JPH02108627A - 貧血治療剤 - Google Patents
貧血治療剤Info
- Publication number
- JPH02108627A JPH02108627A JP63262322A JP26232288A JPH02108627A JP H02108627 A JPH02108627 A JP H02108627A JP 63262322 A JP63262322 A JP 63262322A JP 26232288 A JP26232288 A JP 26232288A JP H02108627 A JPH02108627 A JP H02108627A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- buf
- anemia
- polypeptides
- remedy
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 title abstract description 29
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 17
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 claims 1
- 229940126904 hypoglycaemic agent Drugs 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 abstract description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 abstract description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 abstract 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 12
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 210000003924 normoblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 1
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000015710 Iron-Deficiency Anemia Diseases 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 101000833014 Petromyzon marinus Globin-5 Proteins 0.000 description 1
- 244000089486 Phragmites australis subsp australis Species 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001548 androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、貧血治療剤に関する。
従来の技術
貧血の治療薬としては、貧血の原因によシ薬物が異るが
、一般的に鉄欠乏性貧血には鉄剤、悪性貧血にはビタミ
ンB、2.葉酸、男性不良性、溶血性貧血にはコルチコ
イド等の副腎皮質ステロイドが使われている。この内ス
テロイドホルモンは、造血促進効果が確認されておシ有
効な治療薬ではあるが、もつとも問題になるのは強い副
作用であル、長期投与には問題が有るといわれている。
、一般的に鉄欠乏性貧血には鉄剤、悪性貧血にはビタミ
ンB、2.葉酸、男性不良性、溶血性貧血にはコルチコ
イド等の副腎皮質ステロイドが使われている。この内ス
テロイドホルモンは、造血促進効果が確認されておシ有
効な治療薬ではあるが、もつとも問題になるのは強い副
作用であル、長期投与には問題が有るといわれている。
近年、赤血球生成に深く関与し貧血を改善する生体物質
としてエリスロポエチンが注目されている。エリスロポ
エチンは腎臓で産生され、α−グロブリン画分に存在す
る分子量45,000の糖蛋白であシ造血幹細胞に作用
して赤芽球細胞への分化及び赤芽球生成を促進させる体
液性調節因子と定義され、新しい貧血治療剤として期待
されている。
としてエリスロポエチンが注目されている。エリスロポ
エチンは腎臓で産生され、α−グロブリン画分に存在す
る分子量45,000の糖蛋白であシ造血幹細胞に作用
して赤芽球細胞への分化及び赤芽球生成を促進させる体
液性調節因子と定義され、新しい貧血治療剤として期待
されている。
しかしながら、原料が人尿であり又含量も極めて少ない
ため大量に供給することが困難である。−方、遺伝子組
換法による生産も研究されているが、いまだ開発研究途
上にある。
ため大量に供給することが困難である。−方、遺伝子組
換法による生産も研究されているが、いまだ開発研究途
上にある。
本発明の課題は種々のヒト細胞を用いて、貧血の治療に
役立つ有効因子を見つけだし、その化学的本体を明らか
にすると共に新規な貧血治療剤を提供することに°有る
。
役立つ有効因子を見つけだし、その化学的本体を明らか
にすると共に新規な貧血治療剤を提供することに°有る
。
本発明者等は斜上の課題を解決するため種々のヒト細胞
の生産物について貧血改善作用物質を検索した結果、ポ
リ(プチドEUF −4、もしくはBUF −5がマウ
スの貧血を改善する作用を有するととを見出し、本発明
を完成するに至った。すなわち、本発明の貧血治療剤は
下記の理化学的性質を有するポリペプチドBUF −4
もしくはBUF−5のうち少くとも1種類以上の物質を
有効成分として含有することを特徴とする。
の生産物について貧血改善作用物質を検索した結果、ポ
リ(プチドEUF −4、もしくはBUF −5がマウ
スの貧血を改善する作用を有するととを見出し、本発明
を完成するに至った。すなわち、本発明の貧血治療剤は
下記の理化学的性質を有するポリペプチドBUF −4
もしくはBUF−5のうち少くとも1種類以上の物質を
有効成分として含有することを特徴とする。
(1)/す(プチドBUP−4(以下BUF −4とす
る)の理化学的性質 (&)構 造:単量体A及び単量体B(第2図参照)の
ヘテロダイマー (b) 分子量:単量体A及び単量体Bともに16±
1kd(1,0[メルカプトエタノール非在下、5DS
−電気泳動法) ヘテロダイマーとして25±1 kd (メルカプトエタノール非存在下、 5D8−電気泳動法) (c) 等電点:pl7.3±0.5(等電点電気泳
動法)(d) P)(安定性:pl(2,0〜10.
