JPH05168498A - カルシウムイオン測定用組成物 - Google Patents
カルシウムイオン測定用組成物Info
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- JPH05168498A JPH05168498A JP34070291A JP34070291A JPH05168498A JP H05168498 A JPH05168498 A JP H05168498A JP 34070291 A JP34070291 A JP 34070291A JP 34070291 A JP34070291 A JP 34070291A JP H05168498 A JPH05168498 A JP H05168498A
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- oxidase
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
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- G—PHYSICS
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- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
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- G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
- G01N2333/918—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生体試料中のカルシウムイオン濃度を測定す
るための測定物である。 【構成】 リン脂質、ホスホリパーゼＡ2 およびリゾレ
シチン測定用試薬を含有するカルシウムイオン測定用組
成物。 【効果】 測定が簡便であり、カルシウム高値検体でも
正確な分析結果を与えることができる。
るための測定物である。 【構成】 リン脂質、ホスホリパーゼＡ2 およびリゾレ
シチン測定用試薬を含有するカルシウムイオン測定用組
成物。 【効果】 測定が簡便であり、カルシウム高値検体でも
正確な分析結果を与えることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、カルシウムイオンの測
定用組成物に関する。更に詳しくはリン脂質、ホスホリ
パーゼＡ2 およびリゾレシチン測定用試薬を含有するカ
ルシウムイオン測定用組成物に関する。
定用組成物に関する。更に詳しくはリン脂質、ホスホリ
パーゼＡ2 およびリゾレシチン測定用試薬を含有するカ
ルシウムイオン測定用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】体液中のカルシウムの測定は、神経、筋
肉の興奮性、血液凝固反応、細胞膜の透過性等の種々の
生理機能や副甲状腺機能などの有用な情報を与え、臨床
的意義が高い。従来、体液中のカルシウムイオンの測定
には、イオン選択電極を用いた電極法などの方法が実用
化され一般に用いられていた。ところが、この方法は専
用の装置が必要であり、従って機器の保守・管理に注意
を要し、試料の分析処理効率が悪い等の問題があった。
肉の興奮性、血液凝固反応、細胞膜の透過性等の種々の
生理機能や副甲状腺機能などの有用な情報を与え、臨床
的意義が高い。従来、体液中のカルシウムイオンの測定
には、イオン選択電極を用いた電極法などの方法が実用
化され一般に用いられていた。ところが、この方法は専
用の装置が必要であり、従って機器の保守・管理に注意
を要し、試料の分析処理効率が悪い等の問題があった。
【０００３】また、近年ホスホリパーゼＤ反応における
カルシウムイオンによる活性化（カルシウム要求性）を
利用したカルシウムイオンの測定方法が報告されている
（１９９１年度日本農芸化学会大会要旨、３０９頁）。
この方法は、高濃度領域のカルシウムイオンの測定のた
めに反応系にＭｎイオンを添加する操作が必要であるな
どの問題があった。
カルシウムイオンによる活性化（カルシウム要求性）を
利用したカルシウムイオンの測定方法が報告されている
（１９９１年度日本農芸化学会大会要旨、３０９頁）。
この方法は、高濃度領域のカルシウムイオンの測定のた
めに反応系にＭｎイオンを添加する操作が必要であるな
どの問題があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、特殊な測定
