JPH06100594A - 抗ヒトインフルエンザウイルス抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗ヒトインフルエンザウイルス抗体、及び免
疫原性人工ポリペプチドを提供する。 【構成】 ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１
及びＨ２Ｎ２のヘマグルチニン分子の幹領域を認識し、
中和活性を有するが、Ｈ３Ｎ２の幹領域を認識せず、中
和活性をもたない抗ヒトインフルエンザウイルス抗体。
Ｈ１Ｎ１及びＨ２Ｎ２の該幹領域と実質上同一の抗原性
を有する免疫原性人工ポリペプチド。 【効果】 抗体はＡ型ウイルスの診断、治療等に、ポリ
ペプチドはワクチンとして有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はヒトインフルエンザＡ型
ウイルスのヘマグルチニンに対する抗体、及びその抗体
の認識する抗原部位を含有するポリペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】インフルエンザウイルスには３つの型
（Ａ、Ｂ及びＣ）があり、インフルエンザの世界的な流
行を起こし、多くの死者がでるのはＡ型のヒトインフル
エンザウイルスによるものである。インフルエンザＡ型
ウイルスは更にウイルス表面タンパク質であるヘマグル
チニン( haemagglutinin：以下、ＨＡと略す）及びノイ
ラミニダーゼ（以下、ＮＡと略す）の抗原性により多く
のサブタイプに分類され、ヒトインフルエンザＡ型ウイ
ルスとしてはＨ１Ｎ１サブクラス、Ｈ２Ｎ２サブクラ
ス、Ｈ３Ｎ２サブクラスの３種が現在知られている。こ
のインフルエンザＡ型ウイルスのＨＡは、球状部領域(
head region ) と幹領域( stem region ) という二つの
構造の異なった領域で構成され、球状部領域は、ウイル
スが標的細胞に結合するための受容体結合部位を含みＨ
Ａの血球凝集活性に関与し、一方、幹領域は、ウイルス
のエンベロープと細胞のエンドソーム膜間の膜融合に必
要な融合ペプチドを含み、融合活性に関与している〔ウ
イリー( Wiley ) ら、アニュアル レビュー オブ バ
イオケミストリー( Ann. Rev.Biochem. ) 、第５６巻、
第３６５〜３９４頁（１９８７）〕。Ｈ１Ｎ１サブタイ
プ、Ｈ２Ｎ２サブタイプを認識する抗ＨＡ抗体として従
来取得された抗ＨＡ抗体は、そのすべてがＨＡの球状部
領域を認識するものである。しかし、この領域は最も抗
原変異が起こり易い部位であり、それ故、これらの抗体
はヒトインフルエンザＡ型ウイルスのサブタイプに共通
に反応するものでなく、また、ウイルスのＨＡの抗原変
化に伴い、認識性を消失するものである。一方、グリー
ン( Green ) らは、Ｈ３Ｎ２サブタイプの１種のＨＡの
幹領域のアミノ酸配列より、ポリペプチドを合成し、こ
のポリペプチドに対する抗体を取得しているが、これら
の抗体はウイルスの中和活性が弱く（特表昭５９−５０
１７１４号公報）、また抗原として使用したポリペプチ
ド自体も、Ｈ３Ｎ２サブタイプで免疫して得たウサギ抗
ウイルス血清に反応を示さず、抗原性の点でも問題があ
った〔セル( Cell )、第２８巻、第４７７〜４８７頁
（１９８２）〕。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】ヒトインフルエンザＡ
型ウイルスは周期的にＨＡとＮＡの型を変えて大流行を
引起こし、インフルエンザの流行期である冬期前にワク
チン接種を受けても、別の型のウイルスによるインフル
エンザが流行するためワクチンの効果が期待できないこ
とが多い。しかし、ＨＡ分子やＮＡ分子中の、ウイルス
のサブタイプに共通で、抗原変異の生じ難い抗原部位、
特に立体構造を認識し、かつ、ウイルスの中和活性を有
する抗体を得ることができれば、この抗体はＡ型ウイル
スの感染による発症の診断、予防並びに治療に利用で
き、かつ、該抗原部位自体も、ワクチンとして有用とな
る。本発明の目的は、インフルエンザＡ型ウイルスのサ
ブタイプに交さ認識性を有し、かつ、ウイルス中和活性
を有する抗体、及びワクチンとしても使用できる抗原部
位ポリペプチドを提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明は抗ヒトインフルエンザウイルス抗体
に関し、下記特性（ａ）及び（ｂ）を有することを特徴
とする。 （ａ）ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブ
タイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子の幹領域を認
識し、Ｈ３Ｎ２サブタイプのＨＡ分子の幹領域は認識し
ない。 （ｂ）ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブ
タイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプに中和活性を有し、Ｈ３
Ｎ２サブタイプには中和活性を有さない。 また本発明の第２の発明は免疫原性人工ポリペプチドに
関し、ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブ
タイプとＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子中の幹領域と実
質上同一の抗原性を有することを特徴とする。

【０００５】本発明者らは鋭意研究の結果、ヒトインフ
ルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ
２サブタイプのそれぞれの幹領域に、共通に保存された
抗原部位に対する抗体が、Ｈ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２
Ｎ２サブタイプのウイルスに強い中和活性を有し、該抗
体がインフルエンザの治療、予防に極めて有用であるこ
と、また該抗原部位を含有するポリペプチドはワクチン
として極めて有用であることを見出し、本発明を完成し
た。

【０００６】ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ
１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子幹領域
中の共通部位を認識し、該ウイルスを中和する、本発明
の抗体は、モノクローナル抗体として、次の様に調製す
ることができる。例えばマウス、モルモット、ウサギの
ような、ほ乳動物を下記抗原、Ｈ１Ｎ１サブタイプ又は
Ｈ２Ｎ２サブタイプより選択されるウイルス粒子、Ｈ１
Ｎ１サブタイプとしては例えばＡ／Bangkok ／１０／８
３、Ａ／Yamagata／１２０／８６、Ａ／Osaka／９３０
／８８、Ａ／Suita ／１／８９（以上、大阪大学微生物
病研究所保存株）、Ａ／ＰＲ／８／３４〔インフルエン
ザ（Ｈ１Ｎ１）、ＡＴＣＣ ＶＲ−９５〕、Ａ１／ＦＭ
／１／４７〔インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）、ＡＴＣＣ
ＶＲ−９７〕、Ａ／New Jersey／８／７６〔インフル
エンザＡ（Ｈ１Ｎ１）、ＡＴＣＣＶＲ−８９７〕、Ａ／
ＮＷＳ／３３〔インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）、ＡＴＣ
ＣＶＲ−２１９〕、Ａ／Weiss ／４３〔インフルエンザ
Ａ（Ｈ１Ｎ１）、ＡＴＣＣＶＲ−９６〕、Ａ／ＷＳ／３
３〔インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）、ＡＴＣＣ ＶＲ−
８２５〕、Ｈ２Ｎ２サブタイプとしては例えばＡ／Okud
a ／５７、Ａ／Adachi／２／５７、Ａ／Kumamoto／１／
６５、Ａ／Kaizuka ／２／６５、Ａ／Izumi／５／６５
（以上、大阪大学微生物病研究所保存株）、Ａ２／Japa
n ／３０５／５７〔インフルエンザＡ（Ｈ２Ｎ２）、Ａ
ＴＣＣ ＶＲ−１００〕、若しくはこれらのウイルスか
ら得られるＨＡ分子、若しくは遺伝子組換え技術を用い
て調製されるＨＡポリペプチド、若しくは本発明の抗体
の認識部位、すなわちＨＡ分子の幹領域の抗原部位を分
子内に含有する組換えポリペプチド、若しくは該部位を
分子内に含有する合成ポリペプチドで免疫し、得られた
脾臓細胞を、例えばマウスのミエローマ細胞と融合さ
せ、得られるハイブリドーマから、上述の各Ｈ１Ｎ１サ
ブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのウイルスに結合性及
び中和活性を有し、Ｈ３Ｎ２サブタイプのウイルス、例
えばＡ／Fukuoka ／Ｃ２９／８５、Ａ／Sichuan ／２／
８７、Ａ／Ibaraki ／１／９０、Ａ／Suita ／１／９０
（以上、大阪大学微生物病研究所保存株）、Ａ／Port C
halmers ／１／７３〔インフルエンザＡ（Ｈ３Ｎ２）、
ＡＴＣＣ ＶＲ−８１０〕、Ａ２／Aichi ／２／６８
〔インフルエンザＡ、ＡＴＣＣ ＶＲ−５４７〕、及び
Ｂ型のウイルス、例えばＢ／Nagasaki／１／８７（大阪
大学微生物病研究所保存株）、Ｂ／Allen ／４５〔イン
フルエンザＢ、ＡＴＣＣ ＶＲ−１０２〕には結合性及
び中和活性を有さず、かつＨ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２
Ｎ２サブタイプのＨＡ分子は認識するが、ＨＡ分子中の
球状部領域が関与する血球凝集活性は阻害せず、ＨＡ分
子中の幹領域が関与する膜融合活性は阻害する抗体産生
細胞を選択し、該細胞を培養することによって調製する
ことができる。

【０００７】このハイブリドーマの調製に関しては、ネ
ーチャー( Nature )、第２５６巻、第４９５〜４９７頁
（１９７５）を基に行う。免疫用マウスとしては、Balb
／ｃ系マウス、Balb／ｃ系マウスと他系マウスとのＦ１
マウスなどが用いられる。免疫はマウス１匹に対して、
例えばウイルス粒子（１００〜１０００ＨＡ単位）を抗
原として用い、２〜５月間に例えば３回行う。なおマウ
スの飼育及び脾臓細胞の採取は常法に従う。

