JPH02265443A - かいばおよび穀物を貯蔵する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、かいばおよび穀物を貯蔵する方法に関する。

貯蔵牧草の調製において牧草は充填を容易にするためぶ
ち切られる。その後可溶性炭水化物（糖）の自然嫌気性
発酵が酸、主に乳酸の生成をもたらし、その上これが微
生物分解を妨げる。

従ってかいばは長期間保存することができる。

牧草は気密保存を達成するため充填し、密閉される。自
然酸化（呼吸）および発酵が牧草の塊から酸素を除去し
その後嫌気性乳酸発酵が引き継ぐ。牧草のｐＨは約６で
らる。

ニー、アイ、バータネｙ　（Ａ、　１．　Ｖｉｒｔａｎ
ｅｎ　）のよく知られた研究は、望ましくない微生物反
応を防止するには、貯蔵牧草のｐＨが約４、好ましくは
それ以下でなければならないことを示している。前もっ
てｐＨは、自然発酵によって本来低減されている。嫌気
性乳酸発酵は、低いｐＨ域を達成するのに必要である。

ｐＨを低減させるひとつの方法は、鉱酸、酸性塩または
有機酸を添加することである。可溶性糖の添加は、遊＊
ｓｉ不足の作物の乳酸発酵を改良する。また遊離糖の量
は、セルロースおよび多糖類を分解するセルラーゼ、ヘ
ミセルラーゼまたはβ−グルコシダーゼなどの酵素の添
加によっても増大させることができる。乳酸発酵を改良
する他の方法は、乳酸菌を貯蔵牧草に添加することであ
る。

またホルムアルデヒド、亜硝酸塩または亜硫酸塩などの
防腐剤は、貯蔵牧草において望ましくない反応を起こす
のに使用されてきた。

従来技術の方法はいずれも満足なものではない。亜硝酸
塩およびホルムアルデヒドは動物に有害であシかつ酸素
を除去しない。最適乳酸発酵は嫌気条件が達成される前
には生じない。自然発酵において遊離の発酵性糖類は好
気性発酵および酸化によって消費され、従って乳酸発酵
のための遊離糖が欠乏したかいばが残る。乳酸発酵はし
ばしば、ｉｉｉ！ましくない副発酵（ｓｉｄｅ−ｆｅｒ
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ　）を防止するのに十分迅速または
効果的でないことがある。

本発明の目的は、従来公知の貯蔵方法の上記欠点を解消
することができる、かいばおよび穀物を貯蔵する方法を
提供することにある。

本発明は、グルコースの存在下グルコースオキシダーゼ
酵素（ＧＯＤ）系が次の反応の触媒作用をなすという公
知の現象に基づくものである。

０Ｄ （１）　　グルコース＋Ｈ，０＋　Ｏ，−−→　グルコ
ン酸＋Ｈ，０゜ この反応（１）は、ＧＯＤの作用によシグルコースが水
と酸素の存在下グルコン酸と過酸化水素に変換するもの
である。

本発明者らは、貯蔵牧草のｓｌｌ製においてグルコース
オキシダーゼ酵素を添加すると、この酵・素反応（１）
が貯蔵牧草中の酸素を除去するとともにそのｐＨ値を迅
速に低減することを見い出した。

酸素の除去とｐＨの低減Ｆｉ双方とも、乳酸発酵にとっ
て必須であり、かいば等の満足な長期貯蔵のためにも本
質的な事項である。グル；−スオキシダーゼ酵素および
反応の最終生成物は、いかなる場合にあっても、乳酸発
酵を妨げるものでない。即ち、かいばや穀物中に含まれ
る乳酸菌は、最終生成物のグルコンｆｆ１Ｋよシ害され
ないのみならず、それを乳酸生成のためのエネルギー源
に利用することができる。さらに１重要なことは、それ
自身下記のカタラーゼを生成できるので、過酸化水素（
Ｈ，０，）が反応（１）よシ生じてもそれによって害さ
れない。

グルコースオキシダーゼを貯蔵するかいばまたは穀物に
添加すると、反応（１）が進行し、生成するグルコン酸
の最大濃度は２ないし２０時間以内に達成され、その後
かいばまたは穀物中の乳酸菌がグルコン酸を少しずつ消
費し、グルコン酸濃度が減少していき、同時に乳酸濃度
が増大する。

したがって、本発明は、貯蔵すべき物に１媒質中のグル
コースオキシダーゼを、グルコン酸を生成してその物の
ｐＨを低減しかつ酸素を消費せしめるのに有効な量添加
することよりなる、乳酸発＃によりかいばおよび穀物を
貯蔵する方法に関する。

本発明者は、本発明の方法に従い、グルコースオキシダ
ーゼ調剤の添加によシ貯賊牧草の微生物分解が抑えられ
、よシ長期貯蔵することができるのを確認している。

グルコースオキシダーゼの添加量は、好ましくは、貯蔵
すべき物１トン当ｊ９１０，０００ないしおよそ１（％
ＯＯＯ，０００，０００ＩＵの量である。

本発明者は、この範囲の添加量であると、上記効果が特
に顕著であるが、グルコースオキシダーゼの添加量が１
ａＯＯ（ＩＩＵ／）ン未満になると、完全に十分な期間
は安定に貯蔵できず、満足な改良効果が得られない場合
があることを確認した。−方、グルコースオキシダーゼ
の添加量が１ａＯＯＱＯＯＯＩＵ／）ンを越えると、費
用の増加によシ経済的負担が著しく重くなるため、実際
上採用することが困ＪＩ！になる。

