JPH02207727A - トランスジェニックマウス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は免疫機構の解析、・免疫機構の異常による疾
患の解析及び免疫機構の異常による疾患の治療薬の効果
解析、更には治療法の検討等に用いるための、ヒ）ＩＬ
−２遺伝子を導入し、この遺伝子が発現しているトラン
スジェニックマウス、並びに同目的の念めのヒ）ＩＬ−
２遺伝子及びヒ）ＩＬ−２レセプター・Ｌチェイン遺伝
子を導入し、両遺伝子が一個体に於いて発現しているト
ランスジェニックマウスに関する。

（従来の技術） 免疫機構（ここでいう免疫機構とは広義の免疫機構を意
味する。即ち抗原特異的生体防御反応及び抗原非特異的
生体防御反応に関する機構を意味する。以下同様）の異
常を示すマウスが種々知られている。例えば、自己免疫
疾患の症状を示すマウスとしてＭＲＬ　／　ｌｐｒ　、
　ＮＺＢ　、　ＮＺＢ　／　ＮＺＷ　Ｆ　１等が知られ
ておシ、免疫不全を示すマウスとしてヌードマ９ス、８
ＣＩＤマウス等が知られている。これらは免疫機構の解
析、免疫機構の異常による疾患の解析及び免疫機構の異
常による疾患の治療薬の効果判定、更には治療法の検討
等に利用されている。これらマウスは突然変異によシ生
じ九マウスである。これらマウスのいかなる遺伝子に異
常が起きているのか、この異常がいかにして疾患を引起
こすのか、この７９スの異常がヒトの疾患といかなる関
係にあるのか、いずれもはりきりとは解明されていない
。しかるにこれら７９スを用いて得られた情報は時とし
てヒトに適応出来ない場合がある。

一方、トランスジェニックマウス（以下ＴＧＭと記する
。）は１９８０年にＧｏｏｒｄｏｎらによシ開発された
。その原理はまず単離し九遺伝子をマイクロインジェク
タ１ン法又はレトロウィルスｔ−用い未分化細胞をまぜ
あわせた後ち胚を培養してキメラ組成の桑実胚または胚
盤胞を得る。次に遺伝子を導入した授精卵を偽妊娠させ
た仮親の卵管に移植する。又はキメラ胚を偽妊娠させた
仮親の子宮に移植する。仮親から生れた子の体細胞にお
ける導入遺伝子を確認してＴＧＭ　’ｌ得ることができ
る。

また異なる遺伝子を導入した異なるＴＧＭを掛合せるこ
とを繰返すことＫよシ複数の遺伝子を持つＴＧＭを得る
ことも出来る。導入に用いる遺伝子は適当なブロモター
、場合によってはエンハンサ−等の遺伝子制御領域を含
み、ＴＧＭの体内で遺伝子が発現出来るように設計され
ている。

さて、免疫機構の解析、免疫機構の異常の解析、免疫機
構の異常による疾患の解析及び免疫機構の異常による疾
患の治療薬の効果判定、更には治療法の検討等にＴＧＭ
を用いることが出来れば、次のような利点が考えられる
。１．あらかじめ分った遺伝子を導入してるため、前述
の利用において解析がしやすい。２．ヒトの遺伝子を導
入することが出来るためヒトの疾患の解析やその治療法
の検討に適している。３．突然変異では得ることが難し
い遺伝子の変化したマウスをも作る事ができる。以上よ
り疾患モデルとしてのＴＧＭの利用が期待されている。

ＩＬ−２はＴ細胞又はＢ細胞の増殖又は分化因子として
知られている。ヒトｒＬ−２の遺伝子は各日らにより明
らかにされた（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ　、Ｔ、ら、Ｎａｔ
ｕｒｅ、３０２ｅ３０５＊１９８３）、Ｉｌ、−２レセ
グタ−（以下ＩＬ−２Ｒと記する）は活性化されたＴ細
胞上たはＢ細胞上に存在しＩＬ−２分子が結合すること
によシＴ細胞又はＢ細胞の増殖又は分化が誘導される。

