JPH02254364A - 生物,化学発光酵素免疫測定用プレート - Google Patents
生物,化学発光酵素免疫測定用プレートInfo
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- JPH02254364A JPH02254364A JP1077529A JP7752989A JPH02254364A JP H02254364 A JPH02254364 A JP H02254364A JP 1077529 A JP1077529 A JP 1077529A JP 7752989 A JP7752989 A JP 7752989A JP H02254364 A JPH02254364 A JP H02254364A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は近年医学、薬学又は生化学等の分野において利
用されている酵素免疫測定法における生物発光、化学発
光を用いた抗原検出方法に最適な生物、化学発光酵素免
疫測定用プレートに関するものである。
用されている酵素免疫測定法における生物発光、化学発
光を用いた抗原検出方法に最適な生物、化学発光酵素免
疫測定用プレートに関するものである。
(従来の技術)
酵素免疫測定法(エンザイム・イムノアッセイ)は、予
め試料台である酵素免疫測定用プレートの有底試料孔に
、被測定対象物に対する特異抗体を結合させておき(抗
体の固相化)、これに被測定対象物である抗原を含む血
液等の試料液を加えて免疫反応(抗原抗体反応)を行な
わせ、抗原を固相化抗体に結合させる。次に、未反応物
を洗浄して除去した後、固相化抗体に結合した抗原に、
さらに酵素標識抗体を加えて結合させ、この抗原に結合
した酵素標識抗体の量を測定することにより、被測定対
象物である抗原の量を求める方法である。
め試料台である酵素免疫測定用プレートの有底試料孔に
、被測定対象物に対する特異抗体を結合させておき(抗
体の固相化)、これに被測定対象物である抗原を含む血
液等の試料液を加えて免疫反応(抗原抗体反応)を行な
わせ、抗原を固相化抗体に結合させる。次に、未反応物
を洗浄して除去した後、固相化抗体に結合した抗原に、
さらに酵素標識抗体を加えて結合させ、この抗原に結合
した酵素標識抗体の量を測定することにより、被測定対
象物である抗原の量を求める方法である。
酵素標識抗体の検出方法としては、通常、比色法あるい
は蛍光法が用いられている。比色法は、基質を加えて反
応させ、その吸光度を測定する方法である。蛍光法は、
基質に蛍光物質を用い、反応させた後、光で励起して蛍
光を起こし、その蛍光強度を測定する方法である。前者
は、操作の簡便さから従来よく用いられているが、感度
は低い。
は蛍光法が用いられている。比色法は、基質を加えて反
応させ、その吸光度を測定する方法である。蛍光法は、
基質に蛍光物質を用い、反応させた後、光で励起して蛍
光を起こし、その蛍光強度を測定する方法である。前者
は、操作の簡便さから従来よく用いられているが、感度
は低い。
一方、後者は、前者の100〜1,000倍の感度を示
すものの、励起光を必要とするために、絶えず被測定試
料以外の物質の干渉を招き、実用されていないのが現状
である。これらの理由から、高感度化の方法として放射
免疫測定法が使用されてきたが、この方法は、標識物質
として放射性同位元素を使用するために取り扱いが限定
され、そのうえ測定者への安全上の問題もあるため、こ
れに変わる超高感度測定法が求められてきた。
すものの、励起光を必要とするために、絶えず被測定試
料以外の物質の干渉を招き、実用されていないのが現状
である。これらの理由から、高感度化の方法として放射
免疫測定法が使用されてきたが、この方法は、標識物質
として放射性同位元素を使用するために取り扱いが限定
され、そのうえ測定者への安全上の問題もあるため、こ
れに変わる超高感度測定法が求められてきた。
近年、これらの問題を解決する方法として、生物あるい
は化学発光酵素免疫測定法が注目を浴びている。その大
きな理由は、発光法は、蛍光法のように励起光を必要と
せず、適当な酸化剤を添加すれば、抗原に特異的に結合
