JPH0459794A - Vip様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 - Google Patents
Vip様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途Info
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- JPH0459794A JPH0459794A JP2165739A JP16573990A JPH0459794A JP H0459794 A JPH0459794 A JP H0459794A JP 2165739 A JP2165739 A JP 2165739A JP 16573990 A JP16573990 A JP 16573990A JP H0459794 A JPH0459794 A JP H0459794A
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明はVIP様活性を有する新規なポリペプチド誘導
体及びその用途に係り、又その製造用原料をも対象とす
る。
体及びその用途に係り、又その製造用原料をも対象とす
る。
本発明によるVIP様活性を有するポリペプチド誘導体
は医薬品成分として、殊に喘息及びインポテンツの治療
に用いることができる。
は医薬品成分として、殊に喘息及びインポテンツの治療
に用いることができる。
(従来の技術)
VIP (Vasoactlve Intestl
nal Po1ypeptide) は為5aid
& Muttにより 1970年にブタ十二指腸から
セクレチンを抽出精製する段階における副分画から精製
された、28個のアミノ酸からなるペプチドホルモンで
ある。1974年にVIF’におけるアミノ酸の一次構
造が明らかになりセクレチン、グルカゴン等と類似して
いることから、VIPはグルカゴン−セクレチンファミ
リーに属するペプチドホルモンであるとされるに至って
いる。VIPは消化管以外に神経系にも汎く存在が認め
られており、その生理作用も多彩であって、強い血管拡
張・血圧降下作用、平滑筋弛緩作用、腸液分泌促進作用
、膵液・胆汁分泌促進作用、胃酸分泌抑制作用、グリコ
ーゲン分解促進作用、種々の下垂体ホルモン分泌促進作
用、更には生殖器の血流調節作用、気管支拡張作用等を
有することが明らかになっている。
nal Po1ypeptide) は為5aid
& Muttにより 1970年にブタ十二指腸から
セクレチンを抽出精製する段階における副分画から精製
された、28個のアミノ酸からなるペプチドホルモンで
ある。1974年にVIF’におけるアミノ酸の一次構
造が明らかになりセクレチン、グルカゴン等と類似して
いることから、VIPはグルカゴン−セクレチンファミ
リーに属するペプチドホルモンであるとされるに至って
いる。VIPは消化管以外に神経系にも汎く存在が認め
られており、その生理作用も多彩であって、強い血管拡
張・血圧降下作用、平滑筋弛緩作用、腸液分泌促進作用
、膵液・胆汁分泌促進作用、胃酸分泌抑制作用、グリコ
ーゲン分解促進作用、種々の下垂体ホルモン分泌促進作
用、更には生殖器の血流調節作用、気管支拡張作用等を
有することが明らかになっている。
これらの種々多様な薬理作用の内でも、VIPは気管支
並びに海綿体小柱における平滑筋弛緩作用を利用して喘
息やインポテンツの治療に用いる薬物として期待されて
いる。このVIPの構造的な特徴としては、C末端がア
ミド化されている点であり、これが生理活性の発現に重
要な役割を果たしている。゛ 一般的に、大腸菌を利用する現在汎用の技術によりポリ
ペプチドを調製する場合にC末端がアミド型のポリペプ
チドを得るためには、発現したポリペプチドを精製する
と共に、C末端アミド化酵素を用いて処理する等の特殊
な酵素処理が要求されている。しかしながら、この種の
酵素が高価であるのみならず、目的物質の収率も低く、
従ってこのような酵素処理を要件とする従来技術方法は
は工業化に適していると云えないのが実杖である。
並びに海綿体小柱における平滑筋弛緩作用を利用して喘
息やインポテンツの治療に用いる薬物として期待されて
いる。このVIPの構造的な特徴としては、C末端がア
ミド化されている点であり、これが生理活性の発現に重
