏ　１８５　１９０ Ｓｅｔ　”ｒａｌ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｖｄ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　！［１ｘ 　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｔ　Ａｓｐ　Ｌｅ■ １９５　Ｚｏｏ　２０５ 、ｒＡｒｇ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｓｓｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｌｙ ｓ　Ｇ−ムｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｎムｒｇ　５ｅｒＬｙｓ　Ｔｈｒ　Ｆｒ ｏ　Ｌｙｉ　Ａｊｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　Ａｌ ａム５ｎＶａｌ　Ａｌｚ　Ｇｌｕ３０５　３１０　３１５　３２Ｏ ＡＩＩＩＩＳｅｔ　Ｅａｒ　Ｓｅｔ　Ａ５ｐ　ＧｌＪｌＡｒｇ　ＧｉｎＡｌａ　 Ｃ’／Ｉ　Ｌ７Ｓ　Ｌ７Ｓ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　Ｌｔｕ　Ｔ）窒■ ｖｄ　Ｓｅｒ　Ｐｈ＠ムｒｇ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｇ−ムｓｐτ ｒｐ　工１ｅ　Ｘｌｅ　ｕｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕｏ　３４０　３４５　３５０ Ｇｌｙ　Ｔｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇ ｌｕ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｆｈａ　Ｐｒｏムｕ　ｈｎＳａｒ　Ｔｙｒ　Ｍａｔ　ｕ ｎ　Ａｉａτｈｒムｓｎ　Ｉｒ１ｓ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　”Ｊｄ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ 　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　ＩＩＬｓ３７０　３７５　３ｆｌＯ Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｉ：＋ｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｌｙ ｓ　！’ｒａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　f１ｎ Ｌｅｕ　Ａｊｎ　Ａｌａ　工１ｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｔｙｒ　Ｆｈａ　 人ｓｐ　ムｓｐ　Ｓａｒ　Ｓａｒ　ムｓａ　ＶｎＬ　ｌ１ａＩＪＬＩ　Ｌ７Ｓ　 Ｌ７ｊ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｊｎ　１ｌｅｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　人ｒｇ　人１ｎ 　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃａｒｓ　Ｈｌｓｌ　４２０　４２５　４３０ （２）配列番号１８に関する情報 飄 （ｉ　ｉ）分子櫃：　ｃ（ＩＮＡ （ｉｉｉ）ハイポセティカル二Ｎ。 （ｉＶ）アンチセンス＝Ｎ。 （ｘｉ）配列：配列番号１８ （２）配列番号１９に関する情報 （１１）分子種：蛋白質 （ｘｌ）配列：配列番号１９ １１ｅｔ　ＨＬｓ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　５ｅｒＬｅｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｌａ　 Ａｌａ　Ｐｒｏ　１ｌｉｓ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ａｌ■ ｌ　５　１０　１５ Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　 Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｌ！ムｓｐ　ｔｈｅ　５ａｒＬｅｕ　Ａｓｐ　Ａｓ ｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　ＩＩｓ　）Ｉｉｓ　Ａ ｒｇムｒｇ　Ｌｅｕ＾ｒｇ　５ｅｒ！’ｒｏ　Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ 　Ｐｒｏ　ＨＬ５　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｌ７Ｓ　Ｈｉｓ　Ａ５ｎ　Ｓｅｒ 　Ａｌａ　ＰｒB ＧＩｎ　にｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｓｓｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　 人ｓｐ　Ｓｅｒ　ＨＬｓ　Ｐｈａ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　ム５ｐＬｙｓ　Ｉｌｅ　Ｐ ｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　人１ａ　Ｇ ｌｕ　Ｐｈａ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　ＴｙｒＬｙｓ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　Ａｒ ｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ａ５Ｐ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｇｉ ｎ　Ｉｌｅ　τｈｒＶａｌ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｖｄ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　 Ｈｌｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｓｐムｕ　ＰｈｅＬｅｕ 　Ｌｅｕ　人ｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｓａｒ 　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　１７ｄＰｈｅ　Ａｓｐ　Ｘ１ｅ　 Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　ＡＪｎ　Ｈｌｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　 Ａｘｎ　Ｐｔｏムｒｇ　Ｈ１ＳＡｊｎ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｌｅ ｕ　Ｓａｒ　Ｖａｎ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒシｕ　ｂｐ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｓａｒ　Ｈ ｅＡｇｎＰｒｏ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　ｕａ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ工１ｅ　Ｇａｙ　ｈｘ ＨＢＬｓ　にＡｙ　Ｐｒｏ　にｈ＋　ｕｎ　ＬｙｓＧｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　１ ｉｓｔ　ＶＬＩＡｌｚ　Ｐｈａ　Ｆａｅ　Ｌｙｉ　ｕａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｖｉ ｌ　ｕｓ　Ｌｅｕ　ＡｒｇＳｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　 Ｔｒｐ　ＧＩＪＩＩ　Ａｓｐ　Ｔｒｐ　工１ｅ　Ｉｌｅ　ムユａ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｕ　Ｇ撃■ （２）配列番号２０に関する情報 （１１）分子種：　ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列：配列番号２０ ＧＣＧＧＣＣＡＣＡＧ　ＣＣＧＣＡＣτＧＧＣＧＧＧＴ人ＣＧＧＣＧ　にＣＣＡ ＣＡＧＡＧＧ　ＣＡＴＴＧＧＣＣＣ人　ＧＡＧτＣＣＣＡ（s　２４０ ｃｃ工ｈｃ、ｈ（：；’ｕ　ＧＣＣＣＣＧＧＣｃＴＣＣＡ（ＡＣｘπＧＣＧＴＣ ＣＣ［；ＧＴ　ＣＣｒＣｒＣＣＣ：’ｒｃ　ＣＡＧＧＡＧＣbＡＧ　３００ （２）配列番号２１に関する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２１ Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ａｉａ　Ｌｅｕ　Ｆｒｏ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕτｒｐ　Ｌ ｓｕ　Ｌｅｕ　Ｇ１７　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｃ７５Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｐｔｏ　Ｐｒ ｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｃ７ｓ　Ｐｒ。 Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａムｒｇ　Ｇｌｕムｒｇ　Ａｒ ｇ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　ｌ１ｅＡｌａ　Ａｌａ　Ｓｅｔ 　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｕａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｆｈｅ 　Ｗｅｔ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ６５　７０　７５　ｇ。 