JPH03501253A - エイズ（ａｉｄｓ）治療を目的とするリポソームによるヌクレオシド類似物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般的には、ヌクレオシド類似物質を用いたウィルス感染症の治療に 関する。より特定的には、本発明は、修飾された抗ウイルス性ヌクレオシド類似 物質をリポソームにカプセル化して、哺乳類に投与した場合の前記類似物質の薬 効を高めることに関する。

本発明は、米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ 　Ｈｅａｌｔｈ）よりカリフォルニア大学および米国政府復員軍人庁（Ｖｅｔｅ ｒａｎｓ　Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に対して支給された米国政府助成金 弟ＧＭ−２４９７９号を用いてなされた。したがって、米国政府は、本発明に対 して一定の権利を有する。

従来の技術 本明細書に参照され、発明の背景を記載し、かつその実践に関して更にその詳細 を提供する出版物、およびその他の参考資料は、参照によって本発明に組み込ま れるものとする。便宜上、参考資料は、番号を用いてこれを参照し、本明細書の 末尾に文献目録としてこれを一括記載する。

ウィルス感染症の治療のためのヌクレオシド類似物質の利用に対しては、近年多 大の関心が寄せられている。抗ウイルス性ヌクレオシド類似物質は、ウィルス複 製の際に、ウィルスの逆転写酵素による新ＤＮＡの合成を妨げることによって、 ウィルスの機能を阻害するように設定される。ヌクレオシドは、ＤＮＡまたはＲ ＮＡの前駆体である。１個のヌクレオシドは、五炭糖１個に結合したピリミジン またはプリン１個からなる。

ＤＮＡ合成の際には、遊離ヌクレオシド三リン酸（リン酸基３個が結合したヌク レオシド）が成長中のＤＮＡ鎖の末端と反応する。この反応には、形成されつつ あるＤＮＡ鎖末端の糖環の３°の位置のヒドロキシル基に対する、遊離ヌクレオ シド三リン酸の５°の位置のリン酸基の結合が必要である。残る２個のリン酸基 はこの反応の際に遊離し、結果的にヌクレオシド１個がＤＮＡ鎖に付加される。

ヌクレオシド類似物質は、自然界に出現するヌクレオシドに酷似しているために 、ウィルスＤＮＡの合成に参加できるような化合物である。しかしながら、抗ウ イルス性ヌクレオシドには、化学構造上の差異が意図的に設定されていて、これ が、ウィルスの逆転写酵素を阻害し、あるいは、成長中のＤＮＡ鎖に類似物質が 結合した場合に、その後のＤＮＡ合成の進展を妨げるのである。アジドチミン（ ＡＺＴ）　、ジデオキシシチジン、ジデオキシアデノシン、アシクロビル、リバ ビラン、およびビダラビンは、ウィルスＤＮＡまたはＲＮＡの合成を中断させる として開発途上にあり、あるいは薬効が見出されたヌクレオシド類似物質の例で ある（１）。

後天性免疫不全症候群（エイズ）は、２０世紀後半の最初の大規模な世界的流行 病であると言われる（２）。エイズは、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）によっ て引き起こされる。現時点では、エイズに対する効果的な治療法は皆無である。

ジデオキシヌクレオシド類似物質、例えばＡＺＴは、現在公知の最も強力な薬剤 であるが、最近行われたヒトにおける試験においては、貧血症（２４％）および 顆粒球減少症（１６％）からなる強い毒性が指摘されている（３７．３８）。

ＨＩＶは、ＣＤ４　（Ｔ４）表面抗原を有する細胞、例えばＣＤ４ヘルパ一リン パ球はもとより、ＣＤ４単球およびマクロファージにも感染する。ＣＤ４リンパ 球の感染は、細胞溶解性感染症をもたらしく３〜５）、また、ＨＩＶ感染による 進行性免疫不全の一因ともなる（６．７）。最近では、ＣＤ４単球またはマクロ ファージは、生体外でも（８，９）生体内でも（１０〜１５）感染することが明 らかにされている。単球またはマクロファージの感染もまた、免疫不全にも、Ｈ ＩＶに誘発された脳疾患にも寄与する可能性がある。更に、単球またはマクロフ ァージにおけるＨＩＶの複製は、リンパ球におけるよりも長時間にわたり、より 細胞溶解性が少ないことから、これらの細胞がウィルスの備蓄部位として働く可 能性がある（８，９．１３）。　ＡＺＴおよびその他のジデオキシヌクレオシド を、これら薬剤の有害な副作用が薄められるような方法で投与する手段が提供す ることは、望ましいことである。更に、単球またはマクロファージにジデオキシ ヌクレオシドを選択的に標的投与（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）　して、このような細 胞群のウィルス感染に対するこれら薬剤の効果の促進をもたらすことも所望され るであろう。

１９６５年に、アレックス・パンガム（Ａｌｌｅｘ　Ｂａｎｇｈａｍ）とその共 同研究者らは、ホスファチジルコリンの乾燥薄膜が水和に際して閉じた二分子小 葉胞（ｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒ　１ｅａｆｌｅｔｌ　ｖｅｓｉｃｌｅ）を自発的 に形成することを発見した。彼らは、このような分散相を用いて陽イオンの捕獲 や拡散を研究した（１８）。その結果°、このような構造はリポソームとして公 知となった。その後、リポソームに関しては多くの可能な用途が示唆され、１９ ７６年までには、６０種を超える物質がリポソームとしてカプセル化されること が報告されていた。医学におけるリポソームには、リポソームによるインシュリ ンの経口投与、器官に対するリポソームの選択的標的投与、リポソームによる担 体を用いた欠失酵素および遺伝物質の補充、など広汎な用途が示唆されるに至っ た（１９）。

しかしながら、上記の目標の多くは、実現困難であることも明らかにされた。

質的には実現不可能であると思われていて、洞様構造、あるいは有窓内皮を有す る器官のみが標的となり得るようである（２０．２１）。欠乏している酵素や遺 伝物質の補充もまた、リポソームが脈管区画から比較的急速に除去され、かつ細 胞表面の膜と融合するが故に、容易に実現しないものと思われる（２０）。

マーク・オストロ（Ｍａｒｃ　０ｓｔｒｏ）による最近の総説において指摘の通 り、リポソームの有望な用途も多数存在し、それらはまさに臨床の場に移されよ うとしている（２２）。例えば、リポソームによるアンチモン薬剤は、ブラック （Ｂｌａｃｋ）およびワトソン（Ｗａｔｓｏｎ）　（２３）　、およびアーヴイ ング（Ａｌｖｉｎｇ）ら（２りによって独立に明らかにされた通り、シーシュマ ニア症の治療に際して遊離薬剤よりも数百倍の薬効がある。リポソームに封入し たアンホテリシンＢは、全身的真菌性疾患による免疫機能低下の患者の治療に際 して、遊離薬剤よりも薬効があるものと思われる（２５．２６）。リポソームへ のカプセル化のその他の用途としては、ドキンルビシン毒性の抑制（２７）　、 およびアミノグリコシド毒性の緩和（２２）が挙げられる。

前述の通り、マクロファージはＨＩＶ感染源の主要な備蓄部位であり（２８，２ ９゜３０）、かつ、マクロファージはリポソーム取り込みの最初の部位でもある （２０゜２１）と現在考えられている。したがって、リポソームを活用して、エ イズ治療の際に抗ウイルス性ヌクレオシド類似物質の薬効を高めることが所望さ れるものと思われる。

