JPH0523199A - Analytical element and analyzing method - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain an analytical element having at least one layer of reagent layer on a support and developing layer upward and containing glycerol dehydrogenase and oxidation type coenzyme in the developing layer, being excellent in determination property of neutral fat and useful for diagnosis of arteriosclerosis. CONSTITUTION:The first reagent layer containing gelatin, glycerol dehydrogenase, diaphorase, 3,3'-(4,4'-biphenylene)-bis(2,5-diphenyltetrazolium chloride), 1,2-bis(vinylsulfonyl)ethane, ascorbic acid oxidase, lipoprotein lipase, etc., is provided on a transparent support such as polyethylene terephthalate film and the second reagent layer containing 3-cyclohexylaminopropane sulfone, potassium carbonate, etc., is provided thereon and further a developing layer containing an oxidation type coenzyme such as glycerol dehydrogenase or NAD<+> and resin for binder are provided thereon to provide the objective analytical element capable of quickly and simply determining a neutral fat such as blood.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、流体試料中の中性脂肪
の分析素子及び分析方法に関するものである。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an element and method for analyzing neutral fat in a fluid sample.

【０００２】[0002]

【発明の背景】血液中の中性脂肪の測定は、種々な型の
過脂肪結晶、動脈硬化症等の診断に重要である。その測
定法として、中性脂肪を分解してグリセロールとし、グ
リセロールを酵素的に分解し、光学濃度、電気的に測定
する方法が行われている。この中には、例えば （１）グリセロール−３−燐酸オキシダーゼを用いる方
法、（２）グリセロールデヒドロゲナーゼを用いる方
法、（３）グリセロール−３−燐酸デヒドロゲナーゼを
用いる方法がある。BACKGROUND OF THE INVENTION The measurement of neutral fat in blood is important for the diagnosis of various types of hyperlipid crystals, arteriosclerosis and the like. As a measuring method, a method is used in which neutral fat is decomposed into glycerol, glycerol is enzymatically decomposed, and optical density and electric are measured. Among these are, for example, (1) a method using glycerol-3-phosphate oxidase, (2) a method using glycerol dehydrogenase, and (3) a method using glycerol-3-phosphate dehydrogenase.

【０００３】ところで、上記の測定方法において、グリ
セロールデヒドロゲナーゼを用いる方法は妨害物質に対
する影響が極めて少ないと言われて来ている。しかしな
がら、時として測定値に大きな変動が認められる場合が
有り、改善が求められている。By the way, it has been said that, in the above-mentioned measuring method, the method using glycerol dehydrogenase has very little influence on interfering substances. However, sometimes large fluctuations are observed in the measured values, and improvement is required.

【０００４】[0004]

【発明の開示】上記の問題点に対する研究を鋭意押し進
めて行った結果、グリセロール脱水素酵素系で中性脂肪
を測定する場合の測定値の変動は、被検液仲の共存物
質、特に遊離グリセリンの影響を受ける為であることが
究明された。そして、グリセロール脱水素酵素系で中性
脂肪を測定する場合、グリセリンを前もって除去してお
けば、測定に際して相関性が向上し、正確性が改善され
ることを見出したのである。DISCLOSURE OF THE INVENTION As a result of earnestly conducting research on the above problems, fluctuations in the measured values when measuring triglyceride with a glycerol dehydrogenase system are caused by the coexisting substances of the test liquid, especially free glycerin. It was determined that it was to be affected. Then, when measuring triglyceride by the glycerol dehydrogenase system, it was found that if glycerin is removed in advance, the correlation is improved and the accuracy is improved in the measurement.

【０００５】上記の知見を基にして本発明は達成された
ものであり、中性脂肪の定量性に優れた技術を提供する
ことを目的とする。この本発明の目的は、支持体上に少
なくとも一層の試薬層とその上方に展開層を有する試料
中の中性脂肪を分析する為の分析素子であって、展開層
にグリセロール脱水素酵素及び酸化型補酵素が含有され
ることを特徴とする分析素子によって達成される。The present invention has been achieved based on the above findings, and an object thereof is to provide a technique which is excellent in the quantification of neutral fat. An object of the present invention is to provide an analytical element for analyzing neutral fat in a sample having at least one reagent layer on a support and a developing layer above the supporting layer, wherein the developing layer contains glycerol dehydrogenase and oxidase. This is achieved by an analytical element characterized by containing a type coenzyme.

【０００６】又、支持体上に少なくとも一層の試薬層と
その上方に展開層を有する試料中の中性脂肪を分析する
為の分析素子であって、展開層にグリセロール脱水素酵
素及び酸化型補酵素が含有されると共に、試薬層にもグ
リセロール脱水素酵素が含有されることを特徴とする分
析素子によって達成される。尚、上記の分析素子におい
て、リポプロテインリパーゼが試薬層及び／又は展開層
に含有されていることが好ましい。このリポプロテイン
リパーゼの量は、例えば２５０〜２５０００Ｕ／ｍ² を
含有させることが出来る。Further, there is provided an analytical element for analyzing neutral fat in a sample having at least one reagent layer on a support and a developing layer above the reagent layer, wherein the developing layer comprises glycerol dehydrogenase and oxidative coenzyme. This is achieved by an analysis element characterized by containing glycerol dehydrogenase in the reagent layer as well as containing the enzyme. In the above analysis element, it is preferable that lipoprotein lipase is contained in the reagent layer and / or the development layer. The amount of this lipoprotein lipase can be, for example, 250 to 25,000 U / m ² .

【０００７】又、上記の分析素子において、グリセロー
ル脱水素酵素は、その大部分が展開層に含有されること
が好ましく、例えば試薬層に含有されるグリセロール脱
水素酵素の量を１とすると、展開層には２〜１００の量
といった程度含有させることが好ましい。尚、グリセロ
ール脱水素酵素の全量は５００〜５００００Ｕ／ｍ² 程
度含有させることが出来る。Further, in the above-mentioned analytical element, it is preferable that most of the glycerol dehydrogenase is contained in the developing layer. For example, when the amount of glycerol dehydrogenase contained in the reagent layer is 1, the developing layer is developed. It is preferred to include in the layer an amount such as 2 to 100. The total amount of glycerol dehydrogenase can be contained at about 500 to 50000 U / m ² .

