JPH06153956A - Silver fox growth hormone gene and its recombinant dna - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide a new gene suitable for the production of a growth hormone useful for promoting the growth of silver fox. CONSTITUTION:A silver fox growth hormone gene coding the polypeptide of formula. A c-DNA is synthesized from an m-RNA obtained from the pituitary gland of a silver fox of the family Canidae and integrated into phage lambdagt10. A gene bank library of cDNA is prepared by using the phage lambdagt10 as a vector. The objective growth hormone cDNA is selected and separated from the library by plaque hybridization selection using a mink growth hormone c DNA.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、シルバーフォックス成
長ホルモン遺伝子及びその組み換え体ＤＮＡに関する。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a silver fox growth hormone gene and its recombinant DNA.

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来、イヌ科に属するシルバーフォック
ス由来の成長ホルモン遺伝子の構造については、全く未
知であり、また該遺伝子の単離すらされていないのが実
情である。動物の成長ホルモンは動物の脳下垂体に存在
する成長を促進させる蛋白質ホルモンであり、精製した
成長ホルモンを元の動物に投与すると成長促進作用が見
られることが知られている。2. Description of the Related Art Conventionally, the structure of a growth hormone gene derived from a silver fox belonging to the family Canidae is completely unknown, and the fact is that the gene has not even been isolated. Animal growth hormone is a protein hormone that exists in the pituitary gland of animals and promotes growth. It is known that administration of purified growth hormone to the original animal has a growth promoting action.

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、遺伝子工学
的手法によりシルバーフォックス成長ホルモンを生産す
ることを目的として、その生産の元となるシルバーフォ
ックス成長ホルモン遺伝子を提供することである。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention aims to produce a silver fox growth hormone by a genetic engineering method, and to provide a silver fox growth hormone gene which is a source of the production.

【０００４】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者等は、シルバー
フォックス由来の成長ホルモンについて鋭意検討した結
果、この成長ホルモン遺伝子を単離し、その構造を決定
することに成功し、本発明を完成した。即ち、本発明
は、配列番号２で表されるポリぺプチドをコードするシ
ルバーフォックス成長ホルモン遺伝子にある。Means for Solving the Problems As a result of extensive studies on the growth hormone derived from silver fox, the present inventors succeeded in isolating this growth hormone gene and determining its structure, and completed the present invention. . That is, the present invention resides in the silver fox growth hormone gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2.

【０００５】さらに、本発明は、配列番号１で表される
シルバーフォックス成長ホルモン遺伝子にある。さら
に、本発明は、前記シルバーフォックス成長ホルモン遺
伝子をベクターＤＮＡに挿入した組み換え体ＤＮＡにあ
る。以下、本発明を詳細に説明する。Further, the present invention resides in the silver fox growth hormone gene represented by SEQ ID NO: 1. Further, the present invention resides in recombinant DNA in which the silver fox growth hormone gene is inserted into vector DNA. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

【０００６】先ず、本発明の遺伝子のドナーとして用い
るものとしては、例えば、イヌ科シルバーフォックス由
来の脳下垂体が挙げられる。上記シルバーフォックス脳
下垂体組織よりｍ−ＲＮＡの調製は、例えばプロナス
（Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)、第70巻、第3646頁(197
3)，ラボマニュアル遺伝子工学、村松正實、第70頁(198
8)記載の方法等により行われる。[0006] First, as a donor of the gene of the present invention, for example, a pituitary gland derived from a canine silver fox can be mentioned. Preparation of m-RNA from the above-mentioned Silver Fox pituitary tissue is carried out, for example, by Pronas (Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 70, 3646 (197).
3), Laboratory Manual Genetic Engineering, Masami Muramatsu, p. 70 (198
8) It is performed by the method etc. described.

