JPH0363215A - 歯垢分解組成物 - Google Patents
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- A61K2800/92—Oral administration
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Epidemiology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
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- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はう蝕原性連鎖球菌ストレプトコッカス・ミュー
タンス(■■叫仝:occus mutans)が産生
ずる歯垢(デンタルプラーク)の主成分である不溶性グ
ルカン(ムタン)を高効率で分解し、新たな歯垢の形成
を阻止する歯垢分解組成物に関するものであって、これ
により、ストレプトコッカス・ミュータンスの口腔内へ
の定着を抑制し、主としてう蝕を予防することに関する
。
タンス(■■叫仝:occus mutans)が産生
ずる歯垢(デンタルプラーク)の主成分である不溶性グ
ルカン(ムタン)を高効率で分解し、新たな歯垢の形成
を阻止する歯垢分解組成物に関するものであって、これ
により、ストレプトコッカス・ミュータンスの口腔内へ
の定着を抑制し、主としてう蝕を予防することに関する
。
歯牙の表面に形成され、付着している歯垢(デンタルプ
ラーク)はその70%が口腔内細菌、約20%が該細菌
により合成された多糖、ならびに約10%が食物残渣で
あるといわれている。従来より、口腔内細菌ストレプト
コッカス・ミュータンスはう蝕原性細菌として特定され
ており、このストレプトコッカス・ミュータンスは、グ
ルコシルトランスフェラーゼやデキストラン合成酵素を
産生し、これら酵素はシ=1糖からムタンやデキストラ
ンなどの歯垢の成分である粘着性グルカンを生成させ、
また、更にこのストレプトコッカス・ミュータンスによ
り歯垢内部に貯留された酸は、歯のエナメル質を脱灰し
てう蝕を誘発するといわれており、歯垢はう蝕の起因物
質と見なされている。
ラーク)はその70%が口腔内細菌、約20%が該細菌
により合成された多糖、ならびに約10%が食物残渣で
あるといわれている。従来より、口腔内細菌ストレプト
コッカス・ミュータンスはう蝕原性細菌として特定され
ており、このストレプトコッカス・ミュータンスは、グ
ルコシルトランスフェラーゼやデキストラン合成酵素を
産生し、これら酵素はシ=1糖からムタンやデキストラ
ンなどの歯垢の成分である粘着性グルカンを生成させ、
また、更にこのストレプトコッカス・ミュータンスによ
り歯垢内部に貯留された酸は、歯のエナメル質を脱灰し
てう蝕を誘発するといわれており、歯垢はう蝕の起因物
質と見なされている。
歯の清掃には、主として歯磨き剤を併用して歯ブラシで
歯の表面に付着した食物残渣や歯垢を機械的に除去する
方法が用いられている。しかし、歯ブラシの使用方法が
適切さを欠くと、歯間や臼歯の咬合部位などが充分清掃
されず、う蝕、歯槽膿漏、歯肉炎などの口腔内疾患を惹
起する原因ともなっている。この歯ブラシ清掃の欠点を
補うべく、歯垢を生物化学的手法により除去する目的で
、デキストラナーゼを歯磨き剤等の口腔用組成物中に配
合することが提案されている(特公昭48−34897
号)。
歯の表面に付着した食物残渣や歯垢を機械的に除去する
方法が用いられている。しかし、歯ブラシの使用方法が
適切さを欠くと、歯間や臼歯の咬合部位などが充分清掃
されず、う蝕、歯槽膿漏、歯肉炎などの口腔内疾患を惹
起する原因ともなっている。この歯ブラシ清掃の欠点を
補うべく、歯垢を生物化学的手法により除去する目的で
、デキストラナーゼを歯磨き剤等の口腔用組成物中に配
合することが提案されている(特公昭48−34897
号)。
デキストラナーゼ産生菌としては従来から、主としてア
スペルギルス(ハ〃ヵ住肚旺)属、ペニシリウム(Pe
nicillium)属、フザリウム(Fusariu
n+)属、ケトミウム (Chaetomius)属や
フミコラ(Humicola)属などに属する糸状菌、
アクチノマイセス(Actinom ces)属やスト
レプトミセス(辣■虹並匹聾)属などに属する放線菌、
およびバチルス (Bacillus)属、ブレビバク
テリウム(Brevibacterium)属、コルネ
バクテリウム(ku並bacterium)属、セルビ
ブリオ(Cellvibrio)属やラクトバチルス(
Lac tobac i 11us)属などに属する細
菌などが知られている。
スペルギルス(ハ〃ヵ住肚旺)属、ペニシリウム(Pe
nicillium)属、フザリウム(Fusariu
n+)属、ケトミウム (Chaetomius)属や
フミコラ(Humicola)属などに属する糸状菌、
アクチノマイセス(Actinom ces)属やスト
レプトミセス(辣■虹並匹聾)属などに属する放線菌、
およびバチルス (Bacillus)属、ブレビバク
テリウム(Brevibacterium)属、コルネ
バクテリウム(ku並bacterium)属、セルビ
ブリオ(Cellvibrio)属やラクトバチルス(
Lac tobac i 11us)属などに属する細
菌などが知られている。
しかしながら、上記の各種微生物の産生ずるデキストラ
ナーゼは、いずれも歯垢に対する分解活性が満足するも
のでなく、当該技術分野においては、歯垢に対し高分解
活性を示すデキストラナーゼが望まれていた。
ナーゼは、いずれも歯垢に対する分解活性が満足するも
のでなく、当該技術分野においては、歯垢に対し高分解
活性を示すデキストラナーゼが望まれていた。
一方、デキストラナーゼ産生菌の培養方法は、細菌性多