【０００８】又、グリセロール脱水素酵素はリポプロテ
インリパーゼよりも多く含有されていることが重要であ
る。好ましくは、リポプロテインリパーゼ１に対してグ
リセロール脱水素酵素を２倍以上含有していることが望
ましい。そして、上記のような分析素子に検体を供給
し、一定時間インキュベートした後、多点測光し、得ら
れた反射濃度差から中性脂肪濃度を求めることを特徴と
する中性脂肪の分析方法によって中性脂肪が正確に定量
される。[0008] It is important that glycerol dehydrogenase is contained in a larger amount than lipoprotein lipase. It is preferable that the lipoprotein lipase 1 contains glycerol dehydrogenase in an amount of 2 times or more. Then, by supplying the specimen to the analysis element as described above, and after incubating for a certain period of time, multipoint photometry is performed, and the neutral fat concentration is determined from the obtained reflection concentration difference. Accurate quantification of neutral fat.

【０００９】この分析に際しての反応式は、次の通りで
ある。The reaction formula for this analysis is as follows.

【００１０】[0010]

【化１】 [Chemical 1]

【００１１】以下、本発明を詳しく説明する。本発明の
乾式分析素子に用いることができる光透過性で水不浸透
性の支持体としては、ポリエチレンテレフタレート、ビ
スフェノールＡのポリカーボネート、ポリスチレン、セ
ルロースエステル（セルロースジアセテート、セルロー
ストリアセテート、セルロースアセテートプロピオネー
ト等）等のポリマーあるいは無機ガラス等からなる厚さ
約５０〜３００μｍのものが用いられる。尚、この支持
体は、その目的に応じて、例えば試薬層との接着性の改
善を目的とした下塗り層を設けても良い。The present invention will be described in detail below. Examples of the light-transmitting and water-impermeable support that can be used in the dry analytical element of the present invention include polyethylene terephthalate, bisphenol A polycarbonate, polystyrene, and cellulose ester (cellulose diacetate, cellulose triacetate, cellulose acetate propionate). Etc.) such as a polymer or an inorganic glass having a thickness of about 50 to 300 μm is used. The support may be provided with an undercoat layer for the purpose of improving the adhesiveness with the reagent layer, depending on the purpose.

【００１２】中性脂肪を分析する為の分析素子の支持体
上には少なくとも一つの試薬層が設けられている。試薬
層には電子伝達剤が含まれる。本発明において、電子伝
達剤とは、被検物質の反応により生成した例えば還元型
ニコチンアミド補酵素（電子供与体）から電子を受け取
って、後述する色素形成前駆物質を還元する機能を有す
る化合物を意味する。本発明に用いられる電子伝達剤と
しては、Ｎ−メチルフェナジン・メトサルフェート類
（例えばＮ−メチルフェナジン・メトサルフェート、１
−メトキシ−Ｎ−メチルフェナジンメトサルフェート
等）、メルドラブルー、メチレンブルー及びＢａｃｉｌ
ｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｔｅａｒｏｌｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉ
ｄｉｕｍ Ｋｌｕｙｖｅｒｉ由来のジアホラーゼ（ジヒ
ドロリポアミドレダクターゼ、ＥＣ１．６．４．３．）
等を使用することができ、好ましい電子伝達剤としては
Ｎ−メチルフェナジンメトサルフェート類やジアホラー
ゼを挙げることができる。そして、Ｎ−メチルフェナジ
ン・メトサルフェート類は１ｍｇ／ｍ² 〜１ｇ／ｍ² 、
望ましくは１０ｍｇ／ｍ² 〜５００ｍｇ／ｍ² で用いる
のが好ましく、又、ジアホラーゼは１００〜１００００
０Ｕ／ｍ² 、望ましくは５００〜５００００Ｕ／ｍ² で
用いるのが好ましい。At least one reagent layer is provided on the support of the analysis element for analyzing neutral fat. The reagent layer contains an electron transfer agent. In the present invention, the electron transfer agent refers to a compound having a function of receiving an electron from, for example, a reduced nicotinamide coenzyme (electron donor) generated by a reaction of a test substance, and reducing a dye-forming precursor described later. means. Examples of the electron transfer agent used in the present invention include N-methylphenazine methosulfates (for example, N-methylphenazine methosulfate, 1
-Methoxy-N-methylphenazine methosulfate, etc.), Meldola blue, methylene blue and Bacil
lus megaterium, Bacillus
tearolhermophilus, Clostri
diaphorase from diu Kluyveri (dihydrolipoamide reductase, EC 1.6.4.3.)
Etc. can be used, and preferable electron transfer agents include N-methylphenazine methosulfates and diaphorase. And N-methylphenazine methosulfate is 1 mg / m ^{2 to} 1 g / m ² ,
Preferably it is preferable to use at ^{10mg / m 2 ~500mg / m 2} , also diaphorase 100-10000
It is preferably used at 0 U / m ² , preferably 500 to 50000 U / m ² .

