JPH02502978A - リポソームの連続的サイズ減少方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 リポソームの　　・サイズ　Ｉ　法　び光」Ｂ針列！− リポソームは、多数の用途、特に医薬技術における用途を有する一種の二分子膜 脂質構造体からなっている。安定複ラメラ小胞体（米国特許第４，５２２，８０ ３号）、多重ラメラ小胞体［Ｂａｎｇｈａ■等、ジャーナルオブモレキュラーバ イオロジー（Ｊ、Ｍ。１゜Ｂｉｏｌ、）１３，２３８−２５２（１９６０））　 、逆相蒸発小胞体（米国特許第４，２３５．８７１号）のような多数の異なった リポソーム構造体が確認されている。特にＰａｐｈａｄｊａｐｏｌｏｕｓとＭｉ ｌｌｅｒによってバイオヒミカエトバイオフィジカ　ラントアクタ（Ｂｉｏｃｈ ｉ■、Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ａｃｔａ、）１３５，６２４−６３８（１９６７）に記載されている単ラメラ小 胞体は。

興味あるものである。

凍結融解した多重ラメラ小胞体（ＦＡＴＭＬＶ）は、′凍結−融解された多重ラ メラ小胞体に認められる溶質分布及び取り込み効率”（Ｍａｙｅｒ等、バイオヒ ミカエトバイオフィジカウントアクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍａ　ａｔ　Ｂｉｏｐｈｙ ｓｉｃａ　Ａｃｔａ、）８１７，１９３−１９６（１９８５））に記載されてお り、その教示はここで引用されている。

リポソームにおいて生ずる問題は、リポソームのサイズ変動である。リポソーム の注射用医薬用途では、サイズの均一性が特に重要なことである。直径が約５ミ クロン（５０００ナノメートル）を越えるリポソームが注射さ九ると、毛細管に 詰まる恐九がある。

均一なサイズのリポソームであれば１分散特性を予測し、かつ選択することがで きる０本発明は、均一なリポソームサイズを得るための改良方法及び装Ｗ番二関 する。

見匪立１汰 均−サイズのリポソーム調整の達成を指向するリポソームの濾過及び押出は、当 該技術において知られている。しかし、濾過／押出速度が低く、わずか約１２ｍ ρ／分以下に過ぎないａ　Ｈｕｎｔ及びＰａｐａｈａｄｊａｐｏｌｏｕｓは、米 国特許第４，５２９，５６１号〔Ｕハント（Ｈｕｎｔ）〕で、濾過／押出法によ る、“選択されたサイズ範囲内のリポソームを製造する方法”を開示している。

ハント法は、加圧下に、リポソームを“均一細孔サイズ膜”を通して押し出す方 法か、あるいはリポソームを“加圧下に穴（オリフィス）を通して”押し出す方 法として記載されている。更にハント特許において、ハント濾過−押出膜性は、 より低圧で行われるオリフィス法とは区別されている。実際に、膜性では、濾過 −押出膜の投入表面上への原料の停滞又は蓄積が関連してくる。この蓄積により 、流れが減退し、一方で運転圧力を高めることが必要になる。

銘木等（米国特許第４，０１６，１００号）は、膜フィルターを用いる濾過工程 によるリポソーム製造法を記載している。銘木等の特許には、リポソームが均一 なサイズに形成されることも示されている。更に、膜の圧力制限及び膜投入表１ 上への原料蓄積から生ずる膜詰まりのために、銘木等の濾過法には、処理能力、 に限界がある。

本発明の目的には、リポソームを押し出して、より小さいサイズのリポソームを 作る方法を提供することである。

本発明の他の目的は、リポソーム原料から、均一なサイズのリポソームを製造す る方法を提供することである。

本発明の更に他の目的は、リポソームのサイズを連続的に減少させる高速／大容 量方法を提供することである。

見豆血ｌ屹 本発明は、リポソーム原料を、膜を使用せずにフリット（ｆｒｉｔ）を通して押 し出すことにより、リポソーム原料からリポソームを押し出して、サイズが小さ く、より均一な固体群とする方法を提供する。また、かかる押出のための押出装 置が提供される。この方法は、押出機に提供された実質的に全ての原料が通り抜 ける点で、濾過を伴わない押出である。

