JPH03151879A - Dna sequence having genetic information of lipoprotein lipase - Google Patents
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、微生物由来のリポプロティンリパーゼをコー
ドする遺伝子のＤＮＡ配列に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Field of Application] The present invention relates to a DNA sequence of a gene encoding lipoprotein lipase derived from a microorganism.
リボプロティンリパーゼ（以下、ＬＰＬと略する）は生
体中のカイロミクロン、その他の低比重りボタンバク質
のトリグリセライドを加水分解する特殊なトリアジルグ
リセロ−プロティンアシルハイドロラーゼ（ＥＣ３，１
，１，３４）である、当該酵素は、その効率的な加水分
解に、例えばプロテアーゼ等の助力を必要とするいわゆ
るリパーゼ（トリアジルグリセロールアシルハイドロラ
ーゼ。Riboprotein lipase (hereinafter abbreviated as LPL) is a special triadylglycero-protein acyl hydrolase (EC3,1
, 1, 34), the enzyme is a so-called lipase (triazylglycerol acyl hydrolase) that requires the assistance of, for example, a protease for its efficient hydrolysis.
ＥＣ，３，１，１，３）と区別されている。EC, 3, 1, 1, 3).
従来、ＬＰＬはシュードモナス属やクロモバクテリウム
属等の微生物や人、マウス、牛等の哺乳類に存在するこ
とが知られており、特に微生物由来のＬＰＬが工業的に
製造されている（特公昭６３−３５９４号公報）。Conventionally, LPL has been known to exist in microorganisms such as Pseudomonas and Chromobacterium, as well as in mammals such as humans, mice, and cows, and especially LPL derived from microorganisms has been industrially produced (Japanese Patent Publication No. 63 -3594 publication).
ＬＰＬは特に臨床検査分野において、血清又はその他の
試料中のトリグリセライドの定量に広く利用されている
。しかしながら、ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配
列については人（Ｓｃｉｅｎｃｅｌ １６３８〜１６４
１（１９８７）） 、マウス（Ｊ、 Ｂｉｏｌ。LPL is widely used, especially in the clinical laboratory field, for the determination of triglycerides in serum or other samples. However, the DNA sequence of the gene encoding LPL has not been determined by humans (Science 1638-164).
1 (1987)), Mouse (J, Biol.
Ｃｈｅｗ、 ｚ旦２エ ８４６３ 〜８４６６（１９
８７）） 、 牛（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。Chew, zdan2e 8463 ~ 8466 (19
87)), Cattle (Proc, Natl.
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、＾、 Ｕ、 ４３６９
〜４３７３（１９Ｂ？））等哺乳類のものについては知
られているが、微生物由来のものに関しては全く知られ
ていなかった。Acad, Sci, U, S, ^, U, 4369
-4373 (19B?)), but nothing was known about microorganisms.
なお、シュードモナスフラジが生産する、いわゆるリパ
ーゼについては、すでにＤＮＡ配列が知られているが（
Ｂｉｏｃｈｅｓ＋、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ｒｅｓ、 Ｃ
ｏａｎｕｎ。The DNA sequence of the so-called lipase produced by Pseudomonas fragi is already known (
Bioches+, Biophys, Res, C
oanun.
Ｌ４ＬＬ１８５〜１９０（１９８６） 、特開昭６４−
７４９９２号公報）これらは上記したように明らかに本
発明とは異なる酵素である。L4LL185-190 (1986), JP-A-1986-
74992) As mentioned above, these are clearly different enzymes from those of the present invention.
（発明が解決しようとする！ｉｏ）
本発明の課題は、遺伝子工学的手法によりＬＰＬを効率
良く生産したり、ＬＰＬの構造を明らかにするための、
微生物由来のＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を
提供することにある。(Solved by the invention! io) The problem of the present invention is to efficiently produce LPL using genetic engineering techniques and to clarify the structure of LPL.
The object of the present invention is to provide a DNA sequence of a gene encoding LPL derived from a microorganism.
