JPH07138290A - Cardiotonic agent - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain a cardiotonic agent, available from a culture prepared culturing a sporogenous imperfect fungus which belongs to the genus Trichothecium and capable of producing a cyclic depsipeptide, having strong cardiotonic actions without causing side effects such as tachycardia or arrhythmia and useful for treating, etc., congestive heart failure. CONSTITUTION:This cardiotonic agent excellent in cardiotonic effects is obtained by inoculating a sporogenous imperfect fungus, belonging to the genus Trichothecium and capable of producing a cyclic depsipeptide expressed by the formula (R is H or methyl) [e.g. Trichothecium TT103 strain (FERM P-13868)] into a culture medium, culturing the imperfect fungus at 25 deg.C for 7 days, inoculating a spore formed on a hypha into a culture medium, culturing the inoculated spore at 25 deg.C for 4 days by turning, subsequently filtering the resultant culture by suction, collecting a filtrate, passing the collected filtrate through an adsorbent resin column, then eluting the adsorbed substance with methanol, concentrating the obtained eluate, purifying the concentrate by silica get chromatography and high-performance liquid chromatography and providing a pharmaceutical preparation from the obtained compound as an active ingredient together with an excipient, a binder, a dispersing agent, etc.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、環状デプシペプチドを
含有し副作用の少ない強心剤に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a cardiotonic agent containing a cyclic depsipeptide and having few side effects.

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来、心不全の治療薬としてジギタリス
が用いられてきたが、このものは強心効果が弱く、副作
用は心臓に対するものも含めて非常に多く、安全域が狭
いものであった〔（１）Hoffman B.F.and Bigger J.T,J
r.:Digitalis and allied cardiac glycosides. In Goo
dman and Gilman's The Pharmacological basis of the
rapeutics.eds:Gilman A.G,et al.Pergamon Press,pp81
4-839,1990. （２）Poole-Whilson,P.A.and Robinson
K.:Digoxin-A redundant drug in congestive cardiac
failure.Cardiovasc.Drugs Ther.2,733-741,1989.〕。Conventionally, digitalis has been used as a therapeutic agent for heart failure, but it has a weak cardiotonic effect, has many side effects including those on the heart, and has a narrow safety margin [( 1) Hoffman BFand Bigger JT, J
r.:Digitalis and allied cardiac glycosides. In Goo
dman and Gilman's The Pharmacological basis of the
rapeutics.eds: Gilman AG, et al.Pergamon Press, pp81
4-839,1990. (2) Poole-Whilson, PAand Robinson
K.:Digoxin-A redundant drug in congestive cardiac
failure.Cardiovasc.Drugs Ther. 2 , 733-741,1989.].

【０００３】また、近年開発されたβ₁ 受容体刺激薬及
びサイクリックＡＭＰ分解酵素阻害薬は、心拍数を増加
させる作用があり、副作用として不整脈をおこすという
欠点がある。更に後者の薬剤は長期治療の場合、基礎疾
患を増悪させることが報告されている〔（３）Packer
M.et al.:Hemodynamic and clinical limitation of lo
ng-term inotropic therapy with amrinone in patient
s with severe chronicheart failure.Circulaton 70,1
038-1047,1984.（４）Packer M.et al.:Effectof oral
milrinone on mortality in severe chronic heart fai
lure.New Engl.J.Med.,325,1468-1475,1991.〕。Further, the β ₁ receptor stimulant and the cyclic AMP degrading enzyme inhibitor which have been developed in recent years have an effect of increasing the heart rate and have a drawback that they cause arrhythmia as a side effect. Furthermore, it has been reported that the latter drug exacerbates the underlying disease in the case of long-term treatment [(3) Packer
M. et al .: Hemodynamic and clinical limitation of lo
ng-term inotropic therapy with amrinone in patient
s with severe chronicheart failure.Circulaton 70 , 1
038-1047, 1984. (4) Packer M. et al .: Effect of oral
milrinone on mortality in severe chronic heart fai
lure.New Engl.J.Med., 325 , 1468-1475, 1991.].

