JPH06313001A - Ｂｓ−５物質およびその製造方法 - Google Patents
Ｂｓ−５物質およびその製造方法Info
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- JPH06313001A JPH06313001A JP12314993A JP12314993A JPH06313001A JP H06313001 A JPH06313001 A JP H06313001A JP 12314993 A JP12314993 A JP 12314993A JP 12314993 A JP12314993 A JP 12314993A JP H06313001 A JPH06313001 A JP H06313001A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 本発明のＢＳ−５物質は、クレブシェラ属に
属する微生物を培養して、下記性質を有する多糖類を得
る。主要構成糖はラムノース、ガラクトース、グルコー
ス、グルクロン酸で、白色ないし淡褐色の粉末。水に易
溶、メタノール、酢酸エチル、ベンゼンに難溶。粘度１
〜２００cps。分子量千〜１０００万。フェノール硫酸
反応、カルバゾール反応、モーリッシュ反応に陽性。 【効果】 ＢＳ−５物質は、毒性の低い抗腫瘍活性を有
する多糖類であって、クレブシェラ属に属する微生物の
培養物より容易に得ることができる。
属する微生物を培養して、下記性質を有する多糖類を得
る。主要構成糖はラムノース、ガラクトース、グルコー
ス、グルクロン酸で、白色ないし淡褐色の粉末。水に易
溶、メタノール、酢酸エチル、ベンゼンに難溶。粘度１
〜２００cps。分子量千〜１０００万。フェノール硫酸
反応、カルバゾール反応、モーリッシュ反応に陽性。 【効果】 ＢＳ−５物質は、毒性の低い抗腫瘍活性を有
する多糖類であって、クレブシェラ属に属する微生物の
培養物より容易に得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、クレブシエラ属 (Kleb
siella) に属する微生物により生産される、抗腫瘍剤と
して有用な新規多糖類ＢＳ−５物質およびその製造法に
関する。
siella) に属する微生物により生産される、抗腫瘍剤と
して有用な新規多糖類ＢＳ−５物質およびその製造法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、微生物により生産される多糖類は
種々知られている。例えばキサントモナス・カンペスト
リスにより生産されるキサンタンガム、ロイコノストッ
ク・メセンテロイデスにより生産されるデキストラン、
オーレオバシディウム・プルランスにより生産されるプ
ルラン、アルカリゲネス・フェーカリスにより生産され
るカードラン等が良く知られている。これら多糖類は、
例えば食品分野において増粘剤、分散剤、品質改良剤、
乳化安定剤等の食品添加物として、工業分野においてコ
ンクリート流動化剤として、さらには医薬品分野におい
て代用血漿剤として広く用いられている。また、クレブ
シエラ属に属する微生物の生産する多糖類としては、ク
レブシエラ・ニューモニアの生産するＢＳ−１物質が知
られている（特公平2ー19121号公報）。また、生理活性
を有する多糖類としては、主に担子菌の生産する多糖類
から抗腫瘍活性を持つ多糖類が多数報告されている。例
えば、椎茸の培養液から調製されるレンチナン、スエヒ
ロタケの生産するシゾフィラン、茯苓の生産するパキマ
ラン等が良く知られている。
種々知られている。例えばキサントモナス・カンペスト
リスにより生産されるキサンタンガム、ロイコノストッ
ク・メセンテロイデスにより生産されるデキストラン、
オーレオバシディウム・プルランスにより生産されるプ
ルラン、アルカリゲネス・フェーカリスにより生産され
るカードラン等が良く知られている。これら多糖類は、
例えば食品分野において増粘剤、分散剤、品質改良剤、
乳化安定剤等の食品添加物として、工業分野においてコ
ンクリート流動化剤として、さらには医薬品分野におい
て代用血漿剤として広く用いられている。また、クレブ
シエラ属に属する微生物の生産する多糖類としては、ク
レブシエラ・ニューモニアの生産するＢＳ−１物質が知
られている（特公平2ー19121号公報）。また、生理活性
を有する多糖類としては、主に担子菌の生産する多糖類
から抗腫瘍活性を持つ多糖類が多数報告されている。例
えば、椎茸の培養液から調製されるレンチナン、スエヒ
ロタケの生産するシゾフィラン、茯苓の生産するパキマ
ラン等が良く知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】多糖類は一般に低毒性
であり、この特性は多糖類を医療用薬剤として利用する
上で大きな利点である。現在、担子菌によって生産され
る多糖類が抗腫瘍性薬剤として利用されている。しか
し、担子菌の培養には高価な培地成分を必要としたり、
培養が困難であったりする場合が多い。またその生産す
る多糖類は構造が複雑になる傾向があり、生産される抗
腫瘍性多糖類の均一性を維持するのが困難であったり、
複雑な精製工程を必要とするものであった。これに対
し、細菌の生産する多糖類は繰り返し単位構造が良く保
たれており、多糖類の構造がより均一である。また、細
菌の培養は糸状菌である担子菌の培養に比べると極めて
容易である。本発明は、培養が容易であり、かつ、生産
