JPH07503488A - 血小板凝固抑制剤および脳必須脂肪酸欠乏症治療薬として用いられるポリ不飽和脂肪酸，特に，ドコサヘキサエン酸をベースとした医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 血小板凝固抑制剤および脳必須脂肪酸欠乏症治療薬として用いられるポリ不飽和 脂肪酸、特にドコサヘキサエン酸をベースとした医薬本発明はポリ不飽和脂肪酸 、特にドコサヘキサエン酸（ＤＨＡまたは２２：６ｎ−３ともよばれる）をベー スとした新規な医薬に関するものである。

神経組織には必須ポリ不飽和脂肪酸が極めて豊富に含まれているということ（ｌ 、２）、特にＤＨＡは灰白質のホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の脂肪 酸の２４％を占めているということは知られている（３）。

このポリ不飽和脂肪酸は脳の正常な発達に最も重要な役割を果している（４）。

すなわち、脳の発達期にこの必須不飽和脂肪　′酸の供給が欠乏°したり、代謝 に異常があると、ヒトの髄鞘形成に悪影響がでる（ｌ、５）。特にｎ−３族の脂 肪酸の脂肪酸の供給欠乏は出生前または出生後のγカゲザル（６，７）およびそ の他の動物（８）での網膜および脳の発達異常の原因になることが分かっている 。この脂肪酸は若いラットの学習能力にも関係していると考えられる（９．１０ ）。脳は２２：６ｎ−３すなわちＤＨＡの前駆体１８：３ｎ−３を蓄積しない（ １４，１５）　、すなわち、脳は１８：３ｎ−３を２２：６ｎ−３へ転化するの に必要な延長・飽和化酵素を有しており（１１）、また、脳に不飽和酸よりエス テル化されていない脂肪酸を取り入れ易いので肝臓で作られて血漿アルブミンに 固定された２２：６ｎ−３を取り入れることができる。

ポリ不飽和脂肪酸は古くから研究されており、必須ポリ不飽超酸を栄養分として 摂取したり、投与可能な調製物の形にして種々の経路で生物に直接与えることは 既に提案されている。すなわら、１８：３ｎ−３、アラキドン酸、２２：６ｎ− ３等の必須ポリ不飽和酸を与えた場合の利点がいくつかの文献に記載されている 。一般にはポリ不飽和酸の混合物として調製され、特にトリグリセリド、リン脂 質および非エステル化状態で調製される。

これらの文献の中には必須ポリ不飽和脂肪酸をリン脂質の形で投与するのが重要 であるとしているものもある。

エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ−３）および２２：６ｎ−３酸に富んだ食事 をすれば心臓血管疾患の発生率が減ることは分かっている（１６）。しかし、こ れらの脂肪酸がなぜ優れた効果を示すのかの機構は解明されていない。これらの ポリ不飽和脂肪酸の血小板機能に対する作用に焦点を当てた研究は多数行われて いる。

これらの脂肪酸は他のシス不飽和脂肪酸と同様に極めて多様な血小板活性化因子 （この血小板活性化因子のＵ　４６，６１９はトロボキサン（ＴＸＡ、）および プロスタグランジンＨ，（ＰＧＩ（、）受容体の拮抗剤である）によって誘導さ れる血小板の凝固を阻害するということが分かっている　（１７−２３）。２０ ：５ｎ−３および２２　：　６ｎ−３の阻害作用は複数のレベルで見られる（１ ７−１９．２４−２７）。

また、エステル化されていない２０：５ｎ−３および２２：６ｎ−３はＵ　４６ ，６１９によって誘導される血小板の凝固と、洗浄血小板でのＵ　４６．６１９ の特異的結合とを競争的に阻害することが分かっている（２８）。血小板リン脂 質貯蔵で２０：５ｎ−３および２２　：　６ｎ−３がアルブミンによってインビ トロを導入すると、Ｕ　４６．６１９に応答する血小板の凝固性は失われ、この 受容体に対する拮抗剤の親和性が小さくなる（２９）。この研究で２０：５ｎ− ３と２２　：　６ｎ−３の大部分をリン脂質中でエステル化していたら、観察さ れた作用はこれらの脂肪酸の他の脂質成分が増加した結果であると解釈されてい たかもしれない。２０：５ｎ−３および２２：６ｎ−３はトロンビンおよびイオ ンポア八２３１８７　（ＴＸＡ、　／ＰＣＩＩ□受容体を介入させない濃縮で使 用される）によって誘導される血小板の凝固に影響しないので、ＴＸＡ、／ＰＧ Ｈ２受容体に対する作用は選択的である（２９）。また、これらは、一定の構造 上の類似性を示す血小板膜のアドレナリン作動性−α２受容体へのヨヒンビンの 結合を変えない（３０）。テストした脂肪酸の中では、２０：５ｎ−３と２２＋ ６ｎ−３のみが血小板全体（２９）または可溶化された血小板膜（３０）のＴＸ Ａ、／ＰＧＨ２受容体を部位特異的に変える。２２：６ｎ−３の効果は２０：５ ｎ−３を上回っている。

魚から得られる５ｎ−２位にドコサヘキサエン酸を有する「天然」のホスファチ ジルコリン（ＰＣＤＨＡｎ）を用いた抗コレステロール剤、抗トロンビン剤、血 小板凝固防止剤はニシザヮ達の日本国特許第ＪＰ−＾−６４−５０，８９０号（ ３１）に記載されている。