従うて、本発明の好ましｂ方法は、グルコースオキシダ
ーゼを貯蔵すべき物１トンｉｂ１へ０００ないし１へ０
０へＯＯＯＩＵＯ量添加することよりなる。

グルコースオキシダーゼＩＵ単位（国際単位）は、五３
％のグルコースを含有する基質と共に燐酸塩緩衝液ｐＨ
１ｔ中で３５℃で過剰酸素の存在下で１分画シ１０マイ
クロリットルの酸素を使用するのく要求される酵素の量
として定義されている。

本発ＢＡＦｉ、カタラーゼの添加量より、さらによシ良
好な効果を得る。カタラーゼは、グルコースオキシダー
ゼの作用によシ生じた過酸化水素を次の反応（２）のよ
うに分解するため、残留Ｈ，Ｏ，による悪影譬の発生が
なくなる。

（２）　　２　Ｈ，０，力′ラー”　　２Ｈ，０＋　　
Ｏｎ生成した酸素は反応（１）Ｋよって最後まで使い尽
され、そして最終生成物はグルコン酸のみとなる。

カタラーゼは通常のグルコースオキシダーゼ調剤の中に
含まれている。もつとも、カタラーゼ非含有の同調剤の
製造も容易である。を九、カタラーゼ活性は、ベーカー
（Ｂａｋｅｒ　）単位で表わされ、普通カメラーゼを含
む牧草にシいて発現されまた多くの乳酸菌はカタラーゼ
活性を有する。

従って、本発明の好ましい方法は、グルコースオキシダ
ーゼの添加とは別に１カタラーゼをさらに添加する方法
である。

本発明の方法忙使用する配合剤は、媒質として固形物例
えばグルコース、ラクトースおよび澱粉等の粉末を用い
た固形（乾燥物、粉末、粒状など）のかたちのものでよ
く、また媒質として水を用いた水溶液のかたちのもので
もよい。

好ましい態様の一つとして、グルコースオキシダーゼを
含有する水溶液の形での配合剤であって、１ないし１２
，５００　ＩＵ／ｓ＋ｊのグルコースオキシダーゼ活性
を有する本のが挙げられる。

また、本発明の方法に使用する配合剤は、カタラーゼの
他、グル；−スオ中シダーゼに加えて−Ｎｔたは複数の
酵素、例えばインヴエルターゼ、セルラーゼ、およびβ
−グルコシダーゼを含有してもよい。酵素成分の目的は
、グルコースオキシダーゼの作用によってグルコン酸に
更に変換されるべきグルコースの生成を促進することに
ある。

セルラーゼ調剤は通常、別個添加されてもよいヘミセル
ラーゼを含有する。次のセルラーゼ配合剤はへミセルラ
ーゼ（ＨＥＣ）含有の市販品を示す。

ＣＭＣ２９００ＩＵ／ｓｕ （スオメンソケリ製） ＨＥＣ２５０００Ｊ１ｋａｔ／ｄ 周知のように１ヘミセルラーゼ酵素はへミセルラーゼを
加水分解してグルコース等の糖を遊離する。従って、本
発明の方法において、ヘミセルラーゼの併用は有利であ
る。

また特定のセルラーゼ調剤はβ−グルコシダーゼをも含
有する。酵素は精製された酵素調剤または乾燥細胞のか
たまシでもよい。

したがって、本発明はまた、貯蔵すべき物に、媒質中の
グルコースオキシダーゼを、グルコン酸を生成してその
物のｐＨを低減しかつ酸素を消費せしめるのに有効な量
添加すること、そして前記の物に、カメラーゼ、セルラ
ーゼ、ヘミセルラーゼおよびβ−グルコシダーゼまたは
その組合せをさらに添加することよりなる、乳酸発酵に
よりかいばおよび穀物を貯蔵する方法に関する。

そして好ましい方法は、グルコースオキシダーゼを貯蔵
すべき物１トン当少１へａｅｏないしｆＱＯＯＱＯＯｏ
ＩＵの量添加することよりなる。

セルラーゼの好ましい添加量線、貯蔵ナベき物１トン当
り１．Ｇｏへ０００ないし１００，０００エイチイーシ
ー（ＨＥＣ）単位の量である。

ｉ九、β−グルコシダーゼの好ましい添加量は、貯蔵す
べき物１トン当Ｊ１００，０００ないし１（％０００１
）ＯＯｃヌケーエイテ４（ｎｋａｔ）単位の量である。

さらに、カタラーゼの好ましい添加量は、貯蔵すべき物
１トン当り５００ないし翫００へ０００ベーカ−（Ｂａ
ｋｅｙ　）単位の量である。

グルコースオキシダーゼの添加とカタラーゼ等の酵素の
添加とは、同時でも、あるいは各々別個でもよい。

また、本発明の方法に使用する配合剤におｈて糖生成物
を含むことは有利である。そのような糖生成物は、例え
ば甜菜または甘蔗廃糖蜜またはホエー加水分解物、澱粉
加水分解物または木材加水分解物である。これらは、遊
離のヘキソースおよび／ま九はペントースを含有する。

配合剤は好ましくは、標準量の酵素と、前記甜菜または
せ！！廃糖蜜またはホエー加水分解物または澱粉加水分
解物または木材加水分解物等の、大部分を構成する他の
成分とを含有して調製される。配合剤はかいば、穀物ま
たは貯蔵すべきその他の物に適するように調製すること
ができる。

配合剤の他の任意成分は無機酸、例えば硫酸、塩酸若し
くは燐酸、また社有機酸、例えば蟻酸、酢酸、乳酸、若
しくはグルコン酸である。酸の目的は貯蔵すべき物質の
初期ｐＨを４ないし６に低減させることにあシ、これは
任意である。