本発明者らは、上記の課題を解決するため、微生物由来
のＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列について検討
した。そして、ＬＰＬ生産菌の有するＬＰＬ遺伝子をク
ローニングし、該遺伝子を含有するＤＮＡ断片を得ると
ともに該遺伝子のＤＮＡ配列を決定することに成功し、
さらに研究を重ねて本発明を完成するに至った。In order to solve the above problems, the present inventors investigated the DNA sequence of a gene encoding LPL derived from a microorganism. They successfully cloned the LPL gene possessed by LPL-producing bacteria, obtained a DNA fragment containing the gene, and determined the DNA sequence of the gene.
Further research led to the completion of the present invention.
すなわち、本発明は微生物由来のＬＰＬをコードする遺
伝子のＤＮＡ配列に関するものである。That is, the present invention relates to the DNA sequence of a gene encoding LPL derived from a microorganism.
本発明のＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列は一義
的には決まらず、多種存在する可能性があり得る。この
ことは、よく知られているように、多くのアミノ酸にお
いて、それをコードする遺伝子のＤＮＡ配列が複数存在
することからも当然のことである０本発明者等により明
らかにされたＬＰＬのアミノ酸配列をコードする遺伝子
の場合も、そのＤＮＡ配列は天然の遺伝子の塩基配列以
外にも多数の可能性があり、本発明のＤＮＡ配列は、天
然の−ＤＮＡ配列のみに限定されるものではなく、本発
明により明らかにされたＬＰＬのアミノ酸配列をコード
する他のＤＮＡ配列も含むものである。The DNA sequence of the gene encoding the LPL of the present invention is not uniquely determined, and there may be many types. This is natural since, as is well known, for many amino acids, there are multiple DNA sequences of genes encoding them. In the case of a gene encoding a sequence, there are many possibilities for the DNA sequence other than the base sequence of the natural gene, and the DNA sequence of the present invention is not limited to only the natural -DNA sequence. It also includes other DNA sequences encoding the amino acid sequence of LPL revealed by the present invention.
さらに遺伝子組み換え技術によれば、基本となるＤＮＡ
特定の部位に、該ＤＮＡがコードするものの基本的な特
性を変化させることなく、あるいはその特性を改善する
ように、人為的に変異を起こすことができる０本発明に
より提供される天然の塩基配列を有するＤＮＡあるいは
天然のものとは異なる塩基配列を有するＤＮＡに関して
も同様に人為的に挿入、欠失、置換を行うことにより天
然の遺伝子を同等あるいは改善された特性とすることが
可能であり、本発明はそのような変異遺伝子をも当然に
含むものである。Furthermore, according to genetic recombination technology, the basic DNA
A natural base sequence provided by the present invention that can be artificially mutated at a specific site without changing the basic characteristics of what is encoded by the DNA or so as to improve the characteristics. Similarly, it is possible to artificially insert, delete, or substitute DNA with a base sequence different from that of a natural gene to make it have the same or improved characteristics as a natural gene. The present invention naturally includes such mutant genes.
本発明においてＬＰＬをコードする遺伝子は、シュード
モナス属に属する微生物由来のものであることか好まし
い。In the present invention, the gene encoding LPL is preferably derived from a microorganism belonging to the genus Pseudomonas.
また、本発明におけるＤＮＡ配列は下記のアミノ酸配列
をコードするものであることが好適である。Moreover, it is preferable that the DNA sequence in the present invention encodes the following amino acid sequence.
ＡＰＰＴＴＩＶＳＡＰＡＶＲ？ＷＡＷ
さらに、本発明におけるＤＮＡ配列は下記のＤＮＡ配列
を有するものであることが好適である。APPTTIVSAPAVR? WAW Furthermore, it is preferable that the DNA sequence in the present invention has the following DNA sequence.
以下、本発明を実施するための各ステップについて詳細
に説明する。Hereinafter, each step for carrying out the present invention will be explained in detail.
