JPH05501116A - エプスタイン・バーウイルス感染治療用のｂｃｒｆ１拮抗薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 エプスタイン・バーウィルス感染治療用のＢＣＲＦ１拮抗薬光盟Ω立野 本発明は、ニゲスタイン・バーウィルス（ＥＢＶ）感染を、ＥＢＶタンパク質で あるＢＣＲＦｌに対する拮抗薬を投与することによって治療する方法に関する。

互量 工１スタイン・バーウィルス（ＥＢＶ）は、アフリカ（Ｍ土病すなわちｅ）型の バーキットリンパ腫に関連して最初に発見された遍在性ヒトヘルペスウィルスで ある。続いて、そのウィルスは鼻咽頭癌にｒｖ：Ｊ係することが更に発見され、 そして伝染性単核球症の原因物質であることが分がっな６通常、感染は小児期初 期に起こり、概して、潜伏性徴候を生じ、時々軽い症状を伴う、しかしながら、 青年期または成人での感染は、咽頭炎、発熱およびリンパ節症を特徴とする伝染 性単核球症を引き起こすことがある。伝染性単核球症の大部分の症状は１〜３週 間で消散するが、倦怠および疲労か数週間〜数が月持続することが時々ある０時 々起きることかある合併症としては、ｉ端な扁桃腫脹、血小板減少症、膵臓破裂 、黄痕および脳炎がある。更に、免疫無防備状態の患者、例えば、移植受容者お よびエイズ（ＡＬＤＳ）患者では、ＥＢＶ感染がＢ４Ｉ胞リンパ球増殖性疾患を 導くことがある。大学および軍隊の集団では、伝染性単核球症の最も高い罹患率 を経験しており、ρＪえは、ライスコンシン大字の学生の全入院数の５％を占め 、軍隊員の病気による欠損日数の原因として第４位を占めている。ドーリ−（Ｔ ｈｏｒｌｅｙ）−ローソン（Ｌａｗｓｏｎ）、Ｂｊｏｃｈｉｍｔｃａｅｔ　Ｂｉ ｏ　ｈ　５ｉｃａ　Ａｃｔａ、第９４８巻、２６３〜２８６頁（１９８８）；ス クーリ−（Ｓｃｈｏｏｌｅｙｌら、マンデル＜Ｍａｎｄｅ　Ｉ　Ｉ　ｌら監修の Ｐｒ１ｎｃｉ　Ｉｅｓ　ａｒｉｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆＩｎｆｅｃｔ、１ｏ ｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ、第２版（ジョン・ウィリー・アンド・サンプ（、Ｊｏ ｈｎ　Ｗｉｌｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ）、ニューヨーク、１９８５）の１２６童。

ＥＢＶ感染者を治療する薬剤の有効性は、特に、免疫無防備状態の患者の治療に おいて有意の臨床的効果を有することができるであろう。

光盟Ω！些 本発明は、ＥＢＶタンパク質であるＢＣＲＦｌに対する拮抗薬の有効量を投与す ることによってＥＢＶ感染を治療する方法を提供する。好ましくは、ＢＣＲＦｌ に対する拮抗薬は、単クローン性抗体または標準法によってそれらから誘導さ？ Ｌな結合性組成物である。

図面の簡単な説明 図１は、ＢＣＲＦＩの製造において有用なＩＩ＃Ｌ動物発現ベクターの略図であ る。

図２は、ＢＣＲＦＩの製造において有用な細菌の発現ベクターの＃Ｉ図である。

発明の詳細な説明 本発明は、一つには、ＢＣＲＦｌか、ウィルス感染に対するｆ＃ｆＥ飽性防御に 必要なサイトカインであるインターフェロン−γ（ＴＦＮ−γ）の産生を抑制す るという発見に基づいている。ＢＣＲＦＩはＥＢＶによって産生されて、その宿 主中においてその生存を促進させると考えられる０本発明の方法は、ＢＣＲＦｌ に対する拮抗薬の有効なまたは疾患を好転させる量を患者に投与することを含む 。

好ましくは、本発明の拮抗薬は、ＢＣＲＦｌに特異的な抗体がら誘導される。

更に好ましくは、本発明の拮抗薬は、ＢＣＲＦｌに特異的なこの種の抗体の断片 または結合性組成物を含む、抗体は、ジスルフィド架橋によって互いに結合した ポリペプチド鎖のアッセンブリーを含む。ＬｇおよびＨｆｉと称される２種類の 主要なポリペプチド鎖は、抗体の全ての主要構造クラス（イソタイプ）を構成し ている。ＨＭおよびＬｆｌ双方は、更に、可変領域および定常領域と称される部 分領域に分けられる。ＨＭは、単一の可変領域および３種類の定常領域を含み、 そして１４は単〜の可変領域＜）（ｆｆのものとは異なる）および単一の定常領 域（Ｈａのものとは異なる）を含む、ＨｆｆおよびＬｆｆの可変領域は抗体の結 合特異性に関与する。

本明細書中で用いられる「Ｈ鎖可変領域Ｊという用語は、（１）長さが１１０〜 １２５アミノ酸であり、（２）そのアミノ酸配列が本発明の単クローン性抗体の ＨＢのアミノ酸配列に対応するボッペプチドを意味する。同様に、「Ｌ頭可変領 域」という用語は、長さが９５〜１１ラアミノ酸であり、〈２）そのアミノ酸配 列が本発明の単クローン性抗体のＬｆｆのアミノ酸配列に対応するボッペプチド を意味する。