0の範囲で安定(・) 熱安定性=65℃、60分の加
熱で安定(f) 有機溶媒安定性:低級アルコール、
アセトニトリルに対し安定 ω グロテアーゼ耐性:プロナーゼ処理で完全に失活す
る (h) アミノ酸配列:単量住人のアミノ酸配列は第
1図に、単量体Bの72ノ酸配列は第2図 に示す。
る)の理化学的性質 (&)構 造:単量体A及び単量体B(第2図参照)の
ヘテロダイマー (b) 分子量:単量体A及び単量体Bともに16±
1kd(1,0[メルカプトエタノール非在下、5DS
−電気泳動法) ヘテロダイマーとして25±1 kd (メルカプトエタノール非存在下、 5D8−電気泳動法) (c) 等電点:pl7.3±0.5(等電点電気泳
動法)(d) P)(安定性:pl(2,0〜10.
0の範囲で安定(・) 熱安定性=65℃、60分の加
熱で安定(f) 有機溶媒安定性:低級アルコール、
アセトニトリルに対し安定 ω グロテアーゼ耐性:プロナーゼ処理で完全に失活す
る (h) アミノ酸配列:単量住人のアミノ酸配列は第
1図に、単量体Bの72ノ酸配列は第2図 に示す。
(2) ポリペプチドBUF −5(以下BUF −
5とする)の理化学的性質 (1) 構 造:単量体Bのホモダイマー構造伽)
分子量:単量体として16±1kd(1,0%メルカプ
トエタノール存在下、5DS− 電気泳動法) ホモダイマーとして25±1kd(メ ルカプトエタノール非存在 5DS−電気泳動法) (c) 等電点:pl7.3±0.5(等電点電気泳
動法)(d) pH安定性:pH2,0〜10.0の
範囲で安定(・) 熱安定性:65℃、60分の加熱で
安定(f) 有機溶媒安定性:低級アルコール、アセ
トニトリルに対し安定 0)′fロチアーゼ耐性:ゾロナーゼ処理で完全に失活
する。
5とする)の理化学的性質 (1) 構 造:単量体Bのホモダイマー構造伽)
分子量:単量体として16±1kd(1,0%メルカプ
トエタノール存在下、5DS− 電気泳動法) ホモダイマーとして25±1kd(メ ルカプトエタノール非存在 5DS−電気泳動法) (c) 等電点:pl7.3±0.5(等電点電気泳
動法)(d) pH安定性:pH2,0〜10.0の
範囲で安定(・) 熱安定性:65℃、60分の加熱で
安定(f) 有機溶媒安定性:低級アルコール、アセ
トニトリルに対し安定 0)′fロチアーゼ耐性:ゾロナーゼ処理で完全に失活
する。
(h) アミノ酸配列:単量体Bのアミノ酸配列は第
2図に示す。
2図に示す。
本発明に係るBUF −4及び5は第1図、第2図に示
すアミノ酸配列と全く同一のアミノ酸配列を有しなくと
も貧血治療作用を有すれば、その物質は本発明のBUF
−4及び5に含有される。
すアミノ酸配列と全く同一のアミノ酸配列を有しなくと
も貧血治療作用を有すれば、その物質は本発明のBUF
−4及び5に含有される。
即ち、第1図又は第2図に示すアミノ酸配列中の1個若
しくは複数のアミノ酸を他のアミノ酸に置換した構造を
有する物質並びに当該配列において1個もしくは複数個
のアミノ酸がN末端又はC末端に付加された構造を有す
る物質、更には、描該配列ON末端又はC末端よ91個
もしくは複数のアミノ酸が欠損し、かつ連続しているア
ミノ酸配列よシなる構造を有する物質も本発明のBUF
−4及び5に含まれる。
しくは複数のアミノ酸を他のアミノ酸に置換した構造を
有する物質並びに当該配列において1個もしくは複数個