装置の保守・管理が不要であり、測定精度に優れ、かつ
カルシウムの高値検体でも正確な分析結果を与える簡便
なカルシウムイオン測定用試薬を提供するものである。
装置の保守・管理が不要であり、測定精度に優れ、かつ
カルシウムの高値検体でも正確な分析結果を与える簡便
なカルシウムイオン測定用試薬を提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記のご
とく目的を達成するために種々鋭意検討した結果、本発
明を完成するに至った。すなわち、本発明は、リン脂
質、ホスホリパーゼＡ2 およびリゾレシチン測定用試薬
を含有することを特徴とするカルシウムイオン測定用組
成物である。
とく目的を達成するために種々鋭意検討した結果、本発
明を完成するに至った。すなわち、本発明は、リン脂
質、ホスホリパーゼＡ2 およびリゾレシチン測定用試薬
を含有することを特徴とするカルシウムイオン測定用組
成物である。
【０００６】本発明に用いられるリン脂質は、下記一般
式で示される。
式で示される。
【化１】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 は炭素原子数６〜２２のアシル基、
Ｘはコリンまたはエタノールアミンを示す。）
Ｘはコリンまたはエタノールアミンを示す。）
【０００７】また、このリン脂質を例示すれば、卵黄レ
シチンや大豆レシチンなどの天然レシチン、ジオレイル
レシチン、ジリノレイルレシチン、ジリノレオイルレシ
チン、１−パルミトイル−２−オレイルレシチン、１−
パルミトイル−２−リノレイルレシチン、１−パルミト
イル−２−リノレオイル、１−ステアロイル−２−オレ
イルレシチン、１−ステアロイル−２−リノレイルレシ
チンなどの合成レシチンが挙げられる。
シチンや大豆レシチンなどの天然レシチン、ジオレイル
レシチン、ジリノレイルレシチン、ジリノレオイルレシ
チン、１−パルミトイル−２−オレイルレシチン、１−
パルミトイル−２−リノレイルレシチン、１−パルミト
イル−２−リノレオイル、１−ステアロイル−２−オレ
イルレシチン、１−ステアロイル−２−リノレイルレシ
チンなどの合成レシチンが挙げられる。
【０００８】リゾレシチン測定用試薬としては、ホスホ
リパーゼＡ2 と上記一般式で示されるリン脂質との反応
生成物であるリゾレシチンを検出するための諸酵素や試
薬の組み合わせから構成される。すなわち、少なくとも
リゾホスホリパーゼ、グリセリルホスホリルコリンホス
ホジエステラーゼおよびグリセロリン酸オキシダーゼま
たはコリンオキシダーゼまたはエタノールアミンオキシ
ダーゼから構成されるリゾレシチン測定用試薬を用いた
反応により生成された過酸化水素を定量すればよく、ま
たペルオキシダーゼを用いて分光学的に測定できるもの
である。
リパーゼＡ2 と上記一般式で示されるリン脂質との反応
生成物であるリゾレシチンを検出するための諸酵素や試
薬の組み合わせから構成される。すなわち、少なくとも
リゾホスホリパーゼ、グリセリルホスホリルコリンホス
ホジエステラーゼおよびグリセロリン酸オキシダーゼま
たはコリンオキシダーゼまたはエタノールアミンオキシ
ダーゼから構成されるリゾレシチン測定用試薬を用いた
反応により生成された過酸化水素を定量すればよく、ま
たペルオキシダーゼを用いて分光学的に測定できるもの
である。
【０００９】一般にはグリセリルホスホリルコリンホス
ホジエステラーゼは、上記一般式においてＸがエタノー
ルアミンの場合も基質として利用するものであるので、
グリセリルホスホリエタノールアミンの場合も反応が進
行する。
ホジエステラーゼは、上記一般式においてＸがエタノー
ルアミンの場合も基質として利用するものであるので、
グリセリルホスホリエタノールアミンの場合も反応が進
行する。
【００１０】本発明に用いられれるホスホリパーゼＡ2
としては、ヘビ毒、ハチ毒、動物膵臓などにその存在が
知られているが、これら起源の酵素は低濃度領域のカル
シウムイオンで最大の活性化が起きることが知られてい
る。本発明者により究明された、ストレプトマイセス由
来のホスホリパーゼＡ2 は、図１に示すように比較的高
濃度のカルシウムイオンまで濃度に比例した活性化がみ
られる。
としては、ヘビ毒、ハチ毒、動物膵臓などにその存在が
知られているが、これら起源の酵素は低濃度領域のカル
シウムイオンで最大の活性化が起きることが知られてい
る。本発明者により究明された、ストレプトマイセス由
来のホスホリパーゼＡ2 は、図１に示すように比較的高
濃度のカルシウムイオンまで濃度に比例した活性化がみ
られる。
【００１１】従って、カルシウムイオン測定の目的には