ＩＬ−２ＲはＬチェインまたはｐ５５と称されるタンノ
Ｉり質とＨチェインま九はｐ７５と称されるタン・母夕
質の結合体と考えられている。ヒ）ＩＬ−２Ｒ”Ｌチェ
インの遺伝子は零度らによシ明らかにされた（Ｎｌｋａ
ｉ　ｄｏ　、Ｔ、ら、Ｎａｔｕｒｅ＋３１１．６３１．
１９８４）、ＩＬ−２及びＩＩ、−２ＲはＴ細胞又はＢ
細胞の増殖又は分化をコントロールすることによシ免疫
系において重要な働きを担っている。しかしＩＬ−２及
びＩＬ−２Ｈの生体内での働きは解明すべき問題が多く
残りている。

又ヒトの疾患とＩＬ−２及びｒ　Ｌ　−’　２　Ｈの働
きの異常との関係に関しても不明な点が多い。従ってこ
れらを解明していく上でＩ　Ｌ−２若しくはＩＬ−２Ｒ
又は双方の働きが異常になつた動物モデルの必要性が高
い。しかしこれまでにＩＬ−２又はＩＬ−２Ｈの働きの
異常が明らかとなりでいる突然変異動物モデルは知られ
ていない。

（発明が解決しようとする課題） 従ってこの発明の目的はＩＬ−２遺伝子又は、！Ｌ−２
遺伝子とＩＬ−２Ｒ遺伝子のいずれの遺伝子とも異常に
発現していることにより免疫系の異常をきたし、これよ
り免疫機構の解析、免疫機構の異常の解析、免疫機構の
異常による疾患の解析、及び疾患の治療薬の効果判定、
更には治療法の検討等に用いることの出来るＴＧＭを作
製することにある。

（課題を解決するための手段） 本発明者はヒ）ＩＬ−２遺伝子をマウス体内で発現出来
るように設計した遺伝子構築物を用いてヒ）ＩＬ−２遺
伝子を発現しているＴＧＭを作製し免疫機構に異常をき
たしている疾患モデルマウスを作ｐえることを見出だし
た。更に、ＩＬ−２遺伝子を導入したＴＧＭとヒ）ＩＬ
−２Ｒ＠Ｌチェイン遺伝子を導入したＴＧＭを掛合せそ
の雑種（Ｆｌ）を作ることによシ、ＩＬ−２遺伝子とＩ
Ｌ−２Ｒ遺伝子のいずれも異常に発現している疾患モデ
ルマウスを作シえる事をみいだした。即ち、この発明は
ＩＬ−２又は、ＩＬ−２及びＩ　Ｌ−２Ｈの生体内発現
異常を特徴とする疾患モデルマウスである。

本発明に係わるヒ）ＩＬ−２遺伝子及びヒトＩＬ−２Ｒ
−Ｌチェイン遺伝子導入ＴＧＭは以下のように行うこと
ができる。更にヒトＩＬ−２遺伝子導入ＴＧＭとヒトＩ
Ｌ−２Ｒ−Ｌチェイン遺伝子導入ＴＧＭを別々につくシ
両者を掛合わせてヒトＩＬ−２遺伝子とヒトＩＩ、−２
Ｒ−Ｌチェイン遺伝子をいずれも発現しているＴＧＭを
得ることが出来る。

ヒ）　ＩＬ−２遺伝子導入ＴＧＭは次のようにして作る
事ができる。転写開始コドン及び転写停止コドンを含む
完全なヒ）ＩＬ−２遺伝子（第１図）の５′端上流にヒ
）ＩＬ−２遺伝子をマウス生体内で発現させえるような
プロモーターを結合させる。

たとえばマウスＭＨＣ（主要組織適合抗原）クラス１　
（Ｈ−２Ｋ”　）プロモーター、マウスメタルチオネイ
ンプロモーター等を用いる事ができる。ヒトＩＬ−２遺
伝子の３′端下流にヒ）ＩＬ−２遺伝子のメツセンジャ
ーＲＮＡを安定化させる為に／リアデニレシ冒ンシグナ
ル（Ｐｏｌｙ　Ａ　）を結合させる。

