JPH05508621A - 自己抗原の経口投与による自己免疫疾患のダウンコントロール - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＆厖立立１ 本発明は、自己免疫疾患、特にＴ−細胞−介在またはＴ−細胞−依存自己免疫疾 患の治療における改善に関する。より詳細には、本発明は、自己免疫疾患の予防 および治療において、経口または腸管内投与された自己抗原、または疾患抑制フ ラグメントまたはその類似物の活性を増補するための協力剤の使用に関する。

および　の　な 自己免疫疾患は、正常な自己移植した組織に対する、細胞または抗体を含有する 異常な免疫反応により特徴付けられる。

数多くの戦略が、自己免疫疾患を抑制するために使用または提案されており、た とえば、シクロホスファミド（ｅ　ｌｙｅ　ｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）　、 シクロスポリンＡ、メトトレキセイト（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、およびイ ムラン（Ｉｍｕｒａｎ　（ａｚｏｔｈｉｏｐｒ・１ｎｅ））等の薬が挙げられる 。プレドニゾン、およびメチルプレドニソロンなどのステロイド化合物も、多く の場合、使用される。これらの薬は、細胞介在自己免疫疾患、および抗体介在自 己免疫疾患の両方に対して、ｔＩＩＪ限された長期間の有効性を有している。こ のような薬の使用は、他の器官系への毒性副作用によって制限されており、さら に、それらは、これらの薬の投薬治療が延期された患者において、”全体”免疫 抑制を促すので、つまり、病原性微生物に対する正常の防衛的免疫反応が調節さ れるので、このため、これらの病原によって、感染の危険性が増加する。さらに 、感染により、全体的な免疫抑制が延期されている患者に、悪性が発展する危険 性が増加するどい自己免疫疾患を治療するための他の治療方法が提案されている 。１９８７年が、急性−相性症状の実験上のアレルギー性急性脳を髄炎（ＥＡＥ ）　、ミニリン塩基性タンパク質に対して、誘発されたＴ細胞介在自己免疫疾患 に有効であることを、開示している。ＥＡＥは承認され、広く使用された、ヒト 疾患多種硬化（ＭＳ、ｈｕｍａｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　５ｃｌ ｅｒｏｓｉｓ）用動物モデルである。上記出願はまた、大型結核菌（Ｍｙｃｏｂ ａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の経口または腸管内投与が、ア ジュバント関節炎の抑制に効果的な治療であることを開示しており、他の自己免 疫疾患の治療に対する前記結果を外挿法により推定するものである。

１９８９年７月１４日に出願された係属中である、米国特許出願Ｎｏ、３７９． ７７８は、自己免疫ブドウ膜網膜炎の治療に対する、Ｓ−抗原の経口または腸管 内治療について開示している。

１９８９年１２刀２０日に出願された係属中である、米国特許出願Ｎｏ、４５４ ．８０６は、細胞介在自己免疫疾患および抗体介在自己免疫疾患の治療用自己抗 原のエアゾール投与について開示している。

ナグレアーアンダーソンら（文［：Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｅｔ。

（ＵＳＡ）８３　ニア４４３−７４４６．１９８６）は、マウスモデルにおける コラーゲン誘発関節炎を抑制するためのコラーゲンの経口投与について開示して いる。

種々の方法が、ＭＢＰ共役リンパ球細胞の静脈内注入（文献：　Ｓｔｒｉｒａｍ 、　ｅｔａｌ、、　Ｃｅ１ｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　７５：３７ｇ、１９ｇ３）お よびフロイント不完全アジュバント（文献：　Ｌａｎｄｏ、　Ｚ、　ｅｔ　ａｌ 、、　Ｊ、Ｐ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１２６：１５２６　（１９８１）　）に おいて乳化されたＭＢＰを使用しての免疫などのＥＡＥの抗原特異性抑制を誘発 するために使用されてきた。

トラウゴットら　（文献：Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｌ、　５６：６５−７３．！９８２ ）　、およびレイネら（文献：　Ｌａｂ、　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　４８ ：２７５−８４．１９８３　）は、ＭＢＰのみの、またはフロイント不完全アジ ュバン）　（ＩＦＡ）における、またはガラクトセレプロシド、すなわちミニリ ンの脂質ハプテンを組み合わせた腸管外投与によって、慢性再発ＥＡＨにより苦 しんでいるモルモットのストレインの治療が、臨床的ＥＡＥ症候を抑制したこと を開示している。

ｖ７クケンナら（文献：Ｃｅ１１．Ｉｍｍｕｎ、８１：３９１−４０２　（１９ ８３））は、先天性の牌白血球または先天性の赤血球細胞に結合したモルモッ） ＭＢＰを用いたラットの前注射が、７０インド完全アジユバントにおけるモルモ ットＭＢＰを用いて、ＥＡＥの引き続く誘発を抑制することを開示している。

英文アブストラクトに基づくと、ベリツクも（文献：　Ｂｅ１ｉｋ　ｅｔ　ａｌ 、、　Ｖｏｐｒ。

Ｍｅｄ、　Ｋｈｉｍ、　２４：　３７２−３７７、１９７８＞は、“アルカリミ ニリンタンパク質フラグメント（ＡＭＰＦ）’およびＥＡＥを有するモルモット に対する”合成脳炎誘発性ペプチド（ＳＥＰ）“の腸管外投与について開示して いる。動物は、牛のＡＭＰＦ、またはＳＥＰによりて、感覚を鋭くされたが、Ａ ＭＰＦ投与後は、回復した。

プレーリーミューレンら（文献：Ｃｃ庄Ｉｍｍｕｎ、　５１：　４０８．１９８ ０　）　、および、上記ナグラーーアンダーソンらは、いずれも自己抗原−リン パ球共役体を用いて動物に注射することにより誘発される、２つの他の実験的自 己免疫疾患症状の抑制について開示している。プレーリーミューレンらは、ＩＦ Ａにおけるサイログロブリン抗原の注入により、モルモットの実験的自己免疫甲 状腺炎の症状の抑制を報告している。ナグラーーアンダーソンらは、マウスにお けるタイプＩＩコーラーゲン誘発関節炎は、アジュバントのタイプＩＩコラーゲ ンを使用して動物に免疫を与える前に、可溶だが、変質しないタイプＩＩコラー ゲンを胃内投与することによって、抑制抑制されることを報告している。

ニューパイ、Ｔ、　Ｊ、ら（文献：Ｌｏｃａｌ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓ ｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｇｕｔ、ｐ、１１９１．ＣＲＣＰｒｅｓｓ　ＢｏｃａＲａ ｔｏｎ％ＦＬ、１９８４；Ｉｍｍｕｎｏｌ、４１　：６１７−６２１．１９８０ ）は、マウスに対してバクテリア性ＬＰＳを与えると、経口投与抗原（ビクリル クロリド）により誘発された接触過敏症への耐性を得ることが可能となることを 報告している。しかしながら、ＬＰＳおよびビクリルクロリドの同時経口投与は 、この抗原に対する延滞タイプ過敏症（ＤＴＨ）において、統計的には重要な効 果を示さない。

ミカレックら（文献：Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２８：１９９２−１９９８．１９ ８２）は、羊の赤血球細胞（ＳＲＢＣ）の延長胃内挿管に続く、５ＲＢＣの全身 投与により、ＬＰＳ−不反応性マウスにおける牌免疫反応およびＬＰＳ−反応性 マウスにおける経口耐性が得られることを報告している。ＬＰＳの共投手はない 。

モ７ット、Ａ、Ｍ、ら（文献：Ｉｍｍｕｎｏ　１．５８：６７７−６８３．１９ ８６）は、オバルプミンを与えられた正常マウスへのＬＰＳの同時投与は、経口 耐性の誘発を防止するが、与えられたオバルミンに対する延滞タイプ過敏症（Ｄ ＴＨ）反応を変えるものではないことを報告している。

ハマダ、Ｔ、ら（文献：Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｒｙ　２：２７５−２８４．１９ ８９）は、ＭＢＰ−敏感性リンパ球細胞の試験管内ＬＰＳ処理は、ルイスラフト におけるＥＡＥのアトブチイブトランスファ（ａｄ’ｏｐｔｉｖｅ　ｔｒａｎｓ 　ｆ　ｅ　ｒ）を増加させることを報告している。