ＰＣＤＨＡｎを抗腫瘍剤としての使いることはヒビノ達の日本国特許第願第ＪＰ −Ａ−１−１６０，９８９号（３２）に記載されている。

本発明は極めて大きな効果を示す必須ポリ不飽和脂肪酸をベースとした新規な医 薬を提供する。本発明の１つの目的は極めて有効な抗トロンボキサンＡ２作用を 有する新規な医薬を提供することにある。

本発明の別の目的は、脳内へ高い効率で必須脂肪酸を取り入れることが可能な新 規な医薬を提供することにある。

本発明は、驚くことに、２２＋６ｎ−３またはＤＨＡの上記用途での効能は、他 の形のリン脂質、特にホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）を除いたフォス ファチジルコリン（ＰＣ）でのそのエステル化によるものでなければならないと いうことを見い出した。このことは抗トロンボキサンＡ２剤の用途でも、脳へ運 ばれる必須ポリ不飽和アミノ脂肪酸源としての用途でも同じである。さらに、こ の形のＤＨＡの効果はホスファチジルコリン（ＰＣ）の形のものを含むリノール 酸（１８：２ｎ−６）のような他の必須脂肪酸よりも高い。

長鎖の脂肪酸を含む天然ホスファチジルコリンを骨を経由した投与は消化が遅い という問題があり、また、静脈経由の投与は多くの場合望ましくない。

従って、本発明の他の重要な目的は経口投与で極めて有効に投与でき、しかも、 大きな効能で受容細胞へ配分可能な上記に対応する医薬を提供することにある。

本発明の対象は、下記化合物からなる群の中から選択される少なくともＩＮの化 合物を治療に有効量含むことを特徴とする必須アミノ酸をベースとした新規な医 薬にある：（１）ｓｎ−２位をエステル化したリソ（Ｉｙｓｏ）ホスファチジル コリン（リソ−ＰＣＤＨＡ）の形のＤＨＡ （２）ＤＨＡが５ｎ−２位でエステル化され、５ｎ−１位に長さの極めて短いア シル基を有するＤＨＡ−ホスファチジルコリン（ここではこれらの化合物をＰＣ ＤＨＡｓとよぶことにする）（３）ＤＨＡが５ｎ−２位でエステル化され、５ｎ −１位と５ｎ−３位に長さの極めて短いアシル基を有するトリグリセリド長さの 極めて短いアシル基とは２〜６個の炭素原子を有するアシル基、主としてアセチ ルを意味し、場合によってはプロピオニル基、ブチリル基を意味する。

本発明の医薬で用いられる化合物は合成時に５ｎ−１位（トリグリセリドの場合 には５ｎ−３位も）がアシル化される。

本発明の医薬は、ホスファチジルコリンのｓｎ　−２位をエステル化した脂肪酸 中に少なくとも７０％のＤＨＡを含むか、治療に有効な量、好ましくは１０％以 上のトリグリセリドを含むのが好ましい。

好ましい実施例の医薬組成物は純粋なもの、すなわち、ポリ必須不飽和脂肪酸源 として上記の化合物のみしか含まないものである。

大脳内固定で好ましい実施例の医薬は、リソホスファチジルコリン（リソ−ＰＣ ＢＨＡ）の形のエステル化されたＤＨＡ、好ましくは、５ｎ−２位がエステル化 されたポリ不飽和必須脂肪酸中に少なくとも７０％のＤ　Ｍ　Ａを有するものを 有効成分として、１０％以上含んでいる。。

本発明の医薬の各投与量は、治療に有効な量のＰＣＤＨＡｓまたはリソ−１’ｃ Ｄｌｌ八　を含んでいる。

本発明の他の対象は、上記化合物を用いた血小板凝固抑制作用を有する医薬、特 にアテローム病（ａｔｈｅｒｏｍａｔｅｕｓｅ）を含む心臓血管疾患の予防また は治療用医薬にある。

本発明のさらに他の対象は、上記の化合物を用いた脳内必須脂肪酸の不全または 欠乏、特に未熟児、乳幼児、栄養衰微患者および老人での脳内必須脂肪酸の不全 症または欠乏症の治療用医薬にある。

本発明の医薬は経口または非経口、特に経静脈または経直腸投与、その他の任意 の投与方法、特に、眼科用の点眼薬の形で投与することができる。

経口投与用調製物は公知の任意の賦形剤またはビヒクル、例えば必須脂肪酸の投 与に現在使用されているものを含むことができ、粉末、顆粒、溶液、その他の形 態にすることができる。

場合な場合には他の有効成分と混合することもできる。

非経口投与用医薬は公知組成を有する油流溶液にＩ’ＣＤｌ１＾Ｓ（好ましくは りボゾームの形またはアルブミンに結合したもの）またはりソーＰＣＤＨＡ　（ アルブミンに結合したもの）またはトリグリセリド−ＤＨＡを、好ましくはＤＨ Ａの脂質の形態のものが１β当たり約１〜１００」となる濃度で加えたものが好 ましい。

経口投与は、数日間または数週間の治療にしても、長期に使ってもよい。薬用量 は１日当たり体重ＩＫｇ当たり約１〜１００ｍｇにするのが好ましい。

ＰＣＤｆｌＡｓ　およびリソ−ＰＣＤＩＩＡ　は化学合成および／またはバイオ 合成、特に胎盤、藻類、卵、魚類、動物の器官や大豆等の野菜類から抽出・精製 した出発原料（脂肪酸、リン脂質、トリグリセリド）で得られる。