ｊ！に配合剤は塩、例えばマグネシウム、カルシウム若
しくは尿素の燐酸塩、またはカルシウム若しくはナトリ
ウムの蟻酸塩を含有してもよい。

また、配合剤は、防腐剤、例えばソルビン酸塩、安息香
酸塩または亜硝酸ナトリウムを含有してもよく、あるい
は界面活性剤例えばＴｗｅｅｎ　２０■を含有してもよ
い。

したがって、本発明の好ましい方法は、木材加水分解物
、ホエー加水分解物、澱粉加水分解物、甜菜糖蜜、甘蔗
廃糖蜜およびこれらの組合せから選択された物質；およ
び／ｉたは塩酸、硫酸、燐酸、蟻酸、醇酸、乳酸および
グルコン酸またはこれらの塩から選択された物質；さら
に防腐剤および／または界面活性剤を、通常グルコース
オキシダーゼ調剤等の各酵素調剤の中に含有して、ある
いは別個に、貯蔵すべき物に対してさらに添加すること
よりなる。

貯蔵すべき１トンの物に添加する上記成分（配合剤中に
存在する）の適当量は次のとおシである。

グルコースオキシダーゼ １へ０００ないし １０．０ＯＱＯＯＯＩＵ ５００ないしへｏｏｃ４ｏｏ。

ベーカ−（Ｂａｋｅｒ　）単位 １．００へ０００ないし １００、Ｇｏへ００エイチ イーシー（ＨＥＣ）単位 １００．０００ないし １０１ＯＯＱＯＯＯｚヌケ− ニーティー（ｎｋａｔ　） 単位 カタラーゼ セルラーゼ β−グルコシダーゼ 糖　蜜、 木材加水分解物、 ホエー加水分解物または 澱粉加水分解物　　　　乾燥物に換算してｃＬ５な１．
、ｎし２０Ｋｑ 鉱酸または有機酸　　　１ないし２ｔＣ純酸として） 塩　　　　　　　　　　１表いし５〜 防　腐　剤　　　　　　［１２ないしＩＫ４種々の酵素
の活性単位に関しては、次の文献に言及されている。

カタラーゼ　ベーカ−（Ｂａｋｅｒ　）単位ニスコツト
デイ−、（Ｓｃｏｔｔ　Ｄ、　）　　およびハンマー　
エフ　、　　（Ｈａｍｎｅｒ　Ｆ、　）酵素学（Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｉａ　）第２２巻（１９６０年版）ｇｌ？
４頁乃至第２００頁。

セルラーゼ　エイチイーシー（ＨＥＣ’）　単位：レー
ダｇ　ンヘｋ　り　　ジ、　−（Ｌｏｅｗｅｎｂｅｒｇ
　Ｊ、　）およびチャツプ−ｖ　ｙ　　シー　、　　（
Ｃｈａｐｍａｎ　Ｃ，）　：微生物学記録（Ａｒｃｈ、
　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）第１１５巻（１９７７年版
）第６１頁ないし第６４頁。

β−グルコシダーゼ　エヌケーエーティ（ｎｋａｔ　）
単位：　（Ｂａｉｌｅｙ　Ｍ、　）およびネパライネン
　ケ（Ｎｅｖａｌａｉｎｅｎ　Ｋ、　）　：酵素微生物
工学（Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｉｃｒｏｂ、　Ｔｅｃｈｎｏｌ
、　）第３巻（１９８１年版）第１５３頁ないし第１５
７頁。

本発明の方法は、穀物全体に１例えばグラミナエ種のも
のに、穀粒または藁のいずれにも適用することができ、
またかいばに１例えばそれ用の作物、牧草、豆類、とう
もろこし、さとうもろζし等に１新鮮なものまたは枯れ
たもののいずれＫも適用することができる。

本発明の方法は次の実施例によって更に説明される。

尚、以下の実施例において、ぶち切られた新鮮牧草又は
大麦は、貯蔵の前に生育中の牧草又は大麦を適当な長さ
に刈シ取ったばかシの植物体そのものを意味する。

実施例１ この例は、グルコースオキシダーゼとカタラーゼの併用
を示す。

ぶち切られた新鮮牧草に、グルコースオキシダーゼ活性
１１，２５０　Ｉ　Ｕ／３ｍｌおよびカタラーゼ活性２
５００ペーカー（Ｂａｋｅｒ　）単位／ｄを有するグル
コースオキシダーゼ調剤（フィニッシュシェガー　カン
パニー　リミッティッド（Ｆｉｎｎｉｓｈ　Ｓｕｇａｒ
　Ｃｏ、　Ｌｔｄ、　）製）を１００５重量イ添加した
。第１表は２４時間の間のグルコン酸の生成とｐＨの低
減を示す。

第　　　１　　　表 ２４時間中におけるグルコン酸の生成と貯蔵牧草のｐＨ
の低減 試　　　　料　　　グルコン酸％　　　ｐＨ対　　　　
照　　　　　　　　α０１　　　　　　　　＆３１１ｏ
ｏｓ％ＧＯＤ　　　　　　ｔ２０　　　　　　五１実施
例２ この例は、グルコースオキシダーゼ、カタラーゼおよび
セルラーゼの併用を示す。

新鮮牧草に酸溶液、セルラーゼ調剤およびグルコースオ
キシダーゼ調剤を第２表に示すように添加した。

第　　　２　　　表 貯蔵牧草中の配合％ セル５−−ｔ／　ｉｌｌ剤％　Ｏ（Ｌ（Ｎ４　　（１０
１４［ＬＯ５０ニーアイブイ第２（Ａｌ’ｌｌ）溶液は
蟻酸８０％と燐酸２０％よシなる。セルラーゼ調剤のセ
ルラーゼ活性は３２．０００エイチイーシー（ＨＥＣ）
単位／ｄであるとともに１同調剤のβ−グルコシダーゼ
活性はｔ５００エヌヶーエーティ（ｎｋａｔ　）／ｄで
あった。この酵素調剤はアルコリミツティラド（Ａｌｋ
ｏ　Ｌｔｄ、　）　Ｋよって製造された。グルコースオ
キシダーゼ調剤は実施例１のと同一であった。