本明細書中で用いられる「単クローン性抗体」という用語は、ＢＣＲＦｌに対し て特異的に結合することかできる免疫グロブリンの均一集団を意味する。

本明細書中で用いられる「結合性組成物」という用語は、（１）操作によって結 合させた場合にＢＣＲＦｌに対する結合親和性か高いコンホーメーションをとり 、そして（２）ＢＣＲＦＩに特異的な単クローン性抗体を産生するハイブリドー マから誘導される２種類のポリペプチド鎖を含む、「操作によって結合させた」 という用語は、その２種類のポリペ１チド鎖か種々の手段によって結合するのに 互いに相対的に位置することができるということを示す意味であり、Ｆａｂまた はＦｖなどの本来の杭木断片での結合、或いはｉｉＩ伝子玉子工学って処理した システィン含有ベグチドソン力−によるカルボキシル末端での結合を含む。本来 、２神類のポリペプチド須は、ＢＣＲＦｌに特異的な単クローン性抗体のしｇ可 変領域およびＨａ可変領域に対応する。好ましくは、本発明の拮抗薬は、ＢＣＲ Ｆｌに特異的な単クローン性抗体から誘導される。ＢＣＲＦＩを阻止するまたは 中和することができる単クローン性抗体は、ＢＣＲＦｌに誘発されたインターフ ェロン−γ産生抑制を阻害するそれらの能力によって選択される。このような検 定にはＴＦＮ−γを合成する細胞系または細胞集団か必要である。便宜上、フィ トヘマグルチニン（ＰＨＡ）などのマイトジェンで刺激された末梢血液リンパ球 （ＰＢＬｓ）がこのような細胞集団として役立つことができる。およそ検定作業 は下記の通りである。すなわち、ＰＨＡで刺激されたＰＢＬｓは３等分に分けら れる。

その第一の部分にＢＣＲＦｌを加える。第二の部分にＢＣＲＦｌおよび推定上の 拮抗薬を加える。第三の部分は対照として役立つ、数日後に、培養物の上澄みの ＩＦＮ−γについて試験する。これは、便宜上、標準エライザ検定法によって商 業的に入手可能なＩＦＮ−γに対する単クローン性および多クローン性抗体、例 ぇは、シェンザイム・インヨーボレーテン１幻Ｇｅｎｚｙｍｅ　Ｉｎｃ、）（ボ ストシ、ＭＡ）からの抗体を用いて行われる。或いは、検定の続取りは、例えば 、ＲＮＡブロッティング、ＰＣＲまたは類似の方法論によって測定される転写さ れなＩＦＮ−γｍ　ＲＮ　Ａの量であることができる。ＰＢＬｓは標準的な技法 を用いて得られる。（ＩＡＩえば、ミシェル（Ｍｉｓｈｅｌｌ）ら監修、Ｓｅｌ ｅｃｔｅｄＭヱ」」二生亘ｓｉ仄−≦≧ＬＬ上旦ｆａｒ−ユ１すＩＩＪユ旦」３ と、２（７ソー？′（Ｆｒｅｅｍａｎ）−ニューヨーク、１９８０）、本発明の ハイブリドーマは周知の技法によって製造される０通常、その方法は、望ましい 抗体を産生ずるＢリンパ球と不死化細胞系の融合を必要とする。或いは、不死の 抗体産生細胞系を生じさせるための非融合技術が可能であり、しがも本発明の範 囲内であり、例えば、ウィルスによって誘発された形質転換：カサリ（Ｃａｓａ ｌｉ）ら、「Ｂリンパ球の抗原特異的選択およびＥＢＶによる形質転換からのヒ ト単クローン性抗体（Ｈｕｍａｎ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｓｆｒｏｍ　Ａｎｔｊ ｇｅｎ−３ｐｅｃｉｆｉｃ　５ｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＢＩｙｍｐｈｏｃｙｔ ｅｓ　ａｎｄ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｂｙ　ＥＢＶ）Ｊ、５ｃｉｅｎ ｃｅ、第２３４巻、４７６〜４７９頁（１９８６）がある。

不死化細胞系は、通常、形質転換されｆＳ１１１ｇ乳動物細胞、特に、替歯類動 物、ウシおよびヒト起源のミエローマ＃ｌ胞である０例えば、米国特許第４，６ ９３，９７５号明細書および同第４，７２０，４５９号明細書、最も頻繁には、 ラットまたはマウスミエローマ＃胞系が便宜上および入手可能性上用いられる。

標的抗原を注射された哺乳動物から適当なリンパ球を得るための技法は周知であ る。一般的には、ヒト起源の細胞が望ましい場合に末梢血液リンパ球（ＰＢＬｓ ）を用いるかまたは非ヒト哺乳動物源が望ましい場合に牌臓細胞若しくはリンパ 節細胞を用いる。宿主哺乳動物に、精製抗原の反復投与によって注射し、その哺 乳動物が望ましい抗体産生細胞系を生じるのを可能にした後、これらを不死化細 胞系と融合するために採取する。好ましくは、抗体産生Ｂ細胞の晴乳動物源は、 マウス、ラット、ウサギまたはヒトである。融合法も当該技術分野で周知であり 、概して、細胞をポリエチレングリコールなどの融合剤と混合することを必要と する。ハイブリドーマはＨＡＴ選択法などの標準法によって選択される。これら のバイブリドーマの中から、望ましい抗体を分泌するもの、すなわち、ＢＣＲＦ ｌに特異的なものを、標準免疫検定法、例えば、ウェスターンプロッティング、 エライザ、ＲＩＡ、ＢＣＲＦ１中和能または類似の方法によってそれらの培地を 検定することにより選択する。抗体は、標準タンパク質精製法、例えば、テユッ セン（Ｔｉｊｓｓｅｎ）、Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ａｎｄ　Ｔｈｅｏｒｙ　ｏｆＥｎ ｚｙｍｅ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ（エルセピア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、アム ステルダム、１９８５）を用いて培地がら回収される。多数の参考文献が上記の 技法のいずれかを適用する場合の手引きとして入手可能であり、例えば、コーラ −（Ｋｏｈ　Ｉ　ｅ　ｒ）ら、Ｈｙｂｒｊｄｏｍａ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（ｒ −ルド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−（Ｃｏｌｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒ ｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、ニューヨーク、１９８０）；ジエンセン、Ｐ ｒａｃｔｉｃｅ　ａｎｄ　Ｔｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａｓ ｓａｙｓ　（エルセピア、アムステルダム、１９８５）；カンブベル（Ｃａｍｐ ｂｅｌｌ）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｏ　！　ｏｇ ｙ　（エルセピア、アムステルダム、１９８４）；バレル（Ｈｕｒｒｅｌｌ）、 Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ＨｙｂｒｉｄｏｍａＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；Ｔｅｃｈｎ ｉｑｕｅｓ　ａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　（ＣＲＣ・プレス（Ｐｒｅｓｓ ）、ポカ・ラドン、ＰＬ、１９８２）；および類似のものかある。次に、ＢＣＲ Ｆｌに特異的な単クローン性抗体を産生ずるハイブリドーマに、前記に記載した ｒＦＮ−γ抑制検定を用いる第二のスクリーンを行い、ＢＣＲＦＩの生物活性を 阻止するまたは中和することかできるものを選択する。