【０００８】ミエローマ細胞としてはＳＰ２／０−Ａｇ
１４（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８１）、ｐ３×６３Ａｇ８
Ｕ．１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５９７）、ｐ３×６３Ａｇ
８（ＡＴＣＣ ＴＩＢ９）、ｐ３×６３−Ａｇ８．６５
３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８０）等が好適に用いられ
る。脾臓細胞とミエローマ細胞は１：１〜１０：１の割
合で混合し、融合はＮａＣｌ（約０．８５％）、ジメチ
ルスルホキシド〔１０〜２０％（ｖ／ｖ）〕及び分子量
１０００〜６０００のポリエチレングリコールを含有す
るリン酸緩衝液（ｐＨ７．２〜７．４）中で、両細胞の
混合物を３５〜３７℃で１〜５分間保温することによっ
て行う。融合細胞の選択は、ＨＡＴ培地を用い、生育し
てくる細胞として選択する。融合細胞のクローン化は限
界希釈法にて少なくとも３回繰返して行う。

【０００９】ハイブリドーマを通常の動物細胞と同様に
して培養すれば、その結果培地中に本発明の抗体を得る
ことができる。また該ハイブリドーマをプリスタン処理
のヌードマウス、又はBalb／ｃマウスの腹腔内に移植し
て増殖させることにより腹水中に本発明の抗体を蓄積さ
せることができる。すなわち、これらのマウス腹腔内に
プリスタン０．５〜１mgを接種し、その後２〜３週目に
腹腔に５×１０⁶ 〜１×１０⁷ 個のハイブリドーマを移
植する。通常７〜１０日後に腹水が蓄積し、これを採取
する。培養物及び腹水中のモノクローナル抗体は通常の
手段で精製される。

【００１０】得られたモノクローナル抗体はＨ１Ｎ１サ
ブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子の幹領域を
認識し、該ウイルスの膜融合活性を阻害することによ
り、該ウイルスを中和し、詳細には以下の性状を有して
いる。

【００１１】（ａ）染色試験により、Ｈ１Ｎ１サブタイ
プ及びＨ２Ｎ２サブタイプでそれぞれ感染したＭＤＣＫ
細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ３４）を認識し、Ｈ３Ｎ２サブ
タイプで感染したＭＤＣＫ細胞は認識しない。染色試験
は４種類の抗体（本発明のモノクローナル抗体、ウサギ
抗マウスイムノグロブリンＧ血清、ヤギ抗ウサギイムノ
グロブリンＧ血清、ペルオキシダーゼ−ウサギ抗ペルオ
キシダーゼ複合体）を用い、ジャーナル オブ クリニ
カル ミクロバイオロジー（Ｊ．Clin. Microbiol ) 、
第２８巻、第１３０８〜１３１３頁（１９９０）に記載
の方法に準じ行う。

【００１２】（ｂ）免疫沈降法により、Ｈ１Ｎ１サブタ
イプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子を認識し、Ｈ３
Ｎ２サブタイプのＨＡ分子は認識しない。

【００１３】（ｃ）血球凝集試験において、Ｈ１Ｎ１サ
ブタイプ、Ｈ２Ｎ２サブタイプ、Ｈ３Ｎ２サブタイプの
それぞれの血球凝集活性を阻害しない。

【００１４】（ｄ）ＨＡ分子をコードする遺伝子解析に
より特定される、Ｈ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブ
タイプのＨＡ分子中の幹領域に特有の共通保存領域を認
識し、Ｈ３Ｎ２サブタイプのＨＡ分子中の幹領域に特有
の共通保存領域は認識しない。

【００１５】ＨＡ分子をコードする遺伝子の解析は次の
様に行う。ウイルス粒子でＭＤＣＫ細胞を感染させ、翌
日感染細胞を集め、グアニジンイソチオシアネートを用
い、細胞中よりウイルスＲＮＡを抽出する。次に、Ｈ１
Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２各サブタイプの（−）鎖ＲＮ
Ａの３′末端に相補的な配列を含有するオリゴヌクレオ
チドプライマー、例えば配列表の配列番号５で表される
プライマー５を調製し、該プライマーを用いてｃＤＮＡ
を合成する。該ｃＤＮＡの増幅を行うため、Ｈ１Ｎ１、
Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２各サブタイプの（＋）鎖ＲＮＡの
３′末端に相補的な配列を含有するオリゴヌクレオチド
プライマー、例えば配列表の配列番号６で表されるプラ
イマー６を調製し、該プライマーとプライマー５を用い
て、ｃＤＮＡをＰＣＲ( Polymerase chain reaction )
法により、効率よく増幅することができる。増幅ＤＮＡ
中の約１．７kbp のＨＡ遺伝子をアガロースゲル電気泳
動で分離後、例えばプライマー５、６を用いセカンドＰ
ＣＲを行い、増幅ＤＮＡを、２０％（ｗ／ｖ）ポリエチ
レングリコール６０００／２．５Ｍ ＮａＣｌを用い遠
心分離し、沈殿精製画分を得る。次に、ウイルスの各サ
ブクラスのＨＡ遺伝子配列より選択したシークエンスプ
ライマーを調製し、該プライマーを〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰ
で標識した後、該標識プライマーと、前出の精製画分を
アニーリングさせ、サーマルサイクラーを利用したジデ
オキシ法〔バイオテクニクス( BioTechniques ) 、第９
巻、第６６〜７２頁（１９９０）〕にて塩基配列を決定
する。

【００１６】例えば配列表の配列番号７〜１４でそれぞ
れ表されるプライマー７〜１４はＨ１Ｎ１サブタイプ用
のシークエンスプライマーであり、配列表の配列番号１
５〜２３でそれぞれ表されるプライマー１５〜２３はＨ
２Ｎ２サブタイプ用のシークエンスプライマーであり、
配列表の配列番号２４〜２６でそれぞれ表されるプライ
マー２４〜２６はＨ３Ｎ２サブタイプ用のシークエンス
プライマーである。なお、ＰＣＲ用プライマーとしてプ
ライマー９、１３を使用し、シークエンスプライマーと
してプライマー１１、１２を使用することにより、Ｈ１
Ｎ１サブタイプのＨＡ分子の幹領域をコードする遺伝子
の一部が効率よく増幅され、解析される。また、ＰＣＲ
用プライマーとしてプライマー１７、２１を使用し、シ
ークエンスプライマーとしてプライマー１９、２０を使
用することによって、Ｈ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子の
幹領域をコードする遺伝子の一部が効率よく増幅され、
解析される。更に、ＰＣＲ用プライマーとしてプライマ
ー２４、２６を使用し、シークエンスプライマーとして
プライマー２５、２６を使用することによって、Ｈ３Ｎ
２サブタイプのＨＡ分子の幹領域をコードする遺伝子の
一部が効率よく増幅され、解析される。

【００１７】ウイルスサブタイプ間のＨＡ分子中の共通
保存領域としては、本発明者らが見出した、Ｈ１Ｎ１サ
ブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子中の幹領域
の配列表の配列番号１で表されるＴＧＬＲＮポリペプチ
ド配列と配列表の配列番号２で表されるGITNKVNSVIEKポ
リペプチド配列がある。図１にＨＡ分子の三次構造の模
式図〔ウィリー（ Wiley )ら、ネーチャー、第２８９
巻、第３７３〜３７８頁（１９８１）〕を示す。図中Ａ
領域、Ｂ領域で示す両ポリペプチド配列は、図１に示す
様にＨＡ分子の幹領域の中央で互に近接して位置してお
り、本発明の抗体の一例のモノクローナル抗体Ｃ１７９
は、該ＨＡ分子中の幹領域の配列表の配列番号１で表さ
れるＴＧＬＲＮポリペプチド配列と配列表の配列番号２
で表されるGITNKVNSVIEKポリペプチド配列とを認識す
る。

【００１８】（ｅ）中和活性試験において、Ｈ１Ｎ１サ
ブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのプラーク形成能又は
フォーカス形成能を阻害し、Ｈ３Ｎ２サブタイプのプラ
ーク形成能、又はフォーカス形成能は阻害しない。中和
活性試験は前出のジャーナルオブ クリニカル ミクロ
バイオロジー記載のプラークリダクション中和試験又は
インフルエンザウイルス迅速フォーカスリダクション中
和試験で行う。すなわち、抗体とウイルスとを混合し、
一定時間保温した後、ＭＤＣＫ細胞に感染させ、プラー
ク又はフォーカスの出現の減少より、中和能を判定す
る。

【００１９】（ｆ）融合活性試験において、Ｈ１Ｎ１サ
ブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプの膜融合活性を阻害
し、Ｈ３Ｎ２サブタイプの膜融合活性は阻害しない。融
合活性試験はネーチャー、第３００巻、第６５８〜６５
９頁（１９８２）記載の方法に準じ行う。すなわちＣＶ
−１細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０）にウイルスを感染さ
せた後、抗体処理を行い、ポリカリオン形成の有無で融
合活性阻害能を判定した。

【００２０】本発明による抗体はＨＡ分子中の幹領域に
結合し、Ｈ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプの
膜融合活性を阻害し、該ウイルス株の感染力を強力に中
和する。したがって本発明による抗体はＨ１Ｎ１サブタ
イプ、Ｈ２Ｎ２サブタイプによるインフルエンザの予
防、及び治療に使用することができる。この時、該抗体
は通常成人に対して約０．５〜５０００mg、好ましくは
５〜５００mgを投与すればよい。本発明の抗体は常用の
賦形剤、生理食塩水、ブドウ糖液、マンニトール、メチ
ルセルロース、ゼチラン等と混合することにより製剤化
される。本剤は凍結乾燥品であることができ、これは使
用直前生理食塩水、５％ブドウ糖液、リンゲル液等の等
張液により再溶解することができる。また、ヒトに対し
ては本発明の抗体はキメラ化した、ヒト人体において異
物として認識され難いキメラ抗体として用いるのが好ま
しく、更に抗原認識部位のみをヒト型抗体に移植した人
工抗体として用いるのが好適である。

