JPH07500313A

JPH07500313A - メバロナート及びメバロノラクトン誘導体による細胞分化誘導

Info

Publication number: JPH07500313A
Application number: JP4511984A
Authority: JP
Inventors: スカレン，テレンス，ジェー; マン，ポール，エル
Original assignee: ユニバーシティ、オブ、ニューメキシコ
Priority date: 1991-05-01
Filing date: 1992-05-01
Publication date: 1995-01-12
Also published as: EP0675715A4; EP1188439A2; EP0675715B1; US5849777A; EP0675715A1; WO1992019105A1; EP1188439A3; DE69232743T2; ATE222493T1; US5783594A; DE69232743D1; CA2109120A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】メバロナート及びメバロノラクトン誘導体による細胞分化誘導発明の背景政府の権利本発明に至る研究は、少なくとも部分的には、合衆国政府、ＮＩＨ補助金ＭＬ− １６，７９６−１３によって資金供与されており、従って、政府は、本特許において本質的な法定の権利を有するであろう。

発明の分野本発明は、免疫的障害又は疾患の治療のための免疫調節剤として又は癌の管理のための抗腫瘍薬として特に有用な、細胞機能調節剤に関する。

関連技術の検討細胞活性は、２つの一般的なカテゴリー、すなわち増殖（再生産）及び分化（個別化された機能）、に大きく分類される。現在の理論によれば、増殖的機能は、正常の細胞には常に存在し、そして成熟細胞においては分化機能によって支配されており、それはこうして、個々の成熟細胞における分化的及び増殖的活性の双方を制御する統合力として働Ｘ０成熟細胞が細胞分化活性を制御するために依存している生化学的機構に故障があると、それは、正常な分化的制御の破綻はそれによって異常な細胞機能及び異常な細胞増殖パターンをもたらすものであることから、重要な意味を有する。

独立して細胞の増殖又は分化を制御している諸因子の使用によって細胞の挙動を制御することの可能性が、先に提示されている。細胞分化を誘導する諸因子の同定は、特に興味深いものである。なぜなら、そのような諸因子は、正常な成熟細胞に特徴的である細胞の機能及び構造をコードする細胞遺伝子の最大限の発現を誘導し、例えば、商業的関心のある細胞産生物の高められた産生をもたらす能力が潜在的にあるからである。

これらの細胞現象の認識は、それによってｉｎ　ｖｉｖｏでの細胞活性が制御されておりそしてそれによって細胞活性を操作できるものである、種々の機構の仮定をもたらした。例えば、最近のある刊行物（Ｓａｃｈｓ、　Ｓｃｉ、　Ａｍ、　Ｖｏｌ、　２５４．　ｐｐ、　４０−４７．１９８６年１月。参照によりここに導入する）において、各細胞が、細胞のための増殖誘導因子として機能する内因性「増殖因子」に応答して、それ自身の分化因子を産生ずることが報告されている。これらの「増殖因子」の影響下に細胞が増殖するとき、増殖する細胞によって産生される細胞分化因子の濃度は、細胞分化を誘導するに十分なまでに高まる。５ａｃｈｓは、これらの細胞により産生される分化因子が、それらが成熟を誘導する細胞のタイプとおそらく同様に極めて多数の、特殊化された蛋白質であると結論づけている。この刊行物はまた、細胞により産生される分化因子以外の、ステロイドホルモン、Ｘ線、ビタミン、細菌性リボ多糖、シトシンアラビノシド、アドリアマイシン、゛メトトレキサート、レシチン、及びいくつかのフォルボールエステルのような物質が、直接的又は間接的に、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、正常の及び遺伝的に欠損のある細胞における分化を誘導することをも報告している。試験した広い範囲の細胞にわたってすべての分化を効果的に誘導する単一の化合物はないように思われた。

ｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ：　Ｃｏｎ５ｉｄｅｒａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、　（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｃｏ、、Ｉｎｃ、、Ｂｕｒｃｈｉｅｌ　ａｎｄ　Ｒｈ。

ｄｅｓ　ａ！、　１９８３年における、Ｍａｎｎ、　Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｉｍａｇｉｎｇ　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｌ）Ｙ、　ｐｐ、　１２１−１４１．参照によりここに導入する）において、限定された増殖能力を有する機能的に分化している細胞の誘導に特に言及して、更に探索されている。分画したアメリカやまごぼうマイトジェン、抗イムノグロブリン、及びリボ多糖を用いた白血球における分化のｉｎ　ｖｉｖｏでの誘導は、次いで抗原に曝すことにより、延長された培養寿命にわたって特に良好な抗体応答を与えた。この発表は、誘導剤としてのアメリカやまごぼうマイトジェンの二重の役割を強調している。すなわち、マイトジェンの増殖的濃度においては、白血球の抗体産生は、細胞の増殖を誘導することによってｉｎ　ｖｉｔｒＯにおいて刺激されるが、しかしながらこの刺激の下においては細胞は急速に老化しそして未成熟なまま死ぬ。対照的に、同じマイトジェンの分化的濃度においては、安定したレベルにて抗原特異的イムノグロブリンを産生している分化した細胞の長期培養物が得られる。

ｉｎ　ｖｉｔｒｏ又はｉｎ　ｖｉｖｏにおける細胞活性を制御又は調節するために潜在的に有用な諸因子に関する、半世紀を超える研究は、注意深く管理された条件の下で非常に狭い範囲の細胞タイプを分化させるのに有効なこともある、非常に多くの化合物を同定している。これらの化合物の最終的な有用性が予測できないのは、細胞の増殖及び分化を制御している僅かにしか理解されていない経路の複雑さ、これらの先行技術の化合物がこれらの経路に干渉する点の予測不能性、及び分化及び増殖を制御している基礎をなす機構に対するこれらの化合物の結果的に実質的にランダムな効果のためであろう。

従って、細胞の分化を制御している原始的な制御機構に直接に影響する、広い範囲の細胞タイプにわたって細胞の分化活性における予測可能な変化を得るためにｉｎ　ｖｉｖｏ又はｉｎ　ｖｉｔｒｏにて細胞をそれに曝すことのできる化合物を提供することが望ましい。特に、病理的細胞を増殖的及び分化的細胞活性が統合された、宿主である生物体の要求に応答した正常な機能に復帰させるために、病理的細胞挙動の自己調節を誘導することのできる化合物を提供することが望ましい。

図面の簡単な説明図１乃至６は、本発明の化合物の様々な投与量に対する、腫瘍（ヌードラットに埋め込んだイヌの神経膠層）の応答をグラフで示す図７乃至９は、対照大における腫瘍の増殖（図７）と比較したときの、本発明の２つの化合物における腫瘍（ヌードラットに埋め込んだイヌの神経膠層）の応答をグラフで示す（図８及び９）。

発明の概要本発明は、遺伝的に十分な（遺伝的に欠損のない）細胞を正常な分化的及び増殖的挙動へと復帰させるため、異常な細胞分化機能の自己調節を促進する、そして細胞の遺伝的潜在能力内における細胞分化機能を多様化させることを含む、特定の立体配置によって定義される生物学的に活性なメバロン酸及びメバロノラクトン誘導体よりなる調節剤を提供する。従って、該化合物は、当該細胞を正常な挙動、特に正常な増殖的及び免疫的機能へと復帰させるために、遺伝的に十分な細胞の病理学的細胞機能を正常化させるのに有用であ該調節剤は、細胞の分化表現型の発現を調節することによって分化の効果を得ているように見える。取り分け、該調節剤は、細胞機能を有意に多様化させるために発現されていない遺伝子の発現を誘導するか又は存在している細胞機能の有意な向上を誘導するように見える。該調節剤は、更に、細胞の挙動を正常化するよう細胞内生化学的制御を刺激することによって、遺伝的に十分な細胞における異常な増殖的又は分化的細胞機能に対抗する。

本発明の調節剤は、非常に低濃度にてそれらの結果を生み出し、そして、低分子量、包括的な干渉性、高い特異性、及び制御可能な終点応答によって特徴づけられる。該化合物は、本発明の方法において使用される量では無毒である。該調節剤は、原始的レベルにおいて、細胞分化挙動及び／又は細胞の増殖及び分化活性の統合を制御している機構を模擬し又は構成するものと理論づけられており、それはこうして広範囲の過程への適用可能性を説明する。

該化合物は、例えば、病理学的細胞機能の治療において、特に腫瘍細胞の増殖の阻害及び／又は腫瘍の転移の阻害のための抗腫傷薬として、治療的に有効な量において、臨床的に有用である。該化合物は、ホストにおける腫瘍の負担の増大を広く阻止でき、及び／又は既に存する腫瘍の負担を減少させることも可能である。該化合物の治療的に有効な量は、更に、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）及び関節リウマチ、紅斑性狼癒、低ガンマグロブリン血症、及び若年性糖尿病のような、自己免疫疾患又は障害の治療において特に臨床的に免疫的に有用である。