抗体の断片の使用および生産も周知であり、例えば、Ｆａｂ断片：テユッセン、 Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ａｎｄ　Ｔｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａ ｓｓａｙｓ　（エルセピア、アムステルダム、１９８５）；およびＦｖ断片：ホ フマン（Ｈｏｃｈｍａｎ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第１２巻、１１３０ 〜１１３う頁（１９７３）、シャロン（Ｓｈａｒｏｎ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ ｔｒ　、第１５巻、１５９１〜１５９４頁（１９７６）およびエーリッヒ（Ｅｈ ｒｌｉｃｈｌら、米国特許第４．３５５．０２３号明細書；並びに抗体２分の１ 分子ニオ−ディドア（Ａｕｄｉｔｏｒｅ）−ハーグリーブズ（Ｈａｒｇｒｅａｖ ｅｓ）、米国特許第４．４７０．９２５号明細書がある。

本発明のハイブリドーマおよび単クローン性抗体は、免疫原としての組換えによ って生じた成熟ＢＣＲＦ１のグリコジル化変種かまたは非グリコジル化変種に対 して製造される。一般的には、ＢＣＲＦｌの非グリコジル化変種は大腸菌（Ｅ。

ｃｏｌｔ）で製造され、グリコジル化変種は哺乳動物細胞宿主、例えば、ＣＶ１ 若しくはＣＯＳサル細胞、マウスＬ細胞または類似のもので製造される０組換え によって生じた成熟ＢＣＲＦ１は、発現ベクターを宿主細胞中に標準プロトコル を用いて導入することによって製造される１例えば、マニアティス＜Ｍａｎｉａ ｔｉｓ）ら、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ＋ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　 Ｍａｎｕａｌ　（コールド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−、ニューヨー ク、１９８２）；オカヤマ（Ｏｋａｙａｍａ）およびベルレグ（Ｂｅｒｇ）、Ｍ ｏ１．Ｃｅ１１．Ｂｊｏｌ、、第２巻、１６１〜１７０頁（１９８２）および第 ３巻、２８０〜２８９頁（１９８３）；タケベ（Ｔａｋｅｂｅ）ら、Ｍｏ１．Ｃ ｅ１１．Ｂｉｏｌ、　、第８巻、４６６〜４７２頁（１９８８）；米国特許第４ ，５９９，３０８号明細書：米国特許第４．６７５．２８５号明細書、カオフマ ン（Ｋａｕｆｍａｎ）ら、Ｍｏ１．Ｃｅ１ｌ。

Ｂｉｏｌ、、第２巻、１３０４〜１３１９頁（１９８２）；まなは類似のものが ある。細菌または哺乳動物の発現ベクターの構築は、望ましいタンパク質をコー ドするヌクレオチド配列が分かるかさもなければ入手可能であれば当該技術分野 で周知であり、例えば、デボア（ＤｅＢｏｒｅ）は米国特許第４，５５１．４３ ３号明細書において細菌の発現ベクターで用いるためのプロモーターを開示し； ゴーデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ）らは米国特許第４，６０１．９８０号明細書におい ておよびリンゲス（Ｒｉｇｇｓ）は米国特許第４．４３１，７３９号明細書にお いて、大腸菌発現システムによる哺乳動物タンパク質の産生を開示し；そしてリ ンゲス（上記に引用）、フェレッテイ（Ｆｅｒｒｅｔｔｉ）ら、Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、第８３巻、５９９〜６０３頁（１９８６）、ス プロート（Ｓｐｒｏａｔ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ 。

第１３巻、２９５９〜２９７７頁（１９８５）およびムレンバソハ（Ｍｕ　ｌ　 １ｅｎｂａｃｈ）ら１．Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　、第２６１巻、７１９〜７ ２２頁（１９８６）は、細菌で発現させるための合成遺伝子を構築する方法を開 示している。したかって、これらの文献は、参考文献として後述される。更に、 ＢＣＲＦｌは、この開示の一部分としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレ クション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）（ロックヒル、メリーランド州）に寄託番号６８４９３として寄託されたプラ スミドであるρＢＣＲＦＩ　（ＳＲα）を用いてＣＯ３７細胞を一時的にトラン スフェクトすることによって製造することかできる１図１は、ρＢＣＲＦＩ　（ ＳＲα）の制限地図である。

８ＣＲＦ１ｃＤＮＡの最大の読み取り枠は、配列番号１に示したアミノ酸の配列 によって定義される。ＥＢＶヶノムの説明は、ベーア（ＢａｅｒＪら、Ｎａｔｕ ｒｅ、第３１０巻、２０７〜２１１頁（１９８４）に与えられており、ＢＣＲＦ ｌｃＤＮＡのヌクレオチド配列はジエンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）リリース２６ で入手可能である。

ＢＣＲＦｌが可溶性形態で、例えば、形質転換した＃母または哺乳動物細胞の分 泌生成物として発現される場合、それは、硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換ク ロマトグラフィー、ゲル濾過、電気泳動、アフィニティークロマトグラフィーお よび／または類似の操作工程を含む当該技術分野の標準法にしたかつて精製する ことができる０例えは、「酵素ｉ１！製法および関連技術（ＥｎｚｙｍｅＰｕｒ ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、Ｍ ｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２２：２３３〜５７７Ｎ　９７７ ）およびスコープスｆｓｃｏｐｅｓ）、Ｐｒｏｔｅ　ｉ　ｎＰｕｒｉｆｉｃａｔ ｉｏｎ；Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ（スプリンガー・フ ェアラーク（Ｓｐ　ｒ　ｉ　ｎｇｅ　ｒ−Ｖｅ　ｒ　ｌ　ａｇ）　、ニューヨー ９．１９８２）はこのような精製法の指針を与える。同様に、ＢＣＲＦｌが不溶 性形も、例えば、凝集物、封入体またはその類似物として発現される場合、それ らは、封入体を破裂した宿主細胞から遠心分離によって分離し、封入体をカオト ロピズム剤および還元剤で可溶化し、可溶化した混合物を稀釈し、そしてカオト ロビズム剤および還元剤の濃度を低下させてポリペプチドが生物学的に活性なコ ンホーメーションをとるようにさせることを含む当該技術分野でのｌＩＡ＄法に よって精製することかできる。後者の方法は参考文献として後述される下記の参 考文献、すなわち、ウィンクラ−（Ｗｉｎｋｌｅｒ）ら、旦１旦−ｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙ、２５＋４０４１〜４０４５　（１９８６）；ウィンクラ−ら、Ｂｉｏｔ ｅｃｈｎｏｌｏ　ｙ、３：９９２〜９９８（１９８５）；コス（Ｋｏｔ、ｈｓ） ら、米国特許第４，５６９，７９０号明細書：並びに欧州特許出願第８６３０６ ９１７．５号明細書および同第８６３０６３５３．３号明細書に開示されている 。