糖デキストランを炭素源および酵素産生の誘導物質とし
て、培養培地に添加する方法がとられているが、デキス
トランは高価な多糖であるので、デキストラナーゼの製
造コストは高く、この面からも、デキストラナーゼの作
用を高め、可能な限り少量のデキストラナーゼを使用し
てもなお効果的に歯垢を分解する手段の開発も切望され
ていた。
糖デキストランを炭素源および酵素産生の誘導物質とし
て、培養培地に添加する方法がとられているが、デキス
トランは高価な多糖であるので、デキストラナーゼの製
造コストは高く、この面からも、デキストラナーゼの作
用を高め、可能な限り少量のデキストラナーゼを使用し
てもなお効果的に歯垢を分解する手段の開発も切望され
ていた。
本発明の課題は歯垢に対し、高い分解活性を有する新た
なエンドデキストラナーゼを含有する歯垢分解組成物を
提供することにあり、また、該デキスラナーゼ作用を相
乗的に高める配合成分を更に配合した歯垢分解組成物を
提供することにある。
なエンドデキストラナーゼを含有する歯垢分解組成物を
提供することにあり、また、該デキスラナーゼ作用を相
乗的に高める配合成分を更に配合した歯垢分解組成物を
提供することにある。
そして、このことにより効率的に歯垢中の不溶性グルカ
ンあるいは歯垢そのものを分解し、ストレプトコッカス
・ミュータンスの口腔内への定着を有効に抑制し、新た
な歯垢形成を阻止することによりう蝕を防止しようとす
るものである。
ンあるいは歯垢そのものを分解し、ストレプトコッカス
・ミュータンスの口腔内への定着を有効に抑制し、新た
な歯垢形成を阻止することによりう蝕を防止しようとす
るものである。
本発明者らはすでに、新規デキストラナーゼ産生菌株を
検索し、グラム陽性土壌細菌アルスロバクタ−・グロビ
フォルミスW31菌(NRRL B−4428゜NRR
LHNorthern Regional Re5ea
rch Laboratory。
検索し、グラム陽性土壌細菌アルスロバクタ−・グロビ
フォルミスW31菌(NRRL B−4428゜NRR
LHNorthern Regional Re5ea
rch Laboratory。
Peoria、 Ill、 、υ、S、A、)またはそ
の突然変異株が新規なエンドデキストラナーゼを産生ず
ることを見出し、該菌株またはその突然変異株を用いて
、工業的使用に供し得るエンドデキストラナーゼの製造
方法を提供している(特願昭63−52661号、特願
昭63−52662号〉が、本発明者らは、このグラム
陽性土壌細菌アルスロバクタ−・グロビフォルミスW3
1菌(NRRL B−4428)の産生ずるエンドデキ
ストラナーゼIおよび■は単独でも、他起源のデキスト
ラナーゼに比し、3〜6倍もの高率でストレプトコッカ
ス・ミュータンスの産生ずる不溶性グルカンを分解する
ことを知見し、また、本エンドデキストラナーゼと共に
各種生物起源のα−アミラーゼを併用すると、前記不溶
性グルカンの分解に顕著な相乗効果を示すことを認め本
発明を完成した。
の突然変異株が新規なエンドデキストラナーゼを産生ず
ることを見出し、該菌株またはその突然変異株を用いて
、工業的使用に供し得るエンドデキストラナーゼの製造
方法を提供している(特願昭63−52661号、特願
昭63−52662号〉が、本発明者らは、このグラム
陽性土壌細菌アルスロバクタ−・グロビフォルミスW3
1菌(NRRL B−4428)の産生ずるエンドデキ
ストラナーゼIおよび■は単独でも、他起源のデキスト
ラナーゼに比し、3〜6倍もの高率でストレプトコッカ
ス・ミュータンスの産生ずる不溶性グルカンを分解する
ことを知見し、また、本エンドデキストラナーゼと共に
各種生物起源のα−アミラーゼを併用すると、前記不溶
性グルカンの分解に顕著な相乗効果を示すことを認め本
発明を完成した。
すなわち、本発明は、アルスロバクタ−属に属する微生
物の産生ずるエンドデキストラナーゼを含有する歯垢分
解組成物に関するものであり、また、本発明は、アルス
ロバクタ−属に属する微生物の産生ずるエンドデキスト
ラナーゼに加えて、さらにα−アミラーゼを含有する歯
垢分解組成物に関するものである。
物の産生ずるエンドデキストラナーゼを含有する歯垢分
解組成物に関するものであり、また、本発明は、アルス
ロバクタ−属に属する微生物の産生ずるエンドデキスト
ラナーゼに加えて、さらにα−アミラーゼを含有する歯
垢分解組成物に関するものである。
以下、本発明を更に詳述する。
本発明において使用するエンドデキストラナーゼとして
は、例えば先の出願(特願昭63−52661号、特願
昭63−52662号)に関るグラム陽性土壌細菌アル
スロバクタ−・グロビフォルミスW31菌(NRRLB
−4428)由来のエンドデキストラナーゼIおよび■
が好適であるが、本菌とその突然変異株、およびアルス
ロバクタ−(Arthrobacter)属に属する細
菌とその突然変異株で、エンドデキストラナーゼを産生
ずる菌株はすべて使用可能である。
は、例えば先の出願(特願昭63−52661号、特願
昭63−52662号)に関るグラム陽性土壌細菌アル
スロバクタ−・グロビフォルミスW31菌(NRRLB
−4428)由来のエンドデキストラナーゼIおよび■
が好適であるが、本菌とその突然変異株、およびアルス
ロバクタ−(Arthrobacter)属に属する細
菌とその突然変異株で、エンドデキストラナーゼを産生
ずる菌株はすべて使用可能である。
以下に、上記エンドデキストラナーゼIおよび■の諸性
質について記載する。
質について記載する。
エンドデキストラナーゼI;
(1)作用
本酵素はデキストランに作用し、主としてイソマルトト
リオースおよびイソマルトテトラオースを生成する。
リオースおよびイソマルトテトラオースを生成する。
(2)基質特異性
主として細菌性多糖デキストランを水解する。
(3)至適pH及び安定pH範囲
p H4,0〜7.5の範囲で作用し、至適pHは6.
