JPH05139957A - Fat emulsion containing phosphatidylserine as constituent component - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide the subject fat emulsion composed of a phospholipid containing a specific amount of phosphatidylserine, liable to be accumulated in lung, having excellent storage stability and affinity and useful as a drug carrier for an agent for pulmonary diseases. CONSTITUTION:The objective fat emulsion is composed of a phospholipid containing 5-100wt.% of phosphatidylserine based on total phospholipid and originated from vegetables such as soybean, rapeseed or linseed, originated from animals such as egg yolk or bovine brain and processed by hydrogenation, enzymatic exchange reaction or produced by chemical synthesis.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、医薬分野で利用される
素材を提供するものであり、さらに詳しくは薬剤キャリ
アーとしての脂肪乳剤に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention provides a material used in the field of medicine, and more particularly to a fat emulsion as a drug carrier.

【０００２】[0002]

【従来の技術】薬剤を生体内に投与する方法としては、
従来、薬剤そのものを直接に摂取させあるいは投与する
方法のほかに、各種のコーティング剤や混合剤で薬剤を
包含し投与する方法が採用されてきた。殊に後者の場合
は、必要な患部へ薬剤を集中的に投与し、同時に他の健
常部位への副作用を軽減するねらいから、ドラッグ・デ
リバリー・システム（ＤＤＳ）として種々の素材および
剤型が開発され、ターゲティング療法として活用されて
きた。2. Description of the Related Art As a method of administering a drug into a living body,
Conventionally, in addition to the method of directly ingesting or administering the drug itself, the method of including and administering the drug with various coating agents and mixtures has been adopted. Especially in the latter case, various materials and dosage forms have been developed as drug delivery systems (DDS) because the drug is intensively administered to the necessary affected area and at the same time side effects on other healthy areas are reduced. It has been used as a targeting therapy.

【０００３】脂肪乳剤は、かかるＤＤＳのキャリアー剤
の形態のひとつであり、とくに脂溶性薬剤の効果的な投
与方法として開発され、静注用脂肪乳剤の脂肪微粒子で
あるリピッドマイクロスフェアを薬剤キャリアーとして
利用したリポ化製剤などとして利用されている。A fat emulsion is one of the forms of a carrier agent for such DDS, and it has been particularly developed as an effective administration method for a fat-soluble drug. Lipid microspheres, which are fat fine particles of an intravenous fat emulsion, are used as a drug carrier. It is used as a lipophilic preparation.

【０００４】現在、一般的に使用されているリポ化製剤
は、大豆油に目的とする薬剤を溶解させ、これに乳化剤
としての卵黄レシチンを加えて乳化させたもので、水相
に脂肪微粒子が約２００nmの粒径で均一に分散している
水中油滴（ｏ／ｗ）型エマルションの乳化状態をとって
いる。ちなみに、卵黄レシチンは卵黄から精製されるリ
ン脂質であり、その一般組成はホスファチジルコリン６
８〜７３％、ホスファチジルエタノールアミン１３〜１
８％、リゾホスファチジルコリン３〜６％、リゾホスフ
ァチジルエタノールアミン２〜３％、ホスファチジルイ
ノシトール１％である（檜垣勇三、「フレグランスジャ
ーナル」第６０巻、第８１〜８４ページ、１９８３年、
フレグランスジャーナル社）。At present, a lipophilic preparation generally used is obtained by dissolving a target drug in soybean oil and adding egg yolk lecithin as an emulsifier to the emulsion to emulsify it. It is in the emulsified state of an oil-in-water (o / w) type emulsion that is uniformly dispersed with a particle size of about 200 nm. By the way, egg yolk lecithin is a phospholipid purified from egg yolk, and its general composition is phosphatidylcholine 6
8-73%, phosphatidylethanolamine 13-1
8%, lysophosphatidylcholine 3-6%, lysophosphatidylethanolamine 2-3%, and phosphatidylinositol 1% (Yuzo Higaki, "Fragrance Journal", Volume 60, pages 81-84, 1983,
Fragrance Journal).