本発明のハイブリドーマに特有の抗体および抗ｔ＊断片は、メンセンジャーＲＮ Ａを抽出し、ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａライブラリーを構築し、そして抗体分子のセグメン トをコードするクローンを選択することによる組換え手段によっても製造するこ とかできる０例えば、ウオール（Ｗａｌｌ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ、５ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第５巻、３１１３〜３１２８頁＜１９７８）、ザクト（Ｚａ ｋｕｔ）ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、第８巻、３５９ １〜３６０１頁（１９８０）；カビリー（Ｃａｂ　ｉ　Ｉ　ｌ　ｙ）ら、Ｐｒｏ ｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、第８１巻、３２７３〜３２７７頁（１９８４） ；ボス（Ｂｏ　ｓ　ｓ　）ら、Ｎｕｃｉｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ 、第１２巻、３７９１〜３８０６頁（１９８４）；アムスター（Ａｍｓｔｅｒ） ら、Ｎｕｃｌｅｊｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、第８巻、２０５５〜２０ ６５頁（１９８０）：モーア（Ｍｏｏｒｅ）ら、米国特許第４，６４２．３３４ 号明細書；スケラ（Ｓｋｅｒｒａ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ、第２４０巻、１０３８ 〜１０４１　（１９８８）；ヒユーズ（Ｈｕ　ｓ　ｅ　）ら、５ｃｉｅｎｃｅ、 第２４６巻、１２７５〜１２８１　（１９８９）；ペター（Ｂｅｔｔｅｒ）ら、 ５ｃｉｅｎｃｅ、第２４０巻、１０４１〜１０４３　（１９８９）；およびリー チマン（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ＞６、Ｎ　ａ　ｔ、　ＩＪ　ｒ　ｅ、第３３２巻、 ３２３〜３２７頁（１９８８）がある。特に、このような技法は、一つの種の結 合性領域が別の種の抗体の非結合性領域と組み合わされて免疫原性を低下させる 内部特異釣車クローン性抗体を製造するのに用いることができる６例えば、リュ ー（Ｌ、ｉｕ）ら、本発明の拮抗薬は薬剤組成物上して投与される。このような 組成物は、本発明の単クローン性抗体の少なくとも１種類またはそれらの断片の 治療量を薬剤担体中に含んでいる。薬剤担体は本発明の組成物を患者に対して送 達するのに適当な任意の相溶性無毒性物質であることができる。滅菌水、アルコ ール、脂肪、蝋および不活性固体は担体中に含まれることかできる。更に、薬学 的に許容し得るアジュバント（例えば、緩衝剤および分散助剤）を薬剤組成物中 に配合することもできる。概して、この種の薬剤を非経口投与するのに有用な組 成物は周知である。

例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃ ｅ、第１５版（マック・パブリッシング・カンパニー（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈ ｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、イーストン、ＰＡ、１９８０１．或いは、本発明の 組成物を、植込み可能なまたは注射可能な薬剤送達システムによって患者体内に 導入することができる。例えば、アーカート（Ｕｒｑｕｈａｒｔ）ら、Ａｎｎ、 Ｒｅｖ、Ｐｈａｒｍｃｏｌ、Ｔｏｘｆｃｏｌ、、第２４巻、１９９〜２３６頁（ １９８４ン　ニルイス（Ｌｅｗｉｓ）監修、ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓ ｅ　ｏｆ　Ｐｅ５ｔｉｃｊｄｅｓ　ａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔ　１ｃａｌｓ　 （プレナム・プレス（ＰｒｅｎｕｍＰｒｅｓｓ）−ニューヨーク、１９８１）； ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）ら監修、Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔ ｅｍｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（プレス・ホ ーウッド・リミテッド（Ｅｌｌｊｓ　Ｈｏｒｗｏｏｄ　Ｌｔｄ、）、ロンドン、 １９８７）；米国特許第３，７７３．９１９号明細書；米国特許第３．２７０． ９６０号明細書：等。

本発明の拮抗薬か抗体から誘導される場合、通常、それらは非経口によって〜好 ましくは静脈内に投与される。このようなタンパク質またはペプチド拮抗薬は免 疫原性であることができるので、それらは、例えば、トマシ（Ｔｏｍａｓ　ｉ） ら、米国特許第４．７３２゜８６３号明細書に記載されたように、慣用的なＩＶ 投与セットによってかまたは皮下デボ（ｄｅｐｏｔ）から徐々に投与されるのが 好ましい、非経口によって投与される場合、抗体または断片は、注射可能な単位 剤形の形態（／８液、懸濁液、エマルジョン）に薬学的に許容し得る注射用ビヒ クルと一緒に配合される。このようなビヒクルは本来的に無毒性且つ非／ｉ！ｌ ｉｌ？’的である。このようなビヒクルの例は、規定食塩水、リンゲル液、デキ ストロース溶液およびバンク液である６固定油およびオレイン酸エチルなどの非 水性ビヒクルを用いることもできる。好ましいビヒクルは５％デキスロース／食 塩水である。ビヒクルは、等強性および化学的安定性を増大させる物質などの少 量の添加側、例えば、緩衝剤および保存剤を含むことかできる。抗体は、凝集物 、他のタンパク質、内毒素およびその類似物を実質的に含まない精製形態におい て４度約５〜３０ｍｇ／ｍｌ好ましくは、１０〜２０ｍｇ／ｍｌで配合されるの が好ましい。