自己免疫疾患の進行性、衰弱性のために、本技術において必要とされるものは、 自己免疫疾患の改善された治療方法である。

本発明の目的は、自己免疫疾患に苦しむ動物の改善された治療方法を提供するこ とである。

本発明のさらなる目的は、自己免疫疾患に苦しむ哺乳動物の治療用薬理学的製剤 を提供することである。

分丑０！！ 本発明は、Ｔ−細胞介在またはＴ−細胞依存自己免疫疾患（ＡＤ）の、改善され た治療または防止方法に関し、本方法は、（ａ）（＋）前記疾患に特異的な自己 抗原：（ｉｉ）前記自己抗原のＡＤ−抑制フラグメント；および（ｉ　ｉ　ｉ） 前記自己抗原または前記フラグメントのＡＤ−抑制類似体からなる群から選択さ れた、少なくとも１つのＡＤ−抑制剤を必要として、哺乳動物に経口または腸管 内投与し：および（ｂ）前記哺乳動物に、前記抑制剤のＡＤ−抑制活性を高める 特性を有する、少なくとも１つの化合物を投与することからなる。

前記化合物の量は、ＡＤ−抑制剤を有するのに効果的であるべきであり、ＡＤ症 候を抑制するのに効果的なレベルで投与される場合には、ＡＤ−抑制剤の抑制活 性を増加させるのに効果的であるべきである。

本発明はまた、共力薬的組成物およびＡＤ治療において有用な投与形態を含有す る。

活性増加化合物（しばしば”共力薬”と称される）は、経口または腸管内投与さ れ石必要がない。しかしながら、経口または腸管内投与が好ましい。さらに、実 質的同時投与が好ましいが、抑制剤および共力薬の投与オーダーは、どのような オーダでも、本発明の範囲内である。

図面の簡単な説明 図１は、ラットにおける延滞タイプ過敏症（ＤＴＨ）のＭＢＰ−ＬＰＳを与える 効果を示す棒グラフである。

図２は、ラットにおけるＭＢＰ−脂質ＡまたはＤＴＨ反応を与える効果を示す棒 グラフである。

図３　（Ａ−Ｃ）は、モルモットにおける慢性ＥＡＥのＭＢＰ＋ＬＰＳを与える 効果を示す棒グラフである。

まい　の 明細書中で参照した全ての特許出願、文献は、それらの完全な参照によって、こ こで具体化される。

本願発明は、（ａ）ＡＤ−抑制剤の腸管内投与または経口投与と、（ｂ）試薬の ＡＤ−抑制活性を高める一つ以上の化合物の投与とによるＴ−細胞介在、または Ｔ−細胞依存自己免疫疾患の治療に関するものである。

ここで使用されているように、”治療”という言葉は、そのような自己免疫疾患 の兆候があられれた後、症状の緩和または治療宇土での抑制と同様に、自己免疫 疾患（またはその病状の兆候が現れること）を防ぐための予防治療の意味も含ん でいる。

さらに、′哺乳動物”は、免疫調整システムを有し、そのため免疫疾患の影響を 受け易い全ての生命を意味している。

自己免疫疾患はヒトを含む哺乳動物の免疫システムの機能不全であり、そのよう な免疫システムは、哺乳動物内の外部物質と自己組織または物質とを識別できず 、その結果、自己組織と自己物質とをあたかも外部からのものであるかのように 取り扱う。

また、”自己抗原”は哺乳動物に通常発見できる物質であり、通常でない場合、 哺乳動物の抗体またはりンバ球からは哺乳動物の一部として理解されず、そのた め哺乳動物の免疫調整システムによって、まるでそのようを抗原が外部からの物 質かのように攻撃される。この自己抗原という言葉はまた哺乳動物に投与したと き、自己免疫疾患の症状を有する状況を誘発させる抗原性物質という意味も含む 。

″ＡＤ−抑制フラグメント”という言葉は、一部のアミノ酸シークエンスまたは 自己抗原の成分を含有し、経口または腸管内投与に応じてＴ−細胞介在またはＴ −細胞依存自己免疫反応を防いだり、または抑制できる能力を有しているタンパ ク質またはポリペプチドという意味をも含む。そのようなフラグメントは、完全 な自己抗原の自己抗原的特性を有することを必要としないということに注目する べきである。例えばＭＢＰに関しては、影響を受け易い哺乳動物においてＥＡＥ を誘発する補助薬を哺乳動物の腸管外に投与すると、影響を受け易い哺乳動物に ＥＡＥが誘発される。それにもかかわらず、Ｕ、Ｓ、特許出願Ｎｏ、６５゜７３ ４．４５４，８０６に開示されているように、ＭＥＰの７ラグメントを有するあ る非疾患（ｎｏｎ−ｄｉｓｅａｓｅ　）は、ＡＤ−抑制活性を有しているという ことが発見された。

”フラグメントまたは自己抗原のような”類似体”という言葉は、化学構造上こ れらの自己抗原またはＡＤ−抑制フラグメントに関連するものであり、同じよう な生物学上の活性を有する、つまり経口投与または腸管内投与によりＴ−細胞介 在またはＴ−細胞依存自己免疫反応を抑制または限定する能力を有する化合物を 意味している。例えば、その言葉は疾患の症状を緩和または抑制するその能力に おいて、自己抗原のＡＤ−抑制活性を模倣する化合物または組成物と同様に、一 つ以上のアミノ酸残さくしかし、ＡＤ−抑制活性は保持している）によって、自 己抗原のアミノ酸シークエンスとは異なるアミノ酸シークエンスを含有するタン パク質をも意味している。そのような組成物の例としては、自己免疫疾患におい て、攻撃のターゲットとなる器官からの組織を例示できる。

”自己免疫疾患抑制剤”または”ＡＤ−抑制剤゛という言葉は、特異的な自己免 疫疾患の臨床上の兆候を遅らせたり、または防いだり、抑制するため、経口投与 または腸管的投与される化合物または組成物を意味している。この言葉は、さき に述べたように、それらの類似体、またはＡＤ−抑制フラグメントと同様に、特 異的な自己免疫疾患に対して作用する自己抗原という意味も含む。

”協力剤“は、ここではＡＤ−抑制剤の投与と共に経口投与されるとき、自己免 疫疾患の臨床上の兆候を抑制を高める、または増強できる物質として限定されて いる。さきの文章で使用されているように、”と共に″（また”と関連して”も 使用されている。）は、ＡＤ−抑制剤の経口または腸管的投与の前、同時、また は後を意味している。本来、協力剤の投与は最初に投与された物質の効果が消え 去るまでに、ＡＤ−抑制剤の投与に引続いて行われるべきである。このため、本 願発明にかかる協力剤はＡＤ−抑制剤を投与してから２４時間以内に投与される べきである。

本願発明で使用される協力剤の例としては、バクテリア性リポ多糖類に限ること なくグラム陰性バクテリアの多岐にわたる。例えばイーコリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）　 、またはサルモネラ薗のサブタイプＬＰＳシグマケミカルコーポレーシ１ン、セ ントルイスＭＯ、ディフコ、デトロイトＭＩバイオモルレス、ラボス、ポリマウ スミーティングＰ　Ａ　（ＬＰＳ、　Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　 Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ，Ｄｉｒｃｏ、　Ｄｅｔｒｏｉｔ　lｌ Ｂｉｏｍｏｌ　Ｒｅｓ、　Ｌａｂｓ、　Ｐｌｙｍｏｕｔｈ　Ｍｅｅｔｉｎｇ、　 ＰＡ）　、脂質Ａ　シグマケミカルコーポレーシ１ン、ＩＣＮ　バイオケミカル ズ、クレバランド、ＯＨ１ポリサイエンスインコーボレーシ１ン、ワーリントン 、Ｐ　Ａ　（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　ＩＣＮＢｒａｃｈｅｍ ｌｃａｌｓ、　Ｃ１ｅｖｅ１ａｎｄ、　ＯＨ，Ｐｏ１ｙｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｉｎ ｃ、、　Ｗｉｒｒｉｎｇｔｏｎ、　ＰＡ　）■謔■■u １１１１１リポタンパク質５例えばプレス、Ｋ、ら（Ｄｅｒｅｓ、　Ｋ、　ｅｔ 　ａｌ、　）ネイチャーＮａｔｕｒｅ　３４２：５６１−５６４．１９８９に開 示されているようにして得られるトリバルミトイル−５−グリカリルクリステイ ニルーセリルー七リン（Ｐ３Ｃ５Ｓ）または、ブラウン、ブイ（文献：　Ｂｒｍ ｕｎ、　Ｖ、、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ　４３５：　３３５−３３７，１ ９）６）により開示されているようにして得られる”ブラウンズリボタンバク質 を例示できる。ＬＳＰは好ましく、さらに脂質Ａは特に好ましい。脂質Ａは全Ｌ ＰＳ分子よりも害が少ないので、本願発明において使用されるには特に好ましい 。本願発明に使用されるＬＰＳもまたグラム陰性バクテリアから抽出され、ガラ ンズ、Ｃ１ら（Ｇａｌａｎｅｓ、　Ｃ，ｅｔ　ｍｌ、　）　（文献：　Ｂｕｒ　 Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　９：　２４５．１９６９）およびスケーリー、Ｒ，Ｒ ，ら（Ｓｋｅｌｌｙ、　Ｒ，Ｒ，ｅｔ　ｍｌ、）　（文献：　Ｉｎｆｅｃｔ、　 Ｉｍｍｕｎ、　２３：　２ｇ７．１９７９）の方法を使用して精製することがで きる。