のアミノ酸がN末端又はC末端に付加された構造を有す
る物質、更には、描該配列ON末端又はC末端よ91個
もしくは複数のアミノ酸が欠損し、かつ連続しているア
ミノ酸配列よシなる構造を有する物質も本発明のBUF
−4及び5に含まれる。
一方はBUF −4が卵胞刺激ホルモン分泌作用を有す
ることは従に報告されている(Val・、W、。
ることは従に報告されている(Val・、W、。
R1v@r 、Ja 、Vaughan、J、 、Mc
Clintoek、R,。
Clintoek、R,。
Corrlgan 、All 、Woo 、w@、JC
arr 、Da and 8p1ems 。
arr 、Da and 8p1ems 。
J、(1986)Nature 321.776−77
7尚、BUF −4はアクチビン(AcHvin )と
も称されるが1本発明においてBUF −4という名称
を用いることにする。
7尚、BUF −4はアクチビン(AcHvin )と
も称されるが1本発明においてBUF −4という名称
を用いることにする。
更にBUF −5は特開昭63−119679号公報に
開示されている物質である。
開示されている物質である。
本発明の貧血治療剤は赤血球産生の低下によシ生ずる貧
血の予防、治療に有効でアシ、マウス及びヒトの培養細
胞へ毒性を示さず、ヒトの貧血の予防、治療に有効であ
る。
血の予防、治療に有効でアシ、マウス及びヒトの培養細
胞へ毒性を示さず、ヒトの貧血の予防、治療に有効であ
る。
本発明の貧血治療剤はBUF −4及びBUF −5の
内掛なくとも1種類以上の物質を有効成分として含有す
るものであるから、上記有効成分を単独で含有するもの
でもよいし、また2種類以上を組み合亡て含有するもの
でもよい。
内掛なくとも1種類以上の物質を有効成分として含有す
るものであるから、上記有効成分を単独で含有するもの
でもよいし、また2種類以上を組み合亡て含有するもの
でもよい。
さて、前記有効成分の投与量であるが、BUF−4又は
BUF −5のいずれか1つの物質のみを単独で用いる
場合はいずれの物質を用いる場合でも通常成人1日あた
シ約0.01■〜1001vであり、これを1回又は数
回に分けて投与すれば良い。
BUF −5のいずれか1つの物質のみを単独で用いる
場合はいずれの物質を用いる場合でも通常成人1日あた
シ約0.01■〜1001vであり、これを1回又は数
回に分けて投与すれば良い。
また2s類以上を組み合せて投与する場合(すなわち、
BUF −4とBUF−5)も、各物質の薬効はほぼ等
しいことよシ、通常成人1日あたシ約o、 o i q
〜100■を1回又は数回に分けて投与すれば良い。
BUF −4とBUF−5)も、各物質の薬効はほぼ等
しいことよシ、通常成人1日あたシ約o、 o i q
〜100■を1回又は数回に分けて投与すれば良い。
もちろん、投与量は患者の貧血の程度、患者の体重及び
当業者が認める他の因子によって変化するので、上記投
与量を厳守する必要はなく、臨機応変に決定すればよい
。
当業者が認める他の因子によって変化するので、上記投
与量を厳守する必要はなく、臨機応変に決定すればよい
。
本発明に使用するBUF −4、及び/又はBUF−5
の製剤化は通常の方法によって行われ、主として注射剤
とされるが、他にカプセル剤、錠剤等の剤型へ製剤化さ
れる。
の製剤化は通常の方法によって行われ、主として注射剤
