JPH04198867A - Automatic pretreatment system for dna analysis - Google Patents
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はＤＮＡの塩基配列分析を行うだめの全自動前処
理システムに関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Field of Industrial Application] The present invention relates to a fully automatic pretreatment system for DNA base sequence analysis.
従来、ＤＮＡ塩基配列分析として放射活性ラベルを行っ
てＤＮＡフラグメントの電気泳動後にオートラジオグラ
フィーによってラダーを読む化学分解法、酸素法か知ら
れている。Conventionally, the chemical decomposition method and the oxygen method are known for DNA base sequence analysis, in which a radioactive label is applied and the ladder is read by autoradiography after electrophoresis of DNA fragments.
化学分解法は、ＤＮＡ断片の一端を高放射活性の３２ｐ
で標識した後、塩基特異的な化学修飾を部分的に施して
修飾塩基との間のリン酸ジエステル結合の切断によって
末端に標識を持つ断片を得、これを変性条件下でゲル電
気泳動してオートラジオグラフィーで検出すると、末端
標識をもつＤＮＡ断片はその末端から化学修飾切断点ま
での長さに応じて泳動されてくるので、各塩基に特異的
な部分切断物を同時に泳動することにより、その移動度
の相互関係から塩基配列を決定することかできるもので
ある。The chemical decomposition method converts one end of the DNA fragment into highly radioactive 32p.
After labeling, a fragment with a label at the end is obtained by partial base-specific chemical modification and cleavage of the phosphodiester bond between the modified base, which is then subjected to gel electrophoresis under denaturing conditions. When detected by autoradiography, DNA fragments with end labels are migrated according to the length from the end to the chemical modification cut point, so by simultaneously migrating partial cleavages specific to each base, The base sequence can be determined from the correlation of their mobilities.
酵素法は、ＤＮＡポリメラーゼの重合酸素反応を利用し
た塩基配列決定法であり、ＤＮＡ断片を含むＭ１３−木
組ＤＮＡにプライマーＤＮＡをアニーリングさせ、ＤＮ
Ａポリメラーゼでの相補型ＤＮＡ合成反応を行わせ、こ
の際、４種類の反応系をつくり、各反応系に基質として
４種類のデオキシヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）と
チェーンターミネータとして１種類のジデオキシリホヌ
クレオチト三リン酸（ｄｄＮＴＰ）を適当な濃度比で加
えたものを用意すると、例えばｄｄＧＴＰを加えた場合
には、ｄＮＴＰか順次付加され相補鎖ＤＮＡが５−−３
一方向へ伸長する際、ｄＧＴＰの付加反応ごとにある確
率で一部の相補鎖ＤＮＡ断片はｄｄＧＴＰを取り込み、
ｄｄＧＴＰは糖部分の３′の位置に水酸基を欠いている
ために伸長反応はそこで停止するのて、ｄｄＧＴＰ、ｄ
ｄＣＴＰ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＴＴＰを加えることによっ
て、塩基配列としてグアニン、シトシン、アデニン、チ
ミンのところて伸長反応を特異的に停止したさまざまな
長さのＤＮＡ断片を得ることができ、この反応の際に一
つのｄＮＴＰのα位を高放射活性のｓｔｐで標識してお
けば各ＤＮＡ断片は５０％尿素存在下でのポリアクリル
アミドゲル電気泳動後、オートラジオグラフィーにより
検出できるものである。The enzymatic method is a base sequencing method that utilizes the polymerized oxygen reaction of DNA polymerase. Primer DNA is annealed to M13-Kigumi DNA containing DNA fragments.
Complementary DNA synthesis reaction using A polymerase was carried out. At this time, four types of reaction systems were created, and each reaction system contained four types of deoxynucleotide triphosphates (dNTPs) as substrates and one type of dideoxylyphosate as a chain terminator. If nucleotide triphosphates (ddNTPs) are added at an appropriate concentration ratio, for example, if ddGTP is added, the dNTPs will be added sequentially and the complementary strand DNA will be 5--3.
During elongation in one direction, some complementary strand DNA fragments incorporate ddGTP with a certain probability for each dGTP addition reaction.
Since ddGTP lacks a hydroxyl group at the 3' position of the sugar moiety, the elongation reaction stops there; therefore, ddGTP, d
By adding dCTP, ddATP, and ddTTP, it is possible to obtain DNA fragments of various lengths in which the elongation reaction is specifically stopped at the base sequences of guanine, cytosine, adenine, and thymine. If the α-position of each dNTP is labeled with highly radioactive stp, each DNA fragment can be detected by autoradiography after polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of 50% urea.
しかし、これらの方法は放射活性ラベルを用いなければ
ならないため扱いか面倒であるとともに、分析の前処理
をすへて人手によっているため、分析に長時間を要する
という問題かあった。そこで放射活性ラベルの代わりに
蛍光色素ラベルを用い、電気泳動時にリアルタイムにレ
ーザ光による泳動パターンを認識し、このパターンをコ
ンピュータ解析することで塩基配列を自動決定するＤＮ
Ａシーケンサ−か提案され、その前処理を自動化するロ
ホットシステムも提案されている。However, these methods require the use of a radioactive label, which is cumbersome to use, and the analysis requires a long time because the pretreatment for analysis is performed manually. Therefore, we use a fluorescent dye label instead of a radioactive label, recognize the migration pattern caused by laser light in real time during electrophoresis, and analyze this pattern by computer to automatically determine the base sequence.
A sequencer has been proposed, and a Rohot system that automates its preprocessing has also been proposed.
しかしながら従来のＤＮＡ前処理システムは液体処理を
中心とした自動化であって、液体の分注と恒温保持だけ
の自動化にすぎず、その他分析に必要な混合等を行って
おらず、必要な場合には別途そのだめの処理を行わなけ
ればならないため分析の高能率化を達成することはでき
なかった。However, conventional DNA pretreatment systems mainly automate liquid processing, and only automate liquid dispensing and constant temperature maintenance, and do not perform other mixing required for analysis. Since the waste must be processed separately, it was not possible to achieve high analysis efficiency.
本発明は上記課題を解決するためのもので、ＤＮＡの塩
基配列決定のための前処理として、分注、恒温保持のみ
でなく、混合処理、濃縮処理等すべての必要な処理を全
自動で行うようにしたＤＮＡ分析用自動前処理システム
を提供することを目的とする。The present invention is intended to solve the above-mentioned problems, and as pre-processing for DNA base sequencing, not only dispensing and constant temperature maintenance, but also all necessary processing such as mixing processing and concentration processing are fully automated. An object of the present invention is to provide an automatic pretreatment system for DNA analysis.
本発明は、ＤＮＡサンプルに蛍光ラベルプライマーを加
えてアニーリングした後、酵素反応によりＤＮＡを伸長
させ、さらに濃縮するに際してすべての工程を全自動で
行えるようにしたことを特徴とするものである。また、
蛍光プライマーは光に不安定であるか、本発明の自動前
処理システムを暗室で運転すれば長時間に及ぶ多数のサ
ンプル処理に際して蛍光プライマーを保護することかで
きる。The present invention is characterized in that after adding a fluorescently labeled primer to a DNA sample and annealing it, the DNA is elongated by an enzymatic reaction and further concentrated, and all steps can be performed fully automatically. Also,
Fluorescent primers may be photo-labile, or operating the automated pretreatment system of the present invention in the dark can protect fluorescent primers during multiple sample processing over extended periods of time.