本願発明において協力剤として使用され、生物学的に活性を有する物質の一般的 な特性は、それらがインターロイキン−１（ＩＬ−１）分泌および／または生成 を誘発するということである。

ＩＬ−１は、数多くの普通の細胞および形質転換が起きた細胞によって製造され るタンパク質であり、マクロファージ、単核白血球、およびケリタノサイト（ｋ ｅｒｉｔａｎｏｃｙｔｅｓ　）によって製造される優れたものである。微生物は 、たとえばエンドトキシン（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎａ）　％エクソトイン（ｅｘｏ ｔｏｊｎｓ）　、イースト細胞壁、であり、そしてウィルス性の血球凝集はモノ サイトによるＩＬ−１ｍ造物を誘発する。ＩＬ−１は、免疫システム外の細胞と 同様に、免疫システムの細胞において生物学上活性の幅広いスペクトルを有して おり、これは大きな炎症性の媒介となると考えられる。

ＡＤ−抑制剤の経口、または腸管的投与と共に行われる協力剤の投与は、試薬が 特効であるため、自己免疫疾患の症状を抑制することにおいて試薬の活性をきわ めて高める。つまり、自己免疫疾患をターゲットとした治療の効率は、協力剤の 共同投与によりて増加する（ＡＤ−抑制剤のみを使用したときの効率との比較り ）Ｏ 本願発明によれば、ＡＤ−抑制剤は、経口または腸管的投与（つまり、直接胃に 投与）された後、それは腸壁の元に配置されている免疫細胞の集まりであるビニ ールバッチ（Ｐｅｙｅｒｓ　Ｐａｔｃｈｅｓ）細胞と接触している小腸になどり 着（。これらの細胞は、骨端内のリンパ腺（腸の上皮の下にある）と同様に、屏 風およびリンパ腺を含む免疫システムと関係している。その結果、ＡＤ−抑制剤 に対する耐性が誘発され、哺乳動物自身の細胞に対して直接反応する免疫は減弱 あるいは完全に抑制される。このように誘発された耐性は、自己免疫疾患に対し て特異的である。病原体に対して反応するため、治療された哺乳動物の能力にお いて、どの様な効果も認められない。さらに、不適切な（つまり、ボビンセーラ ムアルプミンなどの自己免疫疾患に影響を与えない）抗原の経口、または腸管的 投与は、自己免疫疾患の臨床上の兆候に影響を与えない、または自己免疫疾患の ためのモデルとして役だっている誘導可能な状況（例えばＥＡＥ、またはＡＡ） に対する哺乳動物の感染性にも影響を与えない。

本願発明のＡＤ−抑制剤によって誘発された耐性は、投薬量に依存している。

つまり、幅広い経口または腸管内設薬量の範囲、臨床上の抑制（または弱化）、 および摂取されたＡＤ−抑制剤の投薬量の増加なともなった組織学上の疾患の兆 候の増加に依存している。

自己抗原により経口誘発耐性を高めるという協力剤の活性もまた投与量に依存し ている。つまり、協力剤の投与量を増加させることによって増加する。しかしな がら、経口誘発耐性の協力剤により能力を高めることは、実に相互依存的であり 、協力剤の使用は、ＡＤ−抑制剤の比較的多い経口、または腸管内投与量によっ て誘発された耐性を向上させるなめに、継続して前もって行われる。逆に、協力 剤の関連使用は、達成されるべき臨床上の兆候抑制の同じレベルのために使用さ れるべきＡＤ−抑制剤の投与を少量にするためには予期されることである。

経口誘発耐性を高めるための協力剤の活性は、特別なＡＤ−抑制剤に対して特異 的ではない、ＥＡＥおよびＤＴＨ反応は、特異的な自己抗原と、本願発明の協力 剤との共同投与によって、減少するよう調整された。したがって、自己抗原に対 する経口誘発特異的耐性を高めるための協力剤の活性は、本願発明によって包含 される他のＡＤ−抑制剤に対して外挿することができる。協力剤のみの投与は最 小限であるか、もしくは特別な自己抗原に対する特異的な免疫反応、または外抗 原（つまり、真の外部からの抗原性物質）に対する免疫反応を起こす哺乳動物の 能力のどちらも減弱させることにおいて効果を有していない。したがって、本願 発明の協力剤の使用は、他の利点を含む重要な２倍の利点を提供する。つまり、 自己抗原に対する特異的な免疫反応の抑制を高める、および侵入する病原体に対 する免疫反応を起こすために治療される目的物の能力に実質上影響を与えないと いうことである。

種々のモデルシステムが、自己免疫疾患の研究のために開発された。実験的なア レルギー性脳Ｖ髄炎（ＥＡＥ）は、いくつかの哺乳動物種の多種硬化（ＭＳ）の ためのモデルとして、マウス、および他の哺乳動物種で研究がなされた。疾患は 、ＭＢＰ、および補助薬（７０イント不完全アトシユバント）の腸管外投与によ って誘発される。この治療は、−次性症状、および髄鞘脱落疾患の悪化する／軽 くなる形態の両方を誘発する。この誘発された疾患は、ＭＳの特性を有している 。影響され易い哺乳動物の後根尾に、フロイント不完全アトシュパントオイル与 は、自己免疫ブドウ膜網膜炎を誘発する。糖尿病は、ＮＯＤマウス、およびＢＢ ラッツに、自発的に進行する。これらのモデルシステムの中のいくつかのものは 、効果、および本願発明による改善された治療法の効果を立証するために用いお よび自己免疫甲状腺炎等を誘発する。経口、および腸管的投与が行われたときの これらの疾患の治療における特異的な自己抗原効果、および疾患モデルのリスト を、以下の表１に示す。

以下、余白。

ｉＬ 底息ｊ！五−性且二１巳区区 多種硬化　ＭＢＰ リウマチ様関節炎　コラーゲン 自己免疫甲状腺炎　サイログロブリン 自己免疫ブドウ膜網膜炎　Ｓ−抗原 糖尿病　イレット細胞エキス （Ｉｓｅｌｅｔ　ｃｅｌｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　）慢性活性肝炎　肝臓エキス アドレナリテイス　副腎腺エキス （＾ｄｒｅｎ吐ｔｉｓ　） 多発性筋炎　筋エキス 自己免疫疾患のため、さきに示したような特異性抗原と同様に、組織エキスが使 用される。

他の自己免疫疾患、その特異性自己抗原、および／または目的細胞は、シュワル ツ、Ｒ，Ｓ＋ら、（文献：　Ｓｃｈｗａｒｔｚ、　Ｒ，Ｓ、　ｅ＋吐Ｆｕｎｄａ ｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ。

５ｅｃｏｎｄ　ｌｆｆ１ｉｔｉｏｎ、　ＰＩＩｕｌ、　Ｗ、Ｅ、、　Ｅｄ、、ｐ ｇ８＋９−１１５９．　Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ、　ＮＹ、P９８９　）に開示 さ とされている細胞から単離される。例えば、ＭＳ治療のために使用されるミニリ ン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）は、以下の実施例１に示されているような、ダイ プラーら（Ｄｉｅｂｌｅｒ　ｅｔ　ｍｌ、）　（下部）の方法を使用して、哺乳 動物から単離精製される。