【０００５】そして、かかるリポ化製剤の利用効果とし
ては、例えば平均粒子径が２００nmの脂肪微粒子をプロ
スタグランジンＥ１、ステロイド、非ステロイド性抗炎
症剤などの低分子薬剤のキャリヤーとして用いたリポ化
製剤が治療効果をあげているとの報告がある。また、こ
れらのリポ化製剤は、動脈硬化部、血管障害部、網内
系、骨髄、炎症部に集積する性質を持っていると言われ
る（五十嵐理慧、中川美弥子、水島裕、「炎症」第８巻
（３）、第２４３〜３４６ページ、１９８８年、日本炎
症学会）。[0005] The lipophilic preparation is useful as a lipophilic agent using, for example, fat particles having an average particle diameter of 200 nm as a carrier for low molecular weight drugs such as prostaglandin E1, steroids and nonsteroidal anti-inflammatory agents. It is reported that the drug product has a therapeutic effect. In addition, these lipophilic preparations are said to have the property of accumulating in arteriosclerosis, vascular lesions, reticuloendothelial system, bone marrow, and inflammation (Riki Igarashi, Miyako Nakagawa, Yu Mizushima, “Inflammation” No. 1). 8 (3), pp. 243-346, 1988, Japanese Society of Inflammation).

【０００６】しかしながら、かかるリポ化製剤ひいては
脂肪乳剤は、その本来の重要な機能である臓器組織ある
いは患部への集積性とその構成成分であるリン脂質の分
子種との相関性で検討された知見はほとんどなく、この
ため、現行のリポ化製剤をはじめとする脂肪乳剤では、
必要な臓器組織への薬剤投与効率が低い。[0006] However, such lipophilic preparations, and thus fat emulsions, were found to be examined in terms of their original important function, that is, their ability to accumulate in organ tissues or affected areas and their correlation with the molecular species of phospholipids, which are their constituents. There is almost no such thing, and for this reason, in the fat emulsions including the current lipoized preparation,
The efficiency of drug administration to necessary organ tissues is low.

【０００７】[0007]

【発明が解決しようとする課題】かかる現状に鑑み、本
発明者らは、脂肪乳剤およびリポ化製剤を構成するリン
脂質の分子種すなわち成分のちがいによる生体臓器・組
織への集積性を検討し、とくに肺臓に集積しやすいリン
脂質の分子種からなる脂肪乳剤を提供することを目的に
鋭意研究した結果、本発明を完成するに至った。In view of the present situation, the present inventors have examined the accumulation property in the living organs / tissues due to the difference in the molecular species, that is, the components of the phospholipids constituting the fat emulsion and the lipophilic preparation. The present invention has been completed as a result of intensive research aimed at providing a fat emulsion composed of a molecular species of phospholipid that is particularly likely to accumulate in the lung.

【０００８】[0008]

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、ホ
スファチジルセリンが全リン脂質の５〜１００重量％を
占めるリン脂質からなることを特徴とする、肺臓に集積
しやすい薬剤キャリアーとしての脂肪乳剤に関する。That is, the present invention is characterized in that phosphatidylserine is composed of a phospholipid which accounts for 5 to 100% by weight of the total phospholipid, and is a fat emulsion as a drug carrier which easily accumulates in the lungs. Regarding

【０００９】本発明でいうホスファチジルセリンとは、
アシルグリセロホスファチジルセリンと総称される範疇
に属するものをいい、分子中の極性基としてセリンをも
つリン脂質の１種であり、植物や動物等天然より得られ
るもの、酵素によりアシル基や塩基部分を交換させたも
の、さらに水素添加させたもの、化学合成により得られ
たものでも何ら制限を受けることなく使用できるが、天
然物由来のホスファチジルセリンやホスファチジルコリ
ン等にホスホリパーゼＤの塩基交換活性を利用してセリ
ンを導入したホスファジルセリンが入手しやすい。The phosphatidylserine referred to in the present invention is
Acylglycerophosphatidylserine belongs to the general category, which is a kind of phospholipid that has serine as a polar group in the molecule. It is obtained from nature such as plants and animals. Exchanged ones, hydrogenated ones, and ones obtained by chemical synthesis can be used without any limitation, but by utilizing the base exchange activity of phospholipase D for phosphatidylserine or phosphatidylcholine derived from natural products. Phosphadylserine containing serine is easily available.

