JPH04273897A - トリペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬として有用なトリ
ペプチド誘導体に関し、更に詳しくはシステインプロテ
アーゼ、中でもカルシウム依存性中性プロテアーゼ（Ｃ
ＡＮＰ）の活性を特異的に阻害するトリペプチド誘導体
に関する。

【０００２】

【従来の技術】システインプロテアーゼの一種であるカ
ルシウム依存性中性プロテアーゼ（ＣＡＮＰ）およびカ
テプシンＢ、Ｌなどは、難病である筋ジストロフィー症
や空胞型ジスタールミオパチーなどの筋崩壊疾患の発症
に深く係わる物質であると考えられており、従って、こ
れらのシステインプロテアーゼの活性を阻害する物質は
、上記疾患の治療薬となり得るものと期待されている。 システインプロテアーゼの活性を阻害する化合物として
は、従来ロイペプチン〔Ｓｈｉｍｉｚｕ．Ｂら、Ｊ．Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５巻、５１５頁（１９７２）
．〕、Ｅ−６４ｃなどのトランスエポキシコハク酸誘導
体〔Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４２巻、５２
３頁（１９７８）．〕やトリペプチド誘導体１６５６Ｂ
（特開平１−２７９８９９号公報）が知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、医薬
として有用な優れたシステインプロテアーゼ阻害作用を
有する化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
に鑑み、トリペプチド化合物について鋭意研究した結果
、システインプロテアーゼの活性を強力に阻害するトリ
ペプチド誘導体を見いだし本発明を完成した。以下、本
発明を説明する。すなわち、本発明は、式（Ｉ）

【００
０５】

【化２】

【０００６】（式中、ｎは４〜６の整数を示す。）で表
されるトリペプチド誘導体である。式（Ｉ）で示される
本発明化合物は、例えば次のような方法で製造すること
ができる。

【０００７】

【化３】

【０００８】（反応式中、ｎは前記と同意義であり、Ｙ
はペプチド合成化学の分野で通常用いられるアミノ酸の
保護基の構成成分であり、例えば、第三級ブトキシ基あ
るいはベンジルオキシ基等を示す。）

【０００９】〔製造例〕工程■ 式（ＩＩ）で表される化合物と式（ＩＩＩ）で表される
化合物をクロロホルム、ジクロルメタン、酢酸エチル、
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、Ｎ，Ｎ’
−ジシクロヘキシルカルボジイミド法、混合酸無水物法
、活性エステル法などペプチド合成化学の分野で通常用
いられる方法および条件により縮合し式（ＩＶ）で表さ
れる化合物を得ることができる。

【００１０】工程■ 式（ＩＶ）で表される化合物を例えばジメチルスルホキ
シド中、トリエチルアミンの存在下、三酸化硫黄ピリジ
ン錯体を用いる方法および条件で酸化して式（Ｖ）で表
される化合物を得ることができる。

【００１１】工程■ 式（Ｖ）で表される化合物と式（ＶＩ）で表される化合
物をベンゼン、ジクロルメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミドなどの有機溶媒中、反応させることにより
式（ＶＩＩ）で表される化合物を得ることができる。

【００１２】工程■ 式（ＶＩＩ）で表される化合物をトリフルオロ酢酸、塩
酸−ジオキサン、塩酸−酢酸エチル、臭化水素酸−酢酸
などを用いた酸加水分解法あるいは、メタノール、エタ
ノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、
パラジウム炭素、パラジウム黒などの触媒を用いる接触
還元法またはカタリティックトランスファーハイドロゲ
ネーション（ＣＴＨ）法などペプチド合成化学の分野で
通常用いられる方法および条件によりアミノ基の保護基
を除去し式（ＶＩＩＩ）で表される化合物およびそのト
リフルオロ酢酸、塩酸あるいは臭化水素酸塩を得ること
ができる。これら式（Ｖ）の化合物の塩はトリエチルア
ミンなどの三級アミンあるいは炭酸水素ナトリウムなど
で処理することにより遊離の式（ＶＩＩＩ）で表される
化合物へと導くことができる。

【００１３】工程■ 式（ＶＩＩＩ）で表される化合物と式（ＩＸ）で表され
る化合物を工程■に記したと同様の方法および条件で縮
合させを式（Ｘ）で表される化合物を得ることができる
。

【００１４】工程■ 式（Ｘ）で表される化合物を工程■に記したと同様の方
法および条件でアミノ基の保護基を除去し、式（ＸＩ）
で表される化合物を得ることができる。

【００１５】工程■ 式（ＸＩ）で表される化合物と式（ＸＩＩ）で表される
化合物を工程■に記したと同様の方法および条件で縮合
させ式（ＸＩＩＩ）で表される化合物を得ることができ
る。

【００１６】工程■ 式（ＸＩＩＩ）で表される化合物を好ましくは約−９０
〜２０℃において、クロロホルム、ジクロルメタン、メ
タノール、エタノールまたは、これらの混合溶媒中、オ
ゾンと反応させ、ついでジメチルスルフィドのような緩
和な還元剤を加え中間体生成物であるオゾニドを分解す
る事により式（Ｉ）で表される化合物を得ることができ
る。