【０００７】得られたｍ−ＲＮＡよりc-ＤＮＡを合成す
るには、例えば、モル・セル・バイオル（Mol.Cell.Bio
l.)、第2 巻、第161 頁(1982)およびジーン(Gene)、第25
巻、第263 頁(1983)記載の方法等により行なうことがで
きる。次いで、このようにして得られたc-ＤＮＡをベク
ターＤＮＡ、例えばファージλgt10( アマシャム社製）
等に組み込み、種々の組み換え体ファージＤＮＡを得
る。この組み換え体ファージＤＮＡを用いて例えば、c-
ＤＮＡクローニングシステムλgt10, アダプター法（ア
マシャム社製）記載の方法によりin vitro パッケージ
ング及び大腸菌(E.coli)Ｌ87( アマシャム社より入手)
等に形質導入することができる。To synthesize c-DNA from the obtained m-RNA, for example, Mol.Cell.Bio is used.
l.), Volume 2, p. 161, (1982) and Gene, 25.
Volume, page 263 (1983). Then, the c-DNA thus obtained is used as a vector DNA, for example, phage λgt10 (manufactured by Amersham).
Etc. to obtain various recombinant phage DNAs. Using this recombinant phage DNA, for example, c-
DNA cloning system λgt10, in vitro packaging and E. coli L87 (obtained from Amersham) by the method described in the adapter method (Amersham)
Etc. can be transduced.

【０００８】上記の種々な形質導入株よりシルバーフォ
ックス成長ホルモンをコードするc-ＤＮＡ( 以下、成長
ホルモンc-ＤＮＡという) を検出するには次の通り行な
う。λgt10をベクターとして作製したc-ＤＮＡのジーン
バンクのライブラリーから、プローブとしてミンク成長
ホルモンｃ- ＤＮＡ（B.B.R.C.,173,No.3,1200〜1204(1
990)参照)を用いてプラークハイブリダイゼーション・
セレクション( アマシャム・社・製Hybondブロッティン
グメンブランプロトコール) を行ない、成長ホルモンc-
ＤＮＡを選択、分離して得ることができる。The detection of c-DNA encoding silver fox growth hormone (hereinafter referred to as growth hormone c-DNA) from the above various transduced strains is carried out as follows. From a gene bank library of c-DNA prepared using λgt10 as a vector, mink growth hormone c-DNA (BBRC, 173, No.3,1200 to 1204 (1
990)) for plaque hybridization.
Selection (Hybond blotting membrane protocol manufactured by Amersham, Inc.) was performed, and growth hormone c-
It can be obtained by selecting and separating DNA.

【０００９】そして、このようにして得られた組み換え
体ファージＤＮＡよりシルバーフォックス由来の成長ホ
ルモンをコードする遺伝子( 以下、成長ホルモン遺伝子
という) を含有するＤＮＡを得るには、該ファージＤＮ
Ａに制限酵素、例えばＢamＨＩを温度30〜40℃、 好まし
くは37℃で1 〜24時間、好ましくは2 時間作用させ、得
られた反応終了液をアガロースゲル電気泳動〔モレキュ
ラー・クローニング（Molecular Cloning)、第150 頁、
コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー(Cold
Spring Habor Laboratory)(1982)記載〕にかけてシルバ
ーフォックス由来の成長ホルモン遺伝子を含有するＤＮ
Ａを得ることができる。In order to obtain a DNA containing a gene encoding a growth hormone derived from silver fox (hereinafter referred to as a growth hormone gene) from the thus obtained recombinant phage DNA, the phage DN is used.
A restriction enzyme such as BamHI is allowed to act on A at a temperature of 30 to 40 ° C., preferably 37 ° C. for 1 to 24 hours, preferably 2 hours, and the resulting reaction solution is subjected to agarose gel electrophoresis (Molecular Cloning). , Page 150,
Cold Spring Harbor Laboratory (Cold
Spring Habor Laboratory) (1982)] containing a growth hormone gene derived from silver fox
A can be obtained.