0付近にある(0.25%デキストラン、30°C,6
分間反応、デキストランはファルマシア製T 2000
を使用した)。
0付近にある(0.25%デキストラン、30°C,6
分間反応、デキストランはファルマシア製T 2000
を使用した)。
又、p H5,0〜7.5の範囲にて安定である(5m
M CaCI=を含有する50mMβ、β′−ジメチル
グルクール酸緩衝液中で4°C124時間放置後、それ
ぞれの残存活性を測定した)。
M CaCI=を含有する50mMβ、β′−ジメチル
グルクール酸緩衝液中で4°C124時間放置後、それ
ぞれの残存活性を測定した)。
(4)作用温度範囲及び最適作用温度
約20〜55°Cの範囲で作用し、最適作用温度は45
°C付近にある<0.25%デキストラン、pH6,0
゜6分間反応)。
°C付近にある<0.25%デキストラン、pH6,0
゜6分間反応)。
(5)熱安定性
p H6,0,10分間各種温度で加熱処理後、それぞ
れの残存活性を測定した。その結果45°Cまでは10
0%、50°Cで約60%の残存活性を示し、60″C
でほぼ完全に失活した。
れの残存活性を測定した。その結果45°Cまでは10
0%、50°Cで約60%の残存活性を示し、60″C
でほぼ完全に失活した。
(6)分子量
5DS−ボリアクリルアミドゲル電気泳動(SOS−P
AGE)法により推定された精製エンドデキストラナー
ゼ■の分子量は約107,000である。
AGE)法により推定された精製エンドデキストラナー
ゼ■の分子量は約107,000である。
(7)等電点(pl)
LKB社製等電点電気泳動装置(110dカラム〉によ
り測定された精製エンドデキストラナーゼIの等電点は
4.29である。
り測定された精製エンドデキストラナーゼIの等電点は
4.29である。
(8)阻害、活性化及び安定化
5mMの水銀、tplなどの重金属イオンにより、また
これと同一濃度のKMnO,およびN−ブロモスクシン
イミドなどにより阻害される。
これと同一濃度のKMnO,およびN−ブロモスクシン
イミドなどにより阻害される。
一方、5mMのカルシウムイオンにより活性化される。
エンドデキストラナーゼ■;
(1)作用
本酵素はデキストランに作用し、主としてイソマルトト
リオースおよびイソマルトテトラオースを生成する。
リオースおよびイソマルトテトラオースを生成する。
(2)基質特異性
主として細菌性多糖デキストランを水解する。
(3)至適pH及び安定pH範囲
pH4,5〜7.0の範囲で作用し、至適pHは6.0
付近にある(0.25%デキストラン、30°C,6分
間反応、デキストランはファルマシア製T 2000を
使用した)。
付近にある(0.25%デキストラン、30°C,6分
間反応、デキストランはファルマシア製T 2000を
使用した)。
又、p H5,0〜7.5の範囲にて安定である(5m
MCaC1□を含有する50mMβ、β′−ジメチルグ
ルクール酸緩衝液中で4°C124時間放置後、それぞ
れの残存活性を測定した)。
MCaC1□を含有する50mMβ、β′−ジメチルグ
ルクール酸緩衝液中で4°C124時間放置後、それぞ
れの残存活性を測定した)。
(4)作用温度範囲及び最適作用温度
約20〜50°Cの範囲で作用し、最適作用温度は40
°Cにある(0.25%デキストラン、pH6,0,6
分間反応)。
°Cにある(0.25%デキストラン、pH6,0,6
分間反応)。
(5)熱安定性
pH6,0,10分間各種温度で加熱処理後、それぞれ
の残存活性を測定した。その結果40°Cまでは100
%、45°Cで約60%の残存活性を示し、55°Cで
ほぼ完全に失活した。
の残存活性を測定した。その結果40°Cまでは100
%、45°Cで約60%の残存活性を示し、55°Cで
ほぼ完全に失活した。
(6)分子量
5DS−ポリアクリルア旦ドゲル電気泳動(SO5PA
GE)法により推定された精製エンドデキストラナーゼ
■の分子量は約70,000である。
GE)法により推定された精製エンドデキストラナーゼ
■の分子量は約70,000である。
(7)等電点(pi)
LKB社製等電点電気泳動装置(110Iliカラム)
により測定された精製エンドデキストラナーゼ■の等電
点は4.51である。
により測定された精製エンドデキストラナーゼ■の等電
点は4.51である。
(8)阻害、活性化及び安定化
5s+Hの水銀、銅などの重金属イオンにより、またこ
れと同一濃度のにMnO,およびN−プロモスクシンイ
ξドなどにより阻害される。
れと同一濃度のにMnO,およびN−プロモスクシンイ
ξドなどにより阻害される。
一方、5a+Hのカルシウムイオンにより活性化される
。
。
また、これらのエンドデキストラナーゼは、先の出J1
1(特願昭63−52661号、特願昭63−5266
2号)明細書に記載に準じた例えば以下の方法により得
られる。
1(特願昭63−52661号、特願昭63−5266
2号)明細書に記載に準じた例えば以下の方法により得
られる。
エンドヌクレアーゼI;
菌株としてはアルスロバクタ−・グロビフォルξスW3
1(NRRL B−4428,NRRLHNorthe
rn RegionalResearch Labor
atory、 Peoria、111.、U、S、A、
)を使用し、デキストランを唯一の炭素源に用い、エン
ドデキストラナーゼI及び■を誘導生成せしめる。
1(NRRL B−4428,NRRLHNorthe
rn RegionalResearch Labor
atory、 Peoria、111.、U、S、A、
)を使用し、デキストランを唯一の炭素源に用い、エン
ドデキストラナーゼI及び■を誘導生成せしめる。
窒素源としては、有機窒素含有物として各種アミノ酸、
マルトエキス、ペプトン、肉エキス、尿素等が、又、無
機窒素化合物としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム等が単独又は組み合わせて用い
る事が出来る。
マルトエキス、ペプトン、肉エキス、尿素等が、又、無
機窒素化合物としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム等が単独又は組み合わせて用い
る事が出来る。
その他、ξネラル、ビタミン類等を適時添加するとよい
。なお、培地中にアスパラギンを添加することによりデ
キストラナーゼ■及び■の生産性を高めることができる
。
。なお、培地中にアスパラギンを添加することによりデ
キストラナーゼ■及び■の生産性を高めることができる
。
培養温度は20〜35℃が適しており、より好ましくは
28〜30°Cがよい。培養pHは5.5〜8.5が適
しているが、より好ましくはpH6,0〜6.5がよい
。培養日数は2〜3日間である。本菌の培養方法は、液
体培養および固形培養のいずれも可能であるが、好気的
に液体培養するのが好ましい。
28〜30°Cがよい。培養pHは5.5〜8.5が適
しているが、より好ましくはpH6,0〜6.5がよい
。培養日数は2〜3日間である。本菌の培養方法は、液
体培養および固形培養のいずれも可能であるが、好気的
に液体培養するのが好ましい。
培養終了後、公知の方法によりエンドデキストラナーゼ
■及び■を得る事が出来るが、例えば、培養液中の菌体
を遠心分離法を用いて除去し、無細胞上清液を得る。次
いでこの上清液を90%飽和硫安で塩析し、得られる沈
澱を5a+Mカルシウムイオンを含有する20+mM酢
酸緩衝液(pH6,0)で透析したL DEAR−セフ
ァロースカラムにのせる。0.2阿塩化ナトリウムで溶
出される活性画分をバイオゲルP−150カラムでゲル
濾過を行い、先に溶出される活性画分を更にDEAE!
