JPH04256441A - β２−ミクログロブリン用吸着剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、β２　−ミクログロブ
リンの吸着剤に関するものであり、更に詳しくは、血液
中または血しょう中より、β２　−ミクログロブリンを
除去する為の吸着剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】β２　−ミクログロブリンは、全アミノ
酸配列の分析により、免疫グロブリンのＣドメインと類
似の、分子量約１２０００の糖鎖を持たない単純タンパ
クであることが分かっている。ところで、長期間にわた
って血液透析を行っている患者では、血液中の遊離のβ
２　−ミクログロブリン濃度が健常者の１０〜１００倍
にも増大しており、透析患者に高率で発生する手根管症
候群（アミロイドーシス）は、このβ２　−ミクログロ
ブリンが原因物質と考えられている。従来より血液ある
いは血しょう中よりβ２　−ミクログロブリンを除去し
ようとする試みがなされているが、未だ実用に耐え得る
ような除去方法は見いだされていない。例えば、透析膜
による分離ではβ２　−ミクログロブリン以外の有用タ
ンパク質も除去されたり、除去量が少ないなどの欠点を
有している。

【０００３】また、不活性担体に抗β２　−ミクログロ
ブリン抗体を担持させた例（特開昭６２−８７１５９７
号）があるが、抗体の生産クローニング等の吸着剤の調
製に時間とコストがかかり、大量使用には不向きである
。

【０００４】また、各種多孔質担体に疎水性の強いリガ
ンドを結合させて吸着させる例（特開昭６３−９９８７
５号、同６２−２４００６８号）では、その強疎水性故
にβ２　−ミクログロブリン吸着量は大きいが、実際の
血液あるいは血しょう中に大量に存在する他のタンパク
（特に疎水性の強いタンパク、例えば免疫グロブリン等
）、脂質等まで吸着してしまう。そのため実際の血液ま
たは血しょう中ではβ２　−ミクログロブリンの吸着量
と吸着速度が小さくなるので使用は困難と考えられる。 更にこれらの従来技術で開示されている担体の孔径、２
０〜２０００オングストロームの範囲では他のタンパク
とのサイズ上の選択は困難と考えられる。また、従来技
術の吸着剤は生体適合性がなく、そのまま実際の血液、
血しょうに適用するには血液適合性の面で問題が残され
ている。

【０００５】

【発明の解決しようとする課題】本発明の吸着剤は、従
来の吸着剤の欠点を克服し、血液または血しょう中より
β２　−ミクログロブリンを選択的に吸着除去し得る吸
着剤を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来より
β２　−ミクログロブリンが拡散でき、しかも血液中の
その他の多量に存在するタンパク質（アルブミン、グロ
ブリン）が拡散しにくい細孔径がデキストランの分子量
にして１万から５万の範囲にあることを見いだしていた
。

【０００７】また、β２　−ミクログロブリンは塩基性
のドメインを有しカルボキシル基、スルホン酸基等の酸
性基と電気的な相互作用をとり得ることまた、β２　−
ミクログロブリンを構成するアミノ酸のうち、中性アミ
ノ酸の側鎖の疎水基が吸着剤の疎水基と相互作用するこ
とを見いだし、酸性基と疎水性基の双方を有する吸着剤
で相乗的な効果が現れることが見いだし本発明を完成す
るに至った。即ち、本発明は、吸着のための官能基とし
て疎水基とカルボキシル基の双方を有することを特徴と
するポリアミノ酸多孔質体からなるβ２　−ミクログロ
ブリン用吸着剤を提供するものである。好適にはその細
孔径がデキストランの分子量にして１万から５万である
。本発明における疎水基とはメチル基、エチル基、プロ
ピル基、ヘキシル基、等のアルキル基、フェニル基、ナ
フチル基等の芳香族疎水基をいう。

【０００８】本発明におけるポリアミノ酸とは、グルタ
ミン酸、アスパラギン酸及びこれらのアミノ酸の疎水性
エステル誘導体の１種または２種以上を重合したもので
あり、これらのアミノ酸またはアミノ酸誘導体を含むも
のであれば他のアミノ酸との共重合体でもよい。共重合
できるアミノ酸としては、アラニン、グリシン、オキシ
プロリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、セリン
、スレオニン、バリン及びこれらの誘導体などを挙げる
ことができる。これは１種でも、又は２種以上使用して
もよい。

