JPH06500229A - 擬人化ｃｄｒ移植抗ｉｃａｍ―１抗体、その生産方法及びその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １６、抗ＩＣＡＭ−Ｌ　ＨＡＭを生産するための方法であって、（ａ）　その可 変ドメインのＣＤＨの少なくとも１つが非ヒト（１！歯目）抗ＩＣＡＭ−１抗体 から誘導されたものであり、かつ、その抗体鎖の残りの免疫グロブリン誘導部分 がヒト免疫グロブリンから誘導されている抗体重鎮又は軽鎖をコードしているＤ ＮＡ配列を有するオペロンを含有している発現ベクターを作成し、（ｂ）　その 可変ドメインのＣＤＲの少なくとも１つが醤歯目（非ヒト）抗ＩＣＡＭ−１抗体 から誘導されたものであり、かつ、その抗体鎖の残りの免疫グロブリン誘導部分 がヒト免疫グロブリンから誘導されている相補的な抗体軽鎖又は重鎮をコードし ているＤＮＡ配列を有するオペロンを含有している発現ベクターを作成し、 （Ｃ）　宿主細胞を上記の各ベクターでトランスフェクションし、そして（ｄ） トランスフェクションした細胞系を培養することによりＨＡＭを生産する、 ことを特徴とする方法。

１７、製薬的に許容され得る希釈剤、賦形剤又は担体と共に、請求項１から請求 項１０までのいずれかに記載の抗体分子又はその断片を含有している治療用組成 物。

１８　検出できるように標識された形態にある請求項１から請求項１１までのい ずれかに記載の抗体分子又はその断片を含有している診断用組成物。

１９　請求項１から請求項１１までのいずれかに記載の抗体産物の有効量をヒト 又は動物対象に投与することを特徴とする治療方法。

２０、哺乳動物対象において特異的防御系の応答がもたらす炎症を処置するため の方法であって、そのような処置を必要としている対象に該炎症を抑制するに充 分な量にある、ＩＣＡＭ−１と結合することのできるＨＡＭ又はＲ，ＡＭである 抗炎症物質を与えることを特徴とする方法。

２１、該ＲＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の抗体の１つ又はそ れ以上である第２０項の方法。

２２、該炎症が遅延型過敏反応である請求項２０に記載の方法。

２３　該炎症が乾癖の症状である請求項２０に記載の方法。

２４　該炎症が自己免疫疾患の症状である請求項２０に記載の方法。

２５、該自己免疫疾患が、レノ−症候群、自己免疫甲状腺炎、Ｅ　Ａ　Ｅ　、多 発性硬化症、リウマトイド関節炎及び紅斑性狼癒からなる群の中から選択される 請求項２４に記載の方法。

２６　該炎症が器官移植拒絶に応答する炎症である請求項２０に記載の方法。

２７、該器官移植が腎移植である請求項２６に記載の方法。

２８、該炎症が組織移植拒絶に応答する炎症である請求項２０に記載の方法。

２９、ＬＦＡ−１に結合することができる抗体、該抗体の機能的誘導体であって ＬＦＡ−１に結合することができる該機能的誘導体、及びＬＦＡ−１の非免疫グ ロブリン拮抗物質からなる群の中から選択される薬物の投与をさらに包含する請 求項２０に記載の方法。

３０、哺乳動物対象において非特異的防御系の応答がもたらす炎症を処置する方 法であって、そのような処置を必要としている対象に該炎症を抑制するに充分な 量の抗炎症物質を与えることからなり、該抗炎症物質がＩＣＡＭ−１を結合する ことのできるＲＡＭ又はＲＡＭである方法。

３１、該炎症が、成人呼吸障害症候群、敗血症に続発する各器官損傷症候群、外 傷に続発する各器官損傷症候群、組織の再潅流損傷、急性糸球体腎炎、反応性関 節炎、急性炎症性成分を伴う皮膚病、中枢神経系炎症性障害（例４発作）、熱傷 、血液透析、白血球除去面輸血、潰瘍性大腸炎、クローン病、顆粒球輸注関連症 候群、及びサイトカイン誘発性障害からなる群の中から選択される症状に伴う炎 症である請求項３０に記載の方法。

３２、該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の抗体の１つ又はそ れ以上である請求項３０又は請求項３１に記載の方法。

３３、ＬＦＡ−１フアミリーの機能的構成要素を移動のために必要とする造血性 腫瘍細胞の転移を抑制するための方法であって、そのような治療を必要としてい る患者に該転移を抑制するに充分な量の抗炎症物質を与えることからなり、該抗 炎症物質がＩＣＡＭ−１を結合することができるキメラ抗体である方法。

３４、ＩＣＡＭ−１に結合することができる該ＲＡＭ又はＲＡＭが請求項１から 請求項１１に記載の抗体からなる群の中から選択される請求項３３に記載の方法 。

３５、ＩＣＡＭ−１を発現する腫瘍細胞の成長を抑制するための方法であって、 そのような処置を必要としている患者に該成長を抑制するに充分な量の毒素を与 えることからなり、該毒素がＩＣＡＭ−１に結合することができる毒素誘導体化 ＲＡＭ又はＲＡＭからなる方法。

３６、ウィルス感染症の処置を必要としている個体の該感染症を処置するための 方法であって、該個体にウィルス感染症を抑制するに充分な量の、ＩＣＡＭ−１ と結合できるＨＡＭ又はＲＡＭを与えることを特徴とする方法。

３７、該ウィルスがピコルナビリダニ属内の主要血清型のリノウイルス、グルー プＡコクサッキーウイルス、又はメンゴウイルスである請求項３６に記載の方法 。

３８、該ウィルスが主要血清型のリノウイルスである請求項３７に記載の方法。

３９、該ＲＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の抗体の少なくとも １つである請求項３６から請求項３８までのいずれかに記載の方法。

４０、ＨＩＶによる白血球の感染を抑制するための方法であって、ＨＩＶに暴露 された患者又はＨＩＶに感染した患者にＨＩＶ−１感染抑制物質の有効量を投与 することからなり、該物質がＩＣＡＭ−１に結合することができるＨＡＭ又はＲ ＡＭである方法。

４１、該ＨＩＶがＨＩＶ−１である請求項４０に記載の方法。

４２、該ＲＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の少なくとも１つの 抗体である請求項４０又は請求項４１に記載の方法。

４３、ウィルスに感染した白血球の血管外移動を抑制するための方法であって、 該も者に抗移動物貿の有効量を投与することからなり、該物質が該白血球のＩＣ ＡＭ−１に結合するという能力を減じることができるＨＡＭ又はＲＡＭである方 法。

４４、該ウィルスに感染した白血球がＨＩＶに感染している請求項４３に記載の 方法。

４５、該ＲＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の少なくとも１つの 抗体である請求項４３又は請求項４４に記載の方法。

４６　喘息の治療を必要としている個体の喘息を処置するための方法であって、 該個体に喘息を抑制するに充分な量の、ＩＣＡＭ−１と結合できるＨＡＭ又はＲ ＡＭを与えることを特徴とする方法。

４７、該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の少な（とも１つの 抗体である請求項４６に記載の方法。

４８、該擬人化ＲＡＭ又はＲＡＭが、経腸手段、非経口手段、局部手段、吸入手 段又は鼻孔的手段によって投与される請求項１９から請求項４７までのいずれか に記載の方法。

４９　該擬人化ＨＡ　Ｍ又はＲＡＭが予防的に投与される請求項４８に記載の方 法。

５０　該擬人化ＨＡＭ又はＲＡＭが治療的に投与される請求項４８に記載の方法 。

５１　該非経口手段が筋肉内、静脈内又は皮下法である請求項４８、請求項４９ 又は請求項５０に記載の方法。

５２、製薬的に許容される担体と共に請求項１から請求項１１までのいずれかに 記載の抗炎症物質を含有する医薬組成物。

５３、少なくとも１つの他の免疫抑制物質を含有している請求項５２に記載の医 薬組成物。

５４、哺乳動物対象におけるＩＣＡＭ−１発現腫瘍細胞を診断するための方法で あって、 （ａ）　ＩＣＡＭ−１と結合できる検出可能に標識されたＨＡＭ又はＲＡＭを含 有する組成物を該対象に投与し、 （ｂ）　該ＩＣＡＭ−１に結合している該ＨＡＭ又はＲＡＭを検出する、ことを 特徴とする方法。

５５、哺乳動物対象における炎症を診断するための方法であって、（ａ）ＩＣＡ Ｍ−１を発現する細胞と結合することができる検出可能に標識されたキメラ抗体 を含有する組成物と共に、該対象の組織の試料をインキュベートし、 （ｂ）　該細胞に結合している該キメラ抗体を検出する、ことを特徴とする方法 。

明　細　畜 擬人化ＣＤＲ移植抗ＩＣＡＭ−１抗体、その生産方法及びその使用発明の分野 本発明は組換え抗体分子（ＲＡＭ）に関し、より詳細には細胞間接着分子ＨＩＣ ＡＭ−１）の抗原決定基に対する特異性を有しているＣＤＲ−移植擬人化抗体分 子（ＨＡＭ）、組換えＤＮＡ技法を用いたその生産方法、及びその治療上用途に 関する。

本出願では、「組換え抗体分子Ｊ　（ＲＡＭ）なる用語は、組換えＤＮＡ技法を 用いる方法によって産生される抗体を説明するために使用しており、これには天 然の免疫グロブリン又はその断片の同族体が包含される。ｒＣＤＲ−移植擬人化 抗体分子（ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｅｄ　ｈｕｍａｎｉｚｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　 ｍｏｌｅｃｕｌｅ）Ｊ　（ＲＡＭ）なる用語は、適当なヒト可変ドメイン骨格領 域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　ｒｅｇｉｏｎｓ）に移植（ｇｒａｆｔｅｄ）された非 −ヒト種由来の免疫グロブリンから誘導された相補性決定部位からなる、非−ヒ ト種由来の免疫グロブリンから誘導される抗原結合部位、を有する分子であって 、その分子の残りの免疫グロブリン誘導部分がヒト免疫グロブリンから誘導され ているもの、を説明するために使用している。ｒＭＡｂＪなる略語は、モノクロ ーナル抗体を意味させるべく使用している。

本発明はまた、ＩＣＡＭ−１と結合して顆粒球又はマクロファージ系統の細胞間 接着を阻害することのできるＨＡＭ及びＲＡＭの用途をも提供する。このような 分子を使用することにより、特異的な及び非特異的な炎症を処置するための方法 が提供される。

本発明はさらに、ウィルス、及び特にリノウイルス疾患の処置における、■ＣＡ Ｍ−１と結合できるＲＡＭ及びＨＡＭに関する。

また、本発明は、ＨＩＶに暴露され、又はＨＩＶによって影響を受けているため にＩＣＡＭ−１と結合できるＲＡＭ及びＨＡＭの投与による白血球感染の抑制が 必要とされている個体、におけるＨＩＶ、特にＨＩＶ−１による白血球の感染を 抑制するための治療及び予防方法にも関する。従って、本発明は、ＨＡＭウィル スによって引き起こされるＡ　Ｉ　ＤＳ（後天性免疫不全症候群）のような疾患 の治療を提供できる。

さらに、本発明は、ＩＣＡＭ−１と結合できるＲＡＭ及びＨＡＭを使用すること を特徴とする、ＨＩＶ（感染細胞の循環系からの移動を抑制するための治療方法 にも関する。従って、本発明は、ＨＡＭウィルスによって引き起こされるＡＩＤ Ｓ（後天性免疫不全症候群）のような疾患の治療を提供できる。

ま、た、本発明は、ＩＣＡＭ−１と結合できるＲＡＭ及びＲＡＭの、喘息処置に おける用途をも提供するものである。

天然の免疫グロブリンは、酵素学的開裂によって誘導され得るＦａｂ、　Ｆ（ａ ｂ’）ｚ及びＦｃ断片などの種々の断片を有するものとして長年にわたって知ら れている。

天然の免疫グロブリンは一般に、それぞれが上腕の遊離末端に指向している抗原 結合部位を有するＹ字型の分子からなるものである。この構造体の残余部分、特 にＹの幹部骨は、免疫グロブリンと関連するエフェクター機能を媒介するもので ある。

天然の免疫グロブリンは検定、診断及び、より限定された程度であるが治療に使 用されている。しかし、このような用途、特に治療用途は、天然の免疫グロブリ ンがポリクローナル性であることによって妨げられている。免疫グロブリンの治 療物質としての可能性が現実となった意義あるステ・ノブは、規定された特異性 を有しているモノクローナル抗体を生産する技法が発見されたことであった［Ｋ ｏｈｌｅｒら、　５ａｔｕｒｅ　２６５：２９５−４９７（１９７５）コ。しか し、殆どのモノクローナル抗体は、ネズミ（醤歯類動物）の膵臓細胞とネズミ骨 髄腫細胞との融合によって産生されてＬ％る。従って、これらは本質的にネズミ タンパク質である。ヒトモノクローナル抗体の生産についての報告は極めて少数 でしかない。

最も利用されているモノクローナル抗体はネズミ起源であるので、それはヒトに おいて本質的に抗原性であり、従ってＨＡＭＡ（ヒト抗−マウス抗体）応答と呼 ばれる望ましくない免疫応答を惹起させる場合がある。従って、ネズミモノクロ ーナル抗体をヒトにおける治療物質として使用することは、ヒト被験者がそのモ ノクローナル抗体に対する免疫応答を亢進させ、それを完全に除去し又は少なく ともその効能を減じさせてしまうという事実があることから、本質的に限定を受 ける。実際に、ネズミ起源のモノクローナル抗体では、ＨＡＭＡ応答が直ぐにも 発現し、そのモノクローナル抗体は非効率化し、また望ましくない反応を惹起さ せるので、１つ以上の、又は幾つかの処買を行う患者ではネズミ起源のモノクロ ーナル抗体を使用することはできない。

従って、ヒトにおいて抗原性がより低くなっている非−ヒトモノクローナル抗体 を作成するための提案がなされている。このような手法は一般に、「擬人化（ｈ ｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）Ｊ手法と呼ぶことができる。これらの手法は概して、 抗体分子のポリペプチド鎖をコードしているＤＮＡ配列を操作する組換えＤＮＡ 手法を利用するものである。

モノクローナル抗体を擬人化するための最近の方法は、１つの抗体の完全な可変 ドメインを含有する抗原結合部位が別の抗体から誘導された定常ドメインと連結 されているキメラ抗体を生産することに関する。このようなキメラ化手法を行う ための方法は、Ｅ　Ｐ　Ｏ１２０６９４［Ｃｅ１ｌｔｅｃｈ　Ｌｉｍ１ｔｅｄコ 、ＥＰＯ１２５０２３［Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ　Ｉｎｃ、及びＣ１ｔｙ　ｏｆ　Ｈ ｏｐｅコ、Ｅ　Ｐ−Ａ−０１７１４９６［Ｒｅｓ、　Ｄｅｖ、　Ｃｏｒｐ。

Ｊａｐａｎ］、Ｅ　Ｐ−Ａ−０１７３４９４［５ｔａｎｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒ ｓｉｔｙコ、及びＷＯ３６１０１５３３［Ｃｅ１ｌｔｅｃｈ　Ｌｉｍ１ｔｅｄコ に記載されている。これらの特許出願は一般に、マウスモノクローナル抗体など の非ヒトモノクローナル抗体由来の可変ドメイン、及びヒト免疫グロブリン由来 の定常ドメインを有している抗体分子の調製方法を開示するものである。しかし 、このような擬人化キメラ抗体は非ヒトアミノ酸配列を有意な比率で、即ち完全 な非ヒト可変ドメインを、依然として含有しているので、特にそれを長期間投与 した場合には何らかのＨＡＭＡ応答を変わらずに惹起させることがある［Ｂｅｇ ｅｎｔらのＢｒ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ　６２：４８７（１９９０）］。

Ｅ　Ｐ−Ａ−０２３９４００（ｆｉｎｔｅｒ）に記載されテイル別ノ手法テハ、 マウスモノクローナル抗体の相補性決定部位（ＣＤＲ）が長いオリゴヌクレオチ ドを使用する部位特異的突然変異によってヒト免疫グロブリンの可変ドメインの 骨格領域（フレームワーク領域）に移植されている。本発明は特に、この別の手 法に従って調製された擬人化抗体分子、即ちＣＤＲ−移植擬人化抗体分子に関す るものである。

このようなＣＤＲ−移植擬人化抗体は、それが含有する非ヒトアミノ酸配列の比 率がより少ない点から、擬人化キメラ抗体よりもＨＡＭＡ応答を極めて惹起させ にくい。

ＣＤＲ−移植によってモノクローナル抗体を擬人化させることに関する研究が、 ＮＰ又はＮＩＰ抗原などの合成抗原を認識するモノクローナル抗体に関してごく 最近行われた。しかし、その後に、リゾチームを認識するマウスモノクローナル 抗体及びヒトＴ細胞の抗原を認識するラットモノクローナル抗体がＣＤＲ−移植 によってそれぞれ擬人化された実験例が、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｖｅｒｈｏｅ ｙｅｎ、５ｃｉｅｎｃｅ　２３９：１５３４−１５３６（１９８８）、及びＲｉ ｅｃｈｍａｎｎらのＮａｔｕｒｅ　３３２：３２３−３２４（１９８８）に記載 された。

ヒトＴ細胞における抗原に対するＣＤＲ−移植抗体の調製もＷＯ８９１０７４５ ４［Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｏｕｎｃｉｌ］に記載されている。

ＣＤＲ領域単独［５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｓｍ ｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ　ＵＳ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ 　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　５ｅｒｖｉｃｅｓ、　ＮＩＨ，ＵＳＡ（ １９８７）において、Ｋａｂａｔらに■ り規定されている。　ｌｕらのＪ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１３２：２１１−２ ５０（１９７０）］の移入は、ＣＤＲ−移植産物に満足のいく抗原結合活性をも たらすのに十分ではなかったことが、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら［Ｎａｔｕｒｅ　３ ３２：３２３−３２４（１９８８）］及びＭｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　 Ｃｏｕｎｃｉｌ［ＷＯ８９１０７４５４コによって見いだされた。Ｒｉｅｃｈｍ ａｎｎら［Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３−３２４（１９８８）］は、鴻足のい く抗原結合活性を有するＣＤＲ−移植産物を得るためには、ヒト配列の２７位セ リン残基をラットの対応するフェニルアラニンに変換する必要のあることを見い だした。重鎮におけるこの２７位残基はＣＤＲＩに隣接する構造ループ内に存在 する。重鎮の３０位にヒトのセリンからラットのチロシンへの変化をさらに含有 しているさらなる構築物は、２７位にセリンからフェニルアラニンへの変化のみ を有している擬人化抗体と比較して、有意に改変された結合活性を有してはいな かった。これらの結果は、より複雑な抗原を認識するＣＤＲ−移植抗体について 有効な抗原結合活性を得るためには、ＣＤＲ領域以外のヒト配列の残基に、特に ＣＤＲ１に隣接するループ内に変化を施すことが必須であるかもしれないことを 示している。しかし、そうであるとしても、得られた最も良好なＣＤＲ−移植抗 体の結合親和性は元のモノクローナル抗体よりも依然として有意に劣っていた。