エイズ以外の疾病の治療を目的として、ヌクレオシド類似物質、例えばヨードデ オキシウリジン（ＩＵＤＲ）　、アシクロビル（ＡＣＶ）　、およびリバビラン をリポソームに組み込もうとの試みがなされている（１６．１７）。しかしなが ら、これらの試みは、このような比較的小型のヌクレオシド類似物質はリポソー ムから急速に漏出して（１６，１７）　、標的投与の有効性を低下させる結果と なることから、充分満足できるまでに至っていない。

光咀の要約 本発明によれば、漏出を妨げ、あるいは相当程度減少させるような方法で抗ウイ ルス性ヌクレオシド類似物質をリポソーム内に封入する、エイズに対する新奇な 治療法が開示される。漏出のこのような減少によって、毒性の緩和がもたらされ 、また、リポソームの使用によって、より多量の抗ウイルス性ヌクレオシド類似 物質がマクロファージに到達して、そのような細胞に存在するＨＩＶ感染に対す るこれらの薬剤の効果を確実に高めることが可能となる。リポソームにカプセル 化されたヌクレオシドの類似物質は、これをリン酸化前の抗ウイルス性ヌクレオ シドとして、本来なら薬剤自体の抗ウィルス活性を大幅に限定してしまうような 、マクロファージにおける酵素学的に欠陥のある段階を迂回することによって、 処方物の抗ウイルス性の薬効を更に高めることができるのである（４３）。

本発明は１、リポソームへのカプセル化の前にヌクレオシド類似物質をリン酸誘 導体へと転化するならば、リポソームからの前記類似物質の漏出は大幅に減少す るという発見に基づく。ヌクレオシド類似物質をそれぞれのリン酸誘導体へと転 化することは、リポソームからの類似物質の漏出を妨げるばかりでなく、ＨＩＶ に感染したマクロファージ細胞に対する類似物質の薬効をも増大させるものと考 えられる。前述の通り、ヌクレオシドは、成長中のＤＮＡまたはＲＮＡ鎖への結 合に先立って、リン酸化されて三リン酸塩の形態となる。マクロファージは、デ オキシヌクレオシドキナーゼ活性が低下しており、かつヌクレオシドをリン酸化 する能力が減退していることが知られている。したがって、遊離ヌクレオシド類 似物質（すなわち、非リン酸化類似物質）、例えばＡＺＴ、ジデオキシシチジン 、あるいはジデオキシアデニンは、マクロファージ細胞中に存在するＨＩＶに対 して特に薬効があるというわけではない（４３）。しかしながら、本発明のリン 酸化された類似物質は、これをリポソームの放出系を用いて投与した場合は、マ クロファージにおけるデオキシヌクレオシドキナーゼ活性の不在によって生じた 代謝的障壁を迂回するが故に、より効果的である。

上記に考察の本発明の特徴、およびその付帯的な利点は、下記の詳細な説明を参 照することによって、更に深く理解されるものと思われる。

詳縄友説明 本発明は、基本的には、ウィルス感染症の治療の際の使用を目的とする、リン酸 化された抗ウイルス性ヌクレオシド類似物質のリポソーム内へのカプセル化に関 わるものである。本発明は、各種ウィルス感染症の治療に使用され得る広範囲の ヌクレオシド類似物質に適用の道が開かれているものの、下記の説明は、後天性 免疫不全症候群（エイズ）および関連するレトロウィルス感染症、例えばエイズ 関連症候群（ＡＲＣ）　、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２による無症候性感染症、およ びＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２の悪性（リンパ腫）または神経性（熱帯性痙 性麻痺）の併発症に罹患した患者の治療に関してなされるものとする。

ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ　：従来はＨＴＬＶ−ＩＩ［／ＬＡＶと称した） は、エイズの疫学上の病原体である。血清学的調査からの推定によれば、１９７ ０年代後期にこのウィルスが米国に持ち込まれて以来、百万人を超える米国人が 感染したとされる。現在までには、米国では２百万人もの多数の人々が感染して いる可能性があると推測される。これらの血清陽性の個人の大多数は、無症候で はあるものの、全てではないにしてもそのほとんどは、持続的に感染しており、 したがって、感染の潜在的伝播者の予備軍を構成している。これらの個人のかな りの部分にリンパ腺症その他の症状が認められ、少数の者（年間数％）が冷酷な 予後が待つエイズにまで進行するのである。現在この少数派は、米国だけで３５ 　、０００Å以上を数え、その数はほぼ１年ごとに倍加している。

細胞レベルにおいては、ＨＩＶは、ＣＤ４　（Ｔ４）ヘルパーリンパ球に感染し 、これらの細胞の死を招来する。ＣＤ４ヘルパ一リンパ球の減少によって、宿主 は周知の特有の日和見感染および悪性腫瘍に対して無防備となる。ＨＩＶは、１ １０にウィルス表面糖蛋白質（ｇｐＨＯ）とリンパ球のＣＤ４抗原との間にある 種の複合体を形成することによって、そのＣＤ４受容体と結合する（３２．３２ ）。その後、ウィルスは、ＮＨ，ＣＩおよびアマンタジンを用いた細胞の前処理 によって増殖的感染が遮断されるとの知見から示唆される通り、ヱンドサイトー シスによって細胞に侵入すると考えられている。想定されるエンドソーム膜との 酸を介した融合の後、ウィルスの逆転写酵素とＲＮＡとは、細胞質への到達を達 成し、最終的には、ウィルスの遺伝物質が細胞のゲノムへの到達を達成する。ヤ ーショアン（Ｙａｒｃｈｏ−ａｎ）およびブローダ−（Ｂｒｏｄｅｒ）による最 近の総説（３３）に記載の通り、ＨＩＶの複製には、治療的介入の標的となり得 る段階が少なくとも９段階存在する。

現時点では、ウィルス逆転写酵素の阻害が、抗レトロウイルス療法の最も有望な 道を示している。

最近、ＣＤ４ヘルパ一リンパ球以外の細胞がＨＩＶに感染することが証明されて いる（２８，２９．３０）。このウィルスは、Ｂ細胞、前骨髄球、および単球中 で複製することが明らかとなった。また、脳および肺から単離された単核食細胞 にＨＩＶが潜伏していること、および、正常な末梢血マクロファージが大量のウ ィルスを産生ずることも明らかにされている。更に、ヒトの肺胞マクロファージ および脳マクロファージにもＨＩＶが潜伏していて、これらの細胞に対するウィ ルスの細胞変性効果は、ＨＩＶに感染したヘルパー１４９２８球で観察されるそ れよりも低い。ＨＩＶに感染したマクロファージと単球とは、ウィルスの備蓄部 位として働き、このことが感染宿主におけるウィルスの存続および拡散の機構で あり得ることが提唱されている（２９．３０）。

本発明は、リポソームに対するマクロファージの親和性を輸送手段として利用し て、リポソームにカプセル化された抗ウイルスヌクレオシド類似物質を、マクロ ファージ、単球、および、その他リポソームを取り込み得るあらゆる感染細胞に 到達させようとするものである。更に、カプセル化に先立つヌクレオシド類似物 質のリン酸化によって下記の利点がもたらされる。すなわち、１）ヌクレオシド 類似物質のリポソームからの漏出が妨げられること、２）マクロファージが遊離 ヌクレオシドをリン酸化できないことに付随する代謝障壁が克服されることであ る。最後に、リン酸化されたヌクレオシドのリポソームへのカプセル化は、血漿 中の酵素、例えばアルカリ性ホスファターゼ、ホスホジェステラーゼ、あるいは ５°−ヌクレオチダーゼによるリン酸エステルの加水分解を防ぐのに不可欠であ ることが挙げられる。