【０００９】ポリアミノ酸多孔質体とは、前述のポリア
ミノ酸自身を多孔質膜化しても良いし、多孔質繊維化し
たものでも良いし、多孔質ビーズ化したものでもよい。 また、各種担体上にコーティングまたは、化学結合させ
た後多孔質化しても良いし、多孔質担体上にコーティン
グまたは化学結合させてもよい。これらに用いられる担
体は、ガラス、金属塩類、炭素等の無機物質でも良いし
、ポリマー等の有機物質であってもよい。また、これら
の担体の形状も、粉状、ビーズ状、膜状、繊維状、中空
糸状、等いろいろな形状のものが利用できるが、吸着カ
ラム、吸着カートリッジ等のモジュールに合わせて選ぶ
ことが出来る。

【００１０】化学結合させる方法は、担体の官能基を利
用して適当な結合試薬を用いて結合させる方法、例えば
、アミノプロピルシリカゲルに、トルエンジイソシアネ
ートまたはテレフタル酸クロリド等の二官能試薬を反応
させ、疎水基とカルボキシル基の両方を有する該ポリア
ミノ酸のアミノ基、カルボキシル基、水酸基等を結合さ
せる方法が挙げられる。ポリアミノ酸自身を多孔質化す
る方法としては、例えば該ポリアミノ酸を適当な溶剤を
溶解し、これと非相溶性の媒体中で分散して、ポリアミ
ノ酸の溶媒を蒸発除去し、析出させる方法（特開昭６２
−１７２８号）や、重合する前のアミノ酸ＮＣＡ（Ｎ−
カルボキシ−α−アミノ酸無水物）をこれと相溶性であ
るが、重合すると非相溶性になる媒体中で重合を行わせ
る方法がある。前者の方法では、ポリアミノ酸の貧溶媒
を添加しておき、析出させた後、これを抽出等の方法で
除去して多孔質化を行うことができ、貧溶媒の種類、添
加量によって細孔径を制御することができる。

【００１１】後者の方法は、基本的には、どの様なアミ
ノ酸、アミノ酸誘導体の組合せでも良いが、細孔径の制
御は溶媒の種類、重合温度、重合触媒、重合時間をうま
く組み合わせて行うことが必要である。これらの方法で
得られる多孔質体の大きさは、任意に変えられるが、実
際に血液または血しょうを通液してβ２　−ミクログロ
ブリンを除去する場合、吸着カラム、吸着カートリッジ
等のモジュールに合わせて選ぶことが出来る。

【００１２】本発明における多孔質体の細孔径はデキス
トランの分子量換算で１万から５万の範囲であることが
好ましい。多孔質体の細孔径はデキストラン標準分子量
物質によるゲルパーミエーションクロマトグラフィー（
ＧＰＣ）によって評価できる。

【００１３】すなわち、ポリアミノ酸を構成成分として
含有してなる多孔質体を適当な方法でふるい分け、液体
クロマトグラフィー用のステンレスカラムに充填する。 孔径評価用のビーズは１００μｍ以下のもので、できる
だけ均一サイズが好ましい。ステンレスカラムのサイズ
は、通常市販されている（例えば日本精密（株）社製４
．６ｍｍφ＊１５０ｍｍ）カラムで充分である。ＧＰＣ
測定を行う標準分子量物質は、できるだけ該多孔質体と
の相互作用が無いものが好ましく、デキストラン標準分
子量物質（シグマケミカル社製）が適当である。その他
の標準分子量物質、例えば球状タンパク質、ポリエチレ
ングリコール等は、必ずしも分子量の順番に溶出しなか
ったり、吸着されてしまうことがあり適当でない。

【００１４】測定方法は、標準分子量デキストランを用
いた通常の水系ＧＰＣ測定でよい。即ち、蒸留水を溶離
液として、液体クロマトグラフィー装置により種々の分
子量のデキストランの溶出容量を測定するものである。

【００１５】

【作用】本発明により、血液中または血しょう中からの
β２　−ミクログロブリンの選択的吸着技術が確立され
た。そのメカニズムは明かではないが、例えば吸着剤の
細孔径の制御により内部に拡散できるタンパク質分子を
限定でき、ポリアミノ酸の有する疎水基とカルボキシル
基がβ２　−ミクログロブリンを特異的に吸着するため
ではないかと考えられる。