ストレプトマイセス由来のホスホリパーゼＡ2 （東洋醸
造株式会社製、カタログＴ−３１）が好都合であり、こ
の点も本発明のカルシウムイオン測定用組成物の優れた
点である。リゾレシチン測定用試薬としてのリゾホスホ
リパーゼの起源は特に限定されるものでないが、動物、
植物、微生物から得られる酵素でレシチンに作用しない
酵素が利用される。
ストレプトマイセス由来のホスホリパーゼＡ2 （東洋醸
造株式会社製、カタログＴ−３１）が好都合であり、こ
の点も本発明のカルシウムイオン測定用組成物の優れた
点である。リゾレシチン測定用試薬としてのリゾホスホ
リパーゼの起源は特に限定されるものでないが、動物、
植物、微生物から得られる酵素でレシチンに作用しない
酵素が利用される。
【００１２】微生物由来の酵素としては、ビブリオ属由
来の酵素（東洋醸造株式会社製、カタログＴ−３２）が
適している。グリセリルホスホリルコリンホスホジエス
テラーゼもその起源は特に限定されるものではなく、動
物、微生物由来の酵素が使用できる。同様にグリセロリ
ン酸オキシダーゼ、コリンオシダーゼやエタノールアミ
ンオキシダーゼも、その起源に何ら限定されるものでは
なく、好ましくは微生物由来の酵素が使用でき、これら
種々の酵素については市販のものを使用することが簡便
である。
来の酵素（東洋醸造株式会社製、カタログＴ−３２）が
適している。グリセリルホスホリルコリンホスホジエス
テラーゼもその起源は特に限定されるものではなく、動
物、微生物由来の酵素が使用できる。同様にグリセロリ
ン酸オキシダーゼ、コリンオシダーゼやエタノールアミ
ンオキシダーゼも、その起源に何ら限定されるものでは
なく、好ましくは微生物由来の酵素が使用でき、これら
種々の酵素については市販のものを使用することが簡便
である。
【００１３】本発明のカルシウムイオン測定用組成物に
はリン酸緩衝液、エタノールアミン緩衝液、ホウ酸緩衝
液、各種グツド緩衝液などあらゆる緩衝液が使用でき
る。緩衝液のpHは７〜８が好ましい。
はリン酸緩衝液、エタノールアミン緩衝液、ホウ酸緩衝
液、各種グツド緩衝液などあらゆる緩衝液が使用でき
る。緩衝液のpHは７〜８が好ましい。
【００１４】本発明のカルシウムイオン測定用組成物に
ついて例示すれば、リン脂質０．２〜５ｍＭ、ホスホリ
パーゼＡ2 １〜１０Ｕ／ml、リゾホスホリパーゼ０．５
〜５Ｕ／ml、グリセリルホスホリルコリンホスホジエス
テラーゼ０．０５〜１Ｕ／ml、グリセロリン酸オキシダ
ーゼ２〜２０Ｕ／ml、コリンオキシダーゼ２〜２０Ｕ／
ml、ペルオキシダーゼ１〜１０Ｕ／ml、４−アミノアン
チピリン０．０２％〜０．２％、フエノールまたはアニ
リン誘導体０．０２％〜０．２％を含有する。本発明の
カルシウムイオン測定用組成物には必要に応じて界面活
性剤、防腐剤、安定化剤等を含有するとよい。
ついて例示すれば、リン脂質０．２〜５ｍＭ、ホスホリ
パーゼＡ2 １〜１０Ｕ／ml、リゾホスホリパーゼ０．５
〜５Ｕ／ml、グリセリルホスホリルコリンホスホジエス
テラーゼ０．０５〜１Ｕ／ml、グリセロリン酸オキシダ
ーゼ２〜２０Ｕ／ml、コリンオキシダーゼ２〜２０Ｕ／
ml、ペルオキシダーゼ１〜１０Ｕ／ml、４−アミノアン
チピリン０．０２％〜０．２％、フエノールまたはアニ
リン誘導体０．０２％〜０．２％を含有する。本発明の
カルシウムイオン測定用組成物には必要に応じて界面活
性剤、防腐剤、安定化剤等を含有するとよい。
【００１５】試料中のカルシウムイオンを測定するに
は、緩衝液、リン脂質、ホスホリパーゼＡ2 およびリゾ
レシチン測定用試薬を含有する試薬に試料を添加して反
応を行わせ、その結果生成するリゾレシチンをリゾレシ
チン測定用試薬処理、いわゆる酵素法により生成する過
酸化水素を過酸化水素電極またはペルオキシダーゼを用
いて分光学的に測定すればよい。
は、緩衝液、リン脂質、ホスホリパーゼＡ2 およびリゾ
レシチン測定用試薬を含有する試薬に試料を添加して反
応を行わせ、その結果生成するリゾレシチンをリゾレシ
チン測定用試薬処理、いわゆる酵素法により生成する過
酸化水素を過酸化水素電極またはペルオキシダーゼを用
いて分光学的に測定すればよい。
【００１６】過酸化水素の測定は常法により行われ、そ
れは例えば特公平２−３１９６０号に記載されている。
試薬は２つ以上に分けて、適宜組み合わせてもよい。具
体的には、上記組成からなるカルシウムイオン測定用組
成物を含む反応液５００〜１０００μl に１０〜２０μ
l の血清検体を加え、３７℃で５〜１０分間反応を行
い、ペルオキシダーゼによる呈色反応の場合は、５００
〜５５０ｎｍにおける吸光度を測定すればよい。
れは例えば特公平２−３１９６０号に記載されている。