（ａ）ＬＰＬをコードする遺伝子を有するＤＮＡ断片及
び組み換えベクターの調製
本発明に用いられる組み換えベクターは、例えばエシェ
リヒア属に属する微生物の培養された細胞内での複製能
を有するベクターＤＮＡに、ＬＰＬ生産能を有する微生
物から調製されたＬＰＬをコードする遺伝子を有するＤ
ＮＡ断片を組み込んでなるものである。(a) Preparation of a DNA fragment and recombinant vector having a gene encoding LPL The recombinant vector used in the present invention can be used to produce LPL by adding vector DNA capable of replicating in cultured cells of a microorganism belonging to the genus Escherichia. D containing a gene encoding LPL prepared from a microorganism capable of
It incorporates an NA fragment.
かかるものの好適な例としては、以下の如くして調製さ
れたものが例示される。すなわち、シュードモナスＰＳ
−２１（微工研菌寄第７０２６号）を栄養培地で培養し
、培養物を得る。この培養物を、例えば５．００Ｏｒｐ
ｍ以上、好ましくは８゜０００〜１０．００Ｏｒｐｍで
５分以上、好ましくは１０〜１５分間遠心分離してシュ
ードモナスＰＳ−２１の菌体を得る。Suitable examples of such products include those prepared as follows. That is, Pseudomonas PS
-21 (Feikoken Bacteria No. 7026) is cultured in a nutrient medium to obtain a culture. This culture is, for example, 5.00 Orp.
Pseudomonas PS-21 cells are obtained by centrifugation at m or more, preferably 8°000 to 10.00 rpm, for 5 minutes or more, preferably 10 to 15 minutes.
この菌体より、例えばＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＯＮＡ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｒｏｄｒｉｑｕｅｓ、 Ｒ，
Ｌ、 ｅｔ ａｌ、 Ａｄｄｉｓｏｎ−ＷｅｓｌｅｙＰ
ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８３）記載
の方法、あるいはＫｏｉｚｕｍｉ Ｊ、らの方法（Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ、 Ｂｉｏｅｎｇｘ 」ム７２１〜７２８．
１９８５）等により染色体ＤＮＡを得ることができる。From this bacterial body, for example, Recombinant ONA
Techniques (Rodriques, R.
L, et al, Addison-WesleyP
Publishing Company, 1983) or the method of Koizumi J, et al. (Bi
721-728.
Chromosomal DNA can be obtained by methods such as (1985).
この染色体ＤＮＡにＢａｍ１ｌｌ、ＥｃｏＲＩ、５ａｕ
３ＡＩ、 （東洋紡製）等の制限酵素を用いて、部分分
解又は完全分解することにより、種々の大きさの染色体
ＤＮＡ断片混合物を得る。This chromosomal DNA contains Bam1ll, EcoRI, and 5au.
A mixture of chromosomal DNA fragments of various sizes is obtained by partial or complete decomposition using a restriction enzyme such as 3AI (manufactured by Toyobo).
このようにして得られたＤＮＡ断片混合物から、例えば
シｇ糖密度勾配遠心分離等により低分子量のＤＮＡ断片
を除き、さらにエタノール沈澱法等の濃縮手段により濃
縮し、ＬＰＬをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ断片
混合物を得る。From the DNA fragment mixture obtained in this way, low molecular weight DNA fragments are removed, for example, by sig sugar density gradient centrifugation, and further concentrated by a concentration means such as ethanol precipitation, thereby containing the gene encoding LPL. Obtain a DNA fragment mixture.
一方、本発明に用いるベクターＤＮＡとしては、如何な
るものでもよく、例えばプラスミドヘクターＤＮＡ、バ
クテリオファージベクターＤＮＡ等が挙げられるが、好
適な例としてはプラスミドベクターｐＢＲ３２２，ｐυ
Ｃ１９（東洋紡製）、バクテリオファージベクターＥＭ
ＢＬ３．λＺＡＰ （ＳＴｌ？ＡＴＡｌｌｉＥＮＥ製）
等が挙げられる。On the other hand, the vector DNA used in the present invention may be of any kind, such as plasmid hector DNA, bacteriophage vector DNA, etc., but preferred examples include plasmid vectors pBR322, pυ
C19 (manufactured by Toyobo), bacteriophage vector EM
BL3. λZAP (Made by STl?ATAliENE)
etc.