第３表、第４表および第５表は貯蔵牧草液状物の分析を
示す。第５表は２４時間後の試料を表わし、第４表は１
力月後のものを、そして第５表は２力月後のものを表わ
す。

第　　　３　　　表 ２４時間後の貯蔵牧草液状物の分析 ｐＨ４６４１１５，６５２ １Ｉｙ／１１５　２０　１５　２０ ’Ａ、ＦＲトＩ、ＣｔＤ酸度ｆ／ｌ、　　　１１　１４
．０　　４３　　　ａ２アンモニア　ｆ／ｌ　　　　　
αＩ　　　１１１　　　（Ｌ２　　　α２第　　　４　
　　表 力月後の貯蔵牧草液状物の分析 ６．６　　　４．５　　４５ ０　　　１２．５　　　０ （Ｌ８　　　　ｔ４　　１２．５ 〇　　　　五８０ ａ　　　　ＯＯ α４　１１４　２己０ α８　　　α４　　　α６ ｐＨ 糖ｙ／を 乳酸１／１ グルコン酸１／１ 酪酸１／１ 乳酸としての酸度１／１ アンモニアｆ／１ 五〇 ２．５ １＆２ α０３ １［Ｌ４ α８ 第　　　５　　　表 ２力月後の分析 １’１５４５ ｐＨ５，３４２４，６４，１翫０ Ｈｙ７ｔ　　　　　　　　ｏ　　　ｚｓｏ　　　ｏ　　
　。

乳酸ｔ／ｌ　　　　ｔａ　　７．４　　Ｚ９１４．２１
ｔ５グルコン酸ｆ／ｌＯｔｌ　　　０　　　０　　　０
酪酸ｆ／ｌ　　　　α８　α１０００ 乳酸としての酸度？／ｌ　　１５７　２ｔ２　２７．０
　５α６１４１アンモニア　ｆ／ｌ　　　　２．０　　
　α４　　α６　　α４　　α８第３表ないし第５表に
おいてｔは貯蔵牧草液状物の容置を表わす。

ｔた、乳酸の濃度は、＃水測定法（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒＭａｎｎｈｅ　ｉｍ　）　Ｋより測定した。この方法
は、貯蔵牧草プレスジエース中の乳酸の定量的な測定法
である。またグルコン酸の濃度も同様に、酵素測定法に
よシ測定し、アンモニアの濃度は特定のイオン電極を用
いて測定した。また、糖の濃度は還元糖方法（ｒｅｄｕ
ｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　ｗｅｔｈｏｄ　）によシ測定し
た。（Ｓｏｍｏｇｙｉ　Ｍ、　１９４５．　ｎｅｗ　ｒ
ｅａｇｅｎｔｆｏｒ　　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｏｎ　ｏｆ　　ｓｕｇａｒｓ　Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、　１６０　：　６１参照）。さら（、酪酸の
濃度は、ガスクロマトグラフィー分析により測定した。

また、′乳酸としての酸度”は、新鮮貯蔵牧草プｖｘ　
　ジ！−ス（ｓｉｌａｇｅ　ｐｒｅｓｓ　ｊｕｉｃｅ　
）の直接滴定分析を表わし、次の刊行物に記載された方
法に従って行った。

（１）　　２２．０５３　　”Ｗａｔｅｒ−８ｏ１ｕｂ
ｌｅＡｃｌｄｉｔｙ（２０）−”０ｆｆｉｃｉａｌ、　
　　ＦｉｎａＩ　　Ａｃｔｉｏｎ：　　Ｏｆｆｊｃｊａ
ｌＭｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔ
ｈｅ　Ａｓ５ｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆ　０ｆｆｉｃｉａ
ｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｓ、　
１０　ｔｈｅｄ、　１９６５　　ｐ、　３３７゜ Ｐｌａｙｎｅ、　Ｍ、　Ｊ、　＆　ＭｃＤｏｎａｌｄ、
　　Ｐ、　１９６６　。

Ｔｈｅ　Ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ　Ｃｏｎ５ｔｉｔｕｅｎｔ
ｓ　ｏｆ　Ｈｅｒｂａｇｅ　ａｎｄｏｆ　Ｓｉｌａｇｅ
、　Ｊ：８ｃ１．　Ｆｄ　Ａｇｒｉｃ、、　１７　；ｐ
、　２６４−２６８゜ その手順は次の通シである。

ｐＨ計を用いて貯蔵牧草プレスジエースを塩基（ＮａＯ
Ｈまたは他のもの）Ｋより滴定しく２） てｐＨ７にする。

（１）　　使用塩基の容量から等量の乳酸を弐〇〇よシ
算出する。

■　ｎ、×Ｖ、＝：　ｎ、ＸＶ。

■　Ａ／Ｅ＝ｎ、Ｘｖｌ （式中、ｎ８．へは塩基、酸の規定度を表わし、ｖｌ、
−は塩基、酸の容量（シを表わし、Ａ、Ｅは測定物質の
重量（ｆ）、当量を表わす。）第３表はグルコースオキ
シダーゼの添加がいかに迅速にｐＨを低減せしめるかを
示している。

第４表および第５表はセルラーゼの効果を示している。

酵素が発酵性糖の量を増大せしめたことが明らかであり
、このことが対照と比較してより低いｐＨとより高い活
性という結果になる。

また第５表は酵素添加が望ましくない酪酸発酵と、蛋白
質からのアンモニアの生成とを妨げたことを示している
。

実施例３ この例は、グルコースオキシダーゼ、カタラーゼおよび
セルラーゼの併用を示す。

ぶち切られた新鮮牧草に酸性塩混合物（マグネシウム、
カルシウムそして尿素の各燐酸塩およびカルシウムとナ
トリウムの各蟻酸塩および塩化ナトリウム）、セルラー
ゼ調剤およびグルコースオキシダーゼ調剤を第６表に示
すように添加した。