試薬は２つ以上に分けて、適宜組み合わせてもよい。具
体的には、上記組成からなるカルシウムイオン測定用組
成物を含む反応液５００〜１０００μl に１０〜２０μ
l の血清検体を加え、３７℃で５〜１０分間反応を行
い、ペルオキシダーゼによる呈色反応の場合は、５００
〜５５０ｎｍにおける吸光度を測定すればよい。
【００１７】本発明のカルシウムイオン測定用組成物
は、分析効率が良く、測定精度に優れ、良好な直線性を
もち、高濃度領域まで正確かつ簡便に測定できる。ま
た、本測定試薬は、臨床検査室でもよく使われている自
動分析機を用いての連続測定にも適応可能である。
は、分析効率が良く、測定精度に優れ、良好な直線性を
もち、高濃度領域まで正確かつ簡便に測定できる。ま
た、本測定試薬は、臨床検査室でもよく使われている自
動分析機を用いての連続測定にも適応可能である。
【００１８】
【実施例】次に、本発明を実施例により説明する。 実施例 １ 下記試薬を用いて下記測定法によりカルシウムイオン濃
度を測定した。
度を測定した。
【００１９】＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） １ ｍＭ ジオレオイルレシチン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
【００２０】＜試薬 ２＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） ０．０５ ％ ４−アミノアンチピリン
【００２１】＜測定方法＞塩化カルシウム（ＣａＣl2）
または塩化マグネシウム（ＭｇＣl2）を含有せしめた被
検液１０μl に上記試薬１を５００μl 加え、３７℃で
５分間反応した後、試薬２を加え、３７℃で５分間反応
させ、２％ＳＤＳ２５０μl を加え、反応を止めた後、
その吸光度を波長５００ｎｍで測定した。この結果を、
図２に示した。マグネシウムイオンでは殆ど反応性が認
められなかったが、カルシウムイオンに対して直線性の
良好な結果が得られた。
または塩化マグネシウム（ＭｇＣl2）を含有せしめた被
検液１０μl に上記試薬１を５００μl 加え、３７℃で
５分間反応した後、試薬２を加え、３７℃で５分間反応
させ、２％ＳＤＳ２５０μl を加え、反応を止めた後、
その吸光度を波長５００ｎｍで測定した。この結果を、
図２に示した。マグネシウムイオンでは殆ど反応性が認
められなかったが、カルシウムイオンに対して直線性の
良好な結果が得られた。
【００２２】実施例 ２ 被検液としてヒト血清を用いた。試薬、測定方法は実施
例１に同じ条件で測定を行った。尚、１ｍＭＣａＣl2を
標準液として血清カルシウム濃度を算出した。この結果
を、表１に示した。
例１に同じ条件で測定を行った。尚、１ｍＭＣａＣl2を
標準液として血清カルシウム濃度を算出した。この結果
を、表１に示した。
【００２３】
【表１】
【００２４】実施例 ３ ＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH７．
３） １ ｍＭ 卵黄ホスファチジルエタノールアミン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ １ Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール １０ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
３） １ ｍＭ 卵黄ホスファチジルエタノールアミン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ １ Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール １０ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
【００２５】＜試薬 ２＞ ０．０５Ｍ ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH７．３） ０．０５％ ４−アミノアンチピリン
【００２６】＜測定方法＞上記組成の試薬１の５００μ
l に被検液（０．５ｍＭＣａＣl2）１０μl を加え、３
７℃で５分間加温後、試薬２を５００μl 加え、５００
ｎｍの吸光度の増加を分光光度計で連続的に測定した。
この結果を、図３に示した。
l に被検液（０．５ｍＭＣａＣl2）１０μl を加え、３
７℃で５分間加温後、試薬２を５００μl 加え、５００
ｎｍの吸光度の増加を分光光度計で連続的に測定した。
この結果を、図３に示した。
【００２７】実施例 ４ 下記試薬を用いて下記測定法によりカルシウムイオン濃