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、強い強心作用を有すると共に、頻脈、不整脈等の副
作用を起こさない強心剤を提供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION Therefore, an object of the present invention is to provide a cardiotonic drug which has a strong cardiotonic action and does not cause side effects such as tachycardia and arrhythmia.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】斯かる実情に鑑み、本発
明者は副作用の少ない強心剤を得るべく鋭意探索を行っ
た結果、下記に示す環状デプシペプチドが、強力な強心
作用を有することを見出し本発明を完成した。In view of such circumstances, the present inventor has conducted diligent search to obtain a cardiotonic drug with few side effects, and as a result, found that the cyclic depsipeptide shown below has a strong cardiotonic action. Completed the invention.

【０００６】すなわち本発明は、次の一般式（１）That is, the present invention provides the following general formula (1):

【０００７】[0007]

【化３】 [Chemical 3]

【０００８】〔式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示
す〕で表わされる環状デプシペプチドを有効成分とする
強心剤を提供するものである。The present invention provides a cardiotonic agent containing a cyclic depsipeptide represented by the formula [wherein R represents a hydrogen atom or a methyl group] as an active ingredient.

【０００９】上記一般式（１）で表わされる環状デプシ
ペプチドは、公知の化合物であり〔（５）Ａｇｒ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．５，８９６〜
８９８，１９７２．（６）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，１０６，２３８８〜２３９２，１９８４〕、
（１）式中、Ｒが水素原子のものはＤｅｓｔｒｕｘｉｎ
Ａと呼ばれ、Ｒがメチル基のものはＲｏｓｅｏｔｏｘ
ｉｎ Ｂと呼ばれている。しかしながら、これらのペプ
チドが強心作用を有することは知られていなかった。The cyclic depsipeptide represented by the general formula (1) is a known compound [(5) Agr. Bi
ol. Chem. , Vol. 36, No. 5,896 ~
898, 1972. (6) J. Am. Chem. So
c. , 106, 2388-2392, 1984],
In the formula (1), when R is a hydrogen atom, Desruxin
Rosetox is called A and R is methyl group
It is called in B. However, it was not known that these peptides have a cardiotonic effect.

【００１０】本発明に用いる上記の環状デプシペプチド
は、従来公知の手段で製造することもできるが、トリコ
テシウム属に属する環状デプシペプチド生産性有胞子不
完全菌を培養し、得られた培養物から採取することによ
り製造するのが好ましい。かかる環状デプシペプチド生
産菌としては、例えば次のＴＴ１０３株が挙げられる。The above-mentioned cyclic depsipeptide used in the present invention can be produced by a conventionally known means, but a cyclic depsipeptide-producing sporeless bacterium belonging to the genus Trichothecium is cultured and collected from the obtained culture. It is preferable to produce it. Examples of the cyclic depsipeptide-producing bacterium include the following TT103 strain.

【００１１】ＴＴ１０３株の菌学的性質を次に示す。 （１）麦芽エキス寒天培地、ポテトデキストロース寒天
培地、オートミール寒天培地上での生育は速い。コーン
ミール寒天培地上での生育は、やや悪い。 （２）麦芽エキス寒天培地、ポテトデキストロース寒天
培地、オートミール寒天培地上の生育した菌の表面は、
極くうすい黄橙色で、裏面も極くうすい黄橙色。コーン
ミール寒天培地上の生育した菌の表面は白色、裏面も白
色である。 （３）いずれの培地でも、培地中の色素の産生は殆ど見
られない。またいずれの培地上でも、分生子形成は良好
で、気菌糸上にメリステムアレウロ型分生子を密に形成
する。 （４）分生子は、２細胞、洋なし形、又は楕円形、無
色、基端は切断型。大きさは５〜１０×１２〜２０μm
。 （５）生育温度の範囲は、１３〜３２℃、生育至適温度
は、２５℃。 （６）生育pHの範囲は、２〜９、生育至適pHは、４〜
８。The mycological properties of the TT103 strain are shown below. (1) Growth on malt extract agar medium, potato dextrose agar medium, and oatmeal agar medium is fast. Growth on cornmeal agar is rather poor. (2) The surface of the grown bacteria on the malt extract agar medium, potato dextrose agar medium and oatmeal agar medium is
Very pale yellow-orange, and the back side is also very pale yellow-orange. The surface of the grown bacteria on the corn meal agar medium is white, and the back surface is also white. (3) In any of the cultures, almost no pigment is produced in the culture. Also, conidia formation was good on any medium, and meristem aleuro-type conidia were densely formed on aerial hyphae. (4) Conidia are 2-cell, pear-shaped, or oval, colorless, and the proximal end is truncated. The size is 5-10 × 12-20μm
. (5) The growth temperature range is 13 to 32 ° C, and the optimum growth temperature is 25 ° C. (6) The growth pH range is 2 to 9, and the optimum growth pH is 4 to
8.

