JPH0347084A - Ｌ―アラニンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ｅＷ法によるＬ−アラニンの製造法に間する
ものである。本発明によれば高収量で効率良くＬ−アラ
ニンを製造することが出来る。

Ｌ−アラニンは周知の如く、医薬、食品又は化学工業原
料として重要なアミノ酸であり、その需（従来の技術と
課題） Ｌ−アラニンの工業的製造法としては、Ｌ−アスパラギ
ン酸の酵素的脱炭酸により製造する方法く特公昭５３−
２７７９２号公ｗｔ）が提案されている。

しかしこの反応に使用するし一アスパラギン酸β−説炭
酸酵素は熱安定性が比較的低い為に３０〜３７℃の温度
範囲で反応せ°ざるを得なかった。

その結果反応速度の低い範囲で反応を行うこととなり、
Ｌ−アラニンを効率良く生産する為には、より高い反応
速度下での反応が望まれていた。

本発明者らはＬ−アスパラギン酸β−説炭酸酵素活性の
熱安定性を向上させる目的で反応液組成等につき鋭意検
討を行い、反応液中に塩化物を添加することにより該酵
素の熱安定性が向上し・、高温条件下で反応出来ること
を見い出し本発明を完成するに到った。

（発明の構成及び効果） 本発明は、Ｌ−アスパラギン酸β−説炭酸酵素活性を有
するシュードモナス・ダクネー（Ｐｓｅｕｄ。

ｍｏｎａｓ　ｄａｃｕｎｈａｅ）の微生物菌体又はその
破砕物の存在下、水性溶媒中でＬ−アスパラギン酸又は
その塩を反応せしめ、該反応液中にＬ−アラニンを生成
するに際し、反応液中に−４４−一塩化物を含有する水
溶液にて、反応温度を４０〜４７℃で反応させることを
特徴とするＬ−アラニンの製造方法を提供するものであ
る。

本発明に用いられる塩化物としては塩化ナトリウム、塩
化カリウム、塩化マグネシラノ４、塩化カルシウム、塩
化アンモニウムが好適に用いられ濃度はＣＱイオンとし
て３〜１５０ｍＭが好ましい。

塩化物を２種以上添加する際は、合計のＣＱイオンの濃
度が上記範囲にあれば良い。

本発明によれば、Ｌ−アラニンを高反応速度で効率よく
製造することが出来る。また、高温反応条件を採用する
為、雑菌による汚染の問題も解消される。

（発明の詳細な説明） 本発明に使用する微生物としては、例えばＬ−アスパラ
ギン酸β−説炭酸酵素を含有するシュードモナス・ダク
ネー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｄａｃｕｎｈａｅ）　
ＩＡＭ　１１５２が好適に用いられる。

本発明に用いられる上記微生物は、菌体のまま用いるこ
とも出来るし、超音波破砕等の処理により破砕した面体
の破砕物をも使用することが出来る。

本発明の方法に使用される上記微生物菌体の調製に使用
する培地は、特に限定されるものではなく一般の微生物
に使用されるものでよい。

Ｌ−アスパラギン酸β−説炭酸酵素を含有する微生物菌
体の調製に使用する培地の炭素源は、特に限定されるも
のではなく、例えばフマル酸、コハク酸、リンゴ酸、Ｌ
−アスパラギン酸等が使用出来るが、その中でもフマル
酸が好適に使用される。培地の窒素源としては、アンモ
ニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アン
モニウム、尿素等の無機塩を用いることが出来るし、ま
た、ペプトン、酵母エキス、コンスティープリカー　カ
ザミノ酸等の有機栄養源も使用することが出来る。無機
塩としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素カリ
ウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。

培養は通気攪拌、振盪等の好気的条件下で行い、培養温
度は２０℃〜４０℃、好ましくは２８℃〜３２℃で行う
。　培養途中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜８付近
にて行い、培養中のｐＨの調整には、酸又はアルカリを
添加して行う。培養開始時の培地中の炭素源の濃度は０
．０５〜１０重量％が用いられ、具体例としてフマル酸
を使用する場合、フマル酸濃度は、好ましくは０．１−
５重態％、更に好ましくは０．　５〜２重量％が適する
。