Ｔｐ　Ｈｌｓ　Ａｌａ　Ｍａｔ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　ＡＪＰ　Ａｒｐ　Ｊｕｐ　に ｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　ｍａ　Ｇｌｕムｒ８ムｒｇ　Ｌｅｕ　 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｉａ　ムｓｐ　Ｌａｕ　Ｍａｌ　Ｍａｔ　Ｓｅｒ　Ｐｈａ　 Ｖａｌ　ＡＳｎ　Ｍｅセ足Ｚｏｏ　１０５　１１０ Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　にｌｙ　Ｈｌｓ　Ｇｉｎ　 Ｇｌｕ　Ｐｒｏ胆Ｓτｒｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈ＊（２）配列番号２３に関す る情報 （ｉ　ｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２３ Ａｌａ　Ａｌａ　ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　ｄａ　Ｐｒｏ　Ｌ ｅｕ　Ｐｈｅ　Ｆｉｓｔ　Ｌｅｕ＾ｓｐ　Ｌａｕ　Ｔｙｒ！！１ｓ　Ａｌａ　Ｆ ｌｅｅ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｊｐ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　 Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　ムｌａ　Ｕｓ　Ｌａ■ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｈａ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｍｅｔ　５ｅｒ　Ｐｂｅ　 ”ｉｄ　Ａｓ＋ｘ　Ｍｅｔ　Ｖａｎ　Ｇｌｕムｒｇ　ＡＪＰＺｏｏ　１０５　１ ！０ ムｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　ＧＩＪＩＩＧｌｕデｒｏＨ１ｓ　Ｔ ｒｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｆｈｓ　Ｈｌｓ　ｔｈｅ　ＡＪＰ１１ｅ　Ｔｙｒ　Ｌｙ ｓ　Ｇｌｕ　Ｆｒａ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　ｌ１ｉｓ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｊｍ　Ｔ ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｓｕ　Ｈｌｓ　ｌ１■ Ｓｅｒ　Ｆｉｓｔ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｖｄ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｈｌｓ　 Ｓｅｒムｓｎムｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｊｕｐ　ＬｓｕＰｈｅ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ 　ＡＪＰ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　ＴｈｒムＵムｒｇ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｊｕｐ　Ｇｌ ｕ　Ｇｌｙτｒｐ　Ｌａｕｌｌｌｏ　１８５　１９０ Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｊｐ　Ｉｉｅ　Ｔｈｒ　ＪＬＩ！　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ ムｒ８τｒｐ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ａｓ１ｌ　Ｈｌｓ　ＨＬｓｌり５　２００　２ ０５ Ｍｅｔ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　）Ｊｈ　Ｇｕｙムｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｘｒ　Ａｈａ　Ｐｒｏムｒｇ　５ｉｒ（２）配列番号２４に関 する情報 （ｉ　ｉ）分子Ｎ：　ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列：配列番号２４ （２）配列番号２５に間する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２５ Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　 Ａｌａ　Ｖａｎ　Ａｌａ　’Ｗａｇ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　５ｅ■ Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｍｅｅ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｗｅｔ　 Ｐｂｅ　Ｔａｕ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｐｔｏ　Ｐｒ。 Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　工１＊　ＭｅＣＨｉｓ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇ ｌｕ　Ｊｕｐ　Ａｊｐ　Ｌｙｌ　Ｌａｕ　Ａｌｐ　Ｖム１Ｓｅｔ　Ｔｙｒ　Ｃ１ ｕ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｃ１ｕ　Ｐｈｅ　Ｉａｕ　に１７　ＩＩｓ　Ａｌａ　Ｇｌ ｕ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　ｌ１ｉ■ Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｘ　ｌ１ｉｓ　Ｇｉｎ　Ｌａｕ　Ｓｅｒ　ＩＪＧムｒｇ　 Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ｕｎ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　ｔａｕＬｅｕ　Ａｓｐ　Ｖａ ｌ　Ｔｙｒ　１ｌｉｓ　Ａｒｇ　ｌｉｅ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇ ｌｙ　Ｌｇｕ　Ｓｅｒ　Ａａｐ　Ｇｉ■ Ｚｏｏ　１０５　１１０ Ａｊｐ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕムｒｇ　Ｇｌｙ　Ｈ ｌｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒムｒｇムｒｇ　Ｓａｒｕ１Ｌ、ｅｕ　ｕｐ　Ｌｙｓムｒｇ 　ｕａ　ＩＩｓ　ｕｐ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　ＡＪＰ　Ｘ１ａ　ＩＩｓ　Ｍａｔ　Ｔ ｈｒ　Ｐｈｉ　ＬｅｕＡｊａ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　ｌ１ｉＳＨ１ｓ　Ａｓｎ　Ｖａ ｌＡＪＰ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ ムｒｇ　Ｌ４ｕ　Ｔｒｐ　Ｐｈｓ　Ａｓｐ　Ｍａｌ　Ｓａｒ　Ａｊｎ　Ｖａｌ　 Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ａｊｐ　ムｓｎ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌｌｌｌｏ　１！１５ 　１９０ Ｍｅｔ　ＪムＧｌｕ　Ｌａｕムｒｇ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　ｕｎ　Ａｌａ　 ＡｓｎＧｌｕ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓτｒｐ　ＬａｕＴｈｒ　Ａｌａ　Ａｊｎ　Ａｒｇ 　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｉｈ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　′ｒｒｒｕａ　Ｉｌｅ　Ｇ ｌｙτｈｒ　Ｇｌｙ！Ｉｉｓ　Ａｒｇ　Ｓｉｒ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｈ ａ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｌｙｓムｒｇ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　５ｅｒ Ｖａｎ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏム５ｎＡｊｎ　Ｍａｌ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｕ　Ｐｒｏ　１ｌｅｔ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　ＴｈｒＡｒｇＳａｒ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ 　Ｍｅｔ　Ｇｌ！ＩＴｈｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　ｔｉｅ　Ａｓｐ　ｔｈｅ　Ｌｙｓ 　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ！１１ＳＡｊｐ　Ｔｒｐ　１１１１Ｉｌｅ　 ｕｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｐｂａ　Ｔ）ｒｒ　 Ｃｙｓ　５ａｒＧｌｙ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ａｊ＋ｘ　Ｆｈｅ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　胆ｓ　Ｍｅｔ　ｕｎｕｓ　Ｔｈｒ　ＡｉｎＨ１ｓ３８５　、　 ３９０　３９５　４０Ｏ Ａｈａ　Ｉｌｅ　Ｖ＆１Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｈｌｓ　Ｌａｕ　Ｌ ｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｌ　Ｐｒ。 