【００１３】試薬層には色素形成前駆物質も含まれる。
色素形成前駆物質は、上記電子伝達剤により還元され、
可視光領域において検出可能な化合物（色素）を形成す
る物質である。本発明の乾式分析素子において、色素形
成前駆物質としてはテトラゾリウム塩を用いることが好
ましい。すなわち、テトラゾリウム塩類は、色素形成後
は、水に対して難溶ないしは不溶性になり、通常ウェッ
ト・ケミストリー法では使用が難しいものの、形成され
る色素が耐拡散性であり、リンギングが防止され、測定
の定量性が向上することから好ましい。本発明において
有用とされるテトラゾリウム塩としては、例えば３，
３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ビフェニレ
ン）−ビス〔２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニ
ルテトラゾウムクロリド〕、３，３’−（３，３’−ジ
メトキシ−４，４’−ビフェニレン）−ビス〔２，５−
ジフェニルテトラゾリウムクロリド〕、３−（４’，
５’−ジメチル−２−チアゾリル）−２，４−ジフェニ
ルテトラゾリウムブロミド）、３−（ｐ−ヨードフェニ
ル）−２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニル−テ
トラゾリウムクロリド、２，２’，５，５’−テトラ−
（ｐ−ニトロフェニル）−３，３’−（３−ジメトキシ
−４−ジフェニレン）−ジテトラゾリウムクロリド、
２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド、
３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ビフェ
ニレン）−ビス〔２，５−ビス（ｐ−ニトロフェニル）
テトラゾリウムクロリド〕、３，３’−（４，４’−ビ
フェニレン）−ビス〔２，５−ジフェニルテトラゾリウ
ムクロリド〕等を挙げることができる。中でも、３，
３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ビフェニレ
ン）−ビス〔２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニ
ルテトラゾリウムクロリド〕や３，３’−（４，４’−
ビフェニレン）−ビス〔２，５−ジフェニルテトラゾリ
ウムクロリド〕が好ましい。テトラゾリウム塩は１０ｍ
ｇ／ｍ² 〜１０ｇ／ｍ² 、望ましくは５０ｍｇ／ｍ² 〜
３ｇ／ｍ² で用いるのが好ましい。The reagent layer also contains a dye forming precursor.
The dye-forming precursor is reduced by the electron transfer agent,
It is a substance that forms a detectable compound (dye) in the visible light region. In the dry analytical element of the present invention, it is preferable to use a tetrazolium salt as the dye-forming precursor. That is, tetrazolium salts are hardly soluble or insoluble in water after dye formation, and although it is usually difficult to use by the wet chemistry method, the dye formed is diffusion resistant, ringing is prevented, and measurement is performed. Is preferable because the quantitative property of is improved. Examples of the tetrazolium salt useful in the present invention include, for example, 3,
3 '-(3,3'-dimethoxy-4,4'-biphenylene) -bis [2- (p-nitrophenyl) -5-phenyltetrazoum chloride], 3,3'-(3,3'-dimethoxy -4,4'-Biphenylene) -bis [2,5-
Diphenyltetrazolium chloride], 3- (4 ',
5'-dimethyl-2-thiazolyl) -2,4-diphenyltetrazolium bromide), 3- (p-iodophenyl) -2- (p-nitrophenyl) -5-phenyl-tetrazolium chloride, 2,2 ', 5 , 5'-tetra-
(P-nitrophenyl) -3,3 '-(3-dimethoxy-4-diphenylene) -ditetrazolium chloride,
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,
3,3 '-(3,3'-dimethoxy-4,4'-biphenylene) -bis [2,5-bis (p-nitrophenyl)
Tetrazolium chloride], 3,3 ′-(4,4′-biphenylene) -bis [2,5-diphenyltetrazolium chloride] and the like. Among them, 3,
3 '-(3,3'-dimethoxy-4,4'-biphenylene) -bis [2- (p-nitrophenyl) -5-phenyltetrazolium chloride] or 3,3'-(4,4'-
Biphenylene) -bis [2,5-diphenyltetrazolium chloride] is preferred. Tetrazolium salt is 10m
^{g / m 2 ~10g / m 2} , preferably 50mg / m ² ~
It is preferably used at 3 g / m ² .

【００１４】尚、酸化型補酵素、電子伝達剤および色素
形成前駆物質を含む反応系の詳細については、Ａ．Ｌ．
Ｂａｂｓｏｎ等によるＣＬＩＮＩＣＡ ＣＨＩＭＩＣＡ
ＡＣＴＡ、１２巻（１９６５）２１０〜２１５頁；
Ｒ．Ｊ．Ｇａｙ等によるＣＬＩＮＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩ
ＳＴＲＹ、Ｖｏｌ．１４、Ｎｏ．８、１９６８、７４０
〜７５３頁；Ｒ．Ｄ．Ｃａｐｐｓ ＩＩ等によるクリニ
カル・ケミストリー、Ｖｏｌ．１２、Ｎｏ．７、１９６
６、４０６〜４１３頁等の文献に記載されている。The details of the reaction system containing the oxidized coenzyme, the electron transfer agent and the dye forming precursor are described in A. L.
CLINICA CHIMICA by Babson et al.
ACTA, 12 (1965) 210-215;
R. J. CLINICAL CHEMI by Gay and others
STRY, Vol. 14, No. 8, 1968, 740
~ Page 753; D. Clinical Chemistry by Capps II, Vol. 12, No. 7,196
6, pages 406 to 413 and the like.

【００１５】グリセロール脱水素酵素は主に展開層に含
有されるが、試薬層にも含有させると感度などの点で有
利である。展開層と試薬層に含有させる場合、試薬層１
に対して展開層に２〜１００含有させることが好まし
い。又、グリセロール脱水素酵素はリポプロテインリパ
ーゼより多く分析素子中に含有していることが重要であ
り、好ましくはリポプロテインリパーゼ１に対してグリ
セロール脱水素酵素を２倍以上（活性）含有しているこ
とが望ましい。Glycerol dehydrogenase is mainly contained in the developing layer, but it is advantageous to include it in the reagent layer in terms of sensitivity. When contained in the development layer and the reagent layer, the reagent layer 1
On the other hand, it is preferable that the development layer contains 2 to 100 parts. Further, it is important that the glycerol dehydrogenase is contained in the analytical element in a larger amount than that of the lipoprotein lipase, and preferably, the glycerol dehydrogenase is contained twice or more (active) with respect to the lipoprotein lipase 1. Is desirable.