【００２１】また、本発明の抗体を誘導するポリペプチ
ドはインフルエンザ用のワクチンとして使用することが
できる。すなわち、Ｈ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サ
ブタイプのＨＡ分子中の幹領域と実質上同一の抗原性を
有するポリペプチドを免疫原として用いれば、Ｈ１Ｎ１
サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのインフルエンザの
流行を予防、治療することができる。該免疫原性ポリペ
プチドとしては、Ｈ１Ｎ１サブタイプ、Ｈ２Ｎ２サブタ
イプより調製されるＨＡ分子、遺伝子組換え技術により
調製されるＨＡポリペプチド、ＨＡ分子やＨＡポリペプ
チドの酵素分解により調製される幹領域ポリペプチド等
が使用できる。また、遺伝子組換え技術や化学合成法に
より、分子内に配列表の配列番号１で表されるＴＧＬＲ
Ｎポリペプチド配列及び配列表の配列番号２で表される
GITNKVNSVIEKポリペプチド配列を有し、該配列の立体配
置が天然のＨＡ分子中の、これらの配列と実質上同一の
抗原性を有する立体配置であるポリペプチドを調製し、
使用しても良い。例えばウイルスのＲＮＡより、ＨＡ遺
伝子を調製し、該遺伝子を制限酵素で切断し、ベクター
に組込み、動物細胞、例えばＣＶ−１細胞で発現させる
ことによって、目的のポリペプチドを得ることができ
る。

【００２２】これらのポリペプチドをワクチンとして使
用する場合、適当なキャリアーを選択すれば、その抗原
性を上昇させることができる。キャリアーとしては例え
ばアルブミン、ポリアミノ酸等を用いれば良い。本発明
のワクチンは従来の能動免疫方式で投与され得、すなわ
ち投与調剤に適合可能な方法で、予防、治療に有効で免
疫原性を有する量を１回又は頻数回投与される。またワ
クチンは通常の製剤化を行えば良く、また、免疫応答を
向上するためのアジュバントを含んでいても良い。

【００２３】

【実施例】以下に本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

【００２４】実施例１ ウイルスの調製 Ｈ１Ｎ１サブタイプとしてＡ／ＰＲ／８／３４、Ａ／Ba
ngkok ／１０／８３、Ａ／Yamagata／１２０／８６、Ａ
／Osaka ／９３０／８８、Ａ／Suita ／１／８９、Ａｌ
／ＦＭ／１／４７、Ｈ２Ｎ２サブタイプとしてＡ／Okud
a ／５７、Ａ／Adachi／２／５７、Ａ／Kumamoto／１／
６５、Ａ／Kaizuka ／２／６５、Ａ／Izumi ／５／６
５、Ｈ３Ｎ２サブタイプとしてＡ２／Aichi ／２／６
８、Ａ／Fukuoka ／Ｃ２９／８５、Ａ／Sichuan ／２／
８７、Ａ／Ibaraki ／１／９０、Ａ／Suita ／１／９
０、Ｂ型ウイルスとしてＢ／Nagasaki／１／８７を用
い、それぞれを１１日齢の発育鶏卵の尿膜腔内に接種
し、３４℃で４日間培養後、各ウイルスを採取した。

【００２５】実施例２ モノクローナル抗体の調製 （１）実施例１で調製したＡ／Okuda ／５７のウイルス
（３２０ＨＡ単位）をフロイント完全アジュバントに使
用前に懸濁し、１か月間隔で、Balb／ｃマウス腹腔内注
射により、２度免疫し、その１か月後に、同抗原（３２
０ＨＡ単位）のPBS 懸濁液を用い腹腔内注射しブースト
した。その３日後に、マウスより脾臓を摘出し、脾細胞
を調製した。マウスミエローマとしてはｐ３×６３Ａｇ
８を１０％牛胎児血清添加ＤＭＥ培地で継代後２日間培
養したものを、細胞融合前に生理食塩水で洗浄し、調製
した。次に脾細胞とミエローマ細胞を細胞数１：５の割
合で混合し、遠心分離して上清を除き、沈殿した細胞塊
を充分ほぐした後、かくはんしながら、１mlの混合液
〔ポリエチレングリコール−４０００（２ｇ）、ＭＥＭ
（２ml）、ジメチルスルホキシド〕に加え、５分間３７
℃に保温した後、液の全量が１０mlになるようにゆっく
りＭＥＭを加えた。次に、遠心分離後、上清を除き、ゆ
るやかに細胞をほぐした。これに正常培地〔ＰＲＭＩ−
１６４０に牛胎児血清１０％を加えたもの〕３０mlを加
え、メスピペットを用いてゆるやかに細胞を懸濁した。

【００２６】懸濁液を９６穴の培養プレートに分注し、
５％のＣＯ₂ を含む培養器中で、３７℃で２４時間培養
した。次にＨＡＴ培地を加え、１０〜１４日間培養し
た。続いて培養上清の一部を採り、ハイブリドーマのス
クリーニングを行った。

【００２７】（２）インフルエンザＡ型ウイルスのサブ
タイプ間で交さ反応するモノクローナル抗体を得るため
に、希釈していない、上記培養上清を１次抗体として用
い、３種のサブタイプ（Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ
２）のそれぞれに感染したＭＤＣＫ細胞の染色試験を行
った。染色試験は前出のジャーナル オブ クリニカル
ミクロバイオロジーに記載の方法に準じて行った。すな
わち９６穴マイクロタイタープレート（ファルコン３０
７２：ベクトン ディキンソン社製）上で、ヒトインフ
ルエンザＡ型ウイルスの各サブタイプ株（Ｈ１Ｎ１：Ａ
／yamagata／１２０／８６、Ｈ２Ｎ２：Ａ／Okuda ／５
７、Ｈ３Ｎ２：Ａ／Fukuoka ／Ｃ２９／８５）に感染さ
せたＭＤＣＫ細胞を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄後、
無水エタノールで室温下、１０分間固定し、次にこれら
を４種類の抗体〔モノクローナル抗体を含有する前記培
養上清、ウサギ抗マウスイムノグロブリンＧ血清（オル
ガノテクニカ社製）の１０００倍希釈液、ヤギ抗ウサギ
イムノグロブリンＧ血清（オルガノテクニカ社製）の５
００倍希釈液、ペルオキシダーゼ−ウサギ抗ペルオキシ
ダーゼ複合体（オルガノテクニカ社製）の１０００倍希
釈液〕で連続的に、４０分間ずつ反応させ、ＰＢＳで洗
浄した。最後にペルオキシダーゼ反応を、０．０１％の
Ｈ₂ Ｏ₂ と０．３mg／mlの３，３′−ジアミノベンジジ
ン四塩酸のＰＢＳ溶液を用い、グラハム、カルノフスキ
ー( Graham、Karnovsky ) の方法〔ジャーナル オブ
ヒストケミストリー アンド サイトケミストリー
（Ｊ．Histochem. Cytochem. )、第１４巻、第２９１〜
３０２頁（１９６６）〕で行った。染色された細胞は通
常の光学顕微鏡で観察し、Ｈ１Ｎ１サブタイプ感染のＭ
ＤＣＫ細胞及びＨ２Ｎ２サブタイプ感染のＭＤＣＫ細胞
をそれぞれ認識する抗体を選抜した。次に該抗体産生の
確認された細胞が増殖している穴の細胞を取り出し、限
界希釈法を３回行い、目的の細胞をクローニングし、ク
ローニングされたハイブリドーマ株をHybridoma Ｃ１７
９、該ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体を
モノクローナル抗体Ｃ１７９と命名した。

【００２８】（３）プリスタン処理したBalb／ｃマウス
に上記ハイブリドーマ株を５×１０⁶個／匹マウスの腹
腔内に投与した。１０〜２１日後に、腹水ガンが誘発さ
れたマウスから腹水を採り、３０００rpm ／５分の遠心
処理により固型成分を除去し、腹水液を調製した。腹水
液１ml中には約５mgのモノクローナル抗体Ｃ１７９（以
下、単にＣ１７９と略す）が含有されていた。Ｃ１７９
はプロテインＡ−セファロース４Ｂ（ファルマシア社
製）で精製され、ＩｇＧ２ａタイプの抗体であった。

【００２９】実施例３ モノクローナル抗体の性状 （１）実施例２−（３）記載の腹水液の１００倍希釈液
を段階希釈し、実施例２−（２）記載の染色試験を行
い、Ｃ１７９の抗原認識性を検討した。Ｈ１Ｎ１サブタ
イプとしてはＡ／ＰＲ／８／３４、Ａ／Bangkok ／１０
／８３、Ａ／Yamagata／１２０／８６、Ａ／Osaka ／９
３０／８８、Ａ／Suita ／１／８９、Ｈ２Ｎ２サブタイ
プとしてはＡ／Okuda ／５７、Ａ／Adachi／２／５７、
Ａ／Kumamoto／１／６５、Ａ／Kaizuka ／２／６５、Ａ
／Izumi ／５／６５、Ｈ３Ｎ２サブタイプとしてＡ／Ai
chi ／２／６８、Ａ／Fukuoka ／Ｃ２９／８５、Ａ／Si
chuan／２／８７、Ａ／Ibaraki ／１／９０、Ａ／Suita
／１／９０、更にインフルエンザＢ型ウイルスとして
Ｂ／Nagasaki／１／８７を用いた。Ｃ１７９はすべての
Ｈ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプを認識し、
Ｈ３Ｎ２サブタイプ、Ｂ型ウイルスは認識しなかった。