さらに最近になって、Ｑｕｅｅｎら［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓ ｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　８６　：　１００２９−１O０３３（１ ９８９）及びＷｏ　９０１０７８６１］は、ヒト免疫グロブリン骨格及び定常領 域に不ズミモノクローナル抗体のＣＤＲ（抗−Ｔａｃ）を結合させることにより 、インターロイキン２レセプターに結合する擬人化抗体の調製を開示した。この ヒト骨格領域は抗−Ｔａｅモノクローナル抗体配列との相同性が最大となるよう に選択された。

さらに、コンピューター・モデリングを使用し、ＣＤＲ又は抗原と相互作用し易 い骨格アミノ酸残基を同定し、擬人化抗体におけるそれらの位置にマウスのアミ ノ酸を使用した。

Ｗｏ９０１０７８６１では、Ｑｕｅｅｎらが擬人化免疫グロブリンを設計するた めの４つの基準を提示している。第１の基準は、擬人化させようとしている非ヒ ト・ドナーの免疫グロブリンと相同的であるのが普通でない特定のヒト免疫グロ ブリン由来の骨格をヒト・アクセプターとして使用するか、又は多くのヒト抗体 由来のコンセンサス骨格をアクセプターとして使用することである。第２の基準 は、ヒトアクセプター残基が普通のものでなく、ドナー残基がその骨格の特定残 基においてヒト配列として普通のものである場合には、そのアクセプター以外の ドナーアミノ酸を使用することである。第３の基準は、ＣＤＲに直接に接する位 置におけるアクセプター以外のドナー骨格アミノ酸残基を使用することである。

第４の基準は、免疫グロブリンの三次元モデルにおいて約３人以内のＣＤＲの側 鎖原子を有しており、かつ抗原又は擬人化免疫グロブリンのＣＤＲと相互作用す ることができると予想される、骨格位置におけるドナーアミノ酸残基を使用する ことである。上記の基準２．３又は４は基準１に加えて、又はそれに代えて適用 することができ、また単独で、あるいは任意の組み合わせで適用することができ る。

Ｗｏ　９０１０７８６１は、ＩＬ−２レセプターのｐ５５Ｔａｃタンパク質に対 する特異性を有する擬人化抗体である単一のＣＤＲ−移植擬人化抗体の調製につ いて詳細に開示している。この擬人化抗体を設計するのには、上記４つすべての 基準の組合わせが使用され、ヒト抗体Ｅｕの可変領域骨格［Ｋａｂａｔらの３ｅ ｑｕ６ｎＣｅＳ　Ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ 　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、　Ｕ、　Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔ ■@ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、　ＮＩＨ（１９８７）］がアクセプターとして使用された。

得られた擬人化抗体では、ドナーＣＤＲはＫａｂａｔら［Ｋａｂａｔら、　５ｅ ｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａＩ 　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌ１ｅａｌｔ ｈ　ａｎｄ　ｆｌｕｍａｎ　５ｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＢ（P９８７）コ及びＷｕ ら［Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１３２：２１１−２５０（１９７０）］によって規 定されているようなものであり、またこれに加えて、可変領域骨格の重鎮の２７ ．３０．４８．６６．６７．８９．９１．９４．１０３．１０４．１０５及び１ ０７位、ならびに軽鎖の４８．６０及び６３位におけるヒト・アクセプター残基 の代わりにマウス・ドナー残基が使用されていた。得られた擬人化抗−Ｔａｃ抗 体はネズミモノクローナル抗体の親和性の約１／３であるｐ５５＝３ｘｌＯ’　 Ｍ−’の親和性を有していると報告されている。

ＣＤＲ−移植擬人化抗体分子の調製はさらに研究され、満足のいく結合親和性を 備えたＣＤＲ−移植産物を得るにはその残基のアミノ酸が何であるのかが重要で ある可変領域の骨格内の位！（即ち、ＫａｂａｔＣＤＲ及び可変領域の構造ルー プの両者の外側）の序列（ｈｉｅｒａｒｃｈｙ）が同定された。これにより、ド ナー免疫グロブリン及びアクセプター骨格の間の相同性レベルとは無関係に非常 に幅広く適用することのできる満足のい＜ＣＤＲ−移植産物を得るためのプロト コールの作成が可能になった。

ごく最近、Ｔｅｍｐｅｓｔら［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　９：２６６−２７ １（１９９１）コは、ヒト呼吸シンンチウムウイルス（ＲＳ　Ｖ）感染をインビ ボにおいて抑制するために、再形成されるヒトモツクローナル抗体の調製を開示 した。この再形成抗体は、ＲＳＶ感染を中和するネズミＭＡｂのＣＤＲをコード している合成オリゴヌクレオチドを、部位特異的突然変異によってヒトＩｇＧ１ モノクローナル抗体の骨格をコードするＤＮＡに移植することにより調製された 。しかし、ＣＤＲ単独でマウス及びヒトの抗体間に移入する単純な再形成抗体は 、Ｒ３Ｖに対する結合性がバックグランドを有意に越えない非常に貧弱なもので しかなかった。結合能を部分的に回復させるためには、重鎮のＣＤＲ３に隣接す る骨格領域のマウス残基へとヒト残基を変換させることが必要であると証明され ている。

機能的なＨＡＭの構築に当たり基準の上で重要であるとして本明細書にて記載し ている骨格領域の残基の組みは、Ｑｕｅｅｎら［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａ ｄ、Ｓｃｉ、、Ｕ、Ｓ、Ａ、　８６：１００２９−１００３３（１９８９）、及 びＷｏ　９０１０７８６１コによって同定された残基とは一致しない。重要な残 基の同定を包含するこのプロトコールは、同時係属の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ ９０１０２０１７［Ｃｅ１ｌｔｅｃｈ　Ｌｉｍ１ｔｅｄ］において詳細に記載さ れ（これは引用によって本明細書に包含される）、これには特に、ネズミ抗−■ ＣＡＭ−１モノクローナル抗体のＣＤＲ−移植が記載されている。

Ｂ、白血球接着及び機能 白血球及び顆粒球は、誘起する炎症応答のため、及びおそらくはウィルス、細菌 及びアレルゲンなどの外来性の侵入物から宿主を守るためにも、細胞基質と接着 できなければならない。この事実は、２つの方向づけされた研究によって証明さ れた。

第１の研究方針は、白血球膜タンパク質の研究に関するものである［Ｗａｌｌｉ ｓ、　Ｗ。

Ｊ、らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３５：２３２３−２３３０（１９８５）　 ；　Ｍｅｎｔｚｅｒ、　Ｓ、　Ｊ、らのＪ、Ｃｅ１１．Ｐｈ凾唐奄盾戟A１２６ ：２８５−２９０（１９８６）　；　Ｈａｓｋａｒｄ、　Ｄ、　ＯらのＪ、　Ｉ ｎ＋ｕｎｏ１．１３７：２９０１−２９０６（１９８６）　F　Ｈａｒｌａｎ、 　Ｊ。

ＶらのＢｌｏｏｄ　６６：１６７−１７８（１９８５）］。細胞接着の過程にと って特に重要なものは、ｒｃＤ１８Ｊファミリー（ｆａ＋ａｉｌｙ）又は複合体 として知られている白血球膜タンパク質の一ファミリーである。このファミリー は３つのへテロダイマー［ｒＭａｃ−１」、ｒＬＦＡ−ＩＪ及びｒＰ１５０．９ ０Ｊとして知られている］から構成され、そのすべては共通するサブユニット（ β−サブユニットとして知られている）及び独特のサブユニット（α−サブユニ ットとして知られている）を形作っている［Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、　Ａ、ら のＩ＋ｕ＋ｕｎｏ１．　Ｒｅｖ、　６ｇ＋１１１−１３５（１９８２）　；　Ｓ ｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、らのＦｅпA　Ｐｒｏｃ、　４４　：２６ ６０−２６６３（１９８５）　；　Ｋｅｉｚｅｒ、　Ｇ、らのＥｕｒ、　Ｊ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１５：１１４２−１１４７（１９８５）@；　Ｓａｎｃｈｅ ｚ−Ｍａ ｄｒｉｄ、　Ｆ、らのＪ、　Ｅｘｐｅｒ、　Ｍｅｄ、　１５８：１７８５−１８ ０３（１９８３）コ。

白血球膜タンパク質のＣＤ１８フアミリーに対するモノクローナル抗体はそれら のタンパク質のアンタゴニストとして機能することにより、インビトロにおける 白血球接着依存性の多数の事象を抑制する。これには、適当な刺激に応答して凝 集する顆粒球の凝集能、タンパク質被覆プラスチックに接着する顆粒球の接着能 、２次元アガロース検定における顆粒球の移動能、及び内皮細胞に接着する顆粒 球の接着能が包含される。

箪２の研究方針は、白血球接着分子のＣＤ１８フアミリーの共通サブユニットを コードする遺伝子における遺伝的欠陥のためにそれらの細胞表面に接着分子のい ずれも発現することのできない個体に関する研究から始まったものである。この ような個体は、「白血球接着不全症Ｊ　（ＬＡＤ）に罹患していると言われる［ Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、　Ｃ，らのＦｅｄ、　Ｐｒｏｃ、　４４：２６７１− ２６７７（１９８５）　：　Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、　Ｃ，らのi、　Ｉｎｆ ｅｃｔ、　Ｄｉｓ。

１５２：６６８−６１１！９（１９８５）］。ＬＡＤの患者に特徴的なのは、壊 死性の実質組織損傷、障害膿の形成及び創傷治癒、ならびにインビトロにお＋’ ）る接着依存性の白血球機能の異常及び慢性及び再発性の細菌感染に対する感受 性の異常などがある。これらのＬＡＤ患者から採取した顆粒球は、それらに対応 する正常な顆粒球が抗−ＣＤ１８モノクローナル抗体の存在下に挙動するのと同 じ欠陥性の挙動をインビトロにおいて示す。即ち、これらの顆粒球は、凝集又は 内皮細胞への接着などの接着関連機能を起こすことができない。しかし、より重 要なことは、これらの顆粒球が細胞基質に接着できないことから、上記の患者が 正常な炎症応答を高めることができないという観察事項である。最も顕著なもの は、これらＬＡＤ患者由来の顆粒球はそれらが炎症損傷の近くに存在する血管内 皮細胞と接着できないためにヒフ感染などの炎症部位に到達できないという観察 である。このような接着は管外漏出にとって必須の工程である。

従って、要約すれば、リンパ球及び顆粒球が動物の健康と生存力とを維持させる 維持能には、それらが他の細胞（例えば、内皮細胞）と接着できる二とが必要と されるのである。顆粒球−内皮細胞の接着には、顆粒球細胞表面に存在する特異 的なレセプター分子に関連する細胞−細胞接触が必要とされることが見いだされ た。これらのレセプターは白血球を他の白血球又は内皮細胞に、及び他の非血管 細胞に接着させることができる。

白血球の細胞表面レセプター分子は相互間で高度に関連していることが見いださ れている。白血球がこれらの細胞表面レセプター分子を欠いているヒトは慢性及 び再発性の感染症、及び他の臨床的な症候群を示す。白血球がＣＤ１８複合体の 機能的な接着分子を欠くために正常な態様で接着できない場合には、炎症反応は 緩和される。白血球接着は組織炎症をもたらす過程に関与しているので、白血球 接着の過程を理解することは特異的及び非特異的な炎症のための処置を規定する うえで非常に意義のあることである。

さらに、白血球接着は、外来性の身体又は組織を同定し、拒絶する過程に関与し ているので、この過程を理解することは、器官移植、組織移植、アレルギー及び 腫瘍学の領域において非常に意義のあることである。

Ｃ３細胞間接着分子ＩＣＡＭ−１及び細胞接着細胞間接着分子ＩＣＡＭ−１はＲ ｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，ら［Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３７：　１２７０−１ ２７４（１９８６）コの手法によって最初に同定され、部分的に特性化された（ これを引用によって本明細書に包含させる）。ＩＣＡＭ−１、その調製、精製及 び特性化は、ＷＯ９０１０３４００（これを引用によって本明細書に包含させる ）に記載されている。

ＩＣＡＭ−１は、内皮細胞及び白血球間の細胞接着の過程に関与するものとして 始めは理解された。細胞接着は、白血球が循環系から進行中の炎症部位に移動す るため、及び細菌もしくはウィルスなどの外来侵入物から宿主を適切に守るため に、白血球が内皮細胞などの細胞基質と接触する過程である。この防護系につい ての優れた概説はＥｉｓｅｎ、　Ｈ，？、によって提示されている［Ｍｉｃｒｏ ｂｉｏｌｏｇｙ、　３編、　Ｈａｒｐｅｒ　＆　Ｒｏｗ、フィラデルフィア、Ｐ ＾（１９８０）、　２９０−２９５頁及び３８１−４１８頁］。

接触過程に関与する内皮細胞の表面分子の１つがＩＣＡＭ−１である。この分子 は、白血球の細胞表面に存在する糖タンパク質のＣＤ−１８、ＣＤ−１１／１８ フアミリーの分子に結合することにより接着を媒介することが示されている［Ｓ ａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ、　Ｆ、らのＪ、　Ｅｘｐｅｒ、　１ｌｅｄ、　１ ５８：１７８５−１８０３（１９８３）　；　ＫｅｉｚｅｒAＧ、Ｄ　らのＥｕ ｒ。

Ｊ、Ｉ＋ｕ＋ｕｎｏ１．１５：　１１４２−１１４７（１９８５）コ。

細胞間接着分子（ＩＣＡＭ−１）は血管内皮細胞などの種々の細胞タイプにて発 現される誘導性の細胞表面積タンパク質てあり、これは炎症部位において優先的 に発現される。ＩＣＡＭ−１はＬＦＡ−１の天然の結合性リガンドであるので、 ＩＣＡＭ−１−ＬＦＡ−１相互作用は炎症部位への白血球の細胞接着、補充、及 び特異的及び非特異的炎症の両者に寄与する白血球機能の誘発における中心的役 割を果している。

Ｄ　ヒト・リノウイルスに対する細胞レセプターＡｂｒａｈａｍら［Ｊ、　Ｖｉ ｒｏｌ、　５１　＋３４０−３４５（１９８４）］は、無作為に選択したヒト・ リノウイルス（ＨＲＶ）血清型の大多数が同じ細胞レセプターと結合できたこと を発見した。

次いで、Ｃｏ１ｏｎｎｏら［Ｃｏ１ｏｎｎｏらのＪ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｃｈ ｅ＋＊、補１０（パートＤ）：２６６（１９８６）　；　ＣB １ｏｎｎｏらのＪ、　Ｖｉｒｏｌ、　５７：７−１２（１９８６）　：　Ｃｏ１ ｏｎｎｏらの欧州特許出願公開第１６９．１４６号］に基づき、主要血清型のＨ ＲＶの内皮細胞表面への接着を阻害できるモノクローナル抗体を発現させた。こ の抗体によって認識される内皮細胞レセプタータンパク質を単離し、それが９０ Ｋｄのタンパク質であることが見いだされ［Ｔｏａ＋ａｓｓｉｎｉらのＪ、　Ｖ ｉｒｏｌ、　５８：２９０−２９５（１９８６）コ、またその後にこれがＩＣＡ Ｍ−１分子であることが示された［５ｔａｕｎｔｏｎらのＣｅ１ｌ　５６：８４ ９−８５４（１’Ｊ８９）コ。

ウィルスレセプター、ＩＣＡＭ−１に対するネズミモノクローナル抗体を使用し 、リノウイルス感染、特に主要な型のヒトリノウイルスによる感染の処１が提案 されている［ＥＰ　３９１０８８］。

Ｅ、ＨＩＶによる感染 ＨＩＶ感染はＡＩＤＳの原因である。ＨＩＶの２つの主要な変異体が開示されて いる　ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２である。ＨＩＶ−１は、アフリカのみで蔓延し ているＨＩＶ−２とは対照的に化アメリカ及び欧州で蔓延している。これらのウ ィルスは類似した構造を有しており、類似した機能を持つタンパク質をコードし ている。これら２つの変異体における遺伝子及び遺伝子産物のヌクレオチド及び タンパク質配列は相互に約４０％の相同性を有すると示されている。

ＨＩＶ！＠染はウィルスタンパク質（ｒｇｐ１２０Ｊと呼ばれる）が７４（ｒＴ ヘルパー」）リンパ球の表面に存在するレセプター分子（ｒｃＤ４Ｊと呼ばれる ）と結合することによって起こると考えられる［Ｓｃｈｎｉｔｔｍａｎ、　Ｓ、 　Ｍ、らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４１　：４１８１−４１８６（１９８ｇ ）］　（これは引用によって本明細書に包含される）。次いで、これらのウィル スは細胞に侵入し、最終的にはＴ細胞を死滅させる工程の中の複製を行う。個体 のＴ４ｓ団の破壊はＨＩＶ感染の直接的な結果である。ＨＩＶは末梢血の単核球 細胞及びヒト血漿から回収することができる［Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂ ｉｏｌ、　２６・２３７１−２３７６（１９８８）　；　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ 、Ｍｅｄ、　３２１　：　１６２１（６２５（１９８９）コ。これらの結果は従 来評■ されていたものよりもウィルス血症的であり、１％と同等に高いＴ細胞感染の頻 度を示す。

Ｔ細胞の破壊は、感染患者が日和見感染と戦う力を減弱させてしまう。ＡＩＤＳ に罹患した個体は癌を発症させることが多いが、この癌とＨＩＶ感染との相関関 係は殆どの場合不確定である。