Ｌｙｇ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　ｄａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｒｇムｕ　Ｇｌｙ 　ｈｌｘ　Ｌｅｕデｒｅ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ４２０　４２５　４コ□ （２）配列番号２６に間する情報 （ｉｉ）分子櫂：蛋白質 （ｘｉ）　配列：配列番号２６ ＣＦ３　ＡＩＪＩ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　ｖａｌ　Ａｓｐ 　Ｐｈｅ　ｕｎ　ｈａｐ　Ｉｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　５ａｒＵｕ　Ｔｒｐ　Ｉｌ ｅ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｓ＠ｒ　Ｐｂｅ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｔｙ ｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　ＧｌｙＡｌａ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ 　Ｗｅｔ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ 　Ｈｌｓ　ＡｌａＰｒｏ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　（’ｙｓ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ 　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　剋ｅｔ　Ｓｅｒ　ｓａｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｌａ■ Ｆｈａ　Ｐｈｅ　ＡＪＰ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｊｕｎ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　 Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　”ｉａｌ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ａｉｎ　ｌｌ■■ ｇ５　９０　９５ （２）配列番号２７に関する情報 （ｉｉ）分子壁；蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２７ Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｖａｎ　Ｓｅｒ　 Ｐｈｅムｒｚ　ｕｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙτｒｐ　ＧｉｎＬ　５　１０　１５ ムｓｐτｒｐ　Ｉｌｅ　ＩＩｓ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＴＦ　Ａｉ ｍ　ｕｎ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓムｓｐ　ＧｌｙＧｌｕ　Ｃｙｓ　Ｓｅｔ　ｔ ｈｅ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｊｎ　Ａｌｌ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　Ａｊｎ　Ａｌａ　Ｔ ｈｒ　Ａｊｎ　Ｈｉｓ　Ａｉｍ３５　４Ｑ　４５ Ａｊｐ　ｕｐ　Ｓｅｒ　Ｓａｒ　Ａｊｎ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　ｔａｕ　Ｌｙｓ　Ｌ ｙｓ　ＴｙｒＡｒｇ　Ａｉｍ　Ｍｅｔ　Ｖａｎ　ＶａｎＡｒｇ　Ｓ＠ｒ　Ｃｙｓ 　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｈ１ｓ０Ｏ （２）配列番号２８に関する情報 （ｉｉ）分子種：蛋白質 （ｘｉ）配列：配列番号２日 Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　ムｓｎ　 Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅムｓｐ　Ａｓｐ　Ａ Ｊｎ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｙａｌ　Ｘｌａ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ａ ｒｇ　Ｔｒｐ　Ｍｅｔ　Ｍａｌ　Ｗａ１（２）配列番号２９に関する情報 （Ｉｉ）分子Ｎ：ｆ白質 （ｘＤ配列：配列番号２９ Ｃｙｓ工！ム工ａａ　Ｈｌｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔ）ｒｒ　Ｖａｌ　Ｘｘａ　ｔ ｈｅ工ａａ　ｈｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｘａａｌ　５　１０　１５ Ａｊｐ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　ＩＩｓ　Ａｉｍ　Ｐｒｏ　Ｘｘｈ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　 Ｘｘｘ　Ａｕａ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ、　２０　２５　３ ０ ＧＬｕ　Ｃ７Ｓ　Ｘａａ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｘａａ　５ｅｒＸａＡ　Ｍ ｅｔ　ａｎ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　紅ｎ　Ｈｌｓ　Ａｌａ１１ｅ　１１！　Ｇｉｎ　 Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｈｆｓ　Ｘｈｘ　工ａａ　Ｘａａ　Ｉｒｏ　Ｘａａ　 ズａｘ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　ＬｙｓＸｎａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　ｕａ　Ｐｒｏ　Ｔｈ ｒ　Ｘｘｘ　Ｌｓｕ　Ｘａａ＾ｌａ　Ｘａａ　Ｓｅｒ　ＶａｌＬｅｕ　Ｔ）ｒｒ 　ＸｍＡｓｐ　Ｘａａ　Ｓｅｒ　Ｘａｌ＾ｓｎ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｌａｕ　Ｘａ ａ　Ｌｙｓ　Ｘａａ　Ａｒｇ　Ａｓｎ　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　ｆｉ１（２）　ｆ！列 番号３０に関する情報 （ｉｉン分子分子量白質 （ＸＤＥ列：配列番号３０ ｈａ　Ｍａｔ　Ｘａａ　Ｘｈａ　Ｍａｔ　Ｘａ、ｚ　Ｘａａ工１工人１ムｓｎ１ ｓムｌａ　Ｘａａ工ａａ　Ｘａａ　Ｍａｔ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　ｌ！ａａ　 Ｘａａ工１１工！！　Ｘａａ工１１工ａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　 Ｃｙｓ　Ｘｚａ　Ｐｒ。 （２）配列番号３工に関する情報 （ｉ　ｉ）分子ａｔ：蛋白質 ｃｙｓ　Ｘｓａ　Ｘａｓ　Ｘｍ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　ｈａ・Ｘｍ　Ｘａａ　Ｆｈ＊ 　ムｕムＸｍ　Ｇｌｘｒり一！ａｍ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａムａ　Ｐｒｏ　Ｘ ａａ　ｈａ　Ｘｍ　Ｘｈａ　ＪムＸａａ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｘｍ　に１ｙｈａ　 Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａｚ　Ｐｒｏ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘｈａ　！ａａムａ　Ｈｌ ｍ　Ｘｍ　Ｘａａ　ｍｎ　Ｈｌｓ　ｕｎ！ａａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｐｒ ｏ　！ａａ工ａａ　Ｍａｔ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｍａｔ　Ｘａｎ　Ｘａａ　Ｌａｕ 　ｈａ　Ｘａａ６５　７０　７５　ｇ。 Ｘｘａ　Ｘａｚ　Ｘａａ　Ｘａｉ　Ｘａａ　ＶａＩＸｈ＊　Ｌｓｕ　Ｘａａ工ａ ａ　Ｘａａ　Ｍａｔ　Ｘａａ　ｋｔ　Ｘａｈ　Ｖａ１Ｘａａ　Ｍａｔ　Ｃｙｓ　 Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａｓ（２）配列番号３２に関する情報 （１１）分子種：　ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列：配列番号３２ ＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡ　ＡｆｌＪｕＴＡＡＡＴＧ　ＣＣＧＣにＴＧＧ　１２４７ （２）配列番号３３に関する情報 （ｉＤ分分子種畳量白 質ｘｉ）配列：配列番号３３ Ｍａｔ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｘｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ 　Ｇｌｙ　Ｈｌｍ　ＨＬｓ　Ｌｅｕ　Ｌｓｕ　Ｌａｕ　Ｌａ■ ｔ　５　１０　１５ Ｌａｕ　ｊｕａ　Ｌａｕ　Ｌｓｕ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　 Ｌｅｕ　丁ｈｒ　人ｒｇ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｐｒ。 Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　ｄａ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａ ｌａ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　人ｒｇ　Ａｓｐ　ＧｌｕＰｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌ ｙ　ｕｌＰｒｏ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　 Ｖｉｌ　Ｍａｔτｒｐ　ＡｒｇＴｈｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｖａｎ　Ｔｈ ｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　（７ｓ　ＢＬｓ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅ ｕ　ＧｌｙＱａ　Ａｒｇ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｌｓｕムｒｇ　Ｆｈｅ　ｕｎムｌａ 　ｕｎ　社ａ　Ｊｉｍ　ｍａ　ｕｎ　Ｐｒｏ　Ｃ１ｕＧｌｙ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　 Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　 Ｇｌｙ　ｕｎ　Ｇｌｙ　Ａｌａムｓｐ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｌｅ ｕ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　ＩＪｕ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　ｕａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ 　Ｐｒ。 １ｇ０　１Ｂ５　１９０ Ｐｒｏ　”Ｉｄムｒｇ　Ａｌｎ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　ＩＪｕ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａ ｌａτｒｐ　ｍｈムｒｇ　ｂｎＡｌｈ　５ａｒＴｒｐ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｓａｒ 　Ｌｅｕムｒｇ　Ｌｅｕ　Ａｉａ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｌｓｕムｒｇ　Ｐｒｏムｒ ｇ　Ａｉａ　Ｐｒ。 Ａｌａ　Ａｌａ　Ｃｙ＄　Ａｉａ　Ａｒｇ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｌｌ　 Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　Ｖｄ　Ｔｈｒ　Ａｓｎムｓｐ　Ｐｒｏ　ムｒ ｇ　Ｌｓｕ　Ｃｙｓ　Ｈｌｓ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　ム１１ムｒｇ　Ｐｒｏ　、Ａｒ ｇ　ムｒｇ　ムｓｐ　ムｌｘ　ＧｌｕＰｒｏ　ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｇａｙ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｊａｎ　Ｃｙｓ　Ａｘｇ　Ａｌａムｒｇム ｒｇシＵＴｙｒ　ｌｄ　Ｓｅｒ　Ｐｂ＠　ムｒｇ　Ｇｌｕ　Ｙａｌ　Ｇｌｙ　Ｔ ｒｐ　Ｋｓ　ムｒｇ　Ｔｒｐ　Ｖｄ　Ｉｌｅ　ムｌａ　Ｐｒ。 ムｒｇ　Ｇｌｙ　Ｆｈｅ　Ｌａｕ　ム１１　ムｓｎ　Ｔｙｒ　Ｃ７ｓ　Ｇｌｎ　 Ｇｌｙ　Ｇｈ　Ｃｙｚ　ムｌａ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　１ｍ２９０　２９５　３０Ｇ ムｒｇ’　Ａｌｘ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ｈｌｓ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ 　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　ｕｐ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓコ２５　３コｏ　３ ３５ （Ｊｓ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　 Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｐｂｅ　Ａｓｐ　ＡｓｎＳｅｒ　ＡＪｐ　Ａ Ｊｎ　ＶＬＩＶａｌ　ｌＪｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　１ｌ ｅｔ　Ｖａｎ　Ｖａｌ　ＡＪＰ　ＧｌｕＯＰ　−１，ｎｇ／ｍ１ ＯＰ　−１，ｎｇ／ｍｌ Ｆｉｇ、３ ０　０．１　１　１０　４０　１００ ０Ｐ−１、ｎｇ／ｍｌ 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）１、特許出願の表示　 ＰＣＴ／ＵＳ９３１０７２３１、発明の名称　組織形成因子誘導による神経の再 生と修復３、特許出願人 住　所　アメリカ合衆国　０１７４８マサチューセンッ、ホブキントン。 サウス　ストリート４５ 名　称　クリエイティブ　バイオモレキュルズ、インコーポレイテッド国　籍　 アメリカ合衆国 ４、代理人 住　所　東京都新宿区四谷１丁目２番１号三浜ビル８階 ６、添付書類の目録 （１）　補正書の写しく翻訳文）　１通ここで使用したホモロジーと同一性の計 算には参照配列としてＯＰ〜１を用いた。またここで使用した配列は、ホモロジ ーと同一性の計算のためにＮｅｅｄｌｅａ＋ａｎらの方法（１９７０，Ｊ、Ｍｏ １．Ｂｉｏｌ、４８：４４３−４５３）を使用して配列が並べられ、アラインプ ログラム（ＤＮＡｓｔａｒ、　Ｉｎｃ）で同一性を計算した。金側において、並 べられた時の候補配列中の内部欠落とアミノ酸の挿入は、ホモロジー／同一性計 算を行っている時には無視した。 現在、本発明のモルフオゲンとして有用な最も好ましい蛋白質の配列は、ｈＯＰ ｌの６個の保存されたシスティン骨格（例えば配列表配列番号５の残基４３−１ ３９）で特定されているアミノ酸配列と６０％以上の同−性好ましくは６５％以 上の同一性を持つもつもである。これらの最も好ましい配列は、ショウジョウノ マエ６０Ａ蛋白質を含む０Ｐ−１と０Ｐ−２蛋白質の対立形質型と種変異型の両 方を含む。さらにまた、本発明の別の好ましい観点におし）て、有用なモルフオ ゲンは、ｒＯＰＸ　Ｊとしてここに示した一部アミノ酸配列を有するポリペプチ ド鎖の種類から構成される、活性な蛋白質を含んでいる。このＯＰＸは、ＯＰＩ および０Ｐ２（配列表配列番号２９）の色々な同定された種とホモロジーを持つ 。 本発明の別の好ましい観点において、有用なモルフオゲンは、以下のＤＮ八又は ＲＮ八へ列に厳密なＡ（ブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸に よってコードされるポリペプチド鎖から成る活性蛋白質を含む。このＤＮＡ又は ＲＮ＾Ｎ列配よ、ＯＰｌ又はＯＦ２の保存されるシスティンドメインを特定する Ｃ−末端配列をコードするもので、夫々配列表配列番号１６と２０のヌクレオチ ド１０３６〜１３４１、ヌクレオチド１３９０〜１６９５である。 光測ｊ１０１１礼皿 ここに説明した蛋白質はニューロンの生存性を増強するための有効物質であり、 特に瀕死のニューロンに有効である。そして哺乳類の神経回路を維持するために 有効である。ここに開示したように、これら蛋白質（「モルフォゲン」）は非分 裂性ニューロンの生存性を増強することができ、神経細胞性ＣＡＭの発現を刺激 し、分化したニューロンの表現型発現を維持し、神経由来の形質転換細胞の再分 化を誘導し、そして神経突起の破壊部分、特に遠位軸索の大きなギャップを超え て軸索成長を促進する。さらにまた、この蛋白質は、免疫学的に関係した神経組 織の損傷に伴なう組織破壊作用を緩和するために神経保護作用を与えることがで きる。最後に蛋白質は哺乳動物の神経組織の生存性をモニターするための方法の 一部分として使用できる。 投与および使用方法、複数の限定されない実施例と同様に本発明の方法、組成物 と装置において有用な適切なモルフォゲンの詳細な説明が以下に開示される。１ ）死のリスクを持った神経細胞の生存性を増強し、哺乳動物の神経回路を維持す るための治療剤としてここに説明するモルフォゲンおよびモルフォゲン促進剤の 適合性を説明し、２）モルフォゲンとモルフォゲン促進剤としての候補物質の有 効性を評価する分析方法を提供する。 特にＣＢＭＰ２の転写は、下垂体の発達に伴って間脳の領域で発現することが知 られており、Ｖｇｒ−１のｍＲＮＡは、発達中の神経管の底板にきわめて隣接し た細胞中と同様に、発達中の神経管の上衣板を含む、ＣＮＳの腹背軸で報告され ている。老齢ラットでは、Ｖｇｒ−１のｍＲＮＡが、発達した海馬組織で報告さ れている。さらに０Ｐ−１とＢＭＰ−２を本来的にコードする遺伝子は、ヒト海 馬ｃＤＮ＾ライブラリーをプローブして特定された。 公知技術の一般的な方法とここに一体化されている国際出願ＵＳ９２１０１９６ Ｂ　（Ｗ０９２／１５３２３）の開示内容を用いて免疫組織学的研究は、成長期 と成熟ラットの脳およびをａｍ織の特定の領域に０Ｐ−ＩＮＯ発現が極在化して いることを確認した。公知の先行技術による標準的な抗体のプロトコールを用い て作成し、好ましくは０Ｐ−１アフイニテイーカラムで精製した標準的なモルフ ォゲン特異的抗血清を用いて、特にウサギ抗−ｏｐｉ抗血清を用いて、特異的に ０Ｐ−１蛋白質の発現が、成熟（２−３力月齢）マウスおよび５−６日齢胎児性 神経組織で評価されている。抗体それ自身は標準的な蛍光ラベル化技術を用いて ラベルし、あるいはラヘル化抗つサギＩｇＧ分子が結合０Ｐ−１抗体を視覚化す るために用いられている。 免疫染色によって成熟ラット中枢神経系（ＣＮＳ）に０Ｐ−１の存在を示すこと ができる。同一のそして広い範囲に染色が、脳（１＾）とを髄（ＩＢ）に認めら れた。 特に間脳の外成長が発達しなかった。さらに心臓は奇形化した。 さらにまた、ラベル化した０Ｐ−１特異的抗体を用いて胚の断面の免疫組織学的 研究方法で分離したところ、０Ｐ−１特異的抗体は神経上皮に分布した。 