JPH0672153B2 - ペプチド - Google Patents
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- JPH0672153B2 JPH0672153B2 JP59104834A JP10483484A JPH0672153B2 JP H0672153 B2 JPH0672153 B2 JP H0672153B2 JP 59104834 A JP59104834 A JP 59104834A JP 10483484 A JP10483484 A JP 10483484A JP H0672153 B2 JPH0672153 B2 JP H0672153B2
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- phe
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0212—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -N-C-N-C(=0)-, e.g. retro-inverso peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/86—Renin inhibitors
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/32—Modification to prevent enzymatic degradation
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明はPhe−Val結合部で部分的にretro転化され、酵
素加水分解に対する高い抵抗性及び長いインビボ活性持
続性を有する特異的レニン阻害剤であるウマアンジオテ
ンシノーゲンの（５−14）デカペプチドの類似体に係わ
る。
素加水分解に対する高い抵抗性及び長いインビボ活性持
続性を有する特異的レニン阻害剤であるウマアンジオテ
ンシノーゲンの（５−14）デカペプチドの類似体に係わ
る。
レニンは、後述するレニン−アンジオテンシン系の酵素
成分の１つであり、その生成物は心臓血管のホメオスタ
シスの維持において重要な役割を果し、各種の高血圧状
態における動脈血圧の上昇に関与する〔S.Oparil及びE.
Haber「ニユーイングランド・ジヤーナル・オブ・メデ
イカル（NeW England J.Med.）」291,389（1974）;W.S.
Peart「ニユーイングランド・ジヤーナル・オブ・メデ
イカル」292,302（1975）;E.Haber「Chin.Sci.Mol.Me
d.」48,49s（1975）;J.O.DaVis「Clin.Sci.Mol.Med.」4
8,30（1975）〕。
成分の１つであり、その生成物は心臓血管のホメオスタ
シスの維持において重要な役割を果し、各種の高血圧状
態における動脈血圧の上昇に関与する〔S.Oparil及びE.
Haber「ニユーイングランド・ジヤーナル・オブ・メデ
イカル（NeW England J.Med.）」291,389（1974）;W.S.
Peart「ニユーイングランド・ジヤーナル・オブ・メデ
イカル」292,302（1975）;E.Haber「Chin.Sci.Mol.Me
d.」48,49s（1975）;J.O.DaVis「Clin.Sci.Mol.Med.」4
8,30（1975）〕。
レニンは腎臓近糸球体細胞により生成、放出されるが、
レニン基質（アンジオテンシノーゲン）と反応してアン
ジオテンシン（Ｉ）（不活性なデカペプチド）を生成す
る。このアンジオテンシン（Ｉ）自体は主に肺において
アンジオテンシン転化酵素（ACE）によりアンジオテン
シン（II）に転化される。
レニン基質（アンジオテンシノーゲン）と反応してアン
ジオテンシン（Ｉ）（不活性なデカペプチド）を生成す
る。このアンジオテンシン（Ｉ）自体は主に肺において
アンジオテンシン転化酵素（ACE）によりアンジオテン
シン（II）に転化される。
アンジオテンシン（II）は現在公知の昇圧作用の最も強
力な内因性基質であり、ダイレクトフイードバツクシス
テムによりレニン放出の調節に関与する。
力な内因性基質であり、ダイレクトフイードバツクシス
テムによりレニン放出の調節に関与する。
レニン−アンジオテンシン系は副腎皮質からのアルドス