好ましくは、内毒素４度は２．５ＥＵ／ｍ１未満である。

拮抗薬のための投与方式の選択は、拮抗薬の血清代謝回転速度、ＢＣＲＦｌの血 清１度、拮抗薬の免疫原性、標的ＢＣＲＦ１の到達可能性およびその類似のもの を含むいくつかの因子に依存する。好ましくは、投与方式は、許容しうる副作用 の水準を堅持しながら、患者に対して送達された拮抗薬の量を最大にする。した がって、送達される拮抗薬の量は、一部分は、特定の拮抗薬および？ｆ３療され る症状の苛酷さに依存する。）ｉ！当な投与量を選択する場合の指針は、抗体の 治療的使用についての文献で見出され、例えば、バッハ（Ｂａｃｈ）ら、フエロ ン（Ｆｅｒｒｏｎｅ）ら監修のＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　（ノージス・パブリッシンズ（ＮｏｇｅｓＰｕｂｌｉｃ ａｔｉｏｎｓ）−バーク・リンノ、ＮＪ、１９８５）の第２２章：並びにハーバ −（Ｈａｂｅｒ）ら監修のＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎＨｕｍａｎ　Ｄｉａｇｎ ｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｙ（ラヴエン′プレス（Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓ ｓｉニューヨーク、１９７７）中、ラッセル（Ｒｕｓｓｅ　ｌ　Ｉ　）、３０’ ３”３５７頁およびスミス（Ｓｍｉｔｈ）ら、３６５〜３８９頁かある。好まし くは、拮抗薬が単クローン性抗体またはそれらのＦａｂの大きさの断片（結合性 組成物を含む）を含む場合は常に、その投与量は約１〜２０ｍｇ／ｋｇ、／日の 範囲である。更に好ましくは、投与量は約１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である 。

下記の実施例は本発明の態様を例証するのに役立つ。選択されたベクター、宿主 、融合相手、試薬酒度および温度並びに他の変数値は、本発明を雛にρノ示する ためのものであり、それらを制限するものと考えるべきではない。

太線遡上 ＣＯＳサル細　におけるＢＣＲＦｌの発現ＢＣＲＦ１に対する読取り枠をコード する遺伝子を、プライマーを用いるポリメラーゼ鋳反応によって増幅させたが、 それは増幅した断片をＥｃｏＲＩ消化ｐｃＤ　（ＳＲα）ベクター（図１）に後 で挿入することを可能にした。挿入断片の暗号鋳を配列番号２に示すが、その読 取り枠は、開始信号ＡＴＧがら停止信号ＴＧＡまでのコドンによって三文字の群 で与えられる。

適当な方向でインサートを運搬するクローンを、ＢＣＲＦｌの発現および／また は制限消化の電気泳動パターンによって同定した。ＢＣＲＦＩ遺伝子を運搬する このようなベクターの一つをｐＢｃＲＦｌ、（ＳＲα）と称し且っＡＴＣＣに寄 託番号６８１．９３として寄託した。ｐＢＣＲＦｌ　（ＳＲα）を大腸菌ＭＣ１ ０６１で増幅させ、標準的な技法によって単離し、そして下記のようにＣＯ３７ サル細胞をトランスフェクトするのに用いた。すなわち、トランスフェクション の前日に、ＣＯ３７サル細胞約１．５Ｘ１０６個を、それぞれ１００ｍｍプレー ト上の５％ウシ胎児血清（Ｆｅ２）および２ミリモルグルタミンを含むダルベツ コ改良イーグル培地（ＤＭＥ）中に播種した。トランスフェクションを行うため に、ＣＯ３７細胞を、トリプシンとのインキュベーションによっで皿から取出し 、血清不含ＤＭＥで２回洗浄腰そして血清不含ＤＭＥ中で、細胞１０７ｇ／ｍ　 Ｉになるよう懸濁させた。０．７５ｍ１アリコートをＤＮＡ、２０μｇと混合し 、０．４ｃｍの滅ｙＭ！気めっきキュベントに移しな、１０分後に、Ａ１１ｌ胞 を、バイオラド・シーン・パルサー（ＢｉｏＲａｄ　Ｇｅｎｅ　Ｐｕ１ｓｅｒｌ 装置において２００ボルト、９６０μＦで脈動させた。更に１０分後に細胞をキ ュベツトから取出し、５％ＦＣ５，２ミリモルグルタミン、ペニシリン、ストレ プトマイシンおよびゲンタマイシンを含むＤＭＥ２０ｍｌに加えた。その混合物 を４つの１００ｍｍ組織培養皿に分配した。３７°Ｃ１５％ＣＯ２で１２〜２４ 時間後に、培地を、１％ＦＣ３のみを含む同様の培地と取換え、インキュベーシ ョンを３７°Ｃ，５％ＣＯ２で更に７２時間続けた後、培地を集め、そしてＩＦ Ｎ−γ合成を阻害するその能力について検定した。

新たに単離されたＰＢＬｓの１０ｍ１アリコート（細胞約２Ｘ１０６個／ｍｌ） を、（ｉ）５％ＦＣ３および２ミリモルグルタミンを補足しなりＭＥ９０％およ び（ｉ　１）ｐＢｃＲＦｌ　（ＳＲα）で予めトランスフェクトしたＣＯ３７細 胞からの上澄み１０％から成る培地中のＰＨＡ　（１００ｎｇ／ｍｌ　）と−緒 に３７°Ｃでインキュベートした。２４時間後に、細胞および上澄みを採取して 、それぞれＩＦＮ−１ｍＲＮＡおよびＩＦＮ−γタンパク質の存在について検定 した。対照は、１０％の上澄みが、無関係のｃＤＮＡインサートを運搬するプラ スミドで予めトランスフェクトされたＣＱＳ培養物からのものであったことを除 き、同一の処理をした。ＢＣＲＦＩで処理した試料は、対照に相対してＩＦＮ− γ合成を約５０％阻害することを示した。

犬橿剋２ 大腸菌におけるＢＣＲＰｌの発 配列番号３に与えられた配列の成熟ＢＣＲＦ１をコードする遺伝子は、大腸菌に おいて発現させることができる。

ｐＢｃＲＦｌ　（ＳＲα）のｃＤＮＡインサートをＭ１３グラスミドに再クロー ン化させ、そこでそれは、特定部位の突然変異誘発によって２回変化し、すなわ ち、最初に、成熟ＢＣＲＦ１ボリベグチドに対するコード領域の５′末端でＣｌ ａｌ部位を形成し、そして次に、成熟ＢＣＲＦ１ポリペプチドに対するコード領 域の３′末端でＢａｍＨ１部位を形成する０次に、突然変異配列は、下記に記載 しなＴＲＰＣｌ　１発現ベクターに容易に挿入される。