【００１０】一方、本発明において用いることのできる
ベクターＤＮＡとしては、いかなるものでもよく、プラ
スミドベクターＤＮＡ、バクテリオファージベクターＤ
ＮＡ等が挙げられるが、具体的には例えば、プラスミド
ｐＵＣ１１８、ｐＵＣ１１９、ｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ
II（STRATAGENE製）ＤＮＡ等が好ましい。上記ベクター
ＤＮＡに制限酵素、例えばＢamＨＩ等（宝酒造社製）を
作用させて消化し、切断されたベクターＤＮＡを得る。On the other hand, any vector DNA can be used in the present invention, including plasmid vector DNA and bacteriophage vector D.
NA and the like can be mentioned, and specifically, for example, plasmids pUC118, pUC119, pBLUESCRIPT.
II (STRATAGENE) DNA and the like are preferable. A restriction enzyme such as Bam HI (manufactured by Takara Shuzo Co., Ltd.) is allowed to act on the above vector DNA for digestion to obtain a cut vector DNA.

【００１１】次いで、上記シルバーフォックス由来の成
長ホルモン遺伝子を含有するＤＮＡと切断されたベクタ
ーＤＮＡを混合し、これに例えばＴ４ＤＮＡリガーゼ
（ベーリンガーマンハイム社製）を作用させて組み換え
体ＤＮＡを得る。この組み換え体ＤＮＡを用いて、例え
ば大腸菌Ｋ−12、好ましくは大腸菌JM109(宝酒造より入
手) 、XL1-Blue（フナコシより入手）等を形質転換して
夫夫の菌体を得る。この形質転換は、D.M.Morrisonの方
法(Methods in Enzymology, vol.68,326-331, 1979) に
より行なうことができる。Then, the DNA containing the growth hormone gene derived from the silver fox and the cleaved vector DNA are mixed, and T4 DNA ligase (manufactured by Boehringer Mannheim) is allowed to act on this to obtain a recombinant DNA. Using this recombinant DNA, for example, Escherichia coli K-12, preferably Escherichia coli JM109 (obtained from Takara Shuzo), XL1-Blue (obtained from Funakoshi) and the like are transformed to obtain the cells of the husband and wife. This transformation can be performed by the method of DM Morrison (Methods in Enzymology, vol.68, 326-331, 1979).

【００１２】そして、この成長ホルモン遺伝子の塩基配
列の決定は、後述の実施例の項目６に示す方法によって
行ない、配列番号１に表される塩基配列を確定し、そし
てその塩基配列から翻訳される配列番号２に表されるア
ミノ酸配列を確定した。Then, the nucleotide sequence of this growth hormone gene is determined by the method shown in item 6 of the below-mentioned example to determine the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1 and translate from the nucleotide sequence. The amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 was determined.

【００１３】[0013]

【発明の効果】本発明は、シルバーフォックス成長ホル
モン遺伝子及びそれを含む組み換え体ＤＮＡを提供す
る。そして、この組み換え体ＤＮＡを含む、例えば微生
物を培地中で培養することにより、極めて短時間の内
に、シルバーフォックス成長ホルモンを効率良く製造す
ることができ、本発明は産業上極めて有用なものであ
る。INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention provides a silver fox growth hormone gene and a recombinant DNA containing the same. By culturing, for example, a microorganism containing this recombinant DNA in a medium, silver fox growth hormone can be efficiently produced within an extremely short time, and the present invention is extremely useful industrially. is there.

【００１４】[0014]