発明の詳細な説明Ａ、　化合物本発明の化合物は、式１１ルケニレンであり、Ｒは各々、独立して、Ｈ，Ｃ，〜Ｃ，アルキル、又は他の生理学的に許容し得る置換基であり；Ｒｏ　は、水素、生理学的に許容し得る陽イオン又は陽イオン錯体Ｍ１又は生理学的に許容し得るエステル基Ｒ２てあり；そしてＡは、少な（とも−の芳香族環、脂環式環又は複素環を含む置換された又は無置換の環系によって特徴づけられた生理学的に許容できる置換基であり、但し式Ｉの化合物が、（ａ）以下に定義するように生物学的に活性であり、且つ（ｂ）後述するような立体配置を有する）のメバロナート及びメバロノラクトン誘導体よりなる。

ここに用いる術語「メバロナート」は、遊離のメバロン酸、そのエステル及びＲｏについて上に定義した通りの塩を含む。

式Ｉの範囲内の化合物は、後述のように、メバロナート又はメバロノラクトン基Ｚの指定された３、５−又は４，６−炭素原子において一つの立体配置を有するものである。

基Ａ、Ｒ，Ｒ’　、Ｍ及びＲ２の定義を修飾している「生理学的に許容し得る」の表現は、許容された投与量レベルにおいて無毒であり且つ−Ｘ−Ｚの特性に帰すことのできる該化合物の抗腫傷薬活性を実質的に減少させない基をいう。エステル基Ｒ２又は塩残基Ｍの場合においては、「生理学的に許容しうるＪの語は更に、生理学的条件の下で加水分解可能であり対応する生物学的に活性なカルボキシル陰イオン及び実質的に無毒の副生成物を与える基Ｒ２又はＭをいう。好ましくは、置換基ＡＳＲＳＲ’　、Ｍ及びＲ２は、不斉中心を有しない。置換基Ａは、該化合物を、細胞分化又は制御のために必須の蛋白質中の特異的な疎水性部位に結合させるよう機能し、それ自身は該化合物の活性に寄与しない、と信じられている。

式Ｉにおける適当な基Ａ、Ｘ、Ｒ，及びＲｏには、次のものが含まれる：Ｘは、メチレン、エチレン、プロピレン、エテニレン、ｌ−プロペニレン、又は２−プロペニレンであり、Ｒは、水素又はメチルであり、Ｒｏは、ナトリウム、カリウム若しくはアンモニウムのような一価の陽イオン若しくは陽イオン錯体、又はマグネシウム若しくはカルシウムのような二価若しくは三価の陽イオン若しくは陽イオン錯体であって、特に、ここにおいてＡ−Ｘ− Ｚは、式Ａ。

の化合物でありＸは２又は３であるか、又はＲｏは、ベンジル；又はＣＩ”　Ｃ −アルキル特にメチル若しくはエチルのような、分枝のある又は分枝のない０１〜ｃ４アルキルのような、エステル化基Ｒ２であり、Ａは、置換された又は無置換の、単核のアリール若しくはアリールオキシ：多核のアリール若しくはアリール才キシ：三核のアリール若しくはアリールオキシ：アルカリール若しくはアルカリールオキシ：シクロアルキル：シクロアルケニル：又はへテロサイクリルであり、例えば、ベンジル；ベンジルオキシ；フェニル；フェニルオキシ：ナフチル；ナフチルオキシ；テトラヒドロナフチル；イミダゾリル；ピリミジル；ピラゾリル；インデニル；キノリニル；ピロリル：インドリル；アザインドリル；イントリジニル；当該ヘテロ原子が０、Ｓ若しくはＮであって、特に環系が少なくとも一つの二重結合を含んでいるものであるｃ４〜Ｃ，ヘテロ環；ｃ４〜Ｃ。

シクロアルキル又は０４〜Ｃ，シクロアルケニル、である。

典型的な化合物は、次の特許に記述されており、それらの各々をここに参照により導入する：すなわち、１９８８年６月５日にＷａｒｅｉｎｇに発行された米国特許第４．７５５．６０６号、１９８６年９月２３日にＷａｒｅｉｎｇに発行された米国特許第４．６１３．６１０号、１９８１年３月ｌＯ日にＯｋａ等に発行された米国特許第４．２５５．４４４号、１９８１年２月３日にＯｋａ等に発行された米国特許第４．２４８．８８９号、１９８８年８月２日にＰｉｃａｒｄ等に発行された米国特許第４．７６１．４１９号、１９８８年６月１４日にＡｎｄｅｒｓｏｎに発行された米国特許第４．７５１．２３５号、１９８４年８月２日に公開されたＷＯ３４１０２９０３，１９８７年５月７日に公開されたＷＯ８７１０２６６２，１９８８年３月２４日に公開されたＷＯ８８１０１９９７，１９８６年６月１９日に公開されたＷＯ３６１０３４８８，１９８０年４月１５日にＭｉ　ｔｓｉ等に発行された米国特許第４゜１９８、４２５号、１９７９年１月３０日にＥｎｄｏ等に発行された米国特許第４，１３７、３２２号、１９７６年９月２８日にＥｎｄｏ等に発行された米国特許第３．９８３゜１４０号、１９８６年５月１３日にＤａｍｏｎに発行された米国特許第４．５８８．７１５号、１９８７年１２月１日にＷｉｌｌａｒｄ等に発行された米国特許第４．７１０゜５１３号、１９８８年４月１９日にＫａｔｈａｗａｌａに発行された米国特許第４，７３９、０７３号、及び１９８７年７月２１日にＲｏｔｈに発行された米国特許第４，６８１、８９３号である。

以下に記載したようにそれらのメバロナートＺ部分の３位、５位の炭素原子に又はそれらのメバロノラクトン２部分の４位、６位炭素原子に適当な立体化学を有するこれらの刊行物に記載された化合物は、本発明の方法において、細胞分化の誘導剤として、特に腫瘍の負担を減少させるために又は免疫疾患又は障害を治療するために、有用であるものと期待される。好ましい化合物は、以下に定義するような陽性のｉｎ　ｖｉｔｒｏ免疫学的活性を呈するものであり、特に同時に抗腫瘍活性を呈するものである。

Ｂ、　化合物活性本発明の方法において有用な式Ｉの化合物は、上述のように細胞分化活性を調節できる化合物よりなる。調節活性を有する特定の化合物としては、−次的な又は二次的な腫瘍細胞増殖を若しくは腫瘍転移を又はこれら双方を阻害することによって、ｉｎ　ｖｉｖｏで腫瘍の負担を減少させるために、本発明による治療的投与量において有効である、腫瘍形質転換細胞に対する抗腫瘍活性を有する化合物が含まれる。白血病及びリンパ腫のような軟腫瘍、並びに黒色腫、卵巣腫瘍、頚部腫瘤、***腫瘍、肺腫瘍（小細胞及び非小細胞）、結腸及び胃の腫瘍、肝細胞腫瘍、膵臓、中腸嚢、及び前立腺腫瘍、脳腫瘍、骨髄腫、及び喉頭腫瘍のような充実性腫瘍の双方を含む、腫瘍の広いスペクトルが、本発明による治療に感受性であると期待される。

本発明の範囲内の、抗腫瘍活性を有する式Ｉの範囲内の化合物は、ｉｎ　ＶｉｔｒＯで免疫学的活性をアッセイすることによって簡便に選択される。それはこの性質が抗腫瘍活性の一マーカーであるように思われるためであるが、しかし、場合によっては、殆ど又は全く免疫学的活性を有しない本発明の範囲内の化合物もまた抗腫瘍的に活性であることがある。免疫学的活性についての非常に多くのｉｎ　Ｖｉｔｒ。

アッセイが当業者に利用できる。本発明の方法において使用するための、細胞分化を調節する能力を有する式Ｉの化合物を選択するのに適した免疫学的活性についての一つの典型的なｉｎ　ＶｉｔｒＯアッセイを、以下に記述する（実施例■ ）。

ここに定義する式Ｉの範囲内の［免疫学的に活性な化合物」は、液性又は細胞性免疫の何れかの誘導によってホストの免疫系の機能を高める化合物よりなる。特に関心の持たれるのは、細胞性免疫系、特に、一般的に現在内因性の腫瘍形質転換細胞、特に充実性腫瘍細胞に対する防衛の一次ラインと考えられている、ナチュラルキラー　（ＮＫ）細胞の免疫応答を高める化合物である。