要な役割を果たしている。゛ 一般的に、大腸菌を利用する現在汎用の技術によりポリ
ペプチドを調製する場合にC末端がアミド型のポリペプ
チドを得るためには、発現したポリペプチドを精製する
と共に、C末端アミド化酵素を用いて処理する等の特殊
な酵素処理が要求されている。しかしながら、この種の
酵素が高価であるのみならず、目的物質の収率も低く、
従ってこのような酵素処理を要件とする従来技術方法は
は工業化に適していると云えないのが実杖である。
尚、本発明が対象としているVIPとは直接的な関係を
有していないが、腸の螺動運動を促進するモチリン様生
理活性物質(モチリンアナログ)に関して、本発明者等
はC末端がホモセリン型のものであっても本来のモチリ
ンと同等又はそれ以上の活性を有していることを見い出
し、これを廉価に大量生産する方法を提案した(特願昭
64−286)。
有していないが、腸の螺動運動を促進するモチリン様生
理活性物質(モチリンアナログ)に関して、本発明者等
はC末端がホモセリン型のものであっても本来のモチリ
ンと同等又はそれ以上の活性を有していることを見い出
し、これを廉価に大量生産する方法を提案した(特願昭
64−286)。
更に、VIPの17位はメチオニンであるが、これをロ
イシン又はノルロイシンに変換したアミノ酸構造を宵す
るポリペプチドもVIPと同様な生理活性□を示すこと
が報告されており (特開昭62−246595)、1
7位のメチオニンが活性に及ぼす影響は殆どないものと
考えられている。
イシン又はノルロイシンに変換したアミノ酸構造を宵す
るポリペプチドもVIPと同様な生理活性□を示すこと
が報告されており (特開昭62−246595)、1
7位のメチオニンが活性に及ぼす影響は殆どないものと
考えられている。
(発明が解決しようとする課題及び発明の目的)慣用技
術によれば、VIPを得るには合成法又は生物試料から
の抽出に頼らざるを得す、廉価で大量に市場に供給する
ことは極めて困難であった。
術によれば、VIPを得るには合成法又は生物試料から
の抽出に頼らざるを得す、廉価で大量に市場に供給する
ことは極めて困難であった。
尚、バイオテクノロジーによる技術を用いても、既述の
ように、C末端のアミド化に特殊な技術を用いねばなら
ず、工業的に有利なVIPの製法をもたらすには至らな
かった。
ように、C末端のアミド化に特殊な技術を用いねばなら
ず、工業的に有利なVIPの製法をもたらすには至らな
かった。
本発明は従来技術における上記のような困難を踏まえて
なされたものであり、ブロムシアンによる切断によって
C末端にホモセリン(ホモセリンラクトンをも含む)を
有し且つVIP様構造を有するポリペプチドを先ず調製
し (生理活性型VIP様ポリペプチド調製用原料の合
成)、次いでこれに簡単な化学反応を施すことにより、
VIPと同程度の活性を有するVIP様ポリペプチド誘
導体(VIPアナログ)を提供することにある。
なされたものであり、ブロムシアンによる切断によって
C末端にホモセリン(ホモセリンラクトンをも含む)を
有し且つVIP様構造を有するポリペプチドを先ず調製
し (生理活性型VIP様ポリペプチド調製用原料の合
成)、次いでこれに簡単な化学反応を施すことにより、
VIPと同程度の活性を有するVIP様ポリペプチド誘
導体(VIPアナログ)を提供することにある。
本発明の附随的な、但し重要な目的は効率的にしかも廉
価に提供できる、上記のVIP様活性を有するポリペプ
チド誘導体を有効成分とする医薬品、殊に気管支拡張剤
及びインポテンン治療剤を提供することにある。
価に提供できる、上記のVIP様活性を有するポリペプ
チド誘導体を有効成分とする医薬品、殊に気管支拡張剤
及びインポテンン治療剤を提供することにある。
本発明の他の目的は、生理活性型VIP様ポリペプチド
誘導体の調製用原料として有用なポリペプチド誘導体を
提供することにある。
誘導体の調製用原料として有用なポリペプチド誘導体を
提供することにある。
(課題を解決し、目的を達成する手段及び作用)本発明
者等は鋭意検討を重ねた結果、醗酵法又は合成法により
得られ、且つ17位がメチオニン(Met)以外のアミ
ノ酸残基であるVIP様の構造を有するポリペプチドに
関して、ブロムシアンにより切断した後に得られるポリ
ペプチドはC末端がホモセリン(ホモセリンラクトンを
も含む)になっているが、このラクトン型のものには比