した酵素(酵素標識抗体)の触媒によって、被測定試料
そのものがきわめて特異的に発光するためである。また
、蛍光法に比べて反応によって生ずる発光が微弱である
という問題があったが、光子計数法を採用することによ
り、高い感度を得ることができるようになった。
は化学発光酵素免疫測定法が注目を浴びている。その大
きな理由は、発光法は、蛍光法のように励起光を必要と
せず、適当な酸化剤を添加すれば、抗原に特異的に結合
した酵素(酵素標識抗体)の触媒によって、被測定試料
そのものがきわめて特異的に発光するためである。また
、蛍光法に比べて反応によって生ずる発光が微弱である
という問題があったが、光子計数法を採用することによ
り、高い感度を得ることができるようになった。
また従来、このような酵素免疫測定法では、数多くの試
料を迅速にしかも正確に測定するために、反応容量の少
ない規則的に配設された多数の試料孔を有する酵素免疫
測定用プレートが使用されている。
料を迅速にしかも正確に測定するために、反応容量の少
ない規則的に配設された多数の試料孔を有する酵素免疫
測定用プレートが使用されている。
(発明が解決しようとする課題)
しかしながら、従来の酵素免疫測定用プレート(以下、
単に測定用プレートという。)は、主に光を透過させる
必要性のある比色法で使用されるものであることから、
第7図に示すように、透明な合成樹脂からなり、しかも
試料孔2の底が平底あるいはV底又はU底に形成されて
いる。そのため、これらの測定用プレートは、発光法に
用いることはできない。この理由は、第7図に示すよう
に、測定用プレートlaが透明であると隣接する試料孔
2での発光と干渉したり、また、底が平底、■底等であ
ると受光部5への集光性が悪くなるため、このような従
来の測定用プレートlaでは被測定試料孔2において試
料の発光量が正確に測定できないからである。
単に測定用プレートという。)は、主に光を透過させる
必要性のある比色法で使用されるものであることから、
第7図に示すように、透明な合成樹脂からなり、しかも
試料孔2の底が平底あるいはV底又はU底に形成されて
いる。そのため、これらの測定用プレートは、発光法に
用いることはできない。この理由は、第7図に示すよう
に、測定用プレートlaが透明であると隣接する試料孔
2での発光と干渉したり、また、底が平底、■底等であ
ると受光部5への集光性が悪くなるため、このような従
来の測定用プレートlaでは被測定試料孔2において試
料の発光量が正確に測定できないからである。
そこで、各試料孔2毎に1孔ずつ発光反応を行なわせ、
確実に受光して計測することも考えられるが、この方法
では、−度に多数の試料を測定することができず、迅速
性に欠けるという欠点がある。
確実に受光して計測することも考えられるが、この方法
では、−度に多数の試料を測定することができず、迅速
性に欠けるという欠点がある。
本発明は斯かる事情に鑑みてなされたもので、集光性が
良く、しかも隣接する試料孔の発光の影響のない正確で
迅速な測定が行なえ、生物発光。
良く、しかも隣接する試料孔の発光の影響のない正確で
迅速な測定が行なえ、生物発光。
化学発光を用いた酵素免疫測定法に最適な測定用プレー
トを提供することを目的とする。
トを提供することを目的とする。
(課題を解決するための手段)
前記目的を達成するため、本発明は、多数の有底試料孔
を設けて、各試料孔の底を曲面で形成するとともに、各
試料孔の少なくとも側部及び底部に非透光性処理を施し
たものである。
を設けて、各試料孔の底を曲面で形成するとともに、各
試料孔の少なくとも側部及び底部に非透光性処理を施し
たものである。
前記試料孔の少なくとも側部及び底部は、その外面に金
属粉又は黒色塗料等をコーティングしたもの、金属粉末
又は炭素粉末等を混入した合成樹脂で形成したもの、あ
るいは着色合成樹脂で形成したものとすることができる
。
属粉又は黒色塗料等をコーティングしたもの、金属粉末
又は炭素粉末等を混入した合成樹脂で形成したもの、あ
るいは着色合成樹脂で形成したものとすることができる
。
(作用)
各試料孔で得られた酵素標識抗体の生物発光又は化学発
光反応による光は、非透光性処理が施されて鏡面となり
