JPH0673470B2 - 抗ヒト胃癌単クロ−ン性抗体ａｍｃ−４６２ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、IgG1クラスに属し、消化器癌に対して反応性
を有する単クローン性抗体AMC−462およびこれを用いる
消化器癌の検出方法に関する。本発明は消化器癌の診
断、とくに膵癌の診断に使用することができ、診断薬の
分野で利用可能である。

従来技術 従来、消化器癌の腫瘍マーカーとして癌胎児性抗原（CE
A）が知られており、CEAを抗CEA血清（ポリクローナル
抗体）を用いて測定することにより消化器癌を検出する
方法が知られている。また抗CEA単クローン性抗体を用
いる消化器癌の検出法も開発されている。CEA測定によ
る血清診断は、その陽性率が30〜60％であり、消化器癌
患者のスクリーニングには十分でない。

最近、大腸癌細胞株に対する単クローン性抗体NS19−９
を用いる血清診断で、膵癌、胆管癌などが80％近い陽性
率で検出され、また膵癌細胞株に対する単クローン性抗
体DuPan−２を用いる血清診断で、膵癌が60〜70％の陽
性率で検出されている〔治療学、15,484（1985）〕。

発明が解決すべき問題点 上述のごとく、NS19−９やDuPan−２の単クローン性抗
体を用いる血清診断で、膵癌は80％近く検出できるが、
なお20％近くが陰性と判断されてしまう。残る20％につ
いても検出できる単クローン性抗体が有れば膵癌の診断
にとって非常に有利である。

問題点を解決するための手段 本発明者は、ヒト胃癌膜成分を免疫源として樹立したハ
イブリドーマが生産する単クローン性抗体AMC−462が、
消化器癌とくに膵癌で高い陽性率を示し、NS19−９やDu
Pan−２を用いる血清診断で陰性と診断された例をも陽
性として検出できることを見出し本発明を完成した。以
下本発明について詳細に説明する。

本発明は、ヒト胃癌組織膜成分で免疫したマウスの脾細
胞とマウス骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマを
作製し、ヒト胃癌に反応性を有する単クローン性抗体を
選択し、該ハイブリドーマを培地中に培養するかマウス
に投与して該マウスで腹水化し、該培養物または腹水よ
り採取することにより得られ、かつシアル酸化された糖
蛋白質または糖脂質を抗原として認識する抗ヒト胃癌反
応性単クローン性抗体を提供する。

本発明の単クローン性抗体は、IgG1クラスに属し、消化
器癌細胞に反応し、シアル酸化された糖蛋白質または糖
脂質を抗原として認識する。

本発明単クローン性抗体の具体例としては、ハイブリド
ーマ細胞株AMC−462（ECACC86050801）が生産するAMC−
462があげられる。

以下に本発明単クローン性抗体の製造法を詳細に説明す
る。

（１）動物の免疫と抗体産生細胞の調製 ３〜10週令、望ましくは８週令のマウスに、ヒト胃癌の
細胞、組織あるいはそれらの膜成分を免疫して、その動
物の脾，リンパ節，末梢血中の抗体産生細胞を調製す
る。免疫するマウスはヒト正常胃細胞で前処理して免疫
寛容にしたマウスを用いるのが好ましい。免疫の方法
は、動物の皮下あるいは静脈内あるいは腹腔内に、適当
なアジュバント〔例えば、フロインドの完全アジュバン
ド（Complete Freund′s Adjuvant）または、水酸化ア
ルミニウムゲルと百日咳菌ワクチンなど〕とともにヒト
胃癌細胞（10⁶〜10⁷細胞／匹），ヒト胃癌組織もしくは
それらの膜成分（膜断片）（10〜500μg/匹）を投与す
る。以後、１〜２週間おきに抗原を２〜５回投与する。
各免疫後３〜７日目に眼底静脈叢より採血し、その血清
がヒト胃癌と反応することを以下に示す酸素免疫測定法
〔酸素免疫測定法（ELISA）：医学書院刊1976年〕など
で調べる。

