JPH0568537A - イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 - Google Patents
イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株Info
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- JPH0568537A JPH0568537A JP4548791A JP4548791A JPH0568537A JP H0568537 A JPH0568537 A JP H0568537A JP 4548791 A JP4548791 A JP 4548791A JP 4548791 A JP4548791 A JP 4548791A JP H0568537 A JPH0568537 A JP H0568537A
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- lysine
- epsilon
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- streptomyces
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Abstract
(57)【要約】
【構成】ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラス(Streptomyces albulus subs
p. lysinopolymerus) 菌株をクロラムフェニコールを用
いて、イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンの生合成に関与す
る遺伝子を含むプラスミドを増幅させた、イプシロン−
ポリ−Ｌ−リシンを生産する菌株。 【効果】本発明の変異株はεＰＬを著量に生産する能力
を有しており、該変異株を培養することによって公知の
菌株を用いるよりも著量にεＰＬを産生することができ
る。
シーズ・リジノポリメラス(Streptomyces albulus subs
p. lysinopolymerus) 菌株をクロラムフェニコールを用
いて、イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンの生合成に関与す
る遺伝子を含むプラスミドを増幅させた、イプシロン−
ポリ−Ｌ−リシンを生産する菌株。 【効果】本発明の変異株はεＰＬを著量に生産する能力
を有しており、該変異株を培養することによって公知の
菌株を用いるよりも著量にεＰＬを産生することができ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はイプシロン−ポリ−Ｌ−
リシン（以下εＰＬと略記する）を著量に生産する菌株
に関する。
リシン（以下εＰＬと略記する）を著量に生産する菌株
に関する。
【０００２】
【従来の技術】εＰＬは以下の構造式で表されるよう
に、Ｌ−リシンのε位のアミノ基が、隣り合うＬ−リシ
ンのカルボン酸とアミド結合で結合した高分子化合物で
ある。
に、Ｌ−リシンのε位のアミノ基が、隣り合うＬ−リシ
ンのカルボン酸とアミド結合で結合した高分子化合物で
ある。
【０００３】
【化１】
【０００４】当該物質は必須アミノ酸であるＬ−リシン
のポリマーであるので安全性が高くかつカチオン含量が
高いので特異な物性を有する。従って、それらの性質を
利用してトイレタリー用品、化粧品、飼料添加物、医
薬、農薬、食品添加物、電子材料等の用途が期待でき
る。従来、当該物質はストレプトマイセス属に属するε
ＰＬ産生菌であるストレプトマイセス・アルブラス・サ
ブスピーシーズ・リジノポリメラス(Streptomycesalbul
us subsp. lysinopolymerus) No. ３４６−Ｄ株（微工
研菌寄第３８３４号）を培地に培養して、得られる培養
物から分離精製して得られている（特公昭５９−２０３
５９号）。
のポリマーであるので安全性が高くかつカチオン含量が
高いので特異な物性を有する。従って、それらの性質を
利用してトイレタリー用品、化粧品、飼料添加物、医
薬、農薬、食品添加物、電子材料等の用途が期待でき
る。従来、当該物質はストレプトマイセス属に属するε
ＰＬ産生菌であるストレプトマイセス・アルブラス・サ
ブスピーシーズ・リジノポリメラス(Streptomycesalbul
us subsp. lysinopolymerus) No. ３４６−Ｄ株（微工
研菌寄第３８３４号）を培地に培養して、得られる培養
物から分離精製して得られている（特公昭５９−２０３
５９号）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、この先願の菌
株では培養液１リットル当りせいぜい0.5g程度のεＰＬ
の生産性しかなく、従って生産コストが高く当該物質の
広範な利用が妨げられていた。本発明者らは、εＰＬを
著量に生産する株を得、これを用いてεＰＬを多量に製
造することを目的として研究を重ね、以下に述べる発明
に到達した。
株では培養液１リットル当りせいぜい0.5g程度のεＰＬ