度を測定した。 ＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） １ ｍＭ ジオレオイルレシチン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製） ６ Ｕ／ml コリンオキシダーゼ
度を測定した。 ＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） １ ｍＭ ジオレオイルレシチン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製） ６ Ｕ／ml コリンオキシダーゼ
【００２８】＜試薬 ２＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） ０．０５ ％ ４−アミノアンチピリン
【００２９】＜測定方法＞塩化カルシウムまたは塩化マ
グネシウムを含有せしめた被検液１０μl に上記試薬１
を５００μl 加え、３７℃で５分間反応した後、試薬２
を加え、３７℃で５分間反応させ、２％ＳＤＳ２５０μ
l 加え、反応を止めた後、その吸光度を波長５００ｎｍ
で測定した。この結果を、図４に示した。マグネシウム
イオンでは殆ど反応性が認められなかったが、カルシウ
ムイオンでは直線性の良好な結果が得られた。
グネシウムを含有せしめた被検液１０μl に上記試薬１
を５００μl 加え、３７℃で５分間反応した後、試薬２
を加え、３７℃で５分間反応させ、２％ＳＤＳ２５０μ
l 加え、反応を止めた後、その吸光度を波長５００ｎｍ
で測定した。この結果を、図４に示した。マグネシウム
イオンでは殆ど反応性が認められなかったが、カルシウ
ムイオンでは直線性の良好な結果が得られた。
【００３０】実施例 ５ 下記組成よりなるカルシウムイオン測定用組成物 ＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） １ ｍＭ ジオレオイルレシチン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
【００３１】＜試薬 ２＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） ０．０５ ％ ４−アミノアンチピリン
【００３２】実施例 ６ 下記組成よりなるカルシウムイオン測定用組成物 ＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH７．
３） １ ｍＭ 卵黄ホスファチジルエタノールアミン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール １０ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
３） １ ｍＭ 卵黄ホスファチジルエタノールアミン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール １０ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製）
【００３３】＜試薬 ２＞ ０．０５Ｍ ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH７．３） ０．０５％ ４−アミノアンチピリン
【００３４】実施例 ７ 下記組成よりなるカルシウムイオン測定用組成物。 ＜試薬 １＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） １ ｍＭ ジオレオイルレシチン ０．２ ％ トリトンＸ−１００ １ Ｕ／ml リゾホスホリパーゼ ０．１Ｕ／ml グリセリルホスホリルコリンホスホジエ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製） ６ Ｕ／ml コリンオキシダーゼ
ステラーゼ ５ Ｕ／ml グリセロリン酸オキシダーゼ ５ Ｕ／ml ペルオキシダーゼ ０．０５ ％ フエノール ５ Ｕ／ml ホスホリパーゼＡ2 （ストレプトマイセ
ス属由来、東洋醸造社製） ６ Ｕ／ml コリンオキシダーゼ
【００３５】＜試薬 ２＞ ０．０５ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（pH７．５） ０．０５ ％ ４−アミノアンチピリン
【図１】ストレプトマイセス由来酵素およびハチ毒由来
酵素の測定結果である。
酵素の測定結果である。
【図２】実施例１における試薬を用いた測定結果であ
る。
る。