ヌクレオシド類似物質は、３°−アジド−３゛−デオキシチミジン（アジドチミ ジン、すなわちＡＺＴ）　、２°、３°−ジデオキシシチジン（ジデオキシシチ ジン、すなわちｄｄＣ）　、２°、３°−ジデオキシアデノシン（ジデオキシア デノシン、すなわちｄｄＡ）　、リバビラン、あるいは他のあらゆる適切なジデ オキシヌクレオシド類似物質など、エイズの治療に用いられる公知のいかなる類 似物質でも可能である。ＡＺＴは、好適な類似物質である。

類似物質は、慣用の方法、例えばトールヘン（Ｔｏｏｒｃｈｅｎ）およびトパル （Ｔ。

ｐａｌ）のオキシ塩化リン法（３４）に従ってこれをリン酸化する。好適な修飾 類似物質は、５°−−リン酸塩である。ＡＺＴおよびその他のジデオキシヌクレ オシドには、５゛−ヒドロキシル基のみが存在することから、リン酸化の際には ５°−−リン酸塩のみが形成される。これに代えて、５°−−リン酸ヌクレオシ ドチオエステルも有効である。抗ウイルス性ヌクレオシドのニリン酸塩および三 リン酸塩の類似物質も有効であるが、これら二または三リン酸塩類似物質は、− リン酸塩よりも不安定である傾向があり、水溶液中で徐々に加水分解されて、− リン酸誘導体へと復帰する可能性がある。

リン酸化後は、ヌクレオシド類似物質をリポソームにカプセル化する。カプセル 化は、周知のリポソームカプセル形成法、例えば超音波処理および押し出し成型 に従ってこれを行うことができる。適切な慣用のカプセル形成法としては、パン ガムら（１８）　、オルリン（Ｏｌｓｏｎ）ら（３９）、ショカ（Ｓｚｏｋａ） およびパパハジャポウロス（Ｐａｐａｈａｄｊａｐｏｕｌｏｓ）　（４０）、メ イヒュー（Ｍａｙｈｅｗ）ら（４１）キム（Ｋｉｍ）ら（４２）　、メイヤー（ Ｍａｙｅｒ）ら（３６）、およびフクナガ（Ｆｕｋｕｎａｇａ）ら（３５）によ って発表された方法があるが、これらに限定されるわけではない。

リポソームは、天然供給源、例えば卵あるいは動植物から産出されるリン脂質、 例えばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジ ルグリセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルセリン、あるいはホスフ ァチジルイノシトールなど、いかなる慣用の合成または天然リン脂質のリポソー ム材料を用いても、これを製造することができる。合成リン脂質としては更に、 例えばシミリストイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリ ン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリ ン、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチ ジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオ レオイルホスファチジルエタノールアミン、およびジステアロイルホスファチジ ルエタノールアミンをも用いることができる。その他の添加剤、例えば、コレス テロール、または他のステロール、糖脂質、セレブロシド、ガングリオシド、ス フィンゴ脂質、グルコサイコシンまたはサイコシンも、慣用的に公知の通り、こ れを添加することができる。所望の場合は、リポソームに用いられるリン脂質お よび添加剤の相対的な量を変化させることができる。好適なその範囲は、リン脂 質が約８０〜９９モル％で、サイコシンまたは他の添加剤が１〜２０モル％であ る。コレステロールは、０〜５０モル％の範囲でこれを用いることができる。リ ポソームに封入される抗ウイルス性ヌクレオシド類似物質の相対的な量は、リポ ソームの水性区画中の対人類似物質の濃度を約０．００１〜約３００ミリモルの 範囲でこれを変化させることができる。

リポソームに封入したリン酸化ヌクレオシド類似物質を患者に投与するには、リ ポソームの投与に利用されるあらゆる公知の方法が用いられる。緩衝性水溶液と して、静脈内、腹腔内、あるいは筋向投与でリポソームを投与することができる 。リポソーム構造を破壊せず、あるいは、カプセル化されたリン酸化ヌクレオシ ド類似物質の活性を損なわない限り、いかなる製薬上許容し得る緩衝性水溶液を も用いることができる。適切な緩衝性水溶液の一例としては、ｐＨが約７．４で 、５ミリモルのリン酸のナトリウム塩を含有する１５０ミリモルＮａＣ１がある が、他の生理的な緩衝性塩類溶液も用いることができる。

投与量は、感染の範囲とその重篤性の度合とに従って、これを変化させることが できる。カプセル化されたリン酸化ヌクレオシド類似物質の投与濃度に関しては 、日量で体重１ｋｇあたり約０．００１〜１，０００■が患者に投与されるよう にしなければならない。

リポソームからのリン酸化ヌクレオシド類似物質漏出の減少を証明する実例を下 記に示す。

［”Ｈ１チミジンおよび［１４Ｃ］チミジン−５°−−リン酸を用いて初期調査 を実施した。２．０ｍｌのＲＰＭＩ緩衝液に溶かした２８．６ｘ１０６ＤＰＭの ［８Ｈコチミジン、および２，５ｘ１０６ＤＰＭの［！４Ｃ］チミジンー５°− −リン酸（［”Ｃ］ＴＭＰ）を卵ホスファチジルコリンおよびコレステロールの 薄膜（モル比で２：１）に加える。１０分間渦流を与えて膨潤させた後、懸濁液 に２０分間超音波処理を施し、フクナガら（３５）の論文に記載の要領で、セフ ァロース４Ｂのカラムを通過させる。多重層小胞（ＭＬＶ）および小単層小胞（ ＳＵＶ）に封入された各化合物のＤＰＭ　（および％）を第１表に示す。ＭＬＶ においては、［”ＣＩＴＭＰは１１％が保持されるのに対して、［”Ｈ］チミジ ンは０．１％が保持されるに過ぎない。ＳＵｖでは、［”Ｃ］ＴＭＰの５％が封 入されるのに対して、［ｌＨ］チミジンは０．４％のみ封入される。

上記のＭＬＶおよびＳＵＶをアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）社の限外濾過セルに入れ て、小容積に濃縮した場合は、［”ＣＩＴＭＰは８６〜８７％がリポソームに保 持されるのに対して、［”Ｈ］チミジンは１８〜２１％が保持されるに過ぎない 。結局、全［”Ｈ］チミジンの０．０２〜０．０９％が保持されるに過ぎないの に対して［１’Ｃ］ＴＭＰは、０．９〜４．３％が保持される。最終的には［１ ’Ｃ］ＴＭＰの方が５０倍も多くリポソームに保持されるという事実は、［”Ｈ ］チミジンは、おそらく脂質二重層を越えては急速に拡散するため、封入される ことが不可能なことを示している。

前記トールヘンおよびトパルのオキシ塩化リン法（３４）に従って、標識したＡ ＺＴ−５°−−リン酸（［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰ）を調製した。２０ナノモルのＡ ＺＴ　（２６０マイクロキユリー）を窒素の存在下で乾燥させる。リン酸トリメ チル２０μｍ、およびトリエチルアミン４μｍを加え、混合液を一１Ｏ℃に冷却 する。オキシ塩化リン４μｍを加え、混合液を一１０℃で３０分間反応させる。

等容の０５モルのトリエチルアミン水溶液の添加によって、反応を停止させる。

アルテックス（Ａｌｔｅｘ）社の製品番号筒Ｃ１８番ウルトロスフエアーオー・ ディー・ニス（Ｕｌｔｒｏｓｐｈｅｒｅ−ＯＤ４゜なるカラムによる高性能液体 クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた判定によれば、ＡＺＴは９０％以上の 収率でＡＺＴ−ＭＰに転化された。