リウマチ様関節炎の症状を有する疾患を治療するとき、コラーゲンは、トレンザ ムら（Ｔｒｅｎｔｈｉｍｅｔａｌ、）　（文献：　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　 １４６：８５７．１９７７　）の方法によって単離精製される。　自己免疫ブド ウ膜網膜症を治療するためには、審査中の出願番号Ｎｏ、３７９，７７８に開示 されているように、精製されたＳ−抗原を得る。

本願発明に使用するための自己抗原の類似体およびフラグメントは、タム、ジェ イーら（Ｔｈｍ、　Ｊ、　ｅｔ　ｍｌ、）　（文献：　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ 、　Ｓｏｃ、　９８：　７３５７．１９）６）と同様に、メリフィールド、Ｒ， Ｂ　、（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、　Ｒ，Ｂ、　）　（文献：　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏ ｃ、　Ａｍ。

Ｓｏｃ、　Ｅｘ、　Ｂｉｏｌ、　２１：　４１２，４９６２、およびミツチェル 、Ａ、　Ｒ，ら（Ｍｉｔｃｈｅｌ、んＲｏｅｔ、ａｌ）　（文献：　Ｊ、　Ａｍ 、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　８５：　２１４９．１９６３）の様な技術において 周知の固相合成技術を使用して合成できる。類似体は、さきに開示されたタンパ ク質合成技術を使用して、醇量のアミノ酸連続物と化合させることにより製造で きる。

類似体は、イーラー、Ｅ、　Ｈ，（Ｅｙｌｅｒ、Ｈ，）１．）　（文献：　ｉｎ 　Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎＥｚｏｅｒｉｍｅｎｕｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ 　Ｂｉｏｌｏｇｙ　９８：　２５９−２８１．１９７８　）　ｓおよびＧ、ハシ ム（Ｇ、　Ｈａｓｈｉｍ、　ｉｎ　Ｍｅｙｌｉｎ：　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎ ｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｔ、　Ｎ、Ｙ、、　P９８０）に開 示 されている技術のように、ＧＰ−ＭＢＰの周知のアミノ酸連続物を使用して形成 できる。たとえば、Ｈａｘｈｉｍ（上部）に開示されているようなＧ　Ｐ　−Ｍ Ｂ　Ｐアミノ敗残さ７２−８５に一致する連続物を有しているタンパク質は、末 端のアスパラギン位置を、グルタミンで置換したアミノ酸代替品に関する先に述 べた技術を使用して、化学的に合成することができる。タンパク質は、以下の実 施例２に示されたような技術を使用して、経口または腸管内形状で、投与された ときの疾患抑制活性のテストがなされる。

疾患抑制類似体およびフラグメントは、周知のＤＮＡ組替え技術を使用して得る ことができる。

本願発明はまた、自己免疫疾患にかかった哺乳動物を治療するために使用される 薬学上の製剤を提供する。この製剤は、ＡＤ−抑制剤の自己免疫疾患抑制効果を 増加させるのに効果的な協力剤の量（以下に示す。）と、薬学的に受容可能なキ ャリアー、および希釈水からなるものである。この製剤はまた、特異的な自己免 疫疾患の臨床上の症状を抑制、または治療するために効果的な自己免疫疾患のた めの特異的なＡＤ−抑制剤の量（単一で、または協力剤の量と関連して）からな るものである。本願発明の処置に準する自己免疫疾患の症状の統計学上の重要な 弱化は、本願発明の範囲内であるということが理解できる。

本願発明にかかる各々の製剤は、付随的な成分として、薬学的に受容可能なキャ リアー、希釈水、溶解、またはエマルシコン化させるための試薬、およびこの分 野において周知のタイプの塩を含有する。たとえば、錠剤はこの分野で周知の固 体キャリヤーを使用する通常の手順に従って製剤されるであろう。本願発明で使 用されるカプセルは、薬学上許容可能な物質、たとえばゼラチンまたはセルロー ス誘導体から製造されるであろう。経口投与形状のための解は具合いが維持され ている（ｇｕｓｕｉｎｅｄ　ｒｅｌｅｓ＋ｓｅ　）経口供給システムおよび／ま たは腸用性コーティングについては、たとえば１９８７年１１月３日に許可され た米国特許Ｎｏ。

４．７０４，２９５．１９８５年１２月３日に許可された米国特許Ｎｏ、４，５ ５６．５５２．１９８２年１月５日に許可された米国特許Ｎｏ、４，３０９，４ ０４、および１９８２年１月５日に許可された米国特許Ｎｏ、４，３０９，４０ ６で熟慮されている。

固体キャリヤーの例は、でんぷん、砂糖、ベントナイト、シリカ、および通常キ ャリヤーとして使用されているものを含む。さらに、本願発明の製剤として使用 されるであろう希釈水、およびキャリヤーはすべて塩水、シロップ、デキストロ ース、および水を含む。

必要な効果を得るための量は、投薬の投薬単位（例えば、カプセル、錠剤、また はそれらの組合せ）を増やすことによって達成できるので、各々の投薬形状の個 々の投薬量に含まれている活性成分の単位含有量は、それ自体が効果的な量を含 んでいる必要はないということは多角評価されるであろう。

本願発明にかかる協力剤の投薬経路は、好ましくは経口または腸管内である。

好ましい経口または腸管内の薬学上の製剤は、たとえば自己免疫疾患に特異的な ＡＤ−抑制剤の効果的な量を含んでいる、または含んでいない本願発明の１つ以 上の協力剤の１ｍｇから３００ｍｇを含有するカプセル、またはビルからなるで あろう。

一般に、自己抗原、フラグメント、または類似体は、１日につき約１５マイクロ グラム／ｋｇ哺乳動物から１５ミリグラム／ｋ　ｇ＠乳動物の量を経口、または 腸管内で哺乳動物に導入される。そして１回の投薬形状、または数回の投薬形状 で投薬されるであろう。ざらに、自己抗原、フラグメント、または類似体は、１ 日につき３００マイクログラムから１２ミリグラム／ｋｇｌｌｌ乳動物の量で投 薬されることが好ましい。

協力剤は、１日につき哺乳動物に対して、約１５ミリグラムから１５ミリグラム ／ｋｇｌｌｌ乳動物という広い範囲の量、より好ましくは１日につき約３００ミ リグラムから１２ミリグラム／ｋ　ｇ＠乳動物の範囲の量を、好ましくは経口ま たは腸管内投薬で哺乳動物に１回の投薬形状、または数回の投薬形状で投薬され るであろう。自己抗原、性物宇土の活性フラグメント、または自己免疫疾患のた めの特異的な自己抗原の類似体の投薬前（２４時間以内、好ましくは１時間以内 ）、実質上同時、またはその後（投薬後、２４時間以内）に、協力剤は経口、ま たは腸管内投薬されるであろう。正確な投与量、および投薬の頻度は、治療され るべき対照物の倫理的状況、体重、性別、年齢はもちろん、ＡＤ−抑制剤および 協力剤の活性と相互作用を有しているということは当業肴によって理解されるで あろう。その結果として、投薬量の調整および投薬スケジュールは、上記要因を ベースとして決定されなければならない。そして経験的に決定される必要がある であろう。しかしながら、そのような決定には文献（ＥＡＩＥ　ｉｎ　Ｊ、Ｉｍ ｍｕｎｏ１１４０：４４０−４４５．１９８８）でヒギンズおよびウニイナー（ Ｈｉｇｇｉｎｓ　ａｎｄ　Ｗｅｉｎｅｒ）によって開示されているように、繰り 返しの実験のみが必要である。