ＰＣＤＨＡｓ　は劣化せずに腸壁を簡単に通過できるが、ｓｎ〜１位と５ｎ−２ 位に作用するリパーゼ活性によって加水分解されると、酢酸、プロピオン酸、醋 酸およびカプロン酸は５ｎ−２位に長鎖を有する脂肪酸に対して、特にヒトのリ パーゼでは加水分解が困難であることが知られているＤＨＡに対して加水分解さ れる。例えば、ＰＣＤＩＩＡｓ　が膵臓リパーゼによって加水分解されると、１ −リソ−２−ＤＨＡ−グリセロホスホコリン（以下、リソ−ＰＣＤＨＡとよぶ） の形態で腸壁を通過し、そのＰＣＤｔｌＡｎへの再エステル化は腸細胞内で行わ れる。また、ＰＣＤＩＩＡｓ　は５ｎ−１位の特異的リパーゼによって容易に加 水分解される。その結果、ＰＣＤＨＡｓ　の投与後のエステル化されてない形の ＰＣＤＨＡｓのＤＨＡの割合はゼロか、わずかである。ＤＨＡのエイコサペンク エン酸（ＥＰＡ）への転化はエステル化されていない脂肪酸で行われることは知 られているので、その転化はインビボでは全くまたはほとんど抑制される。ＥＰ ＡはＤＨＡとは異なる活性を有しくＶｏｎ　５ｃｈａｃｋｙとＷｅｂｅｒ、　１ ９８５　（３４）　：　Ｔｒｉｇｇｉａｎｉ達、１９９０　（３５）；　Ｒｏｂ ｉｎｓｏｎ、　１９９３　（３６）：　５ａｌｅｓとｌ１ａｒｄ、　１９９３（ ３７））　、場合によってはＤ　ＨＡの活性を小さくする（Ｃａｒｌｓｏｎ達、 １９９２　（３８）；　Ｃａｒｌｓｏｎ　、　１９９３　（３９））ので、ｐｃ ＤＩＩＡを投与してＥＰＡを生成させるのは回避しなければならない。

ＰＣＤＨＡｓ　を投与（静脈内または骨に）すると、かなりの割合の１０口１１ 八ＳがリソーＰＣＤ１１八に転化される。このリソ−ＰＣＤＩＩＡは長鎖の脂肪 酸で再アシル化されて、ＰＣＤＨＡｎ　と等価なＰＣとなるか、アルブミン等の 運搬剤と結合する。ＰＣＤＨＡｓ　はもとのままの形であり、また、インビトロ でアルブミンにより良好に固定され、インビボでアルブミンによってより良好に 運搬されるので、ＰＣＤＨＡｎよりも好ましい。このＰＣＤＨＡｓはＰＣＤｆｌ Ａｎに比べて脳へのＤＨＡの優れた供給体であり、以下で説明するりソーＰＣＤ Ｈへ　の変転により近い変転を示す。アルブミンは細胞、特に脂肪酸、特にリソ リン脂質の形の脂肪酸を血小板へ効果的に運搬することは知られている。

反対に、ｐｃ口ｌｌＡｓ　はＰＣＤＨＡｎと同様に、ＨＤＬのようなリポ蛋白に 結合することができるので、ＰＣＤＨＡｎの代謝に近い代謝を示し、従って、少 なくとも１つがポリ不飽和である長鎖を有する脂肪酸を含むＰＣで観察されるの と同様に、ＬＤＬのコレステロールのＨＤＬへの移動を容易にして、ＬＤＬと結 合したブロアエロゲン（ｐｒｏ−ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅ）コレステロールの血ｕ ｍ度を低下させることになる（Ｋｉｒｓｔｅｎ達、１９８９　（４０）；　Ｏ’ Ｂｒ１ｅｎ達、１９９３　（４１））。従って、ＰＣＤＨＡｓ　のこの特性は心 臓血管疾患の発生を減らすのに有効である。

従って、ＰＣＤ）ＩＡｓは魚から調製されるｐｃ口ＨＡｎ　（例、旧ｂｉｎ。

達（３２）　ＨＮｉＮ１５ｈｉｚａ達（３１））（コれは５ｎ−１位に短鎖）脂 肪酸（６個以下の炭素原子を有する脂肪酸）を有していないことは知られている 　（ＳａｒｇｅｎＬ達、１９９０　（４２）　）に対して独特な性質を有してお り、その固有な活性の他にリソ−ＰＣＤＮＡ　およびＰＣＤＨＡｎとして挙動す ることができる。特に、ＰＣＤ）ＩＡｎ　と同様に脳への薬剤の供給を容易にす る経静脈投与を含めた任意の経路でリボゾームの形態で投与することができると いう利点がある。またＰＣＤＨＡｓ　はリソ−ＰＣＤＩ＋への安定したガレノス 軸ａｌｅ旧ｑｕｅ）形を構成する。実際には、ＰＣＤＩ昆Ｓ　は一部がインビボ でリソ−ＰＣＤＩＩＡに加水分解されている。また、リソ−ＰＣＤＨＡの５ｎ− １位をアシル化するとりソーＰＣＤＨへ　の投与前の貯蔵中、さらには投与後で も、Ｉ−ＤＨＡ−２−リソグリセロホスホコリンの生成を防止する。１−ＤＨＡ −２−リソグリセロホスホコリンは抗腫瘍剤としての使用が知られているリン脂 質である（Ｓａｌ＜ｕｒａｉ達（３３））。