、かつ、曲面で形成された試料孔の底部で反射して試料
孔の開口部方向に向かって進行し、該開口部近傍に配設
される受光部に集光される。また、試料孔の少なくとも
側部及び底部は、非透光性処理が施されているため、隣
接する試料孔からの光が遮光される。
光反応による光は、非透光性処理が施されて鏡面となり
、かつ、曲面で形成された試料孔の底部で反射して試料
孔の開口部方向に向かって進行し、該開口部近傍に配設
される受光部に集光される。また、試料孔の少なくとも
側部及び底部は、非透光性処理が施されているため、隣
接する試料孔からの光が遮光される。
(実施例)
次に、本発明の実施例を添付図面に従って説明する。
第3図は、本発明に係る測定用プレート1を示し、この
測定用プレートlは透明な合成樹脂からなり、上面に規
則的に配列された多数の試料孔2を有している(ただし
、図では一部の試料孔2のみを示し、他は省略しである
。)。
測定用プレートlは透明な合成樹脂からなり、上面に規
則的に配列された多数の試料孔2を有している(ただし
、図では一部の試料孔2のみを示し、他は省略しである
。)。
各試料孔2は、有底で竿1図に示すように、その底面は
曲面で形成されている。この底面の曲面形状としては、
放物面、二次曲面あるいは半楕円曲面等が好ましい。ま
た、各試料孔2の底外面。
曲面で形成されている。この底面の曲面形状としては、
放物面、二次曲面あるいは半楕円曲面等が好ましい。ま
た、各試料孔2の底外面。
外側面及び測定用プレート1の裏面は、アルミニウム等
の金属粉を含むコーティング剤3でコーティングされて
いる。このコーティング剤3をコーティングする代わり
に黒色系塗料を塗布してもよい。
の金属粉を含むコーティング剤3でコーティングされて
いる。このコーティング剤3をコーティングする代わり
に黒色系塗料を塗布してもよい。
第1図は、本実施例に係る測定用プレート1を用いて、
化学発光酵素免疫測定法により血液等の被測定試料中の
特定の抗原を分析する一過程を示す。4は、ベルオキシ
ターゼを標識した酵素標識抗体に、発光基質であるルミ
ノールと酸化剤である過酸化水素を加えた化学発光反応
液である。5は、この化学発光反応液4が発する光の量
を測定するルミノメータの受光部で、各試料孔2の開口
部近傍に位置している。
化学発光酵素免疫測定法により血液等の被測定試料中の
特定の抗原を分析する一過程を示す。4は、ベルオキシ
ターゼを標識した酵素標識抗体に、発光基質であるルミ
ノールと酸化剤である過酸化水素を加えた化学発光反応
液である。5は、この化学発光反応液4が発する光の量
を測定するルミノメータの受光部で、各試料孔2の開口
部近傍に位置している。
化学発光反応液4が発する光は、四方に放射されるが、
試料孔2の底面がコーティング剤3により鏡面となって
おり、しかも曲面で形成されているため、この試料孔2
の底面で反射し、試料孔2の開口部に向かって進行して
受光部5に集光される。また、コーティング剤3により
、外部からの光、特に隣接する試料孔2からの光が遮光
される。
試料孔2の底面がコーティング剤3により鏡面となって
おり、しかも曲面で形成されているため、この試料孔2
の底面で反射し、試料孔2の開口部に向かって進行して
受光部5に集光される。また、コーティング剤3により
、外部からの光、特に隣接する試料孔2からの光が遮光
される。
これにより、受光部5には、それが位置する被測定用試
料孔2からの化学発光による光のみが集光されるため、
発光量が正確に測定できる。また、隣接する試料孔2で
の化学発光の影響を受けないので、各試料孔2で一度に
化学発光させることができ、測定が迅速に行なえる。
料孔2からの化学発光による光のみが集光されるため、
発光量が正確に測定できる。また、隣接する試料孔2で
の化学発光の影響を受けないので、各試料孔2で一度に
化学発光させることができ、測定が迅速に行なえる。
第2図は、本発明の他の実施例に係る測定用プレート1
0を示し、この測定用プレート10は、予め金属粉末又
は炭素粉末等を混入した合成樹脂で形成して非透光性と
したものであり、コーティング剤を塗布していない以外
は第1図に示す測定用プレート1と同様であり、対応す
る部分には同一符号を付して説明を省略する。