次に、上記ベクターＤＮＡに上記のようにして得たＬＰ
Ｌをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ断片混合物を連
結する。連結には、例えば大腸菌ＤＮＡリガーゼ、Ｔ、
−ＤＮＡリガーゼ（東洋紡製）等、好ましくはＴ、−Ｄ
ＮＡリガーゼを４〜３７℃、好マシ＜は４〜１６°ｃ−
ｔ’酵素１〜１ｏＯユニット１時間以上、好ましくは４
〜１６時間作用させて組み換えＤＮＡを得る。Next, the LP obtained as above was added to the vector DNA.
A mixture of DNA fragments containing the gene encoding L is ligated. For ligation, for example, E. coli DNA ligase, T,
-DNA ligase (manufactured by Toyobo), preferably T, -D
NA ligase at 4-37°C, preferably 4-16°C.
t' enzyme 1 to 1oO units for 1 hour or more, preferably 4
Allow to act for ~16 hours to obtain recombinant DNA.
この組み換えＤＮＡを用いて、例えばＥ、ｃｏｌｉ Ｋ
１２、好ましくはＥ、ｃｏｌｉ ＪＭ１０９株、Ｅ、ｃ
ｏｌｉ Ｈ８１（１１株、Ｅ、ｃｏｌｉ Ｐ２３９２株
、Ｅ、ｃｏｌｉ ＸＬＩ−ｂｌｕｅ株（ＳＴＲＡＴＡＧ
ＥＮＥ）等を形質転換あるいは形質導入して、それぞれ
の菌体を得る。この形質転換及び形質導入は、例えばＭ
ｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｍａｎｉａｔｉｓ
Ｔ、 ｅｔ ａｔ、 ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ ）ｌａ
ｒｂｏｒ、１９８２）記載の方法により行うことができ
る。Using this recombinant DNA, for example, E. coli K.
12, preferably E.coli JM109 strain, E.c.
coli H81 (11 strains, E. coli P2392 strain, E. coli XLI-blue strain (STRATAG
ENE), etc. to obtain the respective bacterial cells. This transformation and transduction can be carried out, for example, by M.
o1ecular Cloning (Maniatis
T, et at, ColdSpring) la
It can be carried out according to the method described in (Rbor, 1982).
（ｂ）ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を存した
組み換えプラスミドの調製
上記菌株よりのＬＰＬをコードする遺伝子を含有する組
み換えＤＮＡの検索は、公知のハイブリダイゼーション
による方法、抗ＬＰＬ抗体を用いる方法、ハロー形成等
によるＬＰＬ活性を検出する方法等いずれの方法でも行
うことができる。(b) Preparation of a recombinant plasmid containing the DNA sequence of the LPL-encoding gene Search for recombinant DNA containing the LPL-encoding gene from the above-mentioned bacterial strain can be carried out using known hybridization methods, methods using anti-LPL antibodies, Any method can be used, such as a method of detecting LPL activity by halo formation or the like.
さらに上記組み換えＤＮＡ中のＬＰＬをコードする遺伝
子を含有するＤＮＡ断片を常法に従い小断片化して上記
プラスミドベクターＤＮＡと連結し、ＬＰＬをコードす
る遺伝子のＤＮＡ配列を存した組み換えプラスミドを得
ることができる。Furthermore, a DNA fragment containing the gene encoding LPL in the recombinant DNA is fragmented into small fragments according to a conventional method and ligated with the plasmid vector DNA to obtain a recombinant plasmid containing the DNA sequence of the gene encoding LPL. .
（Ｃ）ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列の決定
上記ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を有した組
み換えプラスミドよりＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮ
Ａ配列を決定するには、公知の方法、例えばＳａｎｇｅ
ｒ等によるｄｉｄｅｏｘｙ法（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。(C) Determination of the DNA sequence of the gene encoding LPL Determining the DNA sequence of the gene encoding LPL from the recombinant plasmid having the DNA sequence of the gene encoding LPL.
