JPH034169A - ｈＡＮＰ抗体及びｈＡＮＰの免疫学的測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はヒト心房性ナトリウム利尿ポリペプチド（ｈｕ
ｍａｎ　Ａｔｒｌａｌ　Ｎａｔｒｌｕｒｅｔｌｃ　Ｐｏ
１ｙｐｅｐｔｉｄｅ、以下、ｈＡＮＰという）抗体及び
ｈＡＮＰ抗体を用いるｈＡＮＰの免疫学的測定法に関す
る。

［従来の技術］ ＡＮＰは、心房から分泌されて血液中を循環するホルモ
ンであり、生体の血圧及び体液量の調節に重要な働きを
していることが明らかになっている。また、ＡＮＰが単
に腎循環器系に作用するだけでなく、脳内にも存在し、
神経ペプチドとして作動する可能性を示す知見も得られ
ている。

ヒト心房（剖検組織）のＡＮＰを分離精製した結果、ヒ
ト心房中には分子量的３にのα型、約６にのβ型及び１
３にのγ型の３種のｈＡＮＰが存在することが明らかに
され、それらの構造も決定された。

α型ｈＡＮＰ　（以下、α−ｈＡＮＰという）は２８個
のアミノ酸からなる一本鎖のペプチドであり、分子内に
Ｓ−８結合を有している。α−ＩＦＡ　Ｎ　Ｐは血液中
のＡＮＰ主成分である。

β型ｈＡＮＰ　（以下、β−ｈＡＮＰという）は、α−
ｈＡＮＰの逆平行２量体という特異構造をもっていて、
α−ｈＡＮＰの約１１５の利尿、降圧及び平滑筋弛緩活
性を有している。

γ型ｈＡＮＰ　（以下、γ−ｈＡＮＰという）は、アミ
ノ酸１２６個からなる高分子蛋白質で、そのＣ末端部分
（９９−１２８）にα−ｈＡＮＰ構造を有している。

ところで、従来、生理活性物質は、その活性を指標にそ
の動態が調べられてきた。ＡＮＰに限らず生理活性を指
標に測るものはすべてこれにあてはまる（例えば、サイ
トカイニン類等）。ｈＡＮＰの場合は、平滑筋弛緩作用
などを指標に単離、精製が行なわれてきた。しかしなが
ら、この方法は煩雑で技術的に熟練を必要とする。従っ
て、この様な欠点を改良できる方法として免疫学的測定
法の開発が必要となる。かかる測定法にはｈＡＮＰ抗体
が必要であり、従来から各種のｈＡＮＰ抗体が知られて
いる（例えば、特開昭８１−５３２９９号公報中のＣＲ
−３、同６１−２２７５９７号公報中の２３Ｎ−Ｄ９、
同８２−２１１５５５号公報、Ｗ　ＯｌｌＳ−６７４２
号公報、特開昭６４−６１５００号公報中のＫＶ−ＡＮ
Ｐ−１等参照）。

しかし、従来のｈＡＮＰ抗体には下記のような問題点が
ある。

■認識部位について詳細に言及されていない。

■従来はＣ末端部、リング部及びＮ末端部を個々に認識
する抗体のみで、特異性の違いにより測定値に解離が認
められていた。

そこで、生理活性を有する構造、すなわち、ジスルフィ
ド結合（構造）及びＣ末端のＴ　ｙ　ｒ　（２ｇ）を有
する構造を持つｈＡＮＰに特異的に反応する抗体が望ま
れている。

［発明が解決しようとする課題］ そこで、本発明者らは上記事情に鑑み、各種検討を行っ
た結果、ｈＡＮＰ分子中の特定のアミノ酸配列にのみ特
異的に反応しうるｈＡＮＰ抗体を見出した。さらに、こ
のｈＡＮＰ抗体を用いることによりｈＡＮＰを高感度に
検出できることをも見出して本発明を完成した。

［課題を解決するための手段］ 上記の課題を解決すべくなされた本発明のｈＡＮＰ抗体
は、ａ−ｈＡＮＰ分子中の少なくともＴ　ｙ　ｒ　（２
１り、Ｃｙ　ｓ　（７）　−Ｃｙ　ｓ　（２３）間のジ
スルフィド結合及びＣＶ　８　（７）　〜Ｍ　ｅ　ｔ　
（１２）を抗原として認識することを特徴とするもので
あり、また本発明のｈＡＮＰの免疫学的測定法は、上記
の性状を有するｈＡＮＰ抗体を用いてなることを特徴と
するものである。