神経細胞に作用する内因性モルフォゲンは、神経組繊細胞例えばニューロン及び ／またはニューロンに結合するダリア細、胞によって発現し分泌され、脳を髄液 および／または血流によってニューロンへ移送される。最近、０Ｐ−１はヒト血 液中に確認された（下記実施例９）。さらに、最近になって移送されたシュワン 細胞が、少なくとも、いくつかの新しい神経突起の周辺に管腔形成とミニリン鞘 形成誘導することを含む、ラットを髄の神経繊維形成を促進することが発見され た（Ｂｕｎｇ、１９９１．Ｅｘρ。 Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、１１４：２５４−２５７）　、これらの細胞の再生能力は シュワン細胞によるモルフォゲンの分泌によって媒介させることができる。 異質の基底節の機能不全は、インビボではハンチントンｎ踏病とパーキンソン病 に関係している。ここで説明するニューロンの生存性を増強できるモルフォゲン の機能は、このモルフォゲンがニューロパシまたは化学的、物理的傷害のため、 インビボで、瀕死の神経性細胞の生存性を増強する治療の一部分として有用であ ることを明示している。臨床応用のためには、モルフォゲンを投与するか、ある いはまたモルフォゲン産生刺激剤を投５することができる。 実施例４．形］１云狽−虹艷（２）モルフォゲン量禾　１分化ここに述べたモル フォゲンは形質転換細胞を、非形質転換細胞に特徴的な形態学的特性への再分化 を誘導する。特にモルフォゲンは神経由来の形質転換細胞を非形質転換ニューロ ンの形態学的特性への再分化を誘導することができる。神経由来の形質転換ヒｌ −ＮＧ１０８−１５株の再分化を誘導したモルフォゲンについて、以下に示す実 施例で詳細を説明する。また形質転換細胞のモルフォゲン誘導再分化はマウス神 経芽腫細胞（ＮＩＥ−１１５）およびヒト胎児カルシノーマ細胞についてである （国際出願ＵＳ９２１０１．９６Ｂ（讐０９２／　１５３２３）を参照）。 請求の範囲 １、瀕死の神経細胞の生存性を増強するか、あるいは哺乳動物の神経経路を維持 するか、神経由来の形質転換細胞の再分化を誘導するための薬剤の調製のための 全ての目的に対して、形態形成活性を有し、かつ、次のようなそれぞれのアミノ 酸配列の一対のポリペプチドからなる二量体蛋白質からなるモルフォゲンの使用 。 （ａ）　ヒト０Ｐ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残基３Ｂ−１３９と少なくとも７０χアミノ酸配列のホモロジーを持つ配列 （ｂ）−設配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ２、瀕死の神経細胞の生存性を増強するか、あるいは哺乳動物の神経経路を維持 するか、神経由来の形質転換細胞の再分化を誘導するための薬剤の調製のための 全ての目的に対して、形態形成活性を有し、かつ、次のようなそれぞれのアミノ 酸配列の一対のポリペプチドからなる二量体蛋白質からなるモルフォゲンをコー ドする遺伝子の発現を刺激する物質の使用。 （ａ）　ヒト０Ｐ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残基３８−１３９　と少なくとも７０ｚアミノ酸配列のホモロジーを持つ配 列 （ｂ）　−１１配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列 表配列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件 でハイブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ３、上記モルフォゲンボリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ヒト０Ｐ−１ のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残基３Ｂ−１３９ と少なくとも８０χのアミノ酸配列のホモロジーを持つ配列からなる請求項１又 は２の使用。 ４、上記モルフォゲンボリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ヒトｏｐ−ｉ のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残基３８−１３９ 　と６０％以上の　アミノ酸配列の同一性を持つ配列からなる請求項１又は２の 使用。 ５、上記モルフォゲンボリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ヒト０Ｐ−１ のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残３３８−１３９ 　と６５％以上の　アミノ酸配列の同一性を持つ配列からなる請求項１又は２の 使用。 ６、上記モルフォゲンポリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が配列表配列番号 ２９、ＯＰＸによって特定される配列からなるものである請求項１又は２の使用 。 ７、上記モルフォゲンボリペプチドの少なくとも１個のアミノ酸配列が、ヒトｏ ｐ−ｉのＣ末＠７個のシスティンドメイン　配列表配列番号５の残基３８−１３ ９からなものである請求項１又は２の使用。 ８、上記モルフォゲンがヒトｏｐ−ｉ、マウス０Ｐ−１、ヒト０Ｐ−２、マウス ０Ｐ−２，６０Ａ　、、ＧＤＦ−１、ＢＭＰ２八、ＢＭＰ２Ｂ　、　ＤＰＰ　Ｓ Ｖｇｒ−１、Ｖｇｒ−１、Ｂ？ＩＰ３、Ｂ門Ｐ５、ＢＭＰ６のプロドメインのＮ 末端から選択される少なくともＮ末端１８アミノ酸からなる少なくとも１個のプ ロドメインペプチドとコンプレックス化されているものである請求項１への使用 。 ９、上記モルフォゲンが配列表配列番号１６の残基１３６４９２のヌクレオチド 又は配列表配列番号２０の残基１５７−２１１のヌクレオチド配列をもつ核酸と 厳密な条件でハイブリダイズする核酸によってコードされている少なくとも１個 のプロドメインとコンプレックス化されているものである請求項１への使用。 １０、上記モルフォゲンが、ヒト０Ｐ−１、マウス０Ｐ−１、ヒト０Ｐ−２、マ ウス０Ｐ−２，６０Ａ　、、ＧＤＦ−１、ＢＭＰ２Ａ　、　ＢＭＰ２Ｂ　、　Ｄ ＰＰ　、　Ｖｇｒ−１、Ｖｇｒ−１、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５及びＢＭＰ６のプロド メインから選択される少なくともプロドメインペプチドの全長の１個とコンプレ ックス化されているものである請求項１への使用。 １１、上記モルフォゲンが、上記の少なくとも１個のプロドメインペプチドと非 共役的にコンプレックス化されている請求項８．９又は１０による使用。 １２、上記薬剤が、さらに塩基性アミノ酸、洗浄剤又はキャリアー蛋白質からな る、請求項８．９又は１０による使用。 １３、上記モルフォゲンが、脳血液バリアーを越えて上記モルフォゲンの移送を 増強する分子と結合している、請求項１による使用。 １４、神経経路の切断を修復するための器具の構築物において、上記器具が外部 及び内部の表面からなる生体内適合性のある管状のケーシングからなり、上記内 部表面は神経突起を再生することが可能な回路を形成しており、上記器具は神経 回路の切断を覆うために充分な形と広がりをもっており、そして切断された神経 末端をその開口部に受け入れることができて、上記モルフォゲンからなる薬剤を 上記回路内に分布させており、上記切断された神経末端を結合さゼることができ るようにする全ての目的に対して、形態形成活性を有し、かつ、次のようなアミ ノ酸配列を有する一対のポリペプチドからなる二量体蛋白質からなるモルフォゲ ンの使用。 （ａ）　ヒト０Ｐ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残基３８〜１３９　と少なくとも７０χアミノ酸配列のホモロジーを持つ配 列 （ｂ）−Ｃ配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残５１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ＋５．上記薬剤がさらに、インビボで部位において蛋白質を保持するために適し た、生体適合性があり、インビボでの生体吸収性のキャリアーからなる請求項１ 又は１４の使用。 １６、上記キャリアーが、軸索成長の方向性を補助するために構造的に満足でき るものである請求項１５の使用。 １７、上記キャリアーが、ポリマー物質である請求項１５による使用。 １８、上記キャリアーが、ラミニン又はコラーゲンである請求項１５による使用 。 １９、に記キャリアーが、脳Ｍｉ織由来細胞外マトリックスである請求項１５に よる使用。 ２０、形態形成活性を有し、かつ、次のようなそれぞれのアミノ酸配列のポリペ プチドからなる二量体蛋白質からなるモルフォゲンであって、上記モルフォゲン が脳血液バリアーを通過して上記モルフォゲンの移送を増強する分子と結合して なる組成物。 （ａ）　ヒ）ＯＰ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残基３８−１３９　と少なくとも７０χアミノ酸配列のホモロジーを持つ配 列 （ｂ）　−１Ｇ配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列 表配列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１　と厳密な条件でハイブ リダイズするヌクレオチドによってコードされた配列。 ２１、インビボで部位において蛋白質を保持するために適切である、生体内適合 でインビボで生体吸収性のキャリアーに分布されたモルフォゲンであって、上記 モルフォゲンが形態形成活性を有し、かつ、次のようなそれぞれのアミノ酸配列 の一対のポリペプチドを有する二量体蛋白質からなるモルフォゲンからなる組成 物。 （ａ）　ヒト０Ｐ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残基３Ｂ−１３９と少なくとも７ｏχアミノ酸配列のホモロジーを持つ配列 （ｂ）一般配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸とと厳密な条件で ハイブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ２２、上記モルフォゲンポリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ヒト０Ｐ− １のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残基３８−１３ ９　と少なくとも８ｏｚのアミノ酸配列のホモロジーを持つ配列からなる請求項 ２ｏ又は２１の組成物。 ２３、上記モルフォゲンボリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ヒト０Ｐ− １のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残基３８−１３ ９　と６０％以上の　アミノ酸配列の同一性を持つ配列からなる請求項２ｏ又は ２１の組成物。 ２４、上記モルフォゲンポリペプチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ヒトｏｐ− ｉのＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残基３８−１３ ９　と６５％以上の　アミノ酸配列の同一性を持つ配列からなる請求項２０又は ２１の組成物。 ２５、上記モルフォゲンポリベブチドのそれぞれのアミノ酸配列が、ＯＰＸ配列 表配列番号２９、によって特定される配列からなる、請求項２０又は２１の組成 物。 ２６、上記モルフォゲンボリベブチドの少なくとも１個のアミノ酸配列が、ヒ） ＯＰ−１配列番号５の残基３８−１３９のＣ末端７個のシスティンドメインから なるものである請求項２ｏ又は２１の組成物。 ２７、上記−Ｅ／ｌ／７，１−ゲンがヒト０Ｐ−１、マウス０Ｐ−１，ヒト０Ｐ −２、マウス０Ｐ−２，６０Ａ　、、ＧＤＦ−１、Ｂ？ＩＰ２＾、ＢＭＰ２Ｂ　 、　ＤＰＰ　、　Ｖｇｒ−１、Ｖｇｒ−１、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５及びＢＭＰ６の プロドメインのＮ末端から選択される少なくともＮ末＠１８アミノ酸からなる少 なくとも１個のポリペプチドとコンプレックス化されているものである請求項２ ０の組成物。 ２８、上記モルフォゲンが、配列表配列番号１６の残基１３６−１９２のヌクレ オチド又は配列表配列番号２ｏの残基１５７−２１１のヌクレオチド配列を有す る核酸と厳密な条件でハイブリダイズする核酸によってコードされている少なく とも一つのプロドメインとコンプレックス化されている請求項２０の組成物。 ２９、上記モルフォゲンがヒト０Ｐ−１、マウ、２．０Ｐ−１、ヒト０Ｐ−２、 マウス０Ｐ−２，６〇八、ＧＤＦ−１、ＢＭＰ２Ａ　、　ＢＭＰ２Ｂ　、　ＤＰ Ｐ　、、Ｖｇｒ−１。 シｇｒ−１　、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５及びＢＭＰ６のプロドメインから選択される 少なくともプロドメインの全長の一つとコンプレックス化されている請求項２０ の組成物。 ３０、上記モルフォゲンが、上記の少なくとも一つのプロドメインペプチドと非 共役的にコンプレックス化されているところの、請求項２７．２８また２９の組 成物。 ３１、上記組成物が、さらに塩基性アミノ酸、洗浄剤又はキャリアー蛋白質から なる、請求項２７．２８または２９の組成物。 ３２、上記キャリアーが軸索成長の方向性を補助するために構造的に満足できる ものである請求項２１の組成物。 ３３、上記キャリアーが、ポリマー物質である請求項２１による組成物。 ３４、上記キャリアーが、ラミニン又はコラーゲンである請求項２１による組成 物。 ３５、上記キャリアーが、脳組織由来細胞外マトリックスである請求項２１によ る組成物 ３６、内部表面と外部表面からなる生体内適合性の中空性ケーシングからなる器 具であって、上記内部表面は神経突起の再生充分な形と広がりを持ち、切断され た神経の末端を受け入れるための開口部を有し、上記器具はさらに上記回路にモ ルフォゲンが分布されており、上記モルフォゲンは形態形成活性を有し、かつ、 次のようなアミノ酸配列を有する一対のポリペプチドからなる二量体蛋白質から なる、 （ａ）　ヒ）ＯＰ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残基３８−１３９　と少なくとも７ｏχアミノ酸配列のホモロジーを持つ配 列 （ｂ）一般配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ３７、上記モルフォゲンが、インビボでの部位において蛋白質を保持するために 適切である、生体内適合性で、インビボ生体吸収性のキャリアーに分布されたモ ルフォゲンである請求項３６の器具。 ３８、上記ケーシングの外部表面が通常不浸透性である請求項３６．３７の器具 。 ３９、正常で健康な神経細胞の表現形質の特性を発現させるか又は維持するため 神経を細胞を刺激する方法であって、上記方法は上記細胞によって上記表現型の 発現を回復又は維持させるために充分な条件下で上記細胞にモルフォゲンを投与 することであり、上記モルフォゲンは、形態形成活性を有し、次のようなそれぞ れのアミノ酸配列からなる一対のポリペプチドからなる、神経由来細胞の刺激方 法、 （ａ）　ヒト０Ｐ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号 ５の残５３８−１３９　と少なくとも７０χアミノ酸配列のホモロジーを持つ配 列 （ｂ）一般配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ４０、正常又は健康な神経細胞の表現形質の特性を発現させるか又は維持するだ めの方法であって、上記方法は上記細胞によって上記表現型の発現を回復又は維 持させるために充分な条件下で上記細胞にモルフォゲンをコードする遺伝子の発 現を刺激する物質を投与することであり、上記モルフオゲンは、形態形成活性を 有し、次のようなそれぞれのアミノ酸配列からなる一対のポリペプチドからなる 、神経由来細胞の刺激方法、（ａ）　ヒ１−ＯＰ−１のＣ末端側７個のシスティ ンドメインで、配列表配列番号５の残５３８−１３９　と少なくとも７０χアミ ノ酸配列のホモロジーを持つ配列 （ｂ）一般配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（ｃ）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１　と厳密な条件でハイブリダ イズするヌクレオチドによってコードされた配列。 ４１．１記神経由来の細胞が形質転換細胞であり、さらに上記モルフォゲンが正 常で健康な細胞の表現型の特性を回復させるような上記細胞の再分化を誘導する ために、充分な条件の下でモルフォゲンを投与することによる進剤請求項３９の 方法。 ４２、上記表現型が神経突起外成長である請求項４１の方法。 ４３、上記表現型が細胞凝集と細胞接着である請求項４１の方法。 ４４、上記表現型が少なくとも−っの細胞接着分子の出現であり、さらに上記モ ルフォゲンが上記細胞によって上記細胞の接着性分子の生産を誘導するために充 分な条件で投与されているところの請求項３９の方法。 ４５、上記細胞接着分子が神経細胞接着分子である請求項４４の方法。 ４６、上記細胞接着性分子がＮ−ＣＡ？Ｉ異性体又はＬ１異性体であるところの 請求項４５の方法。 ４７、上記神経由来細胞が瀕死の状態にあり、さらにモルフォゲンが上記細胞の 生存性を増強するために充分な条件で投与されている請求項３９の方法。 ４８゜上記神経由来細胞が化学的、機械的損傷によって起こる瀕死の状態にある 請求項４７の方法。 ４９、上記損傷が細胞性毒物に対する露出によってもたらされたものである請求 項４８の方法。 ５０、上記毒物がエタノールである請求項４９の方法。 ５１、上記神経由来細胞が哺乳動物神経組織中にインビボで存在しているもので ある請求項３９．４１．４４．４７の方法。 ５２、上記細胞がニューロンである請求項５１の方法。 ５３、上記細胞が末梢神経系の一部分である請求項５１の方法。 ５４、上記細胞が中枢神経系の一部分である請求項５１の方法。 ５５、上記細胞が線状基底節ニューロンである請求項５４の方法。 ５６、上記細胞が異質ニューロンである請求項５４の方法。 ５７、上記神経由来細胞が哺乳動物神経組織中にインビボで分布しており、さら に上記傷害が神経切断である請求項４８の方法。 ５８．上記モルフォゲンが上記神経の切断に先んじて投与されている５７の方法 。 ５９、上記神経由来細胞が哺乳動物神経組織中にインビボで分布しており、さら に上記神経組織に結合した腫瘍によって瀕死の状態にあるところの請求項４７の 方法。 ６０、上記傷害が転移性である請求項５９の方法。 ６１、上記傷害が神経由来細胞からなる腫瘍によって起こったものである請求項 ５９の方法。 ６２、上記腫瘍が神経芽腫、神経膠芽腫、網膜芽腫である請求項６１の方法。 ６３、上記神経由来細胞が哺乳動物の神経組織中にインビボで分布し、そして神 経回路の部分をなし、さらに上記モルフォゲンが上記回路の維持のために充分な 条件で投与されるところの請求項３９の方法。 ６４、上記神経回路が障害を受けており、さらに上記モルフォゲンが上記障害を 受けた回路を細胞的修復させるために刺激するに充分な条件で投与されていると ころの請求項６３の方法。 ６５、上記モルフォゲンは、上記回路の障害が拡張する前に投与されているとこ ろ、請求項６３の方法。 ６６、上記回路に対する障害が上記細胞の脱ミニリン化である請求項６３の方法 。 ６７、上記神経由来細胞が哺乳動物の神経組織にインビボで分布し、ニューロバ ソーによって瀕死の状態にあるものである、請求項４７又は６３の方法。 ６８、上記ニューロバソが代謝性、感染性、毒物性、自己免疫性、栄養性、虚血 性由来である請求項６７の方法。 ６９、上記ニューロパシーがパーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン ＦＩｖ＠病、多発性硬化症、筋萎縮性遅延性硬化症から選択される疾患である請 求項６８の方法。 ７０、上記ニューロパシーが軸索の退化によるものである請求項６８の方法。 ７１、上記ニューロパシーが脱ミニリン性ニューロパシーである請求項６７の方 法。 ７２、次のステップからなる、試料中の生理学的に適切な濃度で存在するモルフ ォゲン検出するための方法、（ａ）上記試料を、上記試料中に存在することが予 測されるモルフォゲンと特異的に作用して結合性蛋白質１モルフォゲンコンプレ ックスを形成するような結合性蛋白質と、上記試料を接触させる、 （ｂ）上記モルフォゲンが、形態形成活性を有し、次のようなそれぞれのアミノ 酸配列からなる一対のポリペプチドからなる二量体蛋白質からなる上記コンプレ ックスを検出する。 （１）ヒト０Ｐ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５ の残基３８−１３９　と少な（とも７０χアミノ酸配列のホモロジーを持つ配列 、または、 （２）−設配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（３）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ７３、次のステップからなる方法であって、試料中の生理学的に適切な濃度で存 在するモルフォゲン抗体を検出するための方法、 （ａ）上記試料を、上記試料中に存在することが予測されるモルフォゲン抗体と 特異的に作用して結合性蛋白質１モルフォゲンコンプレノクスを形成するような 結合性蛋白質と、上記試料を接触させる、 （ｂ）上記モルフォゲンが、形態形成活性を有し、次のようなそれぞれのアミノ 酸配列からなる一対のポリペプチドからなる二量体蛋白質からなる上記コンプレ ックスを検出する。 （１）ヒトＯＰ−１のＣ末端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５ の残５３８−１３９　と少なくとも７０χアミノ酸配列のホモロジーを持つ配列 、または、 （２）−設配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（３）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 ７４、上記試料が、哺乳動物神経組織からバイオプシーした試料であるむ請求項 ７２又は７３の方法。 ７５、上記試料が哺乳動物の脳を髄液である請求項７２また７３の方法。 ７６、上記試料が哺乳動物血清である請求項７２また７３の方法。 ７７、以下の内容であるキット （ａ）結合性の蛋白質−モルフォゲンコンプレックスを形成するようなモルフォ ゲンに特異的に作用する結合性蛋白質であって上記モルフォゲンが、形態形成活 性を有し、二量体蛋白質及び次のようなそれぞれのアミノ酸配列の一対のポリペ プチドからなる二量体蛋白質かなる結合性蛋白質、（＋）　ヒ）ＯＰ−１のＣ末 端側７個のシスティンドメインで、配列表配列番号５の残基３８−１３９　と少 なくとも７０′＆アミノ酸配列のホモロジーを持つ配列、または、 （２）−設配列６で配列表配列番号３１によって特定される配列（３）配列表配 列番号１６のヌクレオチド残基１０３６−１３４１を持つ核酸と厳密な条件でハ イブリダイズする核酸によってコードされた配列。 （ｂ）上記コンプレックスを検出する手段。 ７８、上記モルフォゲンが、さらに次のモルフォゲンプロドメインポリペプチド の少なくとも一つからなっているものであって、 （ａ）　ヒト０Ｐ−１，７ウスｏｐ−ｉ、ヒト０Ｐ−２、マウス０Ｐ−２，６０ Ａ　、　ＧＤＦ　−Ｌ　ＢＭＰ２Ａ　、　ＢＭＰ２Ｂ　、　ＤＰＰ　、　Ｖｇｒ −１、シｇｒ−１　、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５、Ｂ門Ｐ６のプロドメインのＮ末端か ら選択されるＮ末端１８アミノ酸、あるいは （ｂ）配列表配列番号１６の残基１３６−１９２又は配列表配列番号２ｏの残基 １５７−２１１のヌクレオチド配列を含む核酸と＠密な条件下でハイブリダイズ する核酸によってコードされているペプチド、そして上記結合性蛋白質は特異的 に上記プロドメインポリペプチドによってエピトープとして認識されているとこ ろの請求項７７のキット。 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号ＧＯＩＮ　３３１５０　 Ｔ　７０５５−２Ｊ３３１５３　Ｄ　７０５５−２Ｊ （３１）優先権主張番号　０４０，５１０（３２）優先臼　１９９３年３月３１ 日（３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。 ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＰＴ、　Ｓ Ｅ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　Ｍ Ｌ、　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。 ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ。 ＣＨ，ＣＺ、　ＤＥ、　ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ 、　ＫＲ，ＬＫ、　ＬＵ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、　ＮＺ、 　ＰＬ、　ＰＴ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＥ。 ＳＫ、ＵＡ （７２）発明者　クベラサムパス、サンゲーベルアメリカ合衆国　０２０５３　 マサチューセッツ、メトウェイ、スプリング　ストリートシックス ＦＩ Ａ６１Ｋ　３７１０２　ＡＡＭ （７２）発明者　オバーマン、バーマンアメリカ合衆国　０２０５３　マサチュ ーセッツ、メトウェイ、サマー　ヒル　ロード（７２）発明者　オズカイナック 、エンジンアメリカ合衆国　０１７５７　マサチューセッツ、ミルフォード、パ ーデユー　ドライブ躬 （７２）発明者　パンダ、ロイ　エッチ、エル。 アメリカ合衆国　０３７５０　ニューハンプシャー、エトナ、バートリッジ　ロ ード１５（７２）発明者　コーエン、チャールズ　エム。 アメリカ合衆国　０２０５３　マサチューセッツ、メトウェイ、ウィンスロブ　 ストリート　９８

Claims (93)

【特許請求の範囲】
1. １．瀕死の神経細胞の生存性を増強するための薬剤の生産へのモルフォゲンの使 用。
2. ２．瀕死の神経細胞の生存性を増強するための方法であって、上記細胞の生存性 増強のために充分な時間と濃度で上記細胞にモルフォゲンを供給することからな る方法。
3. ３．上記細胞が、上記細胞からなる神経組織に対する化学的または機械的損傷の ため瀕死の状態にあるところの請求項１または２の発明。
4. ４．上記損傷が神経切断からなる請求項３の発明。
5. ５．上記モルフォゲンが上記損傷に対して先に上記細胞に供給されている請求項 ３の発明。
6. ６．上記損傷が上記細胞の脱ミエリン化によるものである請求項３の発明。
7. ７．上記損傷が細胞性毒物に対して上記細胞が露出したことによるものである請 求項３の発明。
8. ８．上記毒物がエタノールからなる請求項７の発明。
9. ９．上記細胞がニューロパシーのため瀕死の状態にあるところの請求項１または ２の発明。
10. １０．上記ニューロパシーの病因が代謝、感染、毒物、自己免疫、栄養、虚血性 である請求項９の発明。
11. １１．上記ニューロパシーが、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性 側索硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病である請求項１０の発明。
12. １２．上記細胞が上記細胞からなる神経組織に関連した腫瘍性病変のため死のリ スクにあるところの請求項１または２の発明。
13. １３．上記病変が神経由来の細胞からなる腫瘍によりもたららされたものである 請求項１２の発明。
14. １４．上記腫瘍が神経芽細胞腫または網膜芽細胞腫ある請求項１３の発明。
15. １５．上記病変がダリア細胞からなる腫瘍からもたらされたものである請求項１ ２の方法。
16. １６．上記瀕死の細胞が中枢神経系の部分からなるるところの請求項１または２ の発明。
17. １７．上記細胞が線条体基底神経節ニューロンからなる請求項１６の発明。
18. １８．上記細胞が黒質ニューロンからなる請求項１６の発明。
19. １９．瀕死の細胞が末梢神経系の部分である請求項１または２の発明。
20. ２０．上記モルフォゲンが上記細胞において細胞接着分子の生産を促進させると ころの請求項１または２の発明。
21. ２１．上記細胞接着分子が神経細胞接着分子である請求項２０の発明。
22. ２２．神経細胞接着分子が、Ｎ−ＣＡＭ−１２０、Ｎ−ＣＡＭ−１４０、Ｎ−Ｃ ＡＭ１８０からなる群から選択されたものであるである請求項２１の発明。
23. ２３．上記モルフォゲンが、ＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，ＶｇＩ（ｆｘ） ，Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる 群から選択された配列の一つと少なくとも７０％のアミノ酸配列ホモロジーを有 しているものからなる請求項１または２の発明。
24. ２４．上記モルフォゲンが、ＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ） ，Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ）．６０Ａ（ｆｘ）からなる 群から選択された配列の一つと少なくとも８０％のアミノ酸配列ホモロジーを有 しているものからなる請求項２３の発明。
25. ２５．上記モルフォゲンが、配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３ ９で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列か らなるものである請求項２４の発明。
26. ２６．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項２５の発明。
27. ２７．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列であって対立形質遺伝子および種変異体を含むものからなるも のである請求項２２の発明。
28. ２８．哺乳動物の瀕死の状態にある神経細胞の生存性を増強するための方法であ って、内因性モルフォゲンの生産を刺激することのできる物質の有効量を上記哺 乳動物に投与するステップからなる方法。
29. ２９．上記物質が上記神経細胞からなる組織の内因性モルフォゲンの生産を刺激 するところの請求項２８の方法。
30. ３０．哺乳動物の神経回路を維持するために充分な時間と濃度で上記経路を特定 するニューロンにモルフォゲンを供給することからなる神経回路維持のための方 法。
31. ３１．上記モルフォゲンがあらかじめ上記回路に傷害に対して供給されている請 求項３０の方法。
32. ３２．上記モルフォゲンが損傷した神経回路の修復促進のために充分て供給され ている請求項３０の方法。
33. ３３．上記損傷した神経回路が上記回路に対して物理的化学的損傷により起こっ たものである請求項３２の方法。
34. ３４．上記損傷が神経切断である請求項３３の方法。
35. ３５．上記損傷が上記回路で特定されるニューロンの脱ミエリン化である請求項 ３３の方法。