【００１０】天然物由来のホスファチジルセリンは、通
常、主として動植物あるいは微生物等の細胞膜の構成成
分として存在するので、かかる細胞組織を常法によりホ
モジナイズして、分別、抽出等の方法で脂質成分を得、
さらにこれをアセトンなどの溶剤、シリカゲルなどの吸
着剤、超臨界条件下の液化ガス等で処理すれば混合リン
脂質の状態を経て、本発明で用いる程度の純度にまで濃
縮・精製することができる。また、ホスファチジルセリ
ンのアシル基部分は水素添加や、ホスホリパーゼを用い
た交換反応でアシル基の種類を変えることができる。ホ
スファチジルセリンは広く生物界に分布するが量的には
多くない。このため、ホスホリパーゼＤの塩基交換活性
を利用してセリンを導入したホファチジルセリンや、化
学合成によって調製されたホスファチジルセリンがむし
ろ入手しやすい。これらのホスファチジルセリンも同様
の手法で濃縮・精製することができる。天然物由来のホ
スファチジルセリンや合成材料としてのリン脂質は、大
豆、菜種、亜麻仁などの植物や卵黄、牛脳などの動物由
来または微生物から入手できる。Since phosphatidylserine derived from natural products usually exists mainly as a constituent component of cell membranes of animals and plants or microorganisms, such cell tissues are homogenized by a conventional method to obtain a lipid component by a method such as fractionation or extraction. ,
Furthermore, if this is treated with a solvent such as acetone, an adsorbent such as silica gel, a liquefied gas under supercritical conditions, etc., it can be concentrated and purified to the degree of purity used in the present invention through the state of mixed phospholipids. .. Further, the acyl group portion of phosphatidylserine can be changed in kind by hydrogenation or exchange reaction using phospholipase. Phosphatidylserine is widely distributed in the living kingdom but not in quantity. Therefore, phosphatidylserine having serine introduced by utilizing the base exchange activity of phospholipase D and phosphatidylserine prepared by chemical synthesis are rather easily available. These phosphatidylserines can be concentrated and purified by the same method. Phosphatidylserine derived from natural products and phospholipids as synthetic materials can be obtained from plants such as soybean, rapeseed and flaxseed, from animals such as egg yolk and cattle brain, or from microorganisms.

【００１１】本発明のホスファチジルセリンの純度は、
リン脂質のうち５〜１００重量％を占めることが必要で
ある。５重量％未満のホスファチジルセリンを含むリン
脂質で脂肪乳剤を調製すると、肺臓との親和性が減少
し、結果として本発明の目的とする肺臓への集積性が低
下する。The purity of the phosphatidylserine of the present invention is
It is necessary to make up 5 to 100% by weight of the phospholipid. When a fat emulsion is prepared with a phospholipid containing less than 5% by weight of phosphatidylserine, the affinity for the lung is reduced, and as a result, the accumulation in the lung, which is the object of the present invention, is reduced.

【００１２】本発明では、かかる純度のホスファチジル
セリンを含有するリン脂質を用いて、常法により脂肪乳
剤を調製すればよい。例えば、脂肪乳剤全体の約１０重
量％の大豆油、約１．２重量％のリン脂質を蒸留水とと
もにホモジナイザーで予備乳化させ、ついでフレンチプ
レス等で処理すると脂肪乳剤が得られる。必要に応じて
他の成分を添加してもよい。この脂肪乳剤の保存安定性
は４℃および４０℃に保存後、その粒子サイズを測定
し、また偏光顕微鏡下で観察することにより測定するこ
とができる。また、本発明の脂肪乳剤の臓器への分布、
癌細胞への取り込み状態は、例えば¹⁴Ｃをラベル化した
トリオレインを大豆油に混合し、これを上述の方法で脂
肪乳剤とし、これをin vitroの場合は癌細胞とともに培
養し、あるいはin vivo の場合は癌細胞を保有する実験
動物に対して静脈注射して経時的に臓器を摘出し、各臓
器に取り込まれた脂肪乳剤量をシンチレーションカウン
ター等で放射活性を測定することにより求めることがで
きる。In the present invention, a fat emulsion may be prepared by a conventional method using the phospholipid containing the phosphatidylserine having such a purity. For example, a soybean oil of about 10% by weight and a phospholipid of about 1.2% by weight of the whole fat emulsion are pre-emulsified with distilled water by a homogenizer and then treated with a French press or the like to obtain a fat emulsion. Other components may be added if necessary. The storage stability of this fat emulsion can be measured by measuring its particle size after storage at 4 ° C. and 40 ° C. and observing under a polarizing microscope. Further, the distribution of the fat emulsion of the present invention to organs,
The state of uptake into cancer cells can be determined, for example, by mixing ¹⁴ C-labeled triolein with soybean oil, and using this as a fat emulsion by the method described above. In the case of, the amount of the lipid emulsion taken up by each organ can be determined by intravenously injecting it into an experimental animal carrying cancer cells, removing the organs over time, and measuring the radioactivity with a scintillation counter or the like. ..

【００１３】[0013]

【実施例】【Example】

実施例１ 〔リン脂質の調製〕ホスホリパーゼＤにより卵黄レシチ
ンから塩基交換反応で得たホスファチジルセリンをシリ
カゲルカラムで精製し、溶出液を留去したところ、ホス
ファチジルセリン純度９６％純度の分画物が得られた。Example 1 [Preparation of phospholipid] Phosphatidylserine obtained from yolk lecithin by a base exchange reaction with phospholipase D was purified on a silica gel column and the eluate was distilled off to obtain a fraction having a phosphatidylserine purity of 96%. Was given.