酸素免疫測定法： 96穴のEIA用プレート〔フロー・ラボラトリーズ（Flow
Laboratories）社製〕に、正常あるいは腫瘍細胞，組織
の膜成分（蛋白量として10〜1,000μg/ml含有する膜断
片）を100〜200μl/穴ずつ分注し、４℃で１〜２晩放置
して、上清を抜き去った後、レジン水あるいは、PBS
（リン酸二ナトリウム1.83g,リン酸一カリウム0.21g,食
塩7.65g,蒸溜水１,pH7.2）でよく洗浄後、１％BSA
（牛血清アルブミン）−PBSを100〜200μl/穴分注し、
４℃で１〜２晩放置して、プレート上に残った蛋白質と
の結合残基をブロック（ブロッキング）した。その後、
BSA−PBSを捨て、レジン水あるいはPBSでよく洗浄した
後、第１抗体として、BSA−PBSで希釈した試料（マウス
血清，ハイブリドーマ培養上清，粗精製モノクローナル
抗体）を100μl/穴分注し、４℃で１晩放置する。レジ
ン水で１回、2M NaCl溶液で６回洗浄した後、第２抗体
としてウサギの抗マウスイムノグロブリンIgG−ペルオ
キシダーゼ結合物〔ダコ（DAKO）社製、販売元協和メデ
ックス〕の100倍希釈液を100μl/穴分注し、室温で２時
間放置する。

PBSでよく洗浄後、ABTS基質液〔2,2′−アジノビス（３
−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）二アンモ
ニウム550mgを0.1Mクエン酸緩衝液（pH4.2）１に溶か
した溶液に、使用直前に過酸化水素１μl/mlを加えた溶
液〕を用い、発色をOD₄₁₅nmの吸光度で測定する。この
とき、胃癌細胞、組織あるいはそれらの膜成分に対して
強く反応するマウスをヒト胃癌免疫マウスとしてハイブ
リドーマ作製のための抗体産生細胞の供給源として用い
る。

酸素免疫測定法を行うにあたって、抗原として、細胞そ
のものを用いる場合は、ファルコン（Falcon）3072プレ
ート中で、標的細胞を培養し、0.25％グルタールアルデ
ヒド−PBSを加え、室温に１〜２時間放置し、PBSでよく
洗浄後、１％BSA−PBS100〜200μｌを加え、２時間放置
し、レジン水またはPBSでよく洗浄し、そのプレートを
用いて、一般の抗原コートプレートを用いるのと同様の
方法にて、抗体価の測定を行った。

細胞融合に供するにあたって、免疫化マウスに融合処理
の３〜４日前に、ヒト胃癌細胞，組織あるいはその膜成
分を２〜５×10⁶細胞／匹あるいは20/400μg/匹腹腔内
に投与し、脾臓細胞を摘出し、脾細胞を調製する。脾臓
をMEM（日水製薬社製）中で細断し、ピンセットでほぐ
し、1200rpm、５分間遠心分離にかけ、上清を捨て、ト
リス−塩化アンモニウム緩衝液（pH7.65）で１〜２分間
処理し赤血球を除去し、MEMで３回洗浄して融合用脾細
胞として提供する。

（２）骨髄腫細胞の調製 骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を使
用する、たとえば、８−アザグアニン耐性マウス（BALB
/c由来）骨髄腫細胞株P3−X63Ag8−U1（P3−U1）〔カレ
ント・トピックス・イン・ミクロバイオロジィ・アンド
・イムノロジィー１（Current Topics in Microbiology
and Immunology−１）〕〔ヨーロピアン・ジャーナル
・オブ・イムノロジィ（European J.Immunology）6,511
−519（1976）〕、SP2/0−Ag14（SP−２）〔ネイチャー
（Nature）276,269−270（1978）〕、P3−X63−Ag8653
（653）〔ジャーナル・オブ・イムノロジィ（J.Immunol
ogy）123,1548−1550（1979）〕、P3−X63−Ag8（X63）
〔ネイチャー（Nature）256,495−497（1975）〕などが
用いられる。これらの細胞株は、８−アザグアニン培地
〔RPMI−1640培地にグルタミン（1.5mM）,2メルカプト
エタノール（５×10^-5M），ジェンタマイシン（10μg/m
l）および牛胎児血清（FCS）（CSL社製）（10％）を加
えた正常培地に、さらに８−アザグアニン（15μg/ml）
を加えた培地〕で継代するが、細胞融合の３〜４日前に
正常培地に継代し、融合当日２×10⁷以上の細胞数を確
保する。