−セファロースカラムにかけることにより、精製エンド
デキストラナーゼIを得ることができる。また、前記バ
イオゲルP−150を用いたゲル濾過で、後から溶出さ
れる活性される活性画分をDBAE−セファロースカラ
ムにかけることにより、精製エンドデキストラナーゼ■
を得ることができる。
■及び■を得る事が出来るが、例えば、培養液中の菌体
を遠心分離法を用いて除去し、無細胞上清液を得る。次
いでこの上清液を90%飽和硫安で塩析し、得られる沈
澱を5a+Mカルシウムイオンを含有する20+mM酢
酸緩衝液(pH6,0)で透析したL DEAR−セフ
ァロースカラムにのせる。0.2阿塩化ナトリウムで溶
出される活性画分をバイオゲルP−150カラムでゲル
濾過を行い、先に溶出される活性画分を更にDEAE!
−セファロースカラムにかけることにより、精製エンド
デキストラナーゼIを得ることができる。また、前記バ
イオゲルP−150を用いたゲル濾過で、後から溶出さ
れる活性される活性画分をDBAE−セファロースカラ
ムにかけることにより、精製エンドデキストラナーゼ■
を得ることができる。
本発明において使用するエンドデキストラナーゼは、上
記のように精製されたもののみではなく、上記培養物か
ら遠心分離によって菌体を除去した粗酵素液の形態であ
ってもよい。
記のように精製されたもののみではなく、上記培養物か
ら遠心分離によって菌体を除去した粗酵素液の形態であ
ってもよい。
また、本発明の歯垢分解組成物において、エンドデキス
トラナーゼとともに含有せしめられるα−アミラーゼと
しては、例えばバチルス(BacilluS)属、アエ
ロバクタ−(Aerobacter)属、アスペルギル
ス(Aspergillus)属、ストレプトミセス(
S treptoa+yces)属、シュードモナス(
Pscudomonas)属等の微生物、麦芽等の植物
体由来のものあるいは唾液中のα−アミラーゼ等が挙げ
られ、いかなる起源のものも使用することができる。
トラナーゼとともに含有せしめられるα−アミラーゼと
しては、例えばバチルス(BacilluS)属、アエ
ロバクタ−(Aerobacter)属、アスペルギル
ス(Aspergillus)属、ストレプトミセス(
S treptoa+yces)属、シュードモナス(
Pscudomonas)属等の微生物、麦芽等の植物
体由来のものあるいは唾液中のα−アミラーゼ等が挙げ
られ、いかなる起源のものも使用することができる。
さらに、本発明の歯垢分解U酸物の具体的な形態として
は、例えば、各種歯磨き剤、義歯洗浄剤、トローチ等の
固形状口中清涼剤、マウスウォッシュ等の液状口中清涼
剤、チューインガム等の口腔用組成物、各種キャンディ
−類等を例示することができる。
は、例えば、各種歯磨き剤、義歯洗浄剤、トローチ等の
固形状口中清涼剤、マウスウォッシュ等の液状口中清涼
剤、チューインガム等の口腔用組成物、各種キャンディ
−類等を例示することができる。
なお以下に、本発明の実施例を示すが、該実施例におい
て使用した不溶性グルカンは次のように調製されたもの
である。すなわち10%ショ糖。
て使用した不溶性グルカンは次のように調製されたもの
である。すなわち10%ショ糖。
0.05%Mg5O,・7)!20.0.2%に、HP
O4,1%ポリペプチドからなる液体培地(pI(7,
0,300dX10)に、う蝕原性連鎖球菌(B豆躬恋
囲X■旧tans IFO13955株〉を接種し、3
7°Cにて4日間静置培養する。得られた培養液をアド
ヴアンテック社製濾紙(Na 2 )を用いた濾過法に
より、不溶性物質を濾別した。濾紙上に残存する不溶性
物質を蒸留水にて充分洗浄し、残渣の懸濁液(約200
1111)をロータリーエバポレーターを用いて濃縮し
く60’C)、凍結乾燥を施した。これら一連の操作を
経て、31の培養液より不溶性グルカンの凍結乾燥標品
約4.8gを得た。
O4,1%ポリペプチドからなる液体培地(pI(7,
0,300dX10)に、う蝕原性連鎖球菌(B豆躬恋
囲X■旧tans IFO13955株〉を接種し、3
7°Cにて4日間静置培養する。得られた培養液をアド
ヴアンテック社製濾紙(Na 2 )を用いた濾過法に
より、不溶性物質を濾別した。濾紙上に残存する不溶性
物質を蒸留水にて充分洗浄し、残渣の懸濁液(約200
1111)をロータリーエバポレーターを用いて濃縮し
く60’C)、凍結乾燥を施した。これら一連の操作を
経て、31の培養液より不溶性グルカンの凍結乾燥標品
約4.8gを得た。
また、同じく以下の実施例において使用するデキストラ
ナーゼあるいはアミラーゼの酵素活性は、1、0%デキ
ストランT2O00:容液あるいは0.3%可溶性澱粉
溶液0.5 d、5mMCa”を含有する酢酸緩衝液(
pH6,0) 1.0−および酵素溶液0.5 mから
なる溶液を30°Cで一定時間反応させた後、反応混液
1. Odにつき酵素反応により生じた還元糖をSom
ogyi−Nelson法を用いて定量し、この条件下
で、いずれも1分間に1μmolのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量をそれぞれ1ユニツトとして
算出したものである。
ナーゼあるいはアミラーゼの酵素活性は、1、0%デキ
ストランT2O00:容液あるいは0.3%可溶性澱粉
溶液0.5 d、5mMCa”を含有する酢酸緩衝液(
pH6,0) 1.0−および酵素溶液0.5 mから
なる溶液を30°Cで一定時間反応させた後、反応混液
1. Odにつき酵素反応により生じた還元糖をSom
ogyi−Nelson法を用いて定量し、この条件下
で、いずれも1分間に1μmolのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量をそれぞれ1ユニツトとして
算出したものである。
実施例1
10%シg糖、 0.05%Mg5Oa・7H,0,0