第１図は本発明のシステムの概念図である。図中、ｌは
制御装置、２は表示手段、３は入力手段、４はメモリ、
５はグリップ・移送手段、６は分注手段、７はキャップ
着脱装置、８は加熱・保温手段、９は冷却手段、１０は
混合手段、１１は遠心分離手段である。FIG. 1 is a conceptual diagram of the system of the present invention. In the figure, l is a control device, 2 is a display means, 3 is an input means, 4 is a memory,
5 is a grip/transfer means, 6 is a dispensing means, 7 is a cap attaching/detaching device, 8 is a heating/warming means, 9 is a cooling means, 10 is a mixing means, and 11 is a centrifugal separation means.
第１図において、計算機からなる制御装置１はフロッピ
ーディスク等からなるメモリ４から制御プログラムを読
み込んでシステム全体をシーケンス制御しており、キー
ボード等の入力手段より各種メニューの選択、プログラ
ムの変更等が行えるようになっている。そして、入力し
た内容、演算結果等は適宜ＣＲＴ等からなる表示手段２
に表示される。グリップ・移送手段５は、μｌオーダー
のＤＮＡサンプルを入れたチューブを把持して移送し、
所定の位置にセットする。分注手段６は、シリンジハン
ドからなり、チューブ内へ適宜サンプルや緩衝液を分注
する。キャップ着脱装置７はキャップを把持してチュー
ブを回転させることにより、ネジ込みでチューブにキャ
ップを付けたり、外したりする。この場合、キャップ着
脱装置によるキャップの把持に代えてキャップの把持は
グリップ・移送手段５により行い、チューブの回転をキ
ャップ着脱手段で行うようにしてもよい。加熱・保温手
段８はサンプルを加熱して反応を促進するものであり、
冷却手段９はサンプルの保存や、沈澱を促進させるため
のものである。混合手段ｌＯは振動を与えることにより
異なる液体試料を混合攪拌させるためのものである。遠
心分離手段１１は、試料の濃縮、チューブ壁に付着した
試料の洗い落としを行うためのものである。このような
構成により、ＤＮＡ分析のだめの前処理をすへて自動化
することかできる。In FIG. 1, a control device 1 consisting of a computer reads a control program from a memory 4 consisting of a floppy disk, etc., and sequentially controls the entire system. Various menu selections, program changes, etc. can be performed using input means such as a keyboard. It is now possible to do so. The input contents, calculation results, etc. are displayed on a display means 2 such as a CRT.
will be displayed. The grip/transfer means 5 grips and transfers a tube containing a μl-order DNA sample,
Set it in place. The dispensing means 6 consists of a syringe hand, and dispenses the sample or buffer into the tube as appropriate. The cap attachment/detachment device 7 attaches and detaches the cap from the tube by screwing the tube in and out by gripping the cap and rotating the tube. In this case, instead of gripping the cap by the cap attachment/detaching device, the cap may be gripped by the grip/transfer means 5, and the tube may be rotated by the cap attachment/detachment device. The heating/warming means 8 heats the sample to promote the reaction,
The cooling means 9 is for preserving the sample and promoting precipitation. The mixing means IO is for mixing and stirring different liquid samples by applying vibration. The centrifugal separation means 11 is for concentrating the sample and washing off the sample adhering to the tube wall. With such a configuration, it is possible to completely automate the preliminary processing for DNA analysis.
本発明は、回転ロボットにより円形状に配置された各種
装置に所定のシーケンスでキャップ付のサンプルチュー
ブを把持・移送してそれぞれの処理をおこなうに際し、
すべての処理を自動化したものであり、まずサンプルチ
ューブを所定位置にセットし、蛍光ラベルプライマー、
緩衝液を加え、混合することによりアニーリングし、そ
の後基質とＤＮＡポリメラーゼを加えて酵素反応により
ＤＮＡを伸長させ、さらに酵素反応を停止させた後、沈
澱剤を加えて沈澱させるとともに、遠心分離機で冷却し
つつ遠心分離することにより濃縮をおこなうようにして
おり、キャップ付のサンプルチューブを使用することに
より混合処理時のサンプルの散失及び高温保持時の液体
の蒸発を防止し、混合、遠心処理によりμｌオーダーの
液体の混合をマイクロチューブ中で確実におこなうとと
もに、冷却遠心分離によりＤＮＡの濃縮を行うことか可
能となる。In the present invention, when sample tubes with caps are grasped and transferred in a predetermined sequence to various devices arranged in a circular shape by a rotating robot to perform respective processing,
All processes are automated. First, the sample tube is set in the specified position, the fluorescent label primer is
Annealing is performed by adding a buffer solution and mixing, followed by adding a substrate and DNA polymerase to elongate the DNA by an enzymatic reaction, and after stopping the enzymatic reaction, adding a precipitant to precipitate the DNA, and using a centrifuge to elongate the DNA. Concentration is performed by centrifugation while cooling, and the use of a sample tube with a cap prevents sample loss during mixing and evaporation of liquid during high temperature maintenance. It is possible to reliably mix liquids on the order of μl in a microtube and to concentrate DNA by refrigerated centrifugation.
以下、実施例を説明する。 Examples will be described below.
第２図は本発明のシステムの具体的な配置図、第３図は
回転ロボットの外観図、第４図はグリップハントの構造
を示す図、第５図はシリンジハントの概略構造を示す図
、第６図はキャップ着脱装置の概略構造を示す図、第７
図は遠心分離機の構造を説明するための図である。図中
、２１はコントローラ、２２．２３はパワーコントロー
ラ、２４はＣＲＴ、２５はキーホード、２６はフロッピ
ーディスクドライブ、３１は回転ロボット、３９は９５
％エタノールボトル、４ｏはグリップハンド、４１は常
温ラック、４２は氷温ラック、４３はホルテクサー、４
５は常温ラック、４６はチソブラック、４７は７０％エ
タノールボトル、４８は廃液ボトル、４９はキャップス
テーション、５０はキャップ着脱部、５１はキャップ置
き場、５１ａはチューブ置き場、５２はキャップラック
、５３．５４はインキュベータ、５５はシリンジハンド
１．５５ａはシリンジハンド２．５６は冷却遠心分離機
、６１は回転台、６２は駆動用ワイヤー、６３はアーム
支持部、６４はアーム、７０はハンド本体、７１は支持
摺動部材、７２はフィンガ、７３はフィンガグリップ、
７５はマイクロチューブ、７６はキャップ、８０はシリ
ンジハンド、８１はピストン、８２はシリンジ、８３は
ロッド、９１はジョーズ、９２はチューブ支持台、９３
はグリップハント、９３ａ、９３ｂはグリップフィンガ
、９４はロッド、９５はスクリューロッド、１００はロ
ーター、１０１−１０４はパケット、１０１ａ〜１０４
ａは回転軸である。FIG. 2 is a specific layout diagram of the system of the present invention, FIG. 3 is an external view of the rotating robot, FIG. 4 is a diagram showing the structure of the grip hunt, and FIG. 5 is a diagram showing the schematic structure of the syringe hunt. Fig. 6 is a diagram showing the schematic structure of the cap attaching/detaching device;
The figure is a diagram for explaining the structure of a centrifuge. In the figure, 21 is a controller, 22, 23 is a power controller, 24 is a CRT, 25 is a keychain, 26 is a floppy disk drive, 31 is a rotating robot, 39 is a 95
% ethanol bottle, 4o is grip hand, 41 is room temperature rack, 42 is ice temperature rack, 43 is Holtexer, 4
5 is a normal temperature rack, 46 is Tiso black, 47 is a 70% ethanol bottle, 48 is a waste liquid bottle, 49 is a cap station, 50 is a cap attaching/detaching section, 51 is a cap storage area, 51a is a tube storage area, 52 is a cap rack, 53.54 55 is an incubator, 55 is a syringe hand 1, 55a is a syringe hand 2, 56 is a cooling centrifuge, 61 is a rotary table, 62 is a driving wire, 63 is an arm support part, 64 is an arm, 70 is a hand body, 71 is a supporting sliding member, 72 a finger, 73 a finger grip;
75 is a micro tube, 76 is a cap, 80 is a syringe hand, 81 is a piston, 82 is a syringe, 83 is a rod, 91 is a jaw, 92 is a tube support stand, 93
93a, 93b are grip fingers, 94 is a rod, 95 is a screw rod, 100 is a rotor, 101-104 is a packet, 101a-104
a is the rotation axis.