（３）細胞融合 （１）で免疫した抗体産生細胞と（２）で得られた骨髄
腫細胞をMEM培地またはPBSでよく洗浄し、細胞数が、抗
体産生細胞：骨髄腫細胞＝５〜10:1になるよう混合し、
遠心分離（1,200rpm5分）した後、上清を捨て、沈澱し
た細胞群をよくほぐした後、撹拌しながら、37℃で、ポ
リエチレングライコール1,000（PEG−1,000）2g,MEM2ml
およびジメチルスルホキシド0.7mlの混液0.2〜1ml/10³
抗体産生細胞を加え、１〜２分間毎にMEM1〜2mlを数回
加えた後、MEMを加えて全量が50mlになるようにする。
遠心分離（900rpm5分）後、上清を捨て、ゆるやかに細
胞をほぐした後、正常培地（RPMI−1640,FCS10％）100m
lを加え、メスピペットによる吸込み、吹出しでゆるや
かに細胞を懸濁する。

この懸濁液を24穴培養用プレートに1ml/穴ずつ分注し、
５％CO₂インキュベーター中、37℃で24時間培養する。
培養プレートに1ml/穴のHAT培地〔正常培地にヒポキサ
ンチン（10^-4M），チミジン（1.5×10^-5M）およびアミ
ノプリテン（４×10^-7M）を加えた培地〕を加え、さら
に24時間培養する。以後２日間、24時間毎に、培養上清
1mlを捨て、新たに同量のHAT培地を加え、CO₂インキュ
ベーター中、37℃で10〜14日間培養する。

コロニー状に生育してきた融合細胞の認められる穴につ
いて、上清1mlを捨て、HT培地（HAT培地からアミノプリ
テンを除いた培地）を同量加え、以後２日間24時間毎に
HT培地への変換を行う。

HT培地で３〜４日間培養後、培養上清の一部をとり上記
の酵素免疫測定法により、ヒト胃癌に対する抗体価を測
定する。このとき、同様の方法で、ヒト正常細胞，組織
あるいはその膜成分などとの反応性も測定し、ヒト胃癌
細胞，組織あるいはその膜成分に特異的に反応するもの
を選択する。ヒト胃癌細胞，組織あるいはその膜成分に
強く反応し、ヒト正常細胞，組織あるいはその膜成分な
どに反応しない穴について、限界希釈法によりクローニ
ングを２回繰り返し、安定してヒト胃癌細胞，組織ある
いはその膜成分に強い抗体価の認められたものを抗ヒト
胃癌単クローン性抗体産生ハイブリドーマ株として選択
する。

（４）単クローン性抗体の調製 プリスタン処理〔2,6,10,14−テトラメチルペンタデカ
ン（Pristane）0.5mlを腹腔内投与し、２週間飼育す
る〕した８〜10週令のC57BL/6雌マウスに、（３）で得
られた抗ヒト胃癌単クローン性抗体産生ハイブリドーマ
細胞２〜４×10⁶細胞／匹を腹腔内注射する。10〜21日
でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスから腹水
を採取し、遠心分離（3,000rpm,5分）して固形分を除去
後、50％硫酸アンモニウムにて塩析し、0.04Mリン酸緩
衝液（pH8.0、0.03M NaClを含む）で透析後、DE52（Wha
tman社製）のカラムに通塔し、IgG画分を集め、精製単
クローン性抗体とする。