To determine the A sequence, known methods such as Sange
dideoxy method (Proc, Natl.
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、υ、Ｓ、Ａ、 、７１．５４６３
〜５４６７、１９７７）を用いて決定することができる
。Acad, Sci, υ, S, A, , 71.5463
~5467, 1977).
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。Hereinafter, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples.
（１）シュードモナスＰＳ−２１の染色体ＤＮＡの調製
シュードモナスｐｓ−２１（微工研菌寄第７０２６号）
をＬＢ培地（ポリペプトン１．０％、酵母エキス０．５
％、塩化ナトリウム１．０％、ｐ Ｈ７，４） １００
ｄに接種し、３０″Ｃで８時間振盪培養して培養物を得
た。この培養物を１２．００Ｏｒｐｍ、１０分間遠心分
離して湿菌体約１ｇを得た後、該菌体からＲｅｃｏ＋１
ｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｒｏｄ
ｒｉｑｕｅｚ Ｒ，Ｌ。(1) Preparation of chromosomal DNA of Pseudomonas PS-21
LB medium (polypeptone 1.0%, yeast extract 0.5
%, sodium chloride 1.0%, pH 7.4) 100
d and cultured with shaking at 30"C for 8 hours to obtain a culture. This culture was centrifuged at 12.00 rpm for 10 minutes to obtain about 1 g of wet bacterial cells.
binant DNA Techniques (Rod
riquez R,L.
ｅｔ ａｌ、 Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８３）記載の方
法により染色体ＤＮＡｖ１１．８ｍｇを調製した０次に
、この染色体ＤＮＡ １００μｇを制限酵素ＭｂｏＩ（
宝酒造社製）で常法に従い部分分解し、５〜２０％シｇ
糖密度勾配遠心分離を行って７〜２３Ｋｂ画分のＤＮＡ
断片約１０μｇを調製した。et al, Addison-Wesley Pub
Next, 100 μg of this chromosomal DNA was treated with the restriction enzyme MboI (
(manufactured by Takara Shuzo Co., Ltd.) according to the conventional method, and 5 to 20% sig.
Sugar density gradient centrifugation was performed to extract DNA from the 7-23 Kb fraction.
Approximately 10 μg of fragment was prepared.
（２）ＬＰＬをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ断片
及び該ＤＮＡ断片を有する組み換えベクターの調製
バクテリオファージベクターＥＭＢ Ｌ ３ （Ｂ ａ
ｍＨＩ切断済、５ＴＲＡＴＡＣＥＮＥ製） ｔμｇと上
記（１）で得られたＤＮＡ断片０．５μｇをＴ。(2) Preparation of a DNA fragment containing the gene encoding LPL and a recombinant vector containing the DNA fragment Bacteriophage vector EMBL 3 (B a
mHI-cleaved, 5TRATACENE) and 0.5 μg of the DNA fragment obtained in (1) above.
−ＤＮＡリガーゼ（東洋紡製）１ユニツトで１６℃、１
２時間反応させＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡはλ
ＤＮＡインビトロパンケージングキットＧｉｇａｐａｃ
ｋ Ｇｏｌｄ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ製）を用いてパッ
ケージングした。パッケージングにより得られた組み換
えファージはＭｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｍ
ａｎｉａｔｉｓＴ、ｅｔ ａｌ、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、 １９８２）記載の方法でＥ、
ｃｏｌｉ Ｐ２３９２（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ製）に形
質導入した。使用ＤＮＡ断片０当たり、約ｌＸｌ０’個
のファージプラークが得られた。-1 unit of DNA ligase (manufactured by Toyobo) at 16°C, 1
The DNA was ligated by reacting for 2 hours. The connected DNA is λ
DNA in vitro pancaging kit Gigapac
It was packaged using k Gold (manufactured by STRATAGENE). The recombinant phage obtained by packaging was subjected to Molecular Cloning (M
aniatisT, et al, Cold Spri
ng Harbor, 1982).