この化合物は潜在的にリソ−ＰＣＤＨＡ　とは異なる代謝をするので、その生成 を防止する必要がある　（Ｍｏｒａｓｈ達、１９ｇ９　（４３）　）。

本発明の上記以外の特徴と利点は、添付図面を参照した以下の実施例の説明から 明らかになろう。しかし、本発明が下記実施例に限定されるものではない。

第１図は１−バルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−グリセロホスホコリン （Ｐ　Ｃ−２２：　６）と、１−バルミトイル−２−リルオイルーグリセロホス ホコリン（ＰＣ−１８：２）とを移動（ｔｒａｎｓｆｅｒ）　Ｌ、た後の血小板 膜のジアシル−グリセロホスホコリンの脂肪酸組成を表している。

血小板膜のジアシル−グリセロホスホコリンは、ホスファチジルリッジトールと ホスファチジルコリンとに特異的な血小板のエンドゲン移動蛋白を用いて、１− パルミ’ｌ−イルー２−ドコサヘキサエノイル−グリセロホスホコリン（鉛直線 を入れた棒グラフ；２２：６ｎ−３）またはｌ−バルミトイル−２−リルオイル ーグリセロホスホコリン（水平線を入れた棒グラフ；１８：２ｎ−６）で置換さ れる。対象の血小板膜（黒色の棒グラフ；対照）はリン脂質を添加せずに培養で 得られたものである。このグラフのデータは３つの独立した実験の平均＋Ｓ、　 Ｄ、を表している。

第２図は、１−バルミトイル−２−ドコサヘキサエノイル−グリセロホスホエタ ノールアミン（ＰＥ−２２：６）と、１−バルミトイル−２−リルオイルグリセ ロホスホエタノールアミン（ＰＥ−１８：２）とを移動した後の血小板膜のジア シル−グリセロホスホエタノールアミンの脂肪酸組成を表している。

血小板膜のジアシル−グリセロホスホエタノールアミンは、トウモロコシから精 製された脂質の移動蛋白を用いて、１−バルミトイル−２−ドコサヘキサエノイ ル−グリセロホスホエタノールアミン（鉛直線を入れた棒グラフ；２２：６ｎ− ３）または１−バルミトイル−２−リルオイルーグリセロホスホエタノールアミ ン（水平線を入れた棒グラフ；１８：２ｎ−６）で置換されている。対象の血小 板膜（黒色の棒グラフ；対照）は、リン脂質を添加しないで培養によって得られ たものである。このグラフのデータも３つの独立した実験の平均＋Ｓ、　Ｄ、を 表ししいる。

第３図は脂質全体の放射能変化を表しており、遊離形態（黒色の円）または２− ＤＨＡ−１−＋ＪソーＰＣの形態（黒色の三角形）の三重水素化（ｔｒｉｔｉｅ ）したＤＨＡを導入した後の脳Ａ、腰Ｂ、心ＩＩＣおよび肝ＭＩＤの変化を表し ている。

ａ）Ｉ’ＣＤＩ＾を生産するミクロ藻の培養従属栄養生物である渦鞭毛藻類：　 Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ　ｃｏｈｎｉａをＡＸＭ培地で２５℃で培養す る。この培養はＢＥＡＣＩＩとＨＯＬＺに記載の条件（４４）でエアレーション し、攪拌した。４日間培養した後、遠心分離で細胞を回収し、湿ったバイオマス を凍結乾燥した。

上記条件で１０１の培地を含む発酵装置から約３ｇの凍結乾燥したバイオマスが 得られる。

ｂ）脂質の抽出 最初に、植物油で用いられる公知の方法で、ヘキサンを用いて凍結乾燥させたバ イオマスから中性脂質を抽出する。

次に、ヨーロッパ特許第０．２９８．７８７号に記載の方法で、アルコール溶剤 （メタノールまたはエタノール）でバイオマスを再抽出して、極性脂質、特にリ ン脂質を抽出する。

上記方法で約１８％の中性脂質と１２％の極性脂質とを抽出するり。

ｃ）ｓｎ−２位にＤ　ＨＡを含むホスファチジルコリンの精製ＣＨＲＩＳＴＩＥ 　達に記載の方法（４５）で、高速液体クロマトグラフィ　（ＨＰＬＣ）を使用 して、極性脂質からＤＨＡを含むホスファチジルコリンを単離する。１０Ｉ！の 培養で得られた極性脂質全体（約３６０　ｍｇ）を処理して約１８０　ｍｇのＰ ＣＤＩＩＡを精製することができる。得られたホスファチジルコリンはＤＨを６ ６％を含む（この含有量はＰＣでエステル化された脂肪酸の総重量）。

ｄ）リソーＰＣＤＨへ　の調製 上記で精製したホスファチジルコリンのｓｎ　−１位のアシル鎖をホスファリパ ーゼＡ、活性を有するリパーゼによって加水分解する。得られたりソーＰ　ＣＤ 　Ｈ八　はクロマトグラフィで精製する。

ｅ）　ＰＣＤＨＡｓ　の調製 上記のりソーＰＣＤＩＩＡ　を有機合成で再度アシル化してｓｎ　−１位が酢酸 、プロピオン酸、酪酸またはカプロン酸でアシル化されたＰＣ−ＤＨＡを得る。