,2%KtHPO4゜ポリペプトン1%からなる液体培
地(pH7,0)中でストレプトコッカス・ミュータン
スIFO13955株を37’C,14日間静置培養し
た。培養開始時より培#液中にステンレスワイヤーを挿
入しておいたところ、ステンレスワイヤー上に多量の人
工プラークが付着・形成された。大型試験管(18X1
80 au++)に15−の既報(特願昭63−526
61号、特願昭63−52662号〉 に準じて調製したアルスロバクタ−・グロビフォル鴫ス
W31菌(NRRL B−4428)起源の粗エンドデ
キストラナーゼ、ならびに高度に精製したエンドデキス
トラナーゼ■あるいは■溶液(各15ユニツト含有)を
入れ、上記人工プラークが付着したステンレスワイヤー
をpH6,0,30°Cで20.40.60分間反応さ
せたところ、いずれの場合も人工プラークは一部分解・
可溶化され、反応後40分でステンレスワイヤー上から
完全に剥離した。
,2%KtHPO4゜ポリペプトン1%からなる液体培
地(pH7,0)中でストレプトコッカス・ミュータン
スIFO13955株を37’C,14日間静置培養し
た。培養開始時より培#液中にステンレスワイヤーを挿
入しておいたところ、ステンレスワイヤー上に多量の人
工プラークが付着・形成された。大型試験管(18X1
80 au++)に15−の既報(特願昭63−526
61号、特願昭63−52662号〉 に準じて調製したアルスロバクタ−・グロビフォル鴫ス
W31菌(NRRL B−4428)起源の粗エンドデ
キストラナーゼ、ならびに高度に精製したエンドデキス
トラナーゼ■あるいは■溶液(各15ユニツト含有)を
入れ、上記人工プラークが付着したステンレスワイヤー
をpH6,0,30°Cで20.40.60分間反応さ
せたところ、いずれの場合も人工プラークは一部分解・
可溶化され、反応後40分でステンレスワイヤー上から
完全に剥離した。
従って、アルスロバクタ−・グロビフォル稟スW31菌
(NRRL B−4428)起源のエンドデキストラナ
ーゼは歯垢の主構成分である不溶性グルカンを強力に分
解・可溶化する能力を有していることが確認された。
(NRRL B−4428)起源のエンドデキストラナ
ーゼは歯垢の主構成分である不溶性グルカンを強力に分
解・可溶化する能力を有していることが確認された。
実施例2
前記不溶性グルカンを0.2%含有する20mM酢酸緩
衝液(pH6,0,+5mM Ca” ) 2.4 r
nlに、アルスロバクタ−・グロビフォルミスW31菌
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼ■あるいは■溶液(各0.27ユニツト含有)
を100μi加え、37°Cで反応させた。さらに対照
として、糸状菌ケトくラム・グラシリ (Chaeto
mium 肛匹旦紅、ペニシリウム・リラシナム(P
enicilliuo+旦凰1…畦、ペニシリウム・フ
ニキュローサム(Penicilliumfunicu
losum)などの市販デキストラナーゼ製剤溶液(通
常各0.27ユニツトが含有されていた)を不溶性グル
カンに上記反応と同一条件下で反応せしめた。経時的に
生成される還元糖をSoa+ogyi−Netson法
を用いて定量し、また不溶性グルカン中の全糖をフェノ
ール硫酸法で定量し、不溶性グルカンの分解率を算出し
た。
衝液(pH6,0,+5mM Ca” ) 2.4 r
nlに、アルスロバクタ−・グロビフォルミスW31菌
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼ■あるいは■溶液(各0.27ユニツト含有)
を100μi加え、37°Cで反応させた。さらに対照
として、糸状菌ケトくラム・グラシリ (Chaeto
mium 肛匹旦紅、ペニシリウム・リラシナム(P
enicilliuo+旦凰1…畦、ペニシリウム・フ
ニキュローサム(Penicilliumfunicu
losum)などの市販デキストラナーゼ製剤溶液(通
常各0.27ユニツトが含有されていた)を不溶性グル
カンに上記反応と同一条件下で反応せしめた。経時的に
生成される還元糖をSoa+ogyi−Netson法
を用いて定量し、また不溶性グルカン中の全糖をフェノ
ール硫酸法で定量し、不溶性グルカンの分解率を算出し
た。
得られた結果(第1図参照)を総合すると、アルスロバ
クタ−・グロビフオミスW31菌(NRRL B442
B)のエンドデキストラナーゼはケトミウム属のデキス
トラナーゼに比べて約3倍、またペニシリウム属のデキ
ストラナーゼに比して約6倍の分解率を示すことが判明
した。
クタ−・グロビフオミスW31菌(NRRL B442
B)のエンドデキストラナーゼはケトミウム属のデキス
トラナーゼに比べて約3倍、またペニシリウム属のデキ
ストラナーゼに比して約6倍の分解率を示すことが判明
した。
実施例3
前記不溶性グルカンを0.2%含有する20mM酢酸緩
衝液(pH6,0,+5mM Ca”) 2.4II
Iiに、アルスロバクタ−・グロビフォル旦スW311
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼIあるいは■溶液(各0.3および1.0ユニ
ツト含有)を100μl加え、37°Cで反応させた。
衝液(pH6,0,+5mM Ca”) 2.4II
Iiに、アルスロバクタ−・グロビフォル旦スW311
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼIあるいは■溶液(各0.3および1.0ユニ
ツト含有)を100μl加え、37°Cで反応させた。
また、大麦麦芽αアミラーゼ(SIGMA社製)、バチ
ルス属(Bacil Ius3ρ、)結晶α−アミラー
ゼ(SIGMA社製)、バチルス・リケニフオルミス(
Bacillus Iicheniformts)結晶
α−アミラーゼなどの市販α−アくラーゼ製剤(各1.