以下に示す実施例８に示されているように、ＩＬ−１の皮下投薬はＥＡＥにおけ る経口投薬のＡＤ−抑制効果を高める。ＩＬ−１は、ＥＡＥ媒介、ヘルパーニー 細胞における免疫刺激効果を有するということの発見は最も驚くべきことであり 、したがって疾患の症状の悪化が予期されるであろう。このため、協力剤（ＩＬ −１生成物および／またはせ泌物を含む）の経口および腸管内投薬が好ましいが 、ＩＬ−１の腸管外投薬、および好ましくは哺乳動物に対して、約０．２ミリグ ラム／ｋｇ哺乳動物から６０ミリグラム／ｋｇｌｌ！乳動物という濃度範囲での 、ＡＤ−抑制剤の経口、及び腸管内投薬と併合した皮下投薬もまた本願発明の範 囲内である。本願発明で使用されるＩＬ−１は、数多くの市販源、たとえばボエ リンガーマンヘイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　：　Ｉｎｄｉ ａｎｏｐｏｌｉｓ、　ＩＮ）　、アンジエンバイオロジカルズ（Ａｍｇｅｎ　Ｂ ｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ　：　Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａｋｓ、ＣＡ　）　、および ＩＳＮバイオケミカルズ（ＩＳＮ　Ｂｉｏｃｈｅｍｆｃａｌｓ　：　Ｃ１ｅｖｅ ｌ＠ｎｄ、　ＯＨ）　から入手することが可能である。

ＡＤ−抑制剤、および協力剤が軽口に導入される場所で、それらは他の食物と混 合され、固体、半固体、懸濁液、またはエマルジョン形状として消費される。

つまり、それらは薬学上の許容可能なキャリヤー、口当りを良くするもの（ｎａ ｖｏｒ　ｅｎｈｉｎｃｅｒｓ）等と混合される・ＡＤ−抑制剤、および協力剤が 腸管内に導入される場所で、それらは固体、半固体、懸濁液、またはエマルシコ ン形状に導入され、周知のホストと、水、懸濁試薬、そして乳状試薬を含む薬学 上の許容可能なキャリヤーと混合されるであろう。

ＡＤ−抑制剤、および協力剤は同じ投薬形状で共に投与されたり、分離された投 薬形状を摂取することによる共同投薬、または分離された投薬形状の連続投与に よって投与かれるであろう。

実施例２から８は、ＡＤ−抑制剤、および上記共同使用の特異的な耐性を高める 効果および本願発明にかかる協力剤の使用を図示している。

実施例２から８によれば、協力剤として、与えられたバクテリア性リボポリサツ カリド（ＬＰＳ）、またはＬＰＳの脂質Ａモイエティー（ＬＰＳは、脂質Ａモイ エティーと、ポリサブカリトモイエティーとからなるものである）は、ルイスラ ットのＥＡＲに対してＭＢＰを与えたことによる保護効果を高めている。疾患の 誘発、疾患病、疾患進み具合い（Ｉｎｄｅｘ　）は、ＡＤ−抑制剤のみの経口投 与に対して、協力剤とＡＤ−抑制剤とを投与した結果としてすべて減する。本願 発明の協力剤はまた、モルモットにおける慢性ＥＡＥを使用している実施例６に 示されているような活性疾患段階の間、自己抗原と共に投与されたとき、疾患の 兆候を抑制する効果を有している。

ＭＢＰ−プラス−ＬＰＳ、またはＭＢＰ−プラス−脂質Ａを与えることは、また 治療される動物の遅延型感覚過敏反応の重要な疾患をもたらす。ＥＡＥおよびＤ ＴＨは、両方ともＣＤ４＋Ｔ−細胞介在現象となると信じられている。結果とし て、ＤＴＨにおける疾患は、本願発明の協力剤の効果を確証する。ＥＡＥおよび ＤＴＨシステムにおいて、自己抗原、ＭＢＰなしにそれだけが添加されるとき、 脂質ＡまたはＬＰＳは効果を有していない、もしくは効果が小さい。このため、 協力剤の耐性を高める効果は特異的である。

本願発明の協力剤は、自己免疫疾患、たとえば上記表１に例示された疾患と同様 に、他の自己免疫疾患、例えば関節炎、糖尿病の治療においてＡＤ−抑制剤の経 口、または腸管内投薬によりて得られる抑制効果を高めたり、もしくは増強させ る。

ざらに、下記実施例７に示されているように、ＭＢＰプラスＬＰＳの経口投与は 、ＭＢＰが与えられた（ＭＢＰ−ｆｅｄ　）ラックのクラスエ組織適合性を有す る分子と比較して、治療された動物から単離された内臓上皮細胞上では、クラス エ工組織適合性を有する分子の発現を減少させる。理論を除外して考えると、ク ラスＩＩの形質発現の相対的な減少によって、ＬＰＳは、誘発細胞であるＣＤＪ 十丁細胞（ヘルパーニー細胞）に対して抗原の変形を引き起こすという仮設を設 けることができる。

経口ＭＢＰ耐性誘発、つまり抑制するものＴ−細胞の誘発は、異なるメカニズム を介して機能すると信じられているので、ＬＰＳおよびＭＢＰが共に投与される とき、協力剤の効果が認められる。

本願発明は、本願発明をより詳しく説明している下記実施例によりて、なんら本 願発明の範囲を限定することなしに、さらに説明される。

夾五匹上二 本発明の方法を実施する際に使用される自己抗原は、以下に示す技術および方法 を用いることにより得られた。

Ｇ　Ｐ　−ＭＢ　Ｐは、ジエプラー等の文献（Ｄｊｅｂｌｅｒ、　Ｇ、　Ｅ、ｅ ｔ　ｉｌ　（Ｐｒｅｐ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　２：１３９、１９７２））の方法 によりモルモットの脳組織から精製され、ベルフリーズ（ＰｅｌＦｒｅｅｚｅ） 　（ロジャーズ、アーカンサス（Ｒｏｇｅｒｓ、＾ｒｋｉｒ＋５ａｓ））から得 られた・詳しくは、中央神経システム組織は、単離され、クロロホルム−メタノ ール溶液中で均質化され、アセトンで抽出され、濾過され、同じ溶液中で再び懸 濁された。溶液は、アセトンで抽出され、濾過され、水で再び懸濁され、ｐＨ３ にｌｌｌ整され、１時間保温された。その後、溶液は、遠心分離され、８Ｍ尿素 で抽出きれ、ＣＭ−５が加えられ、ｐＨ１１にａｌｌ！ｌされた。その後、溶液 は濾過され、尿素で二回に渡って再懸濁された。そして、溶液は再度濾過され、 水中で２回再懸濁され、濾過され、０．１２１ＮのＨＣＩで再懸濁され、濾過さ れ、希釈水１０体積に対して透析され、使用するまで凍結乾燥された。

！　ＬＰＳの投与は、ＥＡＥにおけるＭＢＰ投与の抑制効果を拡大するＯ 一連の実験が、ルイス（Ｌｅｗｉｓ）ラットを用いて行われた。ここで、生後６ 〜８遍のルイスラット（ハルラン−スプラグ　ドウレイ、インディアナポリス、 ＩＮ（Ｈ＠ｒｌａｎ−３ｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌｅｙ、　Ｉｎｄｉａｎｏｐｏｌ ｉｓ、　ＩＮ））は、１８ゲージのステンレススチール製動物投与針（トーマス 　サイエンティフィック、スウエデスボロ、ＮＪ（Ｔｈｏｍａｓ　５ｃｉｅｎｔ ｉｎｃ、　ｓｗｅｄｅｓｂｏｒｏ、　ＮＪ））を用しゝた胃の挿管により、ＭＢ Ｓ（ＰＢＳ内に１ｍｇ）もしくはＬＰＳ　（ＰＢＳ内に１ｍｇ）のみ、またはＭ ＢＳ＋ＬＰＳ　（１ｍｇと１ｍｇ）の組合せで投与される。ラットは、免疫処理 がなされる前に５回（全投与量５ｍｇ）投与される。ＬＰＳ　（シグマケミカル 　Ｃｏ、Ｓｔ。