培養期間は１０時間〜４日間、最適期間は１〜３日間で
ある。

このようにして得られた培養物から各々菌体を集めて、
水又は適当な緩衝液で洗浄し、本発明の酵素反応に使用
する。

本発明の方法においては、上記で調製された微生物菌体
又はその破砕物の存在下、水性溶媒中でＬ−アスパラギ
ン駿又はその塩を含有する水、ｄ液にて酵素反応させる
に際し塩化物を共存させる。

ここで該水溶液に添加されるし一アスパラギン酸又はそ
の塩の添加濃度は０．５〜５０重量％、好ましくは３〜
３０重量％である。

なお、Ｌ−アスパラギン酸は、反応液への溶解度の関係
から溶解させた状態でも粉体で存在（不溶解状態）して
いてもさしつかえない。反応液のｐＨの調整はアルカリ
溶液、例えはアンモニア水、水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム等の水溶液が好適に使用される。

該水溶液には、さらにピリドキサール５゛リン酸を０．
０００５〜０．０５重量％、好ましくは０．００１〜０
．０１重量％添加して用いることが出来る。さらに必要
な場合には非イオン性の界面活性剤、例えばポリオキシ
エチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート等を０．０１〜０．　５重
量％、好ましくは０．０３〜０．２重重％を添加して用
いることが出来る。また必要な場合にはピルビン酸、α
−ケト酪酸等のα−ケト酸を０．０００１〜０゜５重量
％、好ましくは０．００１〜０．２重量％を添加して用
いることが出来る。本発明において、酵素反応時のｐＨ
は４．３〜５．０、好ましくは４．５〜４．８であり、
反応温度は４０〜４７℃、好ましくは４２〜４５℃であ
り、反応は通常約３〜約４８時間行われる。又、塩化物
の濃度は、ＣＱイオンとして３〜１５０ｍＭが好ましく
、１０〜１００ｍＭがさらに好ましい。塩化物を２種以
上含む場合は、濃度の合計が上記範囲にあれば良い。

上記のような反応方法によって得られる反応液中に生成
したＬ−アラニンの分離・精製は公知のイオン交換樹脂
処理等により行うことが出来る。

実験例 以下の実験例において、Ｌ−アラニンの定性はベーパー
クロマトグラフのＲｆ値と高速液体クロマトグラフの保
持時間及び精製物の比旋光度により確認した。定員は、
高速液体クロマトグラフィー（島津ＬＣ−５Ａ）を用い
て行った。

また、下記の実験例において％と表わしたのはＭ量％を
意味する。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。

実施例 （１）微生物の調製 培地（フマル酸ナトリウム０．５％、フマル酸アンモニ
ウム１．０％、酵母エキス０．　５％、リン酸−カリウ
ム０．０５％、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ・７Ｈ２００，０５％
含有、［）Ｈ７，０）１００ｍ２を５００ｍＱ容三角フ
ラスコに分注、滅菌した後シュードモナス・ダクネー（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｄａｃｕｎｈａｅ）ＡＭ　１
１５２を植苗し、３０℃にて１日間振盪培養を行った（
前培養）。次に、上記培地と同様の培地１２を２Ｑ容通
気攪拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、前
培養物の２０ｍＲを添加して、回転数１１００Ｏｒｐ、
通気量１ｖｖｍ、　　温度３０℃、ｐＨ７，３にて１日
間培養を行った。

培養終了後、培養物１００ｍＱから遠心分離して集菌後
、該菌体を１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で洗
浄し後、該洗浄菌体を酵素反応に使用した。

（２）実験方法 上記で得られた菌体を、表−１〜表−５に示した実施区
にて、各表のように塩化物を加えた水性反応？夜［Ｌ−
アスパラギン酸３０％、ポリオキシエチレンオクチルフ
ェニルエーテル　０．０５％、ピリドキサール５′−リ
ン酸０．０５％、ピルビン酸ソーダ０．０２％含有、ｐ
Ｈ４，７＜調整はアンモニア水（２８％Ｎ　Ｈ３含有）
にて行う〉１２００ｍ９に懸濁し、各温度で１０時間振
盪した後の生成Ｌ−アラニン量を測定した。

（３）結果

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に
   属するＬ−アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含有する微
   生物菌体若しくはその破砕物の存在下、水性溶媒中でＬ
   −アスパラギン酸又はその塩を反応せしめ、該反応液中
   にＬ−アラニンを生成するに際し、反応液中に塩化物を
   含有する該水性溶媒中にて、反応温度を４０〜４７℃に
   維持することを特徴とするＬ−アラニンの製造法。