テロンの分泌の調節に係わる主要なメカニズムの１つを
構成する。
テロンの分泌の調節に係わる主要なメカニズムの１つを
構成する。
レニン−アンジオテンシン系の阻害剤である化合物は、
現在、高血圧症の治療に使用されている。しかしなが
ら、これらの化合物は、補償性過レニン症（compensato
ry hyperreninemia）の如き副作用を生ずる欠点を有し
ている。
現在、高血圧症の治療に使用されている。しかしなが
ら、これらの化合物は、補償性過レニン症（compensato
ry hyperreninemia）の如き副作用を生ずる欠点を有し
ている。
さらに、最近の研究によれば、レニンは血管の平滑筋組
織に存在し、ここで合成され、血圧の維持に少なからぬ
役割を果すことが示されている。したがって、高血圧症
の治療に関して、特殊なレニン阻害剤の分野で検索を行
なうことは適切なものと考えられる。
織に存在し、ここで合成され、血圧の維持に少なからぬ
役割を果すことが示されている。したがって、高血圧症
の治療に関して、特殊なレニン阻害剤の分野で検索を行
なうことは適切なものと考えられる。
このような阻害剤は以下の３つのクラスに属する。
１）ペプスタテイン（Pepstatin）及び類似体 ２）脂質及びリン脂質 ３）レニン基質類似体 しかしながら、ペプスタテイン及び類似体は動物性高血
圧症モデルにおいてのみ血圧低下作用があり（I500.1μ
Ｍ）、正常血圧のラツトでは無効である。しかも阻害特
異性にも乏しく、レニンだけでなくペプシン、イソレニ
ン及びカテプシンＤの如き他の酸プロテアーゼにも作用
する。脂質及びリン脂質の抗高血圧症活性については、
インビトロにおいて繰返し試験が行なわれているが、レ
ニン−アンジオテンシン系の生理学的調節剤として重要
性をもつものであるため、凝問視されている〔M.J.Anto
naccio及びD.W.Cushman「Federation Proc.」40,2275
（1981）〕。
圧症モデルにおいてのみ血圧低下作用があり（I500.1μ
Ｍ）、正常血圧のラツトでは無効である。しかも阻害特
異性にも乏しく、レニンだけでなくペプシン、イソレニ
ン及びカテプシンＤの如き他の酸プロテアーゼにも作用
する。脂質及びリン脂質の抗高血圧症活性については、
インビトロにおいて繰返し試験が行なわれているが、レ
ニン−アンジオテンシン系の生理学的調節剤として重要
性をもつものであるため、凝問視されている〔M.J.Anto
naccio及びD.W.Cushman「Federation Proc.」40,2275
（1981）〕。
多くの興味は、レニンにより加水分解されるLen10−Len
11及びLeu10−Val11結合を含むレニン基質フラグメント
の構造類似体形の第３クラスの化合物（合成ペプチド阻
害剤）に集中している。
11及びLeu10−Val11結合を含むレニン基質フラグメント
の構造類似体形の第３クラスの化合物（合成ペプチド阻
害剤）に集中している。
かかる化合物は非常に強力な阻害剤であり（I505.9μＭ
ないし10μＭ）、高度の特異性をもつ〔J.Burtonら「Pr
oc.Acad.Sci.U.S.A」77,5476（1980）;M.Szelkeらヨー
ロツパ特許願０−045−665（1982）;M.Szelkeら「ネー
チヤー（Nature）」299,555（1982）〕。
ないし10μＭ）、高度の特異性をもつ〔J.Burtonら「Pr
oc.Acad.Sci.U.S.A」77,5476（1980）;M.Szelkeらヨー
ロツパ特許願０−045−665（1982）;M.Szelkeら「ネー
チヤー（Nature）」299,555（1982）〕。
これらの化合物の中でも、ヒトアンジオテンシノーゲン
Ｎ−末端セクエンスのオクタペプチドHis−Pro−Phe−H
is−Leu−Val−Ile−His及びデカペプチドPro−His−Pr
o−Phe−His−Len−Val−Ile−His−Lys（加水分解可能
なLeu−Val結合を、レニンによる加水分解を阻止するた
めに、 −CH2−NH−に還元している）、及びウマアンジオテン
シノーゲンのＮ−末端セクエンスのデカペプチドPro−H
is−Pro−Phe−His−Phe−Phe−Val−Tyr−Lysが合成さ
れている。
Ｎ−末端セクエンスのオクタペプチドHis−Pro−Phe−H
is−Leu−Val−Ile−His及びデカペプチドPro−His−Pr
