JPH04370093A - 血栓溶解性物質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】この発明は、特定の菌株を培養し
て血栓溶解活性の高い物質を製造する方法に関するもの
である。 【０００２】 【従来の技術】従来から納豆は高血圧症に良く、心臓に
良い等、様々な点で健康性が唱えられている。須見らは
、納豆の中に血栓溶解酵素に類似する酵素が存在するこ
とを見出しこれをナットウキナーゼと命名した。また、
納豆を経口摂取すると線溶解活性が血中に移行し、長期
間にわたり安定に存在することを明らかにした［“化学
と生物”第２９巻，第２号，１１９頁，１９９１年］。 納豆の健康性はこのナットウキナーゼに起因していると
考えられている。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】一方、血栓の溶解は、
血栓症はもとより毛細血管の狭窄が原因となる痴呆症等
の疾病に効果があるといわれているが、血栓溶解効果を
高めるためには血栓溶解酵素の多量の摂取が必要とされ
る。 【０００４】納豆は日配食品であり、日常的に摂取され
るので納豆からナットウキナーゼを経口的に摂取し、血
中の血栓溶解活性を高める方法も考えられるが、一度に
食べる量は３０〜５０ｇと限られている。また、市販の
納豆の血栓溶解活性は弱いものであるため、納豆だけで
上述の効果を期待することは現実に不可能である。 【０００５】そこでこの発明は、納豆よりも血栓溶解活
性の高い物質を効率よく製造できる方法を提供すること
を目的としてなされたものである。 【０００６】 【課題を解決するための手段】本発明者等は、旨みと粘
性の高い納豆を製造するために菌株の探索や培養方法を
含めた納豆の製造方法を鋭意研究し、自然界より分離し
た菌株バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｓ
ｕｂｔｉｌｉｓ）ＮＮ−１を用いることにより高旨みで
高粘性の納豆が製造できることを見出し、既に特許出願
を行った（特願平２−５３４５９号）。そしてさらに研
究を重ねた結果、このバチルス・ズブチリスＮＮ−１菌
株を用いて得られた培養物が高い血栓溶解活性を示すこ
とを見出しこの発明を完成させたものである。 【０００７】すなわちこの発明による血栓溶解性物質の
製造方法は、バチルス・ズブチリスＮＮ−１菌株を穀類
または窒素源を含有する培地で培養し、血栓溶解性物質
を含む培養物を得ることを特徴とするものである。また
この培養物をそのまま血栓溶解性物質として利用するこ
ともできるが、必要に応じてこの培養物から液状または
粉状の抽出物を得ることもできる。 【０００８】この発明で使用するバチルス・ズブチリス
ＮＮ−１菌株は稲わらより分離された菌株であり、ＦＥ
ＲＭ　　Ｐ−１１３１９の寄託番号で通産省工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されている。その菌学的性
質は以下の通りである。 【０００９】 Ａ．形態学的性質 グラム染色　　　　　　陽性 大きさ　　　　　　　　　　０．８×２．０〜３．０μ
ｍ形　　態　　　　　　　　　　短桿菌 運動性　　　　　　　　　　あり 胞　　子　　　　　　　　　　菌体は膨らまない。 【００１０】 Ｂ．培養的性質 代用肉汁寒天培地上での生育 コロニーの形態　　　　　　周縁は不規則形であるが、
コロニー全体としては円形である。 コロニーの色　　　　　　　　白色 コロニーの光沢　　　　　　鈍光である。艶がない。 代用肉汁培地での生育 菌体の沈殿　　　　　　　　　　あり 中間部　　　　　　　　　　　　　　濁りはない菌　　
膜　　　　　　　　　　　　　　生成する。厚い。 【００１１】 Ｃ．生理的性質 カタラーゼ反応　　　　　　　　陽性 嫌気的条件下では生育しない。 フォーゲス・プロスカウエル試験　　　　　　陽性酸の
生成　　　　　　　　　　　　　　グルコース、マンニ
トールからは陽性。アラビノース、キシロースからは陰
性。 ガスの生成　　　　　　　　　　　　グルコースからは