【００１４】〔脂肪乳剤の調製〕大豆油１ｇとレシチン
１２０mgとをホモジナイザーで１２０００rpm.１５分間
攪拌したのち、グリセリン２５０mgと蒸留水９mlを加
え、さらにホモジナイザーで２００００rpm.２０分間攪
拌し予備乳化させる。予備乳化液をフレンチプレス（ア
ミンコ社製）で６３８psi.５回処理して脂肪乳剤を得
た。レシチン成分として卵黄レシチンを用いたものを対
照に、ホスファチジルセリン（卵黄由来９６％純度）を
用いたものをサンプルとして用いた。分布測定用の脂肪
乳剤は¹⁴Ｃをラベル化したトリオレイン（デュポン社
製）５０μCiを大豆油に混合して調製した。[Preparation of Fat Emulsion] 1 g of soybean oil and 120 mg of lecithin were stirred with a homogenizer at 12,000 rpm for 15 minutes, 250 mg of glycerin and 9 ml of distilled water were added, and further stirred with a homogenizer at 20000 rpm for 20 minutes to preliminarily emulsify. The pre-emulsion was treated with French Press (Aminco Co.) for 638 psi. 5 times to obtain a fat emulsion. A sample using egg yolk lecithin as a lecithin component was used as a control, and a sample using phosphatidylserine (96% purity derived from egg yolk) was used as a sample. A fat emulsion for distribution measurement was prepared by mixing 50 μCi of ¹⁴ C-labeled triolein (manufactured by DuPont) with soybean oil.

【００１５】得られた脂肪乳剤の粒径をコールターＮ４
カウンター（日科機社製）で測定したところ対照の脂肪
乳剤が２０１±３３nm、ホスファチジルセリンによる脂
肪乳剤が１８８±３２nmであった。この脂肪乳剤を４℃
６カ月、室温６か月および４０℃１か月間以上保存後、
粒径測定と乳化状態を肉視ならびに偏光顕微鏡下で観察
したが変化は認められず、良好な乳化状態を保ってい
た。The particle size of the resulting fat emulsion was measured by Coulter N4
When measured with a counter (manufactured by Nikkaki Co., Ltd.), the control fat emulsion was 201 ± 33 nm, and the phosphatidylserine fat emulsion was 188 ± 32 nm. This fat emulsion at 4 ° C
After 6 months, room temperature 6 months and 40 ℃ 1 month or more,
The particle size measurement and the emulsified state were observed visually and under a polarizing microscope, but no change was observed and the good emulsified state was maintained.

【００１６】〔in vitroでの癌細胞への取り込み〕ホス
ファチジセリンを用いた脂肪乳剤、対照の脂肪乳剤およ
び¹⁴Ｃをラベル化したトリオレイン０．１μCiを癌細胞
１０⁶ 個／mlと混合、３７℃・４時間インキュベート後
洗浄し、ソルエン３５０（パッカード社製）で可溶化
し、ハイオニックフロー（パッカード社製）を加えて、
シンチレーションカウンターを用いて放射活性として癌
細胞に取り込まれた脂肪乳剤量を測定した。[In Vitro Incorporation into Cancer Cells] A fat emulsion using phosphatidylserine, a control fat emulsion and 0.1 μCi of ¹⁴ C-labeled triolein were mixed with 10 ⁶ cancer cells / ml. After incubation at 37 ° C for 4 hours, washing, solubilization with Solen 350 (made by Packard), and addition of Hyonic Flow (made by Packard),
The amount of fat emulsion taken into the cancer cells as radioactivity was measured using a scintillation counter.

【００１７】その結果、表１に示すようにホスファチジ
ルセリンを用いた脂肪乳剤は対照の脂肪乳剤より約１．
７倍量癌細胞に取り込まれていた。As a result, as shown in Table 1, the fat emulsion using phosphatidylserine was about 1.
It was taken up by 7 times the amount of cancer cells.