0を示し、この測定用プレート10は、予め金属粉末又
は炭素粉末等を混入した合成樹脂で形成して非透光性と
したものであり、コーティング剤を塗布していない以外
は第1図に示す測定用プレート1と同様であり、対応す
る部分には同一符号を付して説明を省略する。
なお、第2図に示す金属粉末等混入の合成樹脂の代わり
に着色合成樹脂を用いてもよい。
に着色合成樹脂を用いてもよい。
本発明者らは、本発明に係る測定用プレート1゜10の
有効性を確認するために以下に示す実験を行なった。
有効性を確認するために以下に示す実験を行なった。
実験1.外部光の影響
第4図に示すように、化学発光反応を行なわせてその発
光量を検出する1個の被測定試料孔2aを特定し、該被
測定試料孔2aの周囲に化学発光反応のみを行なわせる
反応試料孔2bを設ける。
光量を検出する1個の被測定試料孔2aを特定し、該被
測定試料孔2aの周囲に化学発光反応のみを行なわせる
反応試料孔2bを設ける。
そして、反応試料孔2bの数を1個ずつ増加させて、被
測定試料孔2aでの受光部5が受光する受光値すなわち
光電子パルス数を測定した。
測定試料孔2aでの受光部5が受光する受光値すなわち
光電子パルス数を測定した。
第5図はこの実験結果を示し、Aは本発明に係る測定用
プレートlを用いたもの、Bは従来の測定用プレートを
用いたものである。ただし、従来の測定用プレートとし
ては、U底でコーティング剤を塗布していない透明のも
のを用いた。
プレートlを用いたもの、Bは従来の測定用プレートを
用いたものである。ただし、従来の測定用プレートとし
ては、U底でコーティング剤を塗布していない透明のも
のを用いた。
この実験1によれば、従来の測定プレートでは、反応試
料孔数の増加に伴い、被測定試料孔2aでの受光値が増
大するため、周囲の反応試料孔2bでの化学発光の影響
を受けていることがわかる。
料孔数の増加に伴い、被測定試料孔2aでの受光値が増
大するため、周囲の反応試料孔2bでの化学発光の影響
を受けていることがわかる。
これに対し、本発明に係る測定用プレート1では、反応
試料孔数の増加にかかりらず被測定試料孔2aでの受光
値は変化しないため、周囲の反応試料孔2bでの化学発
光の影響は全く受けていないことがわかる。
試料孔数の増加にかかりらず被測定試料孔2aでの受光
値は変化しないため、周囲の反応試料孔2bでの化学発
光の影響は全く受けていないことがわかる。
実験2.集光性
底形状がU底、■底、平底の3種類の試料孔を用い、ベ
ルオキシターゼ量を増加させて化学発光を行なわせ、各
試料孔での受光値を測定した。なお、各試料孔の側及び
底外面にはコーティング剤を塗布した。
ルオキシターゼ量を増加させて化学発光を行なわせ、各
試料孔での受光値を測定した。なお、各試料孔の側及び
底外面にはコーティング剤を塗布した。
標識酵素であるベルオキシターゼの量と発光量の関係は
直線的であることがすでに知られているが、本実験によ
れば、第6図に示すように、U底の試料孔ではV底、平
底の試料孔よりも集光性が良いため、ベルオキシターゼ
奄の変化に対する受光値の変化の勾配が大きく、感度が
良いことがわかる。
直線的であることがすでに知られているが、本実験によ
れば、第6図に示すように、U底の試料孔ではV底、平
底の試料孔よりも集光性が良いため、ベルオキシターゼ
奄の変化に対する受光値の変化の勾配が大きく、感度が
良いことがわかる。
(発明の効果)
以上の説明から明らかなように、本発明に係る測定用プ
レートによれば、化学発光反応液が発する光の集光性が
良く、しかも外部光、特に隣接する試料孔での発光の影
響を受けないので、発光法による正確な測定が行なえる
。また、−度に多数の試料孔で同時に化学発光を行なわ
せることができ、迅速な測定が可能となるという効果を
有している。
レートによれば、化学発光反応液が発する光の集光性が
良く、しかも外部光、特に隣接する試料孔での発光の影
響を受けないので、発光法による正確な測定が行なえる
。また、−度に多数の試料孔で同時に化学発光を行なわ
せることができ、迅速な測定が可能となるという効果を
有している。
第1図は本発明に係る生物、化学発光酵素免疫測定用プ