ロイス、Ｍ　Ｏ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ 、　Ｍｏｂ）は、Ｅ、コイル菌株（Ｅ。

ｃｏｉｌ　ｓｔｒ鳳ｉｎ）　０１２７　：　Ｂ　８からのものである。そしてラ ットは、最後の投与の２日後、マイコバクテリウムチューバクロシス（Ｍｙｃｏ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）　（ディフコ、デトロイト、 Ｍ　Ｉ　（Ｄｉｒｃｏ、　Ｄｅｃｒｏｊｔ、　Ｍｌ））を４マイクログラム有す る完全なプレウドのアジュバント（ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｆｒｅｕｎｄ’　ｓ　ａ ｄｊｕｖａｎｔ）　（ＣＦ　Ａ　）と同じ体積の２５マイクログラムのＭＢＰで 、各足パッド内で免疫処理される。そして、その後の２から３週間にかけてＥＡ Ｅ疾患が観察される。疾患は、麻酔により発現する。７０回スコアーリングシス テムは、Ｏ＝普通、ｌ＝ニリンブチイルｌｉｍｐ　ｔｌｌｉｌ）、２諺後足麻痺 （ｂｉｎｄ　ｌｅｇ　ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、３Ｍ失禁（ｉｎｃｏｎｔｉｎｅｎ ｃｅ）、４−四肢麻痺された。疾患インデックスは、各動物で計算され、最も高 ν１疾患のスコアーの疾患の回数（数日において）の継続で溝成される。動物は 、盲目の状態で臨床的に測定される。結果は、以下の表２にまとめる。

糞−１ ＭＢＰにより経口的に引き起こされた ＥＡＥの抑止の経口ＬＰＳによる向上 ＮＬ　及里！　葭区ユ且Ｌ　王孜立毀直弧支班息工Ｚ二り五無し　２２／２２　 ６Ｊ５±０．３９　２．９８±０．３８　１８．６０±２．０３ＬＰＳ投与　２ ０／２４　４．８５ｆ：０．５６’　１．８９±０．２５”　１１．１５±ＩＪ ４’ＭＢＰ投与　２１／２９”　３．２４±０．５０’　１．１７±０．１８” 　５．８３±１．１８’ＭＢＰ＋ＬＰＳ投与　１２／２９ゝ　１，９７±０．５ ３”　０．５３±０．１３”　２．７２±０．７９“（ｐ＜０．０５）’　（Ｎ 、Ｓ、）’　（ｐ＜０．０５）’　（ｐ＜０．０５）”叩＜　０．０６　ｖｓ、 コントロール ｂｐ　＜　０．０１　ｖｓ、コントロールｃｐ　＜　０．００１　ｖｓ、コント ロールｃｔｐ値は、ＬＰＳ＋ＭＢＰ　ｖｓ、　ＭＢＰを比較した値（ｐ値は、発 現をのぞいてｔ−テストにより、カイの２乗を用いて計算された。）実験では、 ＭＢＰのみを投手した動物と比較してＬＰＳとＭＢＰとの両方を投与した動物の 疾患に対する抑制が顕著に増加し、これは表より明かである。ＭＢＰ＋ＬＰＳは 、疾患の発現が低かった（コントロールが２２／２２であり、ＭＢＰを投与した 動物が１２／２９であったのに対し、ｌ　２／２９でありた。）。

また、疾患の期間、平均の最高強度およびＩＤが低かった。ＬＰＳ投与のみが、 ＭＢＰもしくはＭＢＰ＋ＬＰＳのいずれよりもＥＡＥへの動物の感受性における 影響がより少ない点に注意する必要がある。結果は、ＡＤ−抑制剤（ＭＢＰ）お よび協力剤（ＬＰＳ）を併せて使うことにより、疾患抑制の添加剤もしくは協力 剤の強化を明かに立証するものである。

：　ＬＰ　の　Ａの　が六　の ＬＰＳは、ポリサッカライド鎖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｈａｉｎ） に加えて脂質の部分をも有する構成である（チラー等の文献（Ｃｈｉｌｌｅｒ、 　Ｊ、　Ｍ、　ｅｔａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎｅｔ、　Ａｃ１ｄ、　５ｃｉＵＳ Ａ〕Ｏ：　２１２９−２１３３．１９７３））。行われた実験において、ＥＡＥ を抑制する協力剤として、ＬＰＳよりも良いか同等の機能を有する脂質Ａが見い だされた。ラット（グループにつき９〜１０）は、上記実施例２においてＬＰＳ を投与するために用いられた実験計画にしたがい脂質Ａを投手された（ラット当 り７５マイクログラム、シグマケミカル社製、サルモネラ　ミネソタ（Ｓａｌｍ ｏｎｅｌｌｉ　ｍ１ｎｎｅｓｏｔａ）　Ｒｅ５９５）。ＥＡＥは、上述した実施 例２に記載されたように引き起こされた。

結果を表３にまとめる。

ＬＰＳ分子の活性部分である脂質Ａ ！！ｙＬ　ｉ里！　葭帆ユ且Ｌ　至轟ムとニヱ　医ＭヱニＬ五無しくコン）０− リ　１０／１０　７．７ＯｆＯ，２６３，１±０．１０　２６．２０±１．９４ 脂質Ａ、９／９　７．５６±０．３４°　３．４０±０．２４”　２４．３３± １．フロａＭＢＰ　１０／１０　６．４Ｏｆ０．４５’　１．９±０．２３’　 １１−７９：ｌ：１．９４’ＭＢＰ＋脂質Ａ　３／９　３．４４±１．１６’　 ０．０３±０．２９’　６．５０±２．１′（ｐ＜０．０５）’　（ｐ＜０．０ １）”　（ｐ＜０．０５）”ａｐ　有意差無し ｂｐ　＜　０．０６ ｃｐ　＜　０．０１ ｄｐ　＜　０．００１ ｅｐ　ＭＢＰ　ｖｓ、　ＭＢＰ＋ＢＰ＋の値上紀要３に示される結果かられかる ように、ＭＢＰと共に経口で投与された７５マイクログラムの投与量での脂質Ａ は、疾患インデックスにおいて、コントロールの１２．１２およびＭＢＰを投与 したラットの１１．６からＭＢＰ＋脂質入全質入したラットの０．０６へ減少す ると共に、ＥＡＥに対しての抑制を強化する（表３参照）。加えて、ＭＢＰ＋Ｂ Ｐ＋を投与したラットは、疾患の発現率が低く　（他のグループが１００％であ るのに対し、３３％である。）、発現の期間も短く、そしてコントロール、ＭＢ Ｐ投与、脂質Ａ投与と比較した場合、より低い平均最高強度を有する。

４：　゛・ 実施例２および３の実験は、麻痺により測定される上述したモニターの疾患表現 により概略示されている。一連の実験は、他の免疫測定が協力剤の使用の結果と しての付加物の影響をも立証できるか否かを決定するためになされる。ＥＡＥは 、疾患を仲介するＣＤ４＋Ｔ細胞であるとされており、そしてこの細胞は遅延型 過敏症（Ｄ　Ｔ　Ｈ）反応に含まれる主要な細胞であるので、ＬＰＳで処理され る動物におけるＤＴＨの応答は抑止が観察されるか否かを決定するために測定さ れる。これらのＤＴＨ反応は、ラットの耳介内に自己抗原（ＭＢＰ、２００マイ クログラム／ｍｌ＞５０マイクロリツターを注入した後４８時間の耳め腫脹を測 定することにより通常の方法においてなされる。この耳は、ＭＢＰにさらされず 、ＭＢＰ２００マイクログラム／ｍｌで感作され、および／または抗原投与に先 だって１ｍｇのＭＢＰおよび／またはＬＰＳ　（１ｍｇ）が投与される。コント ロールとして、２００マイクログラム／ｍｌの濃度の５０マイクロリツターのミ コノでクテリウムチューバコロシス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　＋ｕｂｅｒ ｃｏｌｏｓｉｓ）　（Ｍ　ｔ　）力１、ＭＢＰで感作されたラットに投与される 。測定は、Ｊ、イミャーナル（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１２５＝４８３、１９ ８０）に記載された方法により行われ、耳の腫脹の変化の平均をインチ×１０． ２で示すものである。結果を図１および図２に示す。図１および’［２におＩ／ １て、縦軸は、ＭＢＰを注入前および注入後４８時間のう・７トの耳の肉厚の変 化の平均を示すものである。図１は、ＬＰＳを投与したラットのＤＴＨの結果を 示し、図２は脂質Ａを投与したラットのＤＴＨの結果を示す。

ＤＴＨ応答における注目すべき重大な減少（４５％）は、ＭＢＰおよび脂質Ａも しくはＬＰＳの両方の組合せを投与した動物において見いだされる。ＬＰＳもし くは脂質Ａのみではいずれも、耳腫脹を抑制するいかなる影響を有しない（図１ および図２参照）。ＭＢＰおよびＬＰＳもしくは脂質Ａの投与によるＤＴＨの抑 制は、ＭｔへのＤＴＨの応答が影響しないように、抗原特異性を有する。