得られた［’Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰを、［１４Ｃコチミジンリン酸塩の場合と同様に してリポソームにカプセル化し、次いで、標識された遊離ＡＺＴ　（［”Ｈ］Ａ ＺＴ）と対比して漏出を試験した。試験結果を第２表に示す。［”Ｈ］ＡＺＴは ０．２％がリポソームに封入されたに過ぎないのに対して、［”Ｈ］ＡＺＴ−Ｍ Ｐは３．８％が封入された。このことは、［”Ｈ］チミジンと同様に（第１表） 　、［”Ｈ］ＡＺＴは、セファロース４Ｂカラムで単離される際にリポソーム外 へと拡散することを示している。対照的に、［２Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰは、容易に封 入される。すなわち、全量の３．８％がリポソーム分画で回収されたが、これは ［”　ＨＩＡＺＴのカプセル化の百分比に対して１９倍の増加である。

培養されたＭＴ−２およびＵ９３７なる細胞とヒトマクロファージとにおける、 ＨＩＶの複製に対するリポソームのｄ丁−リン酸塩の効果を下記の要領で試験し た。

真空中での回転蒸発によって、コレステロール２７ｍｇおよび卵ホスファチジル コリン１１０ｍｇからなる薄膜を作成し、６０ｆノモルのＡＺＴ−ＭＰと、６マ イクロキユリーの［”Ｈ］ＡＺＴ−紀とを含有するＲＰＭＩ培地１培地１加ｌて 、混合液を２０℃で２０分分間上うし、次いで、ｌＯプサイルの渦流を与えて［ ”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰ含有ＭＬ、Ｖを製造する。

リペックス・エキストルーダ［Ｌｉｐｅｘ　Ｅｘｔｒｕｄｅｒ　：カナダ国ブリ ティッシュコロンビア州バンク−バー所在、リペックス・バイオメンブレインズ 社（ＬｉｐｅｘＢｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ、　Ｉｎｃ、）製コなる押し出し成型 機を使用し、メイヤー（Ｍａｙｅｒ）らの方法（３６）を用いて直径１００止の 小単層小胞（ＥＶｌｏｏ）を調製する。この方法は、２層に積層したポリカーボ ネートフィルタ［米国カリフォルニア州プレザントン所在、ニュクレオポア（Ｎ ｕｃｌｅｏｐｏｒｅ）社製］の通過による大型多重層小胞の押し出し成型に基づ く。

得られたリポソーム製剤をセファロース４Ｂの１ｘ１５ｃｍのカラムに通し、Ｒ ＰＭＩ緩衝液を用いて溶出させる。［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰを含有するＥＶｌｏｏ のリポソームは、ボイド容に溶出し、遊離［３Ｈ］薬剤は、カラムの塩類容に回 収される。このような条件下では、［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰの１４．３％が封入さ れた。緩衝液の単位容積あたり更に多くのリン脂質を用い、かつ凍結および融解 を反復することによって、更に高いカプセル化効率を達成することが可能である （３６）。

ＥＬＩＳＡ法に用いるプレート中で増殖中のＭＴ−２およびＵ９３７なる細胞に 、［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰを含有するＥＶ１００リポソームを各種の濃度で加え、 前記プレートの他の凹部にはＡＺＴ−ＭＰおよびＡＺＴを加えた。３日後に、細 胞変性効果（ＣＰＥ）について酊−２細胞（１凹部あたりの細胞数が６ｘ１０５ 個）を調べた。ＣＰＨの評価の結果を第３表に示す。

第３表 実験第８７２５番 ＭＴ−２細胞におけるＨＩＶ複製に対するリポソームＡＺＴ−ＭＰの効果。７日 後。

ＰＥ 薬剤量／凹部　遊離　リポソームＡの　リポソームＢの２　ｏ；ｏ　ｏ；ｏ　ｏ ：。

Ｏ，２ｏ；ｏ　、　ｏ；ｏ　ｏ；。

０．０２　４＋４＋　３＋　；０　０　；００．００２　４＋；４＋　４＋；４ ＋　ｏ；。

０．００２　４＋；４＋　４：４＋　４＋；４＋対照群は薬剤なし、４＋４＋； などの表示はＣＰＥ、すなわち細胞変性効果。ＲＰＭＩ培地中でメイヤーらの方 法（３６）を用いて［”Ｈ］ＡＺＴ−リン酸含有リポソームを調製し、貯溜され たリポソームのピークの［”Ｈ］含量を用いてカプセル化リポソームのＡＺＴ− ＭＰを定量した。１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中のＨＩＶ感染ＭＴ− ２細胞に［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰ含有リポソームを加えて、最終容積を０．２００ ｍ１とした。リポソームＡは、６７モル％の卵ホスファチジルコリンと３３モル ％のコレステロールとからなり、リポソームＢは、６．６モル％のサイコシン、 ６０モル％の卵ホスファチジルコリン、および３３．３モル％のコレステロール を用いて作成した。ＣＰＨの評価付けは、ハードル（Ｈａｅｒｔｌｅ）らの論文 （４４）に記載の要領でこれを行なった。この系では、１＋とは１凹部あたり１ 〜３個のシンシチウム（巨大細胞）に相応する。２＋は、１凹部あたり３〜１０ 個のシンシチウムに、また、２０％までの細胞死に相応する。３＋は、１凹部あ たり１０〜３０個のシンシチウム、および細胞生存率の２０〜７０％の低下に相 応し、４＋は、１凹部あたり３０個以上のシンシチウム、および少なくとも７０ ％の生存細胞数の低落に相応する（４４）。

同様に、ＥＬＩＳＡ用プレートで増殖中のＵ９３７細胞６ｘ１０５個にＨＩＶを 接種した。上記の要領で、ＡＺＴ、　ＡＺＴ−ＭＰ、およびリポソームによるＡ ＺＴ−ＭＰを培養液に加えた。

増殖４日後に、細胞の上清を取り出し、１：１００に希釈。デュポンＥＬＩＳＡ システム（Ｄｕｐｏｎｔ　ＥＬＩＳＡ　Ｓｙｓｔｅｍ）なる装置（製品番号第Ｎ ＥＫ−０４１号）を用いて、ＨＩＶのｇｐ２４を検定した。結果を第４表に示す 。

第４表 Ｕ９３７細胞におけるＨＩＶ複製に対するリポソームＡＺＴ−ＭＰの効果 ｇｐ２４抗原、ｐｇ／ｍｌ 脂質量／凹部　薬剤量／凹部　遊離　リポソームＡ　リポソームＢ２．７２　２ ．０　１，０５０　３０　３００．８６　０，６３　１．２００　３０　３００ ．２７　０．２０　３．４５０　３０　３００．０８６　０．０６３　２，８５ ０　３０　３００．０２７　０．０２０　３，５００　８５０　３００．００８ ６ 一−−−−−−−−−虹並競−−−」」並−２埠虹−一一一り競虹−−−［”Ｈ ］ＡＺＴ−ＭＰ含有リポソームは、第１表におけると同様にして調製し、１０％ つシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地０．２００ｍ１中のＨＩＶ感染Ｕ９３７細胞に これを加えた。リポソームＡは、６７モル％の卵ホスファチジルコリンと３３モ ル％のコレステロールとからなり、リポソームＢには、６．６モル％のサイコシ ン、６０モル％の卵ホスファチジルコリン、および３３モル％のコレステロール が含まれる。結果は、２重試験の平均値である。