【００１２】以上の性質より、本菌株は、Trichotheciu
m 属に属する有胞子不完全菌と考えられ菌類図鑑〔宇田
川俊一、椿啓介ほか講談社サイエンティフィク、講談
社、１９８７年〕により検索した結果、新規と認められ
たので、ＴＴ１０３株と命名し、工業技術院生命工学工
業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１３８６８として寄託し
た。From the above properties, this strain is Trichotheciu
The TT103 strain was named as TT103 strain because it was recognized as new as a result of searching with a fungal pictorial book [Shunichi Udagawa, Keisuke Tsubaki et al. Kodansha Scientific, Kodansha, 1987], which is considered to be a spore-deficient bacterium belonging to the genus m. Deposited as FERM P-13868 to Institute of Biotechnology, Institute of Technology.

【００１３】この菌を用い、本発明に用いる環状デプシ
ペプチド（１）を得るには、まず通常の微生物が利用し
得る栄養物を含有する培地で、ＴＴ１０３株を培養すれ
ばよい。栄養源のうち炭素源としては、例えば、グルコ
ース、水飴、デキストリン、スクロース、澱粉、糖蜜及
び動植物油などが使用できる。窒素源としては、例え
ば、大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープ・リカー、綿
実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ソーダ及び尿素などが使用可能である。その
ほか必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、
コバルト、塩素、燐酸、硫酸及びそのほかのイオンを生
成することのできる無機塩類を添加することが有効であ
る。また菌の生育を助け、本活性物質の産生を促進する
ような、有機及び無機物を適当に添加することができ
る。In order to obtain the cyclic depsipeptide (1) used in the present invention using this bacterium, first, the TT103 strain may be cultured in a medium containing nutrients that can be used by ordinary microorganisms. As the carbon source among the nutrient sources, for example, glucose, starch syrup, dextrin, sucrose, starch, molasses and animal and vegetable oils can be used. As the nitrogen source, for example, soybean flour, wheat germ, corn steep liquor, cottonseed meal, meat extract, peptone, yeast extract, ammonium sulfate, sodium nitrate, urea and the like can be used. In addition, if necessary, sodium, potassium, calcium,
It is effective to add inorganic salts capable of producing cobalt, chlorine, phosphoric acid, sulfuric acid and other ions. In addition, organic and inorganic substances that help the growth of bacteria and promote the production of the present active substance can be added appropriately.

【００１４】ＴＴ１０３株の培養は、好気的条件下で行
うことが好ましい。培養に適当な温度は１５〜３０℃で
あるが、２０〜２７℃の範囲が特に好ましい。培養は振
とう培養、タンク培養とも通常３〜１０日で目的とする
環状デプシペプチド（１）が最大量になるので、このと
き、培養液を取り出し、目的の環状デプシペプチド
（１）を単離精製する。The TT103 strain is preferably cultured under aerobic conditions. A suitable temperature for culturing is 15 to 30 ° C, but a range of 20 to 27 ° C is particularly preferable. In both the shaking culture and the tank culture, the target cyclic depsipeptide (1) usually reaches its maximum amount in 3 to 10 days. At this time, the culture solution is taken out and the target cyclic depsipeptide (1) is isolated and purified. .