【００３０】（２）抗体の中和活性測定は前出のインフ
ルエンザウイルス迅速フォーカスリダクション中和試験
を、アーカイブズ オブ ビロロジー( Arch. Virol.
)、第８６巻、第１２９〜１３５頁（１９８５）、ミク
ロバイオロジー アンド イムノロジー( Microbiol. I
mmunol. ) 、第２９巻、第３２７〜３３５頁（１９８
５）に準じて行った。抗体としては実施例２−（３）の
腹水液を用い、該抗体は使用前に３倍容のレセプター分
解酵素（ＲＤＥ：武田薬品工業社製）溶液を加え、３７
℃、１８時間反応後、５６℃、４５分間の加熱処理でＲ
ＤＥを失活させ、最終的に腹水液の１６倍希釈液として
調製し、被検液とし、次の様に測定を行った。

【００３１】すなわち９６穴マイクロプレートにＭＤＣ
Ｋ細胞を１０⁴ 個／穴、分注し、翌日、前記抗体（１６
倍希釈液）の４段階希釈液と、３０フォーカス形成単位
／穴に調製した実施例３−（１）記載のそれぞれのウイ
ルス液を等量混合し、３７℃で１時間保温した。次にこ
の混合液の２５μｌを、前記ＭＤＣＫ細胞の入ったマイ
クロタイタプレートの各穴に分注し、３０分間、３７℃
で保温した。次に各穴中の溶液を除去し、ＰＢＳで各穴
を洗浄し、次に０．５％トラガカンスガム（和光純薬）
及び５μｇ／mlのトリプシンを含有するＭＥＭを添加し
た。３７℃で２０〜２４時間、保温後、添加液を除去
し、各穴をＰＢＳで洗浄後、細胞を、室温下、無水エタ
ノールで１０分間処理し、細胞を固定した。次に乾燥
し、実施例２−（２）記載の染色試験に準じ、細胞の染
色を行った。染色後、細胞を水道水で洗浄し、乾燥後、
光学顕微鏡下、染色されたフォーカス数を、計測した。

【００３２】Ｃ１７９は、すべてのＨ１Ｎ１サブタイプ
及びＨ２Ｎ２サブタイプのフォーカス形成を阻害し、強
いウイルス中和活性を示し、一方、Ｈ３Ｎ２サブタイ
プ、Ｂ型ウイルスのフォーカス形成には影響を与えなか
った。また、プラークリダクション中和試験においても
同様な結果を示した。

【００３３】（３）抗体の血球凝集阻害活性（ＨＩ）は
次の様に行った。実施例３−（２）と同様にＲＤＥ処理
した抗体（３２倍希釈液）を用い、段階希釈液を調製
し、次に実施例３−（１）記載の各ウイルス（１６ＨＡ
単位）と混合し、室温で３０分間反応させた。その後、
ニワトリ赤血球を加えよく混和し、各ウイルスの血球凝
集活性に及ぼす抗体の影響を検討した。Ｃ１７９はすべ
てのサブタイプのウイルスの血球凝集活性に影響を与え
なかった。

【００３４】（４）抗体の融合阻止活性測定は前出のネ
ーチャー、第３００巻、第６５８〜６５９頁（１９８
２）の方法を改変し行った。すなわち、ＣＶ−１細胞の
モノレーヤー培養物に、実施例３−（１）記載の各ウイ
ルス株をそれぞれ感染させた。２４時間後に、細胞をＤ
ＭＥＭで２回洗浄し、次にトリプシン添加（１０μｇ／
ml）のＤＭＥＭ中で１５分間、３７℃で保温した。次に
細胞をＤＭＥＭで２度洗浄後、実施例２−（３）の腹水
液のＤＭＥＭ希釈液を添加し、３７℃で３０分間保温し
た。その後、細胞を、ｐＨ５．０に調整した融合培地
（Ｎａ₂ ＣＯ₃ 無添加のＰＲＭＩ、０．２％ウシ血清ア
ルブミン、１０mM ＭＥＳ、１０mM ＨＥＰＥＳ）に
て、３７℃、２分間処理し、続いて、ＤＭＥＭで２回洗
浄し、融合培地を除去した後、２％ウシ胎児血清を含む
ＤＭＥＭで３７℃、３時間保温した。次に、無水メタノ
ールで細胞を固定し、ギムザ染色した後、光学顕微鏡で
ポリカリオン形成の有無を判定した。Ｃ１７９は、すべ
てのＨ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのポリ
カリオン形成を阻止し、Ｈ３Ｎ２サブタイプ及びＢ型ウ
イルスのポリカリオン形成は阻止しなかった。

【００３５】以上、Ｃ１７９はＨ１Ｎ１サブタイプ、Ｈ
２Ｎ２サブタイプを特異的に認識し、ウイルスの膜融合
を阻害し、中和活性を示す抗体であった。これらの結果
を表１に示す。

【００３６】

【表１】

【００３７】表中の数字は実施例２−（３）の腹水液の
希釈倍数であり、染色力価は染色試験で細胞を染色可能
な該腹水液の最大希釈倍数、中和活性においては対照の
抗体無添加区のフォーカス数の半分まで、フォーカスの
出現を抑制可能な該腹水液の最大希釈倍数を示す。また
＋はポリカリオン形成が１０００倍希釈の該腹水液の抗
体溶液で完全に阻害されることを意味し、−は１０倍希
釈の該腹水液を用いた時にも全く阻害がみられなかった
ことを意味する。また、３２倍希釈の該腹水液を用いて
もＨＩ活性は認められない。

【００３８】実施例４ エピトープの決定 （１）Ｃ１７９の認識タンパク質がＨＡ分子であること
を免疫沈降反応によって決定した。すなわち、Ｈ２Ｎ２
サブタイプのＡ／Okuda ／５７を３０分間ＭＤＣＫ細胞
に吸着、感染させた後、培地中のメチオニンを１０μCi
の「³⁵Ｓ〕メチオニンで置換したＭＥＭで２４時間培養
し、感染細胞を標識した。次に該細胞を集め、次にＲＩ
ＰＡ緩衝液〔５０mMトリス（ｐＨ７．４）、１５０mM
ＮａＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、１％ノニデットＰ−４０、
１％デオキシコール酸、０．１％ＳＤＳ〕に再懸濁し
た。続いて不溶物を遠心除去した後、上清を得た。次に
該上清をＣ１７９と混合し、１時間、４℃で保温した
後、プロテインＡ−セファロースＣＬ４Ｂビーズを添加
し、室温で２時間保持し、免疫沈降物をビーズに吸着さ
せた。次に該ビーズを集め、ＲＩＰＡ緩衝液で５回洗浄
した後、沸騰し、Ｃ１７９の結合タンパク質を遊離させ
た。次に該タンパク質のＳＤＳ−１２．５％ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動を行い、ゲルを固定し、１Ｍサリ
チル酸ナトリウムに浸してから乾かし、オートラジオグ
ラフィーを行った。Ｃ１７９の結合する標識タンパク質
は、その電気泳動パターンより、Ａ／Okuda ／５７のＨ
Ａ分子と同定された。同様の試験をＨ１Ｎ１サブタイ
プ、他のＨ２Ｎ２サブタイプ、Ｈ３Ｎ２サブタイプをそ
れぞれ用い行った。Ｃ１７９はすべてのＨ１Ｎ１サブタ
イプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのＨＡ分子と特異的に免疫
沈降したが、Ｈ３Ｎ２サブタイプのＨＡ分子とは結合性
を示さなかった。

【００３９】（２）Ｃ１７９存在下でＨ１Ｎ１サブタイ
プ又はＨ２Ｎ２サブタイプで感染させたＭＤＣＫ細胞を
培養し、Ｃ１７９に感受性を示さない抗原変異株を得
た。すなわち、親株としてＨ１Ｎ１サブタイプのＡ／Su
ita ／１／８９、Ｈ２Ｎ２サブタイプのＡ／Izumi ／５
／６５を用い、該ウイルスでそれぞれ感染させたＭＤＣ
Ｋ細胞をＣ１７９存在下で培養し、Ｃ１７９存在下でも
生育可能な変異株をそれぞれＭＤＣＫ細胞のプラークよ
り純粋分離し、Ａ／Suita ／１／８９の変異株をＡ／Su
ita ／１／８９（Ｒ）、Ａ／Izumi ／５／６５の変異株
をＡ／Izumi ／５／６５（Ｒ）とそれぞれ命名した。こ
の２変異株は染色試験、中和試験で全くＣ１７９に反応
性を示さなかった。また、この変異株は両株とも、ＭＤ
ＣＫ細胞でのプラーク形成能も弱く、実験動物マウスに
は病原性を示さず、培養細胞でのみ生育可能な、弱感染
株であった。

【００４０】（３）抗体の抗原認識部位を特定するため
に、ＨＡ分子をコードする遺伝子（以下ＨＡ遺伝子と略
す）の解析を行った。 （ａ）プライマーの合成：プライマー５〜プライマー２
６をＤＮＡ合成機を用いて合成し、脱保護の後、イオン
交換ＨＰＬＣ（ＴＳＫゲル、ＤＥＡＥ−２ＳＷカラム）
で精製し、セプ−パク（Ｓｅｐ−ｐａｋ）Ｃ１８で脱塩
し、各ＤＮＡ約５０μｇを得た。