o−Phe−His−Len−Val−Ile−His−Lys（加水分解可能
なLeu−Val結合を、レニンによる加水分解を阻止するた
めに、 −CH2−NH−に還元している）、及びウマアンジオテン
シノーゲンのＮ−末端セクエンスのデカペプチドPro−H
is−Pro−Phe−His−Phe−Phe−Val−Tyr−Lysが合成さ
れている。
しかしながら、後者のデカペプチド（インビトロにおい
てヒトレニンの特異的阻害剤であり、インビボでの抗高
血圧症剤として有効である）は作用期間が極めて短かく
（約４分）、それ故、臨床上の適用が制限されている
（米国特許第4,269,827号）。
てヒトレニンの特異的阻害剤であり、インビボでの抗高
血圧症剤として有効である）は作用期間が極めて短かく
（約４分）、それ故、臨床上の適用が制限されている
（米国特許第4,269,827号）。
発明者らは、レニンに対して特異性を有し、しかも酵素
加水分解に対する高度の抵抗性及び長い活性持続性を有
するペプチド阻害剤を見出し、本発明に至つた。
加水分解に対する高度の抵抗性及び長い活性持続性を有
するペプチド阻害剤を見出し、本発明に至つた。
持続形の作用をもつレニン阻害剤を使用する場合には、
以下の効果が得られる。
以下の効果が得られる。
（１） 現在のレニン−アンジオテンシン系の阻害剤を
使用する間に一般的に生ずる補償性過レニン症の発生を
防止できる。
使用する間に一般的に生ずる補償性過レニン症の発生を
防止できる。
（２） 慢性のレニン依存性高血圧症についての研究に
おいて長期間のインビボ実験が可能となる。
おいて長期間のインビボ実験が可能となる。
該デカペプチドが限られたインビポ安定性しか待ち得な
いこと及び抗高血圧作用の持続性が極めて短時間である
ことの主原因の１つは、レニン自体及び血漿の他のペプ
チダーゼの作用により容易に加水分解されることにある
と思われる。
いこと及び抗高血圧作用の持続性が極めて短時間である
ことの主原因の１つは、レニン自体及び血漿の他のペプ
チダーゼの作用により容易に加水分解されることにある
と思われる。
そのため、プロテアーゼのタンパク質分解作用からペプ
チド物質を適切に保護するために、酵素加水分解に対し
て最も鋭敏なペプチド結合をretro転化する方法を利用
することが非常に有利であることを見出した。
チド物質を適切に保護するために、酵素加水分解に対し
て最も鋭敏なペプチド結合をretro転化する方法を利用
することが非常に有利であることを見出した。
特開昭58−146538号、特開昭58−116443号、ヨーロツパ
特許公告第97994号、イタリー国特許願第20926A/82、同
第23417A/82に記載されている如く、ペプチド結合の方
向を逆にすること から へ）により、元のペプチドの構造異性でありかつ生理活
性をそのまま保持するが、一般に酵素加水分解に対して
より強い抵抗性を示す類似体（一般に「retro−inverso
ペプチド」として知られている）が生成される。
特許公告第97994号、イタリー国特許願第20926A/82、同
第23417A/82に記載されている如く、ペプチド結合の方
向を逆にすること から へ）により、元のペプチドの構造異性でありかつ生理活
性をそのまま保持するが、一般に酵素加水分解に対して
より強い抵抗性を示す類似体（一般に「retro−inverso
ペプチド」として知られている）が生成される。
本発明では、デカペプチドPro−His−Pro−Phe−His−P
he−Phe−Val−Tyr−Lysのレニン加水分解作用部位に近
接するPhe−Val結合を逆転し、酵素阻害作用を保持する
と共に、正常なペプチド結合をもつ阻害剤よりも持続性
の長いインビボ活性をもつ類似体を得ている。
he−Phe−Val−Tyr−Lysのレニン加水分解作用部位に近
接するPhe−Val結合を逆転し、酵素阻害作用を保持する
と共に、正常なペプチド結合をもつ阻害剤よりも持続性
の長いインビボ活性をもつ類似体を得ている。
セクエンス中の唯一つのペプチド結合のみを転化（逆
転）させる方法は、逆転した結合を形成するように２つ
の結合するアミノ酸残基を変換する工程、特に、元のペ
プチドのアミノ末端に最も近いアミノ酸残基をジエム−
ジアミノ残基に変換する工程及びカルボニル末端に最も
近いアミノ酸残基をマロニル又は２−置換マロニル残基
に変換する工程を包含する〔Goodman M.ら「Acc.Chem.R