の生産性しかなく、従って生産コストが高く当該物質の
広範な利用が妨げられていた。本発明者らは、εＰＬを
著量に生産する株を得、これを用いてεＰＬを多量に製
造することを目的として研究を重ね、以下に述べる発明
に到達した。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明はストレプトマイ
セス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラ
ス(Streptomyces albulus subsp. lysinopolymerus) 菌
株をクロラムフェニコールを用いて、εＰＬの生合成に
関与する遺伝子を含むプラスミドを増幅させたεＰＬを
生産する菌株である。
セス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラ
ス(Streptomyces albulus subsp. lysinopolymerus) 菌
株をクロラムフェニコールを用いて、εＰＬの生合成に
関与する遺伝子を含むプラスミドを増幅させたεＰＬを
生産する菌株である。
【０００７】また、本発明のεＰＬを生産する菌株は、
ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシーズ・
リジノポリメラスNo. ３４６−Ｄ株のプラスミド増幅変
異株が好ましい。この変異株は、前記菌にプラスミドを
増幅させる処理を施した菌株であり、クロラムフェニコ
ール処理によりプラスミド増幅変異株５０８３３株（微
工研条寄第１１１０号）が得られる。
ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシーズ・
リジノポリメラスNo. ３４６−Ｄ株のプラスミド増幅変
異株が好ましい。この変異株は、前記菌にプラスミドを
増幅させる処理を施した菌株であり、クロラムフェニコ
ール処理によりプラスミド増幅変異株５０８３３株（微
工研条寄第１１１０号）が得られる。
【０００８】以下に本発明を詳細に説明する。先ず、本
発明の菌株の取得方法を述べる。ストレプトマイセス・
アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo.
３４６−Ｄ株あるいは、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システ
イン耐性変異株を培地に接種し振とう培養した後に、ク
ロラムフェニコールを添加し培養を続ける。遠心分離し
て菌体を集め、洗浄した後、寒天培地に菌を塗布する。
静置培養した後、ブドウ球菌（Staphylococcus aureus)
を含む普通寒天培地を重層し、さらに培養し生成したブ
ドウ球菌の生育阻止円の大きな株が目的のプラズミド増
幅εＰＬ高生産株、すなわち、プラスミド増幅変異株５
０８３３株（微工研条寄第１１１０号) である。５０８
３３株の菌学的性質を示すと次の通りである。
発明の菌株の取得方法を述べる。ストレプトマイセス・
アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo.
３４６−Ｄ株あるいは、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システ
イン耐性変異株を培地に接種し振とう培養した後に、ク
ロラムフェニコールを添加し培養を続ける。遠心分離し
て菌体を集め、洗浄した後、寒天培地に菌を塗布する。
静置培養した後、ブドウ球菌（Staphylococcus aureus)
を含む普通寒天培地を重層し、さらに培養し生成したブ
ドウ球菌の生育阻止円の大きな株が目的のプラズミド増
幅εＰＬ高生産株、すなわち、プラスミド増幅変異株５
０８３３株（微工研条寄第１１１０号) である。５０８
３３株の菌学的性質を示すと次の通りである。
【０００９】(1) 形態学的性質 シュークロース・硝酸塩寒天培地上で30℃、10日間生育
した５０８３３株の気菌糸および基生菌糸を顕微鏡で観
察した結果を次に示す。 胞子形成菌糸の分枝法および形態:単純分枝、閉鎖
らせん状（closed spiral) 胞子の数: 数十個 胞子の表面構造および大きさ:胞子は円ないし楕円
形で大きさは約1.2 〜 1.5 μであり、その表面構造は
スパイニー(Spiny) である。 鞭毛胞子、菌核および胞子のうの有無存在が認めら
れない。 胞子柄の着生位置: 気菌糸上。
した５０８３３株の気菌糸および基生菌糸を顕微鏡で観
察した結果を次に示す。 胞子形成菌糸の分枝法および形態:単純分枝、閉鎖
らせん状（closed spiral) 胞子の数: 数十個 胞子の表面構造および大きさ:胞子は円ないし楕円
形で大きさは約1.2 〜 1.5 μであり、その表面構造は
スパイニー(Spiny) である。 鞭毛胞子、菌核および胞子のうの有無存在が認めら
れない。 胞子柄の着生位置: 気菌糸上。
【００１０】(2) 各種培地上における生育状態 下記の各種培地上における性状はそれぞれ30℃で10〜14
日間培養後の観察結果である。 (3) 生理的性質 ５０８３３株の生理的性質は次の通りである。 生育温度範囲 約15〜40℃。生育最適温度：30℃付近。 ゼラチンの液化、でん粉の加水分解および脱脂牛乳