上記の構成からなる本発明において、ｈＡＮＰ抗体は通
常の抗体産生法により調製することができ、ｈＡＮＰ抗
体を調製するための免疫源は抗原そのもの又はハブテン
抗原が用いられる。

該抗原としてはｈＡＮＰ又はその断片等が挙げられる。

ｈＡＮＰの好ましい例はα−ｈＡＮＰである。α−ｈＡ
ＮＰは液相によるペプチド合成法又はＰｅｐｔｉｄｅ　
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２４１（１９８４）で開示された
方法により調製できる。また、市販品を利用することも
できる。また、ｈＡＮＰ断片としてはα−ｈ　Ａ　Ｎ　
Ｐ　（４−２８）、同（５−２８）あるいは同（７−２
８）等が用いられる。

一方、ハブテン抗原の場合は、抗原をキャリアーに結合
させたものを免疫源として用いる。キャリアーは公知の
ものが用いられ、例えば、ウシ血清アルブミン、ウマ血
清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、ヒツジ血清アル
ブミン、ヒト血清アルブミン等の血清アルブミン類；ウ
シ血清グロブリン、ウマ血清グロブリン、ウサギ血清グ
ロブリン、ヒト血清グロブリン等のグロブリン類；ウシ
チログロブリン、ウマチログロブリン、ウサギチログロ
ブリン、ヒトチログロブリン等のチログロブリン類；ウ
シヘモグロビン、ウマヘモグロビン、ヒトヘモグロビン
等のヘモグロビン類：キーホールリンペットヘモシアニ
ン等のヘモシアニン類などが挙げられる。

また、ハブテン抗原の調製方法は公知の手法がいずれも
用いられ、例えば、抗原とキャリアーとを結合剤を用い
て結合させる方法等が挙げられる。

ここで使用される結合剤としては、例えば、グルタルア
ルデヒド、マロンジアルデヒド、スクシンジアルデヒド
等のジアルデヒド類；Ｎ、Ｎ＝−。

−フェニレンジマレイミド、Ｎ、Ｎ−−ｍ−フェニレン
ジマレイミド等のシマレイミド類；ジシクロへキシルカ
ルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ゛（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド類などが
挙げられる（例えば、１３１ｏｃｈｅｍ、Ｂｌｏｐｈｙ
ｓ、　Ｒｅｓ　、Ｃｏｓｍｕｎ、　、　１２９　、２４
８−２５５　（１９８４）等参照）。

本発明のｈＡＮＰ抗体はポリクローナル抗体又はモノク
ローナル抗体のいずれでもよい。

ポリクローナルｈＡＮＰ抗体は、高度に精製したｈＡＮ
Ｐを動物に免疫し、得られた血清から回収・精製するこ
とによって得られる。

該抗血清の製造は公知の方法にて行なえばよく、例えば
、高度精製ｈＡＮＰとフロイントの完全アジュバントと
の混合乳液を作り、動物の皮内に２〜３回注射し、最終
免疫の数日後採血を行ない、室温で凝固せしめた後、４
℃で一夜放置した後、３．０００ｒｐ■、２０分間の遠
心分離により抗血清（ｈＮＡＰ抗体）が得られる。

免疫に用いる動物としては、特に動物種を選ぶ必要はな
く、例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ等が
挙げられる。該抗血清の精製は、例えば、」、＾ｍ、ｃ
ｈｅｍ、ｓｏｃ、、８２．３３１１６　（１９４Ｇ）、
　Ｆｅｄ。

Ｐｒｏｃ、、１７．１１６１（１９５８）に記載の方法
にて行なわれる。

一方、モノクローナルｈＡＮＰ抗体は細胞融合法により
得ることができる。細胞融合法は自体既知の手段にて行
なわれ、その−例は増殖性を持った細胞と目的とする抗
体を産生じているリンパ球とをポリエチレングリコール
の存在下で反応せしめることにより、増殖性と抗体産生
能とを同時に兼ねそなえた細胞を製するもので、この細
胞の産生ずる抗体は一個の抗原決定基に対してのみ反応
する単一の抗体である。より具体的には、増殖性を持つ
細胞としてマウスミエローマ細胞を、抗体産生リンパ球
としてｈＡＮＰで免疫されたマウス牌臓細胞（Ｂ細胞）
を用いて融合させ、さらに目的とする抗体を産生じてい
る細胞をスクリーニングして、ｈＡＮＰのモノクローナ
ル抗体を得る。

