JPH06153979A - Monoclonal antibody against fish iridovirus, hybridoma for producing the antibody and production method - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide a new monoclonal antibody useful for the diagnosis of infectious diseases with fish iridovirus. CONSTITUTION:The monoclonal antibody has a specificity to fish iridovirus and is obtained from the product of hybridoma HSM-803, HSM-804, HSM-805, HSM-807, HSM-808, HSM-809, etc. The exemplified antibody is IgM and K and has specificity to the liquid extracted from the spleen of a fish infected with fish iridovirus.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、魚類イリドウイルスに
対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するため
のハイブリドーマ及び方法に関するものである。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a monoclonal antibody against a fish iridovirus, a hybridoma and a method for producing the antibody.

【０００２】[0002]

【従来の技術】平成２年の夏、愛媛県のマダイ養殖場で
初めて確認された魚類イリドウイルスは、その後、感染
域を四国各地、九州各地へと広げ、更に、ハマチ、シマ
アジ、マダイ養殖場でも感染が認められるようになっ
た。本イリドウイルスによる被害は大量斃死を特徴とす
るため、本ウイルスの蔓延は養殖現場にとって致命的で
あり、その防疫法が強く望まれている。しかしながら、
これまでに治療法を含めた効果的な防疫法は見つかって
おらず、疾病の発生以前にウイルスを早期発見し、感染
魚を系外に排除することが重要である。また、本ウイル
スの感染経路は現在のところ不明であるが、垂直感染の
可能性があるとすれば、種苗生産の段階でウイルスを早
期発見し、ウイルスフリーの種苗を生産することが必要
となる。[Prior Art] In the summer of 1990, the fish iridovirus, which was first confirmed at the red sea bream farm in Ehime Prefecture, subsequently spread the infection area to various regions in Shikoku and Kyushu, and also to the hamachi, striped horse mackerel and red sea bream farms. However, the infection has come to be recognized. Since the damage caused by this iridovirus is characterized by mass mortality, the spread of this virus is fatal to the aquaculture site, and its epidemics law is strongly desired. However,
Up to now, no effective quarantine law including a treatment method has been found, and it is important to detect the virus early before the outbreak of the disease and eliminate the infected fish out of the system. In addition, although the infection route of this virus is currently unknown, if there is a possibility of vertical infection, it is necessary to detect the virus early in the seedling production stage and produce virus-free seedlings. .

【０００３】現在、イリドウイルスの診断には、脾臓の
顕微鏡観察が行われるが、この方法を用いると個体の殺
傷を伴うことになり、上記目的には適用できない。At present, the spleen is microscopically observed for the diagnosis of iridovirus, but if this method is used, the individual is killed and it cannot be applied to the above purpose.

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、個体が
検体採取後も生存できるように少量のサンプリングで済
み、かつ少量のサンプルで高感度にウイルスを検出でき
る診断法を確立するに当たって、モノクローナル抗体を
利用すべく検討を重ねた。その結果、特定のモノクロー
ナル抗体がこの目的に適合することを見出し、更に魚類
イリドウイルスで免疫された哺乳動物の免疫細胞と哺乳
動物の骨髄腫細胞とを融合して得られたハイブリドーマ
を用いて該モノクローナル抗体を製造する方法を確立し
て本発明を完成した。DISCLOSURE OF THE INVENTION The inventors of the present invention have established a diagnostic method that requires only a small amount of sampling so that an individual can survive after collecting a sample, and that can detect a virus with high sensitivity with a small amount of sample. Studies have been repeated to use a monoclonal antibody. As a result, it was found that a specific monoclonal antibody is suitable for this purpose, and further, using a hybridoma obtained by fusing mammalian immune cells immunized with fish iridovirus and mammalian myeloma cells, The present invention has been completed by establishing a method for producing a monoclonal antibody.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明の第一は、魚類イ
リドウイルスに特異性を有するモノクローナル抗体であ
り、本発明の第二は、魚類イリドウイルスで免疫された
哺乳動物の免疫細胞と哺乳動物の骨髄腫細胞とを融合し
て得られ、前記モノクローナル抗体を生産するハイブリ
ドーマであり、本発明の第三は、前記ハイブリドーマを
培養し、前記モノクローナル抗体を採取することを特徴
とするモノクローナル抗体の製造法である。The first aspect of the present invention is a monoclonal antibody having specificity for fish iridovirus, and the second aspect of the present invention is the immune cells and mammals of mammals immunized with the fish iridovirus. A hybridoma obtained by fusing with an animal myeloma cell, which produces the monoclonal antibody, and the third aspect of the present invention is to cultivate the hybridoma and collect the monoclonal antibody. It is a manufacturing method.