【実施例】以下、本発明を実施例を挙げて更に詳細に説
明する。但し、本発明はこれら実施例によりその技術的
範囲が限定されるものではない。 実施例 シルバーフォックス成長ホルモンc-ＤＮＡの
クローニング （１）脳下垂体組織の取得 屠殺されたばかりのシルバーフォックス( 蔵王ミンク牧
場より入手)30 体より、直ちに脳下垂体を取り出し、脳
下垂体組織0.6gを得た。これを直ちに液体窒素に浸積
し、凍結させたものを‐80℃ディープフリーザー( 荏原
・社・製) に保存した。 （２）ＲＮＡの取得 項目１で得られた脳下垂体50mgから、モレキュラークロ
ーニング(Molecular Cloning) 、第7.19〜7.22頁、コー
ルドスプリングハーバーラボラトリー(Cold Spring Har
bor Laboratory)(1989) 記載の方法により処理し、150
μg のトータルＲＮＡを得た。 （３）c-ＤＮＡの合成 c-ＤＮＡの合成は、ベーリンガー・社・製キットを用い
て行なったものである。上述の如くして得られたＲＮＡ
60μgを用いてベーリンガー社の指示するジーン(Gen
e)、第25巻、第263頁(1983)記載の方法に従い処理した
結果、5 μg の2本鎖c-ＤＮＡが得られた。 （４）c-ＤＮＡライブラリーの作製 c-ＤＮＡライブラリーの作製は、アマシャム社製のcDNA
クローニングシステムλgt10, アダプター法のキットを
用いて行った。EXAMPLES The present invention will be described in more detail below with reference to examples. However, the technical scope of the present invention is not limited by these examples. Example Cloning of Silver Fox Growth Hormone c-DNA (1) Acquisition of Pituitary Tissue Pituitary tissue was immediately removed from 30 freshly slaughtered Silver Fox (obtained from Zao Mink Ranch) to obtain 0.6 g of pituitary tissue. Got This was immediately immersed in liquid nitrogen and frozen and stored in a -80 ° C deep freezer (manufactured by Ebara Co., Ltd.). (2) Acquisition of RNA From 50 mg of pituitary gland obtained in Item 1, Molecular Cloning, 7.19-7.22, Cold Spring Harbor Laboratory
Bor Laboratory) (1989)
μg of total RNA was obtained. (3) Synthesis of c-DNA The synthesis of c-DNA was carried out using a kit manufactured by Boehringer. RNA obtained as described above
Using 60 μg, the Boehringer directed gene (Gen
As a result of treatment according to the method described in e), Vol. 25, p. 263 (1983), 5 μg of double-stranded c-DNA was obtained. (4) Preparation of c-DNA library c-DNA library was prepared by Amersham cDNA
It was performed using a cloning system λgt10, adapter method kit.

【００１５】上述のごとくして得られたc-ＤＮＡ １μ
g を用いてアマシャム社の指示する方法に従い行った結
果、約200万のc-ＤＮＡライブラリーを得た。 （５）成長ホルモンc-ＤＮＡの断片の検索 プラークハイブリダイゼーション・セレクション〔アマ
シャム・社・製ハイボンド(Hybond)ブロッティングメン
ブランプロトコール〕に従って成長ホルモンc-ＤＮＡの
検索を行なった。以下に、詳述する。1 μ of c-DNA obtained as described above
As a result of carrying out according to the method instructed by Amersham using g, about 2 million cDNA libraries were obtained. (5) Search for Growth Hormone c-DNA Fragments Growth hormone c-DNA was searched according to plaque hybridization selection [Amersham, Hybond blotting membrane protocol]. The details will be described below.