ＩＴ−２細胞および０９３７細胞に対して用いた方法に従い、培養されたヒトマ クロファージに対するリポソームＡＺＴ−−リン酸の効果も測定した。結果を第 ５表に示す。

第５表 培養ヒトマクロファージにおけるＨＩＶ複製に対するリポソームＡＺＴ−ＭＰの 効果 ｇｐ２４抗原、ｐｇ／ｍｉ 脂質量／凹部　薬剤量／凹部　遊離　リポソームＡ　リポソームＢマイクロモル 　ナノモル　ＡＺＴ　ＡＺＴ−ＭＰ　ＡＺＴ−ＭＰ２０．０　２，０１６　ｎ、 ｄ、　ｎ、ｄ。

６．３　１，８４４　ｎ、ｄ、　ｎ、ｄ。

２．７２　２．０　２，５２４　３０　３００．８６　０．６３　２．４８０　 ３０　３００．２７　０．２０　２．１１６　３０　１６００．０８６　０．０ ６３　２．１７２　３０　３００．０２７　０．０２Ｏｎ、ｄ、　３０　２２０ ｎ、ｄ、＝測定されず。表記濃度の［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰを含有する卵ホスファ チジルコリンのリポソームは、第１表におけると同様にして調製し、ヒトマクロ ファージにこれを加えた。培養３日後に、ｇｐ２４について上清を検定した。リ ポソームＡは、６７モル％の卵ホスファチジルコリンと３３モル％のコレステロ ールとからなり、リポソームＢには、６６モル％のサイコシン、６０モル％の卵 ホスファチジルコリン、および３３モル％のコレステロールが含まれる。

下記の実施例を更に追加した。

［”　ＨＩＡＺＴ−ＭＰを含有する卵ホスファチジルコリンおよびコレステロー ル（２：１）のリポソーム（直径１００ナノメートル）を、メイヤーらの押し出 し成型法（３６）を用いてＲＰＭＩ培養液中で作成し、セファロース４Ｂを用い たゲル浸透クロマトグラフィーによって得られたボイド容のピークにおける３Ｈ のカウント数を用いて、カプセル化された［”Ｈ］ＡＺＴ−ＭＰの量を測定した 。ＡＺＴ−ＭＰの量を変化させて加え、ＨＩＶ感染細胞に対する効果を、デュポ ンＥＬＩＳＡ検定用具一式を用いてＨＩＶ抗原であるｇｐ２４の産生を定量する ことによって判定した。２種類の形態のリポソームを作成し、これをリポソーム Ａ１およびリポソームＢとした。

リポソームＡは、６７モル％の卵ホスファチジルコリンと３３モル％のコレステ ロールとからなり、リポソームＢには、６．６モル％のサイコシン、６０モル％ の卵ホスファチジルコリン（Ｐの、および３３モル％のコレステロールが含まれ る。

試験の結果を第６表に示す。

第６表 Ｕ９３７細胞におけるＨＩＶ複製に対するリポソームＡＺＴ−ＭＰの効果 ｇｐ２４抗原、ｎｇ／ｍ１ ＰＣ量／凹部　薬剤量／凹部　遊離　リポソームＡ　リポソームＢ４．６　２． ０　２，７４０　６０　６００．４６　０．２　３．１２０　７８　６００．０ ４６　０．０２　５，０６０　２，１４０　１．３５３０．００４６　０．００ ２　４，４６０　２，１２０　１３．２９００．０００４６　０．０００２　１ ０，９１０　１３，１００　１３．９８００　０　（１５，４２０）　− 第６表について説明のＵ９３７に対する試験用に調製したリポソームＡＺＴ−Ｍ Ｐを、ＨＩＶ感染ヒトマクロファージに対しても用いた。第６表に関して前述し たと同一の仕方で試験を実施し、第７表に示した結果を得た。

第７表 ヒトマクロファージにおけるＨＩＶ複製に対するリポソームＡＺＴ−ＭＰの効果 ＰＣ量／凹部　薬剤量／凹部　遊離　リポソームＡ　リポソームＢ４．６　２． ０　２，０１６　３０　３００．４６　０．２　１．８７２　３０　３００．０ ４６　０．０２　２，２６８　３０　４９０．００４６　０．００２　２Ｊ３２ 　２，０８４　１，６３２０．０００４６　０．０００２　２，２４８　１，７ ３２　１．３１６０．００００４６　０．００００２　２，８００　１，４４８ 　１．７４４０　０　２．２７６ 上記によって、本発明の好適実施例を説明したわけであるが、技術の習熟者によ れば、ここには実例が開示されているに過ぎず、本発明の対象範囲内において、 他に各種の代替方法、適応策、変更がなされ得ることが留意されなければならな い。したがって、本発明は、ここに記載の特定の実施例に限定されずして、別掲 の請求範囲にのみ限定されるものである。

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５、ビー・リュー・マツトン（Ｐ、Ｊ、　Ｍａｄｄｏｎ）　、ニー・ジー・ダル グレイシュ、リュー・ニス・マクダガル（Ｊ、Ｓ、　ＭｃＤｏｕｇａｌ）　、ビ ー・アール・クラファム、アール・ニー・ワイス、およびアール・アクセル（Ｒ ，Ａｘｅｌ）　：　ｒＴ４遺伝子はエイズウィルス受容体を暗号化しており、免 疫系および脳で発現する（Ｔｈｅ　Ｔ４　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｅｓ　ｔｈｅ　 ＡＩＤＳ　ｖｉｒｕｓ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　ｉｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ）　 Ｊ　、セル（Ｃｅｌｌ）　、第４７巻（１９８６年）３３３ページ。

６、リュー・ディー・リフマン（Ｊ、Ｄ、　Ｌｉｆｓｏｎ）　、エム・ビー・フ ァインバーブ（Ｍ、Ｂ、　Ｆｅｉｎｂｅｒｇ）　、ジー・アール・ライニス（Ｇ 、Ｒ，Ｒｅｙｅｓ）　、エル・ワイン（Ｌ、　Ｒａｂｉｎ）　、ビー・バナブー ル（Ｂ、　Ｂａｎａｐｏｕｒ）　、　ニス°チャクラパルティ（Ｓ、　Ｃｈａｋ ｒａｂａｒｔｉ）　、ビー・モス（Ｂ１ＭＯ５Ｓ）、エフ・ウオンースタール（ Ｆ、　Ｗｏｎｇ−Ｓｔａａｌ）　、グーーエス・スタイ７−　（Ｋ、Ｓ、　Ｓｔ ｅｉｍｅｒ）、およびイー・ジー・エングルマン（Ｅ、Ｇ、　Ｅｎｇｌｅｍａｎ ）　：　ｒＨＴＬＶＩ［［／ＬＡＶの外皮糖蛋白質によるＣＤ４依存性細胞融合 の誘発（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ４−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｅｌｌ　ｆ ｕｓｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　ＨＴＬＶＩ［［／ＬＡＶ　ｅｎｖｅｌｏｐｅ　ｇｌ ｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）　Ｊ　、ネーチャー、第３２３巻（１９８６年）７２５ ページ。

７、ビー・ヨッフｘ　（Ｂ、　Ｙｏｆｆｅ）　、ディー・ルイス（Ｄ、　Ｌｅｗ ｉｓ）　、ビー・ペトリー（Ｂ、　Ｐｅｔｒｉｅ）　、シー・ヌーナン（Ｃ，Ｎ ｏｏｎａｎ）　、リュー・メルニック（Ｊ、　Ｍｅｌｎｉｃｋ）、エフ・ビー・ ホリンジ＋−（Ｆ、Ｂ、　Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ）：　ｒ未感染ＣＤＪ＋リンパ球 とヒト免疫不全ウィルスに感染した細胞との混合体における細胞溶解のメジエー タとしての融合（Ｆｕｓｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｍｅｄｉａｔｏｒ　ｏｆ　ｃｙｔｏ ｌｙｓｉｓｉｎ　ｍ１ｘｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｕｎｉｎｆｅｃｔｅｄ　ＣＤ４＋　 ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｃｅｌｌｓ　１ｎｆｅｃｔｅｄ　ｂ■ ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ）　Ｊ　、プロシ ーディンゲス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンセズ・オブ ・ザ・ユナイテド・ステーブ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａ ｄ、　Ｓｃｉ、　Ｌｌ、Ｓ、Ａ、）　、第８４巻（１９８７年）　１，４２９ペ ージ。

