JPH03151883A - 形質転換法 - Google Patents
形質転換法Info
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- JPH03151883A JPH03151883A JP1288757A JP28875789A JPH03151883A JP H03151883 A JPH03151883 A JP H03151883A JP 1288757 A JP1288757 A JP 1288757A JP 28875789 A JP28875789 A JP 28875789A JP H03151883 A JPH03151883 A JP H03151883A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、遺伝子を宿主細胞内にとり込ませて生じる形
質転換を指標として、目的の遺伝子をもつ細胞を検出す
る形質転換法に関するものである。
質転換を指標として、目的の遺伝子をもつ細胞を検出す
る形質転換法に関するものである。
(従来の技術〕
目的とする遺伝子を保持する細胞をスクリーニングする
基礎技術として、通常形質転換法が用いられている。
基礎技術として、通常形質転換法が用いられている。
細胞を形質転換させるための遺伝子を含むベクターDN
Aに、目的とする遺伝子を含むDNA断片を組み込んだ
組み換えDNAを宿主細胞に取り込ませると、その宿主
細胞は形質転換される。このベクターDNAによる細胞
の形質転換においては、例えば栄養要求性、薬剤耐性、
温度感受性を発現させるためのマーカーをベクターDN
Aに付加し、マーカーの発現を介して目的とする遺伝子
をもつ細胞を効果的に検出することができる。この形質
転換を行うためには宿主細胞がDNAを吸収できる状態
(コンピテント)にあることが重要であるが、1970
年、Mande lと旧gaらは大腸菌を塩化カルシウ
ムで処理すると大腸菌の細胞壁の構造が変化してベクタ
ーDNAを容易に透過することを発見し、人為的にコン
ピテントをつくる手法を確立した。
Aに、目的とする遺伝子を含むDNA断片を組み込んだ
組み換えDNAを宿主細胞に取り込ませると、その宿主
細胞は形質転換される。このベクターDNAによる細胞
の形質転換においては、例えば栄養要求性、薬剤耐性、
温度感受性を発現させるためのマーカーをベクターDN
Aに付加し、マーカーの発現を介して目的とする遺伝子
をもつ細胞を効果的に検出することができる。この形質
転換を行うためには宿主細胞がDNAを吸収できる状態
(コンピテント)にあることが重要であるが、1970
年、Mande lと旧gaらは大腸菌を塩化カルシウ
ムで処理すると大腸菌の細胞壁の構造が変化してベクタ
ーDNAを容易に透過することを発見し、人為的にコン
ピテントをつくる手法を確立した。
現在、形質転換法に3けるカルシウム処理はカルシウム
処理と加温処理から成っている。すなわち、低温でカル
シウム処理し細胞膜の透過性が増大したコンピテントの
宿主細胞と形質転換用の組み換えDNAの混合液を水中
に一定時間放置する。次に、加温処理することによって
組み換えDNAを細膓内へ導入する。これを適当な選択
培地で生育させ目的とする遺伝子を含む細胞をスクリー
ニングする手法である。
処理と加温処理から成っている。すなわち、低温でカル
シウム処理し細胞膜の透過性が増大したコンピテントの
宿主細胞と形質転換用の組み換えDNAの混合液を水中
に一定時間放置する。次に、加温処理することによって
組み換えDNAを細膓内へ導入する。これを適当な選択
培地で生育させ目的とする遺伝子を含む細胞をスクリー
ニングする手法である。
このカルシウム処理による形質転換法は、遺伝子を細胞
に導入する他の方法、例えばマイクロインジェクション
法、細胞融合法、エレクトロポーション等に比べて多く
用いられている。
に導入する他の方法、例えばマイクロインジェクション
法、細胞融合法、エレクトロポーション等に比べて多く
用いられている。
従来の形質転換法による形質転換効率、すなわちDNA
が宿主菌に組み込まれる確率は、導入する組み換えDN
Aの添加量と相関関係にある。形質転換率は通常低く、
例えば宿主菌にTAKARA E。
が宿主菌に組み込まれる確率は、導入する組み換えDN
Aの添加量と相関関係にある。形質転換率は通常低く、
例えば宿主菌にTAKARA E。
Co11 JM 109コンピテントセルを用いた場合
の形質転換効率のカタログ値は、1×107colon
y/μgと示されている。
の形質転換効率のカタログ値は、1×107colon