とされるが、他にカプセル剤、錠剤等の剤型へ製剤化さ
れる。
注射剤を調製する場合には主薬のBUF −4、及び/
又はBUF −5に必要によシ声詞整剤、緩衝剤。
又はBUF −5に必要によシ声詞整剤、緩衝剤。
安定化剤、保存剤などを添加し常法によシ靜脈内、皮下
、筋肉内用注射剤とすればよい、又、経口用製剤を調製
する場合は生薬のBUF −4及び/又はBUF −5
に賦形剤、さらに必要に応じて、結合剤、崩壊剤、着色
剤等を加え常法によシ錠剤、カプセル剤等とする。
、筋肉内用注射剤とすればよい、又、経口用製剤を調製
する場合は生薬のBUF −4及び/又はBUF −5
に賦形剤、さらに必要に応じて、結合剤、崩壊剤、着色
剤等を加え常法によシ錠剤、カプセル剤等とする。
次に貧血治療作用を有するBUF −4及びBUF−5
の製造法について簡単に説明する。
の製造法について簡単に説明する。
BUF −4、及びBUF −5の生産は組換えDNA
法によシ行われるので、以下にその概要を記載する。
法によシ行われるので、以下にその概要を記載する。
BUF −4を生成せしめる方法は、BUF −4をコ
ードする遺伝子、すなわち単量偉人及び単量体Bを含有
するプラスミドによシ形質転換された真核生物を、ま7
’j BUF −5を生成せしめる方法はBUF−5を
コードする遺伝子、すなわち単量体Bを含有するプラス
ミドによシ形質転換された真核生物細胞を培養液中で培
養し培養液中にBUF −4もしくはBUF −5を製
造せしめるという方法をもちいる(特開昭63−119
679 )。
ードする遺伝子、すなわち単量偉人及び単量体Bを含有
するプラスミドによシ形質転換された真核生物を、ま7
’j BUF −5を生成せしめる方法はBUF−5を
コードする遺伝子、すなわち単量体Bを含有するプラス
ミドによシ形質転換された真核生物細胞を培養液中で培
養し培養液中にBUF −4もしくはBUF −5を製
造せしめるという方法をもちいる(特開昭63−119
679 )。
さて、このように生産されたBUF −4もしくはBU
F −5の精製は通常のポリペプチドの精製法に準じて
行われる。例えば培養液を限外濾過法で濃縮し、この@
給液から4リペプチドを塩析し、透析後陰イオン交換体
を使用するイオン交換クロマドグ2フイーを行うことに
よシ粗ポリペグチド標品が得られる。この粗標品につい
て疎水クロマトグラフィー又はクロマトフオーカシング
法によシ殆んどの夾雑蛋白が除去される。又この両者を
組合せると更に精製倍率を向上することができる。
F −5の精製は通常のポリペプチドの精製法に準じて
行われる。例えば培養液を限外濾過法で濃縮し、この@
給液から4リペプチドを塩析し、透析後陰イオン交換体
を使用するイオン交換クロマドグ2フイーを行うことに
よシ粗ポリペグチド標品が得られる。この粗標品につい
て疎水クロマトグラフィー又はクロマトフオーカシング
法によシ殆んどの夾雑蛋白が除去される。又この両者を
組合せると更に精製倍率を向上することができる。
このようKして精製した標品について逆相高速液体クロ
マトl”574−(HPLC)又i;l)スーパーロー
ズ又はMonoQHR5/ 5カラムを装備し九FPL
C()7 、Ay マシア製Fast Protein
P*ptld@Po1ynucleotide Li
quid Chromatography )システム