E. coli P2392 (manufactured by STRATAGENE) was transduced. Approximately 1X10' phage plaques were obtained per 0 DNA fragments used.
（３）ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を有した
組み換えプラスミドの調製
ＬＰＬをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ断片を有す
る組み換えファージの検索はプラーク・ハイブリダイゼ
ーションにより行った。すなわち、シュードモナスＰＳ
−２１生産のＬＰＬのアミノ酸配列より２１ｍａ ｒの
ミックスプローブを作成し、Ｔ４−ポリヌクレオチドキ
ナーゼとγ−５２ｐＡＴＰを用いてアイソトープラベル
してＤＮＡプローブとした。常法に従いプラーク・ハイ
ブリダイゼーシッンを行ったところ、上記ファージプラ
ーク１０００個当たり、２〜３個の陽性シグナルが得ら
れた。(3) Preparation of a recombinant plasmid having the DNA sequence of the gene encoding LPL Search for a recombinant phage having a DNA fragment containing the gene encoding LPL was performed by plaque hybridization. That is, Pseudomonas PS
A 21-mar mixed probe was prepared from the amino acid sequence of LPL produced by -21, and was labeled with an isotope using T4-polynucleotide kinase and γ-52pATP to obtain a DNA probe. When plaque hybridization was performed according to a conventional method, 2 to 3 positive signals were obtained per 1000 phage plaques.
陽性シグナルを示す組み換えファージ１種を純化し、常
法に従ってファージＤＮＡを調製したところ、約１５Ｋ
ｂｐのＤＮＡが挿入されていた（第１図参照〕。One type of recombinant phage showing a positive signal was purified, and phage DNA was prepared according to a conventional method.
bp of DNA had been inserted (see Figure 1).
次いで、この１５Ｋｂｐの挿入ＤＮＡを種々の制限酵素
で切断してｐＵｃ１９にサブクローニングし、ＬＰＬを
コードする遺伝子のＤＮＡ配列を含有する組み換えプラ
スミド５ｕｂｃｌｏｎｅ Ａを得た。Next, this 15 Kbp inserted DNA was digested with various restriction enzymes and subcloned into pUc19 to obtain a recombinant plasmid 5ubclone A containing the DNA sequence of the gene encoding LPL.
５ｕｂｃｌｏｎｅ Ａの挿入ＤＮＡ約４．３ Ｋ ｂは
種々の制限酵素により特徴付けられた（第１図参照）。The approximately 4.3 Kb insert DNA of 5ubclone A was characterized with various restriction enzymes (see Figure 1).
（４）ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列の決定
上記（３）の５ｕｂｃｌｏｎｅ Ａをさらに種々の制限
酵素で切断して小断片化し、５ｅｑｕｅｎａｓｅ ”Ｄ
ＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ （東洋紡製）を
用いて塩基配列の決定を行った。その結果、第２図に示
すようなオーブンリーディングフレームの存在が認めら
れた。(4) Determination of the DNA sequence of the gene encoding LPL The 5ubclone A from (3) above was further cut into small fragments with various restriction enzymes, and the 5ubclone A
The base sequence was determined using NA Sequencing Kit (manufactured by Toyobo). As a result, the presence of an oven reading frame as shown in FIG. 2 was observed.
オーブンリーディングフレームの塩基配列及びアミノ酸
配列を第２図に示した。なお、このオーブンリーディン
グフレーム中には、シュードモナスＰＳ−２１の生産す
るＬＰＬのＮ末端アミノ酸配列と相同配列が存在しく第
２図下部）、ＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列で
あることが確認された。The nucleotide sequence and amino acid sequence of the open reading frame are shown in FIG. In addition, this open reading frame contained a sequence homologous to the N-terminal amino acid sequence of LPL produced by Pseudomonas PS-21 (Figure 2 bottom), and it was confirmed that this was the DNA sequence of the gene encoding LPL. .