es.」12（1979）〕。
転）させる方法は、逆転した結合を形成するように２つ
の結合するアミノ酸残基を変換する工程、特に、元のペ
プチドのアミノ末端に最も近いアミノ酸残基をジエム−
ジアミノ残基に変換する工程及びカルボニル末端に最も
近いアミノ酸残基をマロニル又は２−置換マロニル残基
に変換する工程を包含する〔Goodman M.ら「Acc.Chem.R
es.」12（1979）〕。
マロニル又は２−置換マロニル残基をペプチド骨格に組
入れることは、格別の問題点を生じない。これに対し
て、ジエム−ジアミノ残基を組入れる際には、一般にデ
リケートな合成手法が要求され、前記特許願に開示され
ている如く、1,1−ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨ
ードベンゼン（TIB）の使用により達成される。この試
薬は、以前は、中間体のイソシアネートを単離又は分離
する必要なく第１級の簡単な構造をもつアミドをアミン
に直換変化するために使用されていた〔Radhakrishna
A.S.ら「ジヤーナル・オブ・オルガニツク・ケミストリ
ー（J.Org.Chem.）」44,1746（1979）〕。
入れることは、格別の問題点を生じない。これに対し
て、ジエム−ジアミノ残基を組入れる際には、一般にデ
リケートな合成手法が要求され、前記特許願に開示され
ている如く、1,1−ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨ
ードベンゼン（TIB）の使用により達成される。この試
薬は、以前は、中間体のイソシアネートを単離又は分離
する必要なく第１級の簡単な構造をもつアミドをアミン
に直換変化するために使用されていた〔Radhakrishna
A.S.ら「ジヤーナル・オブ・オルガニツク・ケミストリ
ー（J.Org.Chem.）」44,1746（1979）〕。
本発明によるretro−inversoペプチドは、下記構造式
（Ｉ）で表される。
（Ｉ）で表される。
式中、アミノ酸はいずれもＬ配置であり、ジエム−ジア
ミノ残基の不斉炭素はＬ−フエニルアラニンと同じ配置
をもち、マロニル残基の不斉炭素はＲ又はＳ配置又はこ
れら２つの配置の混合であつてもよい。
ミノ残基の不斉炭素はＬ−フエニルアラニンと同じ配置
をもち、マロニル残基の不斉炭素はＲ又はＳ配置又はこ
れら２つの配置の混合であつてもよい。
本発明によるペプチドは、固相における合成により簡単
に生成される。まず、残基７及び８を２−イソプロピル
−マロニル−Ｄ−フエニルアラニンアミドの中に挿入
し、ついで第１アミンを1,1−ビス（トリフルオロアセ
トキシ）ヨードベンゼンの作用によりアミドに変化され
る。
に生成される。まず、残基７及び８を２−イソプロピル
−マロニル−Ｄ−フエニルアラニンアミドの中に挿入
し、ついで第１アミンを1,1−ビス（トリフルオロアセ
トキシ）ヨードベンゼンの作用によりアミドに変化され
る。
この合成は、通常行なわれる固相でのペプチド合成の手
法に従つて実施される。当分野で公知の如く、この方法
は、反応媒体には不要であるが、膨潤性の重合体マトリ
ツクス上で個々のアミノ酸を連続して付加することによ
りセクエンスを形成すると共に、合成の終了時までペプ
チドを結合した状態に維持し、最後に適当な試薬による
処理を介してペプチドを離脱するものである。
法に従つて実施される。当分野で公知の如く、この方法
は、反応媒体には不要であるが、膨潤性の重合体マトリ
ツクス上で個々のアミノ酸を連続して付加することによ
りセクエンスを形成すると共に、合成の終了時までペプ
チドを結合した状態に維持し、最後に適当な試薬による
処理を介してペプチドを離脱するものである。
本発明による合成で使用される重合体は、置換ベンジル
アルコール残基により適当に官能化されたポリアミド樹
脂ビーズでなる〔R.Arshadyら「ジヤーナル・オブ・ザ
・ケミカル・ソサエテイー（J.Chem.Soc.）」Perkin I
529（1981）〕。
アルコール残基により適当に官能化されたポリアミド樹
脂ビーズでなる〔R.Arshadyら「ジヤーナル・オブ・ザ
・ケミカル・ソサエテイー（J.Chem.Soc.）」Perkin I
529（1981）〕。
適当な条件下で別に活性化された第１のリシンアミノ酸
残基は対称無水物としてエステル結合によつてこれら残
基に結合される。合成の間不溶性樹脂にペプチドを結合