回収した抗体の精製方法は公知の手法により行なわれる
。例えば、硫酸アンモニウム沈澱法、イオン交換体によ
る処理法、ゲル濾過法等が挙げられる。

かくして得られる本発明抗体は、ｈＡＮＰ分子中、特に
α−ｈＡＮＰ分子中の少なくともＴｙｒ（２８）、Ｃｙ
　ｓ　（７）　−Ｃｙ　ｓ　（２３）間のジスルフィド
結合及びＣｙ　ｓ　（７）　〜Ｍ　ｅ　ｔ　（１２）の
３カ所を認識する。

従って、本発明抗体は、環状構造を形成し、Ｃ末端のＴ
　）’　ｒ　（２８）を有するＡＮＰと反応しつる。

具体的には、ａ　−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　％Ｍ　ｅ　ｔ　Ｅ
　Ｏ）型α−ｈＡＮＰ及びβ−ｈＡＮＰとは反応する。

また、α−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（１−２８）、同（５−２
８）及び同（７−２８）とは反応するが、α−ｈ　Ａ　
Ｎ　Ｐ　（１−１０）、同（１３−２８）、同（１８−
２８）及び同（５−２７）とは反応しない。

また、本発明抗体はＩｇクラスＩｇＧ、分子量１５万〜
１６万、等電点５．８〜７．３等の性質を有する。

本発明抗体は、心疾患又は腎不全の診断、治療効果の判
定、電解質（特にナトリウムイオン等）のモニターリン
グ等の臨床検査用試薬として用いることができる。

また、ｈＡＮＰの検出、精製度合の測定等の生理学用又
は薬理学用の試薬として用いることもできる。

本発明のｈＡＮＰの免疫学的測定法は、前記の本発明ｈ
ＡＮＰ抗体を用いて免疫学的測定法によりｈＡＮＰを測
定（定量又は早足ｆｆ１）する方法である。かかる測定
法に用いられる免疫学的＋１１１定法としては、従来よ
り抗原抗体反応を利用する免疫学的測定法として公知の
手法のいずれも用いることができ、例えば、酵素免疫測
定法（ＥＩＡ法）、放射性免疫測定法（ＲＩ　Ａ法）、
赤血球凝集試験ｌＪ３定法（ＰＨＡ法）等が挙げられる
。また、上記各１１−１定法において、測定様式として
、例えば、競合法、サンドイツチ法、二抗体法等の様々
な方法が知られているが、これらのいずれの方法も適用
することができる。これらの免疫学的測定法及びその具
体的な実施方法については、例えば、石川ら編「酵素免
疫測定法Ｊ　　（１９７８年医学書院刊行）、入江編「
ラジオイムノアッセイＪ　　（１９７４年講談社刊行）
等に詳細に記載されている。

より具体的に放射性免疫＃ｊ定法を例にとって説明する
と、本発明の免疫学的測定法を用いるｈＡＮＰ定量用キ
ットの態様としては、 （１）　ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ抗体、第二抗体（ｆｇＧ抗体）
、放射性物質標識α−ｈＡＮＰ、標準α−ｈＡＮＰ。

沈澱促進剤（Ｂ−Ｆ分離剤）及び緩衝液よりなるｈＡＮ
Ｐ定量用キット； （２）　ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ抗体を固定化した不溶性担体、
放射性物質標識α−ｈＡＮＰ、標準α−ｈＡＮＰ及び緩
衝液よりなるｈＡＮＰ定量用キット；等が例示される。

上記のキットにおいて、標準α−ｈＡＮＰは、後述する
標準検量線を作成するために用いられるものであり、通
常はα−ｈＡＮＰの凍結乾燥品よりなるものである。標
準α−ｈＡＮＰは緩衝液に溶解して使用され、この際、
例えば、１〜１０．０００ｐｇ１０．１ｍｌとなるよう
に４〜５濃度段階まで小分けして標準検ｊｌ線の作成に
使用される。

放射性物質標識α−ｈＡＮＰとしては、例えば、１２５
Ｉ標識したものが好ましいものとして挙げら、　　　１
２５ れ、ａ　−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　１　ｓｕ＋ｏｌ当り、ＮＸ
ば　　Ｉであれば１００ＴＢＱ以下程度の比放射活性が
適当である。