0ユニフト含有)を単独で不溶性グルカンに上記反応と
同一条件下で反応せしめた。この際、経時的に生成され
る還元糖をSomogyi−Nelson法を用いて定
量し、不溶性グルカン分解活性を660nmの吸光度と
して表示した。
ルス属(Bacil Ius3ρ、)結晶α−アミラー
ゼ(SIGMA社製)、バチルス・リケニフオルミス(
Bacillus Iicheniformts)結晶
α−アミラーゼなどの市販α−アくラーゼ製剤(各1.
0ユニフト含有)を単独で不溶性グルカンに上記反応と
同一条件下で反応せしめた。この際、経時的に生成され
る還元糖をSomogyi−Nelson法を用いて定
量し、不溶性グルカン分解活性を660nmの吸光度と
して表示した。
得られた結果(第2図参照)から、試みた各種α−ア旦
クラーゼ例外なく単独で、不溶性グルカンの初期分解に
寄与することが明らかとなった。
クラーゼ例外なく単独で、不溶性グルカンの初期分解に
寄与することが明らかとなった。
実施例4
前記不溶性グルカンを0.2%含有する20mM酢酸緩
衝液(pH6,0,+ 5 mM、 Ca”) 2.4
dに、アルスロバクタ−・グロビフォルξスW31菌
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼ【あるいは■ (各0.3および1.0ユニツ
ト)を単独で用いた溶液、あるいは上記精製エンドデキ
ストラナーゼ(0,3ユニツト〉と共に大麦麦芽α−ア
ξラーゼ(SIGMA社製)、バチルス属結晶α−アミ
ラーゼ(SIGMA社製)、ヒト唾液α−アミラーゼ(
SIGMA社製)、バチルス・リケニフォルミス結晶α
−アミラーゼの各0.7ユニツトとを併用した溶液をそ
れぞれ100μl加え、37℃で反応させた。この際、
経時的に生成される還元糖をSosogyi−Nels
on法を用いて定量し、不溶性グルカン分解活性を66
0nmの吸光度として表示した。
衝液(pH6,0,+ 5 mM、 Ca”) 2.4
dに、アルスロバクタ−・グロビフォルξスW31菌
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼ【あるいは■ (各0.3および1.0ユニツ
ト)を単独で用いた溶液、あるいは上記精製エンドデキ
ストラナーゼ(0,3ユニツト〉と共に大麦麦芽α−ア
ξラーゼ(SIGMA社製)、バチルス属結晶α−アミ
ラーゼ(SIGMA社製)、ヒト唾液α−アミラーゼ(
SIGMA社製)、バチルス・リケニフォルミス結晶α
−アミラーゼの各0.7ユニツトとを併用した溶液をそ
れぞれ100μl加え、37℃で反応させた。この際、
経時的に生成される還元糖をSosogyi−Nels
on法を用いて定量し、不溶性グルカン分解活性を66
0nmの吸光度として表示した。
得られた結果(第3図参照)を総合すると、アルスロバ
クタ−・グロビフォルミスW31菌(NRRLB−44
28)の産生ずるエンドデキストラナーゼに各種生物起
源のα−アミラーゼを適量併用すると、例外なく不溶性
グルカンの初期分解に顕著な相乗効果を示し、エンドデ
キストラナーゼ使用量の減少を可能ならしめることが明
らかとなった。
クタ−・グロビフォルミスW31菌(NRRLB−44
28)の産生ずるエンドデキストラナーゼに各種生物起
源のα−アミラーゼを適量併用すると、例外なく不溶性
グルカンの初期分解に顕著な相乗効果を示し、エンドデ
キストラナーゼ使用量の減少を可能ならしめることが明
らかとなった。
実施例5
前記不溶性グルカンを0.2%含有する20mM酢酸緩
衝液(pH6,0,+5mM Ca”) 2./Ir
R1に、アルスロバクタ−・グロビフォルミスW31菌
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼIあるいは■ (各0.3ユニツト)を単独で
用いた溶液、バチルス・リケニフォルミスα−アξラー
ゼ(1,0ユニツト)を単独で用いた溶液、精製エンド
デキストラナーゼ(0,1ユニツト)と共にバチルス・
リケニフォルミスα−アξラーゼ(0,9ユニツト)と
を併用した溶液、精製エンドデキストラナーゼ(0,2
ユニツト)と共にバチルス・リケニフオルζスα−アξ
ラーゼ(0,8ユニツト)とを併用した溶液、および精
製エンドデキストラナーゼ(0,3ユニツト)と共にバ
チルス・リケニフオルξスα−アミラーゼ(0,7ユニ
ツト)とを併用した溶液をそれぞれ100μl加え、3
7°Cで反応させた。
衝液(pH6,0,+5mM Ca”) 2./Ir
R1に、アルスロバクタ−・グロビフォルミスW31菌
(NRRL B−4428)起源の精製エンドデキスト
ラナーゼIあるいは■ (各0.3ユニツト)を単独で
用いた溶液、バチルス・リケニフォルミスα−アξラー
ゼ(1,0ユニツト)を単独で用いた溶液、精製エンド
デキストラナーゼ(0,1ユニツト)と共にバチルス・
リケニフォルミスα−アξラーゼ(0,9ユニツト)と
を併用した溶液、精製エンドデキストラナーゼ(0,2
ユニツト)と共にバチルス・リケニフオルζスα−アξ
ラーゼ(0,8ユニツト)とを併用した溶液、および精
製エンドデキストラナーゼ(0,3ユニツト)と共にバ
チルス・リケニフオルξスα−アミラーゼ(0,7ユニ
ツト)とを併用した溶液をそれぞれ100μl加え、3
7°Cで反応させた。
この際、経時的に生成される還元糖をSomogyi−
Nelson法にて定量し、不溶性グルカン分解活性を
660na+の吸光度として表示した。
Nelson法にて定量し、不溶性グルカン分解活性を
660na+の吸光度として表示した。
得られた結果(第4図参照)から、精製エンドデキスト
ラナーゼとα−アミラーゼとを併用すると不溶性グルカ
ンの初期分解に顕著な相乗効果が出現し、エンドデキス
トラナーゼ使用量の減少を可能ならしめている。
ラナーゼとα−アミラーゼとを併用すると不溶性グルカ
ンの初期分解に顕著な相乗効果が出現し、エンドデキス
トラナーゼ使用量の減少を可能ならしめている。
エンドデキストラナーゼ(系統名;l、6−α−D−グ
ルカン6−グルカノヒドロラーゼ、 EC3,2゜1.