【００１５】本発明に用いる環状デプシペプチド（１）
を培養物から精製単離するには、不純物との溶解度差を
利用する方法、イオン結合力の差を利用する方法、吸着
親和力の差を利用する方法、分子量の差を利用する方法
等が挙げられるが、それぞれ単独、あるいは適宜組み合
わせて、あるいは反復して使用することができる。Cyclic depsipeptide used in the present invention (1)
In order to purify and isolate the protein from the culture, methods that utilize the difference in solubility with impurities, methods that utilize the difference in ionic binding force, methods that utilize the difference in adsorption affinity, methods that utilize the difference in molecular weight, etc. However, they can be used alone, in appropriate combination, or repeatedly used.

【００１６】上記の如くして得られた環状デプシペプチ
ド（１）は、経口、非経口いずれの方法によっても投与
することが可能であり、また本発明の強心剤は、各種の
剤型、例えば散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠、カプセル
剤、アンプル剤等の経口投与剤；皮下、筋肉若しくは静
脈注射剤；坐剤等とすることができる。上記強心剤は、
環状デプシペプチド（１）単独又は環状デプシペプチド
と賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、界面活
性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、矯味剤、香
料、被覆剤等を適宜組み合わせて処方することにより製
造することができる。斯くして得られた本発明強心剤の
投与量は、症状、投与ルート等によっても異なるが、一
般的に成人において、環状デプシペプチド（１）として
０．１〜３００mg／日、好ましくは０．１〜１００mg／
日であり、これを通常１日３〜４回に分けて投与するの
が好適である。The cyclic depsipeptide (1) obtained as described above can be administered either orally or parenterally, and the cardiotonic agent of the present invention can be administered in various dosage forms such as powder, Orally administrable agents such as granules, tablets, dragees, capsules and ampoules; subcutaneous, intramuscular or intravenous injections; suppositories and the like. The cardiotonic agent is
Cyclic depsipeptide (1) alone or cyclic depsipeptide and excipients, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, lubricants, dispersants, buffers, preservatives, flavoring agents, perfumes, coatings It can be produced by appropriately combining and prescribing agents and the like. The dose of the cardiotonic agent of the present invention thus obtained varies depending on the symptoms, administration route, etc., but is generally 0.1 to 300 mg / day, preferably 0.1 to 300 mg / day as cyclic depsipeptide (1) in adults. 100 mg /
It is a day, and it is usually preferable to administer this in 3 to 4 divided doses a day.

【００１７】[0017]

【発明の効果】本発明の強心剤は、不整脈等の副作用が
なく、強心効果に優れており、うっ血性心不全等の治療
に有用である。INDUSTRIAL APPLICABILITY The cardiotonic agent of the present invention has no side effects such as arrhythmia, has an excellent cardiotonic effect, and is useful for treating congestive heart failure and the like.

【００１８】[0018]

【実施例】以下に実施例及び試験例を挙げて更に具体的
に本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例によっ
て限定されるものではない。EXAMPLES The present invention will be described in more detail below with reference to Examples and Test Examples, but the present invention is not limited to these Examples.

【００１９】実施例１ 環状デプシペプチド（１）の製
造： （１）培養 麦芽エキス寒天培地上にＴＴ１０３株を植菌し、２５
℃、７日間培養後、菌糸上にできた胞子を滅菌脱脂乳
（１０％還元脱脂乳）に懸濁し、−８０℃で凍結保存し
た。別に、麦芽エキス２％、酵母エキス０．２％を含有
する培地（pH５．６）１．５Ｌを３Ｌ三角フラスコに入
れ、１２１℃において１５分間高圧滅菌した。これに上
記凍結菌を解凍し、その４０μL を植菌し、２５℃にお
いて４日間、１分間１８０回転にて旋回培養する。得ら
れた培養物を吸引濾過して、粗生成物たる濾液を得た。Example 1 Production of Cyclic Depsipeptide (1): (1) Culture 25 strains of TT103 were inoculated on a malt extract agar medium, and 25
After culturing at 7 ° C for 7 days, the spores formed on the hyphae were suspended in sterilized skim milk (10% reduced skim milk) and stored frozen at -80 ° C. Separately, 1.5 L of a medium (pH 5.6) containing 2% of malt extract and 0.2% of yeast extract was placed in a 3 L Erlenmeyer flask and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes. The above-mentioned frozen bacterium is thawed, 40 µL thereof is inoculated, and cultivated by swirling at 25 ° C for 4 days at 180 rpm for 1 day. The obtained culture was subjected to suction filtration to obtain a filtrate as a crude product.

