JPH04271787A - Ｄ−乳酸の製造法及びシュードモナス属細菌 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、シュードモナス　（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌を培養して、１，２−プ
ロパンジオールから高選択率でＤ−乳酸を製造する方法
、及びこれに用いる新規なシュードモナス・ＳＰ．Ｔ−
１３５菌株に関する。 【０００２】近年、Ｄ−乳酸は医農薬の分野において需
要が高まってきている。本発明によれば、高選択率でＤ
−乳酸を安価に製造することができる。 【０００３】 【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】１，２
−プロパンジオールからの乳酸の生成に関しては、バク
テリウム・テルモ（Ｂａｃｔｅｒｉｕｎ　ｔｅｒｍｏ）
　による生成（Ｌｅ　Ｂｅｌｓ　Ｃｏｍｐｔ．　ｒｅｎ
ｄ．，９２，５３２（１８８１））　、酵母による生成
（石井ら．農芸化学会誌、３３，８８９（１９５９））
土壌細菌による生成（福井ら．Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．　
Ｔｅｃｈｎｏｌ．，５３，３５４（１９７５））が報告
されているが、これらはいずれも定性的な報告であり、
生成量についての記載はない。 【０００４】また発酵生産的見地からは、アースロバク
ター・オキシダンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｏｘｙ
ｄａｎｓ）　による生成（八木ら、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
３３，１５８７（１９６９）；同誌４３，５７１（１９
７９））が報告されているが、生成乳酸の光学活性（Ｄ
体又はＬ体）に関する記載はない。 【０００５】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、シュード
モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物を
利用するＤ−乳酸の製造について鋭意研究を重ねた。そ
の結果、１，２−プロパンジオールからＤ−乳酸生成能
を有する新細菌を見い出し、これを利用することにより
高選択率でＤ−乳酸を製造し得ることを見出し、本発明
を完成した。 【０００６】本発明は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ）属に属するＤ−乳酸生成能を有する細菌を
、１，２−プロパンジオールを含有する培地に培養し、
該培養物からＤ−乳酸を採取することを特徴とするＤ−
乳酸の製造法である。 【０００７】本発明に用いられる微生物としては、シュ
ードモナス属に属し、１，２−プロパンジオールからＤ
−乳酸生成能を有するものであれば特に制限はないが、
特にシュードモナス・ＳＰ．ＴＢ−１３５菌株が挙げら
れる。 【０００８】シュードモナス・ＳＰ．ＴＢ−１３５菌株
の菌学的性質及び分類学的性質は以下のとおりである。 【０００９】Ｉ．顕微鏡的性質 ａ）細胞の形及び大きさ：桿菌、０．７〜０．８×２〜
３μｍ ｂ）運動性：有り、極鞭毛１本 ｃ）胞子形成：無し ｄ）グラム染色：陰性 【００１０】ＩＩ．培養的性質 ａ）肉汁寒天培地：生育良好 ｂ）ポテト・グルコース寒天培地：生育良好ｃ）ＹＭ培
地：生育良好 【００１１】ＩＩＩ．生理学的性質 ａ）酸素要求性：好気性 ｂ）色素の生成：− ｃ）オキシダーゼ：＋ ｄ）カタラーゼ：＋ ｅ）ＶＰテスト：− ｆ）ＯＦテスト：酸化 ｇ）ＭＲテスト：− ｈ）硝酸塩の還元：＋ ｉ）ゼラチンの液化：− ｊ）デンプンの分解：＋ ｋ）インドールの生成：− ｌ）炭素源の資化性 グルコース、ジェラニオール、β−アラニン及びＤＬ−
アルギニンを資化し、トレハロース、２−ケトグルコン
酸、ｍｅｓｏ−イノシトール及びＬ−バリンを資化しな
い。 【００１２】ＩＶ．　化学分類的性質 ａ）ＤＮＡ中グアニン・シトシン（ＧＣ）含量：６７．
８ｍｏｌ　％ ｂ）脂肪酸組成：直鎖型 ｃ）キノン型：Ｑ９ ｄ）３−ヒドロキシ酸：Ｃ１０，Ｃ１２　　【００１３
】以上の諸性質を「バージェイズ・マニュアル・オブ・
システマティク・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）」第２巻（１９８６年）より検索
した。その結果、本菌はシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ）属に属する菌株であると同定されたが、
種については炭素源の資化性等が既知の種と異なる点が
あり、新種と考えられた。従って、本発明においてはシ
ュードモナス・ＳＰ．ＴＢ−１３５と命名した。本菌株
は工業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号「
微工研菌寄第１１９６４号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１９６４
）」として寄託されている。 【００１４】上記の微生物を培養するための培地として
は、炭素源として少なくとも１，２−プロパンジオール
が含まれていればよく、その濃度は例えば培養の開始時