【０００６】本発明のモノクローナル抗体は、魚類イリ
ドウイルスを免疫抗原として免疫した哺乳動物の免疫細
胞と哺乳動物の骨髄腫細胞とを融合して得られるハイブ
リドーマを培養して該モノクローナル抗体を産生せし
め、該モノクローナル抗体を採取することにより得られ
る。上述の哺乳動物の免疫細胞は、免疫抗原として魚類
イリドウイルスを用いて通常の方法により哺乳動物を免
疫することにより調製される。ここで用いる哺乳動物と
しては特に制限はないが、細胞融合に使用する骨髄腫細
胞との適合性を考慮して選択するのが好ましく、一般的
にはマウス、ラット等が使用される。免疫方法も一般的
方法によって行われ、例えば、魚類イリドウイルスをリ
ン酸緩衝生理食塩水(PBS) 等の緩衝液で適当な濃度に希
釈し、フロイントのアジュバントとの懸濁液とし、皮下
注射によって動物に投与する。初回免疫の２〜５週間後
に追加免疫を行い、これを２〜数回繰り返す。免疫細胞
としては、最終免疫の約３日後に摘出した脾臓細胞から
取り出したリンパ球を使用するのが好ましい。また、前
記のごとくして得られる免疫細胞と融合される他方の親
細胞としての骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）としては既
知の細胞株、例えばマウス由来のNS-O、NS-1、SP-2/O、
P3-U1 、FO、S194等やラット由来のR210等が挙げられ
る。The monoclonal antibody of the present invention is produced by culturing a hybridoma obtained by fusing mammalian immune cells immunized with fish iridovirus as an immunogen and mammalian myeloma cells to produce the monoclonal antibody. Obtained by collecting the monoclonal antibody. The above-mentioned mammalian immune cells are prepared by immunizing mammals by a conventional method using fish iridovirus as an immunizing antigen. The mammal used here is not particularly limited, but is preferably selected in consideration of compatibility with myeloma cells used for cell fusion, and generally, mouse, rat and the like are used. The immunization method is also carried out by a general method, for example, a fish iridovirus is diluted to an appropriate concentration with a buffer solution such as phosphate buffered saline (PBS), made into a suspension with Freund's adjuvant, and subcutaneously injected. Administer to animals. Booster immunization is performed 2 to 5 weeks after the initial immunization, and this is repeated 2 to several times. As the immune cells, it is preferable to use lymphocytes taken out from splenocytes extracted about 3 days after the final immunization. Further, a cell line known as a myeloma cell (myeloma cell) as the other parent cell fused with the immune cell obtained as described above, for example, NS-O, NS-1, SP-2 derived from mouse / O,
P3-U1, FO, S194, etc. and rat-derived R210, etc. may be mentioned.