【００１６】プラークハイブリダイゼーション・セレク
ションに用いるプローブはミンクc-ＤＮＡを元として、
デュポン社製のランダムプライマーエクステンションラ
ベリングシステム,NEP-103(RNDOM PRIMER EXTENSION LA
BELING SYSTEM,NEP-103)を用いて作製した。このプロー
ブを用いてプラークハイブリダイゼーション・セレクシ
ョン〔アマシャム・社・製ハイボンド(Hybond)ブロッテ
ィングメンブランプロトコール〕に従って項目３記載の
c-ＤＮＡライブラリー１万株についてシルバーフォック
ス成長ホルモンc-ＤＮＡの検索を行ない、ポジティブク
ローン１株を得た。 （６）シルバーフォックス成長ホルモン遺伝子の解析 単離したポジティブクローンのファージＤＮＡを常法(M
olecular Cloning,ed.Maniatis et al.,p.77 〜85, Col
d Spring Harbor Laboratory, USA, 1982) に従って調
製し、ＢamＨＩ、ＥcoＲＩ等の制限酵素で切断し、前述
の電気泳動により検討した。その結果、ＢamＨＩによる
切断にて表れる約800bp のＤＮＡ断片上にシルバーフォ
ックス成長ホルモン遺伝子が存在すると考えられた。そ
こで、この断片をアガロース電気泳動にかけ、GENECLEA
N II（フナコシ（株）より購入）により精製し、得られ
る断片をＢamＨＩで切断したpUC119に挿入し、組換え体
プラスミドpfGH300 得た（第１図参照）。また、この組
換え体プラスミドを常法に従い、XL1-Blueに形質転換を
行ない、形質転換体である大腸菌E.coli XL1-Blue(pFGH
300)を得た。なお、大腸菌E.coli XL1-Blue(pFGH300)は
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第4063号
（FERM BP-4063) として寄託されている。また、得られ
たプラスミドをKilo-Sequence 用deletion kit（宝酒造
より購入）及び 370 DNA Sequencing System（アプライ
ドバイオシステム社より購入）を用いて塩基配列の決定
を行った。決定した塩基配列を配列番号１に、また、該
塩基配列から翻訳されるポリペプチドのアミノ酸配列を
配列番号２に夫々示した。シルバーフォックス成長ホル
モン遺伝子は 648塩基のコーディング領域を持ち、216
個のアミノ酸をコードしていた。The probe used for plaque hybridization selection is based on mink c-DNA.
DuPont random primer extension labeling system, NEP-103 (RNDOM PRIMER EXTENSION LA
BELING SYSTEM, NEP-103) was used. Using this probe, according to plaque hybridization selection [Hybond blotting membrane protocol manufactured by Amersham, Inc.]
The 10,000 clones of the c-DNA library were searched for silver fox growth hormone c-DNA, and one positive clone was obtained. (6) Analysis of silver fox growth hormone gene The phage DNA of the isolated positive clone was analyzed by the conventional method (M
olecular Cloning, ed. Maniatis et al., p.77-85, Col
d Spring Harbor Laboratory, USA, 1982), cleaved with restriction enzymes such as Bam HI and Eco RI, and examined by the aforementioned electrophoresis. As a result, it was considered that the silver fox growth hormone gene was present on a DNA fragment of about 800 bp which was revealed by cleavage with Bam HI. Therefore, this fragment was subjected to agarose electrophoresis and GENECLEA
Purification by N II (purchased from Funakoshi Corporation), the resulting fragment was inserted into pUC119 cut with Bam HI to obtain recombinant plasmid PfGH300 (see FIG. 1). In addition, this recombinant plasmid was transformed into XL1-Blue according to a conventional method, and E. coli XL1-Blue (pFGH
I got 300). Escherichia coli E1-coli XL1-Blue (pFGH300) has been deposited at the Institute of Microbial Science and Technology, the Agency of Industrial Science and Technology, as Micro Engineering Research Article No. 4063 (FERM BP-4063). The nucleotide sequence of the obtained plasmid was determined using a Kilo-Sequence deletion kit (purchased from Takara Shuzo) and 370 DNA Sequencing System (purchased from Applied Biosystems). The determined nucleotide sequence is shown in SEQ ID NO: 1, and the amino acid sequence of the polypeptide translated from the nucleotide sequence is shown in SEQ ID NO: 2. The silver fox growth hormone gene has a coding region of 648 bases and 216
Coded for one amino acid.