に０．０１〜２０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０５〜
１０％（Ｗ／Ｖ）程度である。窒素源としては塩化アン
モニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、アン
モニアのような無機窒素源、ペプトン、肉エキス、コー
ンスティープリカー、カザミノ酸のような有機窒素源等
を；無機物としてリン酸カリウム、リン酸一水素カリウ
ム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第
二鉄等を；また必要に応じて各種ビタミン等の栄養素を
含有した培地が好適に使用される。 【００１５】培養は通気撹拌、振盪等の好気的条件下で
行い、培養温度は通常２０〜４０℃、好ましくは２５〜
３５℃である。培養途中のｐＨは通常５〜１０、好まし
くは６〜８付近であり、培養中のｐＨの調整には酸、ア
ルカリを添加して行うことができる。培養期間は通常１
〜７日間、好ましくは２〜５日間である。 【００１６】上述の本発明に用いる各微生物は、各酵素
活性を向上させた変異、遺伝子組み換え、細胞融合など
の手法により得られた微生物であってもよい。 【００１７】この培養物からＤ−乳酸を分離・精製する
には、それ自体既知の方法、例えばイオン交換樹脂処理
法等により行うことができる。 【００１８】 【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、これらの実施例は本発明の範囲を何ら制限する
ものではない。 【００１９】実施例１ 下記培地組成Ａの培地５０ｍｌを５００ｍｌ容三角フラ
スコに分注して、１２０℃、１５分間滅菌処理したもの
に、シュードモナス・ＳＰ・ＴＢ−１３５菌株を一白金
耳量接種し、３０℃で２日間振盪培養（前培養とする）
後、上記を同じ培地組成Ａの培地５０ｍｌを５００ｍｌ
容三角フラスコに分注して１２０℃で１５分間滅菌処理
したものに、上記前培養物２ｍｌを接種して、更に３０
℃で５日間振盪培養した。 【００２０】上記培養液を硫酸酸性（ｐＨ２．０）に調
整後、遠心分離で菌体を分離した上清液について、生成
乳酸量をＨＰＬＣ（　バイオラッド、ＨＰＸ８７Ｈカラ
ム）により測定し、Ｄ−乳酸をＤ−乳酸脱水素酵素を用
いる酵素法で測定した。この結果、培養４日目で２１ｇ
／ｌ　の乳酸が生成し、１００％Ｄ−体であることが確
認された。原料１，２−プロパンジオールの（Ｒ）−（
−）体に対するモル収率は９０％であった。 【００２１】 培地組成Ａ 　　１，２−プロパンジオール　　　　　　　　　　　
　　　４．０　　％（Ｗ／Ｖ）　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　ＫＨ２　ＰＯ４　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２％　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｋ２　Ｈ
ＰＯ４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　０．８４％　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ＮＨ４　ＮＯ３　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２　　％　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｍｇ
ＳＯ４　７Ｈ２　Ｏ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　０．０１％　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　酵母エキス　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０．２　　％　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＣａＣＯ
３　＊　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　２．０　　％　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　（ｐＨ　　８．０）　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　＊別に殺菌して添加　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　【００２２】 【発明の効果】本発明によれば、１，２−プロパンジオ
ールから高選択率でＤ−乳酸を製造することができる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　シュードモナス属に属するＤ−乳酸生
   成菌を、１，２−プロパンジオールを含有する培地に培
   養し、該培養物からＤ−乳酸を採取することを特徴とす
   るＤ−乳酸の製造法。
2. 【請求項２】　　　　１，２−プロパンジオールからＤ
   −乳酸生成能を有するシュードモナス・ＳＰ・ＴＢ−１
   ３５菌株。