第６表 配合型１％ 貯蔵牧草１貯蔵牧草２ 酸性塩混合物係　　　　　　ａ４　　　α４セルラ一ゼ
調剤％　　　　　　０　　　　　（１０５グルコースオ
キシダービ調剤％　　　　　　０　　　　　　α００５
セルラーゼ調剤およびグルコースオキシダーゼ調剤は実
施例２のと同一であった。＠７表は２４時間後の貯蔵牧
草分析を示す。

第７表 ２４時間後の貯蔵牧草分析（結果は数種の試料の平均値
を表わす。） 貯蔵牧草１　貯蔵牧草２ 乾燥物質ｅ４　　　　　　２２　　　　　２２糖　　チ
　　　　　　　　　　　　　４゜Ｓ　　　　　　　　ａ
ＯｐＨ４０ａｔ 酢酸＋酪酸％　　　　　　００ グルコンｔＲ４０１，０ 第７表Ｆｉまたグルコースオキシダーゼが酸性塩の存在
下で活性であることを示している。

実施例４ この例は、グルコースオキシダーゼとカタラーゼの併用
を示す。

ぶち切られた新鮮大麦に実施例１のと同一のグルコース
オキシダーゼ調剤をα００５重盪憾添加した。第８表は
最初の２４時間の間でのグルコン酸の生成を示す。

第　　８　　表 ２４時間の間での貯蔵大麦中のグルコン酸の生成グルコ
ースオキシダーゼ調剤（ＬＯＱ５重量優添加 貯蔵大麦の調設　　　貯蔵大麦液状物 からの時間　　　　　中のグルコン酸 ２時間　　　　　　α７１ｑｂ １５時間　　　　　　１．５１係 第８表はグルコースオキシダーゼが貯蔵大麦中において
ｐｉ（を低減しかつ酸素を除去せしめるのに活性である
ことを示している。

実施例５ 貯蔵かいば配合剤 酵素により加水分解されたホエー溶液（王にグルコース
とカラクトースよりなる乾燥物質を７０重量係含有する
。）に、１１，２５０ＩＵ／ｄ（酵素調剤）のグルコー
スオキシダーゼ活性を有スルグルコースオキシダーゼ酵
素調４１１５ｖｔｌ／ｌ　１および５２．ＯＱ　Ｏエイ
チイーシー（ＨＥＣ）／ａｕ（酵素調剤）のセルラーゼ
活性を有するセルラーゼ−グルコキシダーゼ酵素調剤５
００ｍ１ｔ　　（ホエー溶液）を添加した。上記のグル
コースオキシダーゼ調剤調剤は、２，５００ベーカー（
Ｂａｋｅｒ　）単位／ｄ（調剤）のカタラーゼ活性を有
するが、カタラーゼ自体は実質的に含まれていないもの
である。

而して、最終使用のために得られた１リットルの配合剤
を水で５リットルに希釈した。希釈混合物は１トンの貯
蔵牧草と混合された。従つて、最終的に使用された配合
剤は、５五７５（＝１１２５０Ｘ１ｏｏｏｘ−￥）　Ｉ
Ｕ／ｗｌのグルコースオキシダーゼ活性を有するもので
あった。

実施例６ 主にペントースよりなる乾燥物質を３５重量悌含有する
木材加水分解物溶液に、 １０　ｄ／Ｌグルコースオキシダーゼ調剤、４００ａｌ
／Ｌセルラーゼ調剤および ２００　ｆ／／Ｌ安息香酸ナトリウムを添加した。

実施例２のと同一の酵素調剤を使用した。而して、使用
のために得られた溶液は水で、１リットルの溶液当り２
リットルの水を添加して希釈された。５リットルの希釈
溶液が１トンの貯蔵牧草のために使用された。従って、
最終的に便用された配合剤は、３７．５　（＝＝１１２
５０　ｘ　１ｏｏ。

ｘ　−）　Ｉ　Ｕ／ｄのグルコースオキシダーゼ活性１
＋２ を有するものであった。

実施例７ ふたつの溶液を調製した。

１）糖溶液 ホエーをβ（ベータ）−ガラクトシダーゼで処理して、
ラクトースの約９０％をグルコースとカラクトースに加
水分解し九。この溶液を乾燥物質の６０重量係になるま
で蒸発させそしてグルコースを乾燥物質の７０重ｉｔｓ
の濃度になるように添加した。（１５％ツイーン２０　
（Ｔｗｅｅｎ２　ｇ＠　）　（界面活性剤）を濃縮溶液
に添加した。

２）グルコースオキシダーゼ調剤（フィニツシユ　シェ
カー　カンパニー　リミッティッド（Ｆｉｎｎｉｓｈ　
Ｓｕｇａｒ　Ｃｏ、　Ｌｔｄ　）　）１１．２５０１Ｕ
／ＷＪの活性を有するグルコースオギシグーー＋！！調
剤をクロカビｍ株の発酵によって調製した。この調剤は
実質的にカタラーゼを含まないものである。この製法は
笥用されている。