しておく置換ベンジルアルコール残基は、合成終了時、
トリフルオロ酢酸による処理を介してペプチドが樹脂か
ら離脱されうるように選ばれる。
残基は対称無水物としてエステル結合によつてこれら残
基に結合される。合成の間不溶性樹脂にペプチドを結合
しておく置換ベンジルアルコール残基は、合成終了時、
トリフルオロ酢酸による処理を介してペプチドが樹脂か
ら離脱されうるように選ばれる。
本発明によるペプチド類似体のレニン阻害作用の測定試
験については、Millar及び共同研究者らの方法を利用す
る〔J.A.Millarら「クリニカキミカ・アクタ（Chinica
Chim.Acta）」101,5（1980）〕。この試験では、ヒト血
漿レニンによりpH7.0においてヒトアンジオテンシノー
ゲンから生成されるアンジオテンシン（Ｉ）の生成率
を、抗体結合体の放射線免疫検定法により測定する。阻
害剤の存在下におけるアンジオテンシン（Ｉ）の生成率
を、一般に、阻害剤不存在下で測定したもののパーセン
ト割合として表示する。
験については、Millar及び共同研究者らの方法を利用す
る〔J.A.Millarら「クリニカキミカ・アクタ（Chinica
Chim.Acta）」101,5（1980）〕。この試験では、ヒト血
漿レニンによりpH7.0においてヒトアンジオテンシノー
ゲンから生成されるアンジオテンシン（Ｉ）の生成率
を、抗体結合体の放射線免疫検定法により測定する。阻
害剤の存在下におけるアンジオテンシン（Ｉ）の生成率
を、一般に、阻害剤不存在下で測定したもののパーセン
ト割合として表示する。
阻害試験条件下において、逆転した結合をもたないペプ
チドに比べて、ペプチダーゼに対するrerro−inversoペ
プチドの安定性が増加していることは、EDTA、ｏ−フエ
ナントロリン、ベンズアミジン塩酸塩及びTrasylol（登
録商標）の如きペプチダーゼ阻害剤の不存在下又は存在
下においても、またヒト血漿中での予培養を行なつた場
合又は行なわない場合でも認められる。
チドに比べて、ペプチダーゼに対するrerro−inversoペ
プチドの安定性が増加していることは、EDTA、ｏ−フエ
ナントロリン、ベンズアミジン塩酸塩及びTrasylol（登
録商標）の如きペプチダーゼ阻害剤の不存在下又は存在
下においても、またヒト血漿中での予培養を行なつた場
合又は行なわない場合でも認められる。
本発明のretro−inversoペプチドは、すべてのペプチド
結合が正常であるペプチドのものよりも長い活性持続性
をもつ強力な特異的レニン阻害剤である。
結合が正常であるペプチドのものよりも長い活性持続性
をもつ強力な特異的レニン阻害剤である。
実施例 ペプチドの合成 Sheppardらの方法〔E.Athertonら「ジヤーナル・オブ・
ザ・ケミカル・ソサエテイー」Perkin I,538（1981）〕
により若干の変更を加えて、固相において合成を行なつ
た。
ザ・ケミカル・ソサエテイー」Perkin I,538（1981）〕
により若干の変更を加えて、固相において合成を行なつ
た。
N,N′−エチレン−ビス−アクリルアミドで架橋したポ
リジメチルアミド−コ−アクリロイルサルコシンメチル
エステルのビーズである重合体支持体1gを1,2−ジアミ
ノエタンによる処理を介して活性化した。この活性化し
た樹脂を（Fmoc Nle）2O 1.8ミリモルと反応させ、つい
で20％ピペリジンのジメチルホルムアミド（DMF）溶液
による処理を介してFmocを除去したのち、2,4,5−トリ
クロロフエノール−ｐ−ヒドロキシメチル安息香酸1.8
ミリモルでアシル化した。このように変性した樹脂はノ
ルロイシン0.525ミリモル/gを含有する。
リジメチルアミド−コ−アクリロイルサルコシンメチル
エステルのビーズである重合体支持体1gを1,2−ジアミ
ノエタンによる処理を介して活性化した。この活性化し
た樹脂を（Fmoc Nle）2O 1.8ミリモルと反応させ、つい
で20％ピペリジンのジメチルホルムアミド（DMF）溶液
による処理を介してFmocを除去したのち、2,4,5−トリ
クロロフエノール−ｐ−ヒドロキシメチル安息香酸1.8
ミリモルでアシル化した。このように変性した樹脂はノ
ルロイシン0.525ミリモル/gを含有する。
Ｎ−メチルモルホリン1.8ミリモル及び４−ジメチルア
ミノピリジン0.18ミリモルの存在下、DMF16ml中に溶解