【００２０】（２）培養物の精製 上記（１）で得られた濾液４０Ｌを、８ＬのＨＰ−２０
カラム（ダイヤイオン，三菱化成（株）製）に吸着させ
た後、メタノールにより溶出した。メタノール溶出画分
を減圧下濃縮し、４５ｇの濃縮物を得た。得られた濃縮
物を蒸留水７００mlに溶解し、塩酸でpH３に調整し、７
００mlの酢酸エチルにて３回抽出した。抽出液を無水硫
酸ナトリウムで脱水した後、減圧下濃縮し、３ｇの濃縮
物を得た。得られた濃縮物をシリカゲル（ワコーゲルＣ
−３００，和光純薬工業社製）にて精製した。ヘキサン
−酢酸エチル混液で溶出し、酢酸エチル１００％の溶出
画分に活性物質を得、減圧下濃縮し１．４ｇの濃縮物を
得た。(2) Purification of culture 40 L of the filtrate obtained in the above (1) was added to 8 L of HP-20.
After being adsorbed on a column (Diaion, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), it was eluted with methanol. The methanol elution fraction was concentrated under reduced pressure to obtain 45 g of a concentrate. The concentrate obtained was dissolved in 700 ml of distilled water and adjusted to pH 3 with hydrochloric acid.
It was extracted three times with 00 ml of ethyl acetate. The extract was dehydrated with anhydrous sodium sulfate and then concentrated under reduced pressure to obtain 3 g of a concentrate. The concentrate obtained was treated with silica gel (Wako Gel C
-300, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Elution with a hexane-ethyl acetate mixed solution gave the active substance in the elution fraction of 100% ethyl acetate, which was concentrated under reduced pressure to obtain 1.4 g of a concentrate.

【００２１】得られた濃縮物をメタノールに溶解した
後、ＨＰＬＣにて精製した。カラムはカプセルパックＣ
−１８（５０φ×５００mm）（資生堂）を使用した。ア
セトニトリル−水系で６０ml／min で溶出し、アセトニ
トリルの濃度が増すように勾配をつけて溶出したとこ
ろ、アセトニトリルが４０％付近の濃度でＤｅｓｔｒｕ
ｘｉｎ Ａ、Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂ、新規な環状デ
プシペプチドの順に活性物質が溶出された。溶出された
活性画分を集め、アセトニトリルを減圧下留去後、水相
を酢酸エチルで抽出した。抽出液を減圧下濃縮すると、
ＤｅｓｔｒｕｘｉｎＡは３３mg、Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ
Ｂは２３０mg、新規な環状デプシペプチドは１２３mg
得られた。このもののＮＭＲデータは次の通りである。
なお、新規な環状デプシペプチドについては、特願平５
−２４５０７８号に記載されている。The concentrate obtained was dissolved in methanol and then purified by HPLC. Column is Capsule Pack C
-18 (50φ x 500 mm) (Shiseido) was used. Elution with an acetonitrile-water system at 60 ml / min was performed with a gradient so that the concentration of acetonitrile was increased. When the concentration of acetonitrile was about 40%, Destru
The active substance was eluted in the order of xin A, Rosetoxin B, and the novel cyclic depsipeptide. The eluted active fractions were collected, acetonitrile was distilled off under reduced pressure, and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate. When the extract is concentrated under reduced pressure,
Desruxin A is 33 mg, Roseotoxin
230 mg of B, 123 mg of new cyclic depsipeptide
Was obtained. The NMR data of this product are as follows.
Regarding the novel cyclic depsipeptide, Japanese Patent Application No.
No. 245078.