【００１８】[0018]

【表１】 [Table 1]

【００１９】実施例２ 〔in vivo での臓器分布の測定〕マウス尾静脈より実施
例１で調製した各脂肪乳剤を２００μl （１μCi）ずつ
投与したのち、正確に１５分、３０分、１時間、２時
間、４時間および２４時間後に頸部動静脈より脱血死さ
せ、直ちに腹部を開き、生理食塩水を心臓より灌流さ
せ、各臓器を摘出した。ソルエン３５０（パッカード社
製）で可溶化、過酸化水素水で脱色させたのち、ハイオ
ニックフロー（パッカード社製）を加えてシンチレーシ
ョンカウンターを用いて放射活性として各臓器に取り込
まれた脂肪乳剤量を測定した。Example 2 [Measurement of Organ Distribution in Vivo] 200 μl (1 μCi) of each fat emulsion prepared in Example 1 was administered from the tail vein of a mouse, and then exactly 15 minutes, 30 minutes, 1 hour. After 2 hours, 4 hours, and 24 hours, the blood was killed by bleeding from the cervical arteries and veins, the abdomen was opened immediately, and physiological saline was perfused from the heart to remove each organ. After solubilizing with Solen 350 (made by Packard) and decolorized with hydrogen peroxide solution, Hyonic Flow (made by Packard) was added and the amount of fat emulsion taken into each organ as radioactivity was measured using a scintillation counter. It was measured.

【００２０】その結果、図１に示すようにホスファチジ
ルセリンを用いた脂肪乳剤は対照の脂肪乳剤より約５倍
量肺臓に集積した。As a result, as shown in FIG. 1, the fat emulsion using phosphatidylserine was accumulated in the lung in an amount about 5 times that of the control fat emulsion.

【００２１】[0021]

【発明の効果】本発明によれば、肺臓に選択的により多
く集積する脂肪乳剤が提供できる。さらに本発明により
製造された脂肪乳剤は、冷所あるいは室温で保存可能で
あり、使用時に注射用蒸留水、注射用生理食塩水、ある
いは注射用輸液等で分散して用いることができる。ま
た、粒子径も静脈投与する注射剤として何ら問題のない
大きさであり、従って静脈内投与注射剤としての条件を
十分に満足している。According to the present invention, it is possible to provide a fat emulsion that selectively accumulates more in the lung. Furthermore, the fat emulsion produced by the present invention can be stored in a cold place or room temperature, and can be used by dispersing with distilled water for injection, physiological saline for injection, infusion solution for injection or the like at the time of use. Further, the particle size is such that there is no problem as an injection for intravenous administration, and therefore the conditions for an injection for intravenous administration are sufficiently satisfied.

【００２２】本脂肪乳剤を用いれば、肺疾患の薬剤や肺
臓における抗悪性腫瘍剤、鎮咳去痰剤等の薬剤のリポ化
製剤としての作用を期待できる。The use of this fat emulsion can be expected to act as a lipophilic preparation for drugs such as lung diseases, anti-malignant tumor agents in the lungs, antitussive expectorants and the like.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】図１はマウスに本発明の組成物および対照組成
物を静脈内投与した場合の経時的な肺臓組織への組成物
の分布を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the distribution of the composition in lung tissue over time when a composition of the present invention and a control composition were intravenously administered to mice.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 辻 宏明 東京都世田谷区八幡山３丁目14番９号 (72)発明者 渡辺 洋一 神奈川県横浜市磯子区磯子６丁目35番22号 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued Front Page (72) Inventor Hiroaki Tsuji 3-14-9 Hachimanyama, Setagaya-ku, Tokyo (72) Inventor Yoichi Watanabe 6-35-22 Isogo, Isogo-ku, Yokohama-shi, Kanagawa

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 ホスファチジルセリンが全リン脂質の５
〜１００重量％を占めるリン脂質からなることを特徴と
する、肺臓に集中しやすい薬剤キャリヤーとしての脂肪
乳剤。1. Phosphatidylserine is one of all phospholipids.
A fat emulsion as a drug carrier, which is easy to concentrate in the lung, characterized by comprising phospholipids which occupy up to 100% by weight. 【請求項２】 リン脂質が大豆、菜種又は亜麻仁等植物
由来のリン脂質である請求項１記載の脂肪乳剤。2. The fat emulsion according to claim 1, wherein the phospholipid is a plant-derived phospholipid such as soybean, rapeseed or flaxseed. 【請求項３】 リン脂質が卵黄、牛脳等動物由来のリン
脂質である請求項１記載の脂肪乳剤。3. The fat emulsion according to claim 1, wherein the phospholipid is derived from an animal such as egg yolk or bovine brain. 【請求項４】 リン脂質が水素添加、酵素による交換反
応または化学合成により調製されたリン脂質である請求
項１、２及び３記載の脂肪乳剤。4. The fat emulsion according to claim 1, 2 or 3, wherein the phospholipid is a phospholipid prepared by hydrogenation, enzymatic exchange reaction or chemical synthesis.