得られたＰＣＤＨＡｓはクロマトグラフィで精製する。

実施例２ グリセロホスホリルコリンまたはグリセロホスフェートからの半合成によるＰＣ −ＤＨＡｓ　の精製組成物の調製酸、プロピオン酸、醋酸、カプロン酸またはド コサヘキサエン酸によるジアシル化 グリセロホスフェートを酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸またはドコサヘ キサエノン酸の誘導体はシル無水物、塩化アシル、アシルイミダゾリド）によっ てアシル化してジアシルホスファチド酸（ＰＡ）を作り、得られたＰＡを塩化コ リンを用いてＰＣに転換する　（Ｓｈｅｎａ　ｅｔ　Ｄａｖｉｓ、　１９８９（ ４７）　；　ｌ１ａｌｔｓ達、１９９２　（４８））。

ｂ）ｓｎ−１位に酢酸、プロピオン酸、酪酸またはカプロン酸残基を含むＰＣか らのＰＣＤＨＡｓの調製酢酸、プロピオン酸、醋酸またはカプロン酸残基を有す るＰＣの５ｎ−２位をホスホリパーゼＡ２活性を有するリパーゼで選択的に加水 分解する。得られたリソＰｃをＤＨＡ誘導体（アシル無水物、塩化アシル、アシ ルイミダゾライド等）によって再度アシル化してＰＣＤＨＡｓを得る。

ｃ）ｓｎ−１位と５ｎ−２位にドコサヘキサエノン酸残基を有すＤ　ＨＡ残基を 有するＰＣのｓｎ　−１位をホスホリパーゼＡ。

活性を有するリパーゼで選択的に加水分解する。得られたリソＰＣを酢酸、プロ ピオン酸、醋酸またはカプロン酸誘導体（好ましくは無水アシルまたは塩化アシ ル）でにって再度アシル化してＰＣＤＩＩＡｓを得る。

血小板膜のホスファチジルコリン（ＰＣ）とホスファチジルエタノールアミン（ Ｐ　Ｅ）が特異的にリノール酸（１８：２ｎ−６とＤＮＡを多く含むようにする ために、リン脂質移動蛋白を用いて、各種のリン脂質中でエステル化されたＤＨ Ａを調製した（４９）。特に、腸細胞のＰＣの分子種の組成を変えるために、ウ シの肝臓から精製したＰＣ特異的な移動蛋白（ＰＴ）を用いた（４９）。

この実施例で用いた方法では、血小板リン脂質のエンドジエン（ｅｎｄｏｇｅｎ ｅ）の量はトウモロコシまたは血小板のＰＴで行った移動では変化しないが、リ ン脂質は１８：２ｎ−６またはＤＨＡが豊富になる。

ＴＸ＾２／ＰＧＨ２受容体対する上記脂肪酸の影響を、そのＰＣまたはＰＥが１ ８：２ｎ−６またはＤＨＡに富む血小板膜で三重水素化したＳ　Ｑ２９．５４ｇ 、ＴＸＡ、／ＰＧＩＩ２受容体ノ競争的拮抗剤ノ特異的結合の測定で評価した。

ＤＨＡが豊富なＰＣを含む血小板膜のみがＴＸＡ、　／ＰＧＨ，受容体を変化さ せて、Ｓ　Ｑ２９．５４８の解離定数を大幅に大きくする。

血小板膜のＰＣの１８：２ｎ−６およびＰＥの１８：２ｎ−６またはＤＨＡを多 くしても受容体には影響がない（第１表）。

これらの特性から、ＰＣＤＨＡｓはその抗トロンボキサンＡ、活性により、その 治療に有効な濃度で血小板凝固防止活性と抗高血圧活性とを有する医薬になる。

第１表Ａ ＤＨＡ　（２２：６ｎ−３）と１８：２ｎ−６に富むＰＣを含む血小板膜（７） ＴＸＡ２／　ＰＧＨ２受容体ヘノＳ　Ｑ２９．５４８（７）結合（ａ）対照およ びＰＣｌ３：２ｎ−６に対してｐ　＜　０．０５第１表Ｂ ＤＨＡ　（２２：６ｎ−３）と１８：２ｎ−６に富むＰＥを含む血小板膜ノＴＸ Ａ！／ＰＣ１１２受容体ヘノ５０２９．５４８ノ結合脳の脂質代謝のピークにあ る２０日齢のラットを研究対象動物にした。

脂肪酸上でリソＰＣを標識化し、アルブミンに固定したコリンを経静脈投与した （５０）。その結果、ＤＨＡ　（２２：６ｎ−３）を含むリソＰＣは特に脳に集 まり、１８：１．１８：２および２０：４等の他の脂肪酸を含むリソＰＣよりも 多く集められることが分かる。第３図から分かるように、２つの供給形すなわち リソ−ＰＣＤＨＡとエステル化されていない形態のＤＨＡとをほぼ同じように集 める腰を除いて、肝臓と肝臓はリソ−ＰＣＤＨＡよりエステル化されていないＤ ＨＡを集めるので、脳だけがこのような傾向を示す。ホスファチジルエタノール アミン中では別のエステル化が起きるので、ホスファチジルコリン中のＤＨＡの 再アシル化は弱く、導入後の最初の期間にしか見られない（第２表）。従って、 アルブミンに固定したりソーＰＣＤＨＡ　が発達中の脳にＤＨＡを供給する特に 好ましい形と思われる。