５：　の　にター　る　の 本発明の協力剤の作用の機構を研究するために、実験が上記実施例２に記載され たような実験計画にしたがって行われた。ここで、協力剤は、経口（”ＰＯ”） もしくは皮下（”ＳＱ”）の両方で上述した実施例２のようにＭＢＰ１ミリグラ ムを５回投与する時と同時に投与される（１ミリグラムの投与である。）。コン トロールは、単にＭＢＰを注入しただけである。結果は以下の表４にまとめる。

１−土 ＬＰＳは、経口で投与した方が、 他の方法で投与するより、より良く口の耐性を強化する。

■　久ユ！　庄扱ユ旦Ｌ　王曳０１艮汰支　医１Δ２−−し乙無しくコンドトリ 　５１５　７．６±０．５１　３．２±０．３７　２４．８±３．７８ＭＢＰ投 与　５１５　５．４±０．４０°　ＩＪ±０．３７”　１０．０±２．４５’Ｍ ＢＰ＋ＬＰＳ　ＰＯ２１５１，８±０．１１１　０．８±０．４９”　３．６± ２．２３’（ｐ＜０．０５）’　（ｐ＜０．０５）’　（ｐ＜０．０５）’ＭＢ Ｐ＋ＬＰＳ　ＳＱ　４／４　６．０±０．７１’　２．７±０．２５’　１５． ５２±３ｏ２８ＬＰＳ　ＳＱ　４／４　５．０±０．４７６　４７５±０．２５ ｋ　２２．７５±５．４’卵＜　０．０１ ｂｐ　＜　０．０５ ｃｐ有意差無し ｄｐ　ＭＥＰ＋ＬＰＳ　ＰＯｖｓ、　ＭＥＰ＋ＬＰＳ　ＳＱの値経口によるＬＰ Ｓは、ＤＩをコントロールにおける２３．０４およびＭＢＰを投与したラットに おける８、０からＭＢＰ＋ＬＰＳを投与したラットにおける０、２６へ減少させ る。他方、皮下によるＬＰＳは、ＭＢＰを投与した後、耐性が排除され、ＩＤが ＭＢＰのみが８゜０であるのに比較して、１６．５となる（表４参照）。ＭＢＰ に対するＤＴＨの応答は、これらのラットにおいて測定され、臨床的な疾患にお いて得られた結果と相関する。経口によるＬＰＳとＭＢＰはＭＢＰのみよりより ＤＴＨ応答を抑制する（データは示されていなＩ／１゜）。皮下注射によるＬＰ Ｓと経口によるＭＢＰとで処理されたラットにおいて、耳の腫脹はこれらのコン トロールのラットと大きく相違していない（データは示されていないｅ） ６：　におｌＬｉな凱導入玄二Ｒ隻 本発明の協力剤の活性面での効果を調べるために、進行中の自己免疫疾患で、慢 性のＥＡＥモデルが研究された。モルモットの株１３（アソシエーテフド　ラビ ットインダストリー、イースト　ブリッジウォーター、Ｍ　Ａ　（Ａｓｓｏｃｉ ＋ｕｅｄＲａｂｂｉｔ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、　Ｅａｓｔ　Ｂｒｉｄｇｅｗａ ＋ｅｒ、　ＭＡ）が、モルモットのミニリン（ｍｙｅｌ、ｉｎ）　（x ル　フリーズ、ロジャーズ、Ａ　Ｒ（Ｐｅｔ−Ｆｒｅｅｚ、　Ｒｏｇｅｖｓ、　 ＡＲ）より購入）、および熱殺菌されたミコ／＜クテリウム　チュ／＜−クロシ ス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｊｓ）（ディフコ、デ トロイト、Ｍ　Ｉ　（Ｄｉｆｃｏ、　Ｄｅｔｒｏｉ＋、　Ｍり）を４マイクログ ラムを有する未完成フロートアジュバント（Ｉｎｃｏｒｒ＋ｏｌｅｔｅ　Ｆｒｕ ｅｎｄ’ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ）と同じ体積の無菌の生理食塩水のｌ：１混合物 で感作する。、０．　４　ｍ　ｌが、うなじの領域におＶｌて、いくつかの部分 に注射された。

免疫処理をした後３２日口のＥＡＥの最初の発作の後、−週間に３回、動物は、 上述した実施例２のように脂質Ａ１５０マイクログラムと共に、もしくは無しに ウシのミニリン（ｍｙｅｌｉｎ）製剤（バイオピュアー、ボストン、Ｍ　Ａ（Ｂ ｉｏｐｕｒｅ。

Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ））　１０　ｍ　ｌが投与された。動物は、１２０日間盲 目の状態で疾患が発生するかを他の全ての日において評価される。疾患は、後足 の麻痺および失禁により特徴づけられる。疾患は、臨床的な強度でクラス分けさ れ、０！異常部分無し、１冨弱々しく、元気がなく、活動性に欠ける、２＝緩や かな不全対麻痺、３諺並の不全対麻痺、４富極度な不全対麻痺、５：ｌ＝死、と いうものである。臨床的な強度の記録は、全能力の最高アトリスク（Ｕ−ｒｉｓ ｋ）スコアー（最高能力アトリスクスコアーは、全ての動物が臨床的な強度４で あると想定するものである。）により分割された観察の数の有効スコアー回数を 得ることにより発生するものであり、増加回数は１００回である。結果は図３に まとめる。

図３Ｃは、コントロールの動物を示す。これらの動物の臨床的なスコアー（図３ Ａ〜３Ｃにおいて、各棒グラフは、１つの個々の動物を示す。）は、６１から８ ７の範囲内である（図３Ｃ参照、平均７３）。ウシミニリンに脂質Ａを加えて経 口で投与したものが、臨床スコアーを１９−２６に減少させるにもかかわらず（ 図３Ａ参照、平均２２）、軽口ウシミニリンの投手は、臨床的なスコアーを１９ 〜７２へ減少させる（図３Ｂ参照、平均値５３）。進行中の自己免疫疾患を処理 するためのＡＤ−抑制剤と共に協力剤を軽口で投与することの効果を立証する。

ｍ二　ＭＢＰとＬＰＳを投与した動物からの腸上皮細胞は、クラスＩおよびクラ スＩＩの分子の異なる量を示す。

これらの実験において、腸上皮細胞は、ＭＢＰおよびＭＢＰにＬＰＳを加えたも のを投与された生後６〜８週の雌のルイスラットから分離される。腸粘膜の上皮 細胞は、ブランド等の文献（Ｂｌａｎｄ、　Ｐ、Ｗ、、　ｅｔ　ａｌ、　Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、、　５８：１．１９８６）に記載されたように通常のルイスラットか ら得られる。十二指腸および隣接する空腸を含む小さな腸が、長手方向に切開さ れ、多量のＨＢＳＳ　（ハンクス平衡食塩水（Ｈａｎｋｓ　ｂａｌａｎｃｅｄ　 ５ａｌｔ　５ｏｌｕｔｊｏｎ）で洗浄され、０．５ｍＭＥＤＴＡを含むＨＢＳＳ 内で５分間室温で保温される。絨毛のと皮細胞および粘液は、ゴム冠ポリスマン で粘膜をこすることにより取り除かれる。そして、得られた塊は、バウトクール ビベツフトを用いて単一の細胞懸濁液内に粉砕される。その後、細胞は、１０％ のＦｅ２　（フエタル　カル７　七ルム（ｆｅｔａｌ　ｃａｌｆ　ｓｅｒｕｍ） ）を含むＲＰＭ１１６４０メディアム内で洗浄される。血球ｔｔ算機で数えられ る。そして、細胞はクラスＩおよびクラスＩＩ決定子へ゛モノクローナル抗体で 染色され、そしてサントス等の文献（Ｓｉｚｎｔｏｓ、　Ｌ、Ｍ、　Ｂ、　ｅｔ 　ａｌ、　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　（Ｉｎ　ｐｒｅｓｓ））に記載 され石よ■■ フルオレセンス　アクチベート　セル　ソーター（Ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ　Ａ ｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｃｅ１ｌＳｏｒｔｅｒ）　（ＦＡＣ５）上で数え上げられる 。