Ｐｏ１ｙＡはヒトＩＬ−２遺伝子の持つｐｏｌｙＡを用
いてもよいし、その他の例えば８Ｖ４０のＰｏ１ｙ　Ａ
やチオシンキナーゼのＰｏ１ｙＡ等を用いる事もてきる
。ヒ）ＩＬ−２遺伝子の発現を安定化させる目的でプロ
モーターとヒト！Ｌ−２遺伝子の間にβグロビン遺伝子
のイントロン及びＰｏ１ｙ　Ａの５′下流にβグロビン
遺伝子を挿入することも出来る◎このエクンンーイント
ロンの組合わせはβグロビンに限らすヒ）ＩＬ−２遺伝
子発現を安定化させる能力のあるものはいずれも用いる
ことができる。

このようにして構築したＤＮＡをマウスの授精卵にマイ
クロインジェクシ曹ンし、ＤＮＡを導入した授精卵を偽
妊娠したマウスの輸卵管に移植する。生れてきたことも
の体細胞のＤＮＡを抽出しサザンプｐツティングによシ
ヒトＩＬ−２遺伝子の存在を確認してヒトＩＬ−２遺伝
子導入ＴＧＭを得る。

ヒトＩＬ−２Ｒ・Ｌチェイン遺伝子導入ＴＧＭはヒト！
Ｌ−２遺伝子のかわシにヒトＩ　Ｌ−２Ｒ・Ｌチェイン
遺伝子を用いて、ヒ）ＩＬ−２遺伝子導入ＴＧＨの場合
と全く同じように作製することが出来る。導入された遺
伝子によるヒ）　Ｉ　Ｌ　−２Ｒ・Ｌチェインタン片り
質はマウスのＩＬ−２Ｒ−Ｈチェインタンノナク質と結
合体を作少ヒトＩＬ−２分子と結合し、ヒトＩＬ−２が
マ９スＩＬ−２８をもつマウス細胞に与えるのと同じ機
能を発揮することが知られている（Ｎｉｓｈｌ、　Ｍら
、Ｎａｔｕｒｅ　。

３３１．２６７−２６９．１９８８）。尚、ヒトＩＬ−
２Ｒ・Ｌチェインのアミノ酸配列及びそれをコードする
遺伝子の塩基配列は第２図に示し九。

更にヒトＩＬ−２遺伝子導入ＴＧＭとヒトＩＬ−２Ｒ・
Ｌチェイン遺伝子導入ＴＧＭを掛合わせてヒ）　ＩＬ−
２遺伝子とヒ）ＩＬ−２Ｒ・Ｌチェイン遺伝子のいずれ
の遺伝子も導入されたＴＧＭを得る。掛合せは通常の交
配によってもよく、あるいはヒ）　ＩＬ−２遺伝子又は
ヒ）ＩＬ−２Ｒ−Ｌチェイン遺伝子の導入された卵子ま
たは***の形で保存しておき必要に応じて体外授精させ
授精卵を仮親に移植してこともを作り、ヒトＩＬ−２遺
伝子とヒトＩＩ、−２Ｒ・Ｌチェイン遺伝子の両遺伝子
の導入されたＴＧＭを得ることも出来る。

本発明においては第１図及び第２図に示すＤＮＡ配列を
とらなくとも、第１図及び第２図に示すアミノ酸配列を
コードするＤＮＡ配列ならば、それぞれヒトＩＬ−２及
びヒトＺＬ−２Ｒチェインをコードする遺伝子として用
いうる。

さてヒトＩＬ−２遺伝子を導入したトランスジェニック
マウスの性質は対照のマウス（遺伝子導入に用いたもと
のマウス）に比べ以下の点で特徴的である。

１、生後約８週以内に脱毛が発生する。１１週での組織
検査では毛根の消失及び表皮、毛包の肥厚が見られる。

約５遍令のぎいマウスでは皮膚病変は認められないが表
皮中のＴｈ７−１　樹状細胞の数が増加している。

２、生後約１年以内に死亡する。

３、生後約１１週経過すると重篤な肺炎が発生する。肺
には好中球の広範な浸潤と局所的リンパ球の浸潤が見ら
れる。約５退会の若いマ９スの肺には僅かなり７７９球
の集合体は認められるが好中球の浸潤は認められない。