のペプトン化：すべて陽性 脱脂牛乳の凝固：陰性 メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成する。 細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸の型についてベ
ッカー(Becker)らの方法〔アプライド・マイクロバイオ
ロジー第13巻第 236頁(1965 年) 参照〕により分析した
結果、Ｌ，Ｌ型であった。
日間培養後の観察結果である。 (3) 生理的性質 ５０８３３株の生理的性質は次の通りである。 生育温度範囲 約15〜40℃。生育最適温度：30℃付近。 ゼラチンの液化、でん粉の加水分解および脱脂牛乳
のペプトン化：すべて陽性 脱脂牛乳の凝固：陰性 メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成する。 細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸の型についてベ
ッカー(Becker)らの方法〔アプライド・マイクロバイオ
ロジー第13巻第 236頁(1965 年) 参照〕により分析した
結果、Ｌ，Ｌ型であった。
【００１１】(4) 各種炭素源の同化性（プリドハム・
ゴットリープ寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シュークロース − ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ ｉ−イノシトール ＋ サリシン − 註）＋：同化する、 −：同化しない。
ゴットリープ寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シュークロース − ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ ｉ−イノシトール ＋ サリシン − 註）＋：同化する、 −：同化しない。
【００１２】以上記述したように、本発明の変異株の菌
学的性質は原菌株であるストレプトマイセス・アルブラ
ス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo. ３４６−
Ｄ株の菌学的性質と類似している。次に得られた変異株
を用いて本発明方法によりεＰＬを製造する。なお、文
中の％は特に記さないかぎり重量（g)／容量（ml）％を
示す。
学的性質は原菌株であるストレプトマイセス・アルブラ
ス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo. ３４６−
Ｄ株の菌学的性質と類似している。次に得られた変異株
を用いて本発明方法によりεＰＬを製造する。なお、文
中の％は特に記さないかぎり重量（g)／容量（ml）％を
示す。
【００１３】まず、得られた変異株を培地に接種して培
養し、培養液から生成蓄積したεＰＬを分離・精製す
る。培地は炭素源、窒素源、無機塩、ビタミンが含まれ
ていれば、いかなるものでもよいが、好ましくは、炭素
源としてブドウ糖５％、あるいはグリセリン５％を含
み、窒素源として硫酸アンモニウム、あるいはＬ−リシ
ンあるいはペプトンを含むものが良い。培養途中で炭素
源、窒素源を逐次添加してもよい。ｐＨは培養初期はｐ
Ｈ 4.0になるまで下がるにまかせ、その後水酸化ナトリ
ウム水溶液等のアルカリでｐＨ 4.0を維持するようにし
ても良い。培養液から遠心分離機あるいはフィルターで
菌体を除いた後、濾過液を精製・脱色し、これを濃縮す
る。濃縮液からアセトン、エタノール等の有機溶媒でε
ＰＬを晶析する。
養し、培養液から生成蓄積したεＰＬを分離・精製す
る。培地は炭素源、窒素源、無機塩、ビタミンが含まれ
ていれば、いかなるものでもよいが、好ましくは、炭素
源としてブドウ糖５％、あるいはグリセリン５％を含
み、窒素源として硫酸アンモニウム、あるいはＬ−リシ
ンあるいはペプトンを含むものが良い。培養途中で炭素
源、窒素源を逐次添加してもよい。ｐＨは培養初期はｐ
Ｈ 4.0になるまで下がるにまかせ、その後水酸化ナトリ
ウム水溶液等のアルカリでｐＨ 4.0を維持するようにし
ても良い。培養液から遠心分離機あるいはフィルターで
菌体を除いた後、濾過液を精製・脱色し、これを濃縮す
る。濃縮液からアセトン、エタノール等の有機溶媒でε
ＰＬを晶析する。
【００１４】
【発明の効果】本発明の変異株はεＰＬを著量に生産す
る能力を有しており、該変異株を培養することによって
公知の菌株を用いるよりも著量にεＰＬを産生すること
ができる。
る能力を有しており、該変異株を培養することによって
公知の菌株を用いるよりも著量にεＰＬを産生すること
ができる。
【００１５】
【実施例】以下、本発明を実施例につき詳細に述べる。 実施例 プラスミド増幅変異株の取得:ストレプトマイセス・ア
ルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラス(Strep
tomyces albulus subsp. lysinopolymerus) No. ３４６
−Ｄ株の胞子１白金耳量をトリス−マレイン酸緩衝液
（ｐＨ9.0)５mlに懸濁し、これにＮ−メチル−Ｎ−ニト