陽性の細胞性免疫活性を確立するための簡便なｉｎ　ｖｉｖｏ試験が、実施例■ ２に提示されており、そこでは、細胞性免疫系に対して刺激効果を有する式Ｉの範囲内の化合物がまた、腫瘍形質転換細胞に対して、本発明により、特に効果的な抗腫瘍効果をも有するということが実証されている。

本発明の範囲内の免疫学的に活性な化合物はまた、液性免疫系の免疫学的増強を示す化合物をも含む。抗腫瘍用途のための式■の好ましい化合物は、ｉｎ　ｖｉｖｏで、宿主の腫瘍細胞に担持されている抗原決定基に対して特異的な抗体を含むイムノグロブリン画分（特にＩｇＧ）の産生を高める能力のある免疫学的に活性な化合物よりなる。液性免疫活性を確立するための簡便なｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏアッセイは、それらの実施例に記述されている。抗腫瘍薬としての本発明による好ましい化合物は、確立された腫瘍に対して、細胞性若しくは液性免疫応答のいずれか又は双方を増大させる能力を示すものである。

式Ｉの多くの化合物が既知のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤であるが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性と本発明による分化活性の促進との間には明らかな相関がない。例えば、ＨＭＧ　−ＣＯＡレダクターゼ阻害剤としての高い活性を有する式Ｉの範囲内の化合物は、必ずしも本発明による分化の有効な誘導剤ではなく、逆に、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を殆ど又は全く示さない化合物が、細胞分化の卓越した誘導剤である場合がある。本発明は、例えば、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２３４：　２８３５に記述されているｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験によって評価したところでは殆ど又は全く有意なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を示さない化合物が、もしも、加えて、これらの化合物が更に、例えば腫瘍特異的抗原に対して又はウィルス若しくはウィルスで形質転換された細胞に対して、免疫系の応答を高めるならば、本発明によれば有用な分化促進化合物、特に抗腫瘍薬及び免疫調節剤である、ということの発見に部分的に根拠を置いている。従って、本発明によって最適な分化促進活性を有する化合物を選択するための有用なガイドラインは、広く、特定の立体化学的配置及び実施例■ のｉｎ　ｖｉｔｒｏアッセイにおいて提示した、少なくとも３倍のｉｎ　ｖｉｔｒｏ免疫学的活性を有する式Ｉの化合物を選択することよりなる。

理論上は、本発明の抗腫瘍性調節剤は、少なくとも部分的には、細胞表面の膜特性を正常化し及び細胞増殖を制御している正常の細胞機構を回復させるよう機能する。特に、抗腫瘍薬として使用される本発明の調節剤が、正常な（形質転換されていない）細胞の増殖を抑止する接触阻害機構に関連した、正常な細胞表面のオリゴ糖類の並びを再構築させる傾向があるとする証拠がある。高親和性レフに導入する）。本発明の化合物は、腫瘍細胞表面のオリゴ糖類を修正して高親和性部位及び腫瘍形質転換された細胞における正常な増殖の制御機構を回復させるのであろう。この考えは、部分的には、本発明により処理された腫瘍の細胞が世代時間の増大と正常化された接触阻害の兆候とを明示しているという観察（実施例Ｖを参照のこと）に基づいている。

Ｃ２化合物の立体化学上に引用した特許、例えば米国特許第４．６１３．６１０号に記述されているように、式Ｉの化合物は、メバロナート誘導体の３位及び５位の炭素原子並びにメバロノラクトン誘導体の４位及び６位の炭素原子よりなる、各々２個の不斉炭素原子を含み、分子中に追加の不斉炭素が存在しないときは、式Ｉの各化合物は従って、一般的にＲ２Ｒ：Ｒ，ｓｒｓ、Ｒ，及びＳ、Ｓ鏡像体として示される４種の立体異性体（鏡像体）を包含する。これら４種のメバロナート誘導体鏡像体のうち２種は、エリトロ（シン）配置を有し、他の２種はトレオ（アンチ）配置を有しており、そして４種のメバロノラクトン誘導体鏡像体のうち２種は、シス配置を有し、他の２種はトランス配置を有している。本発明において有用な鏡像体及びそれらのラセミ混合物を特徴付けるために使用される規約は、当該技術において慣用されているものであり、米国特許第４．６１３．６１０号に詳細に説明されている。

以下に記述するように、該特定の立体配置を有しない式Ｉの範囲内の鏡像体のうちのあるものは、本発明の方法において実質的に不活性であり、本発明は分化活性のある鏡像体の使用に向けられている。不活性の種を除去するための鏡像体の混合物の分離が、従って推奨される。これは、例えば米国特許第４．６１３．６１０号に記述されているような慣用的手順により容易に達成される。代わりにそして好ましくは、この所望の分化活性のある鏡像体は、該所望の鏡像体のみを又は実質的にそれのみを与える方法によって合成される。そのような方法は、当該技術において周知である。しかしながら、本発明に従って使用するための治療用組成物中に混入している不活性な種の存在は、いかなる不活性な化合物も治療投与量を計算するに際して考慮されねばならずまた免疫抑制的鏡像体の使用は推奨されないという注意を払えば、一般には有害でない。従って、本発明はまた、本発明の活性な鏡像体各々のラセミ混合物をも包含する。

本発明の方法において有用な式■の化合物の生物学的に活性な鏡像体は、ＸをＺに結合させている架橋部分Ｘの末端炭素原子が不飽和であるか又はＸが直接結合であるときはメバロナートのＲ，Ｒ。

Ｓ、Ｓ及びＳ、　Ｒ鏡像体及びこれらのラセミ混合物よりなり、ＸをＺに結合させている架橋部分Ｘの末端炭素原子が飽和しているときはＲ，Ｒ；Ｓ、Ｓ；及びＲ，Ｓ鏡像体よりなる。

従って、例えば、−Ｘ−Ｚが、−Ｚ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｚ、又は−ｔ、ｔ−ｔ＊− ＣＨ＝ＣＨ−Ｚである場合、Ｚがメバロン酸、エステル又は塩部分であるときは、本発明による生物学的に活性な鏡像体は、３Ｒ，５Ｒ，３Ｓ、５Ｓ　；及び３Ｓ、５Ｒ鏡像体並びに対応するそれらの３Ｒ，５Ｒ−３Ｓ、５Ｓ及び３Ｒ，５Ｓ −３Ｓ、５Ｒラセマートよりなり、Ｚがメバロノラクトン部分であるときには４Ｒ１６Ｒ；４Ｓ、６Ｓ；及び４Ｓ、６Ｒ鏡像体並びに対応するそれらの４Ｒ，６Ｒ−４Ｓ、６Ｓ及び４Ｒ，６Ｓ−４Ｓ、６Ｒラセマートよりなる。逆に、−Ｘ− Ｚが、−（ＣＨｚ）、−Ｚ　（ｍ＞０）又は−ＣＨ”ＣＨＣＨＩ　Ｚであり且つＺが、メバロン酸、エステル又は塩部分であるときは、本発明による生物学的に活性な鏡像体は、３Ｓ、５Ｓ；３Ｒ，５Ｒ；及び３Ｒ，５Ｓ鏡像体並びにそれらの対応する３Ｓ、５Ｓ−３Ｒ，５Ｒ及び３Ｓ、５Ｒ−３Ｒ，５Ｓラ−１＝ｖ−トよりなり、Ｚがメバロノラクトン部分であるときは４Ｓ、６Ｓ；４Ｒ，６Ｒ，及び４Ｒ，６Ｓ鏡像体並びに対応す６４Ｓ、６Ｓ−４Ｒ，６Ｒ並びｌ：４Ｓ、６Ｒ −４Ｒ，６Ｓ−ｙセマートよりなる。

要約すると、本発明の方法において有用な化合物は、広く、化合物の生物学的に活性な式Ｉに従った、鏡像体（それらの混合物をも含む）よりなる。本発明の分化誘導剤は、特に、式Ｉの化合物（それらの鏡像体及びそれらに対応するラセマートを含む）よりなるが、但し、Ｘが、直接結合であるが又はＸをＺに結合している末端の不飽和炭素原子を含む場合には、３Ｓ、５Ｓ（メバロナート）、４Ｒ，６Ｓ（メバロノラクトン）鏡像体のいずれも含まず、モしてＸが、ＸをＺに結合している末端の飽和炭素原子を含む場合には３ｓ、５Ｒ（メバロナート）、４８．６Ｒ（メバロノラクトン）鏡像体のいずれも含まない。上に示したように、そして更に以下に提示するように、この条件により除外された該３Ｒ，５Ｓ　（４Ｒ，６Ｓ）及び３Ｓ、５Ｒ（４Ｓ、６Ｒ）鏡像体は、本発明の治療方法においては実質的に不活性であり、更に、これらの化合物は、望ましくない免疫抑制活性によって特徴づけられるように思われる。この後者のカテゴリーに属する特に注目すべき鏡像体には、実施例■及び表１に提示するように、コンパクチン（ｃｏｍｐａｃ　ｔ　ｉｎ）及びロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）　（メビノリン（ｍｅｖｉｎｏｌｉｎ））が含まれる（免疫増強がない）。式Ｉの化合物の最適の分化誘導剤活性は、本発明によれば、こうして、残基Ｚ（式■）の３．５又は４．６炭素原子の正確な立体化学及び架橋残基Ｘの特徴に依存するように思われ、そして上に示したように免疫学的活性によって明示されるように思われる。こうして、免疫学的活性、特にＩｇＧ抗体産生の刺激が、残基Ｚの化合物の分化誘導剤活性、及び特に抗腫瘍活性を予測するものと考えられる。