第２表 脳の脂質中の放射能分布 （総脂質の放射能の％） Δ　リソ−ＰＣＤＩＩＡの導入 Ｂ、エステル化されていないＤＨＡの導入１、Ｂｏｕｒｒａ　Ｊ、Ｍ、（１９８ ０）　ＩＮＳＥＲＭ　ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　１４．　（Ｎ、ｓａｕｍａｎｎｅｄ 、）、　Ｅｌｓａｖｉｅｒ、　Ｎｏｒｔｈ　Ｈｏ１ｌａｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃ ａｌ　Ｐｒｅｓｓ、１８７−２０６゜２、Ｍａｒｔｉｎｅｚ　Ｍ、ｅ仁　Ｂａｌ ｌａｂｒｉｇａ　Ａ、（１９Ｂ？）　Ｌｉｐｉｄｓ、２２．　１３３−１３８゜ Ｌ　Ｏ’Ｂｒ１ｅｎ　Ｊ、Ｓ、　ｅｔ　Ｓａｍｐｓｏｎ　Ｅ−Ｌ、（１９６５） 　Ｊ、　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ、’　６，５４５−５４７゜ ４、Ａｉｌｉｎｇ　Ｃ，、Ｂｒｕｃｅ　Ａ、、Ｋａｒｌｓｓｏｎ　Ｌ、、５ａｐ ｉａ　Ｏ，ｅｔＳｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ　Ｌ、（１９７２）Ｊ、Ｎｕｔｒ、１０ ２，７７３−７８２゜５−　Ｇａｚｚｏ　Ｓ、ｅｔ　Ｄ’Ｕｄｉｎｅ　Ｂ、（１ ９７７）Ｎａｕｒｏｓｃｉ−Ｌｅｔｔ、７，２６７−２７５゜６＋Ｎｅｕｒｉｎ ｇａｒ　Ｍ−、Ｃｏｎｎｏｒ　Ｗ、Ｅ、、Ｌｉｎ　Ｄ、Ｓ、、Ｂａｒｓｔａｄ　 Ｌ、ａｔ　ＬｕｃｋＳ、（１９８７）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、５ｃｉ− Ｕ−３，Ａ、８３，４０２１−４０２５゜７＋Ｃｏｎｎｏｒ　Ｗ、Ｅ、、Ｎｅｕ ｒｉｎｇｅｒ　Ｅ＋Ｍ、、Ｂａｒｓｔａｄ　Ｌ、ｅｔ　・Ｌｉｎ　Ｄ、Ｓ。

（１９８４）Ｔｒａｎｓ、Ａｓ５ｏｃ、Ａｍ、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ　９７．　 １−１９゜Ｌ　Ｓａｌｅｍ　Ｎ、Ｊｒ、、ＫｉＪＴＩＨ，Ｙ、ａｔ　Ｙｅｒｇｅ ｙ　Ｊ、Ａ、（１９８６）　ＳｉｍｏｐｏｕｌｏｓＪＬＰ−、Ｋｉｆｅｒ　Ｒ− Ｒ，、ａｔ　Ｍａｒｔｉｎ　Ｒ−（ｅｄｓ、）Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ、２６３−３１７− ９、Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ｎ、、５ａｉｔｏｈ　Ｍ、、Ｍｏｒｉｕｃｈｉ　Ａ、、 Ｎｏｍｕｒａ　Ｍ、ａｔＯｋｕｙａｍａ　Ｈ，（１９８７）Ｊ、Ｌｉｐｉｄ　Ｒ ａ５−　２８，１４４−１５１゜４３．３４２−３４８゜ １１、Ｃｏｏｋ　Ｈ，Ｗ、ｅｔ　５ｐｅｎｃｅ　Ｍ、Ｗ、（１９７４）　Ｂｉｏ ｃｈｉｍ−Ｂｉｏｐｈｙｇ、Ａｃｔａ３６９．１２９−１４１゜ １２、Ｂｕｒｔｏｎ　Ｌ、５ｃｏｔｔ　Ｍ、ａｔ　Ｂａｚａｎ　Ｎ、Ｇ、　（１ ９８９）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８６．２９０３−２９０７゜９６７−９ ６８゜ １５・　入ｎｄｅｒｓｏｎ　Ｇ−Ｊ、ｅｔ　Ｃｏｎｎｏｒ　Ｗ、Ｅ、　（１９８ ８）　Ｌｉｐｉｄｓ　２３．　２８６−２９０゜１７、Ｍａｃ工ｎｔｙｒｅ、Ｄ 、Ｅ、、Ｈｏｏｖｅｒ、Ｒ−Ｌ、、Ｓｍｉ七り、Ｍ、、Ｓｔ＠ｅｒ、Ｍ、。

Ｌｙｎｃｈ、　ＣＬ、　Ｋａｒｎｏｓｋｙ、　Ｍ、Ｊ、　ａｔ　Ｓａｌｚｍａｎ 、　Ｅ、Ｗ−（１９８４）　Ｂｌｏｏｄ　６３゜８４８−８５７゜ １８、　Ｋｉｔａｇａｗａ、Ｓ、、　Ｅｎｄｏ、　Ｊ、　ａｔ　Ｋａｍｅｔａｍ ｉ、　Ｆ、（１９８５）　Ｂｉｏｃｈｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｇ、Ａｃｔａ　８１１１．　３９１−３９７゜ＩＬ　５ａｔｏ、Ｔ −、Ｈａｓｈｉｚｕｍａ、Ｔ、、Ｎａｋａｏ、Ｋ、Ａｋｉｂａ、Ｓ、ａｔ　Ｆｕ ｊｉｉ。