使用の前に７リットルの糖溶液（１）′ｔ−１５リット
ルの水で６０リットル槽中にて希釈した。この希釈溶液
に７０ｓ＋７のグルコースオキシダーゼ調剤（２）を添
加しそしてよく１付した。この溶液５リットルを草刈り
機内の１トンの牧草に添加した。従って、実際に使用さ
れた配付剤は”６８（””　１２”　ｘ７Ｘ１０３＋１
５Ｘ１０”＋７０’ＩＵ／ｄのグルコースオキシダーゼ
活性を有するものであった。このかいば混合物を貯蔵所
に移し、被覆して充填した。試料を２４時間後貯蔵庫か
ら取り出し九。試料は１７ないし１．３壬のグルコン酸
を含有し、ｐＨは５１ないし＆５であった。この段階で
乳酸発酵が引き継ぎ、ｐＨが急速に約４にまで低減され
た。

同様の貯蔵所からのガス生成をドレゲルベルケアーゲ−
（Ｄｒａｇｅｒｗｅｒｋｅ　ＡＧ　）管により測定した
。測定は酸素が除去されて数時間以内に乳酸＠酵の条件
に達したことを示した。

実施例８ 甜菜糖蜜（主な糖は蔗糖である。）を水で乾燥物質の７
０重ｔｓになるまで希釈しそして次の成分を添加した。

２０　ｍ／　Ｌグルコースオキシダーゼ調剤２００ｄ／
ｌセルラーゼ調剤 ２００　ｆ／を安息香酸ナト１７ウム（防腐剤９実施例
７のと同一の酵素調剤を使用した。

使用の前に１リットルの混合物を水で５リットルになる
まで希釈した。５リットルの希釈溶液を１トンの貯蔵か
いばに混合した。従って、最終的に使用された配合剤は
４−０（＝１１２５０ゼ活牲を有するものであった。

実施例９ この例は、グルコースオキシダーゼの単独使用を示す。

牧草（おおあわがえり（ｔｉｍｏｔｈｙ　）　、フック
スフット（ｃｏｃｋｓｆｏｏｔ　）　　およびメドウ７
エスク（ｍｅａｄｏｗ　ｆｅｓｃｕｅ　）の混合物ノを
プラスチック袋の中に詰めそして密封した。次いで、牧
草中の全ての生きた生物を死滅させるために牧草をγ線
照射した。その後殺菌が完全であるのを確めるためにご
く一部の袋を開けそして微生物成長について試験した。

グルコースについての鏡付が無い場合の牧草貯蔵の初期
段階におけるグルコースオキシダーゼの効果を調べるた
めに牧草を死滅させた。従って、グルコースオキシダー
ゼの真の効果をモニターできることにした。

牧草に対する処理は次の通りとした。

Ａ、未処理　対照 Ｂ、　グルコースオキシダーゼ　　　２００００ＩＵ／
トンＣ６グルコースオキシダーゼ　　　４００００１Ｕ
／）ンＤ、　グルコースオキシダーゼ　　　８００００
１Ｕ／）ンＥ、　グルコースオキシダーゼ　　４０００
００ＩＵ／トン添加の前に、グルコースオキシターゼヲ
殺珈水により、加えた液の量が全ての処理物につき同じ
となるように希釈した。加えた後の調剤におけるグルコ
ースオキシダーゼ濃度は各処理物について次の通りであ
った。

Ａ、無し Ｂ、（ＬＩＩＵ／ｄ Ｃ１（Ｌ２１Ｕ／ｄ Ｄ、α４ＩＵ／ＭＩ Ｅ、２．Ｏ夏Ｕ／ｍ７？ 処理物を牧草袋の中に注入しそして袋を再び密封した。

新鮮貯蔵牧草を２１℃の温度に保った。グルコースオキ
シダーゼ添加の２４時間後に貯蔵牧草よりｐｎおよびグ
ルコン酸の濃度を分析測定した。グルコン酸濃度は酵素
法により測定した。その結果を第９表に示す。

第９表：　グルコースオキシダーゼ添加の２４時間後の
貯蔵牧草のグルコン酸濃度とｐＨＡ、　　　　　　　　
　　α５５　　　　　　　　　　５．４７Ｂ、　　　　
　　　　　　α６０　　　　　　　　　　５．５ｊＣ０
α９０　　　　　　　　　　５．２５Ｄ、　　　　　　
　　　　　　ｆ、１０　　　　　　　　　　４．９８Ｅ
、　　　　　　　　　　　２．２０　　　　　　　　　
　４．４２第９表より、牧草へのグルコースオキシダー
ゼの添加量が増大する程、グルコン酸生成量のより増加
とｐＨのより減少の結果になることが明らかにわかる。

実施例１０ この例も、グルコースオキシダーゼの単独使用を示す。

牧草（おおあわがえり（ｔｉｍｏｔｈｙ　）、フックス
フット（ｃｏｅｋｓｆｏｏｔ　）およびメドウ　フエス
ク（ｍｅａｄｏｗ　ｆｅｓｃｕｅ　）の混合物をプラス
チック袋の中に詰めそして密封した。次いで、牧草中の
全ての生きた生物を死滅させるために牧草をγ線照射し
た。その後殺菌が完全であることを確めるためにごく一
部の袋を開けそして微生物成長について試験した。グル
コースについての親会が無い場曾の牧草貯蔵の初期段階
におけるグルコースオキシダーゼの効果を確めるために
牧草を死滅させた。従って、グルコースオキシダーゼの
真の効果をモニターできることにした。

牧草に対する処理は次の通りとした。

Ａ、未処理　対照 Ｂ、　グルコースオキシダーゼ　　　４０００００ＩＵ
／）ン処理物Ｂの添加の前に、グルコースオキシダーゼ
を殺菌水によシ２１Ｕ／ｄの濃度に希釈しそしてこの溶
液５０ｍを上記の殺菌牧草２５（ＩＫ加えた。