される多糖類の構造が均一である細菌を培養し、抗腫瘍
性を有する新規な多糖類を提供することを課題とする。
であり、この特性は多糖類を医療用薬剤として利用する
上で大きな利点である。現在、担子菌によって生産され
る多糖類が抗腫瘍性薬剤として利用されている。しか
し、担子菌の培養には高価な培地成分を必要としたり、
培養が困難であったりする場合が多い。またその生産す
る多糖類は構造が複雑になる傾向があり、生産される抗
腫瘍性多糖類の均一性を維持するのが困難であったり、
複雑な精製工程を必要とするものであった。これに対
し、細菌の生産する多糖類は繰り返し単位構造が良く保
たれており、多糖類の構造がより均一である。また、細
菌の培養は糸状菌である担子菌の培養に比べると極めて
容易である。本発明は、培養が容易であり、かつ、生産
される多糖類の構造が均一である細菌を培養し、抗腫瘍
性を有する新規な多糖類を提供することを課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、細菌の生
産する多糖類が比較的均一な構造を有することに着目
し、抗腫瘍性を有する生産物を鋭意探索した結果、クレ
ブシェラ属に属する微生物が比較的低い投与量で高い抗
腫瘍活性を有する多糖類を生産することを見いだし、本
発明に至った。即ち、本発明は、クレブシエラ属に属す
るＢＳ−５物質生産菌を培養し、培養物から採取して得
られるＢＳ−５物質およびその製造方法に関する。以下
本発明を詳しく説明する。本発明に係るＢＳ−５物質
は、クレブシエラ属（Klebsiella）に属するＢＳ−５物
質生産菌により生産される多糖類であって、該ＢＳ−５
物質生産菌の培養物から分離・採取される。
産する多糖類が比較的均一な構造を有することに着目
し、抗腫瘍性を有する生産物を鋭意探索した結果、クレ
ブシェラ属に属する微生物が比較的低い投与量で高い抗
腫瘍活性を有する多糖類を生産することを見いだし、本
発明に至った。即ち、本発明は、クレブシエラ属に属す
るＢＳ−５物質生産菌を培養し、培養物から採取して得
られるＢＳ−５物質およびその製造方法に関する。以下
本発明を詳しく説明する。本発明に係るＢＳ−５物質
は、クレブシエラ属（Klebsiella）に属するＢＳ−５物
質生産菌により生産される多糖類であって、該ＢＳ−５
物質生産菌の培養物から分離・採取される。
【０００５】ＢＳ−５物質は下記性質を有することを特
徴とする。 a. 外観：白色ないし淡褐色粉末。 b. 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜200センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース10.8〜15.9%、ガラ
クトース29.1〜34.1%、グルコース31.2〜36.4%、グルク
ロン酸12.3〜19.1%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： 千〜1000万（カラム：Asahipak GSM-700
H×2＋GS-1b、移動担：50mM NaNO3 ＋ 0.02wt%NaN3、分
子量標準品：プルラン） g. 元素分析値： Ｃ 30.0〜40.0%、Ｈ 4.0〜6.0%、
Ｎ 0.1〜1.0% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。
徴とする。 a. 外観：白色ないし淡褐色粉末。 b. 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜200センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース10.8〜15.9%、ガラ
クトース29.1〜34.1%、グルコース31.2〜36.4%、グルク
ロン酸12.3〜19.1%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： 千〜1000万（カラム：Asahipak GSM-700
H×2＋GS-1b、移動担：50mM NaNO3 ＋ 0.02wt%NaN3、分
子量標準品：プルラン） g. 元素分析値： Ｃ 30.0〜40.0%、Ｈ 4.0〜6.0%、
Ｎ 0.1〜1.0% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。
【０００６】また、本発明に係る精製したＢＳ−５物質
は、クレブシエラ属に属するＢＳ−５物質生産菌を培養
し、培養物から採取して得られるＢＳ−５物質を更に精
製することにより得られる物質であって、下記性質を有
することを特徴とする。 a. 外観：無臭の白色粉末。 b. 溶解性： 水に易溶、メタノール、酢酸エチル、ク
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜300センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース13.3〜15.9%、ガラ
クトース30.8〜34.1%、グルコース35.4〜36.4%、グルク
ロン酸14.5〜19.1%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性 ニンヒド
リン反応 陽性。 f 分子量：1万〜1000万。 g 元素分析値：C 31.0〜40.0%、H 4.5〜6.0%、N 0.