４、　リンノ々球系組織である、胸腺、ひ臓及びリンノ
母節における組織学的異常はないがひ臓あたシのリン／
４球の数が正常の２〜３倍となっている。

５、抗原非特異的Ｔ細胞応答は正常マウスと変わらぬが
、抗原特異的Ｔ細胞応答が低下している。

６、抗原非特異的Ｂ細胞の増殖応答は正常マウスと変わ
らぬが、抗原特異的抗体産生応答が低下している。

７、　リンパ球のサブセットの分布は正常マウスと変わ
らない。

８、　自己抗体の明らかな産生は認められない。

９、ＮＫ（ナチーラルキラー）活性は正常マウスと変わ
らない。

ヒ）ＩＬ−２遺伝子及びヒ）ＩＬ−２Ｒ遺伝子の両遺伝
子を導入し九トランスジェニックマウスの性質は対照の
マウス（遺伝子導入にもちいたもとのマウス、ヒトＩＬ
−２遺伝子及びヒトＩＬ−２Ｒ遺伝子の双方を有さない
マウス）に比べ以下の点で特徴的である。

１、成長が遅れる ２、歩行障害、運動失調 ３、生後４週以内に死ぬ ４、　間質性肺炎にかかる ５、胸腺の皮質及びひ臓の赤髄においてリンパ球が著し
く減少している。

６、小脳のグルキンエ細胞が消滅している。

７、抗原特異的で細胞の応答の低下 ８、抗原特異的抗体産生応答の低下 ９、胸腺においてＣＤ４　８−の細胞が増加している。

１０、　　ひ臓にオイテＴｈｙ−１＋／ＣＤ４　８−細
胞が増加している。

１１、　　ひ臓において膜表面にイムノグロブリンを持
つＢ細胞（ａｌｇ　　Ｂ細胞）が減少している。

１２、　　ひ臓のＮ　Ｋ　（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｋ１１ｌ
ｅｒ細胞）活性が増加しておシ、この活性はＴｂｙ−１
＋／ＣＤ３−細胞により担われている。

（本発明の効果） （ｉ）　　ヒ）　ＩＬ−２遺伝子を導入したＴＧＭは以
下のような利用が示唆される。

１、　このＴＧＭにおいて末梢のリン／ＩＰ球サブセッ
トの分布が正常と変わらず、抗原非特異免疫応答も正常
マウスと変わらないのにたいし、抗原特異的免疫応答が
低下している。これはおそらくＩＬ−２の異常な生産が
Ｔ細胞の分化過程の異常を引起こし７ｔ＆めと思われる
が、この状態は胸腺の変調又は老化と共に現れる免疫不
全状態と類似している。しかるにこのＴＧＭは胸腺の機
能や、Ｔ細胞の分化過程を調べたシ、Ｔ細胞の分化異常
や胸腺の変調あるいは老化による免疫不全を調べるモデ
ルとなる。

２、　このＴＧＭに頻発する肺炎の原因は確定していが
いが、全身の免疫不全が大きく係わりていると推察され
る。免疫不全が原因で起きる肺炎、例えば老人性の肺炎
、先天的免疫不全患者に於ける肺炎等のモデルとなる。

３、　このＴＧＭにおける皮膚炎の発生は表皮中で増加
している’ｒｈｙ−ｘ＋樹状細胞によるものと思われる
。しかるにこのタイプの皮膚炎のモデルとなる。

４、　このＴＧＭのサイトドキシツクで細胞の応答は低
下してることよシ移植組織にたいする拒絶反応が低下し
ていることが予想され、種々の移植実験に用いることが
出来ると思われる。例えばサイトドキシツクＴ細胞の移
植組織拒絶機構に関する研究や、ある種のヒト癌細胞の
継代維持である。