Ｔ”ＲＰＣＩＩベクターは、合成上の一致ＰＢＳ断片をＣ１ａｌソンカー（ＡＴ ＧＣＡＴ＞に連結することによって、および得られた断片をＣ１ａｌ制限ｐＭＴ １１ｈｃ（Ｃｌａｌ部位を含むように予め修飾された）にクローン化することに よって横築された。ｐＭＴｌｌｈｃは、πＶＸグラスミドＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄ １１Ｔポリリンカー領域を有するｐ　ＢＨ３２２の小さい（２，３キロベース） 高コピーＡＭＰ　、ＴＥＴＳ誘導体である。（πＶＸは、マニアティスら、Ｍｏ １ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、コ ールド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−１１９８２に記載されている）、 これは、ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＴ　Ｃ″ｐＭＴ１１ｈｃを制限し、得られた 付着端に入れ、そしてＣ１ａｌリンカ−（ＣＡＴＣＧＡＴＧ）と連結し、それに よってＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩ部位を修復し且つＳｍａ１部位をＣｌａｌ部 位で置き換えることによってＣｌａｌ部位を含むように修飾された。

ＴＲＰＣｌ、Ｉ横築からのある形質転換ａ胞は、Ｃｌａｌ部位が側面に位置した 縦列のＰＢＳ配列を有した。Ｃｌａｌ部位の一つおよびＰＢＳ配列の第二コピー の一部分は、このプラスミドをＰｓｔｌで消化し、Ｂａ１３１ヌクレアーゼで処 理し、ＥｃｏＲＩで制限し、そしてＴ４ＤＮＡポリメラーゼを４種類のデオキシ ヌクレオチド三リン酸全部の存在下で用いて処理することによって除去された。

得られた３０〜４０ｂｐの断片をＰＡＧＥによって回収し、Ｓｍａｌ制限ｐＵｃ １２にクローン化した０次に、ｐＫｃｌ、０１ｃニコルス＜Ｎ１ｃｈｏｌｓ）ら によってＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１０１巻、１５５頁 （アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１ 、９８３　）に記載された）から誘導された２４８ｂｐの大腸菌ｔｒｐＰ含有Ｅ ｃｏＲＩ断片を、ＥｃｏＲ１部位にクローン化して、ＴＲＰＣＩＩ構築を完了し たか、これを図２に図示する。ＴＲＰＣｌ　１は、それをＣ１，ａ　ｌおよびＢ ａｍＨＩで最初に消化し、それを精製した後、それを標準的な連結用浴液中で、 成熟ＢＣＲＦＩをコードするヌクレオチド配列を有するＭ１３のＣＩ　ａ　１− ＢｍａＨＩ断片と混合することによってＢＣＲＦｌに対するベクターとして用い られる。ＴＲＰＣｌ　１−ＢＣＲＦｌと称されるインサート含有ＴＲＰＣＩＩは 、例えば、ＡＴＣＣから寄託番号３３８７６として入手可能な大腸菌に１２菌株 であるＪＭＩＯｌにおいて増殖される。

衷旌倒旦 旦９工凪［柑倶すＰヒ２ｊ上准９皇皇 雄のルイスラットを、ＣＯ３７細胞で発現したＢＣＲＦｌの精製調製試料で免疫 する。最初に、ラットに完全フロインドアジュバント（ＦＣＡ）１ｍｌで乳化し ｆ、：ＢｃＲＦ１／８Ｈ（１０ミ’）モルト！Ｊス−Ｊ（Ｃ１，０，５モルＮａ Ｃｌ、ｐＨ７，４中、ＢＣＲＦｌか５〜１００μｇ／ｍｌ　）で免疫し、そして 不完全フロインドアジュバント中の同量の材料で２回追加抗原を行った。試験採 血を行う、被験動物に、リン酸緩衝溶液中２５μｇのＢＣ，ＲＦ１溶液の最終追 加抗原を与え、４日後にその肺臓を融合用に得る。

ラット膵臓細胞約３Ｘ１０８個を等数のＰ３Ｘ６３−Ａ−Ｃ８，６５３マウスミ エローマ細胞（ＡＴＣＣから寄託番号ＣＲＪ−１５８０として入手可’ｎ）と− 緒にポリエチレングリコールを用いて融合する。細胞懸濁１ｆ（ＨＡＴ培地中細 胞約載されたプロトコルにしたかって、４０個の９６ウ工ル微量滴定プレートに 分配した。１０日後に、ハイプリドーマ上澄みを、微量滴定グレート上に直接固 定化されなりＣＲＦｌと結合する能力を調べるなめに（間接エライザ）、または ウサギ抗ＢＣＲＦ１の固定化された多クローン性１ｇＧ画分に結合したＢＣＲＦ ｌと結合する能力を調べるために試験する。結合した抗体は標準プロトコルを用 いるペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ラント免疫グロブリンによって検出される。Ｂ ＣＲＦｌと反応する抗体を分泌するハイブリドーマを限界稀釈によってクローン 化する０選択されたハイブリドーマを貯蔵しく例えば、１０％ＤＭＳＯを含む培 地中において一７０℃で〉、そして標準的な哺乳動物細胞培養技術（例えば、１ ０％ウシ胎児血清を含み、１ミリモルグルタミンおよび５０ミリモル２−メルカ プトエタノールを補足したＲＰＭＩｉ６４０）を用いて培養する。ＢＣＲＦＩ阻 止抗体を産生ずるハイブリドーマを、ＢＣＲＦ１特異的抗体を産生ずるハイブリ ドーマの組から、前記に記載した検定におけるＢＣＲＦＩに誘発されたＩＦＮ− γ産生抑制に対抗するそれらの能力によって選択する。

本発明の前述の実施態様についての説明は、例示および説明のために示された。

それらは、本発明を網羅するものではなく、またその開示された正確な形態に制 限するためのらのではなく、明らかに、多くの修正および変更が前記の内容に照 らして可能である。実施態様は、本発明の原理を最もよく説明するために選択さ れ且つ記載さたものであり、それによって当業者は本発明を種々の実施態様にお いておよび予想される特定の使用に適当であるような種々の修正を用いて最もよ く利用することができる。それは、本発明の範囲が本明細書に添付の請求の範囲 によって定義されるということを意味する。