ＨＩＶウィルスの単なる複製のみで感染細胞は死滅するが、このような複製は通 常、感染個体におけるＴ４細胞の小さな分画でのみ検出される。幾つかの方針に 沿った研究により、ＨＩＶウィルスがＴ４集団の破壌を媒介する他の機序が解明 された。

ＨＩＶ複製を媒介するものとは別に、ＨＩＶ感染細胞は細胞毒、キラー細胞の作 用によって破壊され得る。キラー細胞はヒトにおいて存在するのが正常であり、 宿主をモニターし、外来細胞（非適合血液の輸血又は器官の移植など）を破壊す るのに役立っている。ＨＩＶにより感染されると、Ｔ４細胞はそれらの細胞表面 にｇｐ１２０分子を提示する。キラー細胞はこのようなＴ４細胞を（天然の細胞 でなく）外来物として認識し、それによりそれらの破壊を媒介するものである。

ＨＩＶ感染はまた非感染の健康細胞をも破壊させることができる。感染細胞はｇ ｐ１２０タンパク質を血液系に分泌することができる。遊離のｇｐ１２０分子は 健康かつ非感染の細胞のＣＤ４レセプターと結合することができる。このような 結合は、細胞がＨＩＶ感染細胞の外観を呈する原因となる。細胞毒、キラー細胞 は、非感染Ｔ４細胞に結合したｇｐ１２０を認識し、細胞が外来性であると結論 づけ、そしてＴ４細胞の破壊を媒介する。

ＨＩＶがＴ４の死滅の原因となり得ることに関連するさらなる機序、及び本発明 の特別に興味深い１つは、「シンシチウム」の形成を介するものである。「ジン シチウム」は、数百のＴ４細胞と同等の数の細胞融合によって形成される多核巨 大細胞である。ＨＩＶによる感染により、感染細胞は他のＴ４細胞と融合できる ようになる。このような融合の相手はそれ自身ＨＩＶに感染されているものの場 合があり、又は感染されていない健康細胞である場合がある。シンシチウムは機 能できず、間もなく死亡する。その死亡はＨＩＶ感染及びＨＩｖ非感染のＴ４細 胞の両者の破壊を招く。この過程は、Ｔ４細胞の直接的な細胞−細胞接触を必然 的に伴うので、本発明の特に興味深い関心事である。ＨＩＶ感染細胞がジンシチ ウムを形成する能力は、このような細胞が健康細胞と融合するための手段を獲得 していることを示している。従って、細胞−細胞接触は、ＨＩＶ感染が個体内の １つの細胞から他の細胞へと伝播される過程において基本的に重要なものであろ う。

ＨＩＶ感染、特にＨＩＶ−１感染は、これらのへテロダイマーによって媒介され る細胞接着反応及び白血球インテグリンの細胞表面発現に影響を与えるようであ る［Ｐｅｔｉｔ、Ａ、　Ｊ、らのＪ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７９：１ ８８（１９８７）　；　Ｈｉｌｄｒｅｔｈ、　Ｊ、　Ｅ、@Ｋ、らの５ｃｉｅｎ ｃ ｅ　２４４：１０７５（１９８９）　；　Ｖａｌｅｎｔｉｎ、＾、らのＪ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１４４：９３４−９３７（１９９０）@；　Ｒｏｓｓｅｎ 。

Ｒ，Ｄ、らのＴｒａｎｓ、　Ａｓ５ｏｃ、＾ｍｅｒｉｃａｎ　Ｐｈｙｓｉｃｉａ ｎｓ　１０２＋１１７−１３０（１９８９）コ（これらはす■ て引用によって本明細書に包含される）。ＨＩＶ−１による感染の後では、Ｕ９ ３７細胞の同型凝集（ｈｏｍｏｔｙｐｉｃ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）が増大さ れ、これはＣＤ１８、ＣＤ１ｌｂの細胞表面発現のよってある［Ｐｅｔｉｔ、＾ 、Ｊ、らのＪ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７９：１８８（１９８７）］。］ ＨＩＶ−１感染Ｕ９３７細は、非感染Ｕ９３７細胞よりも高い頻度でＩＬ−１て 刺激された内皮細胞と接着する。この挙動は、その感染細胞を抗−ＣＤ１８又は 抗−ＣＤ１１ａモノクローナル抗体で処理するか、又は内皮基質を抗−ＩＣＡＭ −１で処理することにより抑制することができる［Ｒｏｓｓｅｎ、　Ｒ，Ｄらの Ｔｒａｎｓ。

Ａｓ５ｏｃ、　：〜ｍｅｒｉｃａｎ　Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ　１０２：１１７− １３０（１９８９）］。ＣＤ１８又はＣＤ１１ａに対するモノクローナル抗体も また、フィトヘムアグルチニン（Ｐ　ＨＡ　）−刺激リンパ芽球腫細胞及び構成 的に感染されたＣＤ４−陰性Ｔ細胞に関連するノン／チウムの形成を阻害できる ことが見いだされた［Ｈｉｌｄｒｅｔｈ、　Ｊ、　Ｅ、　Ｋ、らの５ｃｉｅｎｃ ｅ　２４４：１０７５（１９８９）］。ウィルス感染細胞のみを抗−ＣＤ１８又 は抗−ＣＤ１１ａモノクローナル抗体で処理してもノン／チウム形成にはほとん ど影響を与えないことが見いだされたが、このことはこれらの抗体が非感染の標 的細胞を感染から保護している基本であることを示しティる［Ｈｉｌｄｒｅｔｈ 、　Ｊ、　Ｅ、　Ｋ、らの５ｃｉｅｎｃｅ　２４４　：　１０７５（１９８９） 　：　Ｖａｌｅｎｔｉｎ、　Ａ　らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｉｏｇｙ　１４４：９ ３４−９３７（１９９０）コ。Ｖａｌｅｎｔｉｎら［Ｖａｌｅｎｔｉ氏A　Ａ、 ら のＪ、　ｆｍｕｎｏｌｏｇｙ　１４４：９３４−９３７（１９９０）コは、連続 ＴセルラインをＨＩＶ−１感染Ｕ９３７細胞と同時培養した場合に形成されるノ ン／チウムをＣＤ１８に特異的であるモノクローナル抗体が阻害することを証明 することによって、最近になって上記の観察事項を確認した。

ＣＤ１８又はＣＤ１１ａに特異的であるモノクローナル抗体が、感受性細胞がＨ ＩＶ惑染感染と融合することを妨害する機序は依然として不明であり、これは本 発明を理解するうえで必須でないが、放射線標識したｇｐ１２０を用いた試験に よって、ＣＤ１８を含宵するヘテロダイマーはウィルスの結合部位を提供しない ことが示された［Ｖａｌｅｎｔｉｎ、　Ａ、らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　 １４４：９３４−９３７（１９９０）コ。従って、ＨＩＶ感染には、細胞−細胞 相互作用、及び／又はこのような細胞−細胞相互作用を模擬するウィルス−細胞 相互作用が関与している。細胞−細胞相互作用は細胞−遊離ウィルスの輸送又は 感染した単核細胞の細胞質内における内皮細胞の障壁を越えるウィルスの輸送を もたらすことができる。細胞−細胞相互作用を模擬するウィルス−細胞相互作用 は、遊離のウィルスが健康な細胞と接触すること、及び／又は該ウィルスが健康 細胞を感染することを可能とし、又はそのような事象を容易にできる。

本発明はこのように、ＨＩＶ感染、及び特にＨＩＶ−１の感染によりＣＤＩＩａ ／ＣＤ１８ヘテロダイマー、及びその結合リガンド、ＩＣＡＭ−１の発現が増大 されるという観察によって部分的には導かれるものである。この増大発現は、そ れがＨＩＶ−感染Ｔ細胞の相互の接着又は凝集能（即ち、「同型凝集」を受ける 能力）を増大させる点から意義深い。このような同型凝集は無活動の正常白血球 間には起こらないことが認められているので、この発見はこのような凝集のため にはＣＤ１１／ＣＤ１８レセプター及び／又はＩＣＡＭ−１の発現が必要とされ ることを示している。このような接着により、ＨＩＶ−１が感染細胞から個体の 健康細胞へと伝播することができ、また健康細胞を遊離ウィルスによって感染さ せることができ、又はそれが容易になる。

ＩＣＡＭ−１は細胞−細胞相互作用のなかで中心的役割を演じるので、ＩＣＡＭ −１に結合するネズミモノクローナル抗体はＨＩＶ感染を予防するための方法と して提示されている［Ｗｏ　９０／１３２８１１゜Ｆ、ＨＩＶ感染細胞の移動 白血球の移動及び伝播は、感染の結果から個体を保護するうえで重要である。

しかし、これらの過程はウィルス感染白血球の移動及び伝播にも関与している。

特に関心の高いものは、ＨＩＶに感染された白血球の移動及び伝播である。この ような細胞の移動により血管外病巣が形成され、またそれは腫瘍及び他の異常の 原因ともなり得る。

罹患した器官の組織学的研究により、病巣の血管外単核細胞は浸透することが判 明した。中枢神経系におけるこのような浸透作用によるウィルス感染細胞の同定 を行い、ＨＩＶ−１感染細胞の存在が判明した。これらの研究により、ＨＩＶ− １は単核球及びマクロファーンに、及びこの−列の他の細胞に基本的に存在して いることが示された［Ｒ，Ｔ、　ＪｏｈｎｓｏｎらのＦＡＳＥＢ　Ｊ、　２：２ ９７０（１９８ｇ）　；　Ｍ、　Ｈ，５ｔｏｌｅｒらのＪ、＾ｔｍｅｒ、　Ｍｅ ｄ、＾ｓｓｎ、　２５６：２３６０（１９８６）　；　Ｓ、　Ｇａｒｔｎｅｒら のＪ、　Ａｍｅｒ、　ｆｌｅｄ、＾唐唐氏A　２５６：２３６５（１９ ８６）　；　Ｓ、　Ｇａｒｔｎｅｒらの５ｃｉｅｎｃｅ　２３３：２１５（１９ ８６）コ。

ＨＩＶ−１感染率球様の細胞の血管外浸透の形成を刺激する機序は未だ十分に規 定されていない。この機序は、細胞−遊離ウィルスの輸送又は感染単核細胞の細 胞質内の内皮障害を越えるウィルスの輸送のいずれかに関与しているのかもしれ ない。

ＨＩＶ−１による感染は、白血球が血管内皮細胞に接着し、また白血球が血液か ら血管外組織部位に転移するのを可能ならしめる分子の細胞表面発現を刺激する ので［Ｃ，Ｗ、　Ｓｍ１ｔｈらのＪ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　８２：１ ７４６（１９８８）、これは引用によって本明細書に包含させる］、ＨＩＶ感染 細胞の伝播を妨害するために細胞移動を抑制する抗体を使用することが提示され ている［Ｗｏ　９０／１３３１６］。

Ｇ、喘息　臨床特性 喘息は不均質な疾患の系統である。これは、刺激に対する気管支の過度の応答性 によって特徴付けられる［ＭｃＦａｄｄｅｎ、　Ｅ、　Ｒ，らのｌ’１ａｒｒｉ ｓｏｎ’　ｓ　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎ ｅ。１０版、　Ｐｅｔｅｒｓｄｏｒｆ、　Ｒ，Ｇら編、マグロ−・ヒル、ニュー ヨーク（１９８３）、　１５１２−１５１９頁：　Ｋａｙ、　Ａ、　Ｂ、　、　 Ａｌｌｅｒｇｙ　ａｎｄ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、アカデミツク・プレス、 ニューヨーク（１９８７）］（これらは引用によって本明細書に包含される）。

喘息は臨床的には、気管支の広範な狭窄、厚い頑強な分泌物、呼吸困難、咳き及 び喘鳴の発作が顕著である。これらの各症状の相互依存度は不明であるが、正味 の成績は気道抵抗の増大、肺及び胸郭の過度膨張、換気及び膝皿流量の異常な分 配である。この疾轡は、症候のない期間の間における急性の症候の一時的期間と して現れる。

急性の症状発現は低酸素症を招き、致命的であることもある。全世界人口の約３ ％の人がこの疾患にかかっている。

喘息には２つのタイプがあると説明されている。即ち、アレルギー性喘息及び特 異体質性喘息である。アレルギー性喘息は、鼻炎、尊麻疹、湿疹などの遺伝性の アレルギー疾患を伴うのが通常である。この症状は、空気運搬性の抗原（例えば 、花粉、環境又は職業上の汚染物質など）の支内注射に対する膨疹−及び−炎症 反応の陽性、並びにＩｇＥの血清レベルの増大を特徴としている。アレルギー性 喘息の進行は多くの患者では、ＩｇＥ抗体の存在が原因として関連しているよう である。上記の特徴を有していない喘息の患者は特異体質性の喘息と考えられる 。

アレルギー性喘息はＴ及びＢリンパ球によって制御されるＩｇＥ応答に影響され 、肥満細胞結合性の前形成ＩｇＥ分子と空気運搬性の抗原との相互作用によって 活性化されると思われる。抗原との接近は、個体を感作するために長期間ＩｇＥ を産生させるに充分な濃度で起こらなければならない。一旦感作されれば、その 喘息患者は極めて低レベルの抗原に応答して症状を現すことがある。

喘息の症状は、誘発性の抗原、環境因子、職業上の因子、身体的負荷、及び感情 的圧迫の存在及びそのレベルによって悪化される場合がある。

喘息はメチルキサンチン類（例えば、テオフィリン）、β−アドレナリン作働性 アゴニスト（例えば、カテコールアミン類、レゾルシノール類、ヤリゲニン類、 及びエフェドリン）、糖質コルチコイド類（例えば、ヒドロコルチゾン）、肥満 細胞脱顆粒のインヒビター（即ち、クロモリン・ナトリウムなどのクロモン類） 、及び抗−コリン作動性物質（例えば、アトロビン）によって処置することがで きる。

喘息は、好酸球が肺の組織に流入することを包含していると考えられる［Ｆｒｉ ｇａｓ、　Ｅ、らのＪ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎ＋＋ａｕｎｏ１．７ ７：５２７−５３７（１９８６）、これは引用によって本明細書に包含される］ 。

喘息の免疫学的基礎に対する知見が気管支肺胞の洗浄液試験［Ｇｏｄａｒｄ、　 Ｐ、らのＪ。

Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．７０：８８（１９８２）］、 及び上上級職が剥がされた呼吸平滑筋の研究［Ｆｌａｖａｈａｎ、　Ｎ、　Ａ、 らのＪ、　Ａｐｐｌ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　５８：８３４（１９８５）　；　Ｂ ａｒｎｅｓ、　Ｐ、@Ｊ、らのＢｒ、　Ｊ、　Ｐ ｈａｒｍａｃｏｌ、　８６：６８５（１９８５）］によって得られた。これらの 試験によって喘息の免疫学の基礎となる機序は解明され得なかったが、喘息疾患 の免疫学的病因に関する一般に認められる仮説を発展させるに至った［Ｆｒｉｇ ａｓ、　Ｅ、らのＪ＾ｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　７７：５ ２７−５３７（１９８６）を参照のことコ。

喘息の病因の顕著な特徴は、好酸球による肺実質組織の普通以上の浸潤、及び粘 膜絨毛の能力破壊である。この「好酸球仮説」は、肺の肥満細胞から放出される 有害な伝達物質を中和するため、好酸球が気管に引き付けられることを示してい る。この仮説によれば、好酸球は、それが脱顆粒して細胞毒性分子を放出する気 管に引き付けられる。脱顆粒の際、好酸球は肥満細胞の有害な伝達物質を酵素学 的に中和するヒスタミナーゼ、アリールスルファターゼ及びホスホリパーゼＤな どの酵素を放出する。これらの分子は、粘膜絨毛装置の破壊をも促進するので、 気管支分泌が清澄化されるのを妨害し、喘ａ、に特徴的な肺損傷の原因となるも のである。

噛込は細胞の移動に関連しているので、二の移動を阻害して被験者におけるアレ ルゲンの作用を緩和する抗体を使用することが提示されている［ＷＯ／９０／従 来、以下のことが提示されている。特に抗−ＩＣＡＭ−１抗体を白血球媒介性の 炎症に罹患した患者に投与することによってこのような炎症を処置すること［Ｅ Ｐ−０２８９９４９及びＥＰ−０３１４８６３コ、特に抗−ＩＣＡＭ−１抗体を ウィルス感染症に罹患した患者に投与することによってこのような感染症を処置 すること［ＥＰ−３９１０８８］、特に抗−ＩＣＡＭ−１抗体を投与することに よってＨＩＶを有する被験者の感染症を予防すること［Ｗｏ　９０／１３２８１ ］、特に抗−ＩＣＡＭ−１抗体をＨＩＶ感染細胞の伝播を予防すること［ＷＯ９ ０／１３３１６］、及びアレルゲンの作用を緩和するために特に抗−ＩＣＡＭ− １抗体を投与すること［Ｗｏ　９０／１０４５３］。

Ｅ　Ｐ−２８９９４９には、上述の治療にとって好ましい抗体であるＩＣＡＭ− １に対する特異性を有しているネズミモノクローナル抗体（Ｒ６−５−Ｄ６）の 調製が記載されている。Ｒ６−５−Ｄ６の試料はアメリカン・タイプ・カルチャ ー・コレクツコンに受託番号、ＡＴＣＣＨＢ９５８０として１９８７年１０月３ ０日付けで寄託されている。Ｒ６−５−Ｄ６はＥＰＣの規則２８（４）の条項の 下、ＡＴＣＣに寄託された。

上記の処置方法の基礎をなす、現在入手可能な抗−ＩＣＡＭ−１モノクローナル 抗体はネズミモノクローナル抗体であり、結果として、ヒト患者に反復投与する と有意なＨＡＭＡ応答を引き起こすおそれがある。このような非常に有用である 潜在力を有する抗体を好適に擬人化し、又は他の適当な組換えＤＮＡ操作を施す ことによって、この望ましくないＨＡＭＡ応答を減じ、又は完全に消失させ、そ れにより抗体の用途を拡大し、拡張することは極めて望ましいであろう。また、 これらの抗体に組換えＤＮＡ工学の手法を適用し、抗−ＩＣＡＭ−Ｉ　ＲＡＭを 調製することも一般に望ましい。