（ｌｉ）　　ヒトＩＬ−２遺伝子及びヒトＩＬ−２Ｒ・
Ｌチェイン遺伝子の両遺伝子を導入し７’ｊＴＧＭは以
下のよう力利用が示唆される。

１、胸腺のコルテックスには正常マウスでは自己と反応
するクローンが除かれ九成熟したで細胞が多く存在する
が、ＴＧＭではこれが存在しない。

これは通常の胸腺に於けるＴ細胞の分化、増殖及び教育
（自己と反応するクローンを除き、かつ自己のＭＨＣと
結合し九非自己分子を認識すクローンを増殖９分化させ
る）がＴＧＭにおいて加速され九。

あるいはこの機構に何等かの変化が生じたと考えられる
。即ちこのＴＧＭは胸腺の丁細胞に対する役割を解明す
る道具となるばかりでなく、この役割の変調が原因とな
っている疾、甑のモデルマウスとなる。例えば、ヒトは
歳をとるとともに胸腺の機能が衰退してゆくことが知ら
れているが、とのＴＧＭは老化の一モデルとなる。

２、このＴＭＧはＮＫ活性が高進しているが、ＮＫ活性
は癌の発生を押える働きがあることから、ＮＫ活性と癌
抑制との関連を探るモデルと々る。

また局所におけるＮＫ＃胞の恒常的に活性化されている
ために生じる疾患のそデルとなる。例えばこの’ｒＧＭ
で見られるような皮膚の炎症である。

３、　７ＧＭが運動失調を示すのは小脳に於ける局所的
リンノや球の浸潤と活性化によるものと思われるが、こ
のＴＧＭは同様の原因で起きる脳神経障害のモデルとな
る。

４、　　ＴＧＭに頻発する間質性肺炎の原因は全身的免
疫力の低下によるものかあるいは肺における恒常的リン
１４球あるいはＮＫ細胞の活性化が原因と考えられる。

この症状に類似したヒトの疾患として免疫力の低下によ
る老人性の肺炎あるいは肺における持続的炎症によるサ
ルコイド−シスが考えられる。しかるにＴＧＭはこのよ
う力疾患のモデルとなシうる ５、　このＴＧＭのサイトドキシツクＴ＃！ａの応答は
低下していることより移植組織に対する拒絶反応が低下
していることが予想され、種々の移植実験に用いること
が出来る可能性があることはＩＬ−２・’Ｉ’ＧＭと同
様である。

以下、本発明を実例に基すいて説明する。

実施例１゜ グラスミドｐＫｃＲ，Ｔａｅ２Ａ（Ｎｉｋａｌｄｏ、Ｔ
、ｅｔ　ａｔ。

Ｎａｔｕｒｅ　３１１．６３１−６３５．１９８４）の
ブロモターブロモターのＰｖｕ　−Ｉ　Ｉ　−ＢａｍＨ
Ｉ断片（ＢａｍＨ工の切゛・断１部、１位は転写開始コ
ドンの１３塩基対上ｈ−ＩＬ−２Ｒと呼ぶ（第３図）。

このプラスミドをＰｖｕ　Ｉ　Ｉ及び８ａｌ　Ｉで直線
化し、これをＣ５７ＢＬマウスの授精卵にマイクロイン
ジエクシ冒ンした。この卵を偽妊娠させたメスのＩＣＲ
マウスの輸卵管に移植した。マイクロインジエクシ曹ン
に用いたＤＮＡは１０ｎＩＩ／／ＩＪの濃度に１０ｍＭ
　Ｔｒｉｍ　−ＨＣＬ（ｐＨ８）　、　０．２ｍＭ　Ｉ
ＣＤＴＡに溶かして用い九。マイクロインジェクシ璽ン
、授精卵移植、ＤＮＡ分析の各方法はＭａｎｌｐｕｌａ
ｔｌｎｇ　ｔｈ＠Ｍｏｕｓｅ　Ｅｍｂｒｙｏ−ａ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ　８ｐｒｌｎ
ｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　ＮｅｗＹ
ｏｒｋ　１９８６　）におけるＨｏｇａｎ、Ｂらの方法
によった、導入され九ＩＬ−２Ｒ−Ｌチェイン遺伝子の
解析及びヒ）ＩＬ−２Ｒ−Ｌチェイン遺伝子の発現の解
析はＮ１５ｈ１・Ｍ、らＮａｔｕｒｖ、３３１　、２６
７−２６９（ｉ９８８）に記載される方法によりた。Ｔ
ＧＭのひ臓及び胸腺においてヒ）ＩＬ−２１−Ｌチェイ
ン遺伝子が強く発現されているマウスを用いてヒトＩＬ
−２導入ＴＧＭと掛合わせた。