y/μgと示されている。
しかし、この値は組み換えDNAを構成する目的DNA
断片とベクターDNAのりガーゼによるDNA結合が1
00%完全なものについての数値であり、現実的にはこ
の数値のような高い形質転換効率は望めない。すなわち
、形質転換効率は目的DNA断片の状態、目的DNA断
片とベクターDNAの濃度比、ワガーゼによってDNA
結合を行う部位及びベクターの種類などに起因する組み
換えDNAの形成条件等によって大きく影響されカタロ
グ値を大きく下回っているのが現状である。
断片とベクターDNAのりガーゼによるDNA結合が1
00%完全なものについての数値であり、現実的にはこ
の数値のような高い形質転換効率は望めない。すなわち
、形質転換効率は目的DNA断片の状態、目的DNA断
片とベクターDNAの濃度比、ワガーゼによってDNA
結合を行う部位及びベクターの種類などに起因する組み
換えDNAの形成条件等によって大きく影響されカタロ
グ値を大きく下回っているのが現状である。
一方、形質転換法においである特定の遺伝子を検出する
ための必要コロニー数は、L、 C1arke。
ための必要コロニー数は、L、 C1arke。
J、 Carbonによって導かれた次式((:all
、 9.91゜1976)によフて求めることができる
。
、 9.91゜1976)によフて求めることができる
。
N=1n (1−p)
In(1−f)
N:クローンの数 p:確率
例えば、ゲノムサイズが5XlO’bp程度の遺伝子か
らライブラリーを作成し、そこから目的の遺伝子を検出
しようとする場合、ゲノムを消化し、平均9kbのDN
AをλフアージDNAに結合させた組み換えDNAを調
製して形質転換法に用いる。この時、形質転換によって
生育したコロニーから99%の確率で目的の遺伝子を検
出するためのコロニー数は次式によって求められ、その
結果1:’1520コロニーが必要となる。
らライブラリーを作成し、そこから目的の遺伝子を検出
しようとする場合、ゲノムを消化し、平均9kbのDN
AをλフアージDNAに結合させた組み換えDNAを調
製して形質転換法に用いる。この時、形質転換によって
生育したコロニーから99%の確率で目的の遺伝子を検
出するためのコロニー数は次式によって求められ、その
結果1:’1520コロニーが必要となる。
ここで、実際に用いた遺伝子についてlXl0’col
ony/μgの割合でコロニーが得られるとすると、上
記の式で求められた目的の遺伝子を検出するために必要
なコロニー数を得るために使用される当初の遺伝子の量
は135.2 ngとなる。しかし形質転換率が高くな
り1 x 10’ colony/μgの割合でコロニ
ーが得られるとすると、目的の遺伝子を検出するために
必要な当初の遺伝子の量は13.5ngと少量ですむ。
ony/μgの割合でコロニーが得られるとすると、上
記の式で求められた目的の遺伝子を検出するために必要
なコロニー数を得るために使用される当初の遺伝子の量
は135.2 ngとなる。しかし形質転換率が高くな
り1 x 10’ colony/μgの割合でコロニ
ーが得られるとすると、目的の遺伝子を検出するために
必要な当初の遺伝子の量は13.5ngと少量ですむ。
また、遺伝子ライブラリーから目的の遺伝子を検出する
には通常数千から致方のコロニー又はプラークからスク
リーニングを行うので、コロニ又はプラーク数が多いほ
ど、すなわち、形質転換率が高いほど目的とする遺伝子
を含む宿主細胞を検出する確率は高くなる。
には通常数千から致方のコロニー又はプラークからスク
リーニングを行うので、コロニ又はプラーク数が多いほ
ど、すなわち、形質転換率が高いほど目的とする遺伝子
を含む宿主細胞を検出する確率は高くなる。
以上のような理由から、従来の形質転換法においては目
的とする遺伝子を含むDNAがライゲーション反応等の
損失などかられずかしか得られない場合、十分な形質転
換体をスクリーニングすることが困難であり、また、1
回の形質転換で必要量がスクリーニングされなければ形
質転換の操作を何度も繰り返さなければならないという
欠点があった。このため、少量の遺伝子から多くの形質
転換体を形成することができる形質転換効率の高い手法
が望まれていた。
的とする遺伝子を含むDNAがライゲーション反応等の
損失などかられずかしか得られない場合、十分な形質転
換体をスクリーニングすることが困難であり、また、1
回の形質転換で必要量がスクリーニングされなければ形
質転換の操作を何度も繰り返さなければならないという
欠点があった。このため、少量の遺伝子から多くの形質
転換体を形成することができる形質転換効率の高い手法