【００４１】（ｂ）Ａ／Suita ／１／８９で感染させた
ＭＤＣＫ細胞を集め、グアニジンイソチオシアネートを
加え注射器で５回注入、注出を繰返し細胞を溶解させ
た。溶解後の細胞抽出液を塩化セシウム溶液に重層し、
超遠心分離を行った。遠心チューブの底の沈殿を緩衝液
に溶解し、フェノール、クロロホルム処理をしたのちエ
タノール沈殿を行い、回収したＲＮＡをウイルスゲノム
ＲＮＡのサンプルとした。次にプライマー５を用いてｃ
ＤＮＡを合成し、続いて、プライマー５、プライマー６
を用いてＰＣＲ法により、該合成ｃＤＮＡの増幅を行っ
た。次に増幅ｃＤＮＡをアガロースゲル電気泳動で分離
し、ＨＡ遺伝子に対応する１．７kbp のｃＤＮＡのバン
ドを溶出した。このｃＤＮＡをプライマー５、６を用
い、ＰＣＲ法により更に増幅し、増幅フラグメントを２
０％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール６０００、２．
５Ｍ ＮａＣｌ溶液を６０％（ｖ／ｖ）加え遠心分離
し、沈殿精製画分を得た。

【００４２】次に〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰでラベルされたＨ
１Ｎ１サブタイプのシークエンシング用プライマー、プ
ライマー７〜１４を用い、精製された遺伝子の塩基配列
を、前述バイオテクニクス記載のサーマルサイクラーを
利用したジデオキシ法で次の様に行った。すなわち、２
pmolのプライマーと１pmolの精製フラグメントを９５
℃、３分間加熱し、急冷することによりアニーリングさ
せた。次にタックポリメラーゼを加え、デオキシヌクレ
オチドとジデオキシヌクレオチドを含む緩衝液中で７２
℃、１０分間保温し、ポリメラーゼ伸長反応を行った。
その後伸長反応を完全に行うため、サーマルサイクラー
の反応へと移した。サーマルサイクラーの条件は９０℃
１分間、５５℃２分間、７２℃３分間のサイクルを１０
回行った。次にサイクル終了物をホルムアミド存在下で
９５℃３分間加熱した後氷中で急冷したものを８％変性
ポリアクリルアミドゲルで電気泳動した。泳動後のゲル
は乾燥させＸ線フィルムによる露光の後、塩基配列を読
み取ってゆき、配列表の配列番号２７に示すＨＡ遺伝子
全体の塩基配列を決定した。

【００４３】（ｃ）Ａ／Suita ／１／８９（Ｒ）のＨＡ
遺伝子の塩基配列の解析を、実施例４−（３）−（ｂ）
の方法に準じて行い、そのＨＡ遺伝子全体の塩基配列を
決定し、親株のＨＡ遺伝子との比較を行った。変異株の
ＨＡ遺伝子には３か所のヌクレオチド置換があった。す
なわち、配列表の配列番号２７で示した親株のＨＡ遺伝
子の塩基番号６２７番のＧがＡに、塩基番号７３６番の
ＧがＡに、塩基番号１０１８番のＣがＡにそれぞれ変異
していた。ＨＡ分子はプロテアーゼによって１か所切断
されることによって、ウイルスの感染性が活性化される
が、該プロテアーゼ切断後の大きい方のポリペプチドを
ＨＡ１、小さい方がＨＡ２と呼ばれている。そしてこれ
ら両ポリペプチドはＳ−Ｓ結合により結ばれているが、
今回の変異は、ＨＡ１の１８９、２２５及び３１８番目
においてアミノ酸置換を伴うものであった。アミノ酸残
基１８９番及び２２５番は高度に可変な領域にあり、３
１８番目の置換、Ｔｈｒ→Ｌｙｓ（ヌクレオチドレベル
ではＡＣＡ→ＡＡＡ）が変異株のＣ１７９への無反応性
を担っていた。なお、本明細書におけるＨＡ分子のアミ
ノ酸番号は、ウイルス( Virus ) 、第１１巻、第２５７
〜２６６頁（１９６１）に記載のＨ３番号法に基づく。

【００４４】（ｄ）Ａ／Izumi ／５／６５及びＡ／Izum
i ／５／６５（Ｒ）のそれぞれのＨＡ遺伝子の塩基配列
の解析を、実施例４−（３）−（ｂ）の方法に準じ、た
だし、Ｈ２Ｎ２サブタイプのシークエンシング用プライ
マー、プライマー１５〜２３を用い行った。Ａ／Izumi
／５／６５のＨＡ遺伝子の塩基配列を配列表の配列番号
２８に示す。変異株のＨＡ遺伝子には１か所のヌクレオ
チド置換があった。配列番号２８で示した親株のＨＡ遺
伝子の塩基番号１１９７番のＴがＡに変異しており、こ
の変異はＨＡ２の５２番目においてアミノ酸置換を伴う
ものであり、この５２番目の置換、Ｖａｌ→Ｇｌｕ（ヌ
クレオチドレベルではＧＴＡ→ＧＡＡ）が変異株のＣ１
７９の無反応性を担っていた。

【００４５】（ｅ）Ｈ１Ｎ１サブタイプのＡ／ＰＲ／８
／３４、Ａ／Bangkok ／１０／８３、Ａ／Yamagata／１
２０／８６、Ａ／Osaka ／９３０／８８、Ｈ２Ｎ２サブ
タイプのＡ／Okuda ／５７、Ａ／Adachi／２／５７、Ａ
／Kumamoto／１／６５、Ａ／Kaizuka ／２／６５、Ｈ３
Ｎ２サブタイプのＡ２／Aichi ／２／６８、Ａ／Fukuok
a ／Ｃ２９／８５、Ａ／Sichuan ／２／８７、Ａ／Ibar
aki ／１／９０、Ａ／Suita ／１／９０のＨＡ分子のＨ
Ａ１の３１８番目付近のアミノ酸配列、ＨＡ２の５２番
目付近のアミノ酸配列を特定するために、各ＨＡ遺伝子
の一部の塩基配列の解析を行った。

【００４６】Ｈ１Ｎ１サブタイプについては、実施例４
−（３）−（ｂ）の方法に準じ各ウイルスのＲＮＡゲノ
ムのｃＤＮＡを合成し、このｃＤＮＡに対してプライマ
ー９、１３を用いてＰＣＲ増幅を行った。得られたＤＮ
Ａ断片を鋳型としてプライマー１１、１２を用い、サー
マルサイクラーを利用したジデオキシ法にて塩基配列を
決定した。

【００４７】Ｈ２Ｎ２株については実施例４−（３）−
（ｂ）の方法に準じ各ウイルスのＲＮＡゲノムのｃＤＮ
Ａを合成し、このｃＤＮＡに対してプライマー１７、２
１を用いてＰＣＲ増幅を行った。得られたＤＮＡ断片を
鋳型としてプライマー１９、２０を用い、同様にジデオ
キシ法にて塩基配列を決定した。

【００４８】Ｈ３Ｎ２株については実施例４−（３）−
（ｂ）の方法に準じウイルスゲノムＲＮＡに対するｃＤ
ＮＡを合成し、このｃＤＮＡに対してプライマー２４、
２６を用いＰＣＲ増幅を行った。得られたＤＮＡ断片を
鋳型としてプライマー２５、２６を用い、同様にジデオ
キシ法にて塩基配列を決定した。

【００４９】Ｈ１Ｎ１サブタイプ、Ｈ２Ｎ２サブタイプ
には、配列表の配列番号１で表されるＨＡ１領域の３１
８〜３２２番のＴＧＬＲＮポリペプチド配列（Ａ領
域）、及び配列表の配列番号２で表されるＨＡ２領域の
４７〜５８番のGITNKVNSVIEKポリペプチド配列（Ｂ領
域）が保存されており、一方、Ｈ３Ｎ２サブタイプに
は、配列表の配列番号３で表されるＨＡ１領域の３１８
〜３２２番のＴＧＭＲＮポリペプチド配列（Ａ′領域）
と、配列表の配列番号４で表されるＨＡ２領域の４７〜
５８番のＱＩＮＧＫＬＮＲ（Ｌ／Ｖ）ＩＥＫポリペプチ
ド配列（Ｂ′領域）が保存されている。Ａ領域とＡ′領
域は１アミノ酸が異なり、Ｂ領域とＢ′領域は５〜６ア
ミノ酸残基の差が認められる。この両領域の差が抗体の
抗原認識性の差であり、血清学的及び融合阻害試験にお
いて、抗体がＨ３Ｎ２サブタイプと反応できなかった原
因である。

【００５０】図１に示す様に、Ａ領域の配列表の配列番
号１で表されるＴＧＬＲＮポリペプチド配列とＢ領域の
配列表の配列番号２で表されるGITNKVNSVIEKポリペプチ
ド配列は、ＨＡ分子の幹領域の中央で互いに近接して位
置しており、Ｃ１７９は該両配列を認識しており、該部
位がＣ１７９のエピトープである。Ｃ１７９は、このＨ
Ａ分子の幹領域に結合し、ＨＡ分子の膜融合機能を阻害
し、ウイルスを中和する。

【００５１】Ｈ１Ｎ１サブタイプ：配列表の配列番号２
７に示したＡ／Suita ／１／８９のＨＡ遺伝子の塩基番
号１０１７〜１０３１がＡ領域をコードし、塩基番号１
１９１〜１２２６がＢ領域をコードしている。配列表の
配列番号２９はＡ／ＰＲ／８／３４のＨＡ遺伝子の一部
を示し、その塩基番号７６〜９０はＡ領域をコードし、
その塩基番号２５０〜２８５はＢ領域をコードしてい
る。配列表の配列番号３０はＡ／Bangkok ／１０／８３
のＨＡ遺伝子の一部を示し、その塩基番号７６〜９０は
Ａ領域をコードし、その塩基番号２５０〜２８５はＢ領
域をコードしている。配列表の配列番号３１はＡ／Yama
gata／１２０／８６のＨＡ遺伝子の一部を示し、その塩
基番号７６〜９０はＡ領域をコードし、その塩基番号２
５０〜２８５はＢ領域をコードしている。配列表の配列
番号３２はＡ／Osaka ／９３０／８８のＨＡ遺伝子の一
部を示し、その塩基番号７６〜９０はＡ領域をコード
し、その塩基番号２５０〜２８５はＢ領域をコードして
いる。