コントローラ２１は計算機からなり、ＣＲＴ２４、キー
ボード２５、フロッピーディスクドライブ２６を備えて
以下の各装置を制御しており、パワーコントローラ２２
．２３は各装置への信号用電力（１２Ｖ）供給を制御し
ている。The controller 21 consists of a computer, and is equipped with a CRT 24, a keyboard 25, and a floppy disk drive 26, and controls the following devices.
．． 23 controls the supply of signal power (12V) to each device.
３１は回転ロボットで、第３図に示すように回転台６１
上に設置させ、駆動用ワイヤー６２で上下動するアーム
支持部６３に支持されたアーム６４を回転させ、その先
端に取り付けられたハンド本体７０でマイクロチューブ
７５を把持し、回転して所定位置に移送してセットする
機能を有しており、ハンド本体はアームに沿って摺動可
能であるとともに、アームに対して回転してマイクロチ
ューブ内の溶液を排出することができ、さらに先端のハ
ンド本体は交換可能であり、本発明ではシリンジハンド
か取り付けられるようになっている。31 is a rotating robot, as shown in FIG.
An arm 64 supported by an arm support part 63 that moves up and down with a drive wire 62 is rotated, and a hand main body 70 attached to the tip thereof grips a microtube 75 and rotated to a predetermined position. It has the function of transferring and setting, and the hand body can slide along the arm and rotate relative to the arm to discharge the solution in the microtube, and the hand body at the tip is replaceable, and in the present invention, a syringe hand can also be attached.
グリップハンド４０は第４図に示すように、ハント本体
７０に摺動可能に取りつけられた支持部材７１によりフ
ィンガ７２か矢印方向に駆動され、フィンガグリップ７
３でマイクロチューブ７５を把持したり離したりするこ
とができるようになっている。As shown in FIG. 4, the grip hand 40 has fingers 72 driven in the direction of the arrow by a support member 71 that is slidably attached to the hunt body 70, and the finger grip 7
3, the microtube 75 can be gripped and released.
ラック４１．４５は常温用のものでサンプル入りマイク
ロチューブを１６本までセットしておくことか可能であ
る。Racks 41 and 45 are for room temperature use and can hold up to 16 microtubes containing samples.
氷温ラック４２は水冷て４°Ｃに保持されており、分析
用のサンプルと試薬類か最初二二にセットされており、
また処理過程で４°Ｃに冷却する必要かある場合にもこ
こにセットされる。The ice temperature rack 42 is water-cooled and maintained at 4°C, and samples and reagents for analysis are initially set at 22.
It is also set here if it is necessary to cool the temperature to 4°C during the processing process.
４３はポルテクサーであり、チューブをここにセットし
て振動を与え、異なる液体の混合撹拌を行わせるための
ものである。Reference numeral 43 is a portexer, in which a tube is set and vibrates to mix and stir different liquids.
５６は遠心分離機であり、本システムにおいては２００
０〜３０００ｒｐｍ程度の速度で回転させ、主としてチ
ューブ壁に付着した試料を落として異なる試料を混合さ
せるためと、４°Ｃに冷却して沈澱を生じやすくし、１
１００００ｒｐ程度の高速で回転させて遠心分離により
濃縮を行うために使用する。遠心分離機の構造は、第７
図に示すようにローター１（１０内に４ケのパケット２
０２〜１０４が設けられ、ローターを回転させるとこの
パケットかそれぞれ各軸１０１ａ＝１０４ａに対して９
０°回転するようになっており、このパケットの中にキ
ャップをしたマイクロチューブをセットすることにより
試料がその底部に濃縮されるようになっている。56 is a centrifuge, and in this system 200
It was rotated at a speed of about 0 to 3000 rpm, mainly to drop the sample attached to the tube wall and mix different samples, and to cool it to 4°C to facilitate precipitation.
It is used for concentration by centrifugation by rotating at a high speed of about 10,000 rpm. The structure of the centrifuge is the seventh
As shown in the figure, rotor 1 (4 packets 2 in 10)
02 to 104 are provided, and when the rotor is rotated, this packet is 9 for each axis 101a = 104a.
It is designed to rotate 0°, and by setting a capped microtube inside this packet, the sample is concentrated at the bottom.
４６はシリンジハンド用のチップを置いておくためのラ
ックである。シリンジハンドは第５図に示すように、シ
リンジ８２か一体となっており、シリンジハンド８０に
設けられたモータ（図示せず）により上下方向に駆動さ
れるロット８３により上下動するピストン８１か挿入さ
れ、ラックに置かれているチューブに対して注射器のよ
うにして先端から液を吸い込んだり、排出して分注する
ために使用する。46 is a rack for storing tips for the syringe hand. As shown in FIG. 5, the syringe hand is integrated with a syringe 82, and a piston 81 is inserted that moves up and down by a rod 83 that is driven up and down by a motor (not shown) provided in the syringe hand 80. It is used like a syringe to suck in liquid from the tip of the tube placed on the rack, or to dispense it by dispensing it.
４７は沈澱洗浄用の７０％エタノールが入れられている
ボトルである。47 is a bottle containing 70% ethanol for washing the sediment.
４８は廃液ボトルで濃縮後の上清や、使用済のチップを
廃棄するためのものである。48 is a waste liquid bottle for discarding the supernatant after concentration and used chips.