【００１７】[0017]

【配列表】[Sequence list]

配列番号 １ 配列の長さ：648 配列の型 ：核酸 鎖の数 ：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：mRNA to cDNA 起源 生物名：シルバーフォックス（Vulpes vulpes) 配 列： ATG GCT GCA AGC CCT CGG AAC TCT GTG CTC CTG GCC TTC GCC TTG 45 CTC TGC CTG CCC TGG CCT CAG GAG GTG GGC GCC TTC CCG GCC ATG 90 CCC TTG TCC AGC CTG TTT GCC AAC GCC GTG CTC CGG GCC CAG CAC 135 CTG CAC CAA CTG GCT GCC GAC ACC TAC AAA GAG TTT GAG CGG GCG 180 TAC ATC CCC GAG GGA CAG AGG TAC TCC ATC CAG AAC GCG CAG GCC 225 GCC TTC TGC TTC TCG GAG ACC ATC CCG GCC CCC ACG GGC AAG GAC 270 GAG GCC CAG CAG CGA TCC GAC GTG GAG CTG CTC CGC TTC TCC CTG 315 CTG CTC ATC CAG TCG TGG CTC GGG CCC GTG CAG TTT CTC AGC AGG 360 GTC TTC ACC AAC AGC CTG GTG TTC GGC ACC TCA GAC CGA GTC TAC 405 GAG AAG CTC AAG GAC CTG GAG GAA GGC ATC CAA GCC CTG ATG CGG 450 GAG CTG GAA GAT GGC AGT CCC CGG GCC GGG CAG ATC CTG AAG CAG 495 ACC TAC GAC AAG TTT GAC ACG AAC CTG CGC AGT GAC GAT GCG CTG 540 CTT AAG AAC TAC GGG CTG CTC TCC TGC TTC AAG AAA GAC CTG CAT 585 AAG GCC GAG ACG TAC CTG CGG GTC ATG AAG TGT CGC CGC TTC GTG 630 GAA AGC AGC TGT GCC TTC 配列番号：２ 配列の長さ：216 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：タンパク質 起源： 生物名：シルバーフォックス 配列： Met Ala Ala Ser Pro Arg Asn Ser Val Leu Leu Ala Phe Ala Leu 1 5 10 15 Leu Cys Leu Pro Trp Pro Gln Glu Val Gly Ala Phe Pro Ala Met 20 25 30 Pro Leu Ser Ser Leu Phe Ala Asn Ala Val Leu Arg Ala Gln His 35 40 45 Leu His Gln Leu Ala Ala Asp Thr Tyr Lys Glu Phe Glu Arg Ala 50 55 60 Tyr Ile Pro Glu Gly Gln Arg Tyr Ser Ile Gln Asn Ala Gln Ala 65 70 75 Ala Phe Cys Phe Ser Glu Thr Ile Pro Ala Pro Thr Gly Lys Asp 80 85 90 Glu Ala Gln Gln Arg Ser Asp Val Glu Leu Leu Arg Phe Ser Leu 95 100 105 Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Gly Pro Val Gln Phe Leu Ser Arg 110 115 120 Val Phe Thr Asn Ser Leu Val Phe Gly Thr Ser Asp Arg Val Tyr 125 130 135 Glu Lys Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Ala Leu Met Arg 140 145 150 Glu Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Ala Gly Gln Ile Leu Lys Gln 155 160 165 Thr Tyr Asp Lys Phe Asp Thr Asn Leu Arg Ser Asp Asp Ala Leu 170 175 180 Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Ser Cys Phe Lys Lys Asp Leu His 185 190 195 Lys Ala Glu Thr Tyr Leu Arg Val Met Lys Cys Arg Arg Phe Val 200 205 210 Glu Ser Ser Cys Ala Phe 215 SEQ ID NO: 1 Sequence length: 648 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Double-stranded topology: Linear Sequence type: mRNA to cDNA Origin organism name: Silver fox (Vulpes vulpes) Sequence: ATG GCT GCA AGC CCT CGG AAC TCT GTG CTC CTG GCC TTC GCC TTG 45 CTC TGC CTG CCC TGG CCT CAG GAG GTG GGC GCC TTC CCG GCC ATG 90 CCC TTG TCC AGC CTG TTT GCC AAC GCC GTG CTC CGG GCC CAG CAC 135 CTG CAC CAA CTG GCT GCC GAC ACC TAC AAA GAG TTT GAG CGG GCG 180 TAC ATC CCC GAG GGA CAG