陰性。 カゼインの加水分解　　　　陽性 ゼラチンの加水分解　　　　陽性 でんぷんの加水分解　　　　陽性 クエン酸資化性　　　　　　　　陽性 チロシン分解　　　　　　　　　　陰性卵黄のレシチナ
ーゼ反応　　　　陰性 硝酸塩の還元性　　　　　　　　陽性 食塩水での生育　　　　　　　　２，５，７％では生育
する。１０％では生育しない。 生育温度　　　　　　　　　　　　　　５，１０，３０
，４０，５０℃で生育する。５５，６５℃で生育しない
。 Ｄ．０．０１％リゾチーム存在下での生育　　　　陰性
。 【００１２】この発明を実施するに際しては、穀類や、
窒素源を含有する培地でバチルス・ズブチリスＮＮ−１
菌株を培養する。大豆、小麦、おから等の固体培地や、
豆乳、ブイヨン等の液体培地のいずれでも培養可能であ
る。培養ｐＨは６から８に調整することが望ましく、培
養温度は２０から４０℃に設定する。 【００１３】この菌株はプロテアーゼ生産能が高く、大
豆蛋白質の分解が旺盛でグルタミン酸等の遊離アミノ酸
量が多い。血栓の主成分であるフィブリンと大豆蛋白質
の会合体とは構造的に類似しているため、培地に大豆蛋
白質を共存させるとプロテアーゼの一種である血栓溶解
活性が誘導される。 【００１４】この発明により製造された高血栓溶解性物
質を含む培養物は、そのままで健康食品として利用する
ことができるが、培養物より抽出した液状物または粉状
物を利用することもできる。また、これらの液状物や粉
状物を日配食品、発酵食品、乳製品、飲料、菓子などに
添加または塗布したものを健康食品として利用すること
もできる。 【００１５】 【実施例】以下にこの発明の実施例および参考例を挙げ
てさらに説明する。なお、血栓溶解活性は以下のような
須見らの方法に従って測定した。すなわち、培養物に１
０倍量の生理的食塩水を加え、５℃で１０時間攪拌して
血栓溶解性物質を抽出した。この食塩水を３０００ｒｐ
ｍで５分間遠心分離して上澄清液を得た。リジン−セフ
ァロース処理した牛フィブリノーゲン（６７％凝固性）
の０．１％溶液１．０ｍｌ、トロンビン（５０　Ｕ／ｍ
ｌ　）０．１ｍｌ、およびホウ酸緩衝液（０．０５Ｍ、
ｐＨ７．８）１．２ｍｌの混合液中に、上記の上澄液５
０μｌ　を添加し、３７℃で保温しフィブリン化物の溶
解時間を求めた。なお、この溶解時間から血栓溶解活性
を求めるには検量線を用いた。すなわち、電気泳動的に
均一な精製血栓溶解酵素（１３４．７アミダーゼ単位／
ｍｇ　　蛋白質）をプラスミン用合成基質Ｈ−Ｄ−バリ
ン−ロイシン−リジン−パラニトロアニリドにｐＨ７．
８、温度３７℃で作用させたときに１分間で１μｇの基
質量を加水分解する酵素活性を１単位とし、この酵素活
性とフィブリン溶解時間との関係の検量線を作成し、こ
の検量線を用いて溶解時間に対応する血栓溶解活性を求
めた。 【００１６】実施例１ 北海道産トヨスズ大豆１ｋｇを１７℃の流水に１５時間
浸漬し、水切り後１２１℃で２０分間高温高圧蒸煮した
。 この蒸煮大豆にバチルス・ズブチリスＮＮ−１（ＦＥＲ
Ｍ　　Ｐ−１１３１９）の胞子懸濁液を１０３　／ｇ蒸
煮大豆となるように接種し、これを１００ｇごとに小型
の発泡スチロール容器に充填した。この容器ごと４０℃
の保温器に入れ、相対湿度９０％の条件で１８時間発酵
させた。発酵終了物に１０倍量の生理的食塩水を加え、
低温で血栓溶解性物質を攪拌抽出した後、３０００ｒｐ
ｍで５分間の遠心分離により上澄液を得た。得られた上
澄液の血栓溶解活性を求めた結果を表１に示す。 【００１７】なお、比較のために市販納豆菌を用いて上
記と同様にして発酵させ、発酵終了物からの上澄液を得
、上澄液の血栓溶解活性を求めた。結果を表１に併記す
る。この表からわかるように、バチルス・ズブチリスＮ
Ｎ−１菌株を用いて得られた血栓溶解性物質が、市販納
豆菌を用いて得られたものよりも著しく高い血栓溶解活
性を示していた。 【００１８】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　表　　
１　　　　　　使　　用　　菌　　株　　　　　　　　