【図３】実施例３における試薬を用いた測定結果であ
る。
る。
【図４】実施例４における試薬を用いた測定結果であ
る。
る。
Claims (6)
- 【請求項１】 リン脂質、ホスホリパーゼＡ2 およびリ
ゾレシチン測定用試薬を含有することを特徴とするカル
シウムイオン測定用組成物。 - 【請求項２】 ホスホリパーゼＡ2 が、ストレプトマイ
セス属由来のホスホリパーゼＡ2 である請求項１記載の
カルシウムイオン測定用組成物。 - 【請求項３】 リゾレシチン測定用試薬が、リゾホスホ
リパーゼ、グリセリルホスホリルコリンホスホジエステ
ラーゼおよびグリセロリン酸オキシダーゼを含有してな
る試薬である請求項１記載のカルシウムイオン測定用組
成物。 - 【請求項４】 リゾレシチン測定用試薬が、リゾホスホ
リパーゼ、グリセリルホスホリルコリンホスホジエステ
ラーゼおよびコリンオキシダーゼまたはエタノールアミ
ンオキシダーゼを含有してなる試薬である請求項１記載
のカルシウムイオン測定用組成物。 - 【請求項５】 リゾレシチン測定用試薬が、リゾホスホ
リパーゼ、グリセリルホスホリルコリンホスホジエステ
ラーゼ、グリセロリン酸オキシダーゼおよびコリンオキ
シダーゼ、必要に応じてエタノールアミンオキシダーゼ
を含有してなる試薬である請求項１記載のカルシウムイ
オン測定用組成物。 - 【請求項６】 過酸化水素指示薬組成物を含有してなる
請求項３ないし請求項５のいずれかの項記載のカルシウ
ムイオン測定用組成物。
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| JP34070291A JPH05168498A (ja) | 1991-12-24 | 1991-12-24 | カルシウムイオン測定用組成物 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34070291A JPH05168498A (ja) | 1991-12-24 | 1991-12-24 | カルシウムイオン測定用組成物 |
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|---|---|
| JPH05168498A true JPH05168498A (ja) | 1993-07-02 |
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ID=18339501
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|---|---|---|---|
| JP34070291A Withdrawn JPH05168498A (ja) | 1991-12-24 | 1991-12-24 | カルシウムイオン測定用組成物 |
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| WO (1) | WO1993013219A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007322336A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Mitsubishi Kagaku Iatron Inc | カルシウム測定試薬及び測定方法 |
| JP2014082990A (ja) * | 2012-10-24 | 2014-05-12 | Fukushima Univ | グリセロール−３−ホスホコリン（ｇｐｃ）などのグリセロール−３−ホスホジエステルに対して加水分解作用を有する酵素及びその製造方法 |
| JP2014113075A (ja) * | 2012-12-07 | 2014-06-26 | Fukushima Univ | グリセロール−３−ホスホエタノールアミン（ｇｐｅ）に対して加水分解作用を有する酵素及びその製造方法 |
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- 1991-12-24 JP JP34070291A patent/JPH05168498A/ja not_active Withdrawn
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1992
- 1992-12-22 WO PCT/JP1992/001680 patent/WO1993013219A1/ja active Application Filing
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