押出機エレメントとしてフリットを使用することにより、リポソーム原料の実質 的に全てを処理して、フリット詰まりなしに、リポソームが押し出されてサイズ の小さい均一な固体群となるという発見が１本発明にとって決定的なものとなる 。

フリットは、均一な細孔サイズのエレメントではないので、フリット多孔率は、 細孔サイズ表示で表わされる。５００ナノメートルの細孔サイズ表示のフリット 及びそれよりも小さい細孔サイズ表示のフリットが好ましい、これらのフリット は、ここでは、５００ナノメートル以下の細孔サイズ表示を有するものとして記 載される。単一フリットを用いることにより、サイズの小さいリポソームの均一 な固体群を作るという所望の結果が得られ、構造的強度があり、簡単であるとい う利点がある。フリットの構造的強度のために、膜濾過／押出系で用いられるも のよりもはるかに高い押出操作圧力を用いることができる。細孔サイズ表示の小 さいフリットは、使用する必要がない。

本発明のリポソーム原料をフリットに通すことにより、リポソーム原料を押し出 す方法を含む、更に１本発明は、実質的に全てのリポソーム原料を押し出すこと を含む、この方法は、押出前に、リポソーム原料をリポソームに調製する方法を も含む、更に１本発明は、約５００ナノメートル以下の細孔サイズ表示を有する フリフトを用いることを含む、更に、この方法は、加圧下で、リポソーム原料を フリットに通すことを含む、圧力は、約１００ボンド／平方インチを越えること が好ましい、約１０００ｐｓｉ以上の圧力が、更に好ましい、また、リポソーム 原料１０ｍＱ／分／Ｃｍ”フリット表面積から４０ｍＡ／分／Ｃｍ”までの速度 で押し出すことが１本発明に含まれる。

この方法は、更に、リポソーム原料を繰り返しフリットに通すことを含む、少な くとも３回通す方法が好ましい、少なくとも１０回フリットに通す方法が更に好 ましい、また、この方法はリポソーム原料をフリットに通す工程の前に、リポソ ーム原料を非リポソーム形態（該原料を単に液相に分散させたような）に調製す る工程を含む。

本発明のリポソーム押出装置は、フリットにつながるポンプと連通ずる、リポソ ーム原料を入れるのに適した貯槽を有している。

更に、この装置は、約５００ナノメートル以下の細孔サイズ表示のフリット、好 ましくは金属フリットを有している。また、この装置は、少なくとも約１００ボ ンド／平方インチの操作圧力を与える働きをするポンプを有している。

ｚ皿立叉見髪腹豆 第１図は、切り取ったフリットの拡大断面の側面線図である。

第２図は１本発明の押出装置の線図である。

第３図は、流動取付部材を備えたフリットの側断面線図である。

ｉ匪度毘風友腹豆 出発リポソーム原料（Ｎ質、水相、並びに任意に用いられる有ソームの高速／大 容量押出は、かかる出発リポソーム原料をフリットに通すことにより行われる。

ここで、押し出された製品に関し、リポソームという用語が用いられるときは、 リポソームそのものの他に、脂質及び脂質−薬剤集合体の両者が含まれる。

ここで用いられる脂質という用語は、脂質物質の疎水性部分が二分子膜の方向に 配向し、親水性部分が水相の方向に配向するような、二分子膜となる任意の適当 な物質を意味する。脂質としては、トリグリセリド類のようなステロール類及び 両親媒性脂質が挙げられる。

この広いグループの脂質のうち１本発明の実施においては、ｉＷｉ親媒性脂質が 主要リポソーム構成成分として用いられる０両親媒性脂質は極性（疎水性）部分 と親水性部分とを有するという特性をもっている。ホスファト、カルボキシル、 スルファト、アミノ。

スルフヒドリル、ニトロ及びその他の類似基を存在させることにより１両親媒性 脂質分子に親水性を付与することができる。疎水性は、長鎖飽和及び不飽和脂肪 族炭化水素基、これらの基を一つ又はそれ以上の芳香族、脂環族又は複素環基で 置換したものを含ませることにより、与えることができるが、これらに限定され るものではない、好ましい両親媒性化合物は、ホスホグリセリド類であり、その 代表的な例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン 、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸及び ジホスファチジルグリセロールが挙げられる。シミリストイルホスファチジルコ リン。