Ｔ、（１９８９）　Ｂｉｏｃｈｉｍ−Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ　９９２．　 １６８−１７３゜２０、５ａｔｏ、　Ｔ、、　Ｎａｋａｏ、　Ｋ、、　Ｈａｓｈ ｉｚｕｍｅ、　Ｔ、　ａｔ　Ｆｕｊｉｉ、　Ｔ、（１９８７）Ｂｉｏｃｈｈｎ− Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　タ３１．　１５７−１６４−２に　Ｇｒｙｇｌｅｗ ｓｋｉ、　Ｒ，Ｊ、、　Ｓａｌｍｏｎ、　Ｊ、Ａ、、　Ｕｂａｔｕｂａ、、、、 、Ｆ、Ｂ、。

Ｗｅａｔｈｅｒｌｙ、Ｂ、Ｃ，、Ｍｏｎｃａｄａ、Ｓ、ｅｔ　Ｗａｎｅ、Ｊ、Ｒ ，、（１９７９）Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ　１８，４５３−４７８゜２２ 、　Ｃｒｏｓｅｔ、　Ｍ＋ｅｔ　Ｌａｇａｒｄｅ、　Ｍ、（１９８６）　Ｔｈｒ ｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、　５６゜（１９９１）　Ａｍ、　Ｊ、Ｐｈｙｓ ｉｏｌ、　２６０．　Ｈ３７９−［３８５゜２Ｂ、Ｓｗａｎｎ、ＩＧ、Ｖｅｎｔ ｏｎ、Ｄ、Ｌ、ｅｔ　Ｌｅ　Ｂｒａｔｏｎ、Ｇ、Ｃ−（１９８９）　ＦＥＢＳＬ ａｔｔ＋　２４３，２４４−２４６゜３０、　Ｐａｒ＠ｎｔ、　Ｃ，Ａ、　Ｌａ ｇａｒｄａ、　Ｍ＋Ｖ＠ｎｔｏｎ、　Ｄ、Ｌ、　ａｔ　Ｌｅ　Ｂｒａｔｏｎ　Ｇ −Ｃ。

（１９９２）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２６７、６５４１−６５４７− に、ａｔ　Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｍ、、Ｎ１ｐｐｏｎ　Ｏ土１　ａｎｄ　Ｆａｔ 　Ｃｏ、ａｔ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ４２、Ｓａｒｇｅｎｔ　Ｊ、Ｒ，、Ｂ ｅ１ｌ　Ｍ、Ｖ、、、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ　Ｒ，Ｊ、ａｔ　Ｔｏｃｈｅｒ　Ｄ、 Ｒ。

ｄａｎｓ：　Ａｎｉｍａｌ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ 　Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ、１゜Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｗｉｌｄ　ａｎｄ　Ｄ ｏｍ＠５ｔｉｃ　Ａｎｉｍａｌｓ　Ｃｏｍｐ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｅｄ。

Ｊ、　Ｍｅｌｌｉｎｇｅｒ、１９９０．　Ｖｏｌ、　５．　ｐｐ、１１−２３゜ ４３、　Ｍｏｒａｓｈ　ＬＣ，、Ｃｏｏｋ　Ｈ，Ｗ、ａｔ　５ｐｅｎｅｅ　Ｍ、 Ｗ、、Ｂｉｏｃｈｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、１９８９．　Ｖｏｌ、　１００４．　ｐ、　２２ １−２２９゜４４、　Ｂｅａｃｈ、　Ｄ、Ｈ，、ｅ七　Ｈｏ１ｚ、　Ｊｒ、　Ｇ 、Ｇ、、　（１９７３）　Ｂｉｏｃｈｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ　３１６．　５６−６５゜４５、　Ｃｈｒｉｓｔｉ ｅ、　Ｗ、Ｗ、、　Ｊ、　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓ、（１９８５）　２６．　５０７ −５１２゜４６、　Ｄｓｌｆｉｎｏ　Ｊ、Ｍ、、　５ｃｈｒｅｉｂａｒ　Ｓ、Ｌ 、　ｓｔ　Ｒｉｃｈａｒｄ　Ｆ、Ｍ、。

Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、１９８７．Ｖｏｌ、２８．ｐ、２３２７ −２３３０゜４７．５ｃｈａｎａ　Ｄ、Ｇ、ｅｔ　Ｄａｖｉｓ　Ｊ、Ｔ−、ｔｏ 　Ｇｅｎｚｙｍｅ　Ｃｏｒｐ、、ＵＳ　Ｐａｔ。

Ａｐｐｌ、、ＵＳＳＮ　５７７３５１，１９８９゜４８、　Ｗａｉｔｓ　Ａ、Ｅ 、、　Ｓｃｈ＠ｎａ　Ｄ、Ｇ、、　Ｆｏｘ　Ｅ−Ｍ、　Ｄａｖｉｓ　Ｊ、Ｔ−ａ ｔ　Ｍｉｓｃｈ）ｃａＭ、Ｒ，、ｄａｎｓ：　Ｃｈｉｒａｌ土ｔｙ　ｉｎ　１ｎ ｄｕｓｔｒｙ、Ｅｄ、Ａ、Ｎ、Ｃｏ１１ｉｎｓ　ａｔ　Ｊ。