【００１７】

【発明の効果】以上の様にして得られた本発明化合物は
、ＣＡＮＰ、カテプシンＢなどのシステインプロテアー
ゼ、中でもＣＡＮＰの活性を特異的に強力に阻害した。

【００１８】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。なお、使用する略号は次の意味を表す。 Ｂｏｃ；第三級ブトキシカルボニル基、ｉｓｏ−Ｂｕ；
イソブチル基、Ｅｔ；エチル基、Ａｓｎ；アスパラギン
残基、Ｇｌｎ；グルタミン残基、Ｌｅｕ；ロイシン残基
、Ｎｐ；ｐ−ニトロフェニル基

【００１９】参考例１ Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−ｏｌの製造Ｂｏｃ−
Ｌ−Ｇｌｎ−ＯＮｐ　　１９．４ｇ（５２．８ミリモル
）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド　　５０ｍｌに溶か
し、氷冷攪拌下、Ｈ−Ｌ−Ｌｅｕ−ｏｌ６．１９ｇ（５
２．８ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド　　
５ｍｌ溶液を滴下した。氷冷下１時間、その後室温で一
夜攪拌した後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣に酢
酸エチルを加え室温で放置し析出した結晶を濾取し、酢
酸エチルで再結晶し無色針状晶の標題化合物を１４．９
ｇ得た。

【００２０】参考例２ Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの製造Ｂｏｃ−Ｌ
−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−ｏｌ　　１９．７ｇ（５７．０
ミリモル）およびトリエチルアミン　　４３．８ｍｌ（
３１４ミリモル）をジメチルスルホキシド６５ｍｌに溶
解し、氷冷攪拌下、三酸化硫黄ピリジン錯体　　５０．
０ｇ（３１４ミリモル）を加えた。氷冷下１０分間、そ
の後室温で１０分間激しく攪拌した後、反応液を氷水５
００ｍｌに注ぎ、酢酸エチルで５回抽出した。抽出液を
１０％クエン酸水溶液、水、飽和重曹水、水および飽和
食塩水の順で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウム
で乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧濃縮し得られた結晶を
酢酸エチル・ヘキサンより再結晶し無色針状晶の標題化
合物を１８．７ｇ得た。

【表２】

【００２１】参考例３ Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂｕ）Ｃ
Ｈ＝ＣＨＣＯ２Ｅｔの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈ　　１７．７ｇ（
５１．５ミリモル）および（トリフェニルホスホラニリ
デン）酢酸エチルエステル　　１９．７ｇ（５６．５ミ
リモル）のジクロルメタン　　２００ｍｌ溶液を室温で
一夜攪拌した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１
：４）に付し、ついでメタノール・水より再結晶し、無
色針状晶の標題化合物を１２．５ｇ得た。

【表３】

【００２２】参考例４ Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓ
ｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｅｔの製造Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇ
ｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ２
Ｅｔ１２．５ｇ（３０．２ミリモル）を４規定塩酸ジ−
オキサン溶液　　５０ｍｌに溶解し室温で１時間攪拌し
た後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド　　２５ｍｌに溶解し、氷冷攪拌下
、トリエチルアミン　　４．２３ｍｌ（３０．３ミリモ
ル）およびＢｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｐ　　１０．７ｇ
（３０．３ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
　　１０ｍｌ溶液を加えた。氷冷下１時間、その後室温
で一夜攪拌した後、反応液を減圧濃縮し残渣をクロロホ
ルムに溶かし１０％クエン酸水溶液、水、飽和重曹水、
水および飽和食塩水の順に洗浄した。有機層を無水硫酸
マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧濃縮し得
られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶
離液；クロロホルム：エタノール＝９：１）に付し、つ
いでメタノール・水より再結晶し無色粉末の標題化合物
を１１．８ｇ得た。

【表４】

【００２３】実施例１ （±）−ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−
Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの製造（１）
（±）−ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−
Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂｕ
）ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＥｔの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓ
ｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｅｔ　　１．００ｇ（１．
９０ミリモル）を４規定塩酸−ジオキサン溶液１０ｍｌ
に溶解し室温で１時間攪拌した後、溶媒を減圧留去した
。 得られた残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌ
に溶解し、氷冷攪拌下、トリエチルアミン０．２６ｍｌ
（１．９０ミリモル）および（±）−３−ヒドロキシオ
クタン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル　　４
８９ｍｇ（１．９０ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド１ｍｌ溶液を加えた。氷冷下、１時間その後、
室温で一夜攪拌した後、反応液を減圧濃縮し得られた粉
末を酢酸エチル、１０％クエン酸水溶液および水で洗浄
後、減圧乾燥して無色粉末の標題化合物を６３２ｍｇ得
た。