【００２２】（１）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：Ｖａｒｉ
ａｎ社製、Ｕｎｉｔｙ−５００型を用い、重クロロホル
ム溶液中で５００ＭＨｚ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定
した。Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａの結果を図１に、Ｒｏｓ
ｅｏｔｏｘｉｎ Ｂの結果を図３に示す。基準物質はテ
トラメチルシランを用いた。(1) ¹ H-NMR spectrum: Vari
A 500 MHz ¹ H-NMR spectrum was measured in a deuterated chloroform solution using a Unity-500 model manufactured by An. The results of Desruxin A are shown in FIG.
The results of eotoxin B are shown in FIG. Tetramethylsilane was used as the reference substance.

【００２３】（２）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：Ｖａｒｉ
ａｎ社製、Ｕｎｉｔｙ−５００型を用い、重クロロホル
ム溶液中で１２５ＭＨｚ¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを測定
した。Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａの結果を図２に、Ｒｏｓ
ｅｏｔｏｘｉｎ Ｂの結果を図４に示す。基準物質はテ
トラメチルシランを用いた。(2) ¹³ C-NMR spectrum: Vari
A 125 MHz ¹³ C-NMR spectrum was measured in a deuterated chloroform solution using a Unity-500 model manufactured by an. The results of Desruxin A are shown in FIG.
The results of eotoxin B are shown in FIG. Tetramethylsilane was used as the reference substance.

【００２４】試験例１ Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａ及びＲｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂ
の強心効果を文献〔（７）Kurokawa M.and Tsunoo A.:P
arasympathetic depression of vas deferenscontracti
on in the guinea-pig involves adenosine receptors.
J.Physiol., 407,135-153,1988;（８）Tsunoo A.Kuroka
wa M.and Takahashi K.:Neurally evoked potentiation
of tonic contractions in the guinea-pig vas defer
ens involves adenosine receptors.J.Physiol., 433,1
63-181,1991〕の方法に従って試験した。Test Example 1 Destroxin A and Rosetoxin B
The cardiotonic effect of [[7] Kurokawa M. and Tsunoo A.:P
arasympathetic depression of vas deferenscontracti
on in the guinea-pig involves adenosine receptors.
J. Physiol., 407 , 135-153,1988; (8) Tsunoo A. Kuroka
wa M. and Takahashi K.:Neurally evoked potentiation
of tonic contractions in the guinea-pig vas defer
ens involves adenosine receptors.J.Physiol., 433 , 1
63-181, 1991].

【００２５】すなわち、ＳＤラット（雄、２００〜３５
０ｇ）、ＩＣＲマウス（雄、２５〜３０ｇ）及びビーグ
ル犬（雄、３〜５kg）の摘出心筋標本を容積０．８mlの
横型灌流槽に固定し、収縮力を等尺性に記録した。灌流
液は９５％酸素、５％炭酸ガスで平衡させたクレブス
液、又は以下の組成をもち通気させた塩溶液（塩化ナト
リウム１４０mM、塩化カリウム５mM、塩化カルシウム
２．６mM、塩化マグネシウム１．３mM、グルコース１０
mM、ＨＥＰＥＳ５mM）を使用した。灌流液は３６〜３７
℃に保ち、流速は３〜４ml／分とした。試験物質は、灌
流液に溶かして標本に適用した。乳頭筋標本は灌流槽内
の白金線を通して２Ｈｚで電気刺激した。SD rats (male, 200-35)
0 g), ICR mice (male, 25-30 g) and beagle dogs (male, 3-5 kg) were fixed in a lateral perfusion tank with a volume of 0.8 ml and the contractile force was recorded isometrically. The perfusate is Krebs solution equilibrated with 95% oxygen and 5% carbon dioxide, or a salt solution (sodium chloride 140 mM, potassium chloride 5 mM, calcium chloride 2.6 mM, magnesium chloride 1.3 mM, aerated with the following composition). Glucose 10
mM, HEPES 5 mM) was used. 36-37 perfusate
The temperature was kept at 0 ° C and the flow rate was 3 to 4 ml / min. The test substance was dissolved in the perfusate and applied to the specimen. The papillary muscle specimen was electrically stimulated at 2 Hz through a platinum wire in a perfusion tank.