【００１６】グリセロール脱水素酵素を試薬層に含有さ
せる場合、２００〜１００００Ｕ／ｍ² 含有させること
が好ましい。グリセロール脱水素酵素はマイクロコッカ
ス等の細菌由来のもの等が用いられる。又、緩衝剤も含
まれることが好ましい。例えば、トリス緩衝剤（トリス
ヒドロキシメチルアミノメタン及び塩酸トリスヒドロキ
シメチルアミノメタンの組み合わせとして知られるも
の）、グッドの緩衝剤として知られるもの、炭酸塩緩衝
剤等が好ましく用いられる。このような緩衝剤は、前述
の色素形成前駆物質と別異の層に含有されることが好ま
しい。これらは、製造時及び試料適用時に混合されない
状態で、積層されていることはいうまでもない。この
為、上記緩衝剤がバインダ中に分散されていることが好
ましく、色素形成前駆物質を含有する第１の試薬層の上
層の第２の試薬層に含有させることが好ましい。When the glycerol dehydrogenase is contained in the reagent layer, it is preferably contained in the range of 200 to 10,000 U / m ² . As the glycerol dehydrogenase, those derived from bacteria such as Micrococcus are used. It is also preferable to include a buffering agent. For example, Tris buffer (known as a combination of trishydroxymethylaminomethane and trishydroxymethylaminomethane hydrochloride), known as Good's buffer, carbonate buffer and the like are preferably used. Such a buffering agent is preferably contained in a layer different from the above-mentioned dye-forming precursor. It goes without saying that these are laminated in a state where they are not mixed at the time of production and application of the sample. Therefore, it is preferable that the buffer agent is dispersed in the binder, and it is preferable that the buffer agent is contained in the second reagent layer above the first reagent layer containing the dye forming precursor.

【００１７】本発明に係る試薬層（例えば、第１の試薬
層及び第２の試薬層）を構成するバインダとして、第２
の試薬層のバインダは第１の試薬層のバインダに対して
不溶性を示す溶媒により積層されることが望ましい。す
なわち、第２の試薬層のバインダの溶媒が第１の試薬層
のバインダを溶解させないバインダの組み合わせが好ま
しい。例えば、第１の試薬層のハインダは水溶性ポリマ
ーであり、第２の試薬層のバインダは親水性、かつ、有
機溶媒可溶性のポリマーの組み合わせが好ましい。そし
て、第１の試薬層を形成する為のバインダとしては、例
えばゼラチン、フタル化ゼラチン等のゼラチン誘導体、
ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム塩等の水溶性セルロース誘導体、ポリビ
ニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリメタクリル
アミド、ポリ（モノ又はジアルキル置換）アクリルアミ
ド、ポリ（モノ又はジアルキル置換）メタクリルアミド
及びこれらの水溶性共重合体などが挙げられる。好まし
くは、ゼラチン及びその誘導体である。第２の試薬層を
形成する為のバインダとしては、例えばポリ（Ｎ−ビニ
ルピロリドン）、ポリ（Ｎ−ビニルイミダゾール）、ポ
リ（Ｎ−ビニルトリアゾール）及びこれらの誘導体又は
それらの共重合体、エチルセルロース、メチルセルロー
ス等のセルロース誘導体、特願昭６０−１０４７７６号
明細書に記載の共重合体等が挙げられる。これらの重合
体は主としてアルコール類、例えばエタノール、プロパ
ノール、ブタノール等に溶解し、かつ、親水性の高分子
物質である。好ましくは特願昭６０−１０４７７６号明
細書に記載の共重合体が用いられる。As a binder constituting the reagent layer (for example, the first reagent layer and the second reagent layer) according to the present invention, the second
It is desirable that the binder of the reagent layer is laminated with a solvent that is insoluble in the binder of the first reagent layer. That is, a combination of binders in which the solvent of the binder of the second reagent layer does not dissolve the binder of the first reagent layer is preferable. For example, the binder of the first reagent layer is preferably a water-soluble polymer, and the binder of the second reagent layer is preferably a combination of hydrophilic and organic solvent-soluble polymers. And as the binder for forming the first reagent layer, for example, gelatin, gelatin derivatives such as phthalated gelatin,
Hydroxyethyl cellulose, water-soluble cellulose derivatives such as sodium carboxymethyl cellulose, polyvinyl alcohol, polyacrylamide, polymethacrylamide, poly (mono- or dialkyl-substituted) acrylamide, poly (mono- or dialkyl-substituted) methacrylamide and water-soluble copolymers thereof And so on. Gelatin and its derivatives are preferred. Examples of the binder for forming the second reagent layer include poly (N-vinylpyrrolidone), poly (N-vinylimidazole), poly (N-vinyltriazole) and their derivatives or their copolymers, ethyl cellulose. , Cellulose derivatives such as methylcellulose, and the copolymers described in Japanese Patent Application No. 60-104776. These polymers are hydrophilic high molecular substances which are mainly dissolved in alcohols such as ethanol, propanol, butanol and the like. Preferably, the copolymer described in Japanese Patent Application No. 60-104776 is used.

【００１８】試薬層の上方には多孔性の展開層が設けら
れる。この展開層は、（１）一定容量の流体試料を単位
面積当たり試薬層に均一に拡散する機能を有するもので
ある。その上、更に、特公昭５３−２１６７７号公報に
記載された性能、すなわち（２）流体試料中の分析反応
を阻害する物質又は要因を除去する機能及び／又は
（３）分光光度分析を行う時に、支持体を経て透過する
測定光を反射するバックグラウンド作用を行う機能を有
するものであれば好ましい。従って、展開層は、上記
（１）の機能のみを有する層、（１）に加えて（２）及
び／又は（３）の機能を併せて有する層のいずれかとす
ることができ、あるいは（１）を包含する複数の機能を
適宜分離し、各機能ごとに別の層を使用することも可能
である。更に（１）、（２）及び（３）の機能のうち、
２つの機能を有する層と、残りの１つの機能を有する層
を組み合わせて使用することもできる。例えば、前述の
特公昭５３−２１６７７号公報に記載された二酸化チタ
ン及び二酢酸セルロースから成るブラッシュポリマーと
呼称される非繊維多孔質媒体の展開層、特開昭５５−１
６４３５６号公報に記載された親水化処理した織物の展
開層、特開昭５７−９４６５８号公報、特開昭５７−１
２５８４７号公報、特開昭５７−１９７４６６号公報及
び特開昭５８−７０１６１号公報などに記載された繊維
構造展開層、特開昭５８−９０１６７号公報に記載され
た粒子結合体構造展開層が挙げられる。特に、上記繊維
構造展開層及び粒子結合体構造展開層は、血球部分も速
やかに移送することが可能な素材として特に有用であ
る。本発明の分析素子における展開層の膜厚は、その空
隙率によって決定されるが、好ましくは約１００〜５０
０μｍ、更に好ましくは約１５０〜３５０μｍである。
又、空隙率は約２０〜８５％が好ましい。A porous spreading layer is provided above the reagent layer. This spreading layer has the function of (1) uniformly diffusing a fixed volume of the fluid sample into the reagent layer per unit area. In addition, the performance described in JP-B-53-21677, that is, (2) a function of removing a substance or a factor that inhibits an analysis reaction in a fluid sample and / or (3) a spectrophotometric analysis It is preferable that it has a function of performing a background action of reflecting the measurement light transmitted through the support. Therefore, the development layer can be either a layer having only the function of (1) above, or a layer having the functions of (2) and / or (3) in addition to (1), or (1 It is also possible to appropriately separate a plurality of functions including a) and use a different layer for each function. Furthermore, among the functions of (1), (2) and (3),
It is also possible to use a layer having two functions and a layer having one remaining function in combination. For example, a development layer of a non-fibrous porous medium called a brush polymer composed of titanium dioxide and cellulose diacetate described in JP-B-53-21677 mentioned above, JP-A-55-1.
Development layer of hydrophilically treated fabric described in JP-A-64356, JP-A-57-94658 and JP-A-57-1
25847, JP-A-57-197466, JP-A-58-70161, and the like, and the particle-boundary structure-developing layer described in JP-A-58-90167. Can be mentioned. In particular, the above-mentioned fibrous structure-developed layer and particle-conjugated structure-developed layer are particularly useful as a material capable of rapidly transferring a blood cell portion. The film thickness of the spreading layer in the analytical element of the present invention is determined by its porosity, but is preferably about 100-50.
It is 0 μm, more preferably about 150 to 350 μm.
The porosity is preferably about 20 to 85%.