ロ−Ｎ’−ニトロソグアニジンを、 1.5mg／mlの濃度に
なるように添加した。これを、30分間、30℃で振とうし
た後、遠心分離機により胞子を集め滅菌水で洗浄し、ブ
ドウ糖５％、硫酸アンモニウム１％、酵母エキス 0.5
％、リン酸二水素一カリウム・７水塩 0.136％、リン酸
一水素二ナトリウム・１２水塩 0.158％、硫酸マグネシ
ウム・７水塩0.05％、硫酸亜鉛・７水塩0.004％、硫酸
第一鉄・７水塩 0.003％、ｐＨ 6.8の培地（以下第１培
地と呼ぶ）５mlに接種し、一昼夜30℃で振とう培養し、
菌を生育させた。
ルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラス(Strep
tomyces albulus subsp. lysinopolymerus) No. ３４６
−Ｄ株の胞子１白金耳量をトリス−マレイン酸緩衝液
（ｐＨ9.0)５mlに懸濁し、これにＮ−メチル−Ｎ−ニト
ロ−Ｎ’−ニトロソグアニジンを、 1.5mg／mlの濃度に
なるように添加した。これを、30分間、30℃で振とうし
た後、遠心分離機により胞子を集め滅菌水で洗浄し、ブ
ドウ糖５％、硫酸アンモニウム１％、酵母エキス 0.5
％、リン酸二水素一カリウム・７水塩 0.136％、リン酸
一水素二ナトリウム・１２水塩 0.158％、硫酸マグネシ
ウム・７水塩0.05％、硫酸亜鉛・７水塩0.004％、硫酸
第一鉄・７水塩 0.003％、ｐＨ 6.8の培地（以下第１培
地と呼ぶ）５mlに接種し、一昼夜30℃で振とう培養し、
菌を生育させた。
【００１６】その培養液をＭＳ溶液（組成は硫酸マグネ
シウム・７水塩0.05％、塩化ナトリウム 0.5％、ツィー
ン８０ 0.05％）で 500倍に希釈する。次いで、この希
釈培養液を、寒天培地１ml当り２mgの濃度になるように
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン、またはこの濃度に
なるようにＳ−アミノエチル−Ｌ−システインおよび寒
天培地１ml当り１mgの濃度になるようにグリシンまたは
Ｌ−スレオニンを添加した前述の第１培地と同じ組成の
寒天培地に塗布した。この寒天培地を、30℃で48時間保
温し、コロニーとして生育させ、Ｓ−アミノエチル−Ｌ
−システイン耐性変異株を得た。
シウム・７水塩0.05％、塩化ナトリウム 0.5％、ツィー
ン８０ 0.05％）で 500倍に希釈する。次いで、この希
釈培養液を、寒天培地１ml当り２mgの濃度になるように
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン、またはこの濃度に
なるようにＳ−アミノエチル−Ｌ−システインおよび寒
天培地１ml当り１mgの濃度になるようにグリシンまたは
Ｌ−スレオニンを添加した前述の第１培地と同じ組成の
寒天培地に塗布した。この寒天培地を、30℃で48時間保
温し、コロニーとして生育させ、Ｓ−アミノエチル−Ｌ
−システイン耐性変異株を得た。
【００１７】このようにして得られたＳ−アミノエチル
−Ｌ−システイン耐性変異株を、前記の第１培地と同じ
組成の培地５mlに接種する。これを30℃２日間振とう培
養した後に、クロラムフェニコールを培養液１リットル
当り50から 500mg、好ましくは 100mgの濃度になるよう
に添加し、さらに５から10時間好ましくは８時間培養を
続ける。遠心分離して菌体を集め、滅菌水あるいは生理
食塩水で洗浄した後、第１培地と同じ組成の培地に寒天
1.7％を加えた寒天培地に菌を塗布する。
−Ｌ−システイン耐性変異株を、前記の第１培地と同じ
組成の培地５mlに接種する。これを30℃２日間振とう培
養した後に、クロラムフェニコールを培養液１リットル
当り50から 500mg、好ましくは 100mgの濃度になるよう
に添加し、さらに５から10時間好ましくは８時間培養を
続ける。遠心分離して菌体を集め、滅菌水あるいは生理
食塩水で洗浄した後、第１培地と同じ組成の培地に寒天
1.7％を加えた寒天培地に菌を塗布する。
【００１８】８日間30℃で静置培養した後、ブドウ球菌
（Staphylococcus aureus)を含む普通寒天培地を重層
し、さらに１夜培養し生成したブドウ球菌の生育阻止円
の大きな株がプラスミド増幅εＰＬ高生産株である。こ
の中の１株が５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）
である。 εＰＬの生産：前記第１培地と同じ組成の培地５mlにプ
ラスミド増幅変異株５０８３３株を１白金耳量接種し、
３０℃で８日間振とう培養した。培養終了後、培養液中
のεＰＬの濃度をイツァキ(Itzhaki) の方法で測定し
た。
（Staphylococcus aureus)を含む普通寒天培地を重層
し、さらに１夜培養し生成したブドウ球菌の生育阻止円
の大きな株がプラスミド増幅εＰＬ高生産株である。こ
の中の１株が５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）
である。 εＰＬの生産：前記第１培地と同じ組成の培地５mlにプ
ラスミド増幅変異株５０８３３株を１白金耳量接種し、
３０℃で８日間振とう培養した。培養終了後、培養液中