ジパルミトイルホスファチジルコリン、シミリストイルホスファチジルグリセロ ール、ジステアロイルホスファチジルコリンのような合成飽和化合物や、ジオレ オイルホスファチジルコリン、シリルオイルホスファチジルコリンのような不飽 和種も用いることができる。スフィンゴ脂質及びグリコスフィンゴ脂質系列の構 成物質のようなリンを含まないその他の化合物も１両親媒性脂質と呼ばれるグル ープに含まれる。

両親媒性脂質は、トリグリセリド類及びステロール類を含む他の脂質と組み合わ せて用いてもよい。

リポソームの形態であろうと、非リポソーム形態のリポソーム成分の混合物にお いてであろうと、リポソーム原料がここで用いられる場合は、リポソームを形成 するか、あるいはリポソームと結合する任意の成分を含む、リポソーム原料は、 脂質、水性媒体並びに任意に用いられる有機溶剤及び生物活性剤を含むものと理 解されよう。

更に、リポソーム原料は、ある場合には、脂質を懸濁させる界面活性剤及び他の 分散剤を含む、適当な有機溶剤は、種々の極性及び誘電特性を有するもので、脂 質を可溶化し、クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホキシド、塩化メチレ ン及びベンゼン：メタノールのような混合溶剤が挙げられるが、これらに限定さ れるものではない１代表的な界面活性剤は、トリトン（丁ｒｉｔｏｎ）　Ｘ　− １００〔ロームアンドハース社（Ｒｏｈｍ　＆　Ｈａａｓ））のようなオクトキ シノールである。クエン酸塩又はリン酸塩緩衝液と、共に、水、０゜９％食塩水 も脂質分散剤として作用する。ある場合には、エタノールのような水溶性有機溶 剤が、水相に存在する。適当な溶剤。

界面活性剤又は分散剤は、脂質を溶液全体に分散させるものであり１両相溶性、 毒性及び可燃性に基づいて好ましく選択される。

ここで用いられる生物的に活性な薬剤（″生物活性剤”）としては、ゲンタマイ シンのような抗菌剤、リファマイシンのような抗ウィルス剤、アンホテリシンＢ のような抗真菌性化合物、アンチモン誘導体のような駆虫性化合物、アドリアマ イシンのような殺腫瘍性化合物１代謝拮抗物質、ペプチド類、アルブミンのよう なたんばく質、ジフテリア毒素のような毒素、カタラーゼのような酢素、シクロ スポリンＡのようなポリペプチド、エストロゲンのようなホルモン、ホルモン拮 抗物質、アセチルコリンのような神経伝達物質、神経伝達拮抗物質、ヒアルロン 酸のような糖たんばく、アルファーリポたんばくのようなリポ蛋白質、ＩｇＧの ような免疫グロブリン、インターフェロンもしくはインターロイキンのような免 疫調節剤、血管拡張剤、アルセナゾ（Ａｒｓｅｎａｚｏ）Ｉ［［のような染料、 ４Ｃのような放射性標識、”Ｔｅのような放射線不透化合物（ｒａｄｉｏ−ｏｐ ａｑｕｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、カルボキシフルオレスセインのような蛍光化 合物、エストロゲン受容体たんばく質のような受容体結合分子、インドメタシン のような抗炎症剤、ピロカルピンのような抗緑内障剤、散瞳性化合物、リドカイ ンのような局所麻酔剤、コディンのような麻酔剤、アルファートコフェノールの ようなビタミン、チミンのような核酸、ＲＮＡポリマーのようなポリヌクレオチ ド、ジアゼパムのような神経活性又は抗不安薬、七ノー、ジー及びポリサッカラ イド等が挙げられるが、これらに限定されるものではない、取り込まれることの できる多くの特定化合物のうちいくつかには、ピロカルピン；ヒト成長ホルモン 、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモンのようなポリペプチド成長ホルモン；イ ンドメタシン；ジアゼパム；アルファートコフェノールそれ自体及びタイロシン （ｔｙｌｏｓｉｎ）がある、抗真菌性化合物としては、ミコナゾール、チルコナ ゾール、エコナゾール、インコナゾール、チオコナゾール、ビフォナゾール、ク ロトリマゾール、ケトコナゾール、ブタコナゾール、イトラコナゾール、オキシ コナゾール、フェンチコナゾール、ナイスタチン、ナフチフィン、アンホテリシ ンＢ、ジノコナゾール及びシクロビロックスアラミンが挙げられるが、特にミコ ナゾール又はチルコナゾールが好ましい、二つ又はそれ以上の化合物を同時に取 り込むことは。