【００１９】この展開層がグリセロール脱水素酵素及び
酸化型補酵素が含有することが大事である。すなわち、
検体試料中に、妨害物質であるグリセリンが存在する場
合、これを除去する為である。尚、グリセロール脱水素
酵素は展開層中に５００〜５００００Ｕ／ｍ² 、好まし
くは１０００〜４００００Ｕ／ｍ² 含有させることが出
来るが、既に述べた通り、試薬層中にも含有させること
が望ましく、その比率は試薬層１に対して展開層に２〜
１００である。そして、さらに分析素子中において、リ
ポプロテインリパーゼより多くのグリセロール脱水素酵
素が含有されることが重要であり、リポプロテインリパ
ーゼ１に対して２倍以上のグリセロール脱水素酵素が分
析素子中に含有されることが好ましい。It is important that this developed layer contains glycerol dehydrogenase and oxidized coenzyme. That is,
This is because when the interfering substance glycerin is present in the specimen sample, it is removed. Incidentally, 500~50000U / m ² glycerol dehydrogenase in the spreading layer, but preferably it is possible to 1000~40000U / m ² is contained, as already mentioned, preferably be contained in the reagent layer, the The ratio is 2 to the developing layer with respect to the reagent layer 1.
100. Furthermore, it is important that the analytical element contains more glycerol dehydrogenase than lipoprotein lipase, and the analytical element contains more than twice as much glycerol dehydrogenase as lipoprotein lipase 1. Preferably.

【００２０】又、酸化型補酵素の量は１０ｍｇ／ｍ² 〜
５０ｇ／ｍ² 程度、望ましくは５０ｍｇ／ｍ² 〜１０ｇ
／ｍ² 程度含有されていることが好ましい。酸化型補酵
素としては、例えばニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド（ＮＡＤ⁺ ）またはニコチンアミドアデニンジヌク
レオチドホスフェート（ＮＡＤＰ⁺ ）等が挙げられる。
好ましくはＮＡＤ⁺ である。尚、ＮＡＤ⁺ はテトラゾリ
ウム塩などの色素形成前駆物質と異なる層に含有させら
れるので、調液時のカブリは低減され、多層分析素子の
バックグラウンドの着色光学濃度が低下し、好ましい。The amount of oxidized coenzyme is 10 mg / m ² to
About 50 g / m ² , preferably 50 mg / m ^{2 to} 10 g
/ M ² is preferably contained. Examples of the oxidized coenzyme include nicotinamide adenine dinucleotide (NAD ⁺ ), nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP ⁺ ), and the like.
Preferred is NAD ⁺ . Since NAD ⁺ is contained in a layer different from a dye-forming precursor such as a tetrazolium salt, fog during solution preparation is reduced, and the background colored optical density of the multilayer analysis element is reduced, which is preferable.

【００２１】又、展開層には、ピルビン酸ナトリウム等
のＬＤＨ阻害剤を含有させることが出来る。又、他の添
加剤として、例えば保恒剤、界面活性剤なども所望に応
じて添加することができる。特に、界面活性剤は、流体
試料を本発明の素子に適用した際の浸透速度の調節など
有効に用いることができる。使用可能な界面活性剤とし
ては、イオン性（アニオン性またはカチオン性）、非イ
オン性を問わず使用できるが、非イオン性の界面活性剤
が有効である。非イオン性界面活性剤の例としては、例
えば２，５−ジ−ｔ−ブチルフェノキシポリエチレング
リコール、ｐ−オクチルフェノキシポリエチレングリコ
ール、ｐ−イソノニルフェノキシポリエチレングリコー
ル等のアルキル置換フェノールのポリアルキレングリコ
ール誘導体、高級脂肪酸のポリアルキレングリコールエ
ステル等が挙げられる。これらの界面活性剤は流体試料
の試薬層への浸透速度を調節し、同時に好ましからざる
「クロマトグラフィー現象」発生を抑制する効果を有す
る。界面活性剤は広範に選択された量を用いることが可
能であるが、塗布液の重量に対して２５〜０．００５重
量％、好ましくは１５〜０．０５重量％用いることがで
きる。尚、界面活性剤は、展開層の他に試薬層にも含有
させることができる。Further, the spreading layer may contain an LDH inhibitor such as sodium pyruvate. Further, other additives such as preservatives and surfactants can be added as desired. In particular, the surfactant can be effectively used for controlling the permeation rate when the fluid sample is applied to the device of the present invention. As the usable surfactant, either ionic (anionic or cationic) or nonionic can be used, but a nonionic surfactant is effective. Examples of nonionic surfactants include polyalkylene glycol derivatives of alkyl-substituted phenols such as 2,5-di-t-butylphenoxy polyethylene glycol, p-octylphenoxy polyethylene glycol, p-isononylphenoxy polyethylene glycol, and the like. Examples thereof include polyalkylene glycol esters of higher fatty acids. These surfactants have the effect of controlling the permeation rate of the fluid sample into the reagent layer and, at the same time, suppressing the undesirable occurrence of “chromatographic phenomenon”. The surfactant can be used in a widely selected amount, but can be used in an amount of 25 to 0.005% by weight, preferably 15 to 0.05% by weight, based on the weight of the coating solution. The surfactant can be contained in the reagent layer in addition to the spreading layer.