【０００７】前記免疫細胞と骨髄腫細胞との融合反応
は、基本的には公知の方法、例えばOi及びHerzenbergの
方法 (Selected Methods in Cellular Immunology, 351
-371,W. H. Freeman & Co., USA press, 1980) 等に準
じて行うことができる。より具体的には、前記融合反応
は、例えば融合促進剤の存在下に通常の栄養培地中で行
われる。ここで融合促進剤としては、通常用いられてい
るもの、例えばポリエチレングリコール(PEG) 、センダ
イウイルス(HVJ) 等が使用され、更に融合効率を高める
ためにジメチルスルホキシド(DMSO)等の補助剤を添加使
用することもできる。免疫細胞と骨髄腫細胞との使用比
は通常の方法と変わりがなく、例えば骨髄腫細胞に対し
免疫細胞を約１〜10倍の割合で用いればよい。前記融合
時の培地としては、例えば前記骨髄腫細胞株の増殖に使
用されるような RPMI-1640培地、MEM 培地、 E-RDF培
地、その他この種の細胞培養に使用される通常の各種培
地を利用でき、通常は牛胎児血清(FCS) 等の血液補液を
除いておくことが好ましい。融合は、前記免疫細胞と骨
髄腫細胞との所定量を前記培地中でよく混合し、予め37
℃に加温した PEG溶液、例えば平均分子量 1,000〜6,00
0 程度のものを、通常培地に約30〜60％(w/v) の濃度で
加えて混合することにより行われる。The fusion reaction between the immune cells and myeloma cells is basically a known method, for example, the method of Oi and Herzenberg (Selected Methods in Cellular Immunology, 351).
-371, WH Freeman & Co., USA press, 1980) and the like. More specifically, the fusion reaction is performed in an ordinary nutrient medium in the presence of, for example, a fusion promoter. As the fusion promoter, a commonly used one such as polyethylene glycol (PEG) or Sendai virus (HVJ) is used, and an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide (DMSO) is added to further enhance the fusion efficiency. It can also be used. The use ratio of immune cells to myeloma cells is the same as in the usual method, and for example, immune cells may be used at a ratio of about 1 to 10 times that of myeloma cells. Examples of the medium at the time of fusion include RPMI-1640 medium, MEM medium, E-RDF medium, and other various ordinary mediums used for cell culture of this kind, which are used for the growth of the myeloma cell line. It is possible to use, and it is usually preferable to remove a blood supplement such as fetal calf serum (FCS). The fusion is performed by thoroughly mixing a predetermined amount of the immune cells and myeloma cells in the medium,
PEG solution heated to ℃, for example, average molecular weight 1,000 ~ 6,00
It is carried out by adding about 0 to a medium at a concentration of about 30 to 60% (w / v) and mixing.

【０００８】所望の融合細胞（ハイブリドーマ）の分離
は、通常の選択用培地、例えばHAT（ヒポキサンチン、
アミノプテリン、チミジン）培地で培養することにより
行われる。かくして得られるハイブリドーマは、通常の
限界希釈法に従い、目的とする抗体の産生株の検索及び
単一クローン化が行われる。目的とする抗体産生ハイブ
リドーマの検索は、例えば間接免疫蛍光法、酵素結合免
疫吸着検定法(ELISA法）、中和反応法、沈降反応法、補
体結合反応法、凝集反応法、オクタロニー(Ouchterlon
y) 法、放射線免疫検定法(RIA法) 等の一般に抗体の検
出に用いられている種々の方法によって行われる。Isolation of the desired fused cells (hybridomas) is carried out by a usual selection medium such as HAT (hypoxanthine,
It is carried out by culturing in an aminopterin, thymidine) medium. The hybridoma thus obtained is subjected to a conventional limiting dilution method to search for a target antibody-producing strain and to carry out monocloning. Target antibody-producing hybridomas can be searched by, for example, indirect immunofluorescence method, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA method), neutralization reaction method, precipitation reaction method, complement fixation reaction method, agglutination reaction method, Ouchterlon (Ouchterlon).
y) method, radioimmunoassay method (RIA method), and various other methods generally used for antibody detection.