抗体のイソタイプの決定は、オクタロニィ（Ouchterlon
y）法（二重免疫拡散法）（免疫学実験入門、生物化学
実験法15、学会出版センター刊,P.74,1981年）によって
行う。

蛋白量の定量は、フォーリン法および280nmでの吸光度
〔1.4（OD₂₈₀）≒イムノグロブリン1mg/ml〕より算出す
る。

得られた単クローン性抗体の特異性の決定は複数の検体
から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは腫瘍
組織あるいはその膜成分との反応性、各種ヒト正常ある
いは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株もしくは
それらの膜成分との反応性、従来から知られている願胎
児性抗原（例えばCEA）との反応性，正常，患者ヒト血
清との反応性などを、酵素免疫測定法，螢光抗体法，免
疫組織学的判定法（PAP法）などにより行い、いずれの
測定法においてもヒト胃願以外とは、なるべく反応しな
いものを選択する。

（５）血清診断法 血清診断は次の通り行う。

96穴EIA用プレートに、第一抗体10〜100μg/mlを50〜20
0μg/穴ずつ分注し、４℃で１〜２晩あるいは、室温で
２〜４時間放置する。PBSで洗浄後、BSA−PBS200μl/穴
を加え、さらに４℃で１晩あるいは室温で２時間放置す
る。このプレートをPBSでよく洗浄後、各穴に血清検体
を１〜100倍希釈で、50〜100μｌを加える。４℃で１晩
あるいは室温で２時間放置後、PBSでよく洗浄する。次
に、ビオチン化した第二抗体あるいは、ペルオキシダー
ゼ標識した第二抗体（10〜100μg/μｌ）を50〜100μl/
穴加え、さらに４℃で１晩あるいは室温で２〜４時間放
置する。第二抗体として、ビオチン化抗体を使用した場
合には、プレートをPBSでよく洗浄後、アビジン−ペル
オキシダーゼまたはアビジン−ビオチン−ペルオキシダ
ーゼ（10μg/ml）を50〜100μl/穴加え、室温で30分間
放置後PBSでよく洗浄する。次に基質液として、ABTS基
質液を50〜100μl/穴加え、室温で10〜30分間放置し、
５％SDS溶液50〜100μl/穴を加え反応を停止させる。各
穴のOD₄₁₅値を測定し、その発色度より、血清検体注の
抗原量を算出する。このようにして得られた健常人血清
中の抗原量と各種癌患者血清中の抗原量を比較すること
により、正常値を決定し、その正常値を超えるものを陽
性とした。

（６）抗原解析 前述の酵素免疫抗体法、免疫組織化学的染色法あるいは
血清診断法の実施に際して、抗原（胃癌膜成分、胃癌培
養細胞株、胃癌組織）をノイラミニダーゼ（neuraminid
ase），プロテアーゼ（protease）などの酵素や過ヨウ
素酸などの試薬で前処理した後、単クローン性抗体と反
応させ、それらの処理をしていない元の抗原と単クロー
ン性抗体の反応性との差より、抗原の化学的性状（単ク
ローン性抗体の認識する抗原部位の化学的性状）を明ら
かにした。すなわち、ノイラミニダーゼ処理により抗原
性が消失すれば、シアル酸が、プロテアーゼ処理により
消失すれば蛋白質が、また過ヨウ素酸処理により消失す
れば糖鎖が、抗原決定基に関与していると推定される。

以下本発明の実施例を示す。

実施例1. （１）抗体産生細胞の調製 ヒト正常胃膜成分（100μｇ蛋白質／匹）を、生後24時
間以内の新生仔C57BL/6マウス（静岡実験動物製）に静
脈内投与した。８週間経過後のマウスにヒト胃癌膜断片
100μｇ（蛋白質換算）／匹を水酸化アルミニウムゲル2
mg/匹，百日咳菌死菌ワクチン１×10¹⁹/匹とともに腹腔
内投与した。以後１〜２週おおきに、同一抗原100μｇ
（蛋白質換算）／匹で３〜５回免疫した。これら免疫処
理したマウスのうち、その抗血清が、ヒト胃癌細胞また
は組織あるいはそれらの膜断片と強く反応したマウスを
免疫マウスとして、そのマウスより、脾細胞を調製し
て、細胞融合に供した。