【００２２】アナライトである中性脂肪はポリマーバイ
ンダの均一な塗布層を通過し難いので、多孔性展開層に
検出用試薬成分の一部、特に加水分解酵素であるリポプ
ロテインリパーゼを含有させることが感度などの点で有
利である。展開層に含有させるリポプロテインリパーゼ
（ＥＣ３．１．１．３４）はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属
由来のもの等が用いられる。リポプロテインリパーゼ
は、試薬層に含有させることも出来る。リポプロテイン
リパーゼは、分析素子に２５０〜２５０００Ｕ／ｍ² 、
好ましくは５００〜５０００Ｕ／ｍ² を含有させること
が出来る。Since the neutral fat, which is an analyte, does not easily pass through the uniform coating layer of the polymer binder, it is necessary to include a part of the reagent component for detection, particularly lipoprotein lipase which is a hydrolase, in the porous spreading layer. Is advantageous in terms of sensitivity. The lipoprotein lipase (EC 3.1.1.34) contained in the spreading layer is derived from the genus Pseudomonas or the like. Lipoprotein lipase can also be contained in the reagent layer. Lipoprotein lipase is used in the analytical element in the range of 250 to 25,000 U / m ² ,
Preferably, it can contain 500 to 5000 U / m ² .

【００２３】展開層に含有されるアルカリ性緩衝剤また
はアルカリ剤としては、２−アミノ−２−メチル−１，
３−プロパンジオール，２−アミノ−２−エチル−１，
３−プロパンジオール、ジエタノールアミン、エタノー
ルアミン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパンジオ
ール、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、トリ
メチルアミン等が挙げられる。このほかに用い得る緩衝
剤としては、日本化学会編「化学便覧 基礎編」（東
京、丸善（株）１９６６年発行）１３１２〜１３２０
頁、Ｒ．Ｍ．Ｃ．Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ編「Ｄａｔ
ａ ｆｏｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ」第２版（Ｏｘｆｏｒｄ ａｔｔｈｅＣｌａｒｅｎｄ
ｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９６９年発行）４７６〜５０８
頁、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」５，４７６頁以降
（１９６６年）、「Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ」１０４，３００〜３１０頁（１９８
０）等に記載のｐＨ緩衝剤系がある。As the alkaline buffering agent or the alkaline agent contained in the spreading layer, 2-amino-2-methyl-1,
3-propanediol, 2-amino-2-ethyl-1,
Examples thereof include 3-propanediol, diethanolamine, ethanolamine, 2-amino-2-methyl-1-propanediol, tris (hydroxymethyl) aminomethane, trimethylamine and the like. Other buffer agents that can be used are “Chemical Handbook Basic Edition” edited by The Chemical Society of Japan, Tokyo, Maruzen Co., Ltd. 1966, 1312-1320.
Pp. R. M. C. Dawson et al ed. "Dat
a for Biochemical Research
h ”2nd edition (Oxford at the Clarend
on Press, published in 1969) 476-508
P., "Biochemistry" 5, p. 476 et seq. (1966), "Analytical Bioch"
"emission" 104, 300-310 (198)
0) and the like, there are pH buffer systems.

【００２４】本発明の分析素子は、必要に応じて、例え
ば米国特許第３，９９２，１５８号明細書記載の反射
層、下塗り層、米国特許第４，０４２，３３５号明細書
記載の放射線ブロッキング層、米国特許第４，０６６，
４０３号明細書記載のバリヤー層、米国特許第４，１６
６，０９３号明細書記載のマイグレーション阻止層、特
開昭５５−９０８５９号公報記載のスカベンジャー層、
及び米国特許第４，１１０，０７９号明細書記載の破壊
性ポッド状部材等を任意に組み合わせて本発明の目的に
合わせた任意の構成とすることができる。The analytical element of the present invention may be used, if necessary, for example, a reflective layer and an undercoat layer described in US Pat. No. 3,992,158, and radiation blocking described in US Pat. No. 4,042,335. Layer, U.S. Pat. No. 4,066,
Barrier layer as described in US Pat. No. 403, US Pat. No. 4,16.
6,093 specification migration prevention layer, JP-A-55-90859, scavenger layer,
Also, the destructible pod-shaped members described in U.S. Pat. No. 4,110,079 and the like can be combined arbitrarily to have an arbitrary configuration according to the object of the present invention.

【００２５】これら分析素子の種々の層は、本発明に係
る支持体上に所望の構成にしたがい、従来写真工業にお
いて公知のスライドホッパー塗布法、押し出し塗布法、
浸漬塗布法等を適宜選択して用い、順次積層することで
任意の厚みの層を塗設することができる。そして、上記
のような分析素子の多孔性展開層側から約５〜３０μ
ｌ、好ましくは約８〜１５μｌの水性液体試料を点着供
給し、必要に応じて約２０〜４５℃の範囲の実質的に一
定の温度でインキュベーションする。その後、一方の
側、例えば光透過性支持体側から分析素子内の色変化、
発色等の検出可能な変化を多点測光し、得られた反射濃
度差から中性脂肪濃度を求める。The various layers of these analytical elements can be formed on the support according to the present invention in a desired structure by a slide hopper coating method, an extrusion coating method, or a known method in the photographic industry.
A layer having an arbitrary thickness can be applied by sequentially selecting and using a dip coating method or the like and sequentially stacking. Then, from the porous development layer side of the analytical element as described above, about 5 to 30 μm
1, preferably about 8-15 μl of an aqueous liquid sample is spotted and optionally incubated at a substantially constant temperature in the range of about 20-45 ° C. After that, the color change in the analysis element from one side, for example, the light-transmissive support side,
The detectable changes such as color development are measured at multiple points, and the neutral fat concentration is determined from the obtained reflection density difference.