【０００９】前記のごとくして得られる本発明のモノク
ローナル抗体を産生するハイブリドーマは通常の培地で
継代培養ができ、また、液体窒素中で容易に長期間保存
が可能である。前記の特定ハイブリドーマから、本発明
のモノクローナル抗体を製造する方法としては、前記ハ
イブリドーマを常法に従って、例えば、２×10⁵ 細胞/m
l になるよう10％FCS 添加 E-RDF培地（村上浩紀ら，日
農化誌，58, 575, 1984)に懸濁後、35〜38℃の５％CO₂
インキュベーター内で培養し、その培養上清から所望抗
体を分離する方法、或は前記ハイブリドーマをこれと適
合性のある哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水より
所望抗体を分離する方法等が採用される。The hybridoma producing the monoclonal antibody of the present invention obtained as described above can be subcultured in an ordinary medium and can be easily stored in liquid nitrogen for a long period of time. As a method for producing the monoclonal antibody of the present invention from the above-mentioned specific hybridoma, the above-mentioned hybridoma is prepared according to a conventional method, for example, 2 × 10 ⁵ cells / m 2.
l-suspended in 10% FCS-supplemented E-RDF medium (Hiromura Murakami et al., Nihon Kagaku, 58 , 575, 1984), and 5% CO _{2 at} 35-38 ℃.
A method of culturing in an incubator and separating the desired antibody from the culture supernatant, or a method of administering the hybridoma to a mammal compatible with this and allowing it to proliferate and separating the desired antibody from the ascites fluid, etc. are adopted. To be done.

【００１０】以上のようにして得られる本発明のモノク
ローナル抗体は、魚類イリドウイルス感染魚脾臓抽出液
に特異性を有し、魚類イリドウイルス感染症の診断に有
用である。The monoclonal antibody of the present invention obtained as described above has specificity to a fish spleen extract infected with a fish iridovirus and is useful for diagnosing a fish iridovirus infection.

【００１１】[0011]

【実施例】次に、本発明を実施例により更に詳細に説明
するが、本発明はこれに限定されるものではない。 （実施例１） 魚類イリドウイルスに対するモノクロー
ナル抗体産生ハイブリドーマの作製 （有）奄美養魚より入手した魚類イリドウイルス感染シ
マアジより脾臓組織を摘出し、PBS を加えてホモジナイ
ズした後、0.45μm のフィルターを通すことにより魚類
イリドウイルスを含む脾臓抽出液を得た。この抽出液を
フロイントの完全アジュバント(Difco社製）と混合し、
蛋白質量として100 μg となるように５週令の雄のBALB
/c系マウスの腹腔内に注射した。その後、２週間おきに
同量の抽出液で追加免疫し、血中抗体価が充分に上昇す
るまで追加免疫を行った。抗魚類イリドウイルス抗体価
の上昇は、抗原として前記魚類イリドウイルス感染シマ
アジ脾臓抽出液、及び対照としての魚類イリドウイルス
非感染シマアジ脾臓抽出液を96穴マイクロタイタープレ
ートに各々 3.0μg/mlの蛋白質濃度でコーティングし、
ELISA を行い、対照との差が有意に認められることによ
り確認した（図１）。EXAMPLES Next, the present invention will be described in more detail by way of examples, but the present invention is not limited thereto. Example 1 Preparation of Monoclonal Antibody-Producing Hybridoma Against Fish Iridovirus Spleen tissue was removed from the fish iridvirus-infected striped horse mackerel obtained from Amami fish, homogenized with PBS, and then passed through a 0.45 μm filter. A spleen extract containing fish iridovirus was thus obtained. This extract was mixed with Freund's complete adjuvant (manufactured by Difco),
5-week-old male BALB so that the protein content is 100 μg
It was injected intraperitoneally into the / c mouse. After that, booster immunization was performed every two weeks with the same amount of extract, and booster immunization was performed until the antibody titer in blood was sufficiently increased. The increase in the anti-fish iridvirus antibody titer was determined by using the fish iridvirus-infected striped horse mackerel spleen extract as an antigen, and the fish ylide virus-uninfected striped horse mackerel spleen extract as a control, each having a protein concentration of 3.0 μg / ml in a 96-well microtiter plate. Coated with
An ELISA was performed and confirmed by the significant difference from the control (Fig. 1).