【００５２】Ｈ２Ｎ２サブタイプ：配列表の配列番号２
８で示したＡ／Izumi ／５／６５のＨＡ遺伝子の塩基番
号１００７〜１０２１がＡ領域をコードし、塩基番号１
１８１〜１２１６がＢ領域をコードしている。配列表の
配列番号３３はＡ／Okuda ／５７のＨＡ遺伝子の一部を
示し、その塩基番号９４〜１０８はＡ領域をコードし、
その塩基番号２６８〜３０３はＢ領域をコードしてい
る。配列表の配列番号３４はＡ／Adachi／２／５７のＨ
Ａ遺伝子の一部を示し、その塩基番号１０３〜１１７は
Ａ領域をコードし、その塩基番号２７７〜３１２はＢ領
域をコードしている。配列表の配列番号３５はＡ／Kuma
moto／１／６５のＨＡ遺伝子の一部を示し、その塩基番
号１０４〜１１８はＡ領域をコードし、その塩基番号２
７８〜３１３はＢ領域をコードしている。配列表の配列
番号３６はＡ／Kaizuka ／２／６５のＨＡ遺伝子の一部
を示し、その塩基番号８８〜１０２はＡ領域をコード
し、その塩基番号２６２〜２９７はＢ領域をコードして
いる。

【００５３】Ｈ３Ｎ２サブタイプ：配列表の配列番号３
７はＡ２／Aichi ／２／６８、配列番号３８はＡ／Fuku
oka ／Ｃ２９／８５、配列番号３９はＡ／Sichuan ／２
／８７、配列番号４０はＡ／Ibaraki ／１／９０、配列
番号４１はＡ／Suita ／１／９０のそれぞれのＨＡ遺伝
子の一部を示し、それぞれの塩基番号８４〜９８はＡ′
領域をコードし、それぞれの塩基番号２５８〜２９３は
Ｂ′領域をコードしている。

【００５４】実施例５ インフルエンザウイルスに対する予防効果 インフルエンザウイルスのマウス感染実験を行い、Ｃ１
７９の予防効果を調べた。１０匹のBalb／ｃマウスにＣ
１７９のＰＢＳ溶液（１mg／ml）１匹当り１mlずつ腹腔
内に投与した。１日後に１０００倍希釈したＨ１Ｎ１サ
ブタイプのＡ１／ＦＭ／１／４７（４０００ＨＡ単位）
を２５μｌずつ鼻腔内接種した。対照として１２匹のマ
ウスにはウイルスだけを接種した。

【００５５】図２に示す様に、対照群のマウスは８匹死
亡（５日後に２匹、６日後に５匹、８日後に１匹）し
た。また、他の生存マウスは著しく、衰弱していた。一
方、Ｃ１７９を投与したマウスは正常であり、１４日を
経過しても、すべて元気であった。図２はＣ１７９の投
与群、非投与群の生存率を示す図であり、縦軸は生存
率、横軸はウイルス感染後の日数を表す。

【００５６】

【発明の効果】本発明によって、ヒトインフルエンザＡ
型ウイルスの診断、感染の予防、治療に有用な抗体が提
供される。この抗体によって認識される抗原部位は、ウ
イルスのサブタイプ間に広く保存され、中和抗体を誘導
することができ、該部位を含むポリペプチドはワクチン
として重要である。