本出顧人は、ｐＢｃＲＦｌ（ＳＲα）を有する大腸菌ＭＣ１０６１をアメリカン ・タイプ・カルチャー・コレクション、ロックビル、メリーランド州、米国（Ａ ＴＣＣ）に受託番号６８１９３として寄託した。この寄託は、特許手続き上の微 生物の寄託に関するＡＴＣＣの承認に基ついて与えられる条件に基づいて行った ものであり、それによって、寄託は、米国成文法３５条１２２および米国規制基 準３７県１．１４に従って米国特許商標局長に対して利用可能にさせるものであ ることおよび米国特許証の公的発行に対して利用可能にさせるものであることか 保証され、それによって寄託が維持されることが必要とされる。寄託された菌株 の入手可能性は、いかなる政府のその特許法による代理権に基づいて付与された 権利に違反して本発明を実施する許可として解釈されるべきではない。

寄託は、ブダベスト条約の要件を満たすように修正された。

配舛衣 配列番号＝１ 配列の型二アミノ酸 配列の長さ：１７０アミノ酸残基 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質／ポリペプチド起源生物：エプスタイン・バーウィルス 性状：ＢＣＲＦ−１ 入ｒ：ｑ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ 　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　ｌ１ｅ配列番号：２ 配列の型：ヌクレオチド 配列の長さ：４９８塩基 鎖の数＝１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　ＤＮＡ配列 起源生物：エプスタイン・バーウィルス性状：ＢＣＲＦ−１ ＡＡＴＴＣＡＴＧ　ＧＡＧ　ＣＧＡ　ＡＧＧ　ＴＴＡ　ＧＴＧ　ＧＴＣＡＣＴ　 ＣＴＧ　ＣＡＧ　ＴＧＣＣＴＧ　ＧＴＧ　ＣＴＧ　４１ＣＴＴ　ＴＡＣＣＴＧ　 ＧＣＡ　ＣＣＴ　ＧＡＧ　ＴＧＴ　ＧＧＡ　ＧＧＴ　ＡＣＡ　ＧＡＣＣＭ　ＴＧ Ｔ　ＧＡＣＡＡＴ　９２ＴＴＴ　ＣＣＣＣＡＧ　ＡＣＣＴＭ　ＧＡＧ　ＡＴＧ　 ＣＣＴ　ＴＣＡ　ＧＴＣＧＴＧ　ＴＴＡ　ＡＡＡＣＣＴ　ＴＴＴ　１３７ＴＣＣ ＡＧＡ　ＣＡＡ　ＡＧＧ　ＡＣＧ　ＡＧＧ　ＴＡＧ　ＡＴＡ　ＡＣＣＴＴＴ　Ｔ ＧＣＴＣＡ　ＡＧＧ　ＡＧＴ　ＣＴＣ１８２ＴＧＣＴＡＧ　ＡＧＧ　ＡＣＴ　Ｔ ＴＡ　ＡＧＧ　ＡＴＧ　ＣＣＡ　ＧＧＣＣＣＴ　ＧＴＣＡＧＡ　ＭＴ　ＧＡＴ　 ＣＣＡ　２２７ＡＴＴ　ＣＴＡ　ＣＣＴ　ＧＧＡ　ＧＧＡ　ＡＧＴ　ＣＡＴ　Ｇ ＣＣＡＣＡ　ＧＧＣＴＧＡ　ＡＡＣＣＡＧ　ＧＡＣＣＣＴ　２７２ＧＡＡ　ＧＣ ＣＡＡＡ　ＧＡＣＣＡＴ　ＧＴＣＡＡＴ　ＴＣＴ　ＴＴＧ　ＧＧＴ　ＧＡＡ　Ａ ＡＴ　ＣＴＡ　入ＡＧ　Ａ、ＣＣ３１７ＣＴＡ　ＣＧＧ　ＣＴＣＣＧＣＣＴＧ　 ＣＧＣＡＧＧ　ＴＧＣＣＡＣＡＧＧ　ＴＴＣＣＴＧ　ＣＣＧ　ＴＧＴ　ＧＡＧ　 ３６２ＡＡＣＡＡＧ　ＡＧＴ　ＡＡＡ　ＧＣＴ　ＧＴＧ　ＧＡＡ　ＣＡＧ　ＡＴ Ａ　ＭＡ　ＡＡＴ　ＧＣＣＴＴＴ　ＡＡＣＡＡＧ　４０７ＣＴＧ　ＣＡＧ　ＧＡ Ａ　ＡＡＡ　ＣＧＡ　ＡＴＴ　ＴＡＣＡＡＡ　ＧＣＣＡＴＧ　入ＧＴ　ＧＡＡ　 ＴＴＴ　ＧＡＣＡＴＴ　４５２ＴＴＴ　ＡＴＴ　ＡＡＣＴＡＣＡＴＡ　ＧＡＡ　 ＧＣＡ　ＴＡＣＡＴＧ　ＡＣＡ　ＡＴＴ　ＡＡＡ　ＧＣＣＡＧＧ　ＴＧＡ　Ｇ　 ４９８配列番号＝３ 配列の型二アミノ酸 配列の長さ：１４７アミノ酸残基 鎖の数：１本鎖 トポロジー、直鎖状 配列の種類：タンパク質／ポリペプチド起源生物：エプスタイン・バーウィルス 性状：　ＢＣＲＦ−１ １ａＩ 要約書 ＥＢＶ感染を治療する方法を提供する。その方法は、ＥＢＶタンパク質でめるＢ ＣＲＦｌに対する拮抗薬の有効量を投与することを含む。好ましくは、その拮抗 薬は、ＢＣＲＦｌに特異的な阻止単クローン性抗体またはそれから誘導された断 片若しくは結合性組成物である０本発明は、例えば、エプスタイン・バーウィル ス疾患の治療用薬剤の製造のための、ＢＣＲＦＩに対する拮ｖｃ薬の使用を含む 。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成　４年　９月２８日 特許庁長官　蘇生　渡　殿　［易 １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ９１１０１８１２ ２、発明の名称 エプスタイン・バーウィルス感染治療用のＢＣＲＦＩ拮抗薬３、特許出願人 住　所　アメリカ合衆国ニューシャーシー州０７０３３゜ケニルワース、ギヤロ ッピング・ヒル・ロード　２０００名　称　シェリング・コーポレーション４、 代理人 住　所　東京都千代田区大手町二丁目２番１号新大手町ビル　２０６区 電話　３２７０−６６４１〜６６４６ 請求の範囲 １、　エプスタイン・バーウィルス疾患の治療用薬剤の製造のための、ＢＣＲＦ ｌに対する拮抗薬の使用。