実施例２゜ ｐＫＣＲ−Ｈ−２に’ｎ・Ｉ　Ｌ　−２ＲのヒトＩＬ−
２ＲｅＤＮＡ部分即ち、Ｈｌｎｄ　　ｍフラグメントを
除き、転写開始コドン、転写停止コドン及びＰｏ１ｙＡ
を含む完全なヒトＩ　Ｌ　−２ｃＤＮＡ、即ちＰａｔ　
Ｉ　−Ｐｕｖ　ｎフラグメント（第１図）と置換した（
第４図）。得られたシラスミドは実施例１．と同様１ｃ
　Ｃ５７ＢＬ　／　６の授精卵にマイクロインジェクシ
■ンし、この卵を偽妊娠させたＩＣＲマウスに移植して
ＴＧＭを得た。

ＴＧＭに於けるヒトＩＬ−２遺伝子の解析及びヒトＩＬ
−２遺伝子の発現の解析は実施例１．と同様におこなり
穴。ＤＮＡゾローブはヒトＩ　Ｌ　−２ｃＤＮＡのＲｓ
ａ　Ｉ　−Ｓｔｕ　■フラグメントを用いた。ＲＮＡａ
　Ｉ　＠８　Ｐ　６　ＲＮＡポリメラーゼによってアン
チセンスＲＮＡプローブを作シこれを用いた。ヒトＩＬ
−２遺伝子を発現しているＴＧＭの血清をヒトＩＩ、−
２にたいする酵素免疫測定法により測定すると、３３０
−５７０ｐのヒトＩＬ−２タンパク質が検出された。ひ
臓及び胸腺でのと）ＩＬ−２遺伝子の発現の高いＴＧＭ
をヒトＩＬ−２Ｒ−Ｌチェイン遺伝子導入ＴＧＭとの掛
合わせに用いた。

実施例３゜ 実施例１．で得なメスのヒ）ＩＬ−２Ｒ−Ｌチェイン遺
伝子導入ＴＧＭと実施例２．で得たオスのヒトＩＬ−２
遺伝子導入ＴＧＭを掛合わせてヒ）ＩＩ、−２１・Ｌチ
ェイン遺伝子とヒ）ＩＬ−２遺伝子のいずれも導入され
ておシ、いずれの遺伝子も発現しているＴＧＭを得た。

導入遺伝子の解析および発現の解析は実施例１．又は実
施例２．に示した方法によった。

実施例４゜ ヒトＩＬ−２を導入したＴＧＭ　（ｉ０−１２退会）の
び臓細胞を用いて免疫機能を調べた。サイトドキシツク
Ｔ細胞活性は次のように測定した。ひ臓細胞（３Ｘ　１
０’　）をＪＬ展の樹状細胞（Ｉ　Ｘ　１０５）と５日
間培養し、とのひ臓細胞を種々の細胞数でＮａ５１Ｃｒ
Ｏラベルした標的細胞Ｐ８１５（Ｈ−２”）（ＩＸＩＯ
’）と共に培養した。５時間培養後、上清中に放出され
たアイソトープ量を測定した。エフェクター無しの培養
上清のアイソトープ量を自発アイソトープ放出量とし、
培養終了３０分前ＫＯ，１％トリトンＸ１００を加えた
培養の上清のアイソトーデ放出量を最大放出アイソトー
プ量とし次。細胞障害能（％）は次のように算出した。

（各培養上清のアイソトープ量−自発アイソトープ量）
／（最大放出アイントープ量−自発アイソトープ量）Ｘ
１００ 嘔 抗体量製応答は次のように測定した。マウスに０．２コ
の羊赤血球（５係）を静脈注射し、７日後、ひ臓細胞を
用いて抗羊赤血球ＰＦＣ（７”ラーク形成細胞）を測定
した。