本発明者らはここに、ネズミモノクローナル抗体から誘導される抗−ＩＣＡＭ− Ｉ　ＲＡＭ及びＣＤＲ−移植擬人化抗体分子を調製するものである。

発明の要旨 本発明は組換え抗体分子（ＲＡＭ）を構築するための方法を提供するものである 。

具体的には、本発明のＲＡＭは、抗−ＩＣＡＭ−１抗体の重鎮及び／又は軽鎖可 変領域から誘導される抗原結合領域を含有している。

本発明は、ＣＤＲ−移植擬人化抗体分子（ＨＡＭ）の構築方法を提供するもので ある。より詳細には、本発明のＲＡＭはＩＣＡＭ−１に対する特異性を有してお り、また少なくとも１つ又はそれ以上の可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤ　 Ｒ）が非ヒト抗−ＩＣＡＭ−１抗体から誘導されたものである抗原結合部位を有 している。

本発明はさらに、検出可能に標識（ラベル）された本発明のＨＡＭ及びＲＡＭを も提供する。

また、本発明は、本発明のＲＡＭ又はＨＡＭを発現できる組換えＤＮＡ分子をも 提供する。

本発明はさらに、本明細書に記載する組換えＤＮＡ分子によって形質転換した場 合に本発明のＨＡＭ又はＲＡＭを産生ずることのできる宿主細胞をも提供するも のである。

本発明はさらに、本発明のＨＡＭ及びＲＡＭにおける診断及び治療学的用途を提 供するものである。

本発明はまた、哺乳動物対象の特異的な防御系の応答に起因する炎症を処置する ための方法であって、このような処置が必要とされている被験者に炎症を抑制す るに十分な量の抗−炎症性物質を投与することを特徴とする方法を提供するもの である（ここに、当該抗−炎症性物質はＩＣＡＭ−１と結合できるモノクローナ ル抗体のＨＡＭ又はＲＡＭである）。

本発明はさらに、ヒト及び他の哺乳動物における非−特異的な炎症を処置するた めの方法を提供するものである。

より詳細に説明すれば、本発明は、哺乳動物対象の特異的な防御系及び非−特異 的な防御系の応答に起因する炎症を処置するための方法であって、このような処 置が必要とされている対象に炎症を抑制するに十分な量の、ＩＣＡＭ−１と結合 することのできる抗−炎症性物質を投与することを特徴とする方法を提供するも のである（ここに、当該抗−炎症性物質はＩＣＡＭ−１と結合できるＨＡＭ又は ＲＡＭである）。

本発明はさらに、成人呼吸困難症候群、敗血症から続発する多器官損傷症候群、 外傷から続発する多器官損傷症候群、心筋組織又は他の組織の再潅流損傷、急性 糸球体腎炎、反応性関節炎、急性炎症性成分を伴う皮膚病、急性化膿性髄膜炎又 は他の中枢神経系炎症性障害、熱傷、血液透析、白血球除去面輸血、潰瘍性大腸 炎、クローン病、壊死性全腸炎、顆粒球輸注関連症候群、及びサイトカイン誘発 性障害からなる群から選ばれる症状に伴う炎症を処！するための上記方法を提供 するものである。

また、本発明は、ＬＦＡ−１フアミリーの機能的構成要素を移動のために必要と する造血性腫瘍細胞の転移を抑制するための方法であって、このような処置を必 要としている患者に該転移を抑制するに充分な量の抗炎症物質を与えることを特 徴とし、該抗炎症物質がＩＣＡＭ−１と結合することのできるＨＡＭ又はＲＡＭ である方法を提供するものである。

本発明はさらに、ＩＣＡＭ−１を発現する腫瘍細胞の成長を抑制するための方法 であって、そのような処置を必要としている患者に該成長を抑制するに充分な量 の毒素を与えることを特徴とし、該毒素が本発明のＨＡＭ又はＲＡＭの１つをも たらすものである方法を提供するものである。

本発明はさらに、炎症を有する疑いのある哺乳動物対象の特異的な防御系の応答 に起因する炎症の存在及びその位置を診断するための方法であって、（ａ）　Ｉ Ｃ，ＡＭ−１を発現する細胞を同定できる検出可能に標識されたＲＡＭ又はＲＡ Ｍを含有する組成物を該対象に投与し、（ｂ）　得られた結合リガンドを検出す る、ことを特徴とする方法を提供するものである。

さらに本発明は、炎症を有する疑いのある哺乳動物対象の特異的な防御系の応答 に起因する炎症の存在及びその位置を診断するための方法であって、（ａ）ＩＣ ＡＭ−１を発現する細胞を同定できる検出可能に標識されたＲＡＭ又はＲＡＭを 含有する組成物と共に該対象の組織試料をインキュベートし、（ｂ）　得られた 結合リガンドを検出すること、を特徴とする方法を提供するものである。

本発明はまた、ＩＣＡＭ−１を発現する腫瘍細胞を有している疑いのある哺乳動 物対象におけるこのような細胞の存在及びその位置を診断するための方法であっ て、 （ａ）ＩＣＡＭ−１と結合できる検出可能に標識されたＨＡＭ又はＲＡＭを含有 する組成物を該対象に投与し、 （ｂ）　得られた結合リガンドを検出すること、を特徴とする方法を提供するも のである。

また、本発明はＩＣＡＭ−１を発現する腫瘍細胞を有している疑いのある哺乳動 物対象におけるこのような細胞の存在及びその位置を診断するための方法であっ て、 （ａ）　ＩＣＡＭ−１と結合できる検出可能に標識されたＲＡＭ又はＲＡＭを含 有する組成物と共に該対象の組織試料をインキュベートし、（ｂ）　得られた結 合リガンドを検出すること、を特徴とする方法を提供するものである。

そして、本発明は、 （ａ）ＩＣＡＭ−１と結合できるＲＡＭ又はＨＡＭから構成される抗炎症物質、 及び （ｂ）　デキサメサゾン、アザチオプリン、及びサイクロスポリンＡの中から選 ばれる少なくとも１つの免疫抑制物質 を含有する医薬組成物をも提供するものである。

本発明はさらに、ＩＣＡｌｖｉ−１と結合できるＲＡＭ及びＲＡＭの抗ウイルス 療法における用途に関する。

より詳細には、本発明は、ウィルス感染症を処置するための方法であって、この ような処！を必要としている個体にて該ウィルスがＩＣＡＭ−１と結合し、ウィ ルス感染症を抑制するに充分な量のＩＣＡＭ−１と結合できるＨＡＭ又はＲＡＭ を投与することを特徴とする方法に関する。

本発明はさらに、ＨＩＶによる白血球の感染を抑制するために方法であって、Ｉ ＣＡＭ−１と結合できるＲＡＭ又はＲＡＭであるＨＩＶ−１感染抑制物質の有効 量を、ＨＩＶに暴露され、又はＨＩＶの影響を受けている徹者に投与することを 特徴とする方法に関する。

本発明はさらにＨＩＶがＨＩＶ−１である上記の方法における１態様をも包含し ている。

また、本発明は、ウィルスに感染された白血球を有する患者における、そのよう な白血球の血管外移動を抑制するための方法であって、該白血球におけるＩＣＡ Ｍ−１と結合する能力を減じることのできるＲＡＭ又はＲＡＭの有効量を該患者 に投与することを特徴とする方法に関する。

本発明はまた、ウィルスにより感染された白血球がＨＩＶによって感染されてい る上記の方法の１態様をも包含している。

本発明はさらに、該物質がＩＣＡＭ−１と結合できるＨＡＭ又はＲＡＭである上 記方法の１態様も包含している。

そして、本発明は、ＩＣＡＭ−１と結合できるＨＡＭ又はＲＡＭの治療学的有効 量を喘息患者に投与することを特徴とする、患者の喘息を処置するための方法を も提供するものである。

本発明はまた、ＩＣＡＭ−１と結合できるＲＡＭ又はＲＡＭがネズミモノクロー ナル抗体Ｒ６−５−６Ｄである上記の方法の１態様にも関する。

図面の簡単な説明 以下に説明する第１図から第１７図の添付図面を参照して、ここに本発明を例示 のためにのみ説明する。

第１図は、Ｒ６−５−Ｄ６ネズミモノクローナル抗体の軽鎖に対応するアミノ酸 配列と共に、５゛非翻訳領域、シグナル配列、可変領域及び一部の定常領域を示 すものである。

第２図は、Ｒ６−５−Ｄ６ネズミモノクローナル抗体重鎮の類似しているｃＤＮ Ａ及びアミノ酸配列を示すものである。

第３図は、プラスミド発現ベクターＰＥＥ６　ｈＣＭＶのプラスミド図式を示す ものである。

第４図は、軽鎖発現プラスミドｐＡＬ５の構築方法を示すプラスミド図式を示す ものである。

箪５図は、重鎮発現プラスミドｐＡＬ６の構築方法を示すプラスミド図式を示す ものである。

第６図は、組換え及びネズミＲ６−５−Ｄ６及び対照モノクローナル抗体ＵＰＣ １０の結合からなる競合検定の結果を表すグラフを示すものである。

第７図は、移植遺伝子ｇＬ２２１及びｇＬ２２１Ａの軽鎖の可変領域のアミノ酸 を１文字コードを使用して表しているものである。下線はネズミ配列から誘導さ れたアミノ酸である。

第８図は、ｇＬ２２１構築物の可変領域遺伝子を組み立てるのに使用するオリゴ ヌクレオチド対を示している。

第９図は、ｇＬ２２１軽鎖を適当な真核生物宿主細胞において発現及び分泌させ ることのできる発現ベクターであるプラスミドｐＢＪ　１の構築方法の図式の概 略を示すものである。４０８ｂｐのＢｓｔＢＩ−３ｐｌ　Ｉ断片をｐＥ１０８１ の唯一のＢｓｔＢＩ及びＳｐｌ　１部位にクローンし、擬人化可変領域遺伝子が ヒトカッパ定常領域遺伝子と直接融合されている完全長鎖の遺伝子を生成させて いる。得られた軽鎖タンパク質は正しいＶ−Ｃ結合配列を有している。

第１０図は、ｇＬ２２１Ａ構築物をコードする可変領域遺伝子を組み立てるため に使用されるオリゴヌクレオチド対を示すものである。

第１１図は、ネズミ抗−ＩＣＡＭ−１抗体の重鎮、擬人化ｇＨ３４１、ｇＨ３４ １Ａ、ｇＨ３４１Ｂ及びｇＨ３４１Ｄ鎖の可変領域のアミノ酸を、ＥＵ重鎖可変 領領域列との比較のうえで１文字コードを使用して表しているものである。

ｇＨ３４１、ｇＨ３４１Ａ、ｇＨ３４１Ｂ及びｇＨ３４１Ｄでは、その遺伝子図 に包含される不ズミ配列に下線を施している。

第１２図は、ｇＨ３４１構築物をコードする可変領域遺伝子を組み立てるために 使用されるオリゴヌクレオチド対を示している。

第１３図は、単一のアミノ酸！換を導入するためにポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ Ｒ）を使用してｇＨ３４１Ｂ遺伝子を構築するための方法を概略示すものである 。

第１４図は、ｇＨ３４１Ｄ遺伝子を構築するために使用したＸｈｏ　Ｉ　−Ａａ ｐａ　１遺伝予断片を組み立てるために使用されるオリゴヌクレオチドを示して いる。

第１５図及び第１６図は、これらの図面中に記されている種々の遺伝子組合わせ 物を使用して新規な抗体を生産した際のＣＯ８細胞発現の結果を示している。

抗体の収量は、以下の方法の項にて説明しているＥＬＩＳＡによって計算し、そ れを使用して、ＪＹ細胞におけるＩＣＡＭ−１抗原に対するその抗体の結合性の 測定値について作図している。

箪１７図は、キメラ及びＣＤＲ−移植抗体を用いた競合結合検定の結果を示すも のである。

好ましい態様の簡単な説明 本発明の第１の態様は、抗ＩＣＡＭ−１抗体の重鎖および／または軽鎖可変領域 から誘導される抗原結合領域を含有するＲＡＭを提供する。

典型的な場合抗ＩＣＡＭ−１抗体は奮歯目ＭＡｂである。

本発明の第２の態様は、ＩＣＡＭ−１抗原に対する特異性を有し、少なくともそ の可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）がヒト以外（例：冨歯目）の抗ＩＣ ＡＭ−１抗体から誘導された抗原結合部位を有するＣＤＲ移植擬人化抗体分子（ ＨＡＭ）を提供する。典型的な場合ＨＡＭは組換えＤＮＡ技術によって調製され る。

本発明では、抗ＩＣＡＭ−１結合領域が典型的には少なくとも１つの抗ＩＣＡＭ −１抗体由来のＣＤＲを含有する。通富、この抗ＩＣＡＭ−１抗原結合領域が、 重鎮および／または軽鎖可変領域のそれぞれの少なくとも２つ、好ましくは３つ すべてのＣＤＲを含有する。これらのＣＤＲは、ｈｂａｔ　ＣＤＲ，構造ループ ＣＤＲおよびこれらのいかなる組み合わせからなってもよい。

本発明のＲＡＭはその特徴として、その抗原結合部位が望ましい抗原結合特異性 を有する抗体から誘導された完全な重鎖および／または軽鎖可変領域からなって いる擬人化キメラ抗体分子を包含しない。本発明のＨＡＭはその特徴としてＣＤ Ｒが移植された抗体（ＣＤＲ移植抗体）である。

本発明のＨＡＭは好ましくは同時係属国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９０１０２０１ ７　（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ　Ｌｉｍ１ｔｅｄ）に定義されるＣＤＲ移植抗体からな る。

軽鎖のＣＤＲが、ＣＤＲＩ（位置２４〜３４）およびＣＤＲ２（位置５０〜５６ ）においてＫａｂａｔ　ＣＤＲに対応し、（位！９１〜９６）中が構造ループ残 基もしくはＣＤＲ３中がＫａｂａｔ　ＣＤＲ残基（位置８９〜９７）に対応する ことが好ましい。さらに、軽鎖がマウスの残基を位置１．２および／または３． ４６．４７．４９．６０．７０．８４．８５および８７のうちの１以上に有して もよく、好ましくは少なくとも位置４６および４７にヒト以外の残基を有する。

ＨＡＭ重鎮がヒト以外（例：マウス）の残基を位！２３および／または２４およ び７１および／または７３に有することが好ましい。さらに、重鎖が位置４８お よび／または４９．６９．７６および／または７８．８０．８８および／または ９１および６のうちの１またはいくつかまたはすべての位置にヒト以外の残基を 有してもよい。また、例えば使用するヒト可変領域フレームワークがＫＯＬであ る場合には、重鎖のＣＤＲが、ＣＤＲ２（位置５０−６．５）においてＫａｂａ ｔ　ＣＤＲ１ＣＤＲ３（位置９５〜１００）において構造ルーフ残基、およびｃ ＤＲｌ（位置２４〜３５）においてＫａｂａｔＣＤＲと構造ループ残基の両方の 混成体に対応することも好ましい。あるいは、例えば使用するヒト可変領域フレ ームワークがＥＵである場合には、重鎮のＣＤＲが、ＣＤＲ１については位置２ ６がら３５まで、ＣＤＲ２については位置５０から５６まで、ＣＤＲ３について は位置９４がら１００までがヒト以外（例：マウス）の残基からなってもよい。

さらにＥＵは残基１０３から１１３までの間にとりわけ特異賀のＪ領域を有して おり、ネズミのアミノ酸または共通（コンセンサス）ヒトＪ領域もしくは両者の 適当な組み合わせを残基１０３から１０８まで（両端を含む）に含ませることも 有効であり得る。

上の記述および本明細書の他の記述では、Ｋａｂａｔの番号付与法（Ｋａｂａｔ ら、　”５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍａ＋ｕｎｏ ｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”、米国保険社会福祉省、　ＮＩＢ（１９８ V） 、Ｗｕら、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１３２：２１１−２５０（１９７０） ）に従って残基名に番号を付与する。したがってこれらの残基名が常にアミノ酸 残基の一次的な番号付けに直接対応するわけではない。実際の一次的アミノ酸配 列は、フレームワークであるかＣＤＲであるかにかかわらず基本的な可変領域構 造の構造成分の短縮もしくは該構造成分への挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔ 番号化の場合よりも少ないかあるいは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、Ｑ ｕｅｅｎら（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８６： １００２９−１００３３（１９８９）およびＷ０９０１０７８６１）によって記 述された抗Ｔａｃ抗体の重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔの番号付与法でＣＤＲ２の 残基５２の後ろに１つのアミノ酸挿入物（残基５２ａ）を含有し、フレームワー ク残基８２の後ろに３つのアミノ酸挿入物（残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃ） を含有する。与えられた抗体に関する残基の正しいＫａｂａｔ番号付与は、その 抗体の配列の相同領域をＫａｂａｔ番号を付与された“標準的な”配列と共に並 べることによって決定できる。

本発明のＲＡＭおよびＨＡＭは、全長重鎮および軽鎖を有する完全な抗体分子、 その断片（Ｆａｂまたは（Ｆ　ａ　ｂ’）２断片など）、軽鎖または重鎮単量体 または二量体、もしくは単一鎖抗体（例・重鎖および軽鎖可変領域がペプチドリ ンカ−によって連結されている単一鎖ＦＶ）、もしくは原型の供与抗体と同じ特 異性を有するあらゆる他の組換えまたはＣＤＲ移植分子からなり得る。さらに、 ＣＤＲ移植重鎖および軽鎖可変領域を他の抗体ドメインと適当に組み合わせるこ ともできる。

ＲＡＭまたはＨＡＭの残りの免疫グロブリン誘導部分を、適当なヒト免疫グロブ リンから誘導することができる。抗原結合領域の起源となる供与抗体のクラス／ タイプを考慮して、適当な可変領域フレームワーク配列を使用することができる 。使用するヒトフレームワークのタイプが供与抗体と同じ／類似のクラス／タイ プのものであることが好ましい。供与抗体配列との相同性をとりわけＣＤＲに近 接あるいは隣接する位置で最大化／最適化するようにフレームワークを選択する ことが有利である。ＣＤＲ移植ＲＡＭを構築するために使用し得るヒトフレーム ワークの例はＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ　ＥＵ、ＬＡＹおよびＰＯＭ（Ｋａｂａ ｔら。

”５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉ ｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”、米国保険社会福祉省、ＮＩＨ（１９８７）　：　 ｆｕら、　Ｊ、　Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１３２：２１１−２５０（１９７０））な どであり、例えば重鎮についてはＫＯＬおよびＮＥＷＭ、軽鎖についてはＲＥＩ 、重鎮および軽鎖の両方についてＥＵ、ＬＡＹおよびＰＯＭである。