処理物を牧草袋の中に注入しそして袋を再び密封した。

新鮮貯蔵牧草を２１℃の温度に保った。処理物の添加後
０．１．３および１０日目において、貯蔵牧草より、グ
ルコン酸濃度乳酸濃度および酢酸濃度を分析測定した。

グルコン酸および乳酸の濃度は酵素法により測定しまた
酢酸の濃度はガスクロマトグラフィーにより測定した。

結果を以下の表に示す。

第１０表：　貯蔵の最初の１０日の間における貯蔵牧草
のｐＨの変化 Ａ、　　　　　　　ａｌＢ　　　　＆ｔ２　　−〇４　
　　４．９７Ｂ、　　　　　　ａｌＢ　　　　４．５８
　　４３８　　　４．３５第１１表：　貯蔵の最初の１
０日の間における貯蔵牧草中のグルコンｒ１に濃度（乾
燥物チとして）の変化 処理物　　０日目　１日目　５日目　１０日日目、　　
　　α４６　　　（Ｌ４５　　０．２６　　　α２５Ｂ
、　　　　　（Ｌ４６　　２．０４　　２．４９　　１
．９６第１２表：　貯蔵の最初の１０日の間における貯
蔵牧草中の乳１１１１！濃度（乾燥物係として）の変化 処ｍ物　　　ｏ８目　１日目　３日目　　１０日日目、
　　　　　ＣＬＯ５［１０５ｌ１０８　　　α０５Ｂ、
　　　　α０３　　（ＬＯ３（ＬＯ７（１０７第１３表
：　貯蔵の最初の１０日の間における貯蔵牧草中の酢ｔ
ＩＲ濃度（乾燥＠係として）の変化 Ａ、　　　　　　　ＩＩＬ２５　　　（Ｌ２５　　　α
２３　　　α２３Ｂ、　　　　　　　（Ｌ２５　　　（
Ｌ２２　　　α１１　　　α２５第１０表より、グルコ
ースオキシダーゼ処理により貯蔵牧草中のｐＨが急速に
減少することがわかる。未処理の貯蔵牧草においてＨｐ
Ｈは１０日の実験期間を通して同じ水準のま１であった
。

実験期間を通して他の酸は相当量生成されていないので
（第１２表、第１３表）　、ｐｎ低下（第１０表）は貯
蔵牧草中のグルコン酸の同時生成（３１１表）の結果で
あることは明らかである。

実施例１１ 直接刈った牧Ｘ（多年生ライ麦の若草）を空気の結った
牧草ジャーの中に貯蔵した。サイロを室温で９０日間保
ちそしてその後貯蔵牧草の化学分析のために開けた。各
処理につき２個のサイロを使用した。

牧草に対する処理は次の通りとした。

■　未処理　対照 ■　グルコースオキシダーゼ　５０（ＬＯＯＯＩＵ／ト
ン（牧１■　グルコースオキシダーゼ　３３０，０００
，０００ＩＵ／）ン（牧草）処理■および■に使用され
たグルコースオキシダーゼは、乾燥媒質材料（結晶セル
ロース）中に加えたものである。

処理■のためのグルコースオキ７ダーゼ／媒質　調剤は
次の通りにて製造した。液状グルコースオキシダーゼ調
剤（グルコースオキシｆ　−ゼ活性ｆ００００１Ｕ／ｄ
、グルコースオキシダーゼ：カタラーゼ＝５：１）１０
ｄを乾燥した結晶セルロース１ｊＱｌの中圧混合した。

従って、この調剤中のグルコースオキシダーゼ濃度は１
００ＩＵ／ｆであった。この調剤６２を処理■として牧
草２に４を処理するのに使用した。

処理■のためのグルコースオキシダーゼ／媒質　調剤は
次の通りにて製造した。＃１表し凍結乾燥したグルコー
スオキシダーゼ調剤（グルコースオキシダーゼ活性１１
００００１Ｕ／９、カタラーゼ無し）１１を乾燥した結
晶セルロース１に４の中に混合した。従って、この調剤
中のグルコースオキシダーゼ調剤は１１０ＩＵ／ｆであ
った。

この調剤６ｔを処理■として牧草２神を処理するのく使
用した。

第１４表：　貯蔵牧草の発酵定性分析 ｐ　Ｈ４３７ 還元糖　　　　　　α５ 乳酸　　　＆５ 酢酸　　　＆２ プロピオン酸　　　α５ 酪　　酸　　　　　　　　　　α４ アンモニア　窒素　　　１４４　　　　　７．５　　　
９．０還元抛、乳酸、酢酸、プロピオン酸および酪＃Ｒ
は乾燥物の百分率として表わし、アンモニア窒素は全窒
素の百分率として表わした。

発酵定性分析は、グルコースオキシダーゼ処理■、■の
双方が未処理対照■と比較して貯蔵４．０２ α４ １２．０ ２．９ 五９５ （Ｌ５ １　五１ ２．０ 牧草の発酵品質を著しく改良することを示した。

未処理の貯蔵牧草におけるｐＨ低下は明らかに、あまり
にゆっくりであった。またクロストリジアル発酵発酵（
ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　
）は乳酸発酵を引き継ぎ、その結果乳酸および牧草蛋白
質の崩壊、並ひに続いてアンモニア窒素、酢酸、プロピ
オン酸および酪酸の生成に至った。

実施例１２ 直接刈り収った第三次刈りの牧草（おおあわがえり（ｔ
ｉｍｏｔｈＹ　）　　およびメドウ　フエスク（ｍｅａ
ｄｏｖｖ　ｆｅｓｃｕｅ　）の混合物ノ　を２０ｋｆガ
ラス繊維サイロの中に貯蔵した。貯蔵牧草の化学分析の
ために貯蔵後９０日０にサイロを開いた。