８、ディー・ディー・ホー（Ｄ、Ｄ、　Ｈｏ）　、ティー・アール−ロタ（Ｔ、 Ｒ，Ｒｏｔａ）、およびエム・ニス・ヒルシュ：　「ヒトＴリンパ球刺激つィル ス■型による単球／マクロファージの感染（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｎ ｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｂｙｈｕｍａｎ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｔｒ ｏｐｉｃ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　Ｉ［［）　Ｊ　、ジャーナル・オブ・クリニ カル・インベスティゲーション（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、）　、第７ ７巻（１９８６年）１．７１２ページ。

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Ｂｒｏｄｅｒ）　：　ｒ３°−アジド−３゛−デオキシチミジン（ＢＷ　Ａ３０ ９Ｕ）　：ヒトＴリンパ球刺激つィルス■型／リンパ腺症関連ウィルスの感染性 および細胞変性効果を生体外で阻害する抗ウィルス剤（３°−ａｚｉｄｏ−３° −ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　（ＢＹ　Ａ３０９Ｕ）　：　Ａｎ　ａｎｔｉ ｖｉｒａｌ　ａｇｅｎｔ　ｔｈａｔ　１ｎｈｉｂｉｔｓ　ｔｈｅ　１ｎｆｅｃｔ ｉｖｉｔｙ　ａｎ■ ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏｔ ｒｏｐｉｃ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　Ｉ［［／ｌｙｍｐｈａ| ｄｅｎｏｐａｔｈｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ） 　Ｊ　、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイ エンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・ステーブ・オブ・アメリカ、第８２巻（１９ ８５年）　７，０９６ページ。

１２、エイチ・ミツヤ、およびニス・ブローグー：　ｒ２’、３’−ジデオキシ ヌクレオシドを用いた生体外でのヒトＴリンパ球刺激つィルス■型／リンパ腺症 関連ウィルス（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　／ＬＡＹ）の感染性および細胞変性効果の阻 害（Ｉｎｈｉｂｉ−ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　１ｎｆｅｃｔ ｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ @Ｔ− １ｙｍｐｈｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　ＩＩＩ／ｌｙｍｐｈａｄ ｅｎｏｐａｔｈｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ　（gＴＬＶ− ｍ／ＬＡＶ）　ｂｙ　２°、３°−ｄｉｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ）　 Ｊ　、プロシーディンゲスーｔブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエ ンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・ステーブ・オブ・アメリカ、第８３巻（１９８ ６年）　１，９１１ページ。

１３、ビー・ニー・ファーマン、ファー・ニー・ファイフ（Ｊ、Ａ、　Ｆｙｆｅ ）　、エム・エイチ・サンフレア、グー・ワインホルト、ファー・エル・ライダ ウド（Ｊ、Ｌ、　ＲｚｄｅＯｕｔ）　、ジー・ニー・フリーマン（Ｇ、Ａ、　Ｆ ｒｅｅｍａｎ）　、ニス°ヌジノフ・レールマン、ディー・ビー・ポロネジ−、 ニス・ブローグー、エイチ・ミツヤ、およびディー・ダブリュー・バリー：「３ °−アジド−３°−デオキシチミジンのリン酸化、およびヒト免疫不全ウィルス 逆転写酵素との５°−三リン酸塩の選択的相互作用（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔ ｉｏｎ　ｏｆ　３°−ａｚｉｄｏ−３°−ｄｅｏｘ−ｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ　ａ ｎｄ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　１ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　５’−ｔ ｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｗｉｔ■ ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ　ｒｅｖｅｒｓｅ 　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）　Ｊ　、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ナシ ョナル・アカデミ−・オブ・サイエンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・ステーブ・ オブ・アメリカ、第８３巻（１９８６年）８．３３３ページ。

１４、デ（−”　ニー−クーニー（Ｄ、Ａ、　Ｃｏｏｎｅｙ）　、エム・ダラル （Ｍ、　Ｄａｌａｌ）、エイチ・ミツヤ、ファー・ビー・マクマホン（Ｊ、Ｂ、 　ＭｃＭａｈｏｎ）　、エム・ナトカル＝　（Ｍ、　Ｎａｄｋａｒｎｉ）　、フ ァー・バルザリー＝　（Ｊ、　Ｂａ１ｚａｒｉｎｉ）　、１ス・ブローグー、お よびディー・ジー・ジョンズ（Ｄ、Ｇ、　Ｊｏｈｎｓ）　：　ｒＨＴＬＶ−■の 感染性の阻害剤である２゛、３°−ジデオキシシチジンの細胞薬理学に関する初 期研究（Ｉｎｉｔｉａｌ　５ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　 ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　２°。

３’−ｄｉｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ、　ａｎ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　１ｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）　Ｊ　、バイオケミカル・ファー ７：１０ジー（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、）　、第３５巻（１９ ８６年）　２，０６５ページ。

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２３、シー・ディー・ヴイー・ブラック（Ｃ，Ｄ、Ｖ、　Ｂｌａｃｋ）　、ジー ・ファー・ワトソン（Ｇ、Ｊ、　Ｗａｔｓｏｎ）　、およびアール・ファー・ウ ォード（Ｒ，Ｊ、　Ｗａｒｄ）、トランザクションズ・オブ・ザ・ロイヤル・ソ サエティー・オブ・トロピカル・メディシン・アンド・ハイジーン（Ｔｒａｎｓ 、　Ｒｏｙａｌ　Ｓｏｃ、　Ｔｒｏｐｉｃａｌ。

Ｍｅｄ、　Ｈｙｇｉｅｎｅ）　、第７１巻（１９７７年）５５０〜５５２ページ 。

２４、シー・アール・アーヴイング、イー・ニー・ステック（Ｅ、Ａ、　５ｔｅ ａｋ）　、ダブりニー・エル・チャツプマン（Ｗ、Ｌ、　Ｃｈａｐｍａｎ）　、 ヴイー・ビー・ウェーブ（Ｖ、Ｂ、　Ｗａｉｔｓ）　、エル・ディー・ヘンドリ ックス（Ｌ、Ｄ、　Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓ）、ジー・エム・スワルツ、ダブりニー ・エル・ハンソン（Ｗ、Ｌ、　Ｈａｎｓｏｎ）、プロシーディンゲス・オブ・ザ ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンセズ・オブ・ザ・ユナイテド・ステ ーブ・オブ・アメリカ、第７５巻（１９７８年）　２，９５９〜２，９６３ペー ジ。

２５、ジーーロペスーベレスタイン（Ｇ、　Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ） 　、アナルス・オブ・ザ・インターナル・メディシン（Ａｎｎ、　Ｉｎｔｅｒｎ 、　Ｍｅｄ、）　、第１０５巻（１９８６年）１３０〜１３１ページ。

２６、ニー・シルコーダ（Ａ、　５ｈｉｒｋｈｏｄａ）　、ジー・ロペス・ベレ スタイン、ジ工−・エム・ホルバート（Ｊ、Ｍ、　Ｈｏ１ｂｅｒｔ）　、および エム・ニー・ルナ（Ｍ、ＡＬｕｎａ）　、ラジオロジー（Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ） 　、第１５９巻（１９８６年）３４９〜３５３ページ。