本発明はＬＰＬをコードする遺伝子のＤＮＡ配列を提供
するものであり、このＤＮＡ配列により、ＬＰＬの効率
的生産やＬＰＬの構造解析等が可能になると期待される
。The present invention provides a DNA sequence of a gene encoding LPL, and it is expected that this DNA sequence will enable efficient production of LPL, structural analysis of LPL, etc.
第１図はプラーク・ハイブリダイゼーションで陽性シグ
ナルを示す組み換えファージの挿入ＤＮＡの制限酵素地
図及び５ｕｂｃｌｏｎｅ Ａ挿入ＤＮＡの制限酵素地図
を示す。
第２図はシュードモナスＰＳ−２１由来ＬＰＬをコード
する遺伝子のＤＮＡ配列及び対応するＤＮＡ配列を示す
、尚、下部はシュードモナスＰＳＳ−２１の生産するＬ
ＰＬのＮ末端アミノ酸配列と相同配列部位を示す。
第２図
ＡＶＩＩＩＩＩＡ１１FIG. 1 shows a restriction enzyme map of the inserted DNA of a recombinant phage showing a positive signal in plaque hybridization and a restriction enzyme map of the 5ubclone A inserted DNA. Figure 2 shows the DNA sequence of the gene encoding LPL derived from Pseudomonas PS-21 and the corresponding DNA sequence. The lower part shows the LPL produced by Pseudomonas PSS-21.
The N-terminal amino acid sequence of PL and homologous sequence sites are shown. Figure 2 AVIIIA11
Claims (4)
る遺伝子のＤＮＡ配列。(1) DNA sequence of a gene encoding riboprotein lipase derived from a microorganism.
請求項１記載のＤＮＡ配列。(2) The DNA sequence according to claim 1, wherein the microorganism belongs to the genus Pseudomonas.
記載のＤＮＡ配列。 【遺伝子配列があります。】(3) Claim 1 or 2 encoding the following amino acid sequence:
DNA sequence as described. [There is a gene sequence. ]
ＤＮＡ配列。 【遺伝子配列があります。】 【遺伝子配列があります。】(4) The DNA sequence according to claim 1 or 2, which has the following DNA sequence. [There is a gene sequence. ] [There is a gene sequence. ]
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29320089A JPH03151879A (en) | 1989-11-10 | 1989-11-10 | Dna sequence having genetic information of lipoprotein lipase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29320089A JPH03151879A (en) | 1989-11-10 | 1989-11-10 | Dna sequence having genetic information of lipoprotein lipase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03151879A true JPH03151879A (en) | 1991-06-28 |
Family
ID=17791719
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29320089A Pending JPH03151879A (en) | 1989-11-10 | 1989-11-10 | Dna sequence having genetic information of lipoprotein lipase |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03151879A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU718990B2 (en) * | 1996-05-22 | 2000-05-04 | Rohm Gmbh | Lysophospholipase produced from Aspergillus by recombinant methods |
| US7993876B2 (en) | 2006-10-02 | 2011-08-09 | Ab Enzymes Gmbh | DNA encoding phospholipases and methods of using same |
| US8202715B2 (en) | 2006-10-02 | 2012-06-19 | Ab Enzymes Gmbh | Cloning, expression and use of acid lysophospholipases |
-
1989
- 1989-11-10 JP JP29320089A patent/JPH03151879A/en active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU718990B2 (en) * | 1996-05-22 | 2000-05-04 | Rohm Gmbh | Lysophospholipase produced from Aspergillus by recombinant methods |
| US7993876B2 (en) | 2006-10-02 | 2011-08-09 | Ab Enzymes Gmbh | DNA encoding phospholipases and methods of using same |
| US8202715B2 (en) | 2006-10-02 | 2012-06-19 | Ab Enzymes Gmbh | Cloning, expression and use of acid lysophospholipases |
| US8507241B2 (en) | 2006-10-02 | 2013-08-13 | Ab Enzymes Gmbh | Cloning, expression and use of acid lysophospholipases |
| US8653241B2 (en) | 2006-10-02 | 2014-02-18 | Ab Enzymes Gmbh | Phospholipase polypeptide and a DNA encoding same |
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