較的容易にアミドや脂肪族アミン等を通常の合成法によ
って結合せしめ得ることを見い出し且つこのようにして
得たポリペプチド誘導体が、C末端にアミド構造を有す
る本来のVIPと同等又はそれ以上の活性を有すること
を見い出し、これによって本発明を完成するに至った。
者等は鋭意検討を重ねた結果、醗酵法又は合成法により
得られ、且つ17位がメチオニン(Met)以外のアミ
ノ酸残基であるVIP様の構造を有するポリペプチドに
関して、ブロムシアンにより切断した後に得られるポリ
ペプチドはC末端がホモセリン(ホモセリンラクトンを
も含む)になっているが、このラクトン型のものには比
較的容易にアミドや脂肪族アミン等を通常の合成法によ
って結合せしめ得ることを見い出し且つこのようにして
得たポリペプチド誘導体が、C末端にアミド構造を有す
る本来のVIPと同等又はそれ以上の活性を有すること
を見い出し、これによって本発明を完成するに至った。
本発明によれば、既述の従来技術における課題は式(1
) %式% [式中XはNet以外のアミノ酸残基を意味し、Yはホ
モセリンのアミド化されているもの、ホモセリンラクト
ンに炭素数が20個以下の第一級脂肪酸アミンを反応さ
せたもの、又はC末端にホモセリンのアミド化されてい
るものを含む任意のポリペプチドを意味する] にて示され、VIP様活性を有するポリペプチド誘導体
にて解決されると共に、本発明による既述の主目的が達
成される。
) %式% [式中XはNet以外のアミノ酸残基を意味し、Yはホ
モセリンのアミド化されているもの、ホモセリンラクト
ンに炭素数が20個以下の第一級脂肪酸アミンを反応さ
せたもの、又はC末端にホモセリンのアミド化されてい
るものを含む任意のポリペプチドを意味する] にて示され、VIP様活性を有するポリペプチド誘導体
にて解決されると共に、本発明による既述の主目的が達
成される。
尚、上記の一般式(1)において、XがrMet以外の
アミノ酸残基」として定義されているのは、仮にMet
(メチオニン)であると、醗酵法で調製し、ブロムシ
アンにて処理する場合に当該Metの部位でも切断が生
じ、結果的にはVIP様の構造を有するポリペプチドが
得られないからである。
アミノ酸残基」として定義されているのは、仮にMet
(メチオニン)であると、醗酵法で調製し、ブロムシ
アンにて処理する場合に当該Metの部位でも切断が生
じ、結果的にはVIP様の構造を有するポリペプチドが
得られないからである。
上記の式(1)にて示される生理活性型VIP様ポリペ
プチド調製用の本発明によるポリペプチド誘導体は式(
I”) H1s−Ser−Asp−A 1a−va l −Ph
e−Thr−Asp−Asn−TyrThr−Arg−
Leu−Arg−Lys−Gln−X −Ala−Va
l−Lys−Lys−Tyr−Leu−Asn−Ser
−11e−Leu−Asn−Y’[式中XはNet以外
のアミノ酸残基を意味し、Y″はホモセリン(ホモセリ
ンラクトンをも含み、l1seで示される)を意味する
コにて示される。
プチド調製用の本発明によるポリペプチド誘導体は式(
I”) H1s−Ser−Asp−A 1a−va l −Ph
e−Thr−Asp−Asn−TyrThr−Arg−
Leu−Arg−Lys−Gln−X −Ala−Va
l−Lys−Lys−Tyr−Leu−Asn−Ser
−11e−Leu−Asn−Y’[式中XはNet以外
のアミノ酸残基を意味し、Y″はホモセリン(ホモセリ
ンラクトンをも含み、l1seで示される)を意味する
コにて示される。
(実施例等)
次に、製造例及び薬理活性試験例に関して本発明を更に
詳細に且つ具体的に説明する。
詳細に且つ具体的に説明する。
尚、以下においてはVIPの17位がロイシン(Leu
)に変換されたVIPアナログに関して説明するが醗酵
法を用いた場合、メチオニン (Net )以外のアミ
ノ酸残基であれば、同様にして他のVIPアナログを調
製し得ることに留意されたい。
)に変換されたVIPアナログに関して説明するが醗酵
法を用いた場合、メチオニン (Net )以外のアミ
ノ酸残基であれば、同様にして他のVIPアナログを調
製し得ることに留意されたい。
裂盗L
(1) VIP様ポリペプチドの合成
ペプチドの合成はアプライドバイオシステムズ社のペプ
チドシンセサイザー43OAにて行った。