【００１２】抗魚類イリドウイルス抗体価が充分に上昇
した時点でマウスを解剖した。脾臓から無菌的に取り出
した２×10⁸ 個のリンパ球と、２×10⁷ 個の対数増殖期
にあるマウスミエローマ細胞P3-X63-Ag8-U1(P3-U1)とを
混合し、50％ PEG水溶液（分子量 1,000、和光純薬工業
製）を用いて融合させた。次いで、融合細胞を15％FCS
添加E-RDF 培地（極東製薬製）に、182ng/mlアミノプテ
リン、13.6μg/mlヒポキサンチン及び 3.9μg/mlチミジ
ンを添加した培地(HAT培地）を用い、37℃にて５％CO₂
インキュベーター中で14日間培養した。Mice were dissected when the anti-fish iridvirus antibody titer was sufficiently increased. 2 × 10 ⁸ lymphocytes aseptically removed from the spleen were mixed with 2 × 10 ⁷ mouse myeloma cells P3-X63-Ag8-U1 (P3-U1) in the logarithmic growth phase, and the mixture was 50%. Fusion was performed using an PEG aqueous solution (molecular weight 1,000, manufactured by Wako Pure Chemical Industries). The fused cells are then 15% FCS
Addition of 182ng / ml aminopterin, 13.6μg / ml hypoxanthine and 3.9μg / ml thymidine to the added E-RDF medium (manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) was used, and 5% CO ₂
The cells were cultured in an incubator for 14 days.

【００１３】HAT培地中で増殖してきたハイブリドーマ
の培養上清を50μl ずつ取り、魚類イリドウイルス感染
シマアジ脾臓抽出液及び対照の魚類イリドウイルス非感
染シマアジ脾臓抽出液を各々 3.0μg/mlの蛋白質濃度で
コーティングした96穴マイクロタイタープレート（ヌン
ク社製）に分注し、ELISA 法により抗魚類イリドウイル
ス特異的モノクローナル抗体産生ハイブリドーマをスク
リーニングした。なお、対照との発色の差が顕著なもの
（Ａ₄₀₅ の値が２倍以上のもの）、又は対照では全く発
色しないものを陽性とした。得られた陽性ハイブリドー
マは限界希釈法により２回クローニングした。50 μl each of the culture supernatants of hybridomas grown in HAT medium were taken, and a fish iridovirus-infected striped spleen extract and a control fish iridovirus-uninfected striped spleen extract were each added at a protein concentration of 3.0 μg / ml. It was dispensed into a coated 96-well microtiter plate (manufactured by Nunc), and an anti-fish iridovirus-specific monoclonal antibody-producing hybridoma was screened by the ELISA method. In addition, the case where the difference in color development from the control was remarkable (the value of A ₄₀₅ was 2 times or more) or the case where no color was developed in the control was defined as positive. The obtained positive hybridoma was cloned twice by the limiting dilution method.

【００１４】（実施例２） 抗魚類イリドウイルスモノ
クローナル抗体の生産 抗魚類イリドウイルスモノクローナル抗体産生ハイブリ
ドーマを２×10⁵ 細胞/ml になるよう10％FCS 添加E-RD
F 培地に懸濁後、37℃にて５％CO₂ インキュベーター中
で増殖限界（１×10⁶ 細胞/ml ）になるまで培養し、遠
心分離によって得られた培養上清を抗魚類イリドウイル
スモノクローナル抗体溶液とした。一回の培養で35〜50
μg/mlののモノクローナル抗体が得られた。 （実施例３） 抗魚類イリドウイルスモノクローナル抗
体の性質 （１）抗魚類イリドウイルスモノクローナル抗体の反応
性 実施例１において得られた陽性ハイブリドーマクローン
を、10％FCS 添加E-RDF 培地に各々２×10⁵ 細胞/ml に
なるよう懸濁し、37℃にて５％CO₂ インキュベーター中
で培養後、遠心分離して培養上清を回収した。Example 2 Production of Anti-Fish Iridovirus Monoclonal Antibody 10% FCS-supplemented E-RD containing 2 × 10 ⁵ cells / ml of a hybridoma producing anti-fish iridovirus monoclonal antibody was prepared.
After suspension in F medium, the cells were cultured at 37 ° C in a 5% CO ₂ incubator until the growth limit (1 x 10 ⁶ cells / ml) was reached, and the culture supernatant obtained by centrifugation was used as anti-fish iridovirus monoclonal antibody. An antibody solution was used. 35-50 in one culture
μg / ml of monoclonal antibody was obtained. (Example 3) Properties of anti-fish iridovirus monoclonal antibody (1) Reactivity of anti-fish iridovirus monoclonal antibody The positive hybridoma clones obtained in Example 1 were each added to 10% FCS-supplemented E-RDF medium in an amount of 2 × 10 5. ^The cells were suspended at ⁵ cells / ml, cultured at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator, and then centrifuged to collect the culture supernatant.