【００２６】ラット右心房筋における灌流槽内のＤｅｓ
ｔｒｕｘｉｎ Ａ濃度と収縮力の関係を図５に、収縮間
隔時間との関係を図６に示す。なお、値は薬物適用前の
対照値に対する比率（相対値）で示した。Des in the perfusion tank in rat right atrial muscle
The relationship between truxin A concentration and contractile force is shown in FIG. 5, and the relationship with contraction interval time is shown in FIG. The values are shown as a ratio (relative value) to the control value before drug application.

【００２７】Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａは０．６μM から
１８０μM の濃度範囲で用量依存的に右心房筋の自動能
による収縮を増強した。また、図６に示すように収縮間
隔はほとんど影響をうけないか延長傾向がみられた。ま
たＤｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａは右心房筋の場合と同様に、
用量依存的に電気刺激による左心室乳頭筋の収縮を増強
した。また、ラット右心房筋におけるＲｏｓｅｏｔｏｘ
ｉｎ Ｂ濃度（灌流槽内）と収縮力の関係を図７に、収
縮間隔時間との関係を図８に示す。なお、値は薬物適用
前の対照値に対する比率（相対値）で示した。Desruxin A dose-dependently enhanced the contraction of the right atrial muscle by autonomic activity in the concentration range of 0.6 μM to 180 μM. Further, as shown in FIG. 6, the contraction interval was hardly influenced or tended to extend. Destroxin A is similar to the case of the right atrial muscle,
The contraction of the left ventricular papillary muscle by electrical stimulation was enhanced in a dose-dependent manner. In addition, Roseotox in rat right atrial muscle
FIG. 7 shows the relationship between the in B concentration (in the perfusion tank) and the contraction force, and FIG. 8 shows the relationship with the contraction interval time. The values are shown as a ratio (relative value) to the control value before drug application.

【００２８】Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂは、０．６μM
から１８０μM の濃度範囲で、右心房筋の自動能による
収縮を増強し、更にこの効果は用量依存的であった。ま
た、図８に示すように自動能による収縮の間隔はほとん
ど影響を受けないか延長傾向がみられた。またＲｏｓｅ
ｏｔｏｘｉｎ Ｂは電気刺激による左心室乳頭筋の収縮
も増強した。収縮力の増加は心房筋の場合と同じ濃度範
囲で用量依存的であった。また、ビーグル犬左心室乳頭
筋標本においてジゴキシンは５μM で、電気刺激によら
ない異常収縮を起こしたが、Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａ及
びＲｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂは１８０μM でも異常収縮
は起こさなかった。Rosetoxin B is 0.6 μM
The concentration range from 1 to 180 μM enhanced autonomic contraction of the right atrial muscle, and this effect was dose-dependent. Moreover, as shown in FIG. 8, the interval of contraction due to the automatic ability was hardly affected or showed an extension tendency. See also Rose
Otoxin B also enhanced electrical contraction of the left ventricular papillary muscle. The increase in contractile force was dose-dependent in the same concentration range as in atrial muscle. In the beagle dog left ventricular papillary muscle preparation, digoxin at 5 μM caused abnormal contraction independent of electrical stimulation, whereas Desruxin A and Rosetoxin B at 180 μM did not cause abnormal contraction.