これらの化合物が相補的又は相乗的効果を奏する場合、特に望ましい、リポソー ムで投与される薬剤量は１通常、遊離の薬剤の場合と同じであるが、投与回数は 減らすことができる。

ここで用いら九る押出しエレメント（ここではフリット）の表面機能としての高 速／大容量押出は、約１０インチ分／−フリット表面積以上、好ましくは約２０ ｍＱ１分／ａ１以上、最も好ましくは４０　ｍ　Ｑ　／分／ａＪ以上の押出速度 を示す、２．５ｃｊの表面積のフリットでは、これらの押出速度は、それぞれ２ ５，５０及び１００ｍｆｌ／分である。高速／大容量は、高速押出ということも できる。

ここで用いられるフリットエレメントは、通常、圧縮及び／又は焼結によって、 部分的に結合された概してビーズ状の物質からなる構造部材である。フリット製 造に有用な多くの物質の中には、結合してフリットとされたセラミック、ガラス 金属、及び金属／カーバイトのビーズ状物質がある。原料の実質的に全ての処理 を促進するには、金属フリットは、ステンレススチール製のものである。

フリットは、エース　サイエンティフィック　カンパニー（Ａｃｅ　５ｃｉｅｎ ｔｉｆｉｃ　Ｃｏｍｐａｎｙ）　にュージャージー州、イースト　ブランズウィ ック（Ｅａｓｔ　Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ））、サイエンティフィック　システムズ 　インコーホレイテッド（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　５ｙｓｔｅ＋ｍｓ、Ｉｎｃ、 ）（ペンシルバニア州、ステート　カレッジ（Ｓｔａｔｅ　ＣｏｌＣｏ１１ｅ］ 、ラニンインストリュウメント　カンパニー（Ｒａｎｉｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎ ｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ）　Ｃマサチューセッツ州、ウォーバーン（Ｗｏｂｕｒｎ） ）等の多数の供給源から入手することができる。フリットは、細孔サイズ範囲に わたって、細孔サイズが不均一であることが特徴である。フリットの細孔サイズ は、フリットを通過するかあるいはフリットにより排除される物質に基づいて、 実験的に測定される。これにより、その一部が上記細孔サイズの上下にある粒子 サイズの範囲が規定さ九る。ここで用いられるフリットのフリット細孔サイズは 、当該技術においてよく知られたこのような実験テストに基づいて、細孔サイズ 表示”としていわれる、フリット内の通路は直線通路ではなく１通路壁は不規則 である。フリットは、棒状、ディスク状のような多くの形状に形成することがで きる。

本発明で用いられるフリット１の詳細な断面が、詳細側断面図で第１図に示され ており１間隙空間３を残して、部分的に焼結された本質的に固体のサブユニット ２のマトリックスを有している。

焼結されたサブユニットは、非直線通路フリット内開口５を構成する部分的に連 続した表面４を形成する０表面の部分的連続性はフリット強度がその断面軸６の 長さの関数であるように、十分に連続している。フリットは、直径が約２ｃｍ、 厚さが約０．１ｃｍであるのが好都合であるが、これらの寸法は臨界的なもので はない、直径が２０ｃｍもしくはそれ以上の大きさのフリットを用いてもよい、 長さが約１０インチ、直径が約１インチのものを含む棒状のフリットは有用であ る。好ましいフリットは、約５００ｎｍから約２００ｎｍまでの細孔サイズ表示 を有している。約１１００ｎ以下の細孔サイズ表示のフリットは、流動抵抗が著 しく高くなる傾向があり、この用途には好ましくない。

第２図は、キャップをしたアクセスポート１２を有するリポソーム原料用供給貯 槽９を備えた好ましい押出装置１０を示す、供給貯槽は、配管工４を介してポン プ１６に接続され、配管１８を介してフリット１に到っており、インライン（ｉ ｎ−１ｉｎｅ）にＱＭされている。フリットを通してポンプで送られたリポソー ムは。