【００１５】（有）奄美養魚より入手した魚類イリドウ
イルス感染マダイ脾臓抽出液と静岡県栽培漁業センター
より入手した魚類イリドウイルス非感染マダイ脾臓抽出
液を96穴マイクロタイタープレートに 0〜6.0 μg 蛋白
質/ml の濃度でコーティングし、ELISA 法により反応性
を調べたところ、６つのハイブリドーマクローン(HSM-8
03、HSM-804 、HSM-805 、HSM-807 、HSM-808 、HSM-80
9)が産生するモノクローナル抗体（30μg/ml) は、魚類
イリドウイルス感染マダイ脾臓抽出液とのみ反応し、魚
類イリドウイルス非感染マダイ脾臓抽出液とは反応しな
かった（図２に例としてHSM-803 とHSM-807 についての
結果を示す）。このことから、これらのモノクローナル
抗体はシマアジのみならず広く他魚種における魚類イリ
ドウイルス感染診断にも使用できることが示唆された。(Presented) Fish iridovirus infected red sea bream spleen extract obtained from Amami cultured fish and fish iridovirus non-infected red sea bream spleen extract obtained from Shizuoka Prefectural Cultivation and Fisheries Center were added to a 96-well microtiter plate at 0-6.0 μg protein / When coated with a concentration of ml and the reactivity was examined by ELISA, it was confirmed that 6 hybridoma clones (HSM-8
03, HSM-804, HSM-805, HSM-807, HSM-808, HSM-80
The monoclonal antibody (30 μg / ml) produced by 9) reacted only with the spleen extract of red sea bream infected with fish iridovirus, and did not react with the spleen extract of red sea bream uninfected with fish iridovirus (for example, HSM- in FIG. 2). The results for 803 and HSM-807 are shown). This suggests that these monoclonal antibodies can be widely used not only for striped horse mackerel but also for diagnosis of fish iridovirus infection in other fish species.

【００１６】前記ハイブリドーマは、工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託され、以下の受託番号が付されて
いる。 ハイブリドーマ(hybridoma) HSM-803 微工研菌寄第 1
3251号 ハイブリドーマ(hybridoma) HSM-804 微工研菌寄第 1
3252号 ハイブリドーマ(hybridoma) HSM-805 微工研菌寄第 1
3253号 ハイブリドーマ(hybridoma) HSM-807 微工研菌寄第 1
3254号 ハイブリドーマ(hybridoma) HSM-808 微工研菌寄第 1
3255号 ハイブリドーマ(hybridoma) HSM-809 微工研菌寄第 1
3256号 （２）抗魚類イリドウイルスモノクローナル抗体のクラ
ス及び軽鎖のタイピング以上の実施例で得られた６種の
モノクローナル抗体のクラス及び軽鎖のタイピングは、
タイピングキット(Zymet社製）を用いて行った。その結
果、前記モノクローナル抗体は全てＩｇＭであり、軽鎖
はκであった。The hybridoma has been deposited at the Institute of Microbial Science and Technology of the Agency of Industrial Science and Technology and has the following deposit numbers. Hybridoma HSM-803 Microbiology Research Institute
No. 3251 hybridoma HSM-804 Microcosm Research Institute 1
No. 3252 hybridoma HSM-805 Microcosm Research Institute 1
3253 Hybridoma HSM-807 Microbiology Research Institute
No. 3254 hybridoma HSM-808 Microscopic Research Institute
No. 3255 hybridoma HSM-809 Microbiology Research Institute
No. 3256 (2) Typing of anti-fish iridovirus monoclonal antibody class and light chain The typing and light chain typing of the 6 kinds of monoclonal antibodies obtained in the above Examples are as follows.
It was performed using a typing kit (manufactured by Zymet). As a result, all the monoclonal antibodies were IgM and the light chain was κ.