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：5 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：２ 配列の長さ：12 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：４ 配列の長さ：12 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列の特徴： ９番目のXaa はVal またはLeu である。 配列番号：５ 配列の長さ：19 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 AGCAAAAGCA GGGGATAAT 19 配列番号：６ 配列の長さ：21 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 AGTAGAAACA AGGGTGTTTT T 21 配列番号：７ 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 TCTTTTCGAG TACTGTGTCA ACA 23 配列番号：８ 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 GCCCCACTAC AATTGGGGAA ATG 23 配列番号：９ 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 TTTTACAGAA ATTTGCTATG GCTG 24 配列番号：10 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 ACTCCCCTAT TGTGACTGGG TGTA 24 配列番号：11 配列の長さ：22 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 GGTTATCATC ATCAGAATGA AC 22 配列番号：12 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 AGTTCACCTT GTTTGTAATC CCGT 24 配列番号：13 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 CCATTTTTTA CTCTTTCCAT GCAT 24 配列番号：14 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 ATCTACTCAA CTGTCGCCAG TTCA 24 配列番号：15 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 TTGTGTCGAC CTTCTCTGTG GAA 23 配列番号：16 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 TGTAGCATTG CCGGATGGCT 20 配列番号：17 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 ATTATCCGGT TGCCAAAGGA TCG 23 配列番号：18 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 GAGAGCACTG GTAATCTGTT GCA 23 配列番号：19 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 CCATCAAATG CCTTTTGAGT GGA 23 配列番号：20 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 ACTAGAAGCT CAGCATTGTA TGT 23 配列番号：21 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 CATGCATTCA TCATCACATT TGTG 24 配列番号：22 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 CATACTTGGG ATAATCATAC GTC 23 配列番号：23 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 GCCATTTATG CTACAGTAGC AGG 23 配列番号：24 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 GATCAGATTG AAGTGACTAA TGCT 24 配列番号：25 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 GAATGCATCA CTCCAAATGG AAGC 24 配列番号：26 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） 配列 AGGTCCTGAA TTCTCCCTTC TAC 23 配列番号：27 配列の長さ：1754 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Suita/1/89 配列 GGATAATAAA TACAACCAAA ATGAAAGCAA AACTACTAGT CCTGTTATGT GCATTTACAG 60 CTACAGATGC AGACACAATA TGTATAGGCT ACCATGCGAA CAACTCAACC GACACTGTTG 120 ACACAGTACT TGAGAAGAAC GTGACAGTGA CACACTCTGT CAACCTACTT GAGGACAGTC 180 ACAACGGAAA ACTATGTCGA CTAAAAGGAA TAGCCCCACT ACAATTGGGT AATTGCAGCA 240 TTGCCGGATG GATCTTAGGA AACCCAGAAT GCGAATCACT GTTTTCTAAG GAATCATGGT 300 CCTACATTGC AGAAACACCA AACTCCGAGA ATGGAACATG TTACCCAGGG TATTTCGCCG 360 ACTATGAGGA ACTGAGGGAG CAATTGAGTT CAGTATCATC ATTCGAGAGA TTCGAAATAT 420 TCCCCAAAGA AAGCTCATGG CCCAACCACA CCGTAACCAA AGGAGTAACG GCATCATGCT 480 CCCATAATGG GAAAAGCAGT TTTTACAGAA ATTTGCTATG GCTGACGGGG AAGAATGGCT 540 TGTACCCAAA TCTGAGCAAG TCCTATGTGA ACAACAAAGA GAAAGAAGTC CTTGTACTAT 600 GGGGTGTTCA TCACCCGTCT AACATAGGGG ACCAAAGGGC CATCTATCAT ACAGAAAATG 660 CTTATGTCTC TGTAGTGTCT TCACATTATA GCAGGAGATT CACCCCAGAA ATAGCAAAAA 720 GACCCAAAGT AAGAGGTCAA GAAGGAAGAA TTAACTACTA CTGGACTCTG CTGGAACCCG 780 GGGACACAAT AATATTTGAG GCAAATGGAA ATCTAATAGC GCCATGGTAT GCTTTCGCAC 840 TGAGTAGAGG CTTTGGGTCA GGAATCATCA CCTCAAACGC ATCAATGGAT GAATGTGACG 900 CGAAGTGTCA AACACCCCAG GGAGCTATAA ACAGTAGTCT TCCTTTCCAG AATGTACACC 960 CAGTCACAAT AGGAGAGTGT CCAAAGTATG TCAGGAGTAC AAAATTAAGG ATGGTTACAG 1020 GACTAAGGAA CATCCCATCC ATTCAATCCA GAGGTTTGTT TGGAGCCATT GCCGGTTTCA 1080 TTGAAGGGGG GTGGACTGGA ATGATAGATG GATGGTATGG TTATCATCAT CAGAATGAAC 1140 AAGGATCTGG CTATGCTGCG GATCAAAAAA GCACACAAAA TGCCATTAAC GGAATTACAA 1200 ACAAGGTGAA TTCTGTAATC GAGAAAATGA ACACTCAATT CACAGCTGTG GGCAAAGAAT 1260 TCAACAAATT AGAAAGAAGG ATGGAATACT TAAATAAAAA AGTTGATGAT GGATTTCTGG 1320 ACATTTGGAC ATATAATGCA GAATTGTTGG TTCTACTGGA AAATGAAAGG ACTTTGGATT 1380 TTCATGACTC AAATGTGAAG AATCTGTATG AGAAAGTAAA AAGCCAATTA AAGAATAATG 1440 CCAAAGAAAT AGGATACGGG TGTTTTGAAT TCTACCACAA GTGTAACAAT GAATGCATGG 1500 AAAGTGTGAA AAATGGAACT TATGACTATC CAAAATATTC CGAGGAATCA AAGTTAAACA 1560 GGGAAAAAAT TGATGGAGTG AAATTGGAAT CAATGGGAGT CTATCAGATT CTGGCGATCT 1620 ACTCAACTGT CGCCAGTTCA CTGGTGCTTT TGGTCTCCCT GGGGGCAATC AGCTTCTGGA 1680 TGTGTTCTAA TGGGTCTTTG CAGTGTAGAA TATGCATCTG AGACCAGAAT TTCAGAAATA 1740 TAAGAAAAAA CACC 1754 配列番号：28 配列の長さ：1728 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Izumi/5/65 配列 ATAGACAACC AAAAGCATAA CAATGGCCAT CATCTATCTC ATACTCCTGT TCACAGCAGT 60 GAGGGGGGAC CAGATATGCA TTGGATACCA TGCCAATAAT TCCACAGAAA AGGTCGACAC 120 AATTCTAGAG CGGAATGTCA CTGTGACTCA TGCCAAGGAC ATCCTTGAGA AGACCCACAA 180 CGGAAAGCTA TGCAAACTAA ACGGAATCCC TCCACTTGAA CTAGGGGACT GTAGCATTGC 240 CGGATGGCTC CTTGGAAATC CAGAATGTGA TAGGCTTCTA AGGGTGCCAG AATGGTCCTA 300 TATAATGGAG AAAGAAAACC CGAGATACAG TTTATGTTAC CCAGGCAACT TCAATGACTA 360 TGAAGAATTG AAACATCTCC TCAGCAGCGT AAAACATTTC GAGAAAGTAA AGATTCTGCC 420 CAAAGATAGA TGGACACAGC ATACAACAAC TGGAGGTTCA AAGGCCTGCG CAGTGTCAGG 480 TAAACCATCA TTCTTCAGGA ACATGGTCTG GCTGACAAAG AAAGGACCAA ATTATCCGGT 540 TGCCAAAGGA TCGTACAACA ATACGAGCGG AGAGCAAATG CTAATAATTT GGGGAGTGCA 600 CCATCCTAAT GATGAGGCAG AACAAAGAGC ATTGTACCAG GAAGTGGGAA CCTATGTTTC 660 CGCAAGCACA TCAACATTGA ACAAAAGGTC AATCCCTGAA ATAGCAGCAA GGCCTAAAGT 720 GAATGGACTA GGAAGTAGAA TGGAATTCTC TTGGACCCTC TTGGATGTGT GGGACACCAT 780 AAATTTTGAG AGCACTGGTA ATCTAGTTGC ACCAGAGTAT GGATTCAAAA TATCGAAAAG 840 AGGTAGTTCA GGGATCATGA AGACAGAAGG AACACTTGGG AACTGTGAGA CCAAATGCCA 900 AACTCCTTTG GGAGCAATAA ATACAACACT ACCTTTTCAC AATGTCCACC CACTGACAAT 960 AGGTGAATGC CCCAAATATG TAAAATCGGA GAAATTGGTC TTAGCAACAG GACTAAGGAA 1020 TGTTCCCCAG ATTGAATCAA GAGGATTGTT TGGGGCAATA GCTGGCTTTA TAGAAGGAGG 1080 ATGGCAAGGA ATGGTTGATG GTTGGTATGG ATACCATCAC AGCAATGACC AGGGATCAGG 1140 GTATGCAGCA GACAAAGAAT CCACTCAAAA GGCATTTGAT GGAATCACCA ACAAGGTAAA 1200 TTCTGTGATT GAAAAGATGA ACACCCAATT TGAAGCTGTT GGGAAAGAAT TCAATAATTT 1260 AGAGAAAAGA CTGGAGAACT TGAACAAAAA GATGGAAGAC GGGTTTCTAG ATGTGTGGAC 1320 ATACAATGCT GAGCTTCTAG TTCTGATGGA AAATGAGAGG ACACTTGACT TCCATGATTC 1380 TAATGTCAAG AACCTGTATG ATAAAGTCAG AATGCAGCTG AGAGACAACG TCAAAGAACT 1440 AGGAAATGGA TGTTTTGAAT TTTATCACAA ATGTGACGAT GAATGCATGA ATAGTGTGAA 1500 AAACGGGACG TATGATTATC CCAAGTATGA AGAAGAATCT AAACTAAATA GAAATGAAAT 1560 CAAAGGGGTA AAATTGAGCA GCATGGGGGT TTACCAAATT CTTGCCATTT ATGCTACAGT 1620 TGCAGGTTCT CTGTCACTGG CAATCATGAT GGCTGGGATC TCTTTCTGGA TGTGCTCCAA 1680 CGGGTCTCTG CAGTGCAGAA TCTGCATATG ATTGTAATTT ATTTTATA 1728 配列番号：29 配列の長さ：442 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/PR/8/34 配列 CCTTTCCAGA ATATACACCC AGTCACAATA GGAGAGTGCC CAAAATACGT CAGGAGTGCC 60 AAATTGAGGA TGGTTACAGG ACTAAGGAAC ATCCCGTCCA TTCAATCCAG AGGTCTATTT 120 GGAGCCATTG CCGGTTTTAT TGAAGGGGGA TGGACTGGAA TGATAGATGG ATGGTATGGT 180 TATCATCATC AGAATGAACA GGGATCAGGC TATGCAGCGG ATCAAAAAAG CACACAAAAT 240 GCCATTAACG GGATTACAAA CAAGGTGAAC TCTGTTATCG AGAAAATGAA CACTCAATTC 300 ACAGCTGTGG GTAAAGAATT CAACAAATTA GAAAAAAGGA TGGAAAATTT AAATAAAAAA 360 GTTGATGATG GATTTCTGGA CATTTGGACA TATAATGCAG AATTGTTAGT TCTACTGGAA 420 AATGAAAGGA CTCTGGATTT CC 442 配列番号：30 配列の長さ：424 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Bangkok/10/83 配列 CCTTTCCAGA ATGTACACCC AGTCACAATA GGAGAGTGCC CAAAGTACGT CAGGAGTACA 60 AAATTAAGGA TGGTTACAGG ACTAAGGAAC ATCCCATCCA TTCAATCCAG AGGTTTGTTT 120 GGAGCCATTG CCGGTTTCAT TGAAGGGGGA TGGACTGGAA TGATAGATGG ATGGTATCGT 180 TATCATCATC AGAATGAACA AGGATCTGGC TATGCTGCGG ATCAAAAAAG CACACAAAAT 240 GCCATTAACG GGATTACAAA CAAGGTGAAC TCTGTAATCG AGAAAATGAA CACTCAATTC 300 ACAGCTGTGG GTAAAGAATT CAACAAATTA GAAAAAAGGA TGGAAAACTT AAATAAAAAA 360 GTTGATGATG GATTTCTGGA CATTTGGACA TATAATGCAG AATTGTTGGT TCTACTGGAA 420 AATG 424 配列番号：31 配列の長さ：424 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Yamagata/120/86 配列 CCTTTCCAGA ATGTACACCC AGTCACAATA GGAGAGTGCC CAAAGTATGT CAGGAGTACA 60 AAATTAAGGA TGGTTACAGG ACTAAGGAAC ATCCCATCCA TTCAATCCAG AGGTTTGTTT 120 GGAGCCATTG CCGGTTTCAT TGAAGGGGGG TGGACTGGAA TGATAGATGG ATGGTATGGT 180 TATCATCATC AGAATGAACA AGGATCTGGC TATGCTGCGG ATCAAAAAAG CACACAAAAT 240 GCCATTAACG GGATTACAAA CAAGGTGAAT TCTGTAATCG AGAAAATGAA CACTCAATTC 300 ACAGCTGTGG GCAAAGAATT CAACAAATTA GAAAGAAGGA TGGAAAACTT AAATAAAAAA 360 GTTGATGATG GATTTCTGGA CATTTGGACA TATAATGCAG AATTGTTGGT CCTACTGGAA 420 AATG 424 配列番号：32 配列の長さ：429 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Osaka/930/88 配列 CCTTTCCAGA ATGTACACCC AGTCACAATA GGAGAGTGCC CAAAGTATGT CAGGAGTACA 60 AAATTAAGGA TGGTTACAGG ACTAAGGAAC ATCCCATCCA TTCAATCCAG AGGTTTGTTT 120 GGAGCCATTG CCGGTTTCAT AGAAGGGGGG TGGACTGGAA TGATAGATGG ATGGTATGGT 180 TATCATCATC AGAATGAACA AGGATCTGGC TATGCTGCGG ATCAAAAAAG CACACAAAAT 240 GCCATTAACG GAATTACAAA CAAGGTGAAT TCTGTAATCG AGAAAATGAA CACTCAATTC 300 ACAGCTGTGG GCAAAGAATT CAACAAATTA GAAAGAAGGA TGGAAAACTT AAATAAAAAA 360 GTTGATGATG GATTTCTGGA CATTTGGACA TATAATGCAG AATTGTTGGT TCTACTGGAA 420 AATGAAAGG 429 配列番号：33 配列の長さ：400 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Okuda/57 配列 GCAATAAATA CAACATTACC TTTTCACAAT GTCCACCCAC TGACAATAGG TGAGTGCCCC 60 AAATATGTAA AATCGGAGAA GTTGGTCTTA GCAACAGGAC TAAGGAATGT TCCCCAGATT 120 GAATCAAGAG GATTGTTTGG GGCAATAGCT GGTTTTATAG AAGGAGGATG GCAAGGAATG 180 GTTGACGGTT GGTATGGATA CCATCACAGC AATGACCAGG GATCAGGGTA TGCAGCAGAC 240 AAAGAATCCA CTCAAAAGGC ATTTGATGGA ATCACCAACA AGGTAAATTC TGTGATTGAA 300 AAGATAAACA CCCAATTTGA AGCTGTTGGG AAAGAATTCG GTAACTTAGA GAAAAGACTG 360 GAGAACTTGA ACAAAAAGAT GGAAGACGGG TTTCTAGATG 400 配列番号：34 配列の長さ：409 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Adachi/2/57 配列 CGCCTTGGAG CAATAAATAC AACATTGCCT TTTCACAATG TCCACCCACT GACAATAGGT 60 GAGTGCCCCA AATATGTAAA ATCGGAGAAG TTGGTCTTAG CAACAGGACT AAGGAATGTT 120 CCCCAGATTG AATCAAGAGG ATTGTTTGGG GCAATAGCTG GTTTTATAGA AGGAGGATGG 180 CAAGGAATGG TTGATGGTTG GTATGGATAC CATCACAGCA ATGACCAGGG ATCAGGGTAT 240 GCAGCAGACA AAGAATCCAC TCAAAAGGCA TTTGATGGAA TCACCAACAA GGTAAATTCT 300 GTGATTGAAA AGATGAACAC CCAATTTGAA GCTGTTGGGA AAGAATTCGG TAACTTAGAG 360 AGAAGACTGG AGAACTTGAA CAAAAAGATG GAAGACGGGT TTCTAGATG 409 配列番号：35 配列の長さ：410 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Kumamoto/1/65 配列 CTCCTTTGGA GCAATAAATA CAACATTACC TTTTCACAAT GTCCACCCAC TGACAATAGG 60 TGAATGCCCC AAATATGTAA AATCGGAGAA ACTGGTCTTA GCAACAGGAC TAAGGAATGT 120 TCCCCAGATT GAATCAAGAG GATTGTTTGG GGCAATAGCT GGCTTTGTAG AAGGAGGATG 180 GCAAGGAATG ATTGATGGTT GGTATGGATA CCATCACAGC AATGATCAGG GATCAGGGTT 240 TGCAGCAGAC AAAGAATCCA CTCAAAAGGC ATTTGATGGA ATCACCAACA AGGTAAATTC 300 TGTGATTGAA AAGATGAACA CCCAATTTGA AGCTGTTGGG AAAGAATTCA ATAATTTAGA 360 GAAAAGACTG GAGAACTTGA ACAAAAGGAT GGAAGACGGG TTTCTAGATG 410 配列番号：36配列の長さ：394 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Kaizuka/2/65 配列 AATACAACAC TACCTTTTCA CAATGTCCAC CCACTGACAA TAGGTGAATG CCCCAAATAT 60 GTAAAATCGG AGAAATTGGT CTTAGCAACA GGACTAAGGA ATGTTCCCCA GATTGAATCA 120 AGAGGATTGT TTGGGGCAAT AGCTGGCTTT ATAGAAGGAG GATGGCAAGG AATGGTTGAT 180 GGTTGGTATG GATACCATCA CAGCAATGAC CAGGGATCAG GGTATGCAGC AGACAAAGAA 240 TCCACTCAAA AGGCATTTGA TGGAATCACC AACAAGGTAA ATTCTGTGAT TGAAAAGATG 300 AACACCCAAT TTGAAGCTGT TGGGAAAGAA TTCAATAATT TAGAGAAAAG ACTGGAGAAC 360 TTGAACAAAA AGATGGAAGA CGGGTTTCTA GATG 394 配列番号：37 配列の長さ：329 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A2/Aichi/2/68 配列 ATGACAAGCC CTTTCAAAAC GTAAACAAGA TCACATATGG AGCATGCCCC AAGTATGTTA 60 AGCAAAACAC CCTGAAGTTG GCAACAGGGA TGCGGAATGT ACCAGAGAAA CAAACTAGAG 120 GCCTATTCGG CGCAATAGCA GGTTTCATAG AAAATGGTTG GGAGGGAATG ATAGACGGTT 180 GGTACGGTTT CAGGCATCAA AATTCTGAGG GCACAGGACA AGCAGCAGAT CTTAAAAGCA 240 CTCAAGCAGC CATCGACCAA ATCAATGGGA AATTGAACAG GGTAATCGAG AAGACGAACG 300 AGAAATTCCA TCAAATCGAA AAGGAATTC 329 配列番号：38 配列の長さ：334 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Fukuoka/C29/85 配列 ATGACAAACC CTTTCAAAAT GTAAACAAGA TCACATATGG GGCATGTCCC AGGTATGTTA 60 AGCAAAACAC TCTGAAATTG GCAACAGGGA TGCGGAATGT ACCAGAGAAA CAAACTAGAG 120 GCATATTCGG CGCAATAGCA GGTTTCATAG AAAATGGTTG GGAGGGAATG GTAGACGGTT 180 GGTACGGTTT CAGGCATCAA AATTCTGAGG GCACAGGACA AGCAGCAGAT CTTAAAAGCA 240 CTCAAGCAGC AATCGACCAA ATCAACGGGA AACTGAATAG GTTAATCGAG AAGACGAACG 300 AGAAATTCCA TCAAATCGAA AAGGAATTCT CAGA 334 配列番号：39 配列の長さ：329 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Sichuan/2/87 配列 ATGACAAACC CTTTCAAAAT GTAAACAAGA TCACATATGG GGCATGTCCC AGATATGTTA 60 AGCAAAACAC TCTGAAATTG GCAACAGGGA TGCGGAATGT ACCAGAGAAA CAAACTAGAG 120 GCATATTCGG CGCAATAGCA GGTTTCATAG AAAATGGTTG GGAGGGAATG GTAGACGGCT 180 GGTACGGTTT CAGGCATCAA AATTCTGAGG GCACAGGACA AGCAGCAGAT CTTAAAAGCA 240 CTCAAGCAGC AATCGACCAA ATCAACGGGA AACTGAATAG GTTAATCGAG AAGACGAACG 300 AGAAATTCCA TCAAACCGAA AAGGAATTC 329 配列番号：40 配列の長さ：334 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Ibaraki/1/90 配列 ATGACAAACC CTTTCAAAAT ATAAACAGGA TCACATATGG GGCATGTCCC AGATATGTTA 60 AGCAAAACAC TCTGAAATTG GCAACAGGGA TGCGGAATGT ACCAGAGAAA CAAACTAGAG 120 GCATATTCGG CGCAATCGCA GGTTTCATAG AAAATGGTTG GGAGGGAATG GTAGACGGTT 180 GGTACGGTTT CAGGCATCAA AATTCTGAGG GCACAGGACA AGCAGCAGAT CTTAAAAGCA 240 CTCAAGCAGC AATCGACCAA ATCAACGGGA AACTGAATAG GTTAATCGAG AAGACGAACG 300 AGAAATTCCA TCAAATCGAA AAGGAATTCT CAGA 334 配列番号：41 配列の長さ：329 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源： 生物名：A/Suita/1/90 配列 ATGACAAACC CTTTCAAAAT GTAAACAGGA TCACATATGG GGCATGTCCC AGATATGTTA 60 AGCAAAACAC TCTGAAATTG GCAACAGGGA TGCGGAATGT ACCAGAAAAA CAAACTAGGG 120 GCATATTCGG CGCAATCGCA GGTTTCATAG AAAATGGTTG GGAGGGAATG GTAGACGGTT 180 GGTACGGTTT CAGGCATCAA AACTCTGAGG GCACAGGACA AGCAGCAGAT CTTAAAAGCA 240 CTCAAGCAGC AATCGACCAA ATCAACGGGA AACTGAATAG GTTAATCGAG AAGACGAACG 300 AGAAATTCCA TCAAACCGAA AAGGAATTC 329