式Ｉに従った特に有用な化合物は、式■、（式中、Ａ及びＲ′は、式Ｉについての定義に同じである）の化合物である。

式Ｉの分化誘導活性のある鏡像体は次のものを含む。

式Ｉ及び■の化合物において、Ａは、例えば、た通りであり、特に、２）　コンパクチン残基、例えば、（式中、Ｒは、米国特許第３．９８３．１４０号に定義されており、Ｒ１はＨ又はＣＨ，である。）、３）　ピラゾリル、特に（式中、Ｒ３乃至Ｒｔは、米国特許第４．６１３．６１０号における定義に同じである。）、又は（式中、Ｒ１乃至Ｒ１は、米国特許第４．７５１．２２９号における定義に同じである。）、４）　米国特許第４．２４８．８８９号及び第４．２５５．４４４号に例示されそこにおいて「Ｚ」として定義されているような置換された又は無置換のアリール又はアリールオキシ、特に、ハロゲン若しくはＣ１〜Ｃ、アルキル若しくは双方で、特に塩素若しくはメチルで置換された若しくは無置換の、フェニル、ナフチル又はテトラヒドロナフチル、又はハロゲンで置換された若しくは無置換のフェノキシ若しくはナフトキシ、５）　イントリジニル又はアブインドリル、特に（式中、Ｒ１及びＲ１は、米国特許第４．７５１．２３５号において定義された通りである。）、及び更に特に、（式中、Ｙｌ、Ｙ”、Ｙ”、Ｙ’、ＸＳＸ’、Ｒ１゜、Ｒ１３、Ｒ７及びＲ１４は、ＰＣＴ出願Ｗ０８６１０１９９７において定義した通りであり、特に、式中、Ｙのうちの一つがＮで、他の各々がＣＨで且つＸｌがＮであるか、又は、Ｙの各々がＣＨで、ＸｌがＣＲ＋　Ｒ＋ｓで且つＸがＮである。）、６）　ピロリル、特に（式中、ＲＩ−Ｒ４は、米国特許第４．６８１．８９３号において定義されている通りである。）、７）　キノリニル、特に（式中、Ｒ１−Ｒ６は、米国特許第４．７６１．４１９号において定義した通りである。）、８）　インドリル、特に（式中、Ｒ，Ｒ，、Ｒ３及びＲｏは、米国特許第４．７３９．０７３号において定義されている通りである。）、（式中、Ｒ，、Ｒ，Ｒ，ＳＲ，及びＲ３は、ＰＣＴ出願Ｗ０８Ｂ１０３４８Ｂにおいて定義されている通りである。）、１０）　例えばハロゲン（特に塩素、臭素若しくはフッ素）、ＣＩ〜Ｃ，アルキル、Ｃ＋〜Ｃ，ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、フェニル、ベンジル、フェニルオキシ若しくはベンジルオキシで置換された又は無置換の、−又は二以上のへテロ原子、特に０、Ｓ又はＮを含むＣ４〜Ｃ，ヘテロ環、例えば、（式中、Ｙは、ｏ、Ｓ又はＮであり、そしてＲ，、Ｒ，、Ｒ，及びＲ４はＰＣＴ出願Ｗ０８７１０２６６２において定義されている通りであり、且つＲ１又はＲ２のいずれかは遊離の原子価である。）、１１）　置換された又は無置換のフェニル、特に、（式中、Ｒ１−Ｒ８は、米国特許第４．７１０．５１３号において定義されている通りである。）、（式中、Ｒｏ　、Ｒａ　、Ｒ５Ｒａ　、Ｒｓ及びＲｓ　ａは、ＰＣＴ出願ＷＯ８４１０２９０３において定義されている通りである。）、又は（式中、Ｒ１，Ｒ４及びＲ１は、米国特許第４．１９８．４２５号において（式中、Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｒ’　、Ｒ”及びＲ３は、米国特許第４，５８８．７１５号において定義されている通りである。）である。

本発明による生物学的に活性な化合物はまた、式ＩＩａ−ｃの化合物に対応するラクトンの、４Ｒ，６Ｒ；４Ｓ、６Ｓ；及び４Ｓ、６Ｒ鏡像体及びそれらのラセマートよりなる。

本発明による生物学的に活性な化合物は特に、式ＩＩａ〜ＩＩｃの鏡像体（ここにＡは、を表す）及びそのラセミ混合物よりなる。

好ましい化合物には、［ａ’　、ＩＩｃ’及びＴＦＯＯ４並びに３Ｓ、５Ｒ−ｃｏＨｅｔｒｕｎｃｏｉｃ　ａｃｉｄ及び３　Ｓ、５　Ｒ−ｃｏｌｌｅｔｒｕｎｃｏｉｃ　ａｃｉｄのへブタン酸鎖を環上の隣接メチル基で置き換えることによって得られる化合物が含まれる。

Ｄ、　化合物の有用性本発明によれば、分化活性を示さない細胞が、細胞分化活性を改善するため、特に異常な分化活性を矯正するため又は細胞分化活性を多様化させるために、ｉｎ　ｖｉｖｏ又はｉｎ　ＶｉｔｒＯでここに記述したメバロナート又はメバロノラクトン調節剤に曝される。本発明の範囲内において、「分化活性」は、正常な成熟細胞の実質上全ての分化活性をいい、コレステロール、ホルモン類、酵素、糖類等の細胞蛋白質、炭水化物及び資質ニゲロブリン及び抗体等の免疫産物の生物産生；正常な増殖パターンを維持し又は課する増殖制御機能；及び細胞膜組成、例えばオリゴ多糖類構造又は細胞質組成等の正常な細胞分化機能に特徴的な細胞構造制御機能を含む。こうして、本発明の方法は、成熟した個々の細胞に特徴的な全ての実質上機能よりなる細胞機能、すなわち、純粋に増殖的能力を有する増殖の初期の細胞に独特ではない機能、を自己制御するための方法を提供し、更に、未発現の細胞分化能力の発現を誘導することによって、例えば分化活性の発現を多様化させること又は未成熟の、実質的に個性化していない細胞若しくは異常に分化した細胞例えば形質転換された若しくは異常な細胞において分化活性を誘導することによって、生物学的に十分な細胞分化活性を高めるための方法を提供する。

ここに用いる術語「自己制御」は、例えば、環境から生物体内に導入された毒物、代謝障害によって引き起こされた生物体の生化学的不均衡、疾患若しくは障害、又は細胞、期間若しくは生物体の傷害等の、既知の又は未知の因子のために、異常な分化活性を示している細胞に細胞生化学的均衡を回復させることにおける調節剤の有用性いう。術語「自己制御」は更に、例えばｉｎ　ｖｉｖｏ及びｉｎ　ｖｉｔｒ。

の双方における細胞の老化を止めること及び存在する細胞機能に対し正常な細胞機能の許容しつる範囲内において細胞機能を多様化させること等、これまで「正常」と見なされてきた細胞活性を矯正することにおける調節剤の有用性をも含む。

本発明の分化誘導剤は、従って、異常な細胞産生の矯正、正常な細胞機能の再発現、細胞の無能力の矯正、正常な増殖パターンの回復、異常な細胞構造の調節、正常な細胞増殖パターンの再構築、そして更に、存在する細胞機能の細胞の遺伝的能力の範囲内における多様化及び／又は拡張を含む、表現形の細胞発現を刺激するよう機能する。

分化活性を修飾するためにここに用いている術語「異常」は、許容されている範囲外である上述の細胞分化活性をいう。すなわち「異常な分化活性」は、細胞形態学及び／又は活性において証明される、許容されている標準を超える又はそれに満たない病理学的細胞分化活性をいい、それはｉｎ　ｖｉｖｏで、生物体の苦痛、衰弱及び／又は死をもたらす生物体の機能不全をもたらす傾向がある。