【００１７】[0017]

【発明の効果】本発明によれば、魚類イリドウイルスに
対して特異性を示すモノクローナル抗体を提供すること
ができる。INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a monoclonal antibody showing specificity to a fish iridovirus.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】マウス血中抗体価の測定結果を示す図である。FIG. 1 is a diagram showing the measurement results of antibody titers in blood of mice.

【図２】ハイブリドーマHSM-803 及びHSM-807 が産生す
るモノクローナル抗体の反応性を示す図である。FIG. 2 is a diagram showing the reactivity of monoclonal antibodies produced by hybridomas HSM-803 and HSM-807.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ 9015−2Ｊ // Ｃ１２Ｎ 15/06 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 木村 省二 茨城県つくば市和台16−２ 大洋漁業株式 会社中央研究所内 (72)発明者 村上 浩紀 福岡県福岡市東区名島４−16−16─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification code Internal reference number FI Technical display location G01N 33/577 B 9015-2J // C12N 15/06 (C12P 21/08 C12R 1:91) ( 72) Inventor Shoji Kimura 16-2 Wadai, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture Central Research Institute, Ocean Fisheries Co., Ltd. (72) Inventor Hiroki Murakami 4-16-16 Najima, Higashi-ku, Fukuoka-shi, Fukuoka

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 魚類イリドウイルスに特異性を有するモ
ノクローナル抗体。1. A monoclonal antibody having specificity for a fish iridovirus. 【請求項２】 魚類イリドウイルス感染魚脾臓抽出液に
特異性を有するモノクローナル抗体。2. A monoclonal antibody having specificity to an extract of fish spleen infected with a fish iridovirus. 【請求項３】 魚類イリドウイルスで免疫された哺乳動
物の免疫細胞と哺乳動物の骨髄腫細胞とを融合して得ら
れるハイブリドーマによって生産され、以下の性質： (1) イリドウイルス感染シマアジ脾臓抽出液と反応する
が、イリドウイルス非感染シマアジ脾臓抽出液とは反応
しない。 (2) イリドウイルス感染マダイ脾臓抽出液と反応する
が、イリドウイルス非感染マダイ脾臓抽出液とは反応し
ない。 を有するモノクローナル抗体。3. The following properties produced by a hybridoma obtained by fusing immune cells of a mammal immunized with a fish iridovirus and myeloma cells of a mammal and having the following properties: (1) Iridovirus-infected striped horse mackerel spleen extract However, it does not react with the spleen extract of striped horse mackerel that is not infected with iridovirus. (2) Reacts with the spleen extract of red sea bream infected with Iridovirus, but does not react with the spleen extract of red sea bream infected with Iridovirus. A monoclonal antibody having: 【請求項４】 魚類イリドウイルスで免疫された哺乳動
物の免疫細胞と哺乳動物の骨髄腫細胞とを融合して得ら
れ、請求項１〜３のいずれか１項に記載のモノクローナ
ル抗体を生産するハイブリドーマ。4. The monoclonal antibody according to claim 1, which is obtained by fusing mammalian immune cells immunized with fish iridovirus and mammalian myeloma cells. Hybridoma. 【請求項５】 請求項４記載のハイブリドーマを培養
し、請求項１〜３のいずれか１項に記載のモノクローナ
ル抗体を採取することを特徴とするモノクローナル抗体
の製造法。5. A method for producing a monoclonal antibody, which comprises culturing the hybridoma according to claim 4 and collecting the monoclonal antibody according to any one of claims 1 to 3.