【００２６】以下、本発明を実施例により具体的に説明
するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.

【００２７】[0027]

【実施例】膜厚１８０μｍの透明な下引済ポリエチレン
テレフタレート支持体上に下記組成の第１の試薬層を設
けた。 〔第１の試薬層〕 Ｒ−１−１ Ｒ−１−２ Ｒ−１−３ Ｒ−１−４ Ｒ−１−５ Ａ（ｇ／ｍ² ） ２１．０ ２１．０ ２１．０ ２１．０ ２１．０ Ｂ（Ｕ／ｍ² ） ６０００ ２０００ ５００ ２０００ ５００ Ｃ（Ｕ／ｍ² ） ３０００ ３０００ ３０００ ３０００ ３０００ Ｄ（ｇ／ｍ² ） ０．８ ０．８ ０．８ ０．８ ０．８ Ｅ（ｇ／ｍ² ） ２．１ ２．１ ２．１ ２．１ ２．１ Ｆ（ｇ／ｍ² ） ０．１５ ０．１５ ０．１５ ０．１５ ０．１５ Ｇ（Ｕ／ｍ² ） ７５００ ７５００ ７５００ ７５００ ７５００ Ｈ（ｇ／ｍ² ） １．０ １．０ １．０ １．０ １．０ Ｉ（Ｕ／ｍ² ） − − − ２０００ ２０００ Ａはゼラチン Ｂはグリセロール脱水素酵素 Ｃはジアホラーゼ Ｄは３，３’−（４，４’−ビフェニレン）−ビス
（２，５−ジフェニルテトラゾリウムクロリド ＥはトライトンＸ−１００ Ｆは１，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン Ｇはアスコルビン酸オキシダーゼ ＨはＢＳＡ Ｉはリポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ） 上記第１の試薬層上に下記組成の第２の試薬層を設け
た。Example A first reagent layer having the following composition was provided on a transparent subbed polyethylene terephthalate support having a film thickness of 180 μm. First reagent layer] R-1-1 R-1-2 R- 1-3 R-1-4 R-1-5 A (g / m 2) 21.0 21.0 21.0 21. 0 21.0 B (U / m ² ) 6000 2000 2000 500 2000 500 C (U / m ² ) 3000 3000 3000 3000 3000 D (g / m ² ) 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 E (g / m ² ) 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 F (g / m ² ) 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 G (U / m ² ) 7500 7500 7500 7500 7500 H (g / m ² ) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 I (U / m ² ) --- 2000 2000 A is gelatin B is glycerol dehydrogenase C is diaphorase D is 3,3 '-(4,4'-biphenylene) -bis (2,5-diphenyltetrazolium chloride E is Triton X-100 F is 1,2-bis. (Vinylsulfonyl) ethane G is ascorbate oxidase H is BSA I is lipoprotein lipase (LPL) A second reagent layer having the following composition was provided on the first reagent layer.

【００２８】 〔第２の試薬層Ｒ−２〕 ３−シクロヘキシルアミノプロパンスルホン酸 ６．１ｇ／ｍ² 炭酸カリウム・３／２Ｈ₂ Ｏ １．８ｇ／ｍ² ルビスコールＶＡ−２８ ４．５ｇ／ｍ² トライトンＸ−１００ ０．５ｇ／ｍ² 尚、第２の試薬層は、溶媒としてｎ−ブノールを用い
て、サンドグラインダー直接分散により塗設したもので
ある。[Second Reagent Layer R-2] 3-Cyclohexylaminopropanesulfonic Acid 6.1 g / m ² Potassium Carbonate 3 / 2H ₂ O 1.8 g / m ² Rubiscol VA-28 4.5 g / m ² Triton X-100 0.5 g / m ² The second reagent layer was applied by direct dispersion using a sand grinder using n-butanol as a solvent.

【００２９】上記第２の試薬層上に下記組成の展開層を
設け、比較例の分析素子１（Ｒ−１−１＋Ｒ−２＋Ｓ−
１）、本発明の分析素子１（Ｒ−１−２＋Ｒ−２＋Ｓ−
２）、本発明の分析素子２（Ｒ−１−３＋Ｒ−２＋Ｓ−
３）、本発明の分析素子３（Ｒ−１−４＋Ｒ−２＋Ｓ−
４）、本発明の分析素子４（Ｒ−１−５＋Ｒ−２＋Ｓ−
５）、本発明の分析素子５（Ｒ−１−６＋Ｒ−２＋Ｓ−
６）を得た。A development layer having the following composition is provided on the second reagent layer, and the analytical element 1 (R-1-1 + R-2 + S-) of the comparative example is provided.
1), analysis element 1 (R-1-2 + R-2 + S- of the present invention
2), analytical element 2 (R-1-3 + R-2 + S- of the present invention
3), analytical element 3 of the present invention (R-1-4 + R-2 + S-
4), analytical element 4 (R-1-5 + R-2 + S- of the present invention
5), the analytical element 5 of the present invention (R-1-6 + R-2 + S-
6) was obtained.