のεＰＬの濃度をイツァキ(Itzhaki) の方法で測定し
た。
【００１９】その結果を表１に示す。 比較例 ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシーズ・
リジノポリメラスNo.３４６−Ｄ株を用いた以外は、実
施例と同様の方法で培養し、εＰＬの濃度を同様の方法
で測定した。その結果を表１に示す。
リジノポリメラスNo.３４６−Ｄ株を用いた以外は、実
施例と同様の方法で培養し、εＰＬの濃度を同様の方法
で測定した。その結果を表１に示す。
【００２０】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (2)
- 【請求項１】 ストレプトマイセス・アルブラス・サブ
スピーシーズ・リジノポリメラス(Streptomyces albulu
s subsp. lysinopolymerus) 菌株をクロラムフェニコー
ルを用いて、イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンの生合成に
関与する遺伝子を含むプラスミドを増幅させた、イプシ
ロン−ポリ−Ｌ−リシンを生産する菌株。 - 【請求項２】 イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを生産す
る菌株が、ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピ
ーシーズ・リジノポリメラス(Streptomycesalbulus sub
sp. lysinopolymerus)No. ３４６−Ｄ株のプラスミド増
幅変異株５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）であ
る、特許請求の範囲第１項記載の菌株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4548791A JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192157A JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
| JP4548791A JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61192157A Division JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0568537A true JPH0568537A (ja) | 1993-03-23 |
| JPH0675501B2 JPH0675501B2 (ja) | 1994-09-28 |
Family
ID=26385492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4548791A Expired - Lifetime JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0675501B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002194591A (ja) * | 2000-12-21 | 2002-07-10 | Nippon Steel Corp | チタン薄板とその製造方法 |
| JP2002330797A (ja) * | 2001-05-08 | 2002-11-19 | Chisso Corp | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
| CN112359002A (zh) * | 2019-12-04 | 2021-02-12 | 江南大学 | 一株小白链霉菌及其在生产ε-聚赖氨酸中的应用 |
-
1991
- 1991-02-19 JP JP4548791A patent/JPH0675501B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002194591A (ja) * | 2000-12-21 | 2002-07-10 | Nippon Steel Corp | チタン薄板とその製造方法 |
| JP2002330797A (ja) * | 2001-05-08 | 2002-11-19 | Chisso Corp | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
| CN112359002A (zh) * | 2019-12-04 | 2021-02-12 | 江南大学 | 一株小白链霉菌及其在生产ε-聚赖氨酸中的应用 |
| CN112359002B (zh) * | 2019-12-04 | 2022-08-02 | 江南大学 | 一株小白链霉菌及其在生产ε-聚赖氨酸中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0675501B2 (ja) | 1994-09-28 |
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