キャップステーション４９はキャップ着脱部５０、キャ
ップ置き場５１、チューブ置き場５１ａを有しており、
キャップ着脱部５０でキャップの着脱を行い、外したキ
ャップをキャップ置き場５ｌやキャップラック５２に置
くものであり、チューブ置き場５１ａはキャップを開け
たチューブを一装置いておくためのものである。キャッ
プステーション４９は、第６図に示すように、チューブ
支持台９２に左右方向に移動可能なジョーズ９１を有し
ており、これを駆動してチューブを挟み、一方、スクリ
ューロッド９５にネジ係合しているロッド９４に取り付
けられたグリップハント９３のグリップフィンガ９３ａ
、９３ｂにより、ネジ込みでチューブ７５に取り付けら
れているキャップ７６をグリップし、チューブ支持台９
２を回転することによりキャップを取り外し、取り外し
たキャップはキャップ置き場５１やキャップラック５２
に置いておき、取り付ける際にはグリップハンドにより
キャップを持ってきてチューブ上端にセットし、チュー
ブを逆回転することによりキャップ締めすることができ
るようになっている。なお上記説明ではキャップの着脱
時におけるキャップのグリップ、キャップの移送をキャ
ップステーションにおけるグリップハントで行うように
したか、この機能を回転ロボット３１のグリップハント
４０で行うようにしてもよくこのようにすることにより
制御を単純化することか可能である。The cap station 49 has a cap attaching/detaching section 50, a cap storage area 51, and a tube storage area 51a.
A cap attachment/detachment section 50 is used to attach and detach a cap, and the removed cap is placed in a cap storage area 5l or a cap rack 52, and a tube storage area 51a is for storing an uncapped tube. As shown in FIG. 6, the cap station 49 has jaws 91 movable in the left-right direction on a tube support base 92, which are driven to pinch the tube and are screwed into a screw rod 95. The grip finger 93a of the grip hunt 93 attached to the rod 94
, 93b grips the cap 76 screwed onto the tube 75, and the tube support stand 9
The cap is removed by rotating 2, and the removed cap is placed in the cap storage area 51 or cap rack 52.
When installing the cap, use the grip hand to bring it to the top of the tube, set it on the upper end of the tube, and tighten the cap by rotating the tube in the opposite direction. In the above explanation, the gripping of the cap and the transfer of the cap when attaching and removing the cap are performed by the grip hunt at the cap station, but this function may also be performed by the grip hunt 40 of the rotary robot 31. This makes it possible to simplify control.
インキュヘーダ５３．５４は所定温度で反応を行わせる
ための恒温槽てあり、インキュベーダ５３は６０℃、イ
ンキュベーダ５４は１６〜３７°Ｃに加熱・保温される
ようになっている。The incubators 53 and 54 are constant temperature baths for carrying out the reaction at a predetermined temperature, and the incubator 53 is heated and kept at 60°C, and the incubator 54 is heated and kept at 16 to 37°C.
次に、以上のような構成からなる本発明のシステムによ
る操作の流れを４サンプルを例にして説明する。Next, the flow of operations by the system of the present invention having the above configuration will be explained using four samples as an example.
まず、ロボットアームにシリンジハンド２を着ける。こ
の操作はアームをシリンジハンド２の５５ａの所まで延
ばして行う。First, attach the syringe hand 2 to the robot arm. This operation is performed by extending the arm to 55a of the syringe hand 2.
（１）シリンジハンド２の先にチップをチップラツク４
６から取って着ける。(1) Place the tip on the tip of the syringe hand 2 in the tip rack 4.
You can take it from 6 and put it on.
（２）サンプルＤＮＡを１０μβづつ、１種類につき４
本、計１６本分、４°Ｃのラック４２にセットされてい
る空チューブに分注する。(2) Add 10μβ of sample DNA, 4 for each type.
Dispense a total of 16 bottles into empty tubes set in a rack 42 at 4°C.
（３）水を９μｌづつ同じ１６本のチューブに分注する
。(3) Dispense 9 μl of water into the same 16 tubes.
（４）シリンジハンド２によりプライマーを氷温ラック
４２から４種のＤＮＡサンプルの入ったマイクロチュー
ブに４μβづつ分注し、これを４種のプライマー（Ｇ、
Ｔ、 Ａ、 Ｃ’）について順次行い、計１６回（
本）の分注を行うことになる。(4) Use the syringe hand 2 to dispense 4 μβ of primer from the ice temperature rack 42 into the microtubes containing the four types of DNA samples, and add the four types of primers (G,
T, A, C') were performed sequentially for a total of 16 times (
(book) will be dispensed.
（５）緩衝液を、氷温ラック４２から３μβづつラック
上の１６本のサンプルの入ったチューブに分注する。(5) Dispense the buffer solution from the ice temperature rack 42 into tubes containing 16 samples on the rack in 3μβ portions.
（６）ロボットアームに着いているシリンジハンド２を
取り外し、所定の場所に置き、グリップハンドを着ける
。(6) Remove the syringe hand 2 from the robot arm, place it in a predetermined place, and attach the grip hand.
（７）混合サンプルの入ったチューブを氷温ラック４２
から取り、キャップ用ラック５２からキャップを持って
きて取りつけ、−旦チューブを４℃のラックにセットす
る。これを４種のプライマーに対応するもの、４種のＤ
ＮＡサンプルに対応するもので計１６本行う。(7) Place the tube containing the mixed sample on the ice temperature rack 42.
Then, take a cap from the cap rack 52 and attach it, and then set the tube in a rack at 4°C. This corresponds to 4 types of primers, 4 types of D
A total of 16 tests were conducted, each corresponding to the NA sample.
以上の（１）〜（７）の工程で鋳型ＤＮＡと蛍光ラベル
プライマーとが緩衝液で混合されたことになる。In the above steps (1) to (7), the template DNA and the fluorescent label primer are mixed with the buffer solution.
（８）サンプルの入ったチューブを４”Ｃのラック４２
から取り、ポルテクサ−４３にセットして振動撹拌しサ
ンプル混合する。(8) Place the tube containing the sample in a 4”C rack 42.
The sample is mixed by vibration stirring by setting it in Portexer-43.
（９）混合により試料か飛散してチューブ壁に付着して
しまい、十分混合しない恐れかあるので、チューブを遠
心分離機にセットした後、２０００ｒｐｍで数秒間遠心
する。これは、チューブを遠心分離機のロータにセット
し、ロータをｌポジションづつ動かしながら、４本のチ
ューブを遠心分離機５６にセットすることにより行う。(9) Since mixing may cause the sample to scatter and adhere to the tube wall, resulting in insufficient mixing, place the tube in a centrifuge and centrifuge at 2000 rpm for several seconds. This is done by setting the tubes in the rotor of a centrifuge, and setting the four tubes in the centrifuge 56 while moving the rotor one position at a time.
この状態で遠心分離機を２００Ｏｒｐｍで数秒間遠心し
、均一混合を保証するための前処理として少量試料チュ
ーブを底部に集める。In this state, centrifuge the centrifuge at 200 rpm for a few seconds and collect a small sample tube at the bottom as a pretreatment to ensure uniform mixing.
（ｌＯ）チューブを遠心分離機のロータ位置■番から取
り出して４°Ｃのラックにチューブをセットし、ロータ
の位置を１番づつ動かしながら、４本のチューブについ
てこれを行う。(lO) Remove the tube from rotor position #2 of the centrifuge, set the tube in a rack at 4°C, and repeat this for four tubes while moving the rotor position one by one.