1〜1.0% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。
は、クレブシエラ属に属するＢＳ−５物質生産菌を培養
し、培養物から採取して得られるＢＳ−５物質を更に精
製することにより得られる物質であって、下記性質を有
することを特徴とする。 a. 外観：無臭の白色粉末。 b. 溶解性： 水に易溶、メタノール、酢酸エチル、ク
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜300センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース13.3〜15.9%、ガラ
クトース30.8〜34.1%、グルコース35.4〜36.4%、グルク
ロン酸14.5〜19.1%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性 ニンヒド
リン反応 陽性。 f 分子量：1万〜1000万。 g 元素分析値：C 31.0〜40.0%、H 4.5〜6.0%、N 0.
1〜1.0% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。
【０００７】次に、本発明に係るＢＳ−５物質はクレブ
シエラ属に属するＢＳ−５物質生産菌を培養し、培養物
よりＢＳ−５物質を採取することにより製造することが
できる。クレブシエラ属に属するＢＳ−５物質生産菌と
しては、代表的にクレブシエラ・プランティコーラ（Kl
ebsiella planticola）を例示することができる。クレ
ブシエラ・プランティコーラの菌株は、JCM7251株(ATCC
15050)として理化学研究所微生物系統保存施設に保存
されている。なお、クレブシエラ・プランティコーラ
（Klebsiella planticola）は、良く知られている通
り、紫外線、X線、放射線などの照射および突然変異源
（例えば、ニトロソグアニジン、ナイトロゲンマスター
ド、アクリジンオレンジ）などの変異手段により容易に
変異し得るので、このようにして得られる変異株であっ
ても、ＢＳ−３物質の生産能を有するものは全て本発明
で利用されるクレブシエラ・プランティコーラの菌株に
包含されるものと理解すべきである。
シエラ属に属するＢＳ−５物質生産菌を培養し、培養物
よりＢＳ−５物質を採取することにより製造することが
できる。クレブシエラ属に属するＢＳ−５物質生産菌と
しては、代表的にクレブシエラ・プランティコーラ（Kl
ebsiella planticola）を例示することができる。クレ
ブシエラ・プランティコーラの菌株は、JCM7251株(ATCC
15050)として理化学研究所微生物系統保存施設に保存
されている。なお、クレブシエラ・プランティコーラ
（Klebsiella planticola）は、良く知られている通
り、紫外線、X線、放射線などの照射および突然変異源
（例えば、ニトロソグアニジン、ナイトロゲンマスター
ド、アクリジンオレンジ）などの変異手段により容易に
変異し得るので、このようにして得られる変異株であっ
ても、ＢＳ−３物質の生産能を有するものは全て本発明
で利用されるクレブシエラ・プランティコーラの菌株に
包含されるものと理解すべきである。
【０００８】次に、クレブシエラ・プランティコーラの
菌株を利用してＢＳ−５物質を製造する方法について説
明する。ＢＳ−５物質は、上記菌株を、炭素源、窒素源
およびその他の成育に必要な栄養成分を含む固体培地も
しくは液体培地中で、振盪培養や通気攪拌培養のような
好気的培養を行うことにより生産される。培地に用いる
炭素源としては、ラクトース、シュークロース、マルト
ース、ガラクトース、グルコース、フラクトース等の糖
類およびグリセロール等が例示し得るが、なかでもラク
トースが好ましい。これら糖類の培地中における濃度は
使用菌株が成育し得る程度であれば特に限定されない
が、通常1〜10%（w/v）、好ましくは3〜7%（w/v）であ
る。また、窒素源としては、ポリペプトン、酵母エキ
ス、肉エキス、トリプチケースペプトンのような有機