放射性物質標識α−ｈＡＮＰは、α−ｈＡＮＰを自体既
知の方法、例えば、クロラミンＴ法、ラクトペルオキシ
ダーゼと過酸化水素を用いるラクトペルオキシダーゼ法
等にて標識化することによって作製することができる。

上記のキットで使用される緩衝液は抗原抗体反応用のも
ので、特にｐＨが６〜９、塩濃度が０．Ｏ１〜０．２Ｍ
程度のものが好ましい。具体的には、例えば、０．１Ｍ
リン酸塩緩衝化生理食塩液、ｐＨ７のものが挙げられる
。

また、第二抗体はＩｇＧに対する抗体であり、ｈＡＮＰ
抗体が由来する同種動物のＩｇＧに対する抗体であるこ
とが好ましい。

沈澱促進剤はデキストラン、ポリエチレングリコール等
が例示される。好ましくは分子ｆｆ１１．０００〜ｔｏ
、ｏｏｏ程度のポリエチレングリコール等が挙げられる
。沈澱促進剤は第二抗体と予め混和しておいてもよい。

また、ｈＡＮＰ抗体を固定化した不溶性担体に関し、不
溶性担体としては、セルロース、デキストラン、セファ
デックス等の多糖類、ポリスチレン、ポリプロピレン等
のプラスチック類、合成繊維、ガラス、セラミック等及
びこれらの材料にアミノ基、カルボキシ基等の官能基を
導入した材料が挙げられる。これらの材料の形状は特に
限定されないが、測定操作の便宜性等からマイクロプレ
ート、プラスチックチューブ、プラスチックボール等が
好ましい。ｈＡＮＰ抗体の不溶性担体への固定化は常法
により行うことができ、例えば、吸着法、イオン結合法
、共有結合法（例えば、カルボジイミド法、グルタルア
ルデヒド法、ブロムシアン活性化法等）などが挙げられ
る。

次に、本発明の免疫学シ１定法の一例として、第二抗体
を用いる場合の測定操作法を具体的に説明すると、まず
、被検液をｈＡＮＰ抗体とプレインキユーベーションさ
せ、次いで放射性物質標識α−ｈＡＮＰを遅延添加して
インキユーベーションする。その後、第二抗体及び沈澱
促進剤よりなる懸濁液を添加し、沈澱物（抗原抗体結合
物）と上清を分離し、それぞれの放射能測定を行う。以
下、常法に従い、沈澱物の放射能（Ｂ）と上清及び沈澱
物の放射能の和（Ｔ）からＢ／Ｔ値を求め、予め作成し
た標準曲線（検量線）から被検液中のｈＡＮＰ含量を求
める。なお、標準曲線は、上記の方法において、被検液
の代りに濃度既知の標準α−ｈＡＮＰ試料を用いて、同
様な操作によりＢ／Ｔｕｆｔを求め、ｈＡＮＰ濃度に対
してＢ／Ｔ値をプロットすること１こより得られる。

なお、本発明のｈＡＮＰの免疫学的ｔａｌｌ定法は上記
の放射性免疫測定法に限定されるものではなく、公知の
免疫学的測定法のいずれの方法にても行うことができる
。例えば、上記の放射性免疫測定法においては、抗原抗
体反応を液相にて行っているが、ｈＡＮＰ抗体を固定化
した不溶性担体を用い、ここに被検液及び放射性物質標
識α−ｈＡＮＰを添加して抗原抗体反応を行い、次いで
洗浄によりＢ−Ｆ分離を行い、固相上に残存した放射性
物質標識α−ｈＡＮＰの放射能を測定する方法であって
もよい。また、放射性物質標識α−ｈＡＮＰの代りに、
放射性物質標識ｈＡＮＰ抗体を用いるサンドイツチ法に
よりｎ１定を行ってもよい。さらには、上記の放射性物
質様２４　ａ　−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ及び放射性物質標識ｈ
ＡＮＰ抗体に代え、酵素標識α−ｈＡＮＰ及び酵素標識
ｈＡＮＰ抗体を用い、標識活性の測定法として酵素と基
質との反応度（反応量、反応速度等）を測定する酵素免
疫測定法によりｍ１定を行ってもよい。かかる測定法に
用いられる標識酵素と基質との組み合わせとしては、例
えば、ペルオキシダーゼと過酸化水素及び０−フェニレ
ンジアミンとの組み合わせ、β−ガラクトシダーゼと０
−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシドとの組み合わ
せ、アルカリホスファターゼとｐ−ニトロホスフェート
との組み合わせ等が挙げられる。