（２）マウス骨髄腫細胞の調製 ８−アザグアニン耐性マウス骨髄腫細胞株P3−U1を正常
培地で培養し、細胞融合時に２×10⁷以上の細胞を得、
細胞融合に親株として供した。

（３）ハイブリドーマの作製 （１）と（２）で得られた脾細胞と骨髄腫細胞とを5:1
の割合で用い、前述した方式で融合させ、HAT培地で37
℃、14日間CO₂5％下で培養して、融合細胞を選択し、HT
培地に変えてさらに培養し、抗ヒト胃癌に対する抗体価
の測定をして、活性な穴を選び、さらに正常培地に変
え、２回クローニングを繰り返して、種々の測定法によ
り、ヒト正常細胞や組織あるいは他の癌に全く反応せ
ず、ヒト胃癌に反応する単クローン性抗体を産生するハ
イブリドーマ株AMC−462を選択した。

（４）単クローン性抗体の精製 プリスタン処理した８週令C57BL/6雌マウスに（３）で
得られたハイブリドーマ株AMC−462を４×10⁶細胞／匹
腹腔内注射した。10〜21日後に、ハイブリドーマは腹水
癌化する。腹水のたまったマウスから、腹水を採取（５
〜10ml/匹）し、遠心分離（3,000rpm,5分）して固形分
を除去した。40％硫酸アンモニウムにて塩析し、0.04M
リン酸緩衝液（pH8.0、0.03M NaClを含む）で透析後、D
E52（Whatman社製）（ベットボリューム50ml）のカラム
に流速20〜30ml/hrで通塔しIgG₁画分を集め、精製単ク
ローン性抗体とする。

（５）AMC−462の特異性 このようにして得られた抗ヒト胃癌反応性単クローン性
抗体AMC−462の反応特異性を第１表に示した。

測定は、酵素結合免疫分析（ELISA）により以下のとお
り行った。

組織（膜成分）を標的とする場合： 酵素免疫分析用96穴プレート（Linbro社製）に0.1mg/ml
の組織（膜成分）液を50μl/穴入れ、37℃で２時間また
は４℃で１晩放置して組織（膜成分）を固定した。PBS
で洗浄後、10％牛胎児血清含有PBSを100μl/穴分注し、
固定組織（膜成分）の活性残基を保護した。

PBSで洗浄後、第１抗体（AMC−462）50μl/穴を入れ、3
7℃で１〜２時間または４℃で１晩放置して標的と抗体
を反応させた。

0.05％Tween−20（和光純薬工業社製）含有PBSで５回洗
浄して未反応の抗体を除去した。第２抗体としてパーオ
キシダーゼ結合ウサギ抗マウス免疫グロブリン（Miles
−Yeda社:200倍希釈）50μl/穴を入れ、37℃で１時間反
応させた。0.05％Tween−20含有PBSで５回洗浄後、レジ
ン水で３回洗浄した。

ABTS50μl/穴を加えて反応を開始し、５％ラウリル硫酸
ナトリウム水溶液50μl/穴を加えて反応を停止させた。

培養株細胞を標的とする場合： 細胞を培養用96穴プレート（Linbro社製）で培養し、コ
ンフルエントになった時点で上記の組織（膜成分）の場
合と同様に反応させた。ただし第１抗体、第２抗体とも
反応条件は室温で30分間とし、発色後に反応液を分析用
96穴プレート移すことにより反応を停止させた。

抗原CEAの場合は組織（膜成分）に替えてCEAを用いる以
外は組織の場合と同様に行った。

いずれの場合も、490nmを対照波長として415nmの吸光度
を測定した。

第１表に示すごとく、AMC−462は、胃癌のみならず、膵
癌や大腸癌などの消化器癌に広い反応性を有している。
しかし、CEAと反応しないことから、抗−CEA抗体とは異
なることがわかる。これらの結果より、AMC−462を用い
る免疫組織化学染色により、消化器癌の病理診断が可能
であった。