36. ３６．上記損傷が細胞性毒物に対して、上記回路で特定する細胞の露出からおこ るものである請求項３３の方法。
37. ３７．上記毒物がエタノールである請求項３６の方法。
38. ３８．上記ダ損傷した神経回路が上記回路で特定される細胞のニューロパシーか らもたらされたものである請求項３０の方法。
39. ３９．上記ニューロパシーの病因が代謝、感染、毒物、自己免疫、栄養、虚血性 である請求項３８の方法。
40. ４０．上記ニューロパシーが、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性 遅発性硬化症、多発性硬化症、アルツハイマー病である請求項３９の方法。
41. ４１．上記ニューロパシーが軸索の変性である請求項３８の方法。
42. ４２．上記ニューロパシーが脱ミエリン化ニューロパシーである請求項３８の方 法。
43. ４３．上記損傷した神経回路が腫瘍性病変によるものである請求項３０の方法。
44. ４４．上記腫瘍性病変が神経芽腫またはグリオマーによっておこるものである請 求項４３の方法。
45. ４５．上記モルフォゲンが上記回路で特定される細胞において細胞接着分子の生 産を促進させるところの請求項３０の方法。
46. ４６．上記細胞接着分子が神経細胞接着分子であるところの請求項４５の方法。
47. ４７．神経細胞接着分子がＮ−ＣＡＭ−１２０、Ｎ−ＣＡＭ−１４０、Ｎ−ＣＡ Ｍ１８０からなる群から選択されたものであるである請求項４６の方法。
48. ４８．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも７０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項３０または４５の方法。
49. ４９．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも８０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項４８の方法。
50. ５０．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項４９の方法。
51. ５１．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項５０の方法。
52. ５２．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義されたアミノ酸配列であって、その対立形質および種変異体を含むものか らなるものである請求項５１の方法。
53. ５３．上記モルフォゲンが配列表配列番号１６のヌクレオチド１０３６−１３４ １または配列表配列番号２０のヌクレオチド１３９０−１６９５まで定義された ＤＮＡ配列と厳密な条件でハイプリダイズする核酸によってコードされたポリペ プチド鎖からなるものである請求項１、２、３０または４６の発明。
54. ５４．上記モルフォゲンが、モルフォゲンファミリーまたは対立型、種特異型ま たはその他配列の変異体のプロドメインからなるペプチドとコンプレックスを形 成した二量体蛋白質種からなるものである請求項１、２、２６、３０、４５また は５１の発明。
55. ５５．上記二量体モルフォゲンが、上記ペプチドと非共有的に結合したものであ る請求項５４の発明。
56. ５６．上記二量体モルフォゲンが、上記の２ペプチドと結合したものである請求 項５４または５５の発明。
57. ５７．上記ペプチドが少なくとも、上記プロドメインドメインを特定する配列の 少なくとも最初の１８アミノ酸からなる請求項５４または５５の発明。
58. ５８．上記ペプチドが上記プロドメインの全長型である請求項５７の発明。
59. ５９．上記ペプチドが配列表配列番号１６のヌクレオチド１３５−１９２または 配列表配列番号２０のヌクレオチド１５７−２１１で定義されたＤＮＡ配列と厳 密な条件でハイプリダイズする核酸によってコードされたポリペプチド鎖からな るものである請求項５４または５５の発明。
60. ６０．上記コンプレックスが塩基性アミノ酸、界面活性剤、キャリアー蛋白質で 安定化されているものである請求項５４または５５の発明。
61. ６１．神経回路を特定する細胞に内因性モルフォゲンの生産を促進させることが できる物質の有効量を哺乳動物に投与することからなる哺乳動物で神経回路を維 持する方法。
62. ６２．以下のことからなる哺乳動物の損傷部位に神経回路の再生を促進させるた めの組成物； インビボでその部位に蛋白質を保持させるために、適切な生体内適合性、生体内 吸収性キャリアーおよび、上記キャリアーに散布し上記損傷部位に供給した時上 記のモルフォゲンのようなモルフォゲンが上記部位に神経回路の再生促進させる 。
63. ６３．上記キャリアーが軸索の成長の方向性を助けるために構造的に充分である ところの請求項６２の組成物。
64. ６４．上記キャリアーが高分子材料である請求項６３の組成物。
65. ６５．上記キャリアーがラミニンまたはコラーゲンである請求項６３の組成物。
66. ６６．神経回路の切断部を修復するための器具であって下記の内容からなる器具 ： 生体内適合性のあるチューブ状ケーシングが内部表面と外部表面にあり神経突起 が再生する回路を特定し、上記器具はなめらかで神経経路の切断を覆うために充 分な容積を持ち、切断神経の末端をその開口部に受人れ、そして上記チューブ状 管によって特定できる回路にモルフォゲンを散布し、神経経路の切断を特定する 切断された神経を補助し、モルフォゲンが神経経路の再生を促進するように、上 記回路に配置した場合に上記神経末端を補助することができる。
67. ６７．上記モルフォゲンが、インビボでの部位に蛋白質を保持するために適した 生体内適合性、生体内吸収性キャリアーと共に上記導管に散布されるところの請 求項６６の器具。
68. ６８．上記キャリアーが、上記導管内で軸索成長の方向性を補助するための充分 な構造をとるところの請求項６７の器具。
69. ６９．上記ケーシングの外部表面が基本的に不浸透性である請求項６７の器具。
70. ７０．上記キャリアーがポリマーである請求項６６の器具。
71. ７１．上記キャリアーがラミニンまたはコラーゲンである請求項６７の器具。
72. ７２．神経由来の形質転換細胞の細分化を誘導するための方法であって、下記の ステップからなる方法：非形質転換神経細胞に特徴的な形態へ上記細胞の再分化 を誘導するために充分な濃度と時間モルフォゲン組成物を上記形質転換細胞に接 触させる。
73. ７３．上記非形質転換神経細胞に特徴的な形態が神経突起の外成長の形成を含む 請求項７２の方法。
74. ７４．上記非形質転換神経細胞に特徴的な形態が細胞凝集と細胞接着を含む請求 項７２の方法。
75. ７５．上記モルフォゲン組成物が上記細胞において神経細胞接着分子の生産誘導 である請求項７２の方法。
76. ７６．上記誘導神経細胞接着分子がＮ−ＣＡＭ−１８０、Ｎ−ＣＡＭ−１４０、 Ｎ−ＣＡＭ−１２０請求項７２の方法。
77. ７７．上記形質転換細胞がニューロブラストーマである請求項７２の方法。
78. ７８．哺乳動物のニューロバシーの検出のためと哺乳動物のニューロパシーを処 置するための治療の有効性の評価とのキットであって、以下からなるキット： ａ）哺乳動物から得られた細胞または体液サンプルを採取するための手段； ｂ）結合蛋白質一モルフォゲンコンプレックスの形成のために上記サンプルにモ ルフォゲン特異的に結合する結合蛋白質；ｃ）上記コンプレックス検出手段
79. ７９．上記結合蛋白質がモルフォゲンのプロドメインの一部または全部によって 特定されたエビトープに特異性を有している請求項７８のキット。
80. ８０．哺乳動物のニューロパシーを検出するための方法であって、以下のステッ プからなる方法； 上記哺乳動物血清または脳脊髄液中のモルフォゲンの生理学的濃度の変動を検出 し、上記変動を神経細胞死の増加の指標とする。
81. ８１．哺乳動物のニューロパシーを検出するための方法であって、以下のステッ プからなる方法： 上記哺乳動物血清または脳脊髄液中のモルフォゲン抗体のタイターの出現濃度の 変動を検出し、上記変動を神経細胞死の増加の指標とする。
82. ８２．上記ニューロパシーが神経変性疾患、神経脱ミエリン化、ミエリン機能不 全、神経性腫瘍、神経損傷等によるものである請求項７８、８０または８１の発 明。
83. ８３．以下のステップからなる組織中の細胞接着分子の生産促進の方法 上記組織の細胞の細胞接着性分子の生産を誘導するために充分な濃度と時間上記 組織にモルフォゲンを供給する。
84. ８４．上記細胞接着性分子が神経細胞接着分子である請求項８３の方法。
85. ８５．上記細胞がニューロンである請求項８４の方法。
86. ８６．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＯＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも７０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項７８、８０または８１の方法。
87. ８７．上記モルフォゲンがＯＰ−１，ＯＰ−２，ＣＢＭＰ２，Ｖｇｌ（ｆｘ）， Ｖｇｒ（ｆｘ），ＤＰＰ（ｆｘ），ＧＤＦ（ｆｘ），６０Ａ（ｆｘ）からなる群 から選択された配列の一つと少なくとも８０％のアミノ酸配列ホモロジーを有し ているものからなる請求項８６の方法。
88. ８８．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６０％以上のアミノ酸配列の同一性を持つアミノ酸配列から なるものである請求項８７の方法。
89. ８９．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義された配列と６５％以上のアミノ酸配列の同一性を待つアミノ酸配列から なるものである請求項８８の方法。
90. ９０．上記モルフォゲンが配列表配列番号５（ｈＯＰ−１）の残基４３−１３９ で定義されたアミノ酸配列であって、その対立形質および種変異体を含むものか らなるものである請求項８９の方法。
91. ９１．上記モルフォゲンが配列表配列番号１６のヌクレオチド１０３６−１３４ １または配列表配列番号２０のヌクレオチド１３９０−１６９５まで定義された ＤＮＡ配列と厳密な条件でハイプリダイズする核酸によってコードされたポリペ プチド鎖からなるものである請求項７８、８０または８１の方法。
92. ９２．脳血液関門を通過する上記モルフォゲンの移送を促進することのできる分 子に結合したモルフォゲンからなる、瀕死の神経細胞の生存性を増強するための 組成物。
93. ９３．上記キャリアーが脳組織由来細胞外マトリックスである請求項６２または ６７の発明。