による高性能グル濾過法又はイオン交換クロマトグラフ
ィーを行うことによシ精製することができる。
マトl”574−(HPLC)又i;l)スーパーロー
ズ又はMonoQHR5/ 5カラムを装備し九FPL
C()7 、Ay マシア製Fast Protein
P*ptld@Po1ynucleotide Li
quid Chromatography )システム
による高性能グル濾過法又はイオン交換クロマトグラフ
ィーを行うことによシ精製することができる。
また、上述のようなポリペプチドの一般的精製法とは別
K、本発明者等が開発した所定の濃度の有機酸を含む有
機溶媒を駆使する精製法(特願昭63−131268
)を用いて精製してもかまわない。
K、本発明者等が開発した所定の濃度の有機酸を含む有
機溶媒を駆使する精製法(特願昭63−131268
)を用いて精製してもかまわない。
BUF −4、もしくはBUF −5、もしくはそれら
の混合物を貧血状態のマウスに投与するとマウスの貧血
が改善される。マウスフレンドウィルス誘発白血病細胞
をマウスに移植するとマウスのヘマトクリ、ト値(赤血
球容積率を表わし、赤血球数よシも正確に貧血の程度を
表わす数値)は次第に低下しマウスは1〜2週間で貧血
状態を呈する。
の混合物を貧血状態のマウスに投与するとマウスの貧血
が改善される。マウスフレンドウィルス誘発白血病細胞
をマウスに移植するとマウスのヘマトクリ、ト値(赤血
球容積率を表わし、赤血球数よシも正確に貧血の程度を
表わす数値)は次第に低下しマウスは1〜2週間で貧血
状態を呈する。
これら対照に比較して移植後BUF −4、もしくはB
UF −5、もしくはそれらの混合物を静脈円建投与す
るとマウスのへマドクリット値は殆んど低下せず21日
目処は明らかな有意差が認められる。
UF −5、もしくはそれらの混合物を静脈円建投与す
るとマウスのへマドクリット値は殆んど低下せず21日
目処は明らかな有意差が認められる。
又移植後1週間目に貧血状態を呈するマウスにBUN’
−4、もしくはBUF −5、もしくはそれらの混合
物を投与するとヘマトクリット値の低下が抑えられ2,
3日後に値の上昇が認められ明らかな貧血治療効果が認
められる。
−4、もしくはBUF −5、もしくはそれらの混合
物を投与するとヘマトクリット値の低下が抑えられ2,
3日後に値の上昇が認められ明らかな貧血治療効果が認
められる。
以下、本発明を実施例に従って具体的に説明する。
実施例1
ddYマウス(雄、5週令、東京実験動物■)を用い、
1群5匹を被験動物として用いた。上記マウスに、同マ
ウスの腹水中で継代培養したマウスフレンド白血病細胞
5−5を2 X 10’個づつマウスの腹腔内に移植し
た。BUF−4(凍結乾燥標品)を滅菌した生理食塩水
に溶解し5000U/mtの注射用薬剤を調製した。B
UF−4投与群には、F5−5細胞を移植した翌日よl
)3日間上記注射薬を0、2 ad (100OU )
宛腹腔内及び静脈内投与した。
1群5匹を被験動物として用いた。上記マウスに、同マ
ウスの腹水中で継代培養したマウスフレンド白血病細胞
5−5を2 X 10’個づつマウスの腹腔内に移植し
た。BUF−4(凍結乾燥標品)を滅菌した生理食塩水
に溶解し5000U/mtの注射用薬剤を調製した。B
UF−4投与群には、F5−5細胞を移植した翌日よl
)3日間上記注射薬を0、2 ad (100OU )