（８）〜（１０）の操作をもう３組について行い、４種
のＤＮＡサンプルに対応するすべてのチューブについて
、計１６本のチューブの処理を行うことになる。The operations (8) to (10) are repeated for three more sets, and a total of 16 tubes, including all tubes corresponding to the four types of DNA samples, are processed.
（１１）４℃のラックからチューブを取り、６０°Ｃの
ラック５３にチューブをセットする。これを１６本のサ
ンプルについてすべて行い、６０°Ｃて１５分間保温す
る。これは、すべて熱変性するための処理で、不適正な
位置にプライマーか結合している可能性かあるのて熱変
性するためのものである。(11) Take the tube from the 4°C rack and set it on the 60°C rack 53. This was done for all 16 samples and kept at 60°C for 15 minutes. This is all heat denaturation treatment, and is done because there is a possibility that the primer is bound to an inappropriate position.
（１２）６０℃のラックからチューブを取り、常温のラ
ック４５にチューブをセットする。これを１６本のサン
プルについてすべて行い、室温て３０分間放置する。こ
うして６０°Ｃから室温まて徐冷することによりプライ
マーを適正な位置に結合させて部分的な２本鎖を形成す
る。(12) Take the tube from the rack at 60°C and set it on the rack 45 at room temperature. This was done for all 16 samples and left at room temperature for 30 minutes. By slowly cooling the mixture from 60°C to room temperature, the primers are bound to appropriate positions to form a partial double strand.
（１３）チューブを常温のラック４５から取り、４°Ｃ
のラック４２にセットする。これを１６本のサンプルに
ついてすべて行い、次の処理のために４°Ｃて５分間冷
却する。(13) Take the tube from the rack 45 at room temperature and keep it at 4°C.
set it on the rack 42. This is done for all 16 samples and cooled for 5 minutes at 4°C for further processing.
以上の処理により鋳型ＤＮＡとプライマーの部分的な２
本鎖か形成され、アニーリング処理か行われたことにな
る。Through the above treatment, the template DNA and primers are partially separated.
This means that a main chain has been formed and an annealing process has been performed.
（１４）５分間冷却したチューブを４°Ｃのラック４２
から取り、キャップをチューブから外し、キャップはキ
ャップ用ラック５２上に置く。そしてキャップを外した
チューブを氷温ラック４２にセットする。これを１６本
のチューブ全てについて行う。(14) Cool the tube for 5 minutes on a rack 42 at 4°C.
Remove the cap from the tube and place the cap on the cap rack 52. Then, the tube with the cap removed is set on the ice temperature rack 42. This is done for all 16 tubes.
（１５）グリップハンドをシリンジハンド２に交換する
。(15) Replace the grip hand with syringe hand 2.
（１６）次に（４）と同じ処理を行い、酵素反応基質を
４°Ｃのラックから４種類のＤＮＡサンプルの入ったチ
ューブに４μｌづつ分注（Ｇ、 Ｔ、 Ａ。(16) Next, perform the same process as in (4), and dispense 4 μl of the enzyme reaction substrate from the 4°C rack into tubes containing four types of DNA samples (G, T, A).
Ｃの順番はプライマーの種類に対応させる）し、これを
４種のプライマーについて順次行う。計１６本のチュー
ブに分注を行うことになる。The order of C corresponds to the type of primer), and this is performed sequentially for the four types of primers. A total of 16 tubes will be dispensed.
（１７）次に（５）と同様に酵素を氷温のラックから４
μβづつ、分注機上の１６本のサンプルの入ったチュー
ブに分注する。(17) Next, remove the enzyme from the ice-cold rack in the same way as in (5).
Dispense μβ into 16 sample tubes on the dispenser.
（１８）ン１７ンジハンド２をグリップハンドに交換す
る。(18) Replace the grip hand 2 with the grip hand.
（＋９）（７）と同様に混合サンプルの入ったチューブ
を４°Ｃのラックから取り、キャップ用ラックの上に置
かれているキャップを取りつける。チューブを４°Ｃの
ラックにセットする。これを４種の基質に対応するもの
、４種のＤＮＡに対応するもので１６本行う。(+9) As in (7), remove the tube containing the mixed sample from the 4°C rack and attach the cap placed on the cap rack. Place the tubes in a rack at 4°C. This is done for 16 times, one corresponding to four types of substrates and one corresponding to four types of DNA.
そして（８）〜（１０）と同様にホルテックス・低速遠
心を行って混合する。この操作を４回繰り返すことは前
と同しである。Then, mix by performing Hortex low speed centrifugation in the same manner as in (8) to (10). Repeating this operation four times is the same as before.
（２０）４°Ｃのラック４２からチューブを取り、チュ
ーブを３７°Ｃのラック５４にセットし、これを１６本
のチューブすべてについて行う。(20) Take the tubes from the 4°C rack 42, set the tubes on the 37°C rack 54, and do this for all 16 tubes.
３７°Ｃで２０分間保温するようにする。この処理によ
り、ＤＮＡの伸長反応か起こり、鋳型ＤＮＡの配列に従
って相補ＤＮＡ鎖が形成される。Keep warm at 37°C for 20 minutes. This treatment causes a DNA elongation reaction, and a complementary DNA strand is formed according to the sequence of the template DNA.
（２１）チューブを３７°Ｃのラック５４から取り、チ
ューブを６０℃のラックにセットする。これを１６本の
チューブすべてについて行い、６０℃で１０分間加熱す
る。この加熱処理によりＤＮＡポリメラーセを失活させ
て伸長反応を停止させる。(21) Take the tube from the 37°C rack 54 and set the tube on a 60°C rack. This is done for all 16 tubes and heated at 60°C for 10 minutes. This heat treatment deactivates DNA polymerase and stops the elongation reaction.
（２２）チューブを６０°Ｃのラックから取り、４°Ｃ
のラック４２にセットする。これを１６本のチューブす
へてについて行う。(22) Remove the tube from the 60°C rack and keep it at 4°C.
set it on the rack 42. This is done for all 16 tubes.
（２３）チューブを４°Ｃのラック４２から取り、キャ
ップをチューブから外してキャップ用ラック上５２に置
き、キャップを外したチューブを４°Ｃのラック４２に
セットする。これを１６本のチューフスべてについて行
う。(23) Take the tube from the 4°C rack 42, remove the cap from the tube and place it on the cap rack 52, and set the uncapped tube on the 4°C rack 42. This is done for all 16 chews.
（２４）グリップハントをシリンジハンド２に交換する
。(24) Replace grip hunt with syringe hand 2.
（２５）酢酸ナトリウムを４°Ｃのラックにセットされ
ているチューブから３．θμｌづづ、同ラック上の１６
本のサンプルの入ったチューブに分注する。これは塩濃
度を上げて沈澱を生しやすくするためである。(25) Add sodium acetate from a tube set in a rack at 4°C. θμl Zuzu, 16 on the same rack
Dispense into the tube containing the book sample. This is to increase the salt concentration and make it easier to form a precipitate.
（２６）シリンシバ、ント２をシリンジハンド１に交換
する。(26) Replace the syringe hand 2 with the syringe hand 1.
（２７）さらに沈澱剤として９５％エタノールをシリン
ジハンドｌを用いて、１００μｌづつ４°Ｃのラック上
の１６本のチューブに分注する。(27) Furthermore, use syringe hand 1 to dispense 100 μl of 95% ethanol as a precipitant into 16 tubes on a rack at 4°C.