本発明の分化誘導剤に細胞を曝すと、正常な分化活性を促進する又は細胞分化活性を多様化する細胞機構が発動される。異常な分化活性を改善するために該分化誘導剤が用いられる用途においては、そのような機能の少なくとも１０％の改善が期待される。すなわち、関係パラメーターにおいて、そのようなパラメーターの慣用的な測定値に対し、少な（とも１０％、好ましくは２０％の改善が期待される。例えば、もしも細胞の生物産生が異常に低い又は高いならば、相当時間にわたって、関係産物について全体でそれぞれ少なくとも１０％の増大又は減少が期待される。こうして、もし与えられた白血球のバイオマスが通常のｉｎ　ｖｉｔｒｏ条件下において１ＯｎＨのＩｇＧを１時間の間に産生ずるならば、同じバイオマスは、本発明の調節剤に曝されたときは、少なくとも１　ｉｎｇのＩｇＧを同じ時間の間に同じ培養条件下において産生ずる。同様に、異常に高い増殖速度を示している恕性細胞のバイオマスの増殖速度が、本発明の調節剤に曝されたときは、少な（とも１０％減少する。同様に、１ｎｖｉｖｏで、異常な細胞分化活性の少なくとも１０％の矯正が、本発明の調節剤への暴露の前後において細胞又は器官の活性を、関係産物についての血液測定、細胞活性の評価のためのＮＭＲ又はＣＡＴ走査、細胞増殖の測定のための重量評価、及び当該技術において周知の他の種々の生化学的診断手順等の、標準の測定技術に従って比較することによって確証されている。

分化活性を多様化させ又は拡張させるために本発明の分化誘導剤を使用するに関しては、同様に、関係パラメーターの慣用的な測定値に基づいて細胞分化活性における約１０％、好ましくは約２０％の増大が期待される。例えば、刺激を受けた鼠の牌細胞を分化誘導剤に曝すと、産生される抗体プール産物の親和性、結合力、及び／又は特異性に関して、抗体の多様性における少なくとも１０％の増大を以て抗体の産生が促進される。細胞構造の修正に関しては、細胞構造、特に細胞成分の生化学的特性、化学的特性、又は細胞成分の立体化学的配列における、少なくとも約１０％の変化が期待される。例えばレクチン結合によって測定したとき、例えば細胞表面膜のオリゴ糖類含量の、少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約２０％の変化が期待される。これまで記述したように、オリゴ糖細胞表面膜特性は、細胞増殖パターンと相関づけられており、そして、異常に高い細胞増殖速度における少なくとも約１０％の減少又は例えば老化した細胞に見られるような異常に低い細胞増殖速度における少なくとも約１０％の増大を提供するための、本発明の分化誘導剤による異常な細胞表面膜オリゴ糖含量の調節は、本発明の範囲内である。この例において、例えば、細胞分化活性の改善は、１ｎｖｉｔｒｏでは、オリゴ糖細胞表面特性を反映するレクチン結合の変化によって又は細胞増殖活性の直接測定（典型的には例えば実施例に記述したように世代時間（Ｔｇ）の変化によって測定される）によって、測定可能である。

Ｅ、　化合物の投与本発明の式Ｉの化合物の投与量は、決定的であるように思われる。すなわち、治療投与量範囲を超える投与量は、応答を増大させるには典型的には無効であり、実際、例えば、腫瘍の増殖を刺激する一方、該範囲を下回る投与量は、例えば腫瘍の負担を阻止するのに実質的に無効である。本発明の分化誘導剤は、一般的に、哺乳類において、例えば１日１回乃至１週に１回程度投与される約１１００ｎ／ｋｇ乃至約１００μｇ／ｋｇの投与量単位で有効である。該分化誘導剤には、治療投与量レベルでは毒性の副作用は認められない。生理的食塩水及び最適な補助薬等の慣用的の薬剤学的に許容しうる担体を用いて、例えば静脈内、腹腔内又は経口投与等のいかなる慣用的な投与経路も用いられる。ヒトのためには、好ましくは核磁気共鳴画像化（ＮＭＲＩ）のような非侵襲的診断技術によって腫瘍応答が認められるまで、少なくとも隔日という治療法に基づき、抗腫傷薬としての治療投与量レベルの該分化誘導剤の静脈内、腹腔内又は皮下注射が推奨される。

最初の陽性の腫瘍応答（例えば、腫瘍の変形又は腫瘍に関連した浮腫の存在）が、治療法の開始から約２週間で観察されると期待される。実質的な腫瘍応答が達成された後、投与頻度は腫瘍が克服されるまで例えば週１回ベースに減少されよう。

典型的手順においては、抗腫瘍化合物の治療投与量の投与は、ヒト腫瘍宿主に第１週の月曜日に開始される。生理的食塩水中の】００ｎｇ／ｋｇが第１週の月曜日、水曜日及び金曜日に静脈内又は腹腔内に投与される。この手順は、週１回のベースでＮＭＲによるモニタリングを行いながら、腫瘍負担の所望の減少が達成されるまで、連続する第２．３．４及びそれに続く週に繰り返される。その後もこの療法を続けてよいが、実験的証拠が、本発明の治療方法には治療後のリバウンドが有意には起こらないことを示している。

実施例１以下の実施例において、使用される化合物は、式ＩＩａ〜Ｔｉｃの化合物であり、式中、Ａは、（式中、Ｉ［ａ’　、ＩＩｂ’及び■ｃ′　として示される）である。

比較化合物ＩＩｄ’　は、であり、式中、Ａ及びＲ′は、ＩＩａ’　乃至ＩＩｃ’　と同じである。「化合物ＪＩＩｅ’　は、化合物■ｂ゛及びＩＩｃ’　のラセミ混合物である化合物ＴＦ−００４は、化合物ＴＦ−００２は、実施例ｏ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける免疫学的活性Ａ、ヒト末梢血白血球（ＨＰＢＬ）の免疫応答ヒト末梢血白血球を、標準組織培養培地中で培養した。これらの培養細胞の部分量＜　１ｏｏｏｏｏｏ個／ｍＬ培地）を、６時間培養し、特定量の式■の化合物を加えた。細胞を次いで更に９０時間培養した。ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）を、クラス特異的（ＩｇＧ）ヤギ抗ヒト抗血清（１：４００）で２時間条件付けした。次いで、参照によりここに導入するＲａｄｉｏ−ｉｍａｇｉｎｇ　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａ　、　Ｓ、Ｗ、　Ｂｕｒｃｈｉｅｌ　ａｎｄ　Ｂ、Ａ、　Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、　ＮｅｗＹｏｒｋ、　１９８３．１）ｐ、　１２５ −１２７に詳細に記述されているようにして、モルモットの補体（２％）を２時間プロティンＡに接合させた。

式Ｉ［ａ’乃至ＩＩｅ’　の化合物についてのこの試験の結果を表■に示す。

表１１、非特異的１ｇＧ産生を正常な産生より下に抑制する濃度２、ラット肝ＨＭＧ −ＣｏＡレダクターゼ活性の５０％阻害のための濃度（μＭ）：データは実施例ＩＡに従って得られた。

３、ＤＮＡへのＣＨ）チミジン取込みによって測定。

上の結果から明らかなように、本発明の抗腫瘍化合物の各々（■ａ’　、Ｉ［ｂ ’　、πｃ’　、ＩＩｅ’　）は、ＩｇＧ産生を刺激した。化合物ＩＩｅ’　は、１．　２μＭの濃度においてはＩｇＧの産生を抑制し、低濃度（１００ｐＭ）においては有意な増強を実質的に示さなかった（３５０％未満）。対照的に、化合物Ｉ［ａ’及び■ｂ′は、各々ＩｇＧ産生を２００ｐＭ濃度において１７００％刺激し、化合物■Ｃ′は、１１００ｐにおいてＩｇＧ産生を６２００％刺激した。免疫学的活性の誘導とＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性の阻害（ＩＣ１゜）との間には明らかな相関はなかった。

本実施例（例えばＩ［ｅ’　）に従ってｉｎ　ｖｉｔｒｏで比較的高濃度においてＩｇＧ産生を阻害する化合物の治療的投与量は、この効果を回避するためにｉｎ　ｖｉｖｏにおいて注意深（管理されなければならないと考えられる。

実施例ＩＩＩ　−ｉｎ’　ｖｉｖｏでの免疫応答１、　液性免疫腫瘍特異的抗体産生ＣＧ−特異的抗体の力価を対照〔化合物Ｉ［ａ’　を投与せず、且つＣＧ（イヌの神経膠層）細胞も埋め込まず〕と比較した。下に表■において記述されている結果に明らかなように、抗原の不存在下における化合物ＩＩａ’　の投与の後、抗体価は対照の抗体価より存意に増大した。ＣＧ腫瘍細胞の埋め込みに続いて、ＣＧ特異的抗体（ＩｇＧ）産生が有意に増大した（表■）。力価におけるこの増大は、独立した測定（ＮＭＲ評価、下記）により腫瘍の退縮が認められるまで時間と共に持続した。この時点で、ＣＧ−特異的抗体が急速に（数日内に）ベースライン対照レベルまで戻った（表■）。