した（Fmoc Lys）2O 1.8ミリモルで前記の変性樹脂を30
分間処理することにより第１のアミノ酸によりエステル
結合を形成した。
ミノピリジン0.18ミリモルの存在下、DMF16ml中に溶解
した（Fmoc Lys）2O 1.8ミリモルで前記の変性樹脂を30
分間処理することにより第１のアミノ酸によりエステル
結合を形成した。
なお、自動「Beckman」合成機モデル990Bの反応器にお
いて、この反応及びヘキサペプチドが合成されるまでの
一連の反応を行なつた。
いて、この反応及びヘキサペプチドが合成されるまでの
一連の反応を行なつた。
引き続いて、第１表に記載する順序でかつ第２表の示す
方法のいずれかに従つて連続してアミノ酸を重合体に導
入した。
方法のいずれかに従つて連続してアミノ酸を重合体に導
入した。
保護されたアミノ酸の対称無水物をアシル化の際に予じ
め調製した。すなわち、保護されたアミノ酸3.6ミリモ
ルを、CH2Cl2中、室温で、10分間、N,N′−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド1.8ミリモルと反応させ、生成し
たジシクロヘキシル尿素を去し、CH2Cl2を減圧下蒸発
させ、対称無水物をDMF16mlに再び溶解させた。
め調製した。すなわち、保護されたアミノ酸3.6ミリモ
ルを、CH2Cl2中、室温で、10分間、N,N′−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド1.8ミリモルと反応させ、生成し
たジシクロヘキシル尿素を去し、CH2Cl2を減圧下蒸発
させ、対称無水物をDMF16mlに再び溶解させた。
各アシル化に関して、アミド結合の形成の終了を、Kais
er法〔E.Kaiser「Anal.Biochem.」34,595（1970）〕に
従って、樹脂サンプルをニンンヒドリンと反応させるこ
とにより確認した。
er法〔E.Kaiser「Anal.Biochem.」34,595（1970）〕に
従って、樹脂サンプルをニンンヒドリンと反応させるこ
とにより確認した。
アミノ酸の分析については、閉止した試験管内におい
て、真空中、フエノールの存在下、沸点に維持して、HC
lにより110℃で18時間加水分解したサンプルについて実
施した。
て、真空中、フエノールの存在下、沸点に維持して、HC
lにより110℃で18時間加水分解したサンプルについて実
施した。
Ｄ−フエニルアラニンアミドが完全に相当するジエム−
ジアミノ残基に変化したことを、TIBによる処理後取出
した樹脂サンプルについて行なつたアミノ酸分析におけ
るフエニルアラニンの消失によつて確認した。最終アミ
ノ酸の付加後、樹脂をエチルエーテルで洗浄し、乾燥
し、ついで95％トリフルオロ酢酸中に３時間懸濁した。
樹脂を取し、2N酢酸で洗浄し、ペプチド含有溶液を凍
結乾燥した。得られたペプチドをAcOH（80％）25ml中に
溶解し、活性炭上に担持した10％金属パラジウム500mg
及びギ酸アンモニウム500mgをこの溶液に添加した〔M.
K.Anwer及びA.F.Spatola「合成（Synthesis）929（198
0）〕。２時間後、Pauly反応により確認した如く、ヒス
タジン保護基は完全に除去されていた。ついで混合物を
遠心分離し、溶液を水で希釈したのち数回凍結乾燥し
た。粗製ペプチドを、カルボキシメチルセルロース（CM
−52）カラム上、濃度範囲0.05Nないし0.5Nの直線勾配
をもつ酢酸アンモニウムにより溶離して、pH7.0におい
てクロマトグラフイー処理した。ペプチドを含有するフ
ラクシヨンを凍結乾燥し、再び、Sephadex SPC25カラム
上で、濃度範囲0.25Nないし1Nの直線勾配をもつ酢酸ア
ンモニウムにより溶離して、pH4.5でクロマトグラフイ
ー処理した。ペプチドを含有するフラクシヨンを集め、
凍結乾燥した。
ジアミノ残基に変化したことを、TIBによる処理後取出
した樹脂サンプルについて行なつたアミノ酸分析におけ
るフエニルアラニンの消失によつて確認した。最終アミ
ノ酸の付加後、樹脂をエチルエーテルで洗浄し、乾燥
し、ついで95％トリフルオロ酢酸中に３時間懸濁した。
樹脂を取し、2N酢酸で洗浄し、ペプチド含有溶液を凍
結乾燥した。得られたペプチドをAcOH（80％）25ml中に
溶解し、活性炭上に担持した10％金属パラジウム500mg
及びギ酸アンモニウム500mgをこの溶液に添加した〔M.