【表５】 （２）（±）−ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ（ＯＨ）２ＣＨ
　　ＣＯ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの
製造 （±）−ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ（ＯＨ）２ＣＨ　　Ｃ
Ｏ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−
Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｅｔ５７０ｍｇ（１．００ミリ
モル）のクロロホルム：メタノール（１：１）８０ｍｌ
溶液を約−５０℃に冷却し、オゾンを２０分間導通した
後、同温度で酸素を１０分間導通し、過剰のオゾンを除
去した。ついで同温度でジメチルスルフィド０．７３ｍ
ｌ（１０．０ミリモル）を加えて２時間攪拌しながら室
温に昇温した後、溶媒を減圧留去し得られた粉末を酢酸
エチルで洗浄し減圧乾燥して無色粉末の標題化合物を　
　５００ｍｇ得た。

【表６】

【００２４】実施例２ （±）−ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−
Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの製造実施例
１と同様にして、（±）−ＣＨ３（ＣＨ２）６ＣＨ（Ｏ
Ｈ）ＣＨ２ＣＯ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣ
Ｈ（ｉｓｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｅｔ　　５９８ｍ
ｇ（１．００ミリモル）　　のクロロホルム：メタノー
ル（１：１）８０ｍｌ溶液、オゾン（２０分間）および
ジメチルスルフィド０．７３ｍｌ（１０．０ミリモル）
よリ無色粉末の標題化合物を５２３ｍｇ得た。

【表７】

【００２５】以下に試験例を示す。下記の方法により、
ＣＡＮＰ、パパインおよびカテプシンＢに対する阻害活
性を測定し、その結果を表８に示した。 〔ＣＡＮＰ阻害活性測定法〕２５ｍＭ　　２−メルカプ
トエタノール、５ｍＭ塩化カルシウム、０．１Ｍグリセ
ロリン酸ナトリウム−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）、０．
２４％アルカリ変性カゼイン、１％ジメチルスルホキシ
ドおよび種々濃度の被験薬を含む反応液０．４５ｍｌを
３０℃で５分間プレインキュベートした後、５μｇのμ
ＣＡＮＰ（５０μｌ）（カルパインｌ、ナカライテスク
製）を加えて反応を開始し、正確に３０℃で２０分間イ
ンキュベートした後、１０％トリクロロ酢酸０．５ｍｌ
を加えて反応を停止させた。室温で６０分間放置した後
３０００×ｇで５分間遠心分離し、上清の２８０ｎｍに
おける吸光度を測定した。１０％トリクロロ酢酸を、μ
ＣＡＮＰを加える前に添加して同様に測定したブランク
値を差し引き、残存活性を求めた。被験薬を加えないで
同様に測定した値を用いて算出した阻害率より５０％阻
害に必要な被験薬の濃度を算出し、ＩＣ５０値として示
した。

【００２６】〔パパイン阻害活性測定法〕２．５ｍＭ　
　２−メルカプトエタノール、１ｍＭエチレンジアミン
四酢酸ニナトリウム、０．１Ｍ　　リン酸ナトリウム−
カリウム緩衝液（ｐＨ６．８）、０．１％ブリッジ−３
５（ナカライテスク製）、１％ジメチルスルホキシドお
よび種々濃度の被験薬を含む反応液０．９５ｍｌに４０
０ｎＭのパパイン溶液（シグマ社製）２５μｌを加え、
４０℃で３分間インキュベートした後、２００μＭベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ア
ルギニン　　４−メチルクマリール−７−アミド（ペプ
チド研究所製）を２５μｌ加え反応を開始し、４０℃で
１０分間インキュベートした後、１００ｍＭクロロ酢酸
ナトリウムを含む１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ４．３）１ｍｌを加えて反応を停止させた。遊離した
４−メチル−７−アミノクマリンの蛍光を島津蛍光光度
計ＲＦ−５０００を用いて励起波長３８０ｎｍ、蛍光波
長４４０ｎｍで測定した。　　被験薬を加えないで同様
に測定した値を用いて算出した阻害率より５０％阻害に
必要な被験薬の濃度を算出しＩＣ５０値として示した。

【００２７】〔カテプシンＢ阻害活性測定法〕２．５ｍ
Ｍ　　２−メルカプトエタノール、１ｍＭエチレンジア
ミン四酢酸二ナトリウム、０．１Ｍリン酸ナトリウム−
カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）、０．１％ブリッジ−３
５（ナカライテスク製）、１％ジメチルスルホキシドお
よび種々濃度の被験薬を含む反応液０．９５ｍｌに２０
０ｎＭのカテプシンＢ溶液（シグマ社製）２５μｌを加
え、４０℃で３分間インキュベートした後、２００μＭ
ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ
−アルギニン　　４−メチルクマリール−７−アミド（
ペプチド研究所製）を２５μｌ加え反応を開始し、４０
℃で１０分間インキュベートした後、１００ｍＭクロロ
酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ４．３）１ｍｌを加えて反応を停止させた。遊離
した４−メチル−７−アミノクマリンの蛍光を島津蛍光
光度計ＲＦ−５０００を用いて励起波長３８０ｎｍ、蛍
光波長４４０ｎｍで測定した。被験薬を加えないで同様
に測定した値を用いて算出した阻害率より５０％阻害に
必要な被験薬の濃度を算出しＩＣ５０値として示した。

【００２８】

【表８】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式 【化１】 （式中、ｎは４〜６の整数を示す。）で表されるトリペ
   プチド誘導体。