配管２１及び三方弁２３を経て、押し出された原料を集める収集容器２２へ収容 される。供給貯槽２ｏに入る配管２４は、真空源に接続された場合は、リポソー ム原料の脱気に用いられることができ、加圧源に接続された場合は、リポソーム 原料の加圧に用いられることが、でき、或いはリポソーム原料に、窒素ガスのよ うな特殊ガスを送るのに用いられることができる。三方弁２３から供給貯槽への 戻り配管２５により、押し出された原料の再循環が行われる。

この装置を用いるに際しては、当該技術において既知の任意のポンプ手段により 、脂質原料をポンプ１６へ導入すればよい、ピストンポンプを用いる場合は、リ ポソーム原料が、ポンプヘッドそれ自体に吸引される。外部ポンプ手段２７．第 に方弁２６及び第２二方弁２６により、供給貯槽９から原料を外部ポンプ輸送し て、ポンプ１６へ原料を送る０次いでポンプヘッドが、フリットを通してリポソ ーム原料を循環させるためのエネルギーを与える。本発明は、ピストンポンプに 限定されるものではなく、ダイアプラムポンプを含む任意のポンプ手段を用いる ことができる。

十分な静水ヘッド、従って十分なフリントを横切る圧力差を有する実施態様にお いては、ポンプは必要としない。

第３図は、流動取付部材３０を備えたフリットの側面線図である。かかる取付部 材と共に、フリットは１本発明の装置にインラインに配置されている。リポソー ム原料は、第１人口取付部材３４、第２人口取付部材３６により容器３８に耐圧 接続で固定された配管工８を介して、ポンプ輸送される。リポソーム原料は、室 ４０に入り、フリット１から空間４２へ押し出され、配管２１を経て取り出され る。配管２１は、フリットシート４６、第１出口取付部材４８、第２出口取付部 材５０及び第３出口取付部材５２からなる出口取付装置４４により、容器３８内 のフリット１に耐圧接続で固定されている。

フリットが強度を有しているために、高速押出が可能となり、目詰まりが起こら ず、押出工程の圧力によって変形することがない、原型押出では、膜材料の最低 変形抵抗により、速度が限定される。フリット押出速度は、主としてポンプ輸送 圧力により制限される。２００ｐｓｉを越える圧力が好ましく、１０００ｐｓｉ もしくはそれ以上が最も好ましい、好ましいポンプは、ピストン型ポンプである ラニンラビット（Ｒａｎｉｎ　Ｒａｂｂｉｔ）ＨＰ　Ｘである。

ポンプは、約５０ｐｓｉおよびそれ以上の圧力で用いられる。

フリットを横切る圧力は、押出速度の主たる決定因子であるが。

流体粘度のような他の因子も押出速度に影響を与えるであろう。

フリット細孔サイズ表示が小さくなると、粘度の低いリポソーム原料が好ましく なるということは、当業者が理解するところであろう、更に、フリット原料が親 油性である場合は、フリットへの脂質の付着のために、フリット細孔サイズで妥 協することになるかも知れない。

本発明の押出を実施するのに単一のフリットを用いることができるということが １本発明の一つの利点である。

次の実施例を参照することにより、本発明が更によく理解されるであろうが、こ れによって限定されるものではない。

去ｌ麿ｕ２ リポソーム原　の調製　び　出 １００ｇｍの卵ホスファチジルコリンを１０００ｇｍの塩化メチレン中に、室温 、大気圧にて撹拌投入し、リポソーム原料を調製した０次いで、１００ｍｇ／ｍ Ωのストレプトマイシンを含む０．９％食塩水１０００ｇｍを、撹拌しながら添 加した。塩化メチレンを蒸発除去し、得られたリポソーム原料は、平均直径が０ ゜５４ミクロンのリポソームからなっていた。

得られたリポソーム原料５０　ｍ　Ａを供給貯槽に入れた。この供給貯槽を、２ ５ｍ１１／分の予備ポンプヘッドを備えたピストンポンプ（ラニン　ラビット　 ＨＰＸ）に接続した。このポンプを。

細孔サイズ表示が５００ナノメートルのステンレススチールフリット（サイエン ティフィック　システムズ　インコーホレイテッド）に流体接続した。フリット は、直径５ｍｍ、厚さ０．７ｍｍであった。

得られたリポソーム原料５０ｍΩを、２５ｍＡ／分の速度で押し出し、内容物を 、フリットを通して３回押し出した０Ｍ料の全回収率は、９９．９９％以上であ った。フリットを通すたびに。