【００１６】

【発明の効果】本発明のβ２　−ミクログロブリン用吸
着剤は、（１）β２　−ミクログロブリン以外の有用タ
ンパク質を吸着することなく選択性が高い（２）β２　
−ミクログロブリンの吸着量及び吸着速度が大きい（３
）吸着剤は生体適合性を有するなどの優れた効果を奏す
る。

【００１７】

【実施例】以下実施例にしたがって、本発明をさらに詳
しく説明するが、本発明は、これら実施例に限られるも
のではない。なおβ２　−ミクログロブリン吸着テスト
は後述した。 製造例１ 平均重合度５００のポリ−γ−メチル−Ｌ−グルタメー
ト（以下ＰＭＬＧ）の２．５％ジクロルエタン溶液５０
ｇ中に、ラウリン酸メチル４ｍｌを加えてよく撹拌する
。これを、部分鹸化ポリビニルアルコール２．５％水溶
液５００ｍｌ中に撹拌分散しながら５０℃でジクロルエ
タンを蒸発除去する。得られたポリアミノ酸多孔質体を
濾過し、温水で充分洗浄して、完全にポリビニルアルコ
ールを除去する。更にメタノールにより、内部のラウリ
ン酸メチルを完全に抽出除去する。この多孔質体を分級
して、３７〜７４μｍのものを取り出し、ステンレスカ
ラムに充填して、ＧＰＣ測定を行った。その結果、排除
限界分子量は約４万であった。更にこの多孔質ポリアミ
ノ酸粒子を１Ｎ苛性ソーダ水溶液中で３０℃１時間放置
した後蒸留水で完全に苛性ソーダを洗浄した。この粒子
の一部を乾燥して滴定によってカルボキシル基を定量し
たところメチルエステル部分の約４５％が加水分解によ
ってカルボキシル基になっていることが解った。

【００１８】製造例２ 製造例１において、平均重合度５００のポリ−γ−メチ
ル−Ｌ−グルタメートの代わりに平均重合度４５０のポ
リ−β−ベンジル−Ｌ−アスパルテートを用いた他は製
造例１と全く同様な方法で多孔質体を製造した。得られ
た粒子の排除限界分子量は約５万であった。これを製造
例１と同様に苛性ソーダ処理してカルボキシル基を定量
するとベンジルエステル部分の約６５％が加水分解によ
ってカルボキシル基になっていることが解った。

【００１９】比較例１ 製造例１において、苛性ソーダ処理をしなかったほかは
製造例１と全く同様な方法で多孔質体を製造した。

【００２０】比較例２ 製造例２において、苛性ソーダ処理をしなかったほか製
造例１と全く同様な方法で多孔質体を製造した。

【００２１】実施例 製造例１、２及び比較例１、２で得られた吸着剤それぞ
れ１ｇを、人工透析患者血しょう５０ｍｌ中に浸漬し、
撹拌しながら、３７℃で、血しょう中のβ２−ミクログ
ロブリン濃度（β２　）、全タンパク質濃度（ＴＰ）、
アルブミン／グロブリン比（Ａ／Ｇ）の経時変化を測定
した。 　　　　　　　　　　　　　　　　０時間　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　４時間　　　　
　　　　　　　　β２　　　　　ＴＰ　　　　Ａ／Ｇ　
　　　　　β２　　　　　ＴＰ　　　　Ａ／Ｇ　　　　
　　　　　ｍｇ　／Ｌ　　ｇ／ｄｌ　　　　−　　　　
　　　　　ｍｇ　／Ｌ　　ｇ／ｄｌ　　　　−製造例１
　　１３．５　　４．２　　１．５　　　　　　２．６
　　４．２　　１．５製造例２　　１３．５　　４．２
　　１．５　　　　　　２．３　　４．２　　１．５比
較例１　　１３．５　　４．２　　１．５　　　　　　
４．５　　４．２　　１．５比較例２　　１３．５　　
４．２　　１．５　　　　　　６．４　　４．２　　１
．５上記から明らかなように、β２　は４時間後におい
て、製造例１、２の場合には比較例１、２の約半分又は
半分以下である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　吸着のための官能基として疎水基とカ
   ルボキシ基の双方を有することを特徴とするポリアミノ
   酸の多孔質体からなるβ２　−ミクログロブリン用吸着
   剤。
2. 【請求項２】　　その細孔径がデキストランの分子量に
   して１万から５万であることを特徴とする請求項１記載
   のβ２　−ミクログロブリン用吸着剤。