また、その抗体の意図する機能、具体的には要求され得るエフェクター機能を考 慮して、ＲＡＭのヒト定常領域ドメインを選択することができる。例えば、この 定常領域ドメインはヒトのＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたは１ｇＭドメインであり 得る。具体的には、そのＨＡＭが治療的目的を有し抗体エフェクター機能を必要 とする場合には、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３イソタイプのＩｇＧヒト定常領域 ドメインを使用することができる。あるいは、そのＨＡＭが治療的目的を有し抗 体エフェクター機能を必要としない場合、例えば単にＩＣＡＭ−１／ＬＦＡ−１ 相互作用を遮断するためのものである場合には、１ｇＧ２およびＩ　ｇＧ４イソ タイブを使用することができる。擬人化抗ＩＣＡＭ−１抗体の場合、ＩｇＧ１イ ソタイプの選択によって最も高活性の結合がもたらされることが示された（本願 と同日出願の本出願人の同時係属国際特許出願（擬人化キメラ抗ＩＣＡＭ−１抗 体に関する出願）を参照のこと）。

ＨＡＭの残りの部分がヒト免疫グロブリン由来のタンパク質配列のみからなる必 要はない。例えば、ヒト免疫グロブリン鎖の一部をコード化するＤＮＡ配列がポ リペプチドエフェクターまたはリポータ−分子のアミノ酸配列をコード化するＤ ＮＡ配列に融合している遺伝子を構築することができる。

別法として、本発明のＲＡＭまたはＲＡＭはＲＡＭまたはＨＡＭの“化学的誘導 体”であってもよい。本明細書では、ある分子が通常はその分子の一部でない追 加の化学的部分を含有する場合に、その分子を別の分子の“化学的誘導体“であ るという。そのような部分はその分子の溶解度、吸収性、生物学的半減期などを 改善し得る。あるいは、これらの部分がその分子の毒性を減少させたり、その分 子の望ましくないなんらかの副作用を除去または緩和することなどもあろう。こ のような効果を媒介することができる部分は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’　ｓ　Ｐｈ ａｒａ＋ａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）に開示されている 。“毒素誘導体化（毒素で誘導体化された）”分子は“化学的誘導体”の特殊な 一部を構成する。“毒素誘導体化“分子とは毒素部分を含有する分子（ＩＣＡＭ −１または抗体など）をいう。細胞に対するこのような分子の結合は細胞のごく 近傍中にその毒素部分を運搬し、それによって細胞の死滅を促進する。適当な毒 素部分はいずれも使用できるが、例えばリシン毒素、ジフテリア毒素、放射性同 位体性毒素、膜チャンネル形成性毒素などを使用することが好ましい。このよう な部分を分子に結合させる方法は当該技術分野でよ（知られている。あるいは重 金属原子をキレートするために、ＲＡＭまたはＲＡＭを大環状分子に結合させる こともできる。

あるいは、組換えＤＮＡ技術の手法を用いることにより、完全な抗体分子のＦＣ 断片またはＣＨ３ドメインが酵素または毒素分子などの機能的非免疫グロブリン タンパク質で１換されているか、あるいは該機能的非免疫グロブリンタンパク質 にペプチド結合で結合しているＲＡＭまたはＨＡＭの“化学的誘導体”を作成す ることもできる。

また本発明は本発明のＨＡＭを製造するための組換えＤＮＡ法２も提供する。

本発明の第３の態様として、抗ＩＣ，ＡＭ−１擬人化抗体分子を生産する方法で あって、 （ａ）その可変領域ドメインのＣＤＲの少なくとも１以上がヒト以外（１＆歯目 ）の抗ＩＣＡＭ−１抗体から誘導されており、かつ、その抗体鎖の残りの免疫グ ロブリン誘導部分がヒト免疫グロブリンから誘導されている抗体重鎮または軽鎖 をコード化するＤＮＡ配列を有するオペロンを発現ベクター中に作成し、（ｂ） その可変領域ドメインのＣＤＨの少なくとも１以上がヒト以外（１！歯目）の抗 ＩＣＡＭ−１抗体から誘導されており、かつ、その抗体鎖の残りの免疫グロブリ ン誘導部分がヒト免疫グロブリンから誘導されている相補的抗体軽鎖または重鎖 をコード化するＤＮＡ配列を有するオペロンを発現ベクター中に作成し、（Ｃ） 宿主細胞をそのまたはそれぞれのベクターでトランスフェクションし、（ｄ）ト ランスフェクションされた細胞系を培養することによりＲＡＭを生産する、 ことからなる方法を提供する。

本発明の第２の態様の好ましい態様に関して上述したように、ＣＤＲに加えて、 特定の可変領域フレームワーク残基がヒト以外（例：マウス）の残基に対応して もよい。しかし本発明のこの態様が、前記の態様と同様に、キメラ抗体（即ち、 本質的に全重鎖および／または軽鎖可変ドメインがヒト以外（薔歯目）の抗ＩＣ ＡＭ−１抗体から誘導される抗体）の生産法を包含しないことは理解されるであ ろう。

細胞系を２つのベクター、即ち、軽鎖由来のポリペプチドをコード化するオペロ ンを含有する第１のベクターおよび重鎮由来のポリペプチドをフード化するオペ ロンを含有する第２のベクターでトランスフェクションすることができる。各ポ リペプチド鎖が同等に発現されることを可能なかぎり保証するべく、コード化配 列と選択可能なマーカーが関与する範囲を除いてこれらのベクターが同一である ことが好ましい。

別法として、軽鎖および重鎮由来のポリペプチドの両方をコード化するＤＮＡ配 列を含有する単一のベクターを用いることもできる。

軽鎖及び重鎮のためのコード化配列中のＤＮＡはｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ又は その両者からなり得る。しかし、重鎮又は軽鎖をコード化するＤＮＡ配列が少な くとも部分的にはゲノムＤＮＡからなることが好ましい。最も好ましくは、重鎮 または軽鎖をコード化する配列がｃＤＮＡとゲノムＤＮＡの融合物からなる。

したがって本発明は、本発明の方法で使用するクローニングおよび発現ベクター ならびにトランスフェクションされた細胞系をも包含する。

これらのベクターを構築するために使用できる一般的方法、トランスフェクショ ン法および培養法はそれ自体はよく知られており、本発明の一部を形成するもの ではない。そのような方法は例えばＭａｎｉａｔｉｓら、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ 　Ｃｌｏｎｉｎｇ、　Ｃｏ１ｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒ ｋ（１９８２）やＰｒｉｍｒｏｓｅおよびＯｌｄ、　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏ ｆ　Ｇｅｎｅ　Ｍａｎｉｐ浮撃≠狽堰B ｎ、　Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、　０ｘｆｏｒｄ（１９８０）などに示されている。

本発明の抗ＩＣＡＭ−１抗体群はすべての抗ＩＣＡＭ−１特異性を包含する。し かし典型的には、本抗体は、抗体が結合した時にＩＣＡＭ−１／ＬＦＡ−１およ び／またはＩＣ，ＡＭ−１／Ｍａｃ−１相互作用を遮断、阻害、もしくは他の様 式で修飾するＩＣＡＭ−１の抗原性エピトープに関する特異性を有する。本抗体 がＲ６−５−Ｄ６などの抗体と同じかあるいは類似するＩＣＡＭ−１抗原性エピ トープに関する特異性を持つことが好ましい。最も具体的には、本抗体をＲ６− ５−Ｄ６抗体から誘導する。

Ｂ　治療および診断 本発明は、本発明のＲＡＭまたはＨＡＭを含有する治療用および診断用組成物な らびに治療および診断におけるそのような組成物の使用をも包含する。本発明の 抗ＩＣＡＭ−１の製品の治療的用途は、Ｅ　Ｐ−０２８９９４９、Ｅ　Ｐ−０３ １４８６３および対応する出願に記載された治療的用途のいずれかまたはすべて を含めて、抗ＩＣＡＭ−１抗体のあらゆる治療的用途を包含する。

１　抗炎症剤 ＣＤ１８またはＣＤ−１１／１８錯体群の構成要素に対するモノクローナル抗体 は、内皮への結合（Ｈａｓｋａｒｄ、　Ｄ、　、ら、　Ｊ、　ＩＩＩｌｍｕｎｏ ｌ、　１３７：２９０１−２９０６（１９８６））、同型■ 着（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，ら、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１６３：１１ ３２−１１４９（１９８６））、リンパ球の抗原およびミトゲン誘発性増殖（Ｄ ａｖｉｇｎｏｎ、　Ｄ、ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、 　、　ＵＳＡ　７８　：　４５３５−S５３９（１９８１） ）、抗体形成（Ｆｉｓｃｈｅｒ、　Ａ、ら、　Ｊ、　Ｉｍ＋ａｕｎｏ１．１３６ ：３１９８−３２０３（１９８６））、およびすべての白血球のエフェクター機 能（マクロファーン（Ｓｔａｒａｓｓｍａｎ、　Ｇ、ら、　Ｊ丁ａ＋ｍｕｎｏ１ ．１３６：４３２８−４３３３（１９８６））、抗体依存性細胞性細胞障害反応 に関与するすべての細胞（Ｋｏｈｌ。

Ｓ、ら、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１３３：２９７２−２９７８（１９８４） ）および細胞障害性Ｔ細胞（Ｋｒｅｎｓｋｙ、４１Ｍ、ら。

Ｊ、　ＩＩＩｌｍｕｎｏｌ、　１３２：２１８０−２１８２（１９８４））の溶 解活性など）を含む、白血球の多くの接着依存性機能を阻害する。上記の機能の すべてにおいて、抗体は、適当な細胞基質に接着するという白血球の能力を阻害 し、これが続いてその最終的な結果を阻害する。これらの機能を阻害するために はポリクローナル抗体とモノクローナル抗体のどちらを使用することもできるが 、本発明は抗ＩＣＡＭ−１モノクローナル抗体から誘導したＲＡＭまたはＲＡＭ を使用することによる改善を提供する。

上述のように、ＬＦＡ−１分子ファミリーの構成要素に対するＩＣＡＭ−１分子 の結合は細胞接着において中心的な重要性を有する。この接着過程を介して、リ ンパ球は外来性抗原の存在に関して動物を連続的に監視することができる。これ らの過程は通常は望ましいものであるが、器官移植拒絶、組織移植拒絶および多 くの自己免疫疾患の原因でもある。したがって、細胞接着を緩和または阻害する ことができるなんらかの手段が器官移植体（例：腎臓）または組織移植体の受容 者あるいは自己免疫患者において高度に望ましいであろう。

ＩＣＡＭ−１を結合することができるＨＡＭまたはＲＡＭは哺乳動物対象（＝お ける抗炎症剤として高度に適している。このような薬剤は、接着を選択的に阻害 することができ、従来の薬剤の場合に認められる腎障害性などの他の副作用を示 さず、ネズミＭＡｂの使用に伴うＴ（ＡＭＡの量を制限する点で、一般的な抗炎 症剤および非擬人化抗体とは異なるということに意義がある。したがって、ＩＣ ＡＭ−１に結合することができるＨＡＭまたはＲＡＭを、哺乳動物対象中でその ような副作用の恐れを伴わずに自己免疫応答を変化させるため、あるいは器官（ 例・腎臓）または組織拒絶を防止するために使用することができる。

ＩＣＡＭ−１を認識することができるＲＡＭまたはＲＡＭの使用によって、Ｈｌ 、Ａ不適合を有する個体間でさえ器官移植を行うことが可能になり得ることは重 要である。

本発明の第４の態様として、特異外炎を抑制する方法であって、そのような治療 を必要とする受容対象に炎症を抑制するに足る量の本発明のＨＡＭまたはＲＡＭ を与えることからなる方法を提供する。薬剤の投与量、投与経路などが炎症を緩 和または防止するに十分である場合、その量を、炎症を”抑制“するに足るとい う。

ＲＡ　ＭまたはＲＡＭを単独で投与してもよいし、あるいは１以上の追加の免疫 抑制剤と組み合わせて（特に器官または組織移植体の受容者に対して）投与する こともできる。このような組成物の投与は“予防的”にも“治療的“にも行うこ とができる。予防的に投与する場合、あらゆる炎症性応答または症状に先駆けて （例えば器官または組織移植の前に、あるいはその移植時に、あるいはその移植 ｌ！［後に、ただし器官拒絶のなんらかの症状が現れる前に）、本免疫抑制組成 物を投与する。

本組成物の予防的投与はそれ以降のあらゆる炎症性応答（例えば移植された器官 または組織の拒絶など）を防止または減弱化するのに役立つ。治療的に投与する 場合、実際の炎症の症状（例えば器官または組織拒絶など）が発生した時（また はその直後）に本免疫抑制組成物を投与する。本組成物の治療的投与はあらゆる 間際の炎症（例えば移植された器官または組織の拒絶など）を減弱化するのに役 立つ。

このように、本発明の抗炎症剤を、炎症の発生に先立って（予期される炎症を抑 制するべく）、あるいは炎症の開始後に投与することができる。

ＩＣＡＭ−１分子は主として炎症の部位（遅延型過敏反応に関与する部位など） で発現するので、ＩＣＡＭ−１分子に結合することができる抗体（特に抗ＩＣＡ Ｍ−１モノクローナル抗体から誘導したＨＡＭおよびＲＡＭ）はそのような反応 の緩和または除去に関して治療的潜在能力を有する。この潜在的な治療的使用を ２つの方法のいずれかで探査することができる。第１に、ＩＣＡＭ−１に結合す ることができるＨＡＭまたはＲＡＭを含有する組成物を遅延型過敏反応を体験し ている患者に投与することができる。例えばそのような組成物をウシ／（ｐｏｉ ｓｏｎ　ｉｖｙ。

ｐｏｉｓｏｎ　ｏａｋ）などの抗原と接触した個体に与え得るであろう。

第６の態様として、それ以降の炎症性反応を防止するために、本発明のＨＡＭま たはＲＡＭを抗原と共に患者に投与する。このようにＩＣＡＭ−１結合性ＲＡＭ またはＲＡＭと共に抗原を追加投与することによって、個体をそれ以降の抗原提 供に対して一時的に寛容化することができる。

ＬＦＡ−１を欠＜ＬＡＤ患者は炎症性応答を開始しないので、ＬＦＡ−１の天然 のリガンドであるＩＣＡＭ−１の拮抗作用も炎症性応答を阻害するであろうと考 えられる。ＩＣＡＭ−１に対する抗体の炎症を阻害するという能力が、紅斑性狼 癒、自己免疫甲状腺炎、経験的アレルギー外扇を髄炎（ｅｘｐｅｒｉ＋５ｅｎｔ ａｌ　ａｌｌｅｒｇｉｃ　ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ；　Ｅ　Ａ　Ｅ 　）、多発性硬化症、糖尿病レノ−（Ｒｅｙｎａｕｄ’　ｓ）症候群のいくつか の形態、リウマトイド関節炎などの自己免疫疾患および慢性の炎症性疾患の治療 におけるそれらの治療的使用の根拠を提供する。このような抗体を乾癖治療にお ける治療法としても使用することができる。一般に、現在ステロイド療法で治療 することができる疾患の治療に、ＩＣＡＭ−１を結合することができるＨＡＭま たはＲＡＭを使用することができる。

Ｂ、非特異性炎症 本発明は、顆粒球−内皮細胞接着を媒介する原因である顆粒球上のＣＤ１８分子 ファミリーの構成要素に内皮細胞上のＩＣＡＭ−１が結合し、ＩＣＡＭ−１の拮 抗剤がこのような接着を阻害することができるという発見から導かれる。このよ うな阻害は一般的な非特異性組織炎症を治療する手段を提供する。

白血球が非特異性炎症の部位に移動し、および／または、白血球が炎症に寄与す る種々のエフェクター機能を成し遂げるためには細胞接着が必要であるので、細 胞接着を阻害する物質はこの炎症を緩和もしくは防止するであろう。゛非特異性 防御系反応”は、免疫記憶が不能な白血球によって媒介される応答である。この ような細胞には顆粒球やマクロファー、か含まれる。本明細書では、炎症が非特 異性防御系の反応によって引き起こされるか、または媒介されるか、あるいは非 特異性防御系の反応に関連する場合に、その炎症が非特異性防御系の応答に起因 するという。少なくとも部分的に非特異性防御系の反応に起因する炎症の例には 、敗血症または外傷から派生する多器官損傷症候群あるいは成人呼吸障害症候群 （、八ＲＤＳ）、心筋または他の組織の再潅流損傷、急性糸球体腎炎、反応性関 節炎、急性炎症性成分を伴う皮膚病、急性化膿性髄膜炎または他の中枢神経系炎 症性障害（例　発作）、熱傷、血液透析、白血球除去面輸血、潰瘍性大腸炎、ク ローン病、壊死性全腸炎、顆粒球輸注関連症候群、およびサイトカイン誘発性障 害などの状態に伴う炎症が含まれる。

本発明の第５の態様として、非特異性炎症の治療法であって、そのような治療を 必要とする対象に本発明のＨＡＭまたはＲＡＭの有効量を与えることからなる方 法が提供される。

２　診断的応用および予後的応用 ＩＣＡＭ−１は主として炎症の部位に発現するので、患者における感染および炎 症の部位を画像化または可視化する手段として、ＩＣＡＭ−１を結合することが できるＲＡＭまたはＲＡＭを使用することができる。

本発明の第８の態様として、放射性同位体、アフィニティーラベル（ビオチン、 アビシンなど）、蛍光性ラベル、常磁性原子などを利用してＲＡＭまたはＲＡＭ を検出できるようにラベルし、これを患者に与えることによって感染または炎症 の部位を特定する。このようなラベル化を行う方法は当該技術分野でよく知られ ている。診断的画像化における抗体の臨床的応用については、Ｇｒｏｓｓｍａｎ 、　Ｈ，Ｂ、　、　Ｕｒｏｌ、　Ｃ１１ｎ、　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒ、　１３： ４６５−４７４（１９８６）、ｌｉｎｇｅｒ、　Ｅ、　Ｃ，ら、　Ｉｎｖｅｓｔ 、　qａｄｉｏｌ、　２０：６９３−７ ００（１９８５）、およびＫｈａｗ、　Ｂ、　Ａ、ら、５ｃｉｅｎｃｅ　２０９ ：２９５−２９７（１９８０）に要約されている。