なお、本発明のｈＡＮＰの免疫学的測定法の対象となる
検体としては、被検者の血液が挙げられるが、これに限
定されるものではない。

［発明の効果］ 本発明の抗体は、環状構造を形成し、Ｃ末端のＴ　ｙ　
ｒ　（２ｇ）を有するＡＮＰと反応するという特徴を有
する。このため、生体試料中のＡＮＰを測定する場合、
特別な抽出操作等を行うことなく、高感度に測定するこ
とが可能となる。

特に、α−ｈＡＮＰの゛測定に有用である（生体中では
、α−ｈＡＮＰ自身、α−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（４−２８
＞、同（５−２８）の形をとって活性を示すことが知ら
れている）。また、β−ｈＡＮＰの測定も可能であり、
その生理学的意義の解明に有用である。

［実施例］ 本発明をより詳細に説明するために実施例及び実験例を
挙げて説明するが、本発明はこれらによって何ら限定さ
れるものではない。

実施例１ ■特異抗血清の作製 （１）免疫源の調製 水溶性カルボジイミド法にてハプテン抗原を調製した。

α−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（１−２８）３．５■とウシチロ
グロブリン２９．４ｍｇを２．０ｍｌ　（７）１０ｍＭ
Ｐ　Ｂ　Ｓ　（ｐ）ｌ　７．２）ｌ、：溶解し、ｌ−シ
クロへキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジ
イミドのメト−ｐ−トルエンスルホン酸塩３５−ｇを含
む蒸溜水１．Ｏｍｌを加え、室温にて２０時間静かに撹
拌した。反応液はセントリコン１０を用い緩衝液交換を
行った。α−ｈＡＮＰ−ウシチログロブリン抱合体は除
菌濾過後−２０℃で保存した。

■免　疫 上記（１）で得られたα−ｈＡＮＰ−ウシチログロブリ
ン抱合体とＨ３７Ｒａ完全アジュバントとを等量混合し
Ｗ１０型エマルジョンを調製した。免疫は日本白色種家
兎の指掌部へ１匹あたり１００μｇの抗原量を皮下注射
した。追加免疫は、液状同量を背部及内へ２週間から数
ケ月間隔で行った。最終投与後、数日してから採血し、
以下、常法に従って、抗血清を得た。

■放射性物質標識α−ｈＡＮＰ ２５ ラクトペルオキシダーゼ法を用いて　　Ｉ−α−ｈ　Ａ
　Ｎ　Ｐ　（〜７４ＴＢｑ／ｍｓ＋ｏｌ）を調製した。

■交叉性試験 ２５ 交叉反応性は、　　　！−α−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（１−
２８）を用いて、α−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（１−２８）　
［ｘ　］及び各種フラ２５ グメント［ｙ］の用量反応曲線を作成し、　　　■−α
−ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（１−２８）との結合率を５０％阻
害するｘｊｌとｙｉｌとの比率［（Ｘ／Ｖ）　Ｘ１００
　］で算出した。

２５ アッセイは　　！−α−ｈＡＮＰを遅延添加する方法で
行った。ＲＩＡ用緩衝液で標準α−ｈＡＮ　Ｐ　（１−
２８）及び各種フラグメントの各希釈系列を作製し、そ
の０．１ｍｌを、また適宜希釈した抗αｈＡＮＰ血清を
０．１ｍｌそれぞれアッセイチューブへ添加し４℃２０
時間静置した。次に約１０．０００ｃｐｓ２５−− の放射能を有する　　Ｉ　α　ｈ　Ａ　Ｎ　Ｐ　（１−
２８）０．１ｍｌを添加しさらに４℃で２０時間静置し
た。Ｂ・Ｆ分離は抗家兎１ｇＧヤギ血清を含む沈澱試薬
１．０ｍｌを加え４℃１５分間静置することにより行い
、沈澱物の放射能をガンマカウンターにてｎ１定した。