11)は細菌性多糖デキストランをエンド様式で加水分
解する酵素として知られており、う蝕原性連鎖球菌スト
レプトコッカス・逅ニータンスなどが生産する不溶性グ
ルカン(ムタン)中のα−1゜6−グルコシド結合をも
特異的に切断する能力を有しているが、前記実施例から
明らかなように、本発明のアルスロバクタ−属に属する
微生物が産生ずるエンドデキストラナーゼは、ケトミウ
ム属やペニシリウム属起源のデキストラナーゼに比し、
デキストラン分解活性単位で同一酵素単位を使用しても
、ストレプトコッカス・ごニータンスIP013955
株の産生ずる不溶性グルカンに対し3〜6倍の高分解率
を示している(実施例2)。さらに、アルスロバクタ−
属に属する微生物が産生ずるエンドデキストラナーゼと
共にα−アミラーゼを併用すると、前記不溶性グルカン
の分解に顕著な相乗効果を示すことが明らかである(実
施例4および5)。
ルカン6−グルカノヒドロラーゼ、 EC3,2゜1.
11)は細菌性多糖デキストランをエンド様式で加水分
解する酵素として知られており、う蝕原性連鎖球菌スト
レプトコッカス・逅ニータンスなどが生産する不溶性グ
ルカン(ムタン)中のα−1゜6−グルコシド結合をも
特異的に切断する能力を有しているが、前記実施例から
明らかなように、本発明のアルスロバクタ−属に属する
微生物が産生ずるエンドデキストラナーゼは、ケトミウ
ム属やペニシリウム属起源のデキストラナーゼに比し、
デキストラン分解活性単位で同一酵素単位を使用しても
、ストレプトコッカス・ごニータンスIP013955
株の産生ずる不溶性グルカンに対し3〜6倍の高分解率
を示している(実施例2)。さらに、アルスロバクタ−
属に属する微生物が産生ずるエンドデキストラナーゼと
共にα−アミラーゼを併用すると、前記不溶性グルカン
の分解に顕著な相乗効果を示すことが明らかである(実
施例4および5)。
そして、このα−アミラーゼの使用は高価なエンドデキ
ストラナーゼの使用量の減少を可能ならしめるという利
点をもたらすものである。
ストラナーゼの使用量の減少を可能ならしめるという利
点をもたらすものである。
さらに、本発明において使用するエンドデキストラナー
ゼはヒト唾液α−アくラーゼの存在下で、相乗的に歯垢
中の不溶性グルカンの分解に寄与し、また、唾液中のC
a”″は本発明において使用するエンドデキストラナー
ゼの有効な保護剤としての作用を有すものである。
ゼはヒト唾液α−アくラーゼの存在下で、相乗的に歯垢
中の不溶性グルカンの分解に寄与し、また、唾液中のC
a”″は本発明において使用するエンドデキストラナー
ゼの有効な保護剤としての作用を有すものである。
したがって、本発明の歯垢分解剤の効果は極めて顕著な
ものであって、これにより、ストレプトコッカス・ξニ
ータンスの口腔内への定着及び新たな歯垢形成を阻止し
、う蝕を有効かつ効率的に防止することが可能となるも
のである。
ものであって、これにより、ストレプトコッカス・ξニ
ータンスの口腔内への定着及び新たな歯垢形成を阻止し
、う蝕を有効かつ効率的に防止することが可能となるも
のである。
第1図はアルスロバクタ−・グロビフォルごスW31菌
エンドデキストラナーゼおよび他の糸状菌起源のデキス
トラナーゼの不溶性グルカンに対する分解率の比較を示
す図であり、第2図はアルスロバクタ−・グロビフォル
ごスW31菌エンドデキストラナーゼおよび起源を異に
する各種α−アミラーゼの不溶性グルカンに対する分解
活性の比較を示す図である。また、第3図はアルスロバ
クタ−・グロビフォルミスW31菌エンドデキストラナ
ーゼと起源を異にする各種α−アミラーゼとを併用した
場合の不溶性グルカンに対する分解活性の比較を示す図
であり、第4図はアルスロバクタ−・グロビフォルミス
W31菌エンドデキストラナーゼとバチルス・リケニフ
ォルミスα−アミラーゼとを併用した場合の不溶性グル
カンに対する分解活性の比較を示す図である。
エンドデキストラナーゼおよび他の糸状菌起源のデキス
トラナーゼの不溶性グルカンに対する分解率の比較を示
す図であり、第2図はアルスロバクタ−・グロビフォル
ごスW31菌エンドデキストラナーゼおよび起源を異に
する各種α−アミラーゼの不溶性グルカンに対する分解
活性の比較を示す図である。また、第3図はアルスロバ
クタ−・グロビフォルミスW31菌エンドデキストラナ
ーゼと起源を異にする各種α−アミラーゼとを併用した
場合の不溶性グルカンに対する分解活性の比較を示す図
であり、第4図はアルスロバクタ−・グロビフォルミス
W31菌エンドデキストラナーゼとバチルス・リケニフ
ォルミスα−アミラーゼとを併用した場合の不溶性グル
カンに対する分解活性の比較を示す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、アルスロバクター属に属する微生物が産生するエン
ドデキストラナーゼを含有する歯垢分解組成物。 2、アルスロバクター属に属する微生物が産生するエン
ドデキストラナーゼ及びα−アミラーゼを含有する歯垢
分解組成物。 3、アルスロバクター属に属する微生物がアルスロバク
ター・グロビフォルミスW31菌株(NRRLB−44
28)である請求項1または2記載の歯垢分解組成物。 4、上記組成物の形態が、歯磨き剤、義歯洗浄剤、トロ
ーチ、マウスウォッシュ、チューインガム、あるいはキ
ャンディーである請求項1〜3記載の歯垢分解組成物。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1195424A JPH0363215A (ja) | 1989-07-29 | 1989-07-29 | 歯垢分解組成物 |
EP90307472A EP0411770A1 (en) | 1989-07-29 | 1990-07-09 | Dental plaque degrading compositions |
US07/552,533 US5085851A (en) | 1989-07-29 | 1990-07-16 | Dental plaque-degrading compositions |
CA002022055A CA2022055A1 (en) | 1989-07-29 | 1990-07-26 | Dental plaque-degrading compositions |
KR1019900011444A KR910002422A (ko) | 1989-07-29 | 1990-07-27 | 치석 분해 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1195424A JPH0363215A (ja) | 1989-07-29 | 1989-07-29 | 歯垢分解組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0363215A true JPH0363215A (ja) | 1991-03-19 |
Family
ID=16340845