牧草に対する処理Ｆｉ次の通りとした。

■　未処理対照 ■　蟻ｅ＊　５１／牧Ｘ１トン ■　セ／ｌ／　ラ−セ酵素　５，０００，０００ＨＥＣ
／牧草１ト／＋グルコ一スオキシダーゼ ５店０００１Ｕ／牧草１トン 処理調剤を水で、溶液１００１ｘｌが牧草２０ｋｆ当り
施用されるように希釈した。

処理■のためのセルラーゼ／グルコースオキシダーゼ調
剤は次の通りにて製造した。乾燥しｆｃｆＮＨｆルコー
スオキシダーゼ（グルコースオキシダーゼ活性１１９１
０／７７９、カタラーゼ無し）８４．０５■および液状
セルラーゼ調剤（２５，０００ＤＥＣ／ｄ）４０ｄを混
合しそして蒸留水で希釈して１０００ｍの容量にし友。

従って、この調剤のグルコースオキシダーゼ活性は１ｏ
ＩＵ／−でありそしてセルラーゼ活性はｊ　０００　Ｈ
ＥＣ／ｒｘｌであった。この調剤１００ｄを、牧草材料
（上記）２０呻を処理するのに使用した。

第１５表：　貯蔵牧草の発酵定性分析 Ｈ 還元糖 乳酸 酢酸 プロピオン酸 五７２　　　　　Ａ６７ １８０　　　　　＆２５ １１Ｌ９５　　　　５．３９ Ｌ４９　　　　１゜９７ ＆６４ ４．２０ ９．０２ ｏ８ 酪酸　　　−［Ｌｉ２ アンモニア　窒素　　　　デ４４　　　４．１０　　　
４．２２還元糖、乳酸、酢酸、プロピオン酸および酪酸
は乾燥物の百分率として表わし、アンモニア窒素は全窒
素の百分率として表わした。

発酵電性分析は、未処理の貯蔵牧草か安定化されず、そ
してクロストリジアル発酵（ｃｌｏｓｔｒＴＭ’ｆ’ｆ
ｅｒｍｅｎｔａｔｉｏ口）が開始して牧草蛋白質を分解
してアンモニア　窒素にすることを示す。乳酸および酢
酸の比は、処理■の貯蔵牧草において最も高く、これは
この貯蔵牧草における乳酸発酵が全ての貯蔵牧草の中で
最もホモ発酵なものであり、よってそれが大変安定でか
つ良好な品質の貯蔵牧草を生成したことを示している。

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. （１）貯蔵すべき物に、媒質中のグルコースオキシダー
   ゼを、グルコン酸を生成してその物のｐＨを低減しかつ
   酸素を消費せしめるのに有効な量添加することよりなる
   、乳酸発酵によりかいばおよび穀物を貯蔵する方法。
2. （２）グルコースオキシダーゼを貯蔵すベき物１トン当
   り１０，０００ないし１０，０００，０００ＩＵの量添
   加することよりなる特許請求の範囲第１項記載の方法。
3. （３）木材加水分解物、ホエー加水分解物、澱粉加水分
   解物、甜菜糖蜜、甘蔗廃糖蜜およびこれらの組合せから
   選択された物質を添加することよりなる特許請求の範囲
   第１項記載の方法。
4. （４）前記物質を貯蔵すべき物１トン当り乾燥物に換算
   して０．５ないし２０Ｋｇの量添加することよりなる特
   許請求の範囲第３項記載の方法。
5. （５）塩酸、硫酸、燐酸、蟻酸、酢酸、乳酸およびグル
   コン酸またはこれらの塩から選択された物質を添加する
   ことよりなる特許請求の範囲第１項記載の方法。
6. （６）前記物質を貯蔵すべき物１トン当り１ないし２リ
   ットルの量添加することよりなる特許請求の範囲第５項
   記載の方法。
7. （７）貯蔵すべき物に、媒物中のグルコースオキシダー
   ゼを、グルコン酸を生成してその物のｐＨを低減しかつ
   酸素を消費せしめるのに有効な量添加すること、そして
   前記の物に、カタラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ
   およびβ−グルコシダーゼまたはその組合せをさらに添
   加することよりなる、乳酸発酵によりかいばおよび穀物
   を貯蔵する方法。
8. （８）グルコースオキシダーゼを貯蔵すべき物１トン当
   り１０，０００ないし１０，０００，０００ＩＵの量添
   加することよりなる特許請求の範囲第７項記載の方法。
9. （９）セルラーゼを貯蔵すべき物１トン当り１，０００
   ，０００ないし１００，０００，０００エイチイーシー
   単位の量添加することよりなる特許請求の範囲第７項記
   載の方法。
10. （１０）β−グルコシダーゼを貯蔵すべき物１トン当り
    １００，０００ないし１０，０００，０００エヌケーエ
    イティ単位の量添加することよりなる特許請求の範囲第
    ７項記載の方法。
11. （１１）カタラーゼを貯蔵すべき物１トン当り５００な
    いし５，０００，０００ベーカー単位の量添加すること
    よりなる特許請求の範囲第７項記載の方法。
12. （１２）木材加水分解物、ホエー加水分解物、澱粉加水
    分解物、甜菜糖蜜、甘蔗廃糖蜜およびこれらの組合せか
    ら選択された物質を添加することよりなる特許請求の範
    囲第７項記載の方法。
13. （１３）前記物質を貯蔵すべき物１トン当り乾燥物に換
    算して０．５ないし２０Ｋｇの量添加することよりなる
    特許請求の範囲第１２項記載の方法。
14. （１４）塩酸、硫酸、燐酸、蟻酸、酢酸、乳酸およびグ
    ルコン酸またはこれらの塩から選択された物質を添加す
    ることよりなる特許請求の範囲第７項記載の方法。
15. （１５）前記物質を貯蔵すべき物１トン当り１ないし２
    リットルの量添加することよりなる特許請求の範囲第１
    ４項記載の方法。