投与の量は、ＭＢＰ１マイクログラム、もしくはＬＰＳの１マイクログラムと共 にＭＢＰ１マイクログラムである。以下に示す細胞の比率は、クラスＩＩ抗体を 示すものであり、コントロールラットからの上皮細胞の５３．８％、ＭＢＰを投 与したラットの６５．９％、ＭＢＰおよびＬＰＳを投与したラットの１６゜９％ である。以下に示す細胞の比率は、クラスエ抗体を示すものであり、コントロー ルラットが８６．７％、ＭＢＰ投手ラットが９８．４％、ＭＢＰとＬＰＳを投与 したラットが６１％であった。これらの結果は、ＭＢＰとＬＰＳを投与したラッ トから上皮細胞のクラスＩＩ組織適合性抗体表現上の異なる効果を立証するもの である。これらの結果は、ＬＰＳの活性が上皮細胞上の興なる減少するクラスＩ Ｉ表現（クラスエ表現に関して）を含む機構により可能なひとつであることを示 す。したがって、これらの細胞は、抑ｔｉｌＪＪＩＩ胞と反対の誘発（もしくは ヘルパー）細胞であるＣＤＡ＋細胞への抗原は優先的に存在しない。

大旌涯−１二 本発明の協力剤の活性の機構を調べるために、実施例２と同様にＥＡＥが導入さ れたルイスラット（グループ当り５匹）は、経口で、Ｇ　Ｐ　−ＭＢ　Ｐのみを １ｍｇ、ＧＰ−ＭＢＰ　（１ｍｇ）およびＬＰＳ　（１ｍｇ）（経口）、ＩＬ− １（２ＯＯＶイクログラム、腹腔内への投！５．）、もしくはＧＰ−ＭＢＰ　（ １ｍｇ）＋ＩＬ−１の注入（２００マイクログラム、腹腔内投与）により、最後 の投与の後処理の後処理し、疾患インデクスを測定した。結果を表５にまとめる 。

表５ ＧＰ−ＭＢＰ＋ＬＰＳ　１７ ＧＰ−ＭＢＰ＋ＩＬ−１４ デツクスを２８へ増加させる。しかしながら、１ミリグラムのＧ　Ｐ　−ＭＢ　 Ｐを経口投与し、２００マイクログラムのＩＬ−１を注入したもの１１、疾患イ ンデックスを４へ減少させる。

したがって、ＩＬ−１の非経口の投与は、経口によるＭＢＰ投与と協力剤をなす ことができることが、上記結果により示される。

投与グループ 臨床スコアー ０　２０．４０　６０　８０　ｔｏ。

臨床スコアー 臨床スコアー 要約書 Ｔ−細胞依存自己免疫疾患の治療または防止方法が開示されており、この方法は 、（Ａ）前記疾患に特異的な自己抗原、フラグメントまたはその類似体からなる 群から選択された薬剤、および（Ｂ）この薬剤の自己免疫疾患抑制活性を増加さ せる特性を有する協力剤を、Ｔ−細胞依存自己免疫疾患を治療または防止するの に効果的な量、経口投与することからなる。また、この方法に使用される投与形 態または薬理学的製剤が、開示されている。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、多発性硬化症の症候を呈する自己免疫疾患（ＡＤ）の、治療が必要な哺乳動 物における、治療または防止方法であり、前記方法は、（ａ）（ｉ）前記自己免 疫疾患に特異的な自己抗原；（ｉｉ）前記自己抗原のＡＤ−抑制フラグメント； および（ｉｉｉ）前記自己抗原またはフラグメントのＡＤ−抑制類似体からなる 群から選択された、少なくとも１つのＡＤ−抑制剤を、前記哺乳動物に経口また は腸管内投与し；および（ｂ）前記抑制剤のＡＤ−抑制活性増加特性を有する、 少なくとも１つの化合物を投与することからなり、 （ａ）および（ｂ）の組み合わせた量が、前記症候を抑制するのに効果的である 、自己免疫疾患（ＡＤ）の治療または防止方法。 ２、前記自己抗原が、ミエリン塩基性タンパク質である、特許請求の範囲第１項 に記載の方法。 ３、前記化合物が、バクテリアリポ多糖類である、特許請求の範囲第１項に記載 の方法。 ４、前記化合物が、リビドＡである、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ５、前記化合物が、経口または腸管内投与される、特許請求の範囲第１項に記載 の方法。 ６、前記化合物および前記抑制剤を同時投与することからなる、特許請求の範囲 第５項に記載の方法。 ７、前記哺乳動物に、前記疾患の臨床症候を抑制または防止するのに独立的に効 果的な量の前記抑制剤を投与することからなる、特許請求の範囲第１項に記載の 方法。 ８、前記哺乳動物に、前記抑制剤および前記化合物を組み合わせて、前記症候を 抑制するのに効果的な量を投与することからなる、特許請求の範囲第１項に記載 り方法。 ９、Ｔ−細胞介在またはＴ−細胞依存自己免疫疾患（ＡＤ）の治療または防止方 法であり、前記方法は、 （ａ）（ｉ）前記疾患に特異的な自己抗原；（ｉｉ）前記自己抗原のＡＤ−抑制 フラグメント；および（ｉｉｉ）前記自己抗原または前記フラグメントのＡＤ− 抑制類似体からなる群から選択された、少なくとも１つのＡＤ−抑制剤を必要と して、哺乳動物に経口または腸管内投与し；および（ｂ）前記哺乳動物に、前記 薬剤のＡＤ−抑制活性増加特性を有する、少なくとも１つの化合物を投与するこ とからなり、前記疾患を抑制するのに効果的な量を技与する、Ｔ−細胞介在また はＴ−細胞依存自己免疫疾患（ＡＤ）の治療または防止方法。 １０、前記化合物が、ばクテリア性リポ多糖類である、特許請求の範囲第９項に 記載の方法。 １１、前記化合物が、リピドＡである、特許請求の範囲第９項に記載の方法。 １２、前記抑制剤を投与する前に、前記化合物を投与することからなる、特許請 求の範囲第９項に記載の方法。 １３、前記化合物および前記抑制剤を実質的に同時投与することからなる、特許 請求の範囲第９項に記載の方法。 １４、前記化合物を、経口または腸管内投与することからなる、特許請求の範囲 第９項に記載の方法。 １５、前記化合物が、非経口投与される、特許請求の範囲第９項に記載の方法。 １６、Ｔ−細胞介在またはＴ−細胞依存自己免疫疾患（ＡＤ）の治療または防止 方法であり、前記方法は、 （ａ）（ｉ）前記疾患に特異的を自己抗原；（ｉｉ）前記自己抗原のＡＤ−抑制 フラグメント；および（ｉｉｉ）前記自己抗原または前記フラグメントのＡＤ− 抑制類似体からなる群から選択された、少なくとも１つのＡＤ−抑制剤を必要と して、哺乳動物に経口または腸管内授与し；および（ｂ）前記哺乳動物に、前記 薬剤のＡＤ−抑制活性増加特性を有する、少なくとも１つの化合物を投与するこ とからなり、前記哺乳動物の腸上皮細胞によりクラスＩ組織適合性抗原に比例し て、クラスＩＩ組織適合性抗原を特異的に減少させるのに効果的な量を投与する 、Ｔ−細胞介在またはＴ−細胞依存自己免疫疾患（ＡＤ）の治療または防止方法 。 １７、自己免疫疾患（ＡＤ）の慢性症候の治療または防止用薬理学的製剤であり 、前記製剤は効果的な量の、 （ａ）（ｉ）前記疾患に特異的な自己抗原；（ｉｉ）前記自己抗原のＡＤ−抑制 フラグメント；および（ｉｉｉ）前記自己抗原または前記フラグメントのＡＤ− 抑制類似体からなる群から選択された、少なくとも１つのＡＤ−抑制剤；（ｂ） 前記抑制剤のＡＤ−抑制活性増加特性を有する、少なくとも１つの化合物；およ び （ｃ）生理学的に許容されるキャリアまたは希釈剤からなる、薬理学的製剤。 １８、ＡＤ−抑制剤を、ＡＤ−抑制活性を増加させる効果的な量、含有する経口 投与形態からなる薬理学的製剤であり、ＡＤ−抑制剤が、前記抑制剤のＡＤ−抑 制活性増加特性を有する、少なくとも１つの化合物、および、生理学的に許容さ れるキャリアからなる、薬理学的製剤。