Ｃｒｏｇｂｙ、１９９２．　ｐｐ、２２３−２３５．　Ｎｅｗ　ｙｏｒｋ＝　Ｊ ｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ４’ｌ　Ｒｕａｃｋａｒｔ、Ｄ、Ｇ、ａ ｔ　Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ｋ、、（１９９０）　Ｃｈｅｗ、Ｐｈｙｓ、Ｌｉｐｉｄｓ ５６．１−２（１ ５０、Ｔｈ１ｎｓ　Ｆ、、Ｄｅｌａｃｈａｍｂｒｅ　Ｍ、Ｃ，、Ｂｅｎｔａｊａ ｃ　Ｍ、、Ｌａｇａｒｄｅ　Ｍ、　ｅｔＬａｃ＠ｒｆ　Ｊ、、（１９９２）　Ｊ 、　Ｎｅｕｒｏｃｈ＠ｍ、　５９．　１１１０−１１１６゜ＦＩＧＵＲＥ　１ 脂肪酸 分 ＦＩＧｔＪＲＥ　３ フロントページの続き （５１）　ｆａｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｆ　９／１０　 Ａ　９１５５−４ＨＣＩＩＢ　１１１００　２１１５−４ＨＣ１１Ｃ３１００２ １１５−４Ｈ （７２）発明者　クロゼ、マルティーヌフランス国　６９５００　ブロン　アレ 　デプラタヌ　２３ （７２）発明者　ラガルド、ミシェル フランス国　６９６８０　ジャシュー　リュデ　シフ　５ （７２）発明者　ルセル、シャン フランス国　２１１１０　ジャンリ　リュ　ドウ　ラ　タランテーズ　３９ Ｉ （７２）発明者　シー、フランク フランス国　２１０００　ディジョン　アヴニュ　レイモン　ポアンカレ　４９ 　ピラルドン　アバルトマン　１８９ （７２）発明者　タイヨ、ジャンールイフランス国　６９８９０　ラ　トウール 　ドウサルバニイ　リュ　デ　グルフィエール（７２）発明者　シルウーズ、ヴ エロニクフランス国　６９１１０　サントーフォワーレーリヨン　シュマン−ブ ーツオン　５０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下記化合物で構成される群の中から選択される少なくとも１つの化合物を含 むことを特徴とする必須アミノ酸をベースとした新規な医薬： （１）ｓｎ−２位がエステル化されたリソホスファチジルコリン（Ｊｙｓｏ−Ｐ ＣＤＨＡ）の形のＤＨＡ、（２）ＤＨＡがｓｎ−２位でエステル化され且つｓｎ −１位に長さが極めて短いアシル基を有するＤＨＡ−ホスファチジルコリン（Ｐ ＣＤＨＡｓ）、および （３）ＤＨＡがｓｎ−２位でエステル化され且つｓｎ−１位とｓｎ−３位に長さ の極めて短いアシル基を有するトリグリセリド。 ２．アシル基がアセチル、プロパノイルまたはブチリルである請求項１に記載の 医薬。 ３．脂肪酸のｓｎ−２位がエステル化されたドコサヘキサェン酸（ＤＨＡ）を少 なくとも７０％含む請求項１または２に記載の医薬。 ４．有効成分として、リソホスファチジルコリンのｓｎ−２位がエステル化され た脂肪酸のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を少なくとも１０％含む請求項１また は２に記載の医薬。 ５．請求項１または２に記載の化合物を用いた心血小板凝固防止作用を有する臓 血管疾患の予防または治療剤。 ６，請求項１または２に記載の化合物を用いた脳必須脂肪酸の不足症または欠乏 症治療剤。 ７．１日当たり体重１ｋｇ当たり１〜１００ｍｇの薬用量に必要な量の有効成分 を含む請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬。 ８．経口投与用に調製された請求項１〜４および７のいずれか一項に記載の医薬 。 ９．アルコール溶剤でバイオマスからリン脂質を抽出し、高速液体クロマトグラ フィによってＤＨＡを含むホスファチジルコリンを単離し、次いでホスホリパー ゼＡ１活性を有するリパーゼでＤＨＡを加水分解し、得られたリソ−ＰＣＤＨＡ をクロマトグラフィで精製することを特徴とするＰＣＤＨＡｓまたはリソ−ＰＣ ＤＨＡに豊んだ精製組成物の製造方法。 １０．酢酸、プロピオン酸、酪酸およびカプロン酸からなる群の中から選択され る酸でｓｎ−１位を再アシル化する請求項９に記載の方法。 １１．酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸またはこれらの誘導体によってグ リセロホスホコリンまたはグリセロホスフェートをジアシル化し、次いでホスホ リバーゼＡ２でｓｎ−２位を選択的に加水分解した後、精製したリソ−ＰＣをＤ ＨＡの誘導体で再度アシル化することを特徴とするＰＣＤＨＡｓに豊んだ、また は精製された組成物の製造方法。 １２．ＤＨＡ酸によってグリセロホスホコリンまたはグリセロホスフェートをジ アシル化し、ホスホリパーゼＡ１によってｓｎ−１位を選択的に加水分解し、そ の後、得られたリソ−ＰＣＤＨＡを酢酸、プロピオン酸、酪酸またはカプロン酸 またはこれらの誘導体で再度アシル化することを特徴とするＰＣＤＨＡｓに豊ん だまたは、精製された組成物の製造方法。