物、または硝酸塩、アンモニウム塩のような無機物を例
示し得るが、ＢＳ−５物質の生産性の観点からは有機態
の窒素源が好ましい。更に、培地には必要に応じて、リ
ン酸一カリウムやリン酸二カリウムのようなリン酸塩、
鉄、銅、マグネシウム、マンガン、モリブデン、亜鉛、
ホウ素等の微量金属類およびビオチン、チアミン、ビタ
ミンB12等のビタミン類および核酸類等を添加してもよ
い。
菌株を利用してＢＳ−５物質を製造する方法について説
明する。ＢＳ−５物質は、上記菌株を、炭素源、窒素源
およびその他の成育に必要な栄養成分を含む固体培地も
しくは液体培地中で、振盪培養や通気攪拌培養のような
好気的培養を行うことにより生産される。培地に用いる
炭素源としては、ラクトース、シュークロース、マルト
ース、ガラクトース、グルコース、フラクトース等の糖
類およびグリセロール等が例示し得るが、なかでもラク
トースが好ましい。これら糖類の培地中における濃度は
使用菌株が成育し得る程度であれば特に限定されない
が、通常1〜10%（w/v）、好ましくは3〜7%（w/v）であ
る。また、窒素源としては、ポリペプトン、酵母エキ
ス、肉エキス、トリプチケースペプトンのような有機
物、または硝酸塩、アンモニウム塩のような無機物を例
示し得るが、ＢＳ−５物質の生産性の観点からは有機態
の窒素源が好ましい。更に、培地には必要に応じて、リ
ン酸一カリウムやリン酸二カリウムのようなリン酸塩、
鉄、銅、マグネシウム、マンガン、モリブデン、亜鉛、
ホウ素等の微量金属類およびビオチン、チアミン、ビタ
ミンB12等のビタミン類および核酸類等を添加してもよ
い。
【０００９】上記培地中での培養温度は、使用菌の増殖
至適温度範囲である20〜37℃、好ましくは25〜32℃であ
る。培養に際しての培地のｐＨは特に限定されないが、
3〜11、好ましくは中性付近である。上述のような培養
条件下に培養すると、経時的に培地の粘度が上昇し、Ｂ
Ｓ−５物質が培地中に生産、蓄積されてくることがわか
る。培養時間は、培地の粘度が最大に達するまで行えば
良いが、実際上は生産効率の点から通常３〜７日間培養
する。培養終了後、培地中のＢＳ−５物質を常法に従っ
て分離・採取する。この分離・採取は、例えば液体培地
を用いた場合には、培養終了後培養液を水で希釈し、遠
心分離などにより菌体等の不純物を除去し、次いで除菌
した培養液にメタノール、エタノール、イソプロパノー
ル、アセトンのような有機溶媒またはセチルトリメチル
アンモニウム塩のような第４級アンモニウム塩またはブ
チルアマイドのような酸アマイドを加えてＢＳ−５物質
を沈殿させることにより行う。この沈殿を洗浄した後、
乾燥させることにより、ＢＳ−５物質が得られる。
至適温度範囲である20〜37℃、好ましくは25〜32℃であ
る。培養に際しての培地のｐＨは特に限定されないが、
3〜11、好ましくは中性付近である。上述のような培養
条件下に培養すると、経時的に培地の粘度が上昇し、Ｂ
Ｓ−５物質が培地中に生産、蓄積されてくることがわか
る。培養時間は、培地の粘度が最大に達するまで行えば
良いが、実際上は生産効率の点から通常３〜７日間培養
する。培養終了後、培地中のＢＳ−５物質を常法に従っ
て分離・採取する。この分離・採取は、例えば液体培地
を用いた場合には、培養終了後培養液を水で希釈し、遠
心分離などにより菌体等の不純物を除去し、次いで除菌
した培養液にメタノール、エタノール、イソプロパノー
ル、アセトンのような有機溶媒またはセチルトリメチル
アンモニウム塩のような第４級アンモニウム塩またはブ
チルアマイドのような酸アマイドを加えてＢＳ−５物質
を沈殿させることにより行う。この沈殿を洗浄した後、
乾燥させることにより、ＢＳ−５物質が得られる。
【００１０】このようにして得られるＢＳ−５物質は下
記性質を有する。 a. 外観：白色ないし淡褐色粉末。 b. 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜200センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース10.8〜15.9%、ガラ
クトース29.1〜34.1%、グルコース31.2〜36.4%、グルク