K.Anwer及びA.F.Spatola「合成（Synthesis）929（198
0）〕。２時間後、Pauly反応により確認した如く、ヒス
タジン保護基は完全に除去されていた。ついで混合物を
遠心分離し、溶液を水で希釈したのち数回凍結乾燥し
た。粗製ペプチドを、カルボキシメチルセルロース（CM
−52）カラム上、濃度範囲0.05Nないし0.5Nの直線勾配
をもつ酢酸アンモニウムにより溶離して、pH7.0におい
てクロマトグラフイー処理した。ペプチドを含有するフ
ラクシヨンを凍結乾燥し、再び、Sephadex SPC25カラム
上で、濃度範囲0.25Nないし1Nの直線勾配をもつ酢酸ア
ンモニウムにより溶離して、pH4.5でクロマトグラフイ
ー処理した。ペプチドを含有するフラクシヨンを集め、
凍結乾燥した。
アミノ酸分析： Pro 2.07（２）； His 2.10（２）； Phe 2.10
（２）； Tyr 0.99（１）； Lys 1.00（１） 得られたペプチド（ラセミ形の２−イソプロピルマロニ
ル残基を鎖中に導入した結果、２種のジアステレオ異性
体の混合物でなる）は、分析用Hibar RP−15（５μＭ）
カラム上での高圧クロマトグラフ分析（溶離剤はトリフ
ルオロ酢酸（0.1％）を含有するアセトニトリル/H2O（3
8/62）混合物である）において、２つのピークを示し
た。また、このペプチドサンプルは、ミクロ結晶性セル
ロースの薄層上での高圧電気泳動（使用した緩衝剤：ギ
酸−酢酸、pH2.1;酢酸ナトリウム−酢酸、pH3.5）にお
いて単一スポツトを示した（ニンヒドリンテスト及びPa
uly試薬によるテスト）。
（２）； Tyr 0.99（１）； Lys 1.00（１） 得られたペプチド（ラセミ形の２−イソプロピルマロニ
ル残基を鎖中に導入した結果、２種のジアステレオ異性
体の混合物でなる）は、分析用Hibar RP−15（５μＭ）
カラム上での高圧クロマトグラフ分析（溶離剤はトリフ
ルオロ酢酸（0.1％）を含有するアセトニトリル/H2O（3
8/62）混合物である）において、２つのピークを示し
た。また、このペプチドサンプルは、ミクロ結晶性セル
ロースの薄層上での高圧電気泳動（使用した緩衝剤：ギ
酸−酢酸、pH2.1;酢酸ナトリウム−酢酸、pH3.5）にお
いて単一スポツトを示した（ニンヒドリンテスト及びPa
uly試薬によるテスト）。
ジアステレオ異性体の分離 ２種類のジアステレオ異性体の混合物を、Lich−roprep
（登録商標）RP−18（Merck.Darmstadt）を充填したカ
ラム（7.8×30mm）を使用し、最初の20分間はトリフル
オロ酢酸（0.1％）を含有するアセトニトリル/H2O（26/
74）混合物で、つづいて８分間はトリフルオロ酢酸（0.
1％）を含有するアセトニトリル/H2O（39/61）混合物で
溶離して、逆転相半調製高圧液クロマトグラフイーによ
りラセミ分割した。個々のジアステレオ異性体の分離
を、各々約0.5μモルを含有する各サンプルについて行
なつた。２種の異性体に相当するフラクシヨンを凍結乾
燥し、分析カラム上での高圧液クロマトグラフイー試験
により再度チエツクした。
（登録商標）RP−18（Merck.Darmstadt）を充填したカ
ラム（7.8×30mm）を使用し、最初の20分間はトリフル
オロ酢酸（0.1％）を含有するアセトニトリル/H2O（26/
74）混合物で、つづいて８分間はトリフルオロ酢酸（0.
1％）を含有するアセトニトリル/H2O（39/61）混合物で
溶離して、逆転相半調製高圧液クロマトグラフイーによ
りラセミ分割した。個々のジアステレオ異性体の分離
を、各々約0.5μモルを含有する各サンプルについて行
なつた。２種の異性体に相当するフラクシヨンを凍結乾
燥し、分析カラム上での高圧液クロマトグラフイー試験
により再度チエツクした。
アミノ酸分析： 異性体A: Pro 1.83（２）； His 1.99（２）； Phe 1.99（２）； Tyr 0.94（１）； Lys 1.00（１） 異性体B: Pro 1.86（２）； His 1.99（２）； Phe 2.05（２）； Tyr 0.96（１）； Lys 1.00（１）
Claims (4)
- 【請求項１】式（Ｉ） で表わされ、特異性レニン阻害剤として使用されると共
に、酵素加水分解に対する強い抵抗性及びインビボ阻害
活性の長い持続性を有する、Phe−Val結合部位で部分的
にretro転化されたペプチド。 - 【請求項２】 ジエム−ジアミノ残基 がＳ配置であり、マロニル残基 がＲ及びＳ対掌体の混合である特許請求の範囲第１項記
載のペプチド。 - 【請求項３】ジエム−ジアミノ残基がＳ配置であり、マ
ロニル残基がＳ配置である特許請求の範囲第１項記載の
ペプチド。 - 【請求項４】ジエム−ジアミノ残基がＳ配置であり、マ
ロニル残基がＲ配置である特許請求の範囲第１項記載の
ペプチド。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT21281/83A IT1164239B (it) | 1983-05-25 | 1983-05-25 | Un retro-inverso analogo del decapeptide (5-14)dell'angiotensinogeno equino inibitore specifico della renina con elevata resistenza all'idrolisi enzimatica |
| IT21281A/83 | 1983-05-25 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59231055A JPS59231055A (ja) | 1984-12-25 |
| JPH0672153B2 true JPH0672153B2 (ja) | 1994-09-14 |
Family
ID=11179480
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59104834A Expired - Lifetime JPH0672153B2 (ja) | 1983-05-25 | 1984-05-25 | ペプチド |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4560505A (ja) |
| EP (1) | EP0127234B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0672153B2 (ja) |
| AT (1) | ATE29890T1 (ja) |
| AU (1) | AU558572B2 (ja) |
| CA (1) | CA1249699A (ja) |
| DE (1) | DE3466396D1 (ja) |