【００２９】試験例２ マウスを１群５匹として用い、本発明に用いる環状デプ
シペプチドを０．５％ツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０）
に溶解してマウス尾静脈より投与し、急性毒性試験を行
った。その結果ＬＤ₅₀はＤｅｓｅｒｕｘｉｎ Ａは、
９．１５mg／kgであり、Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂは１
３．０５mg／kgであった。Test Example 2 Using 5 mice per group, the cyclic depsipeptide used in the present invention was added to 0.5% Tween 80 (Tween 80).
Acetotoxicity test was carried out by dissolving it in the mouse and administering it from the tail vein of mice. As a result, LD ₅₀ is Deseruxin A,
9.15 mg / kg, Rosetoxin B is 1
It was 3.05 mg / kg.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａの¹Ｈ−ＮＭＲスペク
トルを示す図である。FIG. 1 is a diagram showing a ¹ H-NMR spectrum of Desruxin A.

【図２】Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａの¹³Ｃ−ＮＭＲスペク
トルを示す図である。FIG. 2 is a diagram showing a ¹³ C-NMR spectrum of Desruxin A.

【図３】Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂの¹Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを示す図である。FIG. 3 is a chart showing ¹ H-NMR spectrum of Rosetoxin B.

【図４】Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂの¹³Ｃ−ＮＭＲスペ
クトルを示す図である。FIG. 4 is a diagram showing a ¹³ C-NMR spectrum of Rosetoxin B.

【図５】Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａのラット右心房筋にお
ける用量−収縮力関係を示す図である。FIG. 5 is a graph showing a dose-contractile force relationship of Destruxin A in rat right atrial muscle.

【図６】Ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ａのラット右心房筋にお
ける用量−収縮間隔時間関係を示す図である。FIG. 6 is a graph showing a dose-contraction interval time relationship in the rat right atrial muscle of Desruxin A.

【図７】Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂのラット右心房筋に
おける用量−収縮力関係を示す図である。FIG. 7 is a graph showing dose-contractile force relationship of Roseotoxin B in rat right atrial muscle.

【図８】Ｒｏｓｅｏｔｏｘｉｎ Ｂのラット右心房筋に
おける用量−収縮間隔時間関係を示す図である。FIG. 8 is a diagram showing a dose-contraction interval time relationship in the rat right atrial muscle of Roseotoxin B.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 佐藤 吉朗 神奈川県小田原市成田540 明治乳業株式 会社ヘルスサイエンス研究所内 (72)発明者 鰺坂 勝美 神奈川県小田原市成田540 明治乳業株式 会社ヘルスサイエンス研究所内 (72)発明者 舟橋 紀男 神奈川県小田原市成田540 明治乳業株式 会社ヘルスサイエンス研究所内 (72)発明者 上條 政幸 神奈川県小田原市成田540 明治乳業株式 会社ヘルスサイエンス研究所内─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification number Reference number within the agency FI Technical display location // (C12P 21/04 C12R 1: 645) (72) Inventor Yoshiro Sato 540 Narita, Odawara, Kanagawa Meiji Dairy Co., Ltd.Health Science Research Institute (72) Inventor Katsumi Aisaka 540 Narita, Odawara-shi, Kanagawa Prefecture Meiji Dairy Co., Ltd. Health Science Research Institute (72) Inventor Norio Funahashi 540, Narita, Odawara, Kanagawa Meiji Dairy Co., Ltd. Health Science Research Institute (72) Inventor Masayuki Kamijo 540 Narita, Odawara, Kanagawa Prefecture Meiji Dairy Co., Ltd.

Claims (2)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 次の一般式（１） 【化１】 〔式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示す〕で表わされ
る環状デプシペプチドを有効成分とする強心剤。1. The following general formula (1): A cardiotonic agent containing a cyclic depsipeptide represented by the formula: wherein R represents a hydrogen atom or a methyl group. 【請求項２】 トリコテシウム属に属する環状デプシペ
プチド生産性有胞子不完全菌を培養し、得られた培養物
から、次の一般式（１） 【化２】 〔式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示す〕で表わされ
る環状デプシペプチドを採取することを特徴とする環状
デプシペプチドの製造法。2. A cyclic depsipeptide-producing sporeless bacterium belonging to the genus Trichothecium is cultivated, and from the obtained culture, the following general formula (1): A method for producing a cyclic depsipeptide, which comprises collecting a cyclic depsipeptide represented by the formula: wherein R represents a hydrogen atom or a methyl group.