ロン酸12.3〜19.1%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： 千〜1000万 g. 元素分析値： Ｃ 30.0〜40.0%、Ｈ 4.0〜6.0%、
Ｎ 0.1〜1.0% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。
記性質を有する。 a. 外観：白色ないし淡褐色粉末。 b. 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜200センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース10.8〜15.9%、ガラ
クトース29.1〜34.1%、グルコース31.2〜36.4%、グルク
ロン酸12.3〜19.1%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： 千〜1000万 g. 元素分析値： Ｃ 30.0〜40.0%、Ｈ 4.0〜6.0%、
Ｎ 0.1〜1.0% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。
【００１１】上述のようにして得られたＢＳ−５物質
は、必要に応じ更に精製処理して精製ＢＳ−５物質を得
ることができる。精製処理は、上記ＢＳ−５物質を水に
再溶解させ、これにメタノール、エタノール、イソプロ
パノールやアセトンのような有機溶媒、セチルトリメチ
ルアンモニウム塩のような第4級アンモニウム塩または
ブチルアマイドのような酸アマイドを用いて再析出させ
る操作を繰り返し行うことにより、更に必要に応じて透
析処理もしくはクロマトグラフィー処理して精製する。
このように精製処理することにより低分子量部分が分離
された精製ＢＳ−５物質が得られる。精製ＢＳ−５物質
は下記性質を有する。
は、必要に応じ更に精製処理して精製ＢＳ−５物質を得
ることができる。精製処理は、上記ＢＳ−５物質を水に
再溶解させ、これにメタノール、エタノール、イソプロ
パノールやアセトンのような有機溶媒、セチルトリメチ
ルアンモニウム塩のような第4級アンモニウム塩または
ブチルアマイドのような酸アマイドを用いて再析出させ
る操作を繰り返し行うことにより、更に必要に応じて透
析処理もしくはクロマトグラフィー処理して精製する。
このように精製処理することにより低分子量部分が分離
された精製ＢＳ−５物質が得られる。精製ＢＳ−５物質
は下記性質を有する。
【００１２】a. 外観：無臭の白色粉末。 b. 溶解性： 水に易溶、メタノール、酢酸エチル、ク
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜300センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース13.3〜15.9%、ガラ
クトース30.8〜34.1%、グルコース35.4〜36.4%、グルク
ロン酸14.5〜19.1%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陰性。 f 分子量：1万〜1000万 g 元素分析値：C 31.0〜40.0%、H 4.5〜6.0%、N 0.
1〜1.0% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。 以下、実施例により、本発明を具体的に説明する。
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜300センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース13.3〜15.9%、ガラ
クトース30.8〜34.1%、グルコース35.4〜36.4%、グルク
ロン酸14.5〜19.1%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陰性。 f 分子量：1万〜1000万 g 元素分析値：C 31.0〜40.0%、H 4.5〜6.0%、N 0.