血栓溶解活性（単位／ｇ蛋白質）　　　　　　Ｂ．ｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ　ＮＮ−１　　　　　　　　　　　　　１
１２．８　　　　　　市販納豆菌Ａ　　　　　　　　　
　　　　　　　　　２１．４　　　　　　市販納豆菌Ｂ
　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０．５　　　
　　　市販納豆菌Ｃ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２６．２　　　　　　　　　　　　　　【００１９
】実施例２ １リットル容の三角フラスコにブリックス１２の豆乳５
００ｍｌ（ｐＨ６．８）を入れ、１２１℃で１０分間オ
ートクレーブ殺菌をした。この豆乳にバチルス・ズブチ
リスＮＮ−１菌株の胞子懸濁液を１０３　／ｇになるよ
うに接種し、これを３８℃で２４時間発酵させた。３０
００ｒｐｍで５分間の遠心分離により上澄液を得、この
上澄液の血栓溶解活性を測定したところ１３０単位／ｇ
であった。 【００２０】上記の上澄液に硫酸アンモニウムを添加し
（８０％飽和）、冷所に放置したところ沈殿が得られた
。この沈殿物を回収し、透析処理し液体の食品素材を得
た。この液状物の血栓溶解活性を測定したところ８００
単位／ｇであった。 【００２１】実施例３ ５００ｍｌ容の坂口フラスコにブイヨン改良培地（ブイ
ヨン１．５ｇ、無機塩化合物０．１ｇ、豆乳３０ｍｌ、
水７０ｍｌ、ｐＨ６．８）を入れ、１２１℃で１０分間
オートクレーブ殺菌をした。この豆乳にバチルス・ズブ
チリスＮＮ−１菌株の胞子懸濁液を１０３　／ｇになる
ように接種し、これを３８℃で２４時間発酵させた。３
０００ｒｐｍで５分間の遠心分離により上澄液を得、こ
の上澄液に硫酸アンモニウムを添加し（８０％飽和）、
冷所に放置したところ沈殿が得られた。この沈殿物を回
収し、透析処理後、真空凍結乾燥することにより粉状の
食品素材を得た。この粉状物の血栓溶解活性を測定した
ところ１２００単位／ｇであった。 【００２２】参考例１ 実施例３で得られた粉状の食品素材５ｇ、脱脂粉乳１０
ｇ、小麦胚芽１０ｇ、ショ糖５ｇを混合したものを澱粉
可食カプセルに封入し、カプセル食品を得た。 【００２３】参考例２ 実施例３で得られた粉状の食品素材をプロセスチーズの
原料中に５〜１０％添加混合し、６０℃で溶解した後、
成形し、プロセスチーズを得た。 【００２４】参考例３ 実施例２で得られた液状の食品素材を常温で煎餅やビス
ケット類の表面に塗布した後、減圧下で乾燥し、血栓溶
解活性を付与した菓子類を得た。 【００２５】参考例４ 実施例２で得られた液状の食品素材にショ糖を１０％に
なるように溶解した。あらかじめ成形した喉飴に上記液
状食品素材を６０℃で噴霧乾燥し、糖衣を施した。これ
により、血栓溶解活性を付与した喉飴を得た。 【００２６】参考例５ 実施例２で得られた液状の食品素材をアイスクリームの
製造原料中に５％添加したところ、食感の変わらないア
イスクリームが得られた。 【００２７】 【発明の効果】以上の説明からわかるようにこの発明に
よれば、バチルス・ズブチリスＮＮ−１菌株を生育培地
で培養することにより、血栓溶解活性の高い培養物が得
られ、この培養物そのものを健康食品として利用するこ
とができる。また必要により、培養物から抽出して得ら
れた液状物や粉状物を健康食品として利用することもで
きる。 【００２８】かような液状物や粉状物を日配食品、発酵
食品、乳製品、飲料、菓子等の食品に添加または塗布し
た健康食品を食することによって、高血栓溶解性物質を
日常的に摂取できる効果がある。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】バチルス・ズブチリスＮＮ−１菌株を穀類
   または窒素源を含有する培地で培養し、血栓溶解性物質
   を含む培養物を得ることを特徴とする血栓溶解性物質の
   製造方法。
2. 【請求項２】前記の培養物から液状または粉状抽出物を
   得ることを特徴とする請求項１記載の血栓溶解性物質の
   製造方法。