２７、イー・エイチ・ヘルマン（Ｅ、Ｈ，Ｈｅｒｍａｎ）　、ニー・ラーマン（ Ａ、　Ｒａｈｍａｎ）、ヴイー・リュー・フェランス（ｖ、Ｊ、　Ｆｅｒｒａｎ ｓ）　、リュー・ニー・ヴイック（Ｊ、Ａ、　Ｖｉｃｋ）　、およびピー・ニス ・シャイン（Ｐ、Ｓ、　５ｃｈｅｉｎ）　、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅ ｒ　Ｒｅｓ、）　、第４３巻（１９８３年）　５，４２７〜５，４３２ページ。

２８、リュー・レヴイー（Ｊ、　Ｌｅｖｙ）ら、アナルス・オブ・ザ・インター ナル・メディシン、第１０３巻（１９８５年）６９４〜６９９ページ。

２９、ニス・ゼット・サラウラディン（Ｓ、Ｚ、　５ａｌａｈｕｄｄｉｎ）　、 アール・エム・ローズ（Ｒ，Ｍ、　Ｒｏｓｅ）　、リュー・イー・グループマン （Ｊ、Ｅ、　Ｇｒｏｏｐｍａｎ）　、ピー・ディー・マーカム（Ｐ、Ｄ、　Ｍａ ｒｋｈａｍ）　、およびアール・シー・ギヤ口、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）　、第 ６８巻（１９８５年）２８１〜２８４ページ。

３０、ニス・ケーニッヒ（Ｓ、　Ｋｏｅｎｉｇ）　、エイチ・イー・ゲンデルマ ン（Ｈ，ＥＧｅｎｄｅｌｍａｎ）　、リュー・エム・オレンシュタイン（Ｊ、Ｍ 、　０ｒｅｎｓｔｅｉｎ）　、エム・シー・ダルカント（Ｍ、Ｃ，Ｄａｌｃａｎ ｔｏ）　、ジー・エイチ・ペゼシュクブール（Ｇ、Ｈ，Ｐｅｚｅｓｈｋｐｕｒ） 　、ｘム−ユングブルート（Ｍ、　Ｙｕｎｇｂｌｕｔｈ）　、エフ・シャツツタ （Ｆ、　Ｊａｎｏｔｔａ）　、ニー　・アクスミット（Ａ、　Ａｋｓｍｉｔ）　 、エム・ニー・マーチン（Ｍ、Ａ、　Ｍａｒｔｉｎ）　、およびニー・ニス・フ アクタ（Ａ、Ｓ。

Ｆａｕｃｉ）　、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、第２３３巻（１９８６年） 　１，０８９〜１，０９３ページ。

３１、リュー・ニス・マクダガル、エム・ニス・ケネディ−（Ｍ、Ｓ、　Ｋｅｎ ｎｅｄｙ）、リュー・エム・スライ（Ｊ、Ｍ、　Ｓｌｆｇｈ）　、ニス・ピー・ ニー　ト（Ｓ、Ｐ、　Ｃｏｒｔ）、ニー・マウル（Ａ、　Ｍａｗｌｅ）　、およ びリュー・グー・ニー・ニコルラン（Ｊ、に、Ａ、　Ｎ１ｃｈｏｌｓｏｎ）　、 サイエンス、第２３１巻（１９８６年）３８２〜３８５ページ。

３２、ピー・リュー・マトン、ニー・ジー・ダルグレーシュ、リュー・ニス・マ クダガル、ピー・アール・クラファム、アール・ニー・ワイス、およびアール・ アクセル、セル、第４７巻（１９８６年）３３３〜３４８ページ。

３３、アール・ヤーショアン、グー・リュー・ワインホルト、エイチ・グー・ラ イアリ−、イー・ゲルマン、アール・エム・ブルム、ジー・エム・シアラー、エ イチ・ミツヤ、リュー・エム・コリンズ、シー・イー・マイヤーズ、アール・ダ ブリュー・フレツカ−、ピー・ディー・マーカム、ディー・ティー・デュラック 、ニス・エフ・レールマン、ディー・ダブリュー・バリー、エム・ニー・タイン シエル、ディー・ピー・ボロネジ−１およびニス・ブローグー、ランセット、１ ９８６年３月１５日号（１９８６年）５７５〜５８０ページ６３４、ディー・ト ールヘン（Ｄ、　Ｔｏｏｒｃｈｅｎ）　、およびエム・ディー・トパル（Ｍ、Ｄ 。

Ｔｏｐａｌ）　、カーシノジェネシス（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ）　、第 ４巻（１９８３年）１．５９１〜１，５９７ページ。

３５、エム・フクナガ（Ｍ、　Ｆｕｋｕｎａｇａ）　、エム・エム・ミラー（Ｍ 、Ｍ、　Ｍｉｌｌｅｒ）、グー・ライ・ホステトラ−２（Ｋ、Ｙ、　）ｌｏｓｔ ｅｔｌｅｒ）　、およびエル・リュー・デフトス（Ｌ、Ｊ、　Ｄｅｆｔｏｓ）　 、エンドクリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）　、第１１５巻（１９８ ４年）７５７〜７６１ページ。

３６、エル・ディー・メイヤー（Ｅ、Ｄ、　Ｍａｙｅｒ）　、エム・リュー・ホ ープ（Ｍ、Ｊ。

Ｈｏｐｅ）　、およびピー・アール・カリス（Ｐ、Ｒ，Ｃｕ１ｌｉｓ）　、ビオ ヒミ力−ｚト・ビオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　 Ａｃｔａ）　、第８５８巻（１９８６年）　１６１〜１６８ページ。

３７、エム・ニー・タインシェル、ディー・ディー・リッチマン（Ｄ、Ｄ、　Ｒ ｉｃｈｍａｎ）、エム・エイチ・グリエコ（Ｍ、Ｈ，Ｇｒｉｅｃｏ）ら、ニュー イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン、第３１７巻（１９８７年）１８ ５〜１９１ページ。

３８、ティー・ディー・リッチマン、エム・ニー・タインシエル、エム・エイチ ・グリエコら、二ニー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン、第３１ ７巻（１９８７年）１９２〜１９７ページ。

３９、エフ・オルラン（Ｆ、　０１ｓｏｎ）　、シー＠ニー６ハント（Ｃ，Ａ、 　）Ｉｕｎｔ）　、エフ・シー・ショー力（Ｆ、Ｃ，５ｚｏｋａ）　、ダブりニ ー・リュー・ヴエイル（Ｗ、Ｊ。

Ｖａｉｌ）　、およびディー・パパハジョポウロス（Ｄ、　Ｐａｐａｈａｄｊｏ ｐｏｕｌｏｓ）　、ビオヒミカ・エト・ビオフィジ力・アクタ、第５５７巻（１ ９７９年）９〜２３ページ。

４０、エフ・ショー力・ジュニア（Ｆ、　５ｚｏｋａ、　Ｊｒ、）　、およびデ ィー・パパハジョポウロス、プロシーディンゲス・オブ・ザ・ナショナル・アカ デミ−・オブ・サイエンセズーオブ・ザ・ユナイテド・ステーブ・オブ・アメリ カ、第７５巻（１９７８年）　４．１９４〜４，１９８ページ。