1〜1.0% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。 以下、実施例により、本発明を具体的に説明する。
【００１３】
【実施例１】 ＢＳ−５物質の製造：クレブシエラ・プランティコーラ
（Klebsiella planticola）JCM7251を、ラクトース3wt
%、トリプチケースペプトン0.35wt%、リン酸一カリウム
0.6wt%、硫酸マグネシウム0.07wt%および寒天1.4wt%か
ら成る斜面培地において増殖させたものを白金耳でかき
取り、上記培地において寒天を除いた液体培地10mlに接
種し、28℃で１日間振盪培養で前培養を行った。次い
で、上記前培養に用いたと同様な組成の液体培地を120
℃15分間加熱滅菌したもの100mlに上記前培養したもの
全量を無菌的に接種して、28℃で１日間振盪培養（180r
pm）を行った。培養の進行に伴い培養液は粘稠となり、
ＢＳ−５物質の生産、蓄積が認められた。得られた培養
液を18000rpmで15分間遠心分離を行って菌体を除去した
後、２倍量のエタノールを加えて淡褐色個体（ＢＳ−５
物質）を析出させた。この淡褐色固体（ＢＳ−５物質）
を遠心分離により採取し、エタノールによる洗浄を繰り
返し行った後、蒸留水に再溶解させ凍結乾燥して乾燥物
0.95gを得た。得られた乾燥物の理化学的性質を調べた
結果、下記に示すようであって、ＢＳ−５物質であると
確認された。なお、分子量の測定はＧＰＣモードの液体
クロマトグラフィーによって行った。
（Klebsiella planticola）JCM7251を、ラクトース3wt
%、トリプチケースペプトン0.35wt%、リン酸一カリウム
0.6wt%、硫酸マグネシウム0.07wt%および寒天1.4wt%か
ら成る斜面培地において増殖させたものを白金耳でかき
取り、上記培地において寒天を除いた液体培地10mlに接
種し、28℃で１日間振盪培養で前培養を行った。次い
で、上記前培養に用いたと同様な組成の液体培地を120
℃15分間加熱滅菌したもの100mlに上記前培養したもの
全量を無菌的に接種して、28℃で１日間振盪培養（180r
pm）を行った。培養の進行に伴い培養液は粘稠となり、
ＢＳ−５物質の生産、蓄積が認められた。得られた培養
液を18000rpmで15分間遠心分離を行って菌体を除去した
後、２倍量のエタノールを加えて淡褐色個体（ＢＳ−５
物質）を析出させた。この淡褐色固体（ＢＳ−５物質）
を遠心分離により採取し、エタノールによる洗浄を繰り
返し行った後、蒸留水に再溶解させ凍結乾燥して乾燥物
0.95gを得た。得られた乾燥物の理化学的性質を調べた
結果、下記に示すようであって、ＢＳ−５物質であると
確認された。なお、分子量の測定はＧＰＣモードの液体
クロマトグラフィーによって行った。
【００１４】a. 外観：白色ないし淡褐色粉末。 b. 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：80センチポイズ（0.8%水溶液、温度30℃、ず
り速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース14.1%、ガラクトー
ス33.3%、グルコース35.8%、グルクロン酸16.9%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： １万〜１０００万（カラム：Asahipak G
SM-700H×2＋GS-1b、移動 担：50mM NaNO3 ＋ 0.02wt%
NaN3、分子量標準品：プルラン）。 g. 元素分析値： Ｃ 37.1%、Ｈ 5.0%、Ｎ 0.4% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：80センチポイズ（0.8%水溶液、温度30℃、ず
り速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース14.1%、ガラクトー
ス33.3%、グルコース35.8%、グルクロン酸16.9%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： １万〜１０００万（カラム：Asahipak G
SM-700H×2＋GS-1b、移動 担：50mM NaNO3 ＋ 0.02wt%
NaN3、分子量標準品：プルラン）。 g. 元素分析値： Ｃ 37.1%、Ｈ 5.0%、Ｎ 0.4% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。
【００１５】「 ＢＳ−５物質の精製：上述のようにし
て得られたＢＳ−５物質0.95gを蒸留水に溶解し、遠心
分離器にかけた。この上清にエタノールを加えて白色固
体（ＢＳ−５物質）を再析出させる操作を2回繰り返し
て行った後、析出物を蒸留水に溶解した。この水溶液を
透析膜に入れ、純水に対して24時間透析を行い、つづい
て凍結乾燥を行い白色塊状の精製物0.60gを得た。得ら
れた精製物の理化学的性質は下記に示すとおりであっ
て、精製ＢＳ−５物質であると確認された。
て得られたＢＳ−５物質0.95gを蒸留水に溶解し、遠心