AGG TAC TCC ATC CAG AAC GCG CAG GCC 225 GCC TTC TGC TTC TCG GAG ACC ATC CCG GCC CCC ACG GGC AAG GAC 270 GAG GCC CAG CAG CGA TCC GAC GAC GAG CTG CTC CGC TTC TCC CTG 315 CTG CTC ATC CAG TCG TGG CTC GGG CCC GTG CAG TTT CTC AGC AGG 360 GTC TTC ACC AAC AGC CTG GTG TTC GGC ACC TCA GAC CGA GTC TAC 405 GAG AAG CTC AAG GAC CTG GAG GAA GAC CAA GCC CTG ATG CGG 450 GAG CTG GAA GAT GGC AGT CCC CGG GCC GGG CAG ATC CTG AAG CAG 495 ACC TAC GAC AAG TTT GAC ACG AAC CTG CGC AGT GAC GAT GCG CTG 540 CTT AAG AAC TA C GGG CTG CTC TCC TGC TTC AAG AAA GAC CTG CAT 585 AAG GCC GAG ACG TAC CTG CGG GTC ATG AAG TGT CGC CGC TTC GTG 630 GAA AGC AGC TGT GCC TTC SEQ ID NO: 2 Sequence length: 216 Sequence type: Amino acid Topology: Unknown Sequence type: Protein Origin: Organism: Silver Fox Sequence: Met Ala Ala Ser Pro Arg Asn Ser Val Leu Leu Ala Phe Ala Leu 1 5 10 15 Leu Cys Leu Pro Trp Pro Gln Glu Val Gly Ala Phe Pro Ala Met 20 25 30 Pro Leu Ser Ser Leu Phe Ala Asn Ala Val Leu Arg Ala Gln His 35 40 45 Leu His Gln Leu Ala Ala Asp Thr Tyr Lys Glu Phe Glu Arg Ala 50 55 60 Tyr Ile Pro Glu Gly Gln Arg Tyr Ser Ile Gln Asn Ala Gln Ala 65 70 75 Ala Phe Cys Phe Ser Glu Thr Ile Pro Ala Pro Thr Gly Lys Asp 80 85 90 Glu Ala Gln Gln Arg Ser Asp Val Glu Leu Leu Arg Phe Ser Leu 95 100 105 Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Gly Pro Val Gln Phe Leu Ser Arg 110 115 120 Val Phe Thr Asn Ser Leu Val Phe Gly Thr Ser Asp Arg Val Tyr 125 130 135 Glu Lys Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Ala Leu Met Arg 140 145 150 Glu Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Ala Gly Gln Ile Leu Lys Gln 155 160 165 Thr Tyr Asp Lys Phe Asp Thr Asn Leu Arg Ser Asp Asp Ala Leu 170 175 180 Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Ser Cys Phe Lys Lys Asp Leu His 185 190 195 Lys Ala Glu Thr Tyr Leu Arg Val Met Lys Cys Arg Arg Phe Val 200 205 210 Glu Ser Ser Cys Ala Phe 215

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】組み換え体プラスミドpFGH300 の制限酵素開裂
地図を示す図。FIG. 1 is a diagram showing a restriction enzyme cleavage map of recombinant plasmid pFGH300.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 梅津 元昭 宮城県仙台市泉区松森字鹿島50−68 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued Front Page (72) Inventor Motoaki Umezu 50-68 Kashima, Matsumori, Izumi-ku, Sendai City, Miyagi Prefecture

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 配列番号２で表されるポリぺプチドをコ
ードするシルバーフォックス成長ホルモン遺伝子。1. A silver fox growth hormone gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2. 【請求項２】 配列番号１で表されるシルバーフォック
ス成長ホルモン遺伝子。2. A silver fox growth hormone gene represented by SEQ ID NO: 1. 【請求項３】 請求項１または請求項２記載のシルバー
フォックス成長ホルモン遺伝子をベクターＤＮＡに挿入
した組み換え体ＤＮＡ。3. A recombinant DNA in which the silver fox growth hormone gene according to claim 1 or 2 is inserted into a vector DNA.