宛腹腔内及び静脈内投与した。
F5−5細胞移植後14日目及び21日0に尾靜脈よシ
ヘマトクリ、ト管に採血し12.00 Or、p、m。
ヘマトクリ、ト管に採血し12.00 Or、p、m。
で5分間遠心分離しヘマトクリット値を常法によシ測定
した。対照群には生理食塩水を投与した。
した。対照群には生理食塩水を投与した。
その結果を第1表に示す。
第1表
対照群 42.5 30.1 27.6静脈
内投与群 43.6 38.0 42.1
腹腔内 1 45.2 43,0 39
.5これと併行して別のマウス1群を用いF5−5細胞
移植後14日目に静脈内に0.24投与し、21日0に
ヘマトクリ、ト値を測定した。その結果、ヘマトクリッ
ト値は42.1であシ明らかなヘマトクリット値の上昇
が確認された。
内投与群 43.6 38.0 42.1
腹腔内 1 45.2 43,0 39
.5これと併行して別のマウス1群を用いF5−5細胞
移植後14日目に静脈内に0.24投与し、21日0に
ヘマトクリ、ト値を測定した。その結果、ヘマトクリッ
ト値は42.1であシ明らかなヘマトクリット値の上昇
が確認された。
一方、正常マウスにBUF −4を50/j、9(2,
5ダ/kg)静脈内投与して2ケ月間飼育して毒性を調
べたが、マウスは正常であシ何ら異常は認められなかっ
た。
5ダ/kg)静脈内投与して2ケ月間飼育して毒性を調
べたが、マウスは正常であシ何ら異常は認められなかっ
た。
実施例2
ddYマウス(雄、5週令、東京実験動物■)を用い、
1群5匹を被験動物として用いた。上記マウスに、同マ
ウスの腹水中で継代培養したマウスフレンド白血病細胞
F5−5を2 X 10’個づつマウスの腹腔内に移植
した。BUF−5(凍結乾燥標品)を滅菌した生理食塩
水に溶解し5000U /dの注射用薬剤を調製した。
1群5匹を被験動物として用いた。上記マウスに、同マ
ウスの腹水中で継代培養したマウスフレンド白血病細胞
F5−5を2 X 10’個づつマウスの腹腔内に移植
した。BUF−5(凍結乾燥標品)を滅菌した生理食塩
水に溶解し5000U /dの注射用薬剤を調製した。
BUF−5投与群には、F5−5細胞を移植した翌日よ
り3日間上記注射薬を0.2d(100OU)宛腹腔内
及び静脈内投与した。F5−5細胞移植後14日目及び
21日0に尾靜脈よシヘマトクリ、ト管に採血し12,
000rgpmmsで5分間遠心分離しヘマトクリット
値を常法によシ測定した。対照群には生理食塩水を投与
した。その結果を第2表に示す。
り3日間上記注射薬を0.2d(100OU)宛腹腔内
及び静脈内投与した。F5−5細胞移植後14日目及び
21日0に尾靜脈よシヘマトクリ、ト管に採血し12,
000rgpmmsで5分間遠心分離しヘマトクリット
値を常法によシ測定した。対照群には生理食塩水を投与
した。その結果を第2表に示す。
第2表
移植前 14日目処 21日0
に照群 45.1 30.1 29.0静脈
内投与群 44.7 4Q、0 .42.2
腹腔内 1 44.1 42.1 39.
5値はすべて平均値 これと併行して別のマウス1群を用いF5−5細胞移植
後14日目に静脈内KO92−投与し、21日0にヘマ
トクリット値を測定した。その結果、ヘマトクリット値
は42.2であり明らかなヘマトクリット値の上昇が確
認された。
内投与群 44.7 4Q、0 .42.2
腹腔内 1 44.1 42.1 39.