２、　前記のＢＣＲＦｌに対する拮抗薬か、ＢＣＲＦｌに誘発されたインターフ ェロン−γの抑制を阻止することができる単クローン性抗体、ＢＣＲＦｌに誘発 されたインターフェロン−γの抑制を阻止することができる単りローン性抗木の 断片、並びにＢＣＲＦＩに誘発されたインターフェロン−γの抑制を阻止するこ とかできる単クローン性抗体のＨｇ可変領域およびＬ鎖可変領域を含む結合性組 成物から成る群より選択される請求項ＩＣ′ニーｆｃ！載の使用。

３、　前記の単クローン性抗体の前記の断片がＦａｂ断片である請求項３に記載 の使用。

４、ＢＣＲＦＩに対する有効量の拮抗薬を投与することを含む、エプスタイン・ バーウィルスに感染した患者の治療方法。

５、　前記のＢＣＲＦｌに対する拮抗薬が、ＢＣＲＦｌに誘発されたインターフ ェロン−γの抑制を阻止することができる単クローン性抗体、ＢＣＲＦｌに誘発 されたインターフェロン−γの抑制を阻止することができる単クローン性抗体の 断片、並びにＢＣＲＦｌに誘発されたインターフェロン−γの抑制を阻止するこ とができる単クローン性抗体のＨｇ可変領域およびＬｉ可変領域を含む結合性組 成物から成る群より選択される請求項４に記載の方法。

６、　前記の基クローン性抗体の前記の断片かＦａｂ断片である請求項５に記載 の方法。

７、　前記の単クローン性抗体がヒト−ヒトハイブリドーマによって製造される 請求項５に記載の方法。

８　前記の単クローン性抗体の前記の断片がＦａｂ断片である請求項７に記載の 方法。

９　前記の単クローン性抗体がヒト単クローン性抗体である請求項５に記載の方 法。

１０、前記の投与工程か、前記の拮抗薬の約１〜２０　ｍ　ｇ、／ｋ　ｇ　（前 記の患者のＣ＊Ｉ）／日の範囲の量の静脈内送達を更に含む請求項５に記載の方 法。

】１．エプスタイン・バーウィルス疾患の治療のための、ＢＣＲＦｌに対する拮 抗薬の使用。

１２、ＢＣＲＦＩに対する拮抗薬を薬学的に許容しうる担体または賦形剤と一緒 に含む、ニゲスタイン・バーウィルス疾患治療用薬剤組成物。

１３、ＢＣＲＦＩに対する拮抗薬と薬学的に許容しうる担体または賦形剤を混合 することを含む、エプスタイン・バーウィルス疾患治療用薬剤組成物の製造方法 。

手続補正帯 平成　４年　９月２８日 １、事件の表示 ＰＣＴ／ＵＳ９１１０１８１２ ２、発明の名称 エプスタイン・パーウィルス感染治療用のＢＣＲＦＩ拮抗薬３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所 名称　シェリンク・コーポレーション ４、代理人 住　所　東京都千代田区大手町二丁目２番］号新大手町ビル　２０６区 ５、補正の対象 請求の範囲 特表千５−５０１１１６　（８） （別紙） （１）請求の範囲を以下の通り補正する。

容しうる担体または賦形剤と一緒に含む、エプスタイン・バーウィルス疾患治療 用薬剤組成物。」以上 圃　腔　２ｊ１　審　稽　失 １１１．□１１１６ｆｉｌｌＡｓ。、１，１ゆ、。ｐＣＴ／ＵＳ　９１１０１８ １２１ａ＋ｗｍｉｅａａｌ　ＡＩｌ＃ａｌｌｅｎ　ｘｅ　ＰＣＴ／ＵＳ　９１１ ０１８１２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　エプスタインハーウイルス疾患の治療用薬剤の製造のためのＢＣＲＦ１に対 する拮抗薬の使用 ２　前記のＢＣＲＦ１に対する拮抗薬がＢＣＲＦ１に誘発されたインターフェロ ン−γの抑制を阻止することかてきる単クローン性抗体ＢＣＲＰ１に誘発された イノターフェロン−γの抑制を阻止することがてきる単クローン性抗体の断片並 びにＢＣＲＰ１に誘発されたイノターフェロン−γの抑制を阻止することがてき る単クローン性抗体のＨ鎖可変領域およびＬ鎖可変領域を含む結合性組成物から 成る群より選択される請求項１に記載の使用３　前記の単クローン性抗体の前記 の断片かＦａｂ断片てある請求項３に記載の使用 ４　ＢＣＲＰ１に対する有効量の拮抗薬を投与することを含むエプスタイノハー ウイルスに感染した患者の治療方法５　前記のＢＣＲＰ１に対する拮抗薬かＢＣ ＲＦ１に誘発されたインターフェロン−γの抑制を阻止することがてきる単クロ ーン性抗体ＢＣＲＰ１に誘発されたインターフェロン−γの抑制を阻止すること がてきる単クローン性抗体の断片並びにＢＣＲＦ１に誘発されたイノターフェロ ン−γの抑制を阻止することかてきる単クローン性抗体のＨ鎖可変領域およびＬ 鎖可変領域を含む結合性組成物から成る群より選択される請求項１に記載の方法 ６　前記の単クローン性抗体の前記の断片かＦａｂ断片てある請求項５に記載の 方法 ７　前記の単クローン性抗体かヒト−ヒトハイブリドーマによって製造される請 求項５に記載の方法 ８　前記の単クローン性抗体の前記の断片がＦａｂ断片てある請求項７に記載の 方法 ９　前記の単クローン性抗体がヒト単クローン性抗体てある請求項５に記載の方 法 １０　前記の投与工程が前記の拮抗薬の約１〜２０ｍｇ／ｋｇ（前記の患者の体 重）／日の範囲の量の静脈内送達を更に含む請求項５に記載の方法１１　エプス タインハーウイルス疾患の治療のためのＢＣＲＦ１に対する拮抗薬の使用