チドシンセサイザー43OAにて行った。
先ず、以下に示されるアミノ酸配列を有するペプチドを
合成した。
合成した。
Hls−5er−Asp−Ala−Val−Phe−T
hr−Asp−Asn−Tyr−Thr−Arg−Le
u−Arg−Lys−Gln−Leu−A!a−Val
−Lys−Lys−Tyr−Leu−Asn−5er−
11e−Leu−Asn−Met−A la−Ser 合成したペプチドサンプルはウォーターズ社製のマイク
ロボンダスフェアのC−18カラム (19mmx 1
5cm)を用いHPLCにて精製した。
hr−Asp−Asn−Tyr−Thr−Arg−Le
u−Arg−Lys−Gln−Leu−A!a−Val
−Lys−Lys−Tyr−Leu−Asn−5er−
11e−Leu−Asn−Met−A la−Ser 合成したペプチドサンプルはウォーターズ社製のマイク
ロボンダスフェアのC−18カラム (19mmx 1
5cm)を用いHPLCにて精製した。
サンプル10mgを秤取した後、70%蟻酸溶液30m
1に溶解させ、ブロムシアン50mgを添加し、37°
Cで24時間反応させた。その後、蒸溜水200m1を
添加し凍結乾燥することによって蟻酸及ヒフロムシアン
を除去した。次いで、再度ウォーターズ社製のマイクロ
ボンダスフェアのC−18カラム (19mm x 1
5cm)を用い1(PLOにて以下の条件下で精製した
。
1に溶解させ、ブロムシアン50mgを添加し、37°
Cで24時間反応させた。その後、蒸溜水200m1を
添加し凍結乾燥することによって蟻酸及ヒフロムシアン
を除去した。次いで、再度ウォーターズ社製のマイクロ
ボンダスフェアのC−18カラム (19mm x 1
5cm)を用い1(PLOにて以下の条件下で精製した
。
溶出液二0.1%トリフルオロ酢酸中30%から60%
のアセトニトリルの直線勾配、30分間。
のアセトニトリルの直線勾配、30分間。
流速 : 7.Oml/min。
HPLCによるメインピーク部分を回収して凍結乾燥す
る。以上の過程を経ると、ペプチドサンプルのC末端は
、ホモセリン又はホモセリンラクトンとなる。
る。以上の過程を経ると、ペプチドサンプルのC末端は
、ホモセリン又はホモセリンラクトンとなる。
更に、酸処理(例えば、0.IN HCI中30″C1
3時rjJ)を施し凍結乾燥するこきにより、C末端の
70%以上をラクトン型に変換することができる。
3時rjJ)を施し凍結乾燥するこきにより、C末端の
70%以上をラクトン型に変換することができる。
このようにして形成されたラクトン型のものを■PLc
で分取し、凍結乾燥粉末をジメチルボルムアミド中に1
0%のアンモニアを含む溶液で室温下に24時間処理す
ることによりC末端がホモセリンアミド型のし一ロイシ
ンー17−VIPを調製することができる。このVIP
アナログの一部を採取し、アブライドバイオシステムズ
社のベプチドシークエンサーにて調べたところ、サンプ
ルはメチオニン(Net)の位置で正しく切断されてお
り、C末端はアミド化されていることが確認された。
で分取し、凍結乾燥粉末をジメチルボルムアミド中に1
0%のアンモニアを含む溶液で室温下に24時間処理す
ることによりC末端がホモセリンアミド型のし一ロイシ
ンー17−VIPを調製することができる。このVIP
アナログの一部を採取し、アブライドバイオシステムズ
社のベプチドシークエンサーにて調べたところ、サンプ
ルはメチオニン(Net)の位置で正しく切断されてお
り、C末端はアミド化されていることが確認された。
尚、ホモセリンラクトン型のし一ロイシンー17=VI
PにCH3(CH2)9NH2、CH3(CH2)I
s NL等の第一級脂肪族アミンをジメチルスルホキシ
ド中で反応させるとC末端に脂肪族アミンの付加したV
IPアナログを容易に得ることができる。
PにCH3(CH2)9NH2、CH3(CH2)I
s NL等の第一級脂肪族アミンをジメチルスルホキシ
ド中で反応させるとC末端に脂肪族アミンの付加したV
IPアナログを容易に得ることができる。
目El ” (気管支収縮抑制活性の測定)上
記の製造例で得られたVIPアナログを被験物質とし、
化学合成法により得られたVIPを対照物質として、モ
ルモット気管支を用いるマグヌス法[”Peptide
s”第6巻第597−11i01頁(1985年)コに
従い気管支収縮抑制活性を測定し、濃度10−6Mのヒ