5値はすべて平均値 これと併行して別のマウス1群を用いF5−5細胞移植
後14日目に静脈内KO92−投与し、21日0にヘマ
トクリット値を測定した。その結果、ヘマトクリット値
は42.2であり明らかなヘマトクリット値の上昇が確
認された。
一方、正常マウスにBUF −5を50μg(2,5ダ
/に9)静脈内投与して2ケ月間飼育して毒性を調べた
が、マウスは正常であシ何ら異常は認められなかった。
/に9)静脈内投与して2ケ月間飼育して毒性を調べた
が、マウスは正常であシ何ら異常は認められなかった。
発明の効果
本発明の貧血治療剤はフレンド白血病によって生ずる貧
血を予防、及び治療する効果を有する。
血を予防、及び治療する効果を有する。
従って本発明の貧血治療剤は白血病、多発性骨髄腫、リ
ンパ腫等の悪性腫瘍によって起る赤血球。
ンパ腫等の悪性腫瘍によって起る赤血球。
ヘモグロVン低下に起因する貧血症等に使用できる。
Claims (1)
- ポリペプチド、BUF−4及びBUF−5の内、少なく
とも1種類以上物質を有効成分として含有する血糖低下
剤。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63262322A JPH02108627A (ja) | 1988-10-18 | 1988-10-18 | 貧血治療剤 |
US07/784,685 US5200395A (en) | 1988-10-18 | 1991-10-29 | Pharmaceutical composition of BUF-5 for treating anemia |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63262322A JPH02108627A (ja) | 1988-10-18 | 1988-10-18 | 貧血治療剤 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02108627A true JPH02108627A (ja) | 1990-04-20 |
Family
ID=17374161
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63262322A Pending JPH02108627A (ja) | 1988-10-18 | 1988-10-18 | 貧血治療剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH02108627A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992004913A1 (en) * | 1990-09-13 | 1992-04-02 | Children's Hospital Medical Center Of Northern California | Method for increasing red blood cell production by treatment with activin or activin-related peptides |
FR2720069A1 (fr) * | 1994-05-19 | 1995-11-24 | Inst Nat Sante Rech Med | Dérivés de facteurs de croissance et d'hormones de la superfamille des TGFB, procédé pour leur obtention et leurs applications biologiques. |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS62234097A (ja) * | 1985-12-18 | 1987-10-14 | Ajinomoto Co Inc | ヒト分化誘導因子buf−3 |
JPS63119679A (ja) * | 1985-10-03 | 1988-05-24 | ジエネンテク,インコ−ポレイテツド | インヒビンのα鎖またはβ鎖をコ−ドしている核酸、並びにその様な核酸を用いてポリペプチドを合成する方法 |
-
1988
- 1988-10-18 JP JP63262322A patent/JPH02108627A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63119679A (ja) * | 1985-10-03 | 1988-05-24 | ジエネンテク,インコ−ポレイテツド | インヒビンのα鎖またはβ鎖をコ−ドしている核酸、並びにその様な核酸を用いてポリペプチドを合成する方法 |
JPS62234097A (ja) * | 1985-12-18 | 1987-10-14 | Ajinomoto Co Inc | ヒト分化誘導因子buf−3 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992004913A1 (en) * | 1990-09-13 | 1992-04-02 | Children's Hospital Medical Center Of Northern California | Method for increasing red blood cell production by treatment with activin or activin-related peptides |
FR2720069A1 (fr) * | 1994-05-19 | 1995-11-24 | Inst Nat Sante Rech Med | Dérivés de facteurs de croissance et d'hormones de la superfamille des TGFB, procédé pour leur obtention et leurs applications biologiques. |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69935345T3 (de) | Methoden und zusammensetzungen zur prävention und behandlung der anämie | |
DE3689246T2 (de) | Physiologisch aktives Polypeptid BUF-3. | |
US4677195A (en) | Method for the purification of erythropoietin and erythropoietin compositions | |
Eppstein et al. | Epidermal growth factor receptor occupancy inhibits vaccinia virus infection | |
Gleich et al. | Comparative properties of the Charcot-Leyden crystal protein and the major basic protein from human eosinophils. | |
US5200395A (en) | Pharmaceutical composition of BUF-5 for treating anemia | |
JPS6232A (ja) | 慢性関節リウマチ性貧血治療剤 | |
JPH0629194B2 (ja) | 悪性腫瘍性貧血治療剤 | |
EP0348353A2 (en) | The use of physiologically active substances for the manufacture of drugs for cerebral and neuronal diseases | |