（２８）シリンジハントｌをグリップハントに交換する
。(28) Replace syringe hunt l with grip hunt.
（２９）（７）と同様に混合サンプルの入ったチューブ
を分注機上のラックから取り、キャップ用ラック５２上
に置かれているキャップを取り付け、チューブを４°Ｃ
のラック４２にセットする。(29) In the same way as in (7), take the tube containing the mixed sample from the rack on the dispenser, attach the cap placed on the cap rack 52, and heat the tube to 4°C.
set it on the rack 42.
これを４種の基質に対応するもの、４種のＤＮＡサンプ
ルに対応するもので１６本行う。This is done 16 times, one for four types of substrates and one for four types of DNA samples.
（３０）サンプルの入ったチューブを４°Ｃのラックか
ら取り出し、サンプルチューブの内容をポルテクサ−４
３で混合し、チューブを４°Ｃのラック４２にセットす
る。これを１６本のチューブすへてについて行う。この
場合は液体の量か多いために壁面に付着した試料を集め
るための遠心分離は不要である。(30) Remove the tube containing the sample from the 4°C rack and transfer the contents of the sample tube to the Portexer-4
Mix at 3 and place the tube on rack 42 at 4°C. This is done for all 16 tubes. In this case, since the amount of liquid is large, centrifugation to collect the sample adhering to the wall is not necessary.
（３１）チューブを４°Ｃのラックから取り、キャップ
をチューブから外してキャップ用ラック５２の上に置き
、キャップを外したチューブを、再び４°Ｃのラックに
セットする。これを１６本のチューブすべてについて行
う。(31) Take the tube from the 4°C rack, remove the cap from the tube and place it on the cap rack 52, and set the uncapped tube on the 4°C rack again. Do this for all 16 tubes.
（３２）ロボットアームに着いているグリップハントを
外して、所定の場所に置き、ロボットアームにシリンジ
ハンド１を着ける。(32) Remove the grip hunt attached to the robot arm, place it in a predetermined place, and attach the syringe hand 1 to the robot arm.
（３３）シリンジハントｌの先にチップをチップラツク
４６から取って着け、１種のＤＮＡサンプルについてＣ
６５μＡ、Ａ６５μＡ、Ｔｌ３０μβ、Ｇ１３０μｌと
なるように分注を行い、分注後、チップを廃液ボトル４
８の中に捨てる。これを４種のＤＮＡサンプルについて
行う。混合されたサンプルのチューブか４本できる。こ
こで、Ｃ１Ａ、 Ｔ、 Ｇを上記割合としたのは蛍光の
強さガＴ。(33) Attach the tip from the tip rack 46 to the end of the syringe handle, and test the C for one type of DNA sample.
Dispense so that the amounts are 65 μA, A 65 μA, Tl 30 μβ, and G 130 μl. After dispensing, transfer the chip to waste liquid bottle 4.
Throw it away in 8. This is done for four types of DNA samples. You will now have 4 tubes of mixed sample. Here, the reason why C1A, T, and G are set to the above ratio is the fluorescence intensity T.
ＧはＣ，Ａに対して半分の強さであるので、これを揃え
るためである。Since G is half as strong as C and A, this is to make them even.
（３４）シリンジハンド１をロボットアームから外し、
所定の場所に置き、グリップハントをロボットアームに
着ける。(34) Remove syringe hand 1 from the robot arm,
Place it in place and attach Grip Hunt to the robot arm.
（３５）上記のように混合したチューブを４°Ｃのラッ
クから取り、キャップラック５２から持ってきたキャッ
プをチューブに着け、チューブを４°Ｃのラックにセッ
トする。これを４本のチューブについて行う。(35) Take the tube mixed as described above from the 4°C rack, attach the cap brought from the cap rack 52 to the tube, and set the tube on the 4°C rack. Do this for four tubes.
（３６）チューブを４°Ｃのラックから取り、冷却遠心
分離機のロータ位置を１番にセットする。遠心分離機ロ
ータパケット■にチューブをセットし、冷却遠心分離機
のロータ位置を１づつ動かしなから４本のチューブをす
べて遠心分離機にセットする。そして、１０分間冷却後
１００００ ｒ ｐｍて３０分遠心する。１０分間冷却
の冷却はＤＮＡを完全に沈澱させるためのものであり、
１１００００ｒｐで３０分遠心することによりＤＮＡを
完全にチューブ底部に集めて濃縮する。(36) Remove the tube from the 4°C rack and set the rotor position of the refrigerated centrifuge to number 1. Set the tubes in the centrifuge rotor packet ■, move the rotor position of the refrigerated centrifuge one by one, and then set all four tubes in the centrifuge. After cooling for 10 minutes, centrifuge at 10,000 rpm for 30 minutes. The cooling for 10 minutes is to completely precipitate the DNA.
Concentrate the DNA by centrifuging at 110,000 rpm for 30 minutes to completely collect it at the bottom of the tube.
（３７）冷却遠心分離機の蓋を開き、ロータ位置を０番
にしてチューブをロータから取り出し、チューブからキ
ャップを外して上清のエタノールを廃液ボトルに捨て、
チューブをキャップ着脱装置のチューブ置場５１ａにセ
ットする。(37) Open the lid of the refrigerated centrifuge, set the rotor position to 0, take out the tube from the rotor, remove the cap from the tube, and discard the supernatant ethanol into a waste bottle.
Set the tube in the tube holder 51a of the cap attachment/detachment device.
（３８）遠心分離機ロータ位置を■番にして上と同じ操
作を２番目のチューブについて行う。(38) Change the centrifuge rotor position to ## and perform the same operation as above for the second tube.
（３９）遠心分離機ロータ位置を０番にして上と同じ操
作を行う。(39) Set the centrifuge rotor position to number 0 and perform the same operation as above.
（４０）遠心分離機ロータ位置を■番にして上と同し操
作を行う。(40) Change the centrifuge rotor position to number ■ and perform the same operation as above.
（４１）ロボットアームに着いているグリップハンドを
外してロボットアームにシリンジハント１を着ける。(41) Remove the grip hand attached to the robot arm and attach the syringe hunt 1 to the robot arm.
（４２）チップをチップラツク４６から取り、シリンジ
の先に着け、７０％エタノールをボトル４７から３５０
μｌ吸い取り、チューブ置場１番にあるチューブの中に
７０％エタノールを分注し、これを４本のチューブにつ
いて行う。チップを廃液ボトルに捨てる。７０％エタノ
ールの分注はＤＮＡの沈澱に残存している塩類等を洗浄
するためのものである。(42) Take the tip from the tip rack 46, attach it to the tip of the syringe, and add 70% ethanol to the bottle 47.
Aspirate μl and dispense 70% ethanol into the tube in tube storage number 1, and do this for 4 tubes. Discard the chips into the waste bottle. The purpose of dispensing 70% ethanol is to wash salts remaining in the DNA precipitate.
（４３）シリンジハンドをロボットアームから外し、所
定の場所に置き、グリップハントをロボットアームに着
ける。(43) Remove the syringe hand from the robot arm, place it in a predetermined place, and attach the grip hunt to the robot arm.