準弾性光散乱法により、押し出されたリポソームの平均直径を測定した。結果を 第１表に示す、リポソームの平均直径０．２７ミクロンが得られた。リポソーム のサイズは、平均直径が０．５４ミクロンから０．２７ミクロンに減少した。こ のように、押出法によれば、リポソームサイズが５０％小さくなる。

１１丘ｌ ｉポソーム１、　の 実施例１の方法により、リポソーム原料をｇ製した。但し、ストレプトマイシン の代わりにアミカシンを使用した０次いで、得られたリポソーム原料３００ｍＱ を、５００ナノメートルの細孔サイズ表示を有するフリットを通して、実施例１ のようにポンプで送った。フリットに４回通した結果を第２表に示す、出発リポ ソーム原料は、平均直径が０．４１ミクロンであったが、押出後の平均直径は０ ．１８ミクロンであった。この押出は、５０％を越えるリポソームサイズの減少 を示している。

失凰五主 ヒ：ヒロカルピンーアルフ　−トコフェロールヘミスクシネート ５グラムのピロカルビン基剤を、秤量した栓付きの５００ｍＱ丸底フラスコに入 れ、全体のダラム量を記録した。Ｄ−アルファートコフェロール酸スクネシート （１２，７５ｇ、　ピロカルピン二〇−アルファートコフェロールのモル比１： １に相当）をフラスコに加え、内容物を再度秤量した。塩化メチレン（５０ｍＡ ）を加え、フラスコを撹拌して固形物を溶解し、フラスコを再度秤量した。５５ ℃の水浴内の回転蒸発器にフラスコを載せ、３０分間回転させた（真空とはせず ）、３０分後、フラスコと内容物を再度秤量し１次いで５５℃にて真空で回転蒸 発させた。その後２回続けた秤量が０．１ｇ以内となるまで、３０分毎にフラス コの重量を記録した１次いで、調製物を室温（２５℃）に冷却し、栓をして、４ ℃で貯蔵した。

ピロカルピン−Ｄ−アルファートコフェロールを入れた５００ｍＱ丸底フラスコ を、水浴温度を５５℃に設定した回転蒸発器に載せた。この物質を３０分間温め た後、水浴温度を３５℃に下げた。０．１％（ｗ／ｖ）ソルビン酸、０．１％（ ｗ　／　ｖ　）　Ｅ　Ｄ　ＴＡナトリウムニ水和物の水溶液（９２ｍΩ）を加え 、懸濁液を渦巻混合させた。更に水相を加えて、最終容積を１２５ｍＱに調整し た。得られたリポソームを、実施例１のようにして１０回押し出して、均一な平 均直径を有するサイズの小さいリポソームを製造した。

１度粁支 ヒ：ヒロカルピンーアルフ　−トコフェロールヘミスクシネート ５．０リツトルの栓付き丸底フラスコ、３０ｇのどロカルピン基剤、７６．５ｇ のＤ−アルファートコフェロール酸スクネシート（ピロカルピン＝Ｄ−アルファ ートコフェロールのモル比１：１に相当）及び３００ｍＱの塩化メチレンを使用 し、それ以外は実施例３の材料及び方法を用いた。

ピロカルピン−Ｄ−アルファートコフェロールを入れた５リツトル丸底フラスコ を、水浴温度を５５℃に設定した回転蒸発器に載せた。この混合物を３０分間温 めた後、水浴温度を３５℃に下げた。０．０１％（ｗ／ｖ）ソルビンｌｉ、ｏ、 ０１％（ｗ／ｖ）ＥＤＴＡニナトリウムニ水和物の水溶液（５５０ｍΩ）を加え 。

撹拌器を使用して、懸濁液を１〜１．５時間混合した。更に水相を加えて、最終 容積を７５０ｍＡに調整した。得られたリポソームを、５００ｎｍの公称細孔サ イズ表示を有するステンレススチールフリットに１ｏ回押通して、実施例１の方 法により処理した。

第１表 平均直径 １　　　　　０、３８　　　　３０ ２　　　　　０、３５　　　　３６ ３　　　　　０、２７　　　　５０ 第２表 平均直径 ２　　　　　０、２９　　　　２９ ３　　　　　０、２６　　　　３５ ４　　　　　０、１８　　　　５７ 第１図 国際調査報告