【００３０】 〔展開層〕 Ｓ−１ Ｓ−２ Ｓ−３ Ｓ−４ Ｓ−５ Ｓ−６ Ｊ（ｇ／ｍ² ）９１ ９１ ９１ ９１ ９１ ９１ Ｋ（ｇ／ｍ² ） ３．１ ３．１ ３．１ ３．１ ３．１ ３．１ Ｌ（Ｕ／ｍ² ）２０００ ２０００ ２０００ − − １０００ Ｍ（ｇ／ｍ² ） ０．５ ０．５ ０．５ ０．５ ０．５ ０．５ Ｎ（ｇ／ｍ² ）２２ ２２ ２２ ２２ ２２ ２２ Ｏ（ｇ／ｍ² ） ９ ９ ９ ９ ９ ９ Ｐ（Ｕ／ｍ² ） − ４０００ ５５００ ４０００ ５５００ ４０００ Ｑ（ｇ／ｍ² ） １．０ １．０ １．０ １．０ １０ １．０ Ｊは粉末濾紙（東洋濾紙４０〜１００メッシュ） ＫはＮＡＤ⁺ ＬはＬＰＬ Ｍはピルビン酸ナトリウム Ｎはスチレン−グリシジルメタクリレート（９：１）共
重合体 ＯはトライトンＸ−１００ Ｐはグリセロール脱水素酵素 ＱはＢＳＡ 上記のようにして得た本発明の分析素子１〜４及び比較
例の分析素子−１に対して、異なる濃度のグリセリンを
含むプール血清１０μｌ（中性脂肪８０ｍｇ／ｄｌ、１
５５ｍｇ／ｄｌ）を滴下し、３７℃でインキュベートし
た。滴下後３分３０秒後と７分後の反射濃度を反射分光
光度計で５４６ｎｍのフィルターを通して測定し、得ら
れた反射濃度差を予めヒト血清を用いて作成しておいた
反射濃度差を濃度に変換する式で変換し、中性脂肪濃度
を求めたので、その結果を下記の表−１に示す。[Development Layer] S-1 S-2 S-3 S-4 S-5 S-6 J (g / m ² ) 91 91 91 91 91 91 91 K (g / m ² ) 3.1 3. 1 3.1 3.1 3.1 3.1 L (U / m ² ) 2000 2000 2000 --- 1000 M (g / m ² ) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0. 5 N (g / m ² ) 22 22 22 22 22 22 22 O (g / m ² ) 9 9 9 9 9 9 P (U / m ² ) -4000 5500 4000 5500 4000 Q (g / m ² ) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 10 1.0 J is powder filter paper (Toyo filter paper 40-100 mesh) K is NAD ⁺ L LPL M is sodium pyruvate N is styrene-glycidyl methacrylate (9: 1) Combined O is Triton X-100 P is glycerol dehydrogenase Q is on BSA Against analytical element 4 and Comparative Examples analytical element -1 of so obtained present invention, pool glycerine different concentrations serum 10 [mu] l (neutral fat 80 mg / dl, 1
55 mg / dl) was added dropwise and incubated at 37 ° C. The reflection densities 3 minutes 30 seconds after and 7 minutes after the dripping were measured with a reflection spectrophotometer through a 546 nm filter, and the obtained reflection density difference was calculated in advance using human serum. The neutral fat concentration was obtained by the conversion with the formula for converting into, and the results are shown in Table 1 below.

【００３１】 表−１ グリセリン濃度 グリセリン濃度 ０mg/ml 10mg/ml ０mg/ml 10mg/ml 本発明分析素子−１ ８０ ８２ １５３ １５５ 本発明分析素子−２ ８０ ８３ １５６ １６０ 本発明分析素子−３ ８１ ８５ １５４ １６７ 本発明分析素子−４ ８０ ８６ １５５ １６４ 本発明分析素子−５ ８０ ８４ １５４ １６１ 比較例分析素子−１ ８１ １１５ １５３ ２０５ この表−１によれば、本発明になるものはグリセリンに
よる影響が少なく、中性脂肪を正確に測定できることが
判る。Table-1 Glycerin Concentration Glycerin Concentration 0 mg / ml 10 mg / ml 0 mg / ml 10 mg / ml Inventive Analytical Element-1 80 82 153 155 Inventive Analytical Element-2 80 83 156 160 Inventive Analytical Element-3 81 85 154 167 Inventive Analytical Element-4 80 86 155 164 Inventive Analytical Element-5 80 84 154 161 Comparative Example Analytical Element-1 81 115 153 205 According to Table 1, the effect of glycerin on the present invention is shown. It can be seen that the amount of triglyceride is small and can be accurately measured.

【００３２】[0032]

【効果】グリセリンによる影響を防止でき、中性脂肪を
正確に測定できる。[Effect] The influence of glycerin can be prevented and the neutral fat can be accurately measured.

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 支持体上に少なくとも一層の試薬層とそ
の上方に展開層を有する試料中の中性脂肪を分析する為
の分析素子であって、展開層にグリセロール脱水素酵素
及び酸化型補酵素が含有されることを特徴とする分析素
子。1. An analytical element for analyzing neutral fat in a sample having at least one reagent layer on a support and a spreading layer above the reagent layer, wherein the spreading layer comprises glycerol dehydrogenase and oxidized coenzyme. An analysis element comprising an enzyme. 【請求項２】 支持体上に少なくとも一層の試薬層とそ
の上方に展開層を有する試料中の中性脂肪を分析する為
の分析素子であって、展開層にグリセロール脱水素酵素
及び酸化型補酵素が含有されると共に、試薬層にもグリ
セロール脱水素酵素が含有されることを特徴とする分析
素子。2. An analysis element for analyzing neutral fat in a sample having at least one reagent layer on a support and a development layer above the support layer, wherein the development layer comprises glycerol dehydrogenase and oxidized coenzyme. An analytical element comprising an enzyme and a reagent layer also containing glycerol dehydrogenase. 【請求項３】 グリセロール脱水素酵素が主に展開層に
含有されることを特徴とする請求項２の分析素子。3. The analytical element according to claim 2, wherein glycerol dehydrogenase is contained mainly in the spreading layer. 【請求項４】 グリセロール脱水素酵素がリポプロテイ
ンリパーゼよりも多く含有されていることを特徴とする
請求項１〜請求項３の分析素子。4. The analytical element according to claim 1, which contains more glycerol dehydrogenase than lipoprotein lipase. 【請求項５】 請求項１〜請求項４記載の分析素子に検
体を供給し、一定時間インキュベートした後、多点測光
し、得られた反射濃度差から中性脂肪濃度を求めること
を特徴とする中性脂肪の分析方法。5. A specimen is supplied to the analytical element according to any one of claims 1 to 4, after incubation for a certain period of time, multipoint photometry is performed, and the neutral fat concentration is determined from the obtained reflection concentration difference. Method for analyzing triglyceride.