この結果は、腫瘍特異的イムノグロブリン応答の発現及び進行と腫瘍の究極的な退縮との間の、ｉｎ　ｖｉｖｏでの時間的な及び定量的な相関を実証している。

この結果は、実験的腫瘍（脳神経膠層）が脳／血液関門の向こうの、実質的に液性免疫系の到達範囲を超えた特権的地位を有していると一般的には考えられていることからすると、特に著しい。実験プロトコールは、以下（図７〜９、実施例 ■）に詳細に記述されている。

表１１化合物１１ｃ°で処置されたイヌにおける特異的抗ＣＧ　１９Ｇ抗体　の産生２、　細胞性免疫細胞性免疫応答は、上記Ｉ［［、１に報告した結果を反映した。下の表■に提示したように、上の実施例ＩＩＩ、１において用いたイヌのクロム放出細胞媒介性リンパ球溶解（ＣＭＬ）は、そこに提示された液性免疫に匹敵する細胞性免疫を実証している。化合物Ｉ［ａ’　の投与（生理食塩水に溶かして腹腔内注射、月曜、水曜、金曜）の１４日後には、ベースラインレベルのＣＧ特異的ＣＭＬが存在するに過ぎなかった。化合物ＩＩａ’　の更なる２か月の投与の後、ＣＭＬの有意な増大があった。これはまた、抗原への暴露のない状態においてでもある。

次いで、ＣＧ腫瘍埋め込み物へ暴露の僅か数日後に、ＣＭＬ反応性の大きな増大があった（表■を参照のこと）。次いで、５週の後（この時には独立した測定により腫瘍は全く退縮していた）、ＣＭＬ反応性は再びベースラインに戻った。こうして、細胞性及び液性双方の免疫が、本発明の化合物により、抗原の不存在下において調節されるように見える。

表１１１化合物１１ｃ′によって治療されたイヌにおける細胞性細胞毒性対ＣＧ腫瘍実施例ＩＶ　：　ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける腫瘍細胞の阻害イヌ神経膠層を、以下のように種々の濃度の化合物Ｉ［ｅ’　及びコンパクチン（米国特許第３．９８３，１４０号）と共に、種々の暴露時間について培養した。細胞毒性は、細胞の単純な生存（Ｔ　６゜Ｎ）、接着（Ａ　Ｄ　Ｈ＊ｏ＊ｔ　）及びチミジン取込み（Ｉｓ。Ｎ）として定量した。結果は下の表■及び■に要約されている。

イヌ神経膠腫細胞：　表１ｖ５０％毒性及び接着レベルの阻害イヌ神経膠層についての単純生存（Ｔ、。、）及び接着（ＡＤＨ８０、）に関する試験した種々の薬物の５０％阻害剤濃度の評価。

イヌ神経膠腫細胞：　表■ チミジン取込みの５０％阻害培養されたイヌ神経膠腫細胞のチミジン取込みに関して試験された種々の薬物の１６゜、の評価。

表■から明らかなように、化合物ＩＩｅ’　は、７００乃至９００ｎＭの範囲において腫瘍細胞に対して細胞毒性がある。

同じ濃度範囲において、化合物ＩＩｅ’　は、ＤＮＡへのチミジン取込みを有意に阻害した（Ｉｓ。、５０〜８０ｎＭ、表Ｖ）。

化合物ＩＩｅ’　は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの強力な阻害剤であり、３ｎＭのＩＣ５ｏ及び２５μｇ／ｋｇのＥＤｓｏを有する（実施例Ｉ）。

実施例Ｖ：　腫瘍細胞の世代時間に対する効果Ａ、　イヌの神経膠層実施例■に記述したようにイヌの神経膠腫細胞を培養し、そして１０ｎＭ濃度の化合物ＩＩｅ’及びＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、又は対照としてＤＭＳＯのみのいずれかに暴露した。対照が８５％コンフルエントに達した後、７２時間毎に細胞を収穫した。世代時間（Ｔ　ｇ）は、細胞集団が２倍になるに要する時間数として測定した。結果は表■に要約されている。

表ｖ１゛イヌ神経膠層の世代時間に対する化合物１１ｅ°の効果３回の測定の平均。イヌの神経膠腫細胞を、指数関数的増殖特性を促進する条件、すなわち２Ｘ１０’　（個／Ｔ−２５フラスコ〕の条件下に増殖させた。対照が約８５％コンフルエントに達した後、該細胞を７２時間毎に収穫した。薬物は、培養開始時にＤＭＳＯに溶かして加え、対照培養物にはＤＭＳＯのみを加えた。薬物濃度は、ＤＭＳＯの最終濃度が常に０．５％となるよう、ＤＭＳＯで調節した表から分かるように、３回の継代培養の後、３回の継代培養間して１８，６時間（対照腫瘍細胞）から３３．４時間（実験細胞）への世代時間の増加があった。このことは、増殖速度の１．８倍の低下を表している。加えて、化合物■ｅ′　で処理した腫瘍細胞は、該細胞がコンフルエントに近づくと接触阻害（形質転換されていない細胞については見られるが形質転換された細胞系には見られない現象）の証拠を示した（対照イヌ神経膠腫細胞は、コンフルエントに近づいたときも急速に増殖を続け、適正な接触阻害を示さなかった）。

Ｂ、ヒト結腸癌細胞イヌ神経膠腫細胞系の代わりにヒト結腸癌細胞系（ＬＳ−１７４）を使用した以外は、上記実施例ＶＡの手順を繰り返した。結果は、下の表■に要約されている。

表■ＩＬＳ−１７４の世代時間に対する化合物Ｉｆ　ｅ″の効果３回の測定の平均。ＬＳ−１７４細胞（ヒト結腸癌）は、指数関数的増殖特性を促進する条件下、すなわち２Ｘ１０’　（個／Ｔ−２５フラスコ〕の条件下に増殖させた。

対照が約８５％コンフルエントに達した後、該細胞を７２時間毎に収穫した。薬物は、培養開始時にＤＭＳＯに溶かして加え、対照培養物にはＤＭＳＯのみを加えた。薬物濃度は、ＤＭＳＯの最終濃度が常に０．　５％となるよう、ＤＭＳＯで調節した。

世代時間の遅延下という結果は、表■に提示したものと近似していたが、より顕著であった。無処理対照腫瘍細胞は、２６．５時間の世代時間を有していた。化合物ＩＩｅ’　の存在下における３回の継代培養の後、世代時間は、４．１６倍だけ延長し１１０．３時間となった。薬物を控えると（２回の継代培養）、世代時間は対照のレベルまで戻った（データは示さず）。

実施例ｖ＋　：　ｉｎ　ｖｉｖｏ腫瘍阻害：　ヌードラ・ントモデルイヌ神経膠層５４匹のヌードラット（Ｈａｒｌａｎ）の右脇腹（こ５Ｘ１０’個のイヌ神経膠腫細胞を注射した。注射時の動物（ま、５２乃至６３日齢であり、体重的２００ｇであった。ラットを７群をこ分（す、対照群（計１２匹であった）を除き、各群は計７匹のう・ノドを有しｔこ。化合物■Ｃ′は、実験動物に、各実験群につき次のうちの一つの投与量で投与した。すなわち、１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、ｌμｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ、０．ＯＬμｇ／ｋｇ及び０．００１ μｇ／ｋｇ（リン酸緩衝食塩水、月曜、水曜、金曜、腹腔内）。対照動物は、ＰＢＳ　（リン酸緩衝食塩水）のみの投与を受（すだ。各注射の液量は、１００μ してあった。薬物の注射（ま、腫瘍細胞の注射と同時に開始した。動物は、適当な投与量の薬物（ｔｎｇ／ｋｇ乃至１１００ｎ／ｋｇ）の腹腔内注射を受け、そして腫瘍の長さ、幅、及び深さは、ノギスを用いて月曜、水曜及び金曜（Ｍ、Ｗ、Ｆ）の朝に約９週間にわたって測定した。グラフ上の各点（ま、各群蚤こつし１ての全ラットの合計を表す。点が切れ目（′）を示してしする箇所では、退縮は起こっておらずう・ノドは層殺された。データ（ま、一層大きい数の対照動物については、対照動物（こつ０ての総腫瘍体積（こ７／１２をかけることによって標準化した。