実施例2. 96穴EIA用プレート〔フロー・ラボラトリーズ（Flow La
boratories）社製〕に、AMC−462（10μg/ml）を50μl/
穴加え、４℃で１晩放置後、PBSで洗浄し、１％BSA−PB
S200μl/穴加え１晩放置し、PBSでよく洗浄したプレー
トに、健常人血清（85検体）および胃癌患者血清（86検
体）、膵癌患者血清（22検体）、肝癌患者血清（15検
体）、結腸癌患者血清（16検体）、直腸癌患者血清（12
検体）、胆嚢癌患者血清（20検体）、乳癌患者血清（３
検体）、胃腸良性疾患患者血清（21検体）、膵良性患者
血清（38検体）、胆嚢良性疾患患者血清（11検体）、肝
硬変患者血清（３検体）を５倍希釈して50μl/穴加え、
４℃で１晩放置後、PBSでよく洗浄した。次に、第二抗
体として、ビオチン化抗胃癌モノクローナル抗体AMC−4
62（10μg/ml）を100μｌ％／穴加え、４℃で１晩放置
し、PBSでよく洗浄した後、アビジン−ビオチン−ペル
オキシダーゼ〔ベクトール（VECTOR）社製〕（10μg/m
l）100μl/穴加え、室温で１時間放置した後、PBSで洗
浄した。次にABTS基質液を100μl/穴加え、室温で30分
間反応させ、５％SDS溶液100μl/穴を加え反応を停止し
た。各穴の発色を吸光光度計（OD₄₁₅）で測定した。そ
の結果、第１図に示した様に、健常人血清では、カット
オフ値（健常人の平均値＋7SD）をこえる陽性例は85例
中１例もなかった（０％）が、胃癌患者血清では、86例
中16例（18.6％）、膵癌では22例中18例（81.8％）、肝
癌では15例中５例（33.3％）、結腸癌では16例中１例
（6.7％）、直腸癌では、12例中０例（０％）、胆嚢癌
でハ20例中８例（40％）、乳癌では３例中１例（33.3
％）で陽性となった。一方良性疾患では、胃腸良性疾患
で21例中０例（０％）、膵良性疾患38例中１例（2.6
％）、胆嚢良性疾患11例中０例（０％）、肝硬変３例中
０例（０％）と陽性率は、極めて低かった。

以上の結果より、AMC−462を用いる本血清診断系は、消
化器癌の、特に膵癌の血清診断に極めて有用であること
がわかる。

実施例３ 実施例２で使用した膵癌患者血清と同じ検体を用いて、
既知の膵癌マーカーであるCA19−９（NS19−９の抗原）
値およびDuPan−２（DuPan−２の抗原）値を測定した。
第２図および第３図に、同一血清検体中のCA19−９量お
よびDuPan−２で測定される抗原量と、本願発明の単ク
ローン性抗体AMC−462を用いて測定される抗原量の比較
を示した。

第２図より明らかなように、本願発明のAMC−462を用い
る血清診断系で測定される膵癌患者血清中の癌抗原量
は、CA19−９の場合とかなり高い相関性を有している。
しかし、CA19−９陰性例でもAMC−462診断系で陽性とな
る場合が５％あった。

第３図より、本発明で検出される癌抗原は、DuPan−２
とは、余り相関せず、陽性率からみても、膵癌の血清診
断法として、DuPan−２よりも、優れたものであると言
える。

実施例４ 実施例１および実施例３に示した結果より、AMC−462を
用いる血清診断素で検出される抗原が、消化器癌、特に
膵癌マーカーとして既知のCEAやDuPan−２と異なるもの
であることは明らかとなったが、CA19−９との異同をさ
らに詳しく検討するために、サンドウィッチELISA系で
の阻害試験を実施した。