その結果を第１表に示す。

（以下余白） 第 １ 表 第　１　表（続き） 実施例２ ■試薬の調製 （１）α−ｈＡＮＰ抗体 実施例１に準じて調製したウサギ由来α−ｈＡＮＰ抗血
清を用いる。

■標準α−ｈＡＮＰ 精製ａ−ｈＡＮＰ溶液（２５６０９ｇ／ｍｌ　）。

同時に緩衝液で倍率稀釈し、２５８０．１２８０．８４
０　。

３２Ｇ　、１６０．８０．４０．２０．１０ｐｇ／ｍｌ
に調整する。

（３）放射性物質標識α−ｈＡＮＰ ２５ 実施例１と同様にして調製した　　■−α−ｈＡ　Ｎ　
Ｐ　（〜７４ＴＢｑ／ｇｖｏｌ）を用いた。

（４）第二抗体 組成は以下の通りである。

沈澱促進剤　ＰＥ０６０００ 第二抗体　ヤギ由来抗つサギＩｇＧ抗体■緩衝液 ０．１５　Ｍ塩化ナトリウム加１０５Ｍリン酸緩衝液（
ρＩＩ７、Ｏ） ■δ？１定操作方法 標準ａ−ｈＡＮＰ液又は被検液０．１ｍｌとｈＡＮｒ抗
血清０．１ｍｌとを攪拌し、２〜８℃で２０時間静２５ 置する。次いで、　　　１−α−ｈＡＮＰＯ，１ｍｌを
添加し、攪拌した後、２〜８℃で２０時間静置する。

反応液に３、第二抗体１．Ｏｍｌを加え、攪拌した後、
２〜８℃で１５分間静置する。次いで、２〜８℃、３．
０００ｒｐｍの条件下に１５分間遠心分離を行い、Ｂ・
Ｆ分離を行い、沈澱物及び上滑の放射能を測定し、Ｂ／
Ｔ値を算出する。標準α−ｈＡＮＰ液の測定値から標準
曲線を作成し、該標準曲線に基き、被検液の測定値から
被検液中のｈＡＮＰ含量を求める。

■測定結果 （１）測定感度 ゼロ濃度の標準溶液（緩衝液）における結合％の２ＳＤ
下限において感度の検討を行った結果、測定感度は１１
０１）／ｍｌ以下であった。

■健常人における血中濃度 健常人における血中り、ＡＮＰ濃度を調べた。

の結果を第２表に示す。

第２表 そ ２ 手 続 補 正 書（自発） 事件の表示 平成１年特 許 願 第１３９４７４号 発明の名称 ｈＡＮＰ抗体及びｈＡＮＰの免疫学的測定法補正命令の
日付（自発） ８　補正の内容 （１）明細書第３頁第９行の「サイトカイニン」を「サ
イト力イン」と訂正する。

■同書第４頁第６行の「すなわち、」の後にｒｈＡＮＰ
分子内の」を挿入する。

Ｏ）同書第４頁第８行の「有する構造を持つｈＡＮＰに
特異的に反応する」をｒ同時に認識する」と訂正する。

（４）同書第７頁末行の「例えば、」の後に「トリクロ
ロ−トリフルオロエタンを用いて、血清を脱脂清澄化し
た後、」を挿入する。

■同書第８頁第１９行の「ゲル濾過法」の後に「、プロ
ティンＡを用いたアフィニティークロマトグラフィー法
」を挿入する。

■同書第１２頁第４行の「過酸化水素」を「過酸化水素
水」と訂正する。

■同書第１２頁第１４行の「好ましい。」を「好ましい
。更にまた、ブドウ球菌から得られるプロティンＡ又は
プロティンＧを第２抗体とともに用いることもできる。

」と訂正する。

■同書第１５頁第１４行の「ニトロホスフェート」を「
ニトロフェニルホスフェート」と訂正する。

θ）同書第２０頁第１表（続き）中、 【 別 紙 ■ ］ 第 表 と訂正する。

（至）同書第２２頁の第２表を別紙■のとおりに訂・正
する。

０１）同書第２３頁の第２表（続き）を別紙■のとおり
に訂正する。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、α型ヒト心房性ナトリウム利尿ポリペプチド分子中
   の少なくともＴｙｒ（２８）、Ｃｙｓ（７）−Ｃｙｓ（
   ２３）間のジスルフィド結合及びＣｙｓ（７）〜Ｍｅｔ
   （１２）を抗原として認識することを特徴とするヒト心
   房性ナトリウム利尿ポリペプチド抗体。 ２、請求項１記載のヒト心房性ナトリウム利尿ポリペプ
   チド抗体を用いることを特徴とするヒト心房性ナトリウ
   ム利尿ポリペプチドの免疫学的測定法。