【図面の簡単な説明】

【図１】ヘマグルチニン分子の三次構造の模式図であ
る。

【図２】インフルエンザウイルス感染群の生存率を示す
図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ 9284−4Ｃ Ｓ 9284−4Ｃ Ｃ１２Ｎ 15/44 ＺＮＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 8214−4Ｂ 21/08 8214−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ 33/569 Ｌ 9015−2Ｊ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記特性（ａ）及び（ｂ）を有する抗ヒ
   トインフルエンザウイルス抗体。 （ａ）ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブ
   タイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのヘマグルチニン分子の
   幹領域を認識し、Ｈ３Ｎ２サブタイプのヘマグルチニン
   分子の幹領域は認識しない。 （ｂ）ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブ
   タイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプに中和活性を有し、Ｈ３
   Ｎ２サブタイプには中和活性を有さない。
2. 【請求項２】 下記特性（ａ）及び（ｂ）を有する請求
   項１記載の抗ヒトインフルエンザウイルス抗体。 （ａ）ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１Ｎ１サブ
   タイプとＨ２Ｎ２サブタイプのヘマグルチニン分子中の
   幹領域の配列表の配列番号１で表されるＴＧＬＲＮポリ
   ペプチド配列と、配列表の配列番号２で表されるGITNKV
   NSVIEKポリペプチド配列とを認識する。 （ｂ）ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ３Ｎ２サブ
   タイプのヘマグルチニン分子中の幹領域の配列表の配列
   番号３で表されるＴＧＭＲＮポリペプチド配列と配列表
   の配列番号４で表されるＱＩＮＧＫＬＮＲ（Ｌ／Ｖ）Ｉ
   ＥＫポリペプチド配列とを認識しない。
3. 【請求項３】 ヒトインフルエンザＡ型ウイルスのＨ１
   Ｎ１サブタイプ及びＨ２Ｎ２サブタイプのヘマグルチニ
   ン分子中の幹領域と実質上同一の抗原性を有する免疫原
   性人工ポリペプチド。
4. 【請求項４】 分子内に少なくとも配列表の配列番号１
   で表されるＴＧＬＲＮポリペプチド配列と、配列表の配
   列番号２で表されるGITNKVNSVIEKポリペプチド配列を有
   し、該両配列の立体配置がＨ１Ｎ１サブタイプ及びＨ２
   Ｎ２サブタイプのヘマグルチニン分子中の幹領域と実質
   上同一の抗原性を有することを特徴とする請求項３記載
   の免疫原性人工ポリペプチド。