分離器にかけた。この上清にエタノールを加えて白色固
体（ＢＳ−５物質）を再析出させる操作を2回繰り返し
て行った後、析出物を蒸留水に溶解した。この水溶液を
透析膜に入れ、純水に対して24時間透析を行い、つづい
て凍結乾燥を行い白色塊状の精製物0.60gを得た。得ら
れた精製物の理化学的性質は下記に示すとおりであっ
て、精製ＢＳ−５物質であると確認された。
【００１６】a. 外観：無臭の白色粉末。 b. 溶解性： 水に易溶、メタノール、酢酸エチル、ク
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：130センチポイズ（0.8%水溶液、温度30℃、
ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース14.6%、ガラクトー
ス32.6%、グルコース35.9%、グルクロン酸16.9%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陰性。 f 分子量：２００万〜１０００万（カラム：Asahipak
GSM-700H×2＋GS-1b、移動 担：50mM NaNO3 ＋ 0.02wt
%NaN3、分子量標準品：プルラン）。 g 元素分析値：C 38.0%、H 5.3%、N 0.2% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：130センチポイズ（0.8%水溶液、温度30℃、
ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース14.6%、ガラクトー
ス32.6%、グルコース35.9%、グルクロン酸16.9%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陰性。 f 分子量：２００万〜１０００万（カラム：Asahipak
GSM-700H×2＋GS-1b、移動 担：50mM NaNO3 ＋ 0.02wt
%NaN3、分子量標準品：プルラン）。 g 元素分析値：C 38.0%、H 5.3%、N 0.2% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。
【００１７】
【実施例２】上記製造法で得られたＢＳ−５物質および
精製ＢＳ−５物質を市販のマウス（jcl/ICR 日本クレア
社）に投与して、ＢＳ−５物質の抗腫瘍活性の検定を行
った。５週令の雄マウスに腫瘍細胞サルコーマ 180G 株
を１×１０6ケの割合で移植した。この担癌マウスにＢＳ
−５物質の生理食塩水溶液を腹腔内投与した。投与は、
腫瘍細胞移植後、１、４、６、８、１２、１３、１５、
１８、２０日目まで計１０回行った。その後、移植２５
日目に解剖を行って、腫瘍組織を摘出し腫瘍重量を測定
した。対照として、同様の方法で生理食塩水を投与した
群の腫瘍重量を測定した。試験は一群につきマウス１０
匹で行い、腫瘍阻止率（ＩＲ）を下記式によって求め
た。 ＩＲ＝（対照群の腫瘍重量ー薬剤投与群の腫瘍重量）／
対照群の腫瘍重量×１００ ＢＳ−５物質の投与量は、マウスの体重１ｋｇ当たり
２．５〜２０ｍｇの範囲で変化させ、複数回試験を行っ
た。結果を表１に示した。
精製ＢＳ−５物質を市販のマウス（jcl/ICR 日本クレア
社）に投与して、ＢＳ−５物質の抗腫瘍活性の検定を行
った。５週令の雄マウスに腫瘍細胞サルコーマ 180G 株
を１×１０6ケの割合で移植した。この担癌マウスにＢＳ
−５物質の生理食塩水溶液を腹腔内投与した。投与は、
腫瘍細胞移植後、１、４、６、８、１２、１３、１５、
１８、２０日目まで計１０回行った。その後、移植２５
日目に解剖を行って、腫瘍組織を摘出し腫瘍重量を測定
した。対照として、同様の方法で生理食塩水を投与した
群の腫瘍重量を測定した。試験は一群につきマウス１０
匹で行い、腫瘍阻止率（ＩＲ）を下記式によって求め
た。 ＩＲ＝（対照群の腫瘍重量ー薬剤投与群の腫瘍重量）／
対照群の腫瘍重量×１００ ＢＳ−５物質の投与量は、マウスの体重１ｋｇ当たり
２．５〜２０ｍｇの範囲で変化させ、複数回試験を行っ
た。結果を表１に示した。
【００１８】 ここに示されるように、ＢＳー５物質は５ｍｇ／ｋｇ以
上の投与量において、９０％以上の高い腫瘍抑制活性を
持つことが分かる。
上の投与量において、９０％以上の高い腫瘍抑制活性を
持つことが分かる。
【００１９】
【発明の効果】本発明に係わるＢＳ−５物質およびそれ
をさらに精製した精製ＢＳ−５物質は、毒性の低い新規
な抗腫瘍性多糖類の供給素材として産業上有益な物質で
ある。
をさらに精製した精製ＢＳ−５物質は、毒性の低い新規
な抗腫瘍性多糖類の供給素材として産業上有益な物質で
ある。
Claims (4)
- 【請求項１】 クレブシェラ属（Klebsiella）に属する
微生物により生産される物質であって、下記性質を有す
ることを特徴とするＢＳ−５物質。 a. 外観：白色ないし淡褐色粉末。 b. 溶解性：水に易溶、メタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜200センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース10.8〜15.9%、ガラ