４１、イー・メイヒュ−（Ｅ、　Ｍａｙ）＋ｅＷ）　、アール・ラゾー（Ｒ，Ｌ ａｚｏ）　ｓダブリュー・リュー・ヴエイル、リュー・キング（Ｊ、　Ｋｉｎｇ ）　、ニー・エム・グリーン（Ａ、Ｍ、　Ｇｒｅｅｎ）　、ビオヒミ力・エト・ ビオフィジカ・アクタ、第７７５巻（１９８４年）１６９〜１７５ページ。

４２、ニス・キム（Ｓ、　Ｋｉｍ）　、ｘム争ターカー（Ｍ、　Ｔｕｒｋｅｒ） 　、イー・カイ（Ｅ。

Ｃｈｉ）ら、ビオヒミ力・エト・ビオフィジ力・アクタ、第７２８巻（１９７８ 年）３３９〜３４８ページ。

４３、ディー・ディー・リッチマン（Ｄ、Ｄ、　Ｒｉｃｈｍａｎ）　、アール・ ニス・コルンブルート（Ｒ，Ｓ、　Ｋｏｒｎｂｌｕｔｈ）　、およびディー　” 　工−−カーソン（Ｄ、Ａ、　Ｃａｒｓｏｎ）、ジャーナル・オブ・エクスベリ メンタル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、第１６６巻（１９８７年 ）　１，１４４〜１，１４９ページ。

４４、ティー・ハードル（Ｔ、　Ｈａｅｒｔｌｇ）、シー・リュー・カレーラ（ Ｃ，Ｊ、　Ｃａｒｒｅｒａ）リュー・ニス・マクダガル、エル・シー・サヮーズ 、ディー・ディー・リッチマン、およびディー・ニー・カーラン、ジャーナル・ オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）　、掲 載準備中（１９８７年）。

国際調査報告 ””””””’　”””１１１１Ｉ”　ＰＣＴ／ＬＩＳ８８１０３２１０

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. １．後天性免疫不全症候群および関連レトロウイルス感染症の治療に用いること を目的とする組成物であって、リポソームにカプセル化されたリン酸化ヌクレオ シド類似物質と、製剤上許容し得るその担体とからなることを特徴とする組成物 。
2. ２．ヌクレオシド類似物質が、アジドチミジン、ジデオキシシチジン、ジデオキ シアデノシン、およびリバビランよりなる群から選択される請求項１記載の組成 物。
3. ３．リン酸化ヌクレオシド類似物質が、アジドチミジンの５′−−リン酸誘導体 である請求項２記載の組成物。
4. ４．リン酸化ヌクレオシド類似物質が、ジデオキシアデノシンの５′−−リン酸 誘導体である請求項２記載の組成物。
5. ５．リン酸化ヌクレオシド類似物質が、ジデオキシシチジンの５′−−リン酸誘 導体である請求項２記載の組成物。
6. ６．リン酸化ヌクレオシド類似物質が、リバビランの５′−−リン酸誘導体であ る請求項２記載の組成物。
7. ７．リポソームが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、 ホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルセリン、ホ スファチジルイノシトール、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストイ ルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジバルミトイル ホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホ スファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミ ン、ジバルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチ ジルエタノールアミン、およびジステアロイルホスファチジルエタノールアミン よりなる群から選択されたリン脂質のうちの少なくとも１種を用いて製造される 請求項１記載の組成物。
8. ８．リポソームが、コレステロール、糖脂質、セレブロシド、ガンダリオシド、 スフィンゴ脂質、グルコサイコシン、およびサイコシンよりなる群から選択され た添加剤を更に含有する請求項７記載の組成物。
9. ９．リポソームが、約８０乃至９９モル％の卵ホスファチジルコリンと約１乃至 ２０モル％のサイコシンとを用いて基本的に構成される請求項８記載の組成物。
10. １０．リン酸化ヌクレオシド類似物質が、アジドチミジンの５′−−リン酸誘導 体である請求項９記載の組成物。
11. １１．製剤上許容し得る担体が、緩衝性水溶液である請求項１記載の組成物。
12. １２．哺乳類における後天性免疫不全症候群および関連レトロウイルス感染症を 治療するための方法であって、リポソームにカプセル化されたリン酸化ヌクレオ シド類似物質と、製剤上許容し得るその担体とからなる製剤上許容し得る量の組 成物を前記哺乳類に投与する段階が含まれることを特徴とする治療方法。
13. １３．ヌクレオシド類似物質を、アジドチミジン、ジデオキシシチジン、ジデオ キシアデノシン、およびリバビランよりなる群から選択する請求項１２記載の治 療方法。
14. １４．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、アジドチミジンの５′−−リン酸誘導 体とする請求項１３記載の治療方法。
15. １５．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、ジデオキシアデノシンの５′−−リン 酸誘導体とする請求項３記載の治療方法。
16. １６．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、ジデオキシシチジンの５′−−リン酸 誘導体とする請求項１３記載の治療方法。
17. １７．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、リバビランの５′−−リン酸誘導体と する請求項１３記載の治療方法。
18. １８．リポソームを、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン 、ホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルセリン、 ホスファチジルイノシトール、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリスト イルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジバルミトイ ルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジラウロイル ホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールア ミン、ジバルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファ チジルエタノールアミン、およびジステアロイルホスファチジルエタノールアミ ンよりなる群から選択されたリン脂質を用いて製造する請求項１２記載の治療方 法。
19. １９．リポソームが、コレステロール、糖脂質、セレブロシド、ガンダリオシド 、スフィンゴ脂質、グルコサイコシン、およびサイコシンよりなる群から選択さ れた添加剤を更に含有する請求項１８記載の治療方法。
20. ２０．リポソームが、約８０乃至９９モル％の卵ホスファチジルコリンと約１乃 至２０モル％のサイコシンとを用いて基本的に構成される請求項１９記載の治療 方法。
21. ２１．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、アジドチミジンの５′−−リン酸誘導 体とする請求項２０記載の治療方法。
22. ２２．製剤上許容し得る担体が、緩衝性水溶液である請求項１２記載の治療方法 。
23. ２３．組成物を、哺乳類に静脈内投与する請求項１２記載の治療方法。
24. ２４．リポソーム内に封入されるリン酸化ヌクレオシド類似物質の濃度が、約０ ．００１ミリモル乃至３００ミリモルである請求項７記載の組成物。
25. ２５．リン酸化ヌクレオシド類似物質をリポソームにカプセル化し、カプセル化 されたリン酸化ヌクレオシド類似物質を形成する段階と、前記カプセル化された リン酸化ヌクレオシド類似物質を、製剤上許容し得るその担体と結合させる段階 とからなることを特徴とする薬剤の製造方法。
26. ２６．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、アジドチミジン、ジデオキシシチジン 、ジデオキシアデノシン、およびリバビランよりなる群から選択する請求項２５ 記載の製造方法。
27. ２７．リン酸化ヌクレオシド類似物質が、リン酸トリメチルおよびトリエチルア ミンの存在下でヌクレオシド類似物質をオキシ塩化リンと反応させる段階を用い て調製される請求項２５記載の製造方法。
28. ２８．リン酸化ヌクレオシド類似物質を、アジドチミジンの５′−−リン酸誘導 体とする請求項２６記載の製造方法。
29. ２９．リポソームが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン 、ホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルセリン、 ホスファチジルイノシトール、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリスト イルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジバルミトイ ルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジラウロイル ホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールア ミン、ジバルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファ チジルエタノールアミン、およびジステアロイルホスファチジルエタノールアミ ンからなる１群から選択されたリン脂質を用いて製造される請求項２５記載の製 造方法。 ヌクレオシド類似物質が、二リン酸誘導体である請求項１記載の組成物。 ヌクレオシド類似物質が、三リン酸誘導体である請求項１記載の組成物。