結果は、図１乃至６に要約されてし）る。

使用したＨａｒｌａｎヌードラ・ソトモデルは、免疫学的能力力く部分的（こ損なわれている。実験化合物■Ｃ°　は、強力な免疫刺激剤である（上記実施例を参照のこと）。このモデル１こお番するイヌ神経膠腫細胞の阻害のだめの最も有効な投与量は、ｔｏｏｎｇ／ｋｇであった（図３）。用いた一層高い投与量（１０及び１００μｇ／ｋ　ｇ）又（ま最も低いｌｎｇ／ｋｇの投与量においては、抗腫瘍活性（よ殆と又（よ全（示さなかった。ｉｎ　ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性に最適な投与量（ま、１ｎｖｉｔｒｏでの免疫刺激に最適な投与量（実施例Ｉ［Ａ、ＨＰＢＬア・ソセイ）と密接に相関している。ｉｎ　ｖｉｖｏにおけるこの最適投与量（１ｏｏｎｇ／ｋｇ：これは均一に分布したなら２５０μＭｉこ等しし為）は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでの最適投与量である１００９Ｍ４こ相当する。

同様に、化合物Ｉ［ａ’　、ＩＩｅ’及びＴＦＯＯ４４こつし１ても、同様の抗腫瘍活性が認められている。

実施例Ｖｌｌ　：　ｉｎ　ｖｉｖｏ腫瘍阻害；　イヌモデル−イヌ神経膠腫（細胞２Ｘ１０＠個）を、４匹の異系交配されたイヌの脳に外科的に埋め込んだ。この手順は、腫瘍の増殖により通常１４乃至２８日後に死を引き起こす。

埋め込みと同時に、これらのイヌは、各々本発明によるイし合物の療法に付され、種々の投与量の化合物ＩＩａ’　、　ＩＩｅ’及びＴＦＯＯ４が、リン酸緩衝食塩水に溶かして腹腔内注射（こよって隔日（月曜、水曜、金曜）に投与された。

腫瘍の増殖は、ＧｄＤＰＴＡを画像化剤として用いてＮＭＲｉこより週１回の間隔で評価した。この方法は、腫瘍表面の血管イヒを照らし出し、神経病理学的観察結果とよく相関する画像を提供する。該イし合物は、腫瘍に対して直接的な、初期効果を有すること力曵見出され、腫瘍の付近における実質的な浮腫としてこのＮＭＲ手順（こおし１て証明された。

この実験及び結果は、次のように要約される：図７は、３匹のイヌの左前頭葉への埋め込み後の、イヌ神経膠腫の急速な且つ進行性の増殖を示す。これらの動物は、有意に神経学的欠損を示していたことから、１２乃至１９日に層殺した。この腫瘍は、これらのイヌを１４乃至２８日で確実に殺したであろう。

図８は、脳の左前頭葉に埋め込まれたイヌ神経膠腫を有する一匹のイヌを示す。

この動物は、ＴＦ−００２で前処置された。埋め込み後、ＴＦ−００２による治療（１０μｇ／ｋｇ、腹腔内、隔日（月曜、水曜、金曜）〕が続けられた。小さい腫瘍が１２日目（こ出現した。それは１９日目までに退縮した。後の試験（データは示さず）は、この動物に腫瘍がないことを示した。

図９は、ＴＦ−００４で治療された２匹のイヌを示す。正方形（ローロ）で示された線は、腫瘍の埋め込みと同日に治療が開始された（ｌμｇ／ｋｇ、腹腔内、隔日すなわち月曜、水曜、金曜）イヌにおける、腫瘍サイズを示す。腫瘍は８日目及び１２日目には目（二見えた。実質的な退縮カ月５日目までに起こり、そして完全な退縮が２１日目までに起こった。他のイヌ（Ｘ　−Ｘ　）は、外科的埋め込みによって左前頭葉にイヌ神経膠腫を植えられた。腫瘍は１０日目には目に見えた。ＴＦ−００４による治療は１１日目に開始された。実質的な退縮が２１日目までに観察され、そして完全な退縮が３０日目までに観察された。

イヌ神経膠層モデルのあらまし４匹の動物の全てにおいて、腫瘍の完全な退縮が観察された。最も顕著な結果は、１μｇ／ｋｇ（腹腔内）の投与量率でＴＦ−００４で治療したイヌにおいて観察された。このイヌの治療は、埋め込み後１１日目に開始され、その時には大きな脳腫瘍が確立されていた。この腫瘍の完全な退縮は、埋め込み後３０日目までに起こったここに記述した調節剤は、広い細胞スペクトルにわたって正常細胞の分化機能を促進するための細胞活性の調節剤としての実質的に普遍的な機能を有するために、細胞分化を十分に基礎的なレベルで左右する、十分に原始的な生化学的制御過程に影響を及ぼすものであるということが、自明のこととして仮定される。本発明の調節剤が、種々の蛋白質、糖蛋白質、炭水化物および脂質という細胞産物並びに酵素；ソマトスタチン、ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）及び下垂体ホルモンのようなホルモン；リンホカイン、グロブリン及び抗原のような免疫産物；コレステロール等の異常な産生を矯正するよう；肝細胞の正常な機能のような正常な細胞機能を再発現させるよう；免疫不全、ヒボタルミア（ｈｙｐｏｔｈａｌｍｉａ）のような腺の欠損、及び代謝的欠損のような細胞の欠損を正すよう；老化した細胞のような低下した増殖速度を示す又は悪性細胞のような加速された増殖速度を示す細胞に、正常な増殖パターンを取り戻させるよう：異常な細胞構造を正常細胞の構造に近づかせるよう調節するよう；先祖及び／又は前駆細胞を成熟細胞の完全な産生へと刺激するよう；そして更に、存在する細胞機能を該細胞の遺伝的能力の範囲内において、例えば抗原性刺激に対する膵臓細胞の、産生される抗体の多様性及び量の双方における免疫応答を高める等のように、多様化及び／又は拡張させるよう；機能することが特に期待される。

該分化誘導剤は、細胞の自己制御又は分化機能を促進するために、細胞分化経路における非常に早期の時点に介入して、細胞分化過程に対する生化学的制御を実行する。従って、ここに記述した調節剤は、生物学的に活性な官能基部分に関して及び細胞への該生物学的に活性な官能基の提供に関して（すなわち、分子の化学量論）、細胞及び分化活性の広いスペクトルにわたって、異常な分化活性をもたらす細胞の不均衡に対抗するよう機能する分子よりなるものであると確信される。こうして、効果において（特定の細胞又は特定の分化活性に関して）比較的特異的である既知の先行技術の調節剤とは対照的に、本発明の調節剤は、化学的に不均衡となった植物、動物（特にヒトを含む哺乳類）、微生物、ウィルス、及び昆虫の細胞に、正常の分化機能を取り戻させるのに有効である。更に、本発明の調節剤は、細胞の遺伝的能力の範囲内において、分化機能の多様性を増大させるよう機能する。

臨床適用本発明において記述された化合物は、細胞分化を誘導し又は高める。すなわちそれらは細胞の表現型の発現を最大限に及び／又は正常にする。従って、それらは、（１）減弱した細胞機能か又は（２）異常な細胞機能によって特徴づけられる疾患において治療上有益であろう。第１の範噴の例には、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）及び低ガンマグロブリン血症が含まれる。第１の範躊のもう一つの例は、細菌、真菌、リケッチア、ウィルス又は原虫を起源とする病原体によって引き起こされる感染性疾患の治療である。本発明の化合物は、これらの細胞の表現型の発現を最大限にさせることによって免疫細胞の機能を最大にする。従って、本発明において記述された化合物を使用する治療によって、これらの病原体の免疫学的認識及び身体からの排除が効率化される。肝細胞（ヘバトサイト）の表現型（分化）が誘導され及び高められることから、アテローム性動脈硬化症を有する患者は、本発明による治療によって利益を得る。これは、ヘバトサイトの表面上のＬＤＬレセプターのレベルの増加をもたらし、これは身体からのコレステロールの除去を効率化する。

第２の範躊の疾患、すなわち異常な細胞機能には、癌、並びに、糖尿病、多発性硬化症、紅斑性狼癒及び関節リウマチのような自己免疫疾患が含まれる。

（クク）尉事ｔｓ画手（クク）Ｊｉｉ事筆Ｗ手【０（００）尉ｍｔｓ目手（クク）尉零Ｉ！ｌ１手（りＯ）纏零短腫手（ＯＯ）　ｉｉ：Ｉ［Ｉ１手ｏｏｒｘｔ’田ｕｌＩｉｋ羽００ｒｘ、請求 ■ ００１　ｘ　ｔｕ１ｕＩＨＡＭ国際調査報告フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３１／４７　９４５４−４ＣＣＯ７Ｃ６９／６７５６９／７３２　Ｚ　９２７９−４ＨＣ０７Ｄ　２０７／３２７　８２１７−４Ｃ２０９／１８　９２８４−４Ｃ２１５／１４　７０１９−４Ｃ２３１／１２　Ｂ　７４３１−４Ｃ２３３／６４　１０６　９３６０−４Ｃ３０９／３０　Ｄ　９３６０−４Ｃ４０５１０４２３３７６０２−４Ｃ４０５１０６２３３７６０２−４Ｃ４７１１０４１０２７６０２−４Ｃ（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＣＡ、ＪＰＩ