即ち、96穴EIA用プレートに、10μg/mlのAMC−462ま
た、NS19−９（第１抗体）を吸着させ、１％BSA−PBSで
ブロッキングしたプレートに、CA19−９およびAMC−462
の認識する抗原の両方を含む膵癌患者血清を50μｌ加
え、よく洗浄後、0.1〜50μg/mlのNS19−９あるいは、A
MC−462単クローン性抗体（阻害抗体）を加え、よく洗
浄した。さらに10μg/mlのビオチン化したNS19−９ある
いはビオチン化したAMC−462単クローン性抗体（第２抗
体）を加え、よく洗浄後、アビジン−ビオチン−ペルオ
キシダーゼ試薬を加え、再びよく洗浄後、ABTS基質を加
え、酵素反応を行わした後、SDS溶液で反応を停止さ
せ、OD₄₁₅を測定した。その結果を第４図に示した。

第４図中Ａ〜Ｆは下記組合せを示す。

Ａ）第１抗体:AMC−462（10μg/ml） 第２抗体：ビオチン化AMC/462（0.1〜50μg/ml） 阻害抗体：なし Ｂ）第１抗体:AMC−462（10μg/ml） 第２抗体：ビオチン化AMC−462（10μg/ml） 阻害抗体:AMC−462（0.1〜50μg/ml） Ｃ）第１抗体:AMC−462（10μg/ml） 第２抗体：ビオチン化AMC−462（10μg/ml） 阻害抗体:NS19−９（0.1〜50μg/ml） Ｄ）第１抗体:NS19−９（10μg/ml） 第２抗体：ビオチン化NS19−９（0.1〜50μg/ml） 阻害抗体：なし Ｅ）第１抗体:NS19−９（10μg/ml） 第２抗体：ビオチン化NS19−９（10μg/ml） 阻害抗体:NS19−９（0.1〜50μg/ml） Ｆ）第１抗体:NS19−９（10μg/ml） 第２抗体：ビオチン化NS19−９（10μg/ml） 阻害抗体:AMC−462（0.1〜50μg/ml） 第４図より、明らかなように、NS19−９およびAMC−462
の反応性はNS19−９およびAMC−462自体によっては、そ
れぞれ完全に阻害されるが、お互いには全く阻害しない
ことからAMC−462によって認識される抗原は、NS19−９
とは異なるものであることがわかる。

発明の効果 本発明によれば消化器癌の診断、とくに膵癌の診断に有
用な単クローン性抗体が供給される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、AMC−462による各種疾患患者の血清診断の結
果を示す。 第２図は、膵癌患者血清中のCA19−９量とAMC−462で検
出される抗原量の比較を示す。 第３図は、膵癌患者血清中のDuPan−２量とAMC−462で
検出される抗原量の比較を示す。 第４図は、NS19−９に対するAMC−462の阻害試験結果を
示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (56)参考文献 特開 昭59−128397（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−176298（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−205327（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−243026（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−250000（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−36398（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−111697（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−123200（ＪＰ，Ａ)

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ヒト胃癌組織膜成分で免疫したマウスの脾
   細胞とマウス骨髄腫細胞とを融合させて得られたハイブ
   リドーマ細胞株AMC−462（ECACC受託番号86050801）が
   生産する下記性質を有する抗ヒト単クローン性抗体AMC
   −462。 免疫グロブリンクラス:IgG1 胃癌、膵癌、大腸癌と反応する。 正常胃、胎児皮膚と反応しない。 CEA、CA19−９、DuPan−２と反応しない。
2. 【請求項２】ハイブリドーマ細胞株AMC−462（ECACC受
   託番号86050801）を培地に培養するかマウスに投与して
   腹水化し、培養物または腹水中に下記性質を有する抗ヒ
   ト胃癌単クローン性抗体AMC−462を蓄積させ、該培養物
   または腹水からこれを採取することによる抗ヒト胃癌単
   クローン性抗体AMC−462の製造法。 免疫グロブリンクラス:IgG1 胃癌、膵癌、大腸癌と反応する。 正常胃、胎児皮膚と反応しない。 CEA、CA19−９、DuPan−２と反応しない。