（４４）チューブをチューブ置場１番から取り、キャッ
プをチューブに取り着けて冷却遠心分離機のロータ位置
を１番にし、チューブを遠心分離機のロータにセットす
る。(44) Take the tube from tube storage No. 1, attach the cap to the tube, set the rotor position of the refrigerated centrifuge to No. 1, and set the tube on the rotor of the centrifuge.
（４５）２番目のチューブについても同様に遠心分離機
にセットする。(45) Set the second tube in the centrifuge in the same way.
（４６）３番目のチューブについても同様に遠心分離機
にセットする。(46) Set the third tube in the centrifuge in the same way.
（４７）４番目のチューブについても同様に遠心分離機
にセットする。(47) Set the fourth tube in the centrifuge in the same way.
遠心分離機中でチューブを１０分間冷却後、１００００
ｒ ｐｍて１０分遠心し、ＤＮＡを完全に沈澱させる
とともに、チューブ底部に集めて濃縮し、遠心分離機の
ロータの位置を１番にする。After cooling the tubes in a centrifuge for 10 minutes,
Centrifuge at rpm for 10 minutes to completely precipitate the DNA, collect and concentrate at the bottom of the tube, and set the rotor of the centrifuge to number 1.
（４８）１番のチューブを遠心分離機から取り出し、キ
ャップを外し、グリップハンドの回転動作を利用して上
清のエタノールを廃液ボトル４８に捨て、キャップをチ
ューブに取り着けてチューブを４°Ｃラックに戻して保
存する。(48) Take out the No. 1 tube from the centrifuge, remove the cap, use the rotating action of the grip hand to dump the supernatant ethanol into the waste bottle 48, attach the cap to the tube, and heat the tube to 4°C. Return to rack and save.
遠心分離機のロータの位置を１番づつ動かして、上のエ
タノールを捨てる操作を４本のチューブについて行う。Move the rotor of the centrifuge one by one and discard the ethanol on top of the four tubes.
グリップハンドをロボットアームから外し、所定の場所
に置く。そして、蛍光物質か光に対して不安定であるた
め、−時暗所で保存する。Remove the grip hand from the robot arm and place it in place. Since the fluorescent material is unstable to light, it should be stored in the dark for a long time.
実際には、さらに負圧状態て遠心分離にかけて乾燥をお
こなって、シーケンサ−にかけることになる。In reality, the material is further dried by centrifugation under negative pressure and then applied to a sequencer.
以上の処理により、アニーリング、ＤＮＡ伸長、濃縮か
全自動で行われたことになる。Through the above processing, annealing, DNA extension, and concentration were performed fully automatically.
なお、１６サンプルの処理を行う場合には、前記（１）
〜（３５）までを４サイクル行うと１６本のチューブか
完成し、前記（３６）番の冷却遠心以降はロータの４ケ
所のパケット穴すべてを用い、１６本のチューブを１度
に遠心処理し、エタノール廃液、エタノール分注の操作
は再び４本づつ４サイクル行えばよい。In addition, when processing 16 samples, the above (1)
By performing 4 cycles of steps from (35) to 16 tubes are completed, and after the cooling centrifugation in step (36), all 4 packet holes in the rotor are used to centrifuge 16 tubes at once. , ethanol waste liquid, and ethanol dispensing operations may be performed again for 4 cycles of 4 bottles each.
なお、本実施例では冷却温度を４°Ｃとしたか、これは
水冷ての冷却のためであり、他の冷却媒体を使用してさ
らに冷却温度を下げてもよいことは言うまでもない。Note that in this embodiment, the cooling temperature was set at 4° C., but this was only for water cooling, and it goes without saying that the cooling temperature may be further lowered by using another cooling medium.
以上のように本発明によれば、ＤＮＡ分析用前処理をす
べて自動化することができ、特に混合と遠心分離により
、チューブ壁面に付着する試料を完全に落とし去ること
かできるのてμｌオーダーの液体をマイクロチューブ中
で確実に混合することかでき、さらにキャップ付のマイ
クロチューブを用いているので混合時のサンプルの散失
及び高温時の液体の蒸発を防ぐことかできる。また、冷
却遠心分離機を用いることによりＤＮＡ試料の遠心分離
と濃縮を行うことが可能である。さらに、本発明におい
ては制御装置のプログラムを変更するだけで処理工程の
追加、変更等を容易に行うことかでき、多様な前処理に
対応することかできる。As described above, according to the present invention, it is possible to automate all pretreatment for DNA analysis, and in particular, by mixing and centrifugation, it is possible to completely remove the sample that adheres to the tube wall surface, and it is possible to completely remove the sample that adheres to the tube wall. can be reliably mixed in a microtube, and furthermore, since a microtube with a cap is used, it is possible to prevent sample loss during mixing and evaporation of liquid at high temperatures. Furthermore, by using a refrigerated centrifuge, it is possible to centrifuge and concentrate the DNA sample. Furthermore, in the present invention, it is possible to easily add or change processing steps by simply changing the program of the control device, and it is possible to cope with a variety of pretreatments.
第１図は本発明のシステムの概念図、第２図は本発明の
システムの具体的な配置図、第３図は回転ロボットの外
観図、第４図はグリップハンドの構造を示す図、第５図
はシリンジハンドの概略構造を示す図、第６図はキャッ
プ着脱装置の概略構造を示す図、第７図は遠心分離機の
構造を説明するための図である。
２１・・・コントローラ、３１は回転ロボット、３９・
・・９５％エタノールボトル、４０・・・グリップハン
ド、４１・・・常温ラック、４２・・氷温ラック、４３
・・ホルテクサ、４５・・・常温ラック、４６・・・チ
ップラツク、４７・・・７０％エタノールボトル、４８
・・・廃液ボトル、４９・・・キャップステーソヨン、
５２・・・キャップラック、５３．５４・・インキュベ
ータ、５５・・・シリンジハンド１．５５ａ・・・シリ
ンジハンド２．５６・・・冷却遠心分離機、６１・・・
回転台、６２・・・駆動用ワイヤー、６３・・・了−ム
支持部、６４・・・アーム、７０・・・ハンド本体、７
２・・・フィンガ、７３・・・フィンガグリップ、７６
・・・キャップ、８０・・・シリンジハンド、８１・・
・ピストン、８２・・・シリンジ、８３・・・ロッド、
９１・・・ジョーズ、９２・・・チューブ支持台、９３
・・・グリップハンド、９３ａ、９３ｂ・・・グリップ
フィンガ、９４・・・ロッド、９５・・・スクリューロ
ッド、ｌＯＯ・・・ロー９−１１０１〜１０４・・・パ
ケット。
出 願 人 東燃株式会社
復代理人弁理士 蛭 川 昌 信（外７名）第３図
第４図Fig. 1 is a conceptual diagram of the system of the present invention, Fig. 2 is a concrete layout diagram of the system of the present invention, Fig. 3 is an external view of the rotating robot, Fig. 4 is a diagram showing the structure of the grip hand, 5 is a diagram showing a schematic structure of a syringe hand, FIG. 6 is a diagram showing a schematic structure of a cap attaching/detaching device, and FIG. 7 is a diagram for explaining the structure of a centrifugal separator. 21...controller, 31 is a rotating robot, 39.