Claims

【特許請求の範囲】

１．遺伝的に十分な哺乳類の細胞の病理学的機能を正常化させるための方法であって、正常化に又は治療に有効な量の、式Ｉ、Ａ−Ｘ−Ｚ（Ｉ）（式中、Ｘは、直接結合、Ｃ１〜Ｃ３アルキレン又はＣ２〜Ｃ３アルケニレンであり、Ｚは、▲数式、化学式、表等があります▼又は対応するラクトン、▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒは各々、独立して、Ｈ又は生理学的に許容し得る置換基であり；Ｒ′は、水素、生理学的に許容し得る陽イオン又は陽イオン錯体Ｍ、又は生理学的に許容し得るエステル基Ｒ２である）であり、；そしてＡは、少なくとも一の芳香族環、脂環式環又は複素環を含む置換された又は無置換の環系によって特徴づけられた生理学的に許容し得る置換基であり、ここに、当該メバロナート又はメバロノラクトン鏡像体は、（ＸをＺに結合させている残基Ｘの末端炭素原子が不飽和であるか又はＸが直接結合であるときは）Ｒ，Ｒ；Ｓ，Ｓ；若しくはＳ，Ｒ鏡像体若しくは対応するラセマートであるか、又は（ＸをＺに結合させている残基Ｘの該末端炭素原子が飽和しているときは）Ｒ，Ｒ；Ｓ，Ｓ；又はＲ，Ｓ鏡像体若しくは対応するラセマートである。〕の化合物の一鏡像体を該哺乳類に投与し又はその細胞をこれによって処理することよりなるものである方法。
２．該病理学的機能が該宿主哺乳類に癌を生じさせており、且つ該鏡像体が抗腫瘍的に活性である、請求項１に記載の方法。
３．該鏡像体がまた免疫学的にも活性である、請求項２に記載の方法。
４．Ｘが−ＣＨ＝ＣＨ−であり、ＲがＨである、請求項１に記載の方法。
５．該化合物が式１の一鏡像体であるか又はその式、▲数式、化学式、表等があります▼ のラセマートである、請求項１に記載の方法。
６．該化合物が式１の一鏡像体であるか又はその式、▲数式、化学式、表等があります▼ のラセマートである、請求項１に記載の方法。
７．該化合物が式Ｉの一鏡像体であるか又はその式、▲数式、化学式、表等があります▼ のラセマートである、請求項２に記載の方法。
８．該化合物が一鏡像体であり、ここにＡが、▲数式、化学式、表等があります ▼ である、請求項５に記載の方法。
９．Ａが、 ▲数式、化学式、表等があります▼ である、請求項６に記載の方法。
１０．Ａが、 ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項７に記載の方法。
１１．該化合物が式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ である、請求項１に記載の方法。
１２．遺伝的に十分の細胞をして抗腹痛的又は免疫学的細胞活性を高めるよう調節するための方法であって、式Ｉ、Ａ−Ｘ−Ｚ（Ｉ）（式中、Ｘは、直接結合、Ｃ１〜Ｃ３アルキレン又はＣ２〜Ｃ３アルケニレンであり、Ｚは、▲数式、化学式、表等があります▼又は対応するラクトン、▲数式、化学式、表等があります▼Ｒは各々、独立して、Ｈ又は生理学的に許容し得る置換基でありＲ′は、水素、生理学的に許容し得る陽イオン又は陽イオン錯体Ｍ、又は生理学的に許容し得るエステル基Ｒ２である。）であり；そしてＡは、少なくとも一の芳香族環、脂環式環又は複素環を含む置換された又は無置換の環系によって特徴づけられた生理学的に許容できる置換基であり、ここに、当該メバロナート又はメバロノラクトン鏡像体は、（ＸをＺに結合させている残基Ｘの末端炭素原子が不飽和であるか又はＸが直接結合であるときは）Ｒ，Ｒ；Ｓ，Ｓ；若しくはＳ，Ｒ鏡像体若しくは対応するラセマートであるか、又は（ＸをＺに結合させている残基Ｘの該末端炭素原子が飽和しているときは）Ｒ，Ｒ；Ｓ，Ｓ；又はＲ，Ｓ鏡像体若しくは対応するラセマートである。〕の化合物の一鏡像体の調節量に該細胞を暴露させることよりなるものである方法。
１３．請求項１の抗腫瘍的に活性の鏡像体の治療的有効量を当該哺乳類に投与することよりなる、宿主哺乳類の癌を治療するための方法。
１４．請求項１の免疫学的に活性な鏡像体の治療的に有効な量で哺乳類を治療することよりなる、罹患した哺乳類における自己免疫障害又は疾患を治療するための方法。
１５．請求項１に免疫学的に活性な鏡像体の治療的に有効な量で当該哺乳類を治療することよりなる、罹患した哺乳類における免疫学的欠損疾患又は障害を治療するための方法。
１６．請求項１の免疫学的に活性な鏡像体の治療的に有効な量で当該哺乳類を治療することよりなる、哺乳類における後天性免疫不全症候群（エイズ）を治療するための方法。
１７．請求項１の免疫学的に活性な鏡像体の治療的に有効な量で当該罹患した哺乳類を治療することよりなる、哺乳類における低ガンマグロブリン血症を治療するための方法。
１８．請求項１の免疫学的に活性な鏡像体の治療的に有効な量で当該疾患又は障害のある当該哺乳類を治療することよりなる、若年性糖尿病、多発性硬化症、紅斑性狼瘡又は関節リウマチよりなる自己免疫疾患障害又は疾患を治療するための方法。
１９．請求項１の免疫学的に活性な鏡像体の治療的に有効な量で当該罹患した哺乳類を治療することよりなる、感染した哺乳類における感染性疾患を治療するための方法。
２０．請求項１の生物学的に有効な鏡像体の治療的に有効な量で当該罹患した哺乳類を治療することよりなる、細菌、真菌、リケッチア又はウィルスによって引き起こされた哺乳類における感染性疾患を治療するための方法。
２１．該病理学的機能が当該哺乳類の免疫学的疾患又は障害をもたらしており、且つ当該鏡像体が免疫学的に活性である、請求項１に記載の方法。
２２．該病理学的機能が該哺乳類に免疫不全をもたらしているものである、請求項２１に記載の方法。
２３．抗腫瘍性の又は免疫学的な細胞活性を促進するための、請求項１に記載の方法。
２４．Ａが、置換された又は無置換の、単核のアリール若しくはアリールオキシ；多核のアリール若しくはアリールオキシ；二核のアリール若しくはアリールオキシ；アルカリール若しくはアルカリールオキシ；シクロアルキル；シクロアルケニル；又は複素環である、請求項１に記載の方法。
２５．Ａが、ベンジル；ベンジルオキシ；フェニル；フェニルオキシ；ナフチル；ナフチルオキシ；テトラヒドロナフチル；イミダゾリル；ピリミジル；ピラゾリル；インデニル；キノリニル；ピロリル；インドリル；アザインドリル；インドリジニル；ヘテロ原子がＯ、Ｓ又はＮであり環系が少なくとも一つの二重結合そ有するＣ４〜Ｃ６複素環；Ｃ４〜Ｃ６の、シクロアルキル又はシクロアルケニル； ▲数式、化学式、表等があります▼；または▲数式、化学式、表等があります▼ である、請求項１に記載の方法。
２６．Ａが、置換された又は無置換の、単核のアリール若しくはアリールオキシ；多核のアリール若しくはアリールオキシ；二核のアリール若しくはアリールオキシ；アルカリール若しくはアルカリールオキシ；シクロアルキル；シクロアルケニル；又は複素環である、請求項１２に記載の方法。
２７．Ａが、ベンジル；ベンジルオキシ；フェニル；フェニルオキシ；ナフチル；ナフチルオキシ；テトラヒドロナフチル：イミダゾリル；ピリミジル；ピラゾリル；インデニル：キノリニル；ピロリル；インドリル；アザインドリル；インドリジニル；ヘテロ原子がＯ、Ｓ又はＮであり環系が少なくとも一つの二重結合そ有するＣ４〜Ｃ６複素環；Ｃ４〜Ｃ６の、シクロアルキル又はシクロアルケニル； ▲数式、化学式、表等があります▼；または▲数式、化学式、表等があります▼ である、請求項１２に記載の方法。