検出可能にラベルされたこのような抗体の集中点の検出は炎症または腫瘍発生の 部位を示す。一つの態様として、組織（血液細胞を含む）の試料を摘出し、その ような試料を検出可能にラベルした抗体の存在下でインキュベートすることによ り、炎症に関するこの試験を行う。好ましい態様として、磁気画像化、蛍光間接 撮影法などを利用して非侵入的な方法でこの技術を行う。器官移植体受容者を潜 在的な組織拒絶の初期兆候について監視する際にこのような診断的試験を使用す ることができる。またリウマトイド関節炎または池の慢性炎症性疾患に対する個 体の先人的性向を決定するための努力としてこのような検定を行うこともできる 。

３、治療的または診断的目的をもって投与される抗原性物質の導入の補助例えば ウシインシュリン、インターフェロン、組織型プラスミノーゲン活性化因子ある いはネズミのモノクローナル抗体などの治療用薬剤または診断用薬剤に対する免 疫応答はこのような薬剤の治療的または診断的価値を著しく損ない、実際に、血 清病などの疾患を引き起こし得る。本発明のＨＡＭおよびＲＡＭを使用すること によってこのような状況を改善することができる。この態様では、これらの抗体 を治療用または診断用薬剤と組み合わせて投与するであろう。

本発明の第９の態様として、受容者による上記薬剤の認識を防止し、したがって その受容者によるその薬剤に対する免疫応答の開始を防止するために、ＩＣＡＭ −１に対する特異性を有するＨＡＭまたはＲＡＭの有効量を対象に追加投与する 。このような免疫応答の欠失ゆえに、患者は治療用または診断用薬剤の追加投与 を受け入れることができるようになる。

４、ＨＡＭおよびＲＡＭの抗ウイルス的用法本発明のもう１つの側面は、ＩＣＡ Ｍ−１がいくつかのウィルスの細胞受容体であり、したがって、ウィルスがヒト 細胞に接着し感染するためにはＩＣＡＭ−１が必要であるという発見（Ｇｒｅｖ ｅ、　Ｊ、　Ｍ、ら、Ｃｅ１１５６：８３９−８４７（１９８９）　；　５ｔａ ｕｎｔｏｎ、　Ｄ。

Ｅ、ら、Ｃｅ１１５６：８４９−８５３（１９８９）　；両文献は完全に本明細 書の一部ヲ構成スル）。具体的には、ライノウィルス、特に主要血清型のライノ ウィルスが、細胞表面に存在するＩＣＡＭ−１分子に結合するというそれらの能 力を介してそれらの感染を媒介し得ることがわかった。

本発明の第１０の嬰↑引；ｚ、Ｉ　ＣＡＭ−１を結合することができるＨＡＭお よびＲ、Ａ　Ｍ　ｌウィルス感染を治療１゛るために使用することに関する。こ のような抗体はつ１′ルスの付薔に関して内皮細胞のＩＣＡ〜ト１を遮断するこ とができるので、受容個体に対するそれらの投与は、ウィルスのｇ名に利用でき るレセプターの減少をもたらし、それゆえに個体の細胞に付着してれに感染する ウィルスの率を減少させる。

ＩＣＡＭ−１はウィルス（具体的にはピコルナビリダニ層内の主要血清型のライ ノウィルス、グループＡコクサソキーウイルス（Ｃｏｌｏｎｎｏ、　Ｒ，Ｊ、ら 、　Ｊ、　ｖｉｒｏｌ、　５７：７−１２（１９８６））およびメンボウイル７ ．　（Ｒｏｓｓｍａｎｎ、　Ｍ、　Ｇ、ら、　Ｖｉｒｏｌ、　１６４　：３７３ −３８２（１９８８j））と 相互作用しこれに結合する能力を有する。この相互作用は、ＩＣＡＭ−１分子の ドメイン１中に存在するＩＣＡＭ−１アミノ酸残基によって媒介される。しかし 、このような相互作用はＩＣＡＭ−１のドメイン２および３中に存在するアミノ 酸の寄与による援助を受ける。したがってこの態様の好ましいＲＡＭおよびＨＡ Ｍには、ＩＣＡＭ−１のドメイン１．２、および３に結合することができる抗体 が含まれる。より好ましいものは、ＩＣＡＭ−１のドメイン１および２に結合す ることができるＨＡＭおよびＲＡＭである。最も好ましいものはＩＣＡＭ−１の ドメイン１を結合することができるＨＡＭおよびＲＡＭである。

本発明の抗ウィルス剤の投与は“予防的”にも“治療的”にも行うことができる 。

予防的に投与する場合、あらゆるウィルス感染の症状に先駆けて（例えば感染前 に、あるいは感染時に、あるいは感染直後に、ただしそのような感染のなんらか の症状が現れる前に）本抗ウィルス剤を投与する。水剤の予防的投与はそれ以降 のあらゆるウィルス感染を防止または減弱化するのに役立ち、あるいはそのよう な感染が他者に対して伝染性になる可能性を減少させるのに役立つ。

治療的に投与する場合、実際のウィルス感染の症状（例えば鼻の充血、熱など） が発生した時（またはその直後）に本抗ウィルス剤を投与する。水剤の治療的投 与はあらゆる実際のウィルス感染を減弱化するのに役立つ。

このように、ウィルス感染の発症に先立って（予期される感染を抑制するべく） 、あるいはそのような感染の開始後に本発明の抗ウィルス剤を投与゛４る、：と ができ本発明の第１１の態様は、ＨＩＶに叙染い−，ｅ体にＨＩ　Ｖ感染抑制剤 の有効ｉを投与することからなるＨＩＶの感染を抑制する方法を提供する。本発 明は具体的にはＨＩＶ−１感染の抑制法に関するが、本発明の薬剤によって抑制 され得る方法で細胞に感染し得るいかなるＨＩＩＩ変種（例えばＨＩＶ−２など ）にも末法を適用し得ることは理解されるべきである。このような変種は本発明 の目的にとってはＨＩｖ−１と等価である 本発明の一側面は、ＨＩＶ感染によって刺激されたＬＦＡ−１および場合によっ てＩＣＡＭ−１の発現が、感染細胞と未感染細胞との接触時間を増大させること ができ感染細胞から未感染細胞へのウィルスの転移を容易にする細胞−細胞接着 反応を促進するという認識から導かれる。したがって、ＩＣＡＭ−１を結合する ことができるものから誘導されたＨＡＭおよびＲＡＭはＨＩＶによる感染、具体 的にはＨＩＶ−１による感染を抑制することができる。

ＩＣＡＭ−１に結合する分子がＨＩＶ感染を抑制する際に利用する一手段は、Ｈ ＩＶ感染細胞カ発現；ｌたＩＣＡＭ−１の健康なＴ細胞のＣＤＩＩ／ＣＤ１８レ セプターに結合するという能力を損なうことによるものである。ＣＤ１１ａ／Ｃ Ｄ１８レセプターまたはＩＣＡＭ−１リガンド分子に結合するという細胞の能力 を損なうために、ＩＣＡＭ−１に結合することができるＲＡＭおよびＲＡＭを使 用することができる。

本発明の薬剤はＨＩＶ感染の抑制を達成するに足る量で受容対象に与えられるで あろう。薬剤の投与量、投与経路などがＨＩＶ感染を減弱化または防止するに十 分である場合、その量を、ＨＩＶ感染を“抑制”するに足るという。本薬剤はＨ ＩＶ感染にさらされる患者またはＨＩＶ感染が起こった患者に投与されるべきで ある。

本発明のＨＡＭおよびＲＡＭは、ＨＩＶ感染の治療に際して“予防的”目的にも “治療的“目的にも使用し得る。予防的に投与する場合、ウィルス感染のあらゆ る症状に先駆けて（例えばそのような感染の時点に先立って、またはその感染時 に、あるいはその感染直後に、ただしそのような感染のなんらかの症状が現れる 前に）本抗体を投与する。本抗体の予防的投与はそれ以降のあらゆるＨＩＶ感染 を防止または減弱化するのに役立つ。治療的に投与する場合、ウィルスに感染し た細胞の検出時（またはその［！後）に本抗体を投与する。本抗体の治療的投与 はあらゆるさらなるＨＩＶ感染を減弱化するのに役立つ。

このように、ウィルス感染の発症に先立って（予期されるＨＩＶ感染を抑制する べく）、あるいはそのようなウィルス感染細胞を実際に検出した後に（さらなる 感染を抑制するべく）本発明の薬剤を投与することができる。

具体的には、本発明は、改善されたＡＩＤＳ治療法および強化されたＨＩＶ感染 （具体的にはＨＩＶ−１感染）抑制手段であって、（ＩＮＣＡＭ−１、可溶性Ｉ ＣＡＭ−１誘導体、ＣＤ１１（ＣＤＩｌａ、ＣＤｌ１ｂまたはＣＤｌＩＣのいず れか）、可溶性ＣＤ１１誘導体、ＣＤ１８、可溶性ＣＤ１８誘導体、またはＣＤ ＩＩ／ＣＤ１８へテロニ量体、またはＣＤＩＩ／ＣＤ１８へテロニ量体の可溶性 誘導体、および／または、（ＩＩ）　Ｉ　ＣＡＭ−１に結合することができるＨ ＡＭまたはＲＡＭ、を、（ＩＩＩ）細胞または粒子に結合したＣＤ４またはＣＤ ４の可溶性誘導体、および／または、 （ＩＶ）　ＣＤ　４に結合することができる分子（好ましくは抗体または抗体断 片）、と共に同時投与することからなる方法または手段を提供する。

本発明の第１２の態様として、ＨＩＶに感染した個体に抗移動剤の有効量を投与 することからなるＨＩＶ感染細胞の移動を抑制する方法をも提供する。

本発明の抗移動剤には、ＨＩＶに感染したＴ細胞のＩＣＡＭ−１に結合するとい う能力を損なうことができるあらゆるＲＡＭまたはＲＡＭが含まれる。ＩＣ，Ａ Ｍ−１に結合するＨＡＭおよびＲＡＭは、ＨＩＶ感染Ｔ細胞が発現させるＩＣＡ Ｍ−１の、ＣＤＩＩ／ＣＤ１８レセプターを発現させている細胞に結合するとい う能力を損なうことによって移動を抑制するであろう。ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８レ セプターに結合するという細胞の能力を損なうために、ＩＣＡＭ−１に結合する ことができるＲＡＭまたはＲＡＭを使用することができる。

本発明の薬剤はＨＩＶ（または他のウィルス）に感染したＴ細胞の移動を抑制す るに足る量で受容対象に与えられるであろう。薬剤の投与量、投与経路などがそ のような移動を減弱化もしくは防止するに十分である場合、その量を、Ｔ細胞の 移動を“抑制する”に足るという。

このような化合物は“予防的”にも“治療的“にも投与することができる。予防 的に投与する場合、ウィルス感染のあらゆる症状に先駆けて（例えばそのような 感染に先立って、またはそのような感染時に、あるいはそのような感染の直後に 、ただしそのような感染のなんらかの症状が現れる前に）ＲＡＭまたはＲＡＭを 投与する。ＨＡＭまたはＲＡＭの予防的投与は、それ以降のウィルス感染Ｔ細胞 の移動を防止または減弱化するのに役立つ。治療的に投与する場合、ウィルスに 感染したＴ細胞の検出時（またはその直後）にＨＡＭまたはＲＡＭを投与する。

この抗体の治療的投与はそのようなＴ細胞のさらなる移動を減弱化するのに役立 つ。

このように、ウィルス感染の発生に先立って（感染したＴ細胞の予期される移動 を抑制するべ（）、あるいはこのようなウィルス感染細胞を実際に検出した後に 本発明のＲＡＭおよびＲＡＭを投与することができる。

６、喘息の治療 本発明の第１３の態様として、ＩＣＡＭ−１に結合することができるＲＡＭおよ びＲＡＭを喘息の治療に用いる。

本発明の抗喘息剤の治療的効果は、このような薬剤を適当な手段（即ち、静脈内 投与、筋肉的投与、皮下投与、経腸投与、または非経口投与）のいずれかで患者 に与えることによって得ることができる。本発明の薬剤を鼻孔スプレー剤、綿棒 などによって鼻孔内に投与することが好ましい。このような薬剤を経口吸入か、 あるいは経口スプレー剤または経口エアゾル剤を介して投与することが特に好ま しい。薬剤を注射によって投与する場合、投与を連続的注入で行ってもよいし、 あるいは単一または複数のポーラス投与で行ってもよい。

本発明の抗喘息剤は、喘息症状の型温度、程度または持続時間を減少または減弱 化させるに足る量で受容対象に与えられるであろう。

本発明のＨＡＭおよびＲＡＭを単独で投与するか、あるいは喘息症状の治療に必 要な下記のような他の抗喘息剤の量を減らすために、１以上の追加の抗喘息剤（ 例えばメチルキサンチン類（テオフィリンなど）、β−アドレナリン作用性作用 薬（カテコールアミン類、レゾルチノール類、ケリゲニン類、およびエフェドリ ンなど）、グルココルチコイド類（ヒドロコルチゾンなど）、クロモン類（クロ モリンナトリウムなど）および抗コリン作用剤（アトロビンなど））と組み合わ せて投与することができる。

本発明のＨＡＭまたはＲＡＭは“予防的”にも“治療的”にも投与できる。予防 的に投与する場合、あらゆる喘息症状に先駆けてＲＡＭまたはＲＡＭを投与する 。

ＲＡＭまたはＲＡＭの予防的投与は、それ以降のあらゆる喘息応答を防止または 減弱化するのに役立つ。治療的に投与する場合、喘息の症状の発生時（またはそ の直後）ｌ：、ＨＡＭまたはＲＡＭを投与する。この抗体の治療的投与はあらゆ る実際の喘息症状の発現を減少させるのに役立つ。このように、予期される喘息 症状の発現に先立って（その症状の発現の予期される型温度、持続時間または程 度を減少させるべく）、あるいはその症状の発現の開始後に本発明の抗体を投与 することができる。

Ｃ１本発明の組成物の投与 ＩＣＡＭ−１を結合することができるＨＡＭまたはＲＡＭの治療的効果は、天然 の混入物を実質的に含有しないＨＡＭまたはＲＡＭの有効量を患者に与える事に よって得ることができる。

本明細書に開示する本発明のＨＡＭおよびＲＡＭは、それらを含有する調製物が 通常これらの産物と共に自然に認められる物質を実質的に含有しない場合に、こ れらが“天然の混入物を実質的に含有しない”という。

本発明は、動物または組織培養または組換えＤＮＡ法によって生産され得るＨＡ ＭおよびＲＡＭに及ぶ。

ＲＡＭまたはＲＡＭを患者に与える場合、投与される薬剤の投与量は患者の年令 、体重、身長、性別、一般的医学的状態、過去の医学的経緯などの因子に依存し て変化するであろう。一般的には、約１ｐｇ／ｋｇから１０　ｍｇ／ｋｇ（患者 の体重）の範囲の抗体の投与量を受容者に与えることが望ましいが、これより低 い投与量やこれより高い投与量を投与することもできる。

ＩＣＡＭ−１に結合することができるＨＡＭまたはＲＡＭを、静脈内、筋肉内、 皮下、経腸、局部的吸入、鼻孔内、または非経口的に患者に投与することができ る。抗体を投与する場合、その投与を連続的投与で行ってもよいし、単一または 複数のポーラス投与で行ってもよい。

組成物の投与が受容患者によって許容され得る場合、その組成物が“薬学的に許 容される”という。このような薬剤の投与量が生理学的に有意である場合、この ような薬剤が“治療的に有効な量”で投与されたという。薬剤の存在が受容患者 の生理学に検出し得る変化をもたらす場合、その薬剤が生理学的に有意であると いう。

医薬的に有用な組成物を調製するために既知の方法に従って本発明のＨＡＭおよ びＲＡＭを製剤化することができ、それによって、これらの抗体を医薬的に許容 される担体賦形剤との混合物中に混合する。適切な賦形剤およびそれらの製剤は 、他のヒトタンパク質（例：ヒトの血清アルブミン）を含めて、例えばＲｅｍｉ ｎｇｔ。

ｎ’　ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ（５１１１６版、 　０ｓｏ１．　Ａ、編、　Ｍａｃｋ、　Ｅａｓｔｏｎ　ＰＡi１９８０））に記 述 されている。効果的な投与に適した医薬的に許容される組成物を形成するために 、そのような組成物はＲＡＭまたはＲＡＭの有効量を適当な量の担体賦形剤と共 に含有するであろう。

作用の持続時間を制御するために追加の医薬的方法を使用することができる。

ＨＡＭまたはＲＡＭを錯化または吸着するためにポリマーを使用することによっ て、制御された放出調製物を達成し得る。適当な巨大分子（例えばポリエステル 、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレンビニルアセテート、メチル セルロース、カルボキノメチルセルロース、または硫酸プロタミンなど）および 巨大分子の濃度ならびに放出を制御するための組込み法を選択することによって 、制御された送達を行うことができる。制御された放出調製物による作用の持続 時間を制御するために考え得るもう１つの方法は、ポリマー性材料（例えばポリ エステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）またはエチレン・ヒニルア セテート・共重合体など）の粒子中にＨＡＭまたはＲＡ　Ｍを組込むことである 。別法として、ポリマー性粒子中にＨＡＭまたはＲＡＭを組込む代わりに、これ らの物質を、例えばコアセルベーノヨン技術や界面重合によって調製したマイク ロカプセル（例　それぞれヒドロキノメチルセルロースまたはゼラチン・マイク ロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）中に封入す るか、あるいはコロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミン微小球、マ イクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョ ン中に封入することができる。このような技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈ ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）に開示されている。

ハイブリドーマ細胞系Ｒ６−５−Ｄ６はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｉｎｇｅｌｈａ ｉｍ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＩｎｃ、から提供された（ロット番号Ｒ ６−５−Ｄ６−Ｅ９−Ｂ２　０−２９−８６）、これをグルタミンと５％胎児ウ ソ血清を補足した抗生物質を含まないダルベツコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ） 中で成長させ、これを分割することにより評価のための過剰成長上清とＲＮＡを 抽出するための細胞の両方を得た。過剰成長上清が不ズミのＩｇＧ２ａ／カッパ 抗体を含有することがわかった。細胞培養上清を試験し、これが抗体Ｒ６−５− Ｄ６を含有することを確認した。

２、分子生物学手法 基本的な分子生物学手法はＭａｎｉａｔｉｓら（１９８２ＸＭａｎｉａｔｉｓら 、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ。

Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９８２））に 従い、場合によりわずかな変法を用いた。

ＤＮＡ配列決定をＳａｎｇｅｒら（１９７７ＸＳａｎｇｅｒら、　Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＩＪｓ＾７４：５４６３|５ ４６７（１９７７））および＾ｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　 Ｐｉｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｈａｎｄｂｏｏｋの記述に]っ て行った。ＣＯ８細胞発現および代謝的ラベル化の研究はｆｈｉｔｔｌｅら（１ ９８７）　（ｌｈｉｔｔｉｅら、　Ｐｒｏｔ、　Ｅｎｇ、　１．６：４９９−５ ０５（１９８７））の記述に従った。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）ト ランスフェクションおよび細胞培養をＧｏｒｍａｎ（１９８８ＸＧｏｒｍａｎ、 Ｃ，、ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　２＋１４３−１９０　ｅｄ、　（１９８８）） およびＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ（１９８８Ｘaｅｂ ｂｉｎｇｔｏｎら、ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　３：１６３−１８８　ｅｄ、　（ １９８８））の記述に従って行った。

全キメラ抗体を生産する安定な細胞系を開発するための第１段階として、軽鎖発 現ベクターによるトランスフェクションの後、ＣＨＯ細胞系から得た上清を分泌 された軽鎖について検定した。この方法は以下の通りである。

９６穴微量滴定プレートをＦ（ａｂ’）ｚヤギ抗ヒトカッパ軽鎖でコートした。

このプレートを水で洗浄し、試料を添加し、室温で１時間インキュベートした。

そのプレートを洗浄した後、Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’：ｈ西洋ワサ ビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）複合体を添加し、さらに１時間インキュベート した。次に、反応を明らかにするために酵素基賀を添加した。

３．２　会合（組二て）検定 完全なＩｇＧの存在量を決定するために、トランスフェクションされたＣＯ８細 胞およびトランスフェクションされたＣＨＯ細胞から得た上清について会合検細 胞上清中の完全なマウスＩｇＧについての会合検定法を次の形式のＥＬＩＳＡと した。

９６穴微量滴定プレートをＦ（ａｂ’）ｚヤギ抗マウスＩｇＧＦｃでコートした 。

このプレートを水中で洗浄し、試料を添加し、室温で１時間インキュベートした 。

そのプレートを洗浄した後、Ｆ（ａｂ’ｌ＋ヤギ抗マウスＩ　ｇＧ　Ｆ（ａ　ｂ ’）ｚ（ＨＲＰ０結合体）を添加した。次に反応を明らかにするために酵素基質 を添加した。標準としてマウスＩｇＧ２ａ骨髄腫であるＵＰＣＩＯを用いた。

３、２．２．キメラ遺伝子でトランスフェクションされたＣＯ８およびＣＨＯ細 胞ＣＯ８細胞上涜中の完全な擬人化抗ＩＣＡＭ−１についての会合検定法を次の 形式のＥＬＩＳＡとした。

９６穴微量滴定プレートをＦ（ａｂ’）ｚヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃでコートした。

このプレートを洗浄し、試料を添加し、室温で１時間インキュベートした。その プレートを洗浄し、モノクローナルマウス抗ヒトカッパ鎖を添加し、室温で１時 間インキュベートした。そのプレートを洗浄し、）”（ａｂ’：ｈヤギ抗マウス ＩｇＧＦｅ（ＨＲＰＯ結合体）を添加した。次に反応を明らかにするために酵素 基質を添加した。標準としてキメラＢ　７２　、３　（Ｂｏｄｍｅｒら、公開さ れた国際特許出願ＷＯ３９１０１７８３）および後に精製した抗ＩＣＡＭ−１（ Ｉ　ｇＧ４．１ｇＧ２、およびＩｇＧ１）を用いた。この検定においてモノクロ ーナル抗カッパ鏑を使用することにより、ＣＤＲ移植抗体の量を上記の標準から 読み取ることが可能になる。

ＣＯ８およびＣＨＯ細胞上清から得た物質および精製したキメラ抗体を、ＩＣＡ Ｍ−１陽性細胞上への抗ＩＣＡＭ−１抗原結合活性について、直接検定法で検定 した。この方法は以下の通りである。

ＪＹ細胞（細胞表面上に構成的にＩＣＡＭ−１を発現させるヒトＢＩＪンバ芽腫 様細胞系）を培養維持した。ポリ−Ｌ−１ｙｓｉｅおよびパラホルムアルデヒド を用いて、ＪＹ細胞の単層を９６穴ＥＬＩ　ＳＡプレート上に固定した。この単 層に試料を添加し、室温で１時間インキ、ベートした。ＰＢＳを用いてそのプレ ートを穏やかに洗浄した。擬人化試料またはマウス試料に適するように、Ｆ（ａ ｂ；）ｚヤギ抗ヒトＩｇＧ　Ｆｃ（ＨＰＯ結合体）またはＦ（ａｂ’）ｚヤギ抗 マウスＩ　ｇＧ　Ｆｃ（ＨＲＰＯ結合体）を添加した。次に反応を明らかにする ために酵素基質を添加した。

この細胞ベースの検定法の陰性対照をキメラＢ２７．３（１ｇＧ４）または貯蔵 した精製ヒトＩｇＧ２およびＩ　ｇ　Ｇ　４　（Ｃｈｅ＋＊１ｃｏｎ）とした。

陽性対照をネズミノＲ６゜５、Ｏ６ＭＡｂまたはキメラ抗ＩＣＡＭ−１抗体とし た。

３．３２　競争結合 ３、３．１と同様にＪＹ細胞の単層を調製した。抗体試料を添加し、４Ｃで終夜 インキュベートした。ビオチニル化した抗ＩＣＡＭ−１をすべてのウェルに添加 した。この混合物を室温で２時間数厘した。そのプレートを洗浄し、ストレプタ バジンーＨＲＰＯを添加した。さらにインキュベートした後、反応を明らかにす るために酵素基質を添加した。

第１欄に記載のように細胞を成長させ、１．４ｘｌＯ’細胞を収集し、グアニジ ウム／ＬｉＣ１抽出法を用いてｍＲＮＡを抽出した。全長ｃＤＮＡを作成するた めに、オリゴｄＴからプライムすることによりｃＤＮＡを調製した。このｃＤＮ Ａをメチル化し、クローニングのためにＥｃｏＲＩリンカ−を付加した。

４．２．ライブラリー構築 ＥｃｏＲＩで切断しウシ腸ホスファターゼで５゛リン酸基を除去した（ＥｃｏＲ Ｉ／ＣＩＰ）ｐＳＰ６４ベクターＤＮＡにｃＤＮＡライブラリーを連結した。こ の連結物を用いて、軽鎖の場合はＢｅｔｈｅｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌｂｓ （ＢＲＬ）から入手した高形質転換効率大腸菌ＨＢ　１０　Ｂ２４　Ｅ、ｃｏｌ ｉ　ＨＢ　１０１）を形質転換し、重鎮の場合はエレクトロポレーション（Ｄｏ ｗｅｒら、　Ｎｕｃｌ、＾ｃｉｄｓ、　Ｒｅｓ、　１６：６１２７（１９８８） ）で調製した大腸菌ＬＭ１０３５を形質転換した。ｃＤＮＡライブラリーを調製 した。軽鎖について１１６００コロニーをスクリーニングし、重鎮について２５ ０００コロニーをスクリーニングした。

５、スクリーニング 軽鎖についてはマウスのカッパ定常領域中の配列に相補的なオリゴヌクレオチド ：　５’ＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＡＡＣＴＧＣＴＣＡＣを用いるオリゴヌクレオチ ドスクリーニングによって、あるいは過去に単離されたマウスのＩｇＧ２ａ定常 領域クローンの９８０ｂｐＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＩ制限断片を用いることによっ て、重鎮あるいは軽鎖プローブについて陽性の大腸菌コロニーを同定した。６個 の軽鎖クローンと１０個の重鎮クローンを同定し、第２回のスクリーニングを行 うために採取した。第２回のスクリーニングで得た陽性クローンを成長させ、Ｄ ＮＡを調製した。遺伝子挿入物の大きさをゲル電気泳動で見積もり、全長ｃＤＮ Ａを含有し得る大きさのＤＮＡ挿入物の配列を決定した。

６、ＤＮＡ配列決定 全長ｃＤＮＡの５°非翻訳領域、シグナル配列、可変および定常領域ならびに３ °非翻訳領域に関するＤＮＡ配列を得た。これらを軽鎖については図１に、重鎮 については図２に示す。

７、ｃＤＮＡ発現ベクターの構築 セルチック（ｃｅｌｌｔｅｃｈ）発現ベクターは図３に示すプラスミドｐＥＥ６ ｈＣＭＶに基づいている（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ、　Ｃ，Ｒ，、公開された国際 特許出願ＷＯ３９１０１０３６）。発現させるべき遺伝子を挿入するためのポリ リンカーがヒトサイトメガロウィルス（ｈＣＭＶ）の主要即時型初期プロモータ ー／エンハンサ−の後ろに導入されている。トランスフェクションされた真核細 胞中のプラスミドを選択するためのマーカー遺伝子をｐＥＥ６ｈＣＭＶの唯一の Ｂａ■Ｈ１部位にＢａ＋ｍＨＩカセットとして挿入することができる。このカセ ット中には内部ＥｃｏＲ１部位が存在するのでＧＳマーカーは最後に挿入される が、ｎｅｏおよびｇｐｔマーカーは目的の遺伝子の挿入に先立って挿入されるの が通例である。

選択可能なマーカーはＳＶ４０後期プロモーターから発現され、これは複製の起 点をも提供するので、このベクターをＣＯ８細胞一時発現系での発現に使用する ことができる。

マウス配列をＥｃｏＲＩ断片として切り出し、軽鎖についてはＥＥ６−ｈＣＭＶ −ｎｅｏ（図４）、重鎮についてはＥ　Ｅ　６−ｈ　ＣＭＶ−ｇ　ｐ　ｔ　（図 ５）中にクローニングした。

ｓ、ｃｏｓ細胞におけるｃＤＮＡの発現プラスミドｐＡＬ５（図４）およびｐＡ Ｌ６（図５）をＣＯ８細胞中に同時トランスフェクトし、一時的発現実験で得た 上清がＪＹ細胞に結合した組み立てられた抗体を含有することを明らかにした（ 図６）。３ｓＳメチオニンを用いる代謝的ラベル化実験によって、重鎮と軽鎖の 発現と組み立てが示された。

９、ＣＤＲ移植遺伝子の構築 受容フレームワークとして使用できると目されるヒト抗体配列の分析は、抗体Ｅ Ｕが適切な候補であり得ることを示唆した（Ｋａｂａｔら、１９８７を参照のこ と）。

９．１．軽鎖配列 図７は、マウスのフレームワーク領域がＥＵ軽鎖由来の類似の配列で置換されて いる２つの可変領域のアミノ酸配列を示す。ｇＬ２２１で使用したマウスだけの 配列は残基２４〜３４．５０〜５６および８９〜９７（両端を含む）である。ｇ Ｌ２２１Ａではいくつかのフレームワーク残基がマウスのまま残されている。こ れは、ドメインのバッキングおよび抗原結合領域の立体配座の安定性に対するこ れらの残基の考え得る寄与を考慮した上で行われた。その残基番号は２．３．４ ９．６０．７０．８４．８５および８７であり、図では下線を付して示しである 。

図８は、ｇＬ２２１構築物の可変領域遺伝子を構築するために使用したオリゴヌ クレオチド対を示す。合成中にオリゴヌクレオチドを化学的にリン酸化した。

相補的オリゴヌクレオチド２０１）１１０１を対にし、６５℃に加熱し、室温に 冷却することによってアニールさせた。次に多対のすべてを混合し、Ｔ４　ＤＮ Ａリガーゼを用いて終夜連結した。この連結生成物を酵素ＢｓｔＢＩおよびＳｐ Ｈで切断することにより、末端の制限部位をあられにした。必要な４０８ｂｐ断 片を調製用アガロースゲル電気泳動で単離し、これを、上述のｐＥＥ６ｈＣＭＶ に類似するベクターであってＢｓｔＩ−５ｐＨ断片上の可変領域配列の挿入によ って適当な真核細胞（例：Ｃｏ５−１細胞）における全長軽鎖配列の効率的な発 現と分泌が可能になるような配置でｈＣＭＶプロモーターおよびヒトのカッパ定 常領域を含有しているｐＥ１０８１中に連結した。

候補クローンをＤＮＡ配列決定によって確認した。１つのクローンｐＢＪ２を発 現研究に使用した。図９はこの構築法の図解である。ｇ　Ｌ　２２１　Ａ遺伝子 を同様の方法で組み立てることによってプラスミドｐＢＪ　１を得た。

図１０はｇＬ２２ＬＡ構築物の可変領域遺伝子を構築するために使用したオリゴ ヌクレオチド対を示す。

９．２３重鎮配列 図１１は、マウスのフレームワーク領域がＥＵ重鎖由来の類似の配列によって置 換されている重鎮可変領域のアミノ酸配列を示す。ＥＵ重鎖はとりわけ特異質の Ｊ領域を有しており、実際、抗ＩＣＡＭ抗体Ｒ６−５−Ｄ６由来のネズミ配列は 正常なヒト配列モチーフに対してＥＵよりも類似している。したがって、残基１ ０３から１０８まで（両端を含むＨＫａｂａｔら、５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　 Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉａ＋＋ａｕｎｏｌ。

ｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、米国保険社会福祉省、　ＮＩＥＩ、　ＵＳＡ（ １９８７）のＥＵ表示に従って番号を付与した）の間のネズミ配列をこの遺伝子 の設計中に組み込んだ。

ｇＨ３４１には、先に言及したものだけでな（残基２６〜３５．５０〜５６およ び９４〜１００Ｂ（Ｋａｂａｔら、５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、米国保険社会福祉 省、　ＮＩＨ，ＵＳＡ（１９８７）のＥＵ表示に従って番号を付与した）由来の マウス配列を取り入れた。ｇＨ３４１Ａではアミノ酸２４および７３にマウスの 残基を使用した。ｇＨ３４１Ｂではアミノ酸２４．４８および７３にマウスの残 基を使用した。ｇＨ３４１Ｄではアミノ酸２４．４８．６９．７１．７３．８０ ．８８、および９１にマウスの残基を使用した。これらの追加のマウス残基は、 ドメインの保全および抗原結合領域の正しい配置に対するこれらの残基の考え得 る寄与に関する判定に適応させるために取り入れた。

図１２はｇＨ３４１構築物の可変領域を構築するために使用したオリゴヌクレオ チド対を示す。ｇＬ２２１に関する９、　１＃Ｉｌの記述と同様にしてこの遺伝 子を組み立てた。必要な遺伝子断片を単離するために、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ およびＡｐａＩを使用した。その４４０ｂｐ遺伝子断片を、適当な軽鎖を生産す ることができるベクターと同時に発現させた場合に上記可変領域配列の導入によ って真核細胞（例：Ｃｏ５−１細胞）における全長重鎮配列の効率的な発現と分 泌が可能になるであろうような配置でｈＣＭＶプロモーターおよびヒトＩｇＧ４ 定常領域を含有しているベクターであるｐＥ１００４（上述のｐ　Ｅ　Ｅ　６　 ｈ　ＣＭＶと類似のベクター）のＨｉｎｄｌＩＩおよびＡｐａＩ部位中にクロー ニングした。このベクターは、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細 胞などにおける安定な細胞系の形成を可能にするべく、ヒポキサンチン・グアニ ン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（ｇｐｔ遺伝子）をもコード化し ている。候補クローンをＤＮＡ配列決定によって確認した。１つのクローンｐＪ Ａ１９２を発現研究に使用した。ｇＨ３４１Ａ遺伝子を同様の方法で組み立てる ことによってｐＪＡ１９５を得た。

ＪＡ１９２中のｇＨ３４１Ａ遺伝子中で研究した残基２４および７３をｇＨ３４ １Ａ遺伝子中のこの２つのコドンの間に存在する制限部位Ｘｈｏｌを用いて分離 することにより、さらに２つの遺伝子ｇＨ３４１Ａ１およびｇＨ３４１Ａ２を作 成する。ＨｉｎｄＩＩＩからＸｈｏＩまでの断片をｐＪＡ１９２（ｇＨ３４１ベ クター）から単離して遺伝子断片を交換することにより、ｇＨ３４１Ａ１および ｇＨ３４１Ａ２遺伝子を含有する誘導体ベクターを構築することができる。これ によって、得られる抗体の正味の酸度に対するこれらのアミノ酸の相対的効果の 検討が可能になる。

ポリメラーゼ連鎖反応（Ｐ　ＣＲ）突然変異誘発法によってｐＪＡ１９５中のｇ Ｈ３４１ＡからｇＨ３４１Ｂ遺伝子を調製した。このＰＣＲ突然変異誘発法では 、結果として生じるアミノ酸がヒトの残基メチオニンからマウスのアミノ酸イソ ロイシンに変化するようにアミノ酸４８のコドンが改変される。ｇＨ３４１Ｂ構 築法の概略を図１３に記載する。候補クローンｐＡＬ１９をＤＮＡ配列決定で確 認し、これを発現研究に使用した。

ｇＨ３４１Ｄ遺伝子を可変領域の３°側の半分のオリゴヌクレオチド組み立てに よッテ組み立て、２９４ｂｐのＸｈｏ　Ｉ　−Ａｐａ　Ｉ断片としてｐＪＡ１９ ５（ｇＨ３４ＩＡ）中にクローニングした。図１３はこの遺伝子断片を組み立て るために使用したオリゴヌクレオチドを表す。得られたベクターをｐＡＬ２０と 命名した。

ＥＵを重鎮受容体として使用する代わりに、別の受容フレームワークを使用する こともできる。例えば抗体ＫＯＬが有用な受容体であることが示されている。

配列の調査ならびにドメインの保全と抗原結合領域の正しい配置に関与すると思 われるフレームワーク残基の研究によって、可変領域のアミノ酸配列を設計すル コトカテキル。遺伝子ｇＨ３４１Ａ（ＫＯＬ）は領域３６〜３５．５０〜６２． ６４〜６５および９５−１００ｂ（両端を含むＸＫａｂａｔら、　５ｅｑｕｅｎ ｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｅｏｔｉｎｓｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅ ｒｓｔ、米国保険社会福祉省、　ＮＩＨ，ＵＳＡ（１９８７））にネズミの配列 を有し、アミノ酸位置２４．７１および７３にも不ズミの配列を有する。この遺 伝子を組み立てるために必要なオリゴヌクレオチドを図１４に示す。各オリゴヌ クレオチドｌＱｐｍｏｌを最終体積１００μｍの緩衝液中で混合する。この混合 物をＴａｑポリメラーゼと共に９５℃１分間、５５℃１分間、および７２℃１分 間の温度調節サイクル３０回にかける。この反応生成物のＨｉｎｄＩＩＩおよび Ａｐａｌ消化後に必要な断片を回収することができ、発現研究のためにこれをｐ Ｅ１００４中にクローニングすることができる。