抗ＣＤ−３抗体刺激による増殖は次のように測定した。

ひ臓細胞（３Ｘ１０）を抗ＣＤ−３モノクロ一ナル抗体
（ハイブリドーマ２Ｃ１１の培養上清、５係）と共に４
８時間培養しトリチウムチミヂン取込み（ｉ２時間）に
より細胞増殖を測定した。

ナチェラルキラー細胞活性の測定は次のようにした。５
１Ｃ，ラベ＃ＹＡＣ−Ｉ　Ｍ胞（Ｉ　Ｘ　１０’　）に
対しひ臓細胞５×１０　を加え４時間培養後、培養上清
に放出されたアイソトープ量を測定した。細胞障害能（
％）はサイトドクシツクＴ細胞活性と同様に算出しな。

Ｘ″一 実施例５゜ ヒトＩＬ−２およびヒトＩＬ−２Ｒ−Ｌチェイン遺伝子
の発現しているＴＧＭ　（以下このＴＧＭを単にＩ　Ｌ
　−２／　Ｉ　Ｌ　−２Ｒ−ＴＧＭと記する）のひ臓細
抱をもちて、ＴＧＭの免疫機能を調べ念。測定方法は実
施例４と同様である。

実施例６゜ ヒトＩ　Ｌ　−２／ヒトＩ　Ｌ　−２ＲＴＧＭのリン／
４’球のサブセットを調べた。ＴＧＭの胸腺またはひ臓
よシリンノ臂球を分離し、ＦＩＴＣラベル抗ＣＤ４モク
ローナル抗体及びビオチン化抗ＣＤ８モノクローナル抗
体（ＰＥ−ストレプトアビジンを反応）。

ＦＩＴＣラベル’ｒｈｙ　−１モノク四−ナル抗体、及
びを反応させた。この細胞を２色螢光ＦＡＣ８で分析し
た・ 実施例７゜ ヒトＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒ。

を分離しＰＩＴＣラベル抗’ｒｈｙ　−１ル抗体及びビ
オチン化抗ＣＤ− 抗体を反応させた後、ＰＥ−ス ＴＧＭＯ全ひ臓細胞 、２モノクローナ ３モノクローナル トレプトアピジン 実施８゜ ５１Ｃｒ−ラベルし７’ｔＹＡＣ−１細胞又はＰ８１５
細胞を標的細胞として、ＩＬ−２／ＩＬ−２ＲＴＧＭの
ＮＫ活性を―ｊ定した。ＩＬ−２／ＩＬ−２ＲＴＧＭの
ひ臓と１ぺ１０’個の標的細胞を１００：１．５０：１
．２５：１．又は１２．５：１の割合いで混合し９６穴
Ｖ−底プレート力いて４時間培養した。培養液中に放出
されたアイソトープを測定した。表示法は実施例５と同
様である。