クトース29.1〜34.1%、グルコース31.2〜36.4%、グルク
ロン酸12.3〜19.1%。 e. 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性、ニンヒド
リン反応 陽性。 f. 分子量： 千〜1000万 g. 元素分析値： Ｃ 30.0〜40.0%、Ｈ 4.0〜6.0%、
Ｎ 0.1〜1.0% h. 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型
で測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、
1160、1040、930、850、820、790、700。 - 【請求項２】 下記性質を有する精製された、特許請求
の範囲第１項に記載のＢＳ−５物質： a. 外観：無臭の白色粉末。 b. 溶解性： 水に易溶、メタノール、酢酸エチル、ク
ロロホルム、ベンゼンに難溶、鉱酸により加水分解。 c. 粘度：1〜300センチポイズ（0.8%水溶液、温度30
℃、ずり速度79.6sec-1）。 d. 主要構成糖成分： ラムノース13.3〜15.9%、ガラ
クトース30.8〜34.1%、グルコース35.4〜36.4%、グルク
ロン酸14.5〜19.1%。 e 呈色反応：フェノール硫酸反応 陽性、カルバゾー
ル硫酸反応 陽性、モーリッシュ反応 陽性 ニンヒド
リン反応 陽性。 f 分子量：1万〜1000万。 g 元素分析値：C 31.0〜40.0%、H 4.5〜6.0%、N 0.
1〜1.0% h 赤外線吸光スペクトル（KBr錠剤法、日立260-50型で
測定）（ｃｍー1）：3400、2930、1610、1410、1310、12
00、1160、1080、1040、930、850、820、790、700。 - 【請求項３】 クレブシエラ属に属する微生物がクレブ
シエラ・プランティコーラ（Klebsiella planticola）J
CM7251である請求項１に記載のＢＳ−５物質。 - 【請求項４】 クレブシエラ属に属するＢＳ−５物質生
産菌を培養し、培養物からＢＳ−５物質を採取すること
を特徴とするＢＳ−５物質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12314993A JP2750993B2 (ja) | 1993-04-28 | 1993-04-28 | Ｂｓ−５物質およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12314993A JP2750993B2 (ja) | 1993-04-28 | 1993-04-28 | Ｂｓ−５物質およびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06313001A true JPH06313001A (ja) | 1994-11-08 |
| JP2750993B2 JP2750993B2 (ja) | 1998-05-18 |
Family
ID=14853404
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12314993A Expired - Lifetime JP2750993B2 (ja) | 1993-04-28 | 1993-04-28 | Ｂｓ−５物質およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2750993B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999048510A1 (fr) * | 1998-03-24 | 1999-09-30 | Tayca Corporation | Inhibiteur de la production d'anticorps d'immunoglobuline m et medicament contre la polyarthrite rhumatoide |
-
1993
- 1993-04-28 JP JP12314993A patent/JP2750993B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999048510A1 (fr) * | 1998-03-24 | 1999-09-30 | Tayca Corporation | Inhibiteur de la production d'anticorps d'immunoglobuline m et medicament contre la polyarthrite rhumatoide |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2750993B2 (ja) | 1998-05-18 |
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