１０、ＣＤＲ移植抗体の発現 ＣＤＲ移植軽鎖または重鎮遺伝子を含有する発現ベクターをＣＯ８細胞中に既述 のように同時トランフェクトした。軽鎖と重鎮の組み合わせを複数種類行い、こ れには対照鎖としてキメラ軽鎖（ｃＬ）およびキメラＩｇＧ４重鎖（ｃＨ）の使 用を含めた。（ｃＬおよびｃＨ遺伝子の構築は本願と同日出願された本出願人の 同時係属英国特許出願に記述されている。）図１５はｇＬ２２１およびｇＬ２２ １Ａ遺伝子をｃＨと共に同時トランフエクトし、ｇＨ３４１、ｇＨ３４１Ａ、ｇ Ｈ３４１Ｂ、ｇＨ３４１Ｄ遺伝子をｃＬと共に同時トランフェクトした一連のト ランスフェクションを示す。ｃＬ　ｃＨの組み合わせに対する比較を行った。

ｇＬ２２１／ｃＨおよびｇＬ２２１Ａ／ｃＨの組み合わせニツイテは、これらが 共にキメラ抗体の結合活性と見かけ上等価な結合活性を有する抗体を与えること がわかる。移植重鎖／キメラ軽鎖の組み合わせの場合には、明らかにＣＤＲ外の マウス配列量の増大が改善された結合特性を有する抗体を導く。

図１６はｇＬ２２１あるいはｇＬ２２１Ａと同時発現させたｇＨ３４１Ｄ遺伝子 の比較を示す。これらの抗体の結合はキメラ抗体と比較してｇＬ２２１Ａ／ｇＨ ３４１ＤおよびｇＬ２２１／ｇＨ３４１Ｄの各組み合わせについてそれぞれ約７ ５％および５０％である。

このように、マウスのフレームワーク残基をｇＨ３４１遺伝子中に導入すること によってかなりの結合活性が維持される。

図１７はＩｇＧ４　ｇＬ２２１Ａ　ｇＨ３４１Ｄ抗体がＪＹ細胞上のＩＣＡＭ− １に対する結合に関して親杭体Ｒ６，５と成功裏に競合するという競争的検定の 結果を示す。競争能力はキメラＩｇＧ４抗体の約１０％である。

抗ｌｃａｍ軽鎖のＤＮＡ配列とその翻訳幸印を付した配列をタンパク質配列決定 によって確認した。

抗Ｉｃａｍ軽晴のＤＮＡ配列とその翻訳１！を付したタンパク質配列はＣ［ｌＲ の配列である。

下線と上線を付したタンパク質配列は定富ドメインの部分である。

ＦＩＧＵＲＥ　３ ＥＣ（ＩＲ＋リンカ−付加 クローニング ＦＩＧＵＲＥ　４ 図４は抗Ｉ　ＣＡＭ軽鎖発現ベクターｐＡＬ５の形成の工程を示す。

ｃＤＮＡ ＥｃｏＲＩリンカ−付加 ＦＩＧＵＲＥ　５ 図５は抗ＩＣＡＭＩ鎖遺伝子発現ベクターの形成の工種を示す。

Ｔ１蓼τ＠６ ０Ｄ　６３０ｎｒｎ ２２１Ｄ工αｍＳＰご一λ■；マｎ−ロＵ刀二Ｉ揖逼ロ８σＵ−鶏αフ！υに２ ２話　）匡困η９ご一λ■；ズ／Ｔｇは稟＝５−匡蕊ロシμ石＆瓢℃んＪＫ２２ １Ａ　［ｐ７エＧｓ　Ｇニー２−＝５回Ｐ［πロ鐙＝＝コＦｉｇｕｒｅ　７ Ｆｉｇｕｒｅ　８ ｖＬＩＣＡＭ移植軽ＩＪ１ｇ　Ｌ　２２ノ横ｇの概要Ｆｉｇｕｒｅ　９ Ｆｉｇｕｒｅ　ｔ。

ＩＣＡＭ−ＥＬＩＩ鎖配列 ｍｕ　ＱＶＯＬＶＯ５ＧＡＺ　Ｖ！ＧＣＰＧ５ＳＶＫＶ　５ＣＩＣＡＳＧＧπ５ 　Ｒ５入エエＷＲＱ入　ＦＧＱにＬｔＷＨＧＧＺｕ　ｎ？Ｍ！”ＧＰＰＮＹ　Ａ ＱＫｒＱＧＲＶＴＩ　丁ＡＤＥＳτＮＴＡＹ　ＭＥＬＳＳＸＪＬＳＥＤ　ＴＡｊ ＹｒＣＡＧＧＹｑＨ３４１Ｋ＝ニニ：；１Ωｐｓｓ ｇ１４３４１Ａ　ｅ本二：Σ二ΩΩニアｓｓＦｉｇｕｒ＠１１ ォ、−ｆ＄　Ｈ３４１遺伝子構築用１７）ｔ！ＪｊＦＪｕｒｅ　１２ ＦＬｇｕｒｅ　１３ Ｆｉｇｕｒｅ　ｌ＆ Ｆｉｇｕｒｅ　１５ Ｆｉｇｕτ＠１６ Ｆｉｇｕτ＠１７ 光学密Ｈ（４０５ｎｍ） 国際調査報告 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３９／３９５　 ＡＤＹ　９２８４−４ＣＣ１２Ｎ　５／１０ ＧＯＬＮ　３３１５３　Ｄ　８３１０−２Ｊ３３１５３１　Ａ　８３１０−２Ｊ ／／（Ｃ１２Ｐ　２１１０８ Ｃ１２Ｒ１：９１） Ｅ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＭ、ＧＡ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、 ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧＩ （７２）発明者　アスワル、ディルシェード・サインイギリス国ロンドン、ダブ リューシー１、タビストック・スフウェア、クノウリーズ・ハウス、フラット３ ５番 （７２）発明者　ロスレイン、ロバート・ニーアメリカ合衆国０６８１１コネチ カツト州、ダンバリー、タマニー・トレイル３２番

Claims (55)

【特許請求の範囲】
1. １．抗ＩＣＡＭ−１抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域から誘導される抗原結合 領域を含む組換え抗体分子。
2. ２．ＩＣＡＭ−１に対する特異性を有し、かつ可変ドメインの相補性決定領域の 少なくとも１つが非ヒト抗ＩＣＡＭ−１抗体から誘導されたものである抗原結合 部位を有しているＣＤＲ移植擬人化抗体分子。
3. ３．位置２４−３４（ＣＤＲ１）、５０−５６（ＣＤＲ２）、及び９１−９６（ ＣＤＲ３）に非ヒトＣＤＲを含有している請求項２に記載のＣＤＲ移植抗体軽鎖 。
4. ４．１、２及び／又は３、４６、４７、４９、６０、７０、８４、８５及び８７ 位の１つ又はそれ以上の位置に非ヒト残基を含有している請求項２又は請求項３ に記載のＣＤＲ移植軽鎖。
5. ５．少なくとも４６位と４７位に非ヒト残基を含有している請求項４に記載のＣ ＤＲ移植軽鎖。
6. ６．位置２４−３５（ＣＤＲ１）、５０−６５（ＣＤＲ２）及び９５−１００（ ＣＤＲ３）に非ヒトＣＤＲを含有している請求項２に記載のＣＤＲ移植抗体重鎖 。
7. ７．位置２６−３５（ＣＤＲ１）、５０−６５（ＣＤＲ２）及び９４−１００（ ＣＤＲ３）に非ヒトＣＤＲを含有している請求項２に記載のＣＤＲ移植抗体重鎖 。
8. ８．２３及び／又は２４位、及び７１及び／又は７３位に非ヒト残基を含有して いる請求項２、請求項６又は請求項７に記載のＣＤＲ移植重鎖。
9. ９．位置６、４８及び／又は４９、６９、７６及び／又は７８、８０、８８及び ／又は９１の１つ又はその幾つか又はそれらのすべてにさらに非ヒト残基を含有 している請求項８に記載のＣＤＲ移植重鎖。
10. １０．請求項１から請求項５までのいずれかに記載の抗体軽鎖を少なくとも１つ 、及び請求項１、請求項２又は請求項６から請求項９までのいずれかに記載の抗 体重鎖の少なくとも１つ、を含む組換え抗体分子又はＣＤＲ移植擬人化抗体分子 。
11. １１．Ｒ６−５−Ｄ６ネズミモノクローナル抗体から誘導されたものである組換 え抗体分子又はＣＤＲ移植擬人化抗体分子。
12. １２．請求項１から請求項１１までのいずれかに記載の抗体重鎖又は軽鎖をコー ドしているＤＮＡ。
13. １３．請求項１０又は請求項１１に記載のＤＮＡを含有するベクター。
14. １４．請求項１、請求項２又は請求項６から請求項９までのいずれかに記載の抗 体重鎮をコードしているＤＮＡと作動可能に組み合わされた請求項１から請求項 ５までのいずれかに記載の抗体軽鎖をコードしているＤＮＡ、を含有している発 現ベクター。
15. １５．請求項１２又は請求項１３に記載のベクターによって形質転換された宿主 細胞。
16. １６．抗ＩＣＡＭ−１ＨＡＭを生産するための方法であって、（ａ）その可変ド メインのＣＤＲの少なくとも１つが非ヒト（齧歯目）抗ＩＣＡＭ−１抗体から誘 導されたものであり、かつ、その抗体鎖の残りの免疫グロブリン誘導部分がヒト 免疫グロブリンから誘導されている抗体重鎖又は軽鎖をコードしているＤＮＡ配 列を有するオペロンを含有している発現ベクターを作成し、（ｂ）その可変ドメ インのＣＤＲの少なくとも１つが齧歯目（非ヒト）抗ＩＣＡＭ−１抗体から誘導 されたものであり、かつ、その抗体鎖の残りの免疫グロブリン誘導部分がヒト免 疫グロブリンから誘導されている相補的な抗体軽鎖又は重鎖をコードしているＤ ＮＡ配列を有するオペロンを含有している発現ベクターを作成し、 （ｃ）宿主細胞を上記の各ベクターでトランスフェクションし、そして（ｄ）ト ランスフェクションした細胞系を培養することによりＨＡＭを生産する、 ことを特徴とする方法。
17. １７．製薬的に許容され得る希釈剤、賦形剤又は担体と共に、請求項１から請求 項１０までのいずれかに記載の抗体分子又はその断片を含有している治療用組成 物。
18. １８．検出できるように標識された形態にある請求項１から請求項１１までのい ずれかに記載の抗体分子又はその断片を含有している診断用組成物。
19. １９．請求項１から請求項１１までのいずれかに記載の抗体産物の有効量をヒト 又は動物対象に投与することを特徴とする治療方法。
20. ２０．哺乳動物対象において特異的防御系の応答がもたらす炎症を処置するため の方法であって、そのような処置を必要としている対象に該炎症を抑制するに充 分な量にある、ＩＣＡＭ−１と結合することのできるＨＡＭ又はＲＡＭである抗 炎症物質を与えることを特徴とする方法。
21. ２１．該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の抗体の１つ又はそ れ以上である第２０項の方法。
22. ２２．該炎症か遅延型過敏反応である請求項２０に記載の方法。
23. ２３．該炎症が乾癬の症状である請求項２０に記載の方法。
24. ２４．該炎症が自己免疫疾患の症状である請求項２０に記載の方法。
25. ２５．該自己免疫疾患が、レノー症候群、自己免疫甲状腺炎、ＥＡＥ、多発性硬 化症、リウマトイド関節炎及び紅斑性狼瘡からなる群の中から選択される請求項 ２４に記載の方法。
26. ２６．該炎症が器官移植拒絶に応答する炎症である請求項２０に記載の方法。
27. ２７．該器官移植が腎移植である請求項２６に記載の方法。
28. ２８．該炎症が組織移植拒絶に応答する炎症である請求項２０に記載の方法。
29. ２９．ＬＦＡ−１に結合することができる抗体、該抗体の機能的誘導体であって ＬＦＡ−１に結合することができる該機能的誘導体、及びＬＦＡ−１の非免疫グ ロブリン拮抗物質からなる群の中から選択される薬物の投与をさらに包含する請 求項２０に記載の方法。
30. ３０．哺乳動物対象において非特異的防御系の応答がもたらす炎症を処置する方 法であって、そのような処置を必要としている対象に該炎症を抑制するに充分な 量の抗炎症物質を与えることからなり、該抗炎症物質がＩＣＡＭ−１を結合する ことのできるＨＡＭ又はＲＡＭである方法。
31. ３１．該炎症が、成人呼吸障害症候群、敗血症に続発する多器官損傷症候群、外 傷に続発する多器官損傷症候群、組織の再灌流損傷、急性糸球体腎炎、反応性関 節炎、急性炎症性成分を伴う皮層病、中枢神経系炎症性障害（例：発作）、熱傷 、血液透析、白血球除去血輸血、潰瘍性大腸炎、クローン病、顆粒球輸注関連症 候群、及びサイトカイン誘発性障害からなる群の中から選択される症状に伴う炎 症である請求項３０に記載の方法。
32. ３２．該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の抗体の１つ又はそ れ以上である請求項３０又は請求項３１に記載の方法。
33. ３３．ＬＦＡ−１ファミリーの機能的構成要素を移動のために必要とする造血性 腫瘍細胞の転移を抑制するための方法であって、そのような治療を必要としてい る患者に該転移を抑制するに充分な量の抗炎症物質を与えることからなり、該抗 炎症物質がＩＣＡＭ−１を結合することができるキメラ抗体である方法。
34. ３４．ＩＣＡＭ−１に結合することができる該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から 請求項１１に記載の抗体からなる群の中から選択される請求項３３に記載の方法 。
35. ３５．ＩＣＡＭ−１を発現する腫瘍細胞の成長を抑制するための方法であって、 そのような処置を必要としている患者に該成長を抑制するに充分な量の毒素を与 えることからなり、該毒素がＩＣＡＭ−１に結合することができる毒素誘導体化 ＨＡＭ又はＲＡＭからなる方法。
36. ３６．ウイルス感染症の処置を必要としている個体の該感染症を処置するための 方法であって、該個体にウイルス感染症を抑制するに充分な量の、ＩＣＡＭ−１ と結合できるＨＡＭ又はＲＡＭを与えることを特徴とする方法。
37. ３７．該ウイルスがピコルナビリダエ属内の主要血清型のリノウイルス、グルー プＡコクサッキーウイルス、又はメンゴウイルスである請求項３６に記載の方法 。
38. ３８．該ウイルスが主要血清型のリノウイルスである請求項３７に記載の方法。
39. ３９．該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の抗体の少なくとも １つである請求項３６から請求項３８までのいずれかに記載の方法。
40. ４０．ＨＩＶによる白血球の感染を抑制するための方法であって、ＨＩＶに暴露 された患者又はＨＩＶに感染した患者にＨＩＶ−１感染抑制物質の有効量を投与 することからなり、該物質がＩＣＡＭ−１に結合することができるＨＡＭ又はＲ ＡＭである方法。
41. ４１．該ＨＩＶがＨＩＶ−１である請求項４０に記載の方法。
42. ４２．該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の少なくとも１つの 抗体である請求項４０又は請求項４１に記載の方法。
43. ４３．ウイルスに感染した白血球の血管外移動を抑制するための方法であって、 該患者に抗移動物質の有効量を投与することからなり、該物質が該白血球のＩＣ ＡＭ−１に結合するという能力を減じることができるＨＡＭ又はＲＡＭである方 法。
44. ４４．該ウイルスに感染した白血球がＨＩＶに感染している請求項４３に記載の 方法。
45. ４５．該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の少なくとも１つの 抗体である請求項４３又は請求項４４に記載の方法。
46. ４６．喘息の治療を必要としている個体の喘息を処置するための方法であって、 該個体に喘息を抑制するに充分な量の、ＩＣＡＭ−１と結合できるＨＡＭ又はＲ ＡＭを与えることを特徴とする方法。
47. ４７．該ＨＡＭ又はＲＡＭが請求項１から請求項１１に記載の少なくとも１つの 抗体である請求項４６に記載の方法。
48. ４８．該擬人化ＨＡＭ又はＲＡＭが、経腸手段、非経口手段、局部手段、吸入手 段又は鼻孔内手段によって投与される請求項１９から請求項４７までのいずれか に記載の方法。
49. ４９．該擬人化ＨＡＭ又はＲＡＭが予防的に投与される請求項４８に記載の方法 。
50. ５０．該擬人化ＨＡＭ又はＲＡＭが治療的に投与される請求項４８に記載の方法 。
51. ５１．該非経口手段が筋肉内、静脈内又は皮下法である請求項４８、請末項４９ 又は請求項５０に記載の方法。
52. ５２．製薬的に許容される担体と共に請求項１から請求項１１までのいずれかに 記載の抗炎症物質を含有する医薬組成物。
53. ５３．少なくとも１つの他の免疫抑制物質を含有している請求項５２に記載の医 薬組成物。
54. ５４．哺乳動物対象におけるＩＣＡＭ−１発現腫瘍細胞を診断するための方法で あって、 （ａ）ＩＣＡＭ−１と結合できる検出可能に標識されたＨＡＭ又はＲＡＭを含有 する組成物を該対象に投与し、 （ｂ）該ＩＣＡＭ−１に結合している該ＨＡＭ又はＲＡＭを検出する、ことを特 徴とする方法。
55. ５５．哺乳動物対象における炎症を診断するための方法であって、（ａ）ＩＣＡ Ｍ−１を発現する細胞と結合することができる検出可能に標識されたキメラ抗体 を含有する組成物と共に、該対象の組織の試料をインキュベートし、 （ｂ）該細胞に結合している該キメラ抗体を検出する、ことを特徴とする方法。