スタミンが示す収縮活性を100%とし収縮阻害活性と
して比較した結果は、第1図に示される通りであった。
記の製造例で得られたVIPアナログを被験物質とし、
化学合成法により得られたVIPを対照物質として、モ
ルモット気管支を用いるマグヌス法[”Peptide
s”第6巻第597−11i01頁(1985年)コに
従い気管支収縮抑制活性を測定し、濃度10−6Mのヒ
スタミンが示す収縮活性を100%とし収縮阻害活性と
して比較した結果は、第1図に示される通りであった。
この図から明らかなように、本発明によるVIPアナロ
グであり、L−ロイシン17−VIPのC末端側にホモ
セリンアミド又は第一級脂肪族アミンを有するポリペプ
チド誘導体が示す気管支収縮抑制活性は化学合成された
純VIPと同程度であることが確認された。
グであり、L−ロイシン17−VIPのC末端側にホモ
セリンアミド又は第一級脂肪族アミンを有するポリペプ
チド誘導体が示す気管支収縮抑制活性は化学合成された
純VIPと同程度であることが確認された。
鼠■L
製造例で得たし一ロイシンー174’1P4se−NL
をlrng宛含有するようにバイアルに無菌的に分配シ
、凍結乾燥にて水分を除去し、次いでバイアルを密封す
ることにより注射目的用の粉末製剤を得た。
をlrng宛含有するようにバイアルに無菌的に分配シ
、凍結乾燥にて水分を除去し、次いでバイアルを密封す
ることにより注射目的用の粉末製剤を得た。
この粉末製剤は用時には生理食塩水に添加溶解される。
尚、本発明によるVIPアナログの安定化剤としてはヒ
ト血清アルブミン等を用いることができる。
ト血清アルブミン等を用いることができる。
(発明の効果)
本発明によるポリペプチド誘導体は、化学合成された純
1’IPと同程度の生理活性を示す。
1’IPと同程度の生理活性を示す。
本発明による生理活性型ポリペプチド誘導体の原料とな
り、C末端にホモセリン(ホモセリンラクトンをも含む
)を有するVIPアナログは、本発明者等が開発した方
法(特願平1−218034)を応用して大腸菌等によ
り産生させれば容易に且つ極めて廉価に得ることができ
る。
り、C末端にホモセリン(ホモセリンラクトンをも含む
)を有するVIPアナログは、本発明者等が開発した方
法(特願平1−218034)を応用して大腸菌等によ
り産生させれば容易に且つ極めて廉価に得ることができ
る。
本発明による生理活性型のVIPアナログは、この原料
を用いて、アンモニア又は第一級脂肪族7ミンを作用さ
せることにより容易に調製することができる。
を用いて、アンモニア又は第一級脂肪族7ミンを作用さ
せることにより容易に調製することができる。
従って、本発明によるVIPアナログの調製に際しては
、従来行なわれていた酵素処理が省略できるので、製造
コストが著しく低減し、収率も向上し、結果として生産
効率が高まり、VIP様生理活性物質の廉価な且つ大量
の供給が可能となる。
、従来行なわれていた酵素処理が省略できるので、製造
コストが著しく低減し、収率も向上し、結果として生産
効率が高まり、VIP様生理活性物質の廉価な且つ大量
の供給が可能となる。
第1図は本発明によるnP様活性を有するポリペプチド
誘導体を被験物質とし、化学合成法により調製された純
VIPを対照物質とし、これらの物質が示すモルモット
気管支収縮阻害活性をマグヌス法ニヨって測定した結果
を示すグラフである。 特許出願人 株式会社三和化学研究所 、−一11、 、− − 碌n月色 第1図 投与量(logM) −G−−: vrp
誘導体を被験物質とし、化学合成法により調製された純
VIPを対照物質とし、これらの物質が示すモルモット
気管支収縮阻害活性をマグヌス法ニヨって測定した結果
を示すグラフである。 特許出願人 株式会社三和化学研究所 、−一11、 、− − 碌n月色 第1図 投与量(logM) −G−−: vrp
Claims (4)
- (1)式( I ) 【遺伝子配列があります】 (式中XはMet以外のアミノ酸残基を意味し、Yはホ
モセリンのアミド化されているもの、ホモセリンラクト
ンに炭素数が20個以下の第一級脂肪族アミンを反応さ
せたもの、又はC末端にホモセリンのアミド化されてい
るものを含む任意のポリペプチドを意味する) にて示され、VIP様活性を有するポリペプチド誘導体
。 - (2)請求項1に記載のポリペプチド誘導体を有効成分