レートの断面図、第2図は本発明の他の実施例に係る測
定用プレートの断面図、第3図は本発明に係る測定用プ
レートの斜視図、第4図は実験用の測定用プレートの平
面図、第5図は外部光の影響性に関する実験結果を示す
図、第6図は集光性に関する実験結果を示す図、第7図
は従来の測定用プレートの断面図である。 ■・・・生物、化学発光酵素免疫測定用プレート、2・
・・試料孔、 3・・・コーティング剤。 特 許 出 願 人 帝國製薬株式会社代 理 人 弁
理士 青白 葆 ほか1名flli1 図 第3図 寓2図 第7図 第4図
レートの断面図、第2図は本発明の他の実施例に係る測
定用プレートの断面図、第3図は本発明に係る測定用プ
レートの斜視図、第4図は実験用の測定用プレートの平
面図、第5図は外部光の影響性に関する実験結果を示す
図、第6図は集光性に関する実験結果を示す図、第7図
は従来の測定用プレートの断面図である。 ■・・・生物、化学発光酵素免疫測定用プレート、2・
・・試料孔、 3・・・コーティング剤。 特 許 出 願 人 帝國製薬株式会社代 理 人 弁
理士 青白 葆 ほか1名flli1 図 第3図 寓2図 第7図 第4図
Claims (4)
- (1)多数の有底試料孔を設けて、各試料孔の底を曲面
で形成するとともに、各試料孔の少なくとも側部及び底
部に非透光性処理を施したことを特徴とする生物、化学
発光酵素免疫測定用プレート。 - (2)前記試料孔の少なくとも側部及び底部に、金属粉
又は黒色系塗料をコーティングしたことを特徴とする請
求項1に記載の生物、化学発光酵素免疫測定用プレート
。 - (3)前記試料孔の少なくとも側部及び底部を、予め金
属粉末又は炭素粉末等を混入した合成樹脂で形成したこ
とを特徴とする請求項1に記載の生物、化学発光酵素免
疫測定用プレート。 - (4)前記試料孔の少なくとも側部及び底部を、着色合
成樹脂で形成したことを特徴とする請求項1に記載の生
物、化学発光酵素免疫測定用プレート。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1077529A JPH02254364A (ja) | 1989-03-29 | 1989-03-29 | 生物,化学発光酵素免疫測定用プレート |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1077529A JPH02254364A (ja) | 1989-03-29 | 1989-03-29 | 生物,化学発光酵素免疫測定用プレート |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02254364A true JPH02254364A (ja) | 1990-10-15 |
Family
ID=13636509
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1077529A Pending JPH02254364A (ja) | 1989-03-29 | 1989-03-29 | 生物,化学発光酵素免疫測定用プレート |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH02254364A (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06218304A (ja) * | 1993-01-27 | 1994-08-09 | Asahi Sanac Kk | 建築用塗材吹付機 |
JP2011501132A (ja) * | 2007-10-10 | 2011-01-06 | ポカード・ディアグノスティクス・リミテッド | 尿中のバクテリアの同定を行うためのシステム |
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-
1989
- 1989-03-29 JP JP1077529A patent/JPH02254364A/ja active Pending
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