が望まれていた。
本発明は、このような形質転換法における問題点を解決
するために鋭意検討した結果、形質転換効率を高め、か
つ簡便に操作される検出方法を達成したものである。
するために鋭意検討した結果、形質転換効率を高め、か
つ簡便に操作される検出方法を達成したものである。
本発明は、カルシウム法を利用した形質転換法における
遺伝子の宿主細胞への導入工程を重力加速度より大きい
重力条件下で行うことを特徴とする形質転換法である。
遺伝子の宿主細胞への導入工程を重力加速度より大きい
重力条件下で行うことを特徴とする形質転換法である。
すなわち、形質転換のための組み換えDNAとそれに対
して受容状態にある宿主細胞とを混在した溶液を所定の
温度条件で重力加速度より大きい重力条件下に置くこと
により形質転換率を大きく向上させ得る方法を見い出し
たものである。
して受容状態にある宿主細胞とを混在した溶液を所定の
温度条件で重力加速度より大きい重力条件下に置くこと
により形質転換率を大きく向上させ得る方法を見い出し
たものである。
ここでいう重力加速度より大きい重力条件下とは、10
〜160重力加速度で20〜70分間好ましくは、30
〜100重力加速度で30〜60分間であり、例えば、
遠心分離機を用いた遠心などの手段が考えられる。
〜160重力加速度で20〜70分間好ましくは、30
〜100重力加速度で30〜60分間であり、例えば、
遠心分離機を用いた遠心などの手段が考えられる。
また、本発明の重力条件下で使用可能な形質転換を行う
組み換えDNAは、通常の形質転換法で調製されたもの
でよく、これに対して用いられる宿主細胞についてもカ
ルシウム処理を行う通常の形質転換法で使用する大腸菌
、酵母などの微生物細胞及び動植物細胞が適用可能であ
る。
組み換えDNAは、通常の形質転換法で調製されたもの
でよく、これに対して用いられる宿主細胞についてもカ
ルシウム処理を行う通常の形質転換法で使用する大腸菌
、酵母などの微生物細胞及び動植物細胞が適用可能であ
る。
具体的な重力加速度より大きい重力条件としては、遠心
分離機を用いた場合、10〜160重力加速度の範囲が
適当であるが、これは使用する宿主細胞の種類によって
異なる。遠心の時間は通常の組み換えDNAを宿主細胞
に導入する時間を当てるのが好ましいが、形質導入に使
用するベクターDNA、目的DNA断片及び宿主細胞の
種類等の各条件に対応した時間を設定することが好まし
い。
分離機を用いた場合、10〜160重力加速度の範囲が
適当であるが、これは使用する宿主細胞の種類によって
異なる。遠心の時間は通常の組み換えDNAを宿主細胞
に導入する時間を当てるのが好ましいが、形質導入に使
用するベクターDNA、目的DNA断片及び宿主細胞の
種類等の各条件に対応した時間を設定することが好まし
い。
温度条件については、通常の形質転換法において遺伝子
の宿主細胞への導入が水中にて行なわれるので、遠心操
作においても0℃〜5℃の低温で行うことが好ましい。
の宿主細胞への導入が水中にて行なわれるので、遠心操
作においても0℃〜5℃の低温で行うことが好ましい。
この重力加速度より大きい重力条件を用いた形質転換法
における形質転換率向上の原因は以下のように推測され
る。すなわち、基本的に形質転換率は導入されるDNA
と宿主細胞の出会う確率によるところが大きく、遠心操
作によってその確率が増大したものと考えられる。また
、遠心操作によって生じる圧力によって宿主細胞に導入
されるDNAが細胞膜を通過して細胞内に入りやすい状
態になるということが推測される。
における形質転換率向上の原因は以下のように推測され
る。すなわち、基本的に形質転換率は導入されるDNA
と宿主細胞の出会う確率によるところが大きく、遠心操
作によってその確率が増大したものと考えられる。また
、遠心操作によって生じる圧力によって宿主細胞に導入
されるDNAが細胞膜を通過して細胞内に入りやすい状
態になるということが推測される。
(実施例〕
以下に本発明を実施例にて示すが、本発明はこれに限定
されるものではない。
されるものではない。
操作1 組み換えDNAの調製
目的DNA断片として高度好塩菌Halobacter
iu+s halobiumの染色体DNAを用いた。
iu+s halobiumの染色体DNAを用いた。
染色体DNA 2μgを制限酵素BanIn、Hin
dlII各6 unitを用いて90分間37℃で完全
消化を行った。
dlII各6 unitを用いて90分間37℃で完全
消化を行った。
次に、ベクターDNAとしてPTP5−81(TOYO
BO社)を使用し、その1μgを目的DNA断片と同様