とする気管支拡張剤。 - (3)請求項1に記載のポリペプチド誘導体を有効成分
とするインポテンツ治療剤。 - (4)式( I ′) 【遺伝子配列があります】 [式中XはMet以外のアミノ酸残基を意味し、Y′は
ホモセリン(ホモセリンラクトンをも含み、Hseで示
される)を意味する] にて示されるポリペプチド誘導体。
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2165739A JPH0459794A (ja) | 1990-06-26 | 1990-06-26 | Vip様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 |
ES91109490T ES2063406T3 (es) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Procedimiento para la preparacion de analogos de polipeptido intestinal vasoactivo. |
EP91109490A EP0463450B1 (en) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Vasoactive intestinal polypeptide analogues and use thereof |
DK91109490.2T DK0463450T3 (da) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Vasoaktive intestinale polypeptid-analoger og udnyttelsen heraf |
DE69101187T DE69101187T2 (de) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | VIP-Analogen und ihre Verwendung. |
AT91109490T ATE101619T1 (de) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Vip-analogen und ihre verwendung. |
US08/201,092 US5428015A (en) | 1990-06-26 | 1994-02-24 | Vasoactive intestinal polypeptide analogues and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2165739A JPH0459794A (ja) | 1990-06-26 | 1990-06-26 | Vip様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0459794A true JPH0459794A (ja) | 1992-02-26 |
Family
ID=15818160
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2165739A Pending JPH0459794A (ja) | 1990-06-26 | 1990-06-26 | Vip様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0459794A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100721784B1 (ko) * | 2002-02-19 | 2007-05-25 | 마쯔시다덴기산교 가부시키가이샤 | 비데 장치 |
-
1990
- 1990-06-26 JP JP2165739A patent/JPH0459794A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100721784B1 (ko) * | 2002-02-19 | 2007-05-25 | 마쯔시다덴기산교 가부시키가이샤 | 비데 장치 |
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