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1195424A Pending JPH0363215A (ja) | 1989-07-29 | 1989-07-29 | 歯垢分解組成物 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5085851A (ja) |
EP (1) | EP0411770A1 (ja) |
JP (1) | JPH0363215A (ja) |
KR (1) | KR910002422A (ja) |
CA (1) | CA2022055A1 (ja) |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US5306639A (en) * | 1985-03-20 | 1994-04-26 | Aizo Matsushiro | DNA encoding glucanase enzymes |
US5747005A (en) * | 1995-08-02 | 1998-05-05 | Barels; Ronald R. | Oil-based, anti-plaque dentifrice composition |
US5871714A (en) * | 1997-10-16 | 1999-02-16 | Pharmacal Biotechnologies, Inc. | Compositions for controlling bacterial colonization |
US6413501B2 (en) * | 1997-10-17 | 2002-07-02 | Novozymes A/S | Plaque-inhibiting oral compositions |
US6042823A (en) * | 1998-07-02 | 2000-03-28 | Amano Pharmaceuticals Co., Ltd. | Enzyme composition and use thereof |
US20030108846A1 (en) * | 2001-12-06 | 2003-06-12 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Disposable oral hygiene device and methods of making same |
CN103343099B (zh) * | 2013-07-02 | 2015-04-22 | 淮海工学院 | 来自海洋的节杆菌及其产低温右旋糖苷酶的方法 |
CN104207983B (zh) * | 2014-08-26 | 2017-08-25 | 华南理工大学 | 一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE1467951A1 (de) * | 1963-09-04 | 1969-02-13 | Iptor Pharmazeutische Praepara | Proteolytische Enzyme enthaltende Zahnreinigungsmittel |
FR4675M (ja) * | 1964-06-05 | 1966-12-19 | ||
GB1284728A (en) * | 1968-10-23 | 1972-08-09 | Aspro Nicholas Ltd | Dental caries control |
US3985869A (en) * | 1969-06-07 | 1976-10-12 | Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. | Dental caries-inducing microorganism cells lytic enzyme |
BE755331A (fr) * | 1969-09-01 | 1971-02-01 | Blendax Werke Schneider Co | Produits de soins buccaux et dentaires |
BE756129A (fr) * | 1969-09-25 | 1971-02-15 | Blendax Werke Schneider Co | Produit dentrifice |
BE756289A (fr) * | 1969-09-25 | 1971-03-01 | Blendax Werke Schneider Co | Produit dentifrice |
US3686393A (en) * | 1970-02-12 | 1972-08-22 | Merck & Co Inc | Method for inhibiting dental plaque |
US4152418A (en) * | 1970-04-01 | 1979-05-01 | Lever Brothers Company | Zinc and enzyme mouthwash and mouthwash concentrate for reducing dental plaque and calculus formation |
US4082841A (en) * | 1975-10-10 | 1978-04-04 | Lever Brothers Company | Dentifrice |
JPS5663915A (en) * | 1979-10-27 | 1981-05-30 | Lion Corp | Tooth paste composition |
JPS56110609A (en) * | 1980-02-06 | 1981-09-01 | Lion Corp | Composition for oral cavity |
-
1989
- 1989-07-29 JP JP1195424A patent/JPH0363215A/ja active Pending
-
1990
- 1990-07-09 EP EP90307472A patent/EP0411770A1/en not_active Withdrawn
- 1990-07-16 US US07/552,533 patent/US5085851A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-26 CA CA002022055A patent/CA2022055A1/en not_active Abandoned
- 1990-07-27 KR KR1019900011444A patent/KR910002422A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0411770A1 (en) | 1991-02-06 |
KR910002422A (ko) | 1991-02-25 |
CA2022055A1 (en) | 1991-01-30 |
US5085851A (en) | 1992-02-04 |
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