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. １．フリットにリポソーム原料を通す工程を含む、リポソーム原料からリボソー ムを押し出す方法。
2. ２．実質的に全てのりポソーム原料が押し出される請求の範囲第１項記載の方法 。
3. ３．フリットが金属からなる請求の範囲第２項記載の方法。
4. ４．リポソーム原料をフリットに通す工程の前に、リポソーム原料をリボソーム に調製する工程を含む請求の範囲第３項記載の方法。
5. ５．フリットが、約５００ナノメートルもしくはそれ以下の細孔サイズ表示のも のである請求の範囲第４項記載の方法。
6. ６．リポソーム原料を加圧下にフリットに通す工程を含む請求の範囲第５項記載 の方法。
7. ７．少なくとも約１０ｍｌ／分／ｃｍ２フリット表面積の速度で、リボソーム原 料をフリットに通すことを含む請求の範囲第５項記載の方法。
8. ８．速度が少なくとも約４０ｍｌ／分／ｃｍ２フリット面積である請求の範囲第 ７項記載の方法。
9. ９．圧力が、少なくとも約２００ポンド／平方インチである請求の範囲第６項記 載の方法。
10. １０．リポソーム原料を、少なくとも約３回フリットに通す工程を含む請求の範 囲第９項記載の方法。
11. １１．リポソーム原料を、少なくとも約１０回フリットに通す工程を含む請求の 範囲第１０項記載の方法。
12. １２．リポソーム原料が、卵フォスファチジルコリンを含む請求の範囲第１０項 記載の方法。
13. １３．フリットが、約５００ナノメートル以下の細孔サイズ表示のものである請 求の範囲第１項記載の方法。
14. １４．リポソーム原料をフリットに通す前に、リポソーム原料をリポソームに調 製する工程を含む請求の範囲第１３項記載の方法。
15. １５．少なくとも約１００ポンド／平方インチの圧力で、リボソーム原料をフリ ットに通す工程を含む請求の範囲第１項記載の方法。
16. １６．リポソーム原料をフリットに通す前に、リポソーム原料をリポソームに調 製する工程を含む請求の範囲第１５項記載の方法。
17. １７．リポソーム原料をフリットに通す工程の前に、リポソーム原料を非リポソ ーム形態に調製する工程を含む請求の範囲第１項記載の方法。
18. １８．（ａ）リポソーム原料を入れるのに適した供給貯槽；（ｂ）該供給貯槽に 接続したポンプ；及び（ｃ）該リポソーム原料が、該ポンプにより通して押し出 されるフリツト を有するリポソーム押出装置。
19. １９．フリットが、金属からなる請求の範囲第１８項記載の装置。
20. ２０．フリットが、約５００ナノメートル以下の細孔サイズ表示のものである請 求の範囲第１９項記載の装置。
21. ２１．ポンプが、少なくとも約２００ポンド／平方インチの操作圧力で働く請求 の範囲第１８項記載の装置。
22. ２２．約２００ナノメートルもしくはそれ以下の細孔サイズ表示のものである請 求の範囲第１８項記載の装置。
23. ２３．該ポンプが、該リボソーム原料をフリットを通して、１０ｍｌ／分／ｃｍ ２フリット表面積の速度でポンプ輸送する請求の範囲第１８項記載の装置。
24. ２４．（ａ）リポソーム原料を供給貯槽に入れ、（ｂ）該リポソーム原料を、供 給貯槽からフリットへポンプ手段によりポンプ輸送し、そして （ｃ）リポソーム混合物をフリットに通すことからなるリポソームの押出方法。
25. ２５．貯槽へリポソーム混合物を入れることが、該リポソーム原料をリポソーム の形態で貯槽へ入れることを含む請求の範囲第２４項記載の方法。
26. ２６．リポソーム原料をフリットに通すことが、リポソーム原料を金属フリット に通すことを含む請求の範囲第２４項記載の方法。
27. ２７．リポソーム原料をフリットに通すことが、リポソーム原料を約５００ナノ メートル末満の細孔サイズ表示を有する金属フリットに通すことを含む請求の範 囲第２４項記載の方法。
28. ２８．リポソーム原料をフリットに通すことが、１０ｍｌ／分／ｃｍ２フリット 表面積の速度で行われる請求の範囲第２４項記載の方法。