| IT (1) | IT1164239B (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1190389B (it) * | 1985-09-19 | 1988-02-16 | Eniricerche Spa | Esapeptidi ad attivita' ipotensiva |
| DE3783280T2 (de) * | 1986-07-16 | 1993-05-06 | Eniricerche Spa | Teilweise retro-invertierte analoge des tuftsin, methode zu ihrer herstellung und pharmazeutische zusammensetzungen, die sie enthalten. |
| ATE107658T1 (de) * | 1988-01-26 | 1994-07-15 | Sankyo Co | Renin inhibierende polypeptide, ihre herstellung und anwendung. |
| JPH03504496A (ja) * | 1988-04-08 | 1991-10-03 | スクリプス クリニック アンド リサーチ ファウンデーション | 水素結合の共有結合置換により安定化されたポリペプチド |
| US5807979A (en) * | 1988-04-08 | 1998-09-15 | The Scripps Research Institute | Synthetic, three-dimensionally stabilized polypeptide mimics of HIV |
| DE4004820A1 (de) * | 1989-08-05 | 1991-04-25 | Bayer Ag | Renininhibitoren, verfahren zur herstellung und ihre verwendung in arzneimitteln |
| US5242903A (en) * | 1989-08-05 | 1993-09-07 | Bayer Aktiengesellschaft | Renin inhibitors |
| US6458357B1 (en) | 1997-09-09 | 2002-10-01 | Myelos Corporation | Retro-inverso neurotrophic and analgesic peptides |
| AU2004223829A1 (en) * | 2003-03-24 | 2004-10-07 | Sequoia Pharmaceuticals, Inc. | Long acting biologically active conjugates |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4269827A (en) * | 1980-06-23 | 1981-05-26 | The Massachusetts General Hospital | Process and composition for reducing blood pressure |
| NO812612L (no) * | 1980-08-06 | 1982-02-08 | Ferring Pharma Ltd | Enzym-inhibitorer. |
| JPS5759846A (en) * | 1980-08-06 | 1982-04-10 | Ferring Pharma Ltd | Polypeptide homologue and manufacture of hydroxy or keto homologue of dipeptide |
| IT1212508B (it) * | 1981-12-22 | 1989-11-22 | Anic Spa | Analoghi retro - invertiti dei penta - ed esapeptidi c - terminali della sostanza p. utili come vasodilatatori |
| IT1190891B (it) * | 1982-06-24 | 1988-02-24 | Anic Spa | Metodo per la sintesi in fase solida di polipeptidi retroinvertiti |
-
1983
- 1983-05-25 IT IT21281/83A patent/IT1164239B/it active
-
1984
- 1984-05-17 DE DE8484200710T patent/DE3466396D1/de not_active Expired
- 1984-05-17 AT AT84200710T patent/ATE29890T1/de active
- 1984-05-17 EP EP84200710A patent/EP0127234B1/en not_active Expired
- 1984-05-22 US US06/612,798 patent/US4560505A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-05-23 CA CA000454917A patent/CA1249699A/en not_active Expired
- 1984-05-24 AU AU28553/84A patent/AU558572B2/en not_active Ceased
- 1984-05-25 JP JP59104834A patent/JPH0672153B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT8321281A0 (it) | 1983-05-25 |
| DE3466396D1 (en) | 1987-10-29 |
| EP0127234B1 (en) | 1987-09-23 |
| IT8321281A1 (it) | 1984-11-25 |
| IT1164239B (it) | 1987-04-08 |
| AU2855384A (en) | 1984-11-29 |
| US4560505A (en) | 1985-12-24 |
| EP0127234A3 (en) | 1985-09-04 |
| ATE29890T1 (de) | 1987-10-15 |
| JPS59231055A (ja) | 1984-12-25 |
| AU558572B2 (en) | 1987-02-05 |
| CA1249699A (en) | 1989-01-31 |
| EP0127234A2 (en) | 1984-12-05 |
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