に制限酵素BanIII、Hindnl各6unitを
用いて60分間37℃で完全消化を行なった。
BO社)を使用し、その1μgを目的DNA断片と同様
に制限酵素BanIII、Hindnl各6unitを
用いて60分間37℃で完全消化を行なった。
完全消化処理したベクターDNA 1100nと目的
DNA断片1100nの混合物にT4リガーゼ(TOY
OBO社)を添加し、−晩4℃の条件下でDNA連結反
応を行なった。
DNA断片1100nの混合物にT4リガーゼ(TOY
OBO社)を添加し、−晩4℃の条件下でDNA連結反
応を行なった。
操作2 形質転換
DNA連結反応によって得られた組み換えDNAと宿主
細胞T八KARA E、 Co11 JM 109 :
I ンピテントセルを用いて形質転換法を実施した。
細胞T八KARA E、 Co11 JM 109 :
I ンピテントセルを用いて形質転換法を実施した。
宿主細胞TAKARA E、豆旦JM 109コンピテ
ントセル120μ2を使用直前に水中で融解した。融解
後穏やかに混和して均一にし、形質転換用の組み換えD
NAlongを加え、この宿主細胞とDNAの混合液を
0℃で30分間TOMY MR−150を用いて約70
重力加速度に相当する1 000 r、p、m、で遠心
した。遠心後書懸濁し、60秒間42℃で加温した後2
分間水中にて放置した。次に、Falconチューブに
サンプルを移し、あらかじめ37℃に保温しておいたS
oC培地を最終1 mILになるように加え、37℃
、160 r、p、m、で振盪した。振盪後溶液100
μ2をLB培地のプレート10枚に各々添加して37℃
で一晩放置し、生育したコロニーの数をカウントした。
ントセル120μ2を使用直前に水中で融解した。融解
後穏やかに混和して均一にし、形質転換用の組み換えD
NAlongを加え、この宿主細胞とDNAの混合液を
0℃で30分間TOMY MR−150を用いて約70
重力加速度に相当する1 000 r、p、m、で遠心
した。遠心後書懸濁し、60秒間42℃で加温した後2
分間水中にて放置した。次に、Falconチューブに
サンプルを移し、あらかじめ37℃に保温しておいたS
oC培地を最終1 mILになるように加え、37℃
、160 r、p、m、で振盪した。振盪後溶液100
μ2をLB培地のプレート10枚に各々添加して37℃
で一晩放置し、生育したコロニーの数をカウントした。
これをサンプルAとした。
対照として、上記形質転換法において、宿主細胞とDN
A混合液を0℃で30分間遠心する工程のみを0℃、3
0分間放置の条件とし、他のサンプル及び方法工程を同
一とした従来の方法のものをサンプルBとして同様の手
順で実験を行なった。
A混合液を0℃で30分間遠心する工程のみを0℃、3
0分間放置の条件とし、他のサンプル及び方法工程を同
一とした従来の方法のものをサンプルBとして同様の手
順で実験を行なった。
以下の第1表にサンプルA及びサンプルBの生育したコ
ロニー数を示した。
ロニー数を示した。
第1表
(発明の効果)
本発明においては、カルシウム法を利用した形質転換法
における遺伝子の宿主細胞への導入工程を重力加速度よ
り大きい重力条件下で行うことにより、従来の方法に比
べて高い形質転換効率を得ることができる。
における遺伝子の宿主細胞への導入工程を重力加速度よ
り大きい重力条件下で行うことにより、従来の方法に比
べて高い形質転換効率を得ることができる。
すなわち、本発明によって従来よりも目的とする遺伝子
を含む細胞が多数スクリーニングされ遺伝子のクローニ
ングの効率が向上するとともに、試料とする遺伝子の微
量化を図ることが可能となり、わずかの遺伝子しか得ら
れない試料に対して特に効果的に形質転換を行うことが
できる。
を含む細胞が多数スクリーニングされ遺伝子のクローニ
ングの効率が向上するとともに、試料とする遺伝子の微
量化を図ることが可能となり、わずかの遺伝子しか得ら
れない試料に対して特に効果的に形質転換を行うことが
できる。
Claims (3)
- (1)カルシウム法による宿主細胞への遺伝子の導入過
程を含む形質転換法において、カルシウム処理により得
られたコンピテント宿主細胞と遺伝子とを混合する操作
を重力加速度より大きい重力条件下で行う工程を含むこ
とを特徴とする形質転換法。 - (2)重力加速度より大きい重力条件を遠心分離機によ
る遠心により得ることを特徴とする請求項1に記載の形
質転換法。 - (3)遠心分離機による条件が10〜160重力加速度
で20〜70分であることを特徴とする請求項1、2に