...95% ethanol bottle, 40... Grip hand, 41... Room temperature rack, 42... Ice temperature rack, 43
...Holtexa, 45...Normal temperature rack, 46...Tip rack, 47...70% ethanol bottle, 48
...Waste liquid bottle, 49...Cap stay soyon,
52... Cap rack, 53.54... Incubator, 55... Syringe hand 1.55a... Syringe hand 2.56... Cooling centrifuge, 61...
Turning table, 62... Drive wire, 63... Arm support part, 64... Arm, 70... Hand body, 7
2...Finger, 73...Finger grip, 76
...Cap, 80...Syringe hand, 81...
・Piston, 82...Syringe, 83...Rod,
91... Jaws, 92... Tube support stand, 93
... Grip hand, 93a, 93b... Grip finger, 94... Rod, 95... Screw rod, lOO... Row 9-1101-104... Packet. Applicant Tonen Co., Ltd. Sub-Representative Patent Attorney Masanobu Hirukawa (7 others) Figure 3 Figure 4
Claims (8)
アニーリングした後、酸素反応によりＤＮＡを伸長させ
るとともに、濃縮するようにしたＤＮＡ分析用自動前処
理システムであって、ＤＮＡサンプルを入れたサンプル
容器を把持して移送し、所定位置にセットする把持移送
手段と、サンプル、プライマー、緩衝液等を分注する分
注手段と、サンプル容器へのキャップの着脱を行うキャ
ップ着脱手段と、サンプルを所定温度に加熱して保温す
る加熱・保温手段と、サンプルを冷却する冷却手段と、
サンプル容器を振動させて攪拌する混合手段と、低速及
び高速回転用の遠心分離手段と、前記各手段をシーケン
ス制御する制御手段とを備え、アニーリング処理、伸長
処理及び濃縮処理を全自動化したことを特徴とするＤＮ
Ａ分析用自動前処理システム。(1) An automatic pretreatment system for DNA analysis that extends and concentrates DNA through an oxygen reaction after adding a fluorescently labeled primer to the DNA sample and annealing it.The system grips a sample container containing a DNA sample. a gripping and transferring means for transferring and setting the sample at a predetermined position; a dispensing means for dispensing the sample, primer, buffer, etc.; a cap attaching/detaching means for attaching and detaching the cap to the sample container; A heating/warming means for heating and keeping the sample warm; a cooling means for cooling the sample;
It is equipped with a mixing means for stirring the sample container by vibrating it, a centrifugation means for low-speed and high-speed rotation, and a control means for sequentially controlling each of the above-mentioned means, and the annealing process, elongation process, and concentration process are fully automated. Featured DN
Automatic pretreatment system for A analysis.
によりＤＮＡサンプルに蛍光ラベルプライマーを加え、
混合手段及び遠心分離手段とにより混合することを特徴
とする請求項１記載のＤＮＡ分析用自動前処理システム
。(2) In the annealing process, fluorescently labeled primers are added to the DNA sample using a grasping/transfer means and a dispensing means.
2. The automatic pretreatment system for DNA analysis according to claim 1, wherein the mixing is performed by a mixing means and a centrifugation means.
ルに把持・移送手段と分注手段とにより基質と酸素を加
え、更に混合手段と遠心分離手段により混合した後、所
定温度で反応させることにより行われることを特徴とす
る請求項１記載のＤＮＡ分析用自動前処理システム。(3) The DNA elongation process is performed by adding a substrate and oxygen to the annealed DNA sample using a gripping/transfer means and a dispensing means, further mixing using a mixing means and a centrifugation means, and then reacting at a predetermined temperature. The automatic pretreatment system for DNA analysis according to claim 1, characterized in that:
移送手段と分注手段とにより沈澱剤を加え、冷却手段と
遠心分離手段とにより冷却しつつ遠心分離して濃縮する
ことを特徴とする請求項１記載のＤＮＡ分析用自動前処
理システム。(4) Concentration treatment involves gripping and
2. The automatic pretreatment system for DNA analysis according to claim 1, wherein a precipitant is added by the transfer means and the dispensing means, and the precipitant is concentrated by centrifugation while being cooled by the cooling means and the centrifugation means.
、アームの先端に着脱可能に取り付けられたグリップハ
ンドからなることを特徴とする請求項１記載のＤＮＡ分
析用自動前処理システム。(5) The automatic preprocessing system for DNA analysis according to claim 1, wherein the gripping and transferring means comprises an arm that can move up and down and rotate, and a grip hand that is detachably attached to the tip of the arm.
の液体の吸入、排出をおこなうシリンジハンドからなる
請求項１記載のＤＮＡ分析用自動前処理システム。(6) The automatic pretreatment system for DNA analysis according to claim 1, wherein the dispensing means comprises a syringe hand that sucks in and discharges liquid into the syringe tip by piston movement.
回転させる手段を備え、把持移送手段によりキャップを
把持した状態でチューブを回転させることによりキャッ
プの着脱を行うことを特徴とする請求項１記載のＤＮＡ
分析用自動前処理システム。(7) The cap attachment/detachment means includes a means for gripping and rotating the lower part of the tube, and the cap is attached/detached by rotating the tube while the cap is gripped by the grip/transfer means. DNA described
Automatic pretreatment system for analysis.
ブの下部を把持して回転させる手段とを備え、キャップ
を把持した状態でチューブを回転させることによりキャ
ップの着脱を行うことを特徴とする請求項１記載のＤＮ
Ａ分析用自動前処理システム。(8) A claim characterized in that the cap attachment/detachment means includes a cap gripping means and a means for gripping and rotating the lower part of the tube, and the cap is attached/detached by rotating the tube while gripping the cap. DN listed in 1
Automatic pretreatment system for A analysis.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33206390A JPH04198867A (en) | 1990-11-29 | 1990-11-29 | Automatic pretreatment system for dna analysis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33206390A JPH04198867A (en) | 1990-11-29 | 1990-11-29 | Automatic pretreatment system for dna analysis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04198867A true JPH04198867A (en) | 1992-07-20 |
Family
ID=18250733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33206390A Pending JPH04198867A (en) | 1990-11-29 | 1990-11-29 | Automatic pretreatment system for dna analysis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04198867A (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0949847A (en) * | 1995-05-29 | 1997-02-18 | Hitachi Ltd | Analyzing instrument using disposable reaction vessel |
| JPH0989901A (en) * | 1995-09-22 | 1997-04-04 | Kirin Brewery Co Ltd | Sampling device |
| JP2002286726A (en) * | 1995-05-29 | 2002-10-03 | Hitachi Ltd | Analyzer using disposable reaction container |
| WO2013002269A1 (en) * | 2011-06-28 | 2013-01-03 | 株式会社安川電機 | Robot hand and robot |
| CN108983737A (en) * | 2018-09-18 | 2018-12-11 | 安徽宝龙电器有限公司 | A kind of temperature acquisition processing system high suitable for density |
-
1990
- 1990-11-29 JP JP33206390A patent/JPH04198867A/en active Pending
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| CN104647391A (en) * | 2011-06-28 | 2015-05-27 | 株式会社安川电机 | Robot hand and robot |
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