〆／ ＹＡＣ−１細胞 Ｐ８１５細胞 明細書の浄書 明細書の浄書 〔発明の効果〕 本発明のトランスジェニックマウスは免疫機構の解析、
免疫機構の異常による疾患の解析及び免疫機構の異常に
よる疾患の治療薬の効果判定、更に治療法の検討等に用
いることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はヒト比−２のアミノ酸配列及び遺伝子のＤＮＡ
配列 第２図はヒトルー２Ｒのアミノ酸配列及び遺伝子のＤＮ
Ａ配列 第３図はヒトルー２Ｒ−ＴＧＭを作製するのに用いたＤ
ＮＡ構築物の模式図 第４図はヒトＩＬ−２・ＴＧＭを作製するのに用いたＤ
ＮＡ構築物の模式図 Ｇ丁ＴＧＡＡＴＧＴθ丁ＧＧ丁ＴＴＧＣＴＩＣＣＴＡ丁
ＴＧＴＡＩＣＴＡＴＴＡＴ丁Ｃτ丁＾ＡＴＣＴ丁ＡＡ！
ＡＣＴＡＴＡＡＡＴ今ＴＧＧＡＴＣＴＴＴ！ＡＴＧＡＴ
ＴＣＴ丁τＴＴＧＴＡＡＧＣＣＣＴＡＧＧＧＧＣＴＣ！
ＡＡ＾＾ＴＧＧＴＴＩＣＡＣＴＴＡ丁ＴＴ！ＴＣＣＣＡ
ＡＡＡＴ！丁ＴＴＡＴＴＡＴＴ！ＴＧＴＴＧＡＡＴＧ！
ＴＡ＾＾丁＾ＴＡＧτ＾ＴＣＴＡＴＧＴＡ（、＾ＴＴＧ
ＧＴ丁ＡＧ丁ＡＡ第１図 ＾ＡＣＴＣＣＴＧ　ＡＣＴＣＣＧ　ＡＴ　ＡＧＡ　Ｇ　
ＡＣＴＧＧ　ＡＴＧＧ　ＡＣＣＣＧＣＡＡＧＧＧＴＧＧ
ＣＡＧＣＣＣＡＧＧＣＧＧ　ＡＣＣＧ　ＡＴＣＴＴＣＣ
ＣＡＴＣＣＣＡ　ＣＡ　ＴＣＣＴＣＣＧＧＣＧＣＧＡ　
ＴＧＣＣＡＡ　Ａ　Ａ　Ａ　Ｇ　ＡＧＭｅｔＡｓｐＳｅ
ｒ丁ｙｒＬｅｕＬｅｕＭｅＬＴｒｐＧＩＧＣＴＧＡＣＧ
ＧＣＡＡＣＴＧＧＧＣＣＴ丁ＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＡＧ
ＡＣＣＴＣＣＧＣＴＴＣＡＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣ丁ＧＧ
ＴＣＣＣＡＡＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＣ
ＡＴＡＣＣＴＧＣＴＧＡＴＧＴＧＧＧＧ１ｅＰｒｏ旧ｓ
ＡｌａＴｈｒＰｈｅＬｙｓＡｌａＭｅｔＡｌａＴｙｒＬ
ｙｓＴＣＣＣＡＣＡＣＧＣＣＡＣＡＴＴＣＡＡＡＧＣＣ
ＡＴＧＧＣＣ丁＾Ｃ＾＾ＧＧ　ｌ　ｕＧ　Ｉ　ｙＴｈ　
ｒＭｅ　ＬＬｅｕＡｓｎＣｙｓＧ　ｌ　ｕＣｙｓ　Ｌｙ
ｓＡ　ｒｇＧ　ｌ　ｙＰｈｅＡ　ｒｇＡｒｇ　Ｉ　Ｉｅ
ＬｙｓＳｅｒＧ　ｌｙｓｅｒＬｅｕＴｙｒＭｅ　ｔＬｅ
ｕｃｙｓＴｈｒＧ　ｌ　ｙＡｓｎＳｅｒＳｅｒＨｉ　ｓ
　５ｅｒＳｅｒＴＧＡＡＧＧＡＡＣＣＡＴＧＴＴＧＡＡ
ＣτＧＴＧＡ＾丁ＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧＴＴＴＣＣＧＣ
ＡＧＡＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＧＧＴＣＡＣＴＣＴＡＴＡ
ＴＧＣＴＣＴＧＴＡＣＡＧＧＡＡＡＣＴＣＴＡＧＣＣＡ
ＣＴＣＧＴＣＣＴＰｒｏＧｌｕＧｌｕＧｌｎＬｙｓＧｌ
ｕＡｒｇＬｙｓＴｈｒ↑ｈｒＧＩｕＭｅ：ＣＴＧＡＡＧ
ＡＡＣＡＧ＾＾ＡＧＡＡＡＧＧＡＡＡＡＣＣＡＣＡＧＡ
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１．３００ ＴＧＡＡＴＧＧＴＡ 第 図 ン５ ｔ ら 手続補正書（放） 平成１年５月

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （ｉ）ヒト・インターロイキン２（以下ＩＬ−２と記す
   ）遺伝子を導入したトランスジェニックマウス （ｉｉ）ヒトＩＬ−２遺伝子及びヒトＩＬ−２レセプタ
   ー・Ｌチェイン遺伝子を導入したトランスジエニツクマ
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