記載の形質転換法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1288757A JPH03151883A (ja) | 1989-11-08 | 1989-11-08 | 形質転換法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1288757A JPH03151883A (ja) | 1989-11-08 | 1989-11-08 | 形質転換法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH03151883A true JPH03151883A (ja) | 1991-06-28 |
Family
ID=17734314
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1288757A Pending JPH03151883A (ja) | 1989-11-08 | 1989-11-08 | 形質転換法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH03151883A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995010619A3 (en) * | 1993-10-08 | 1995-07-13 | Univ Michigan | Methods of increasing rates of infection by directing motion of vectors |
US5811274A (en) * | 1994-12-09 | 1998-09-22 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods, compositions and apparatus for cell transfection |
US6010885A (en) * | 1993-03-25 | 2000-01-04 | The Regents Of The University Of California | Expression of heterologous polypeptides in halobacteria |
-
1989
- 1989-11-08 JP JP1288757A patent/JPH03151883A/ja active Pending
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
J.MOL.BIOL.=1970 * |
J.MOL.BIOL.=1983 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6010885A (en) * | 1993-03-25 | 2000-01-04 | The Regents Of The University Of California | Expression of heterologous polypeptides in halobacteria |
WO1995010619A3 (en) * | 1993-10-08 | 1995-07-13 | Univ Michigan | Methods of increasing rates of infection by directing motion of vectors |
US5534423A (en) * | 1993-10-08 | 1996-07-09 | Regents Of The University Of Michigan | Methods of increasing rates of infection by directing motion of vectors |
US5866400A (en) * | 1993-10-08 | 1999-02-02 | The University Of Michigan | Methods of increasing rates of infection by directing motion of vectors |
US5811274A (en) * | 1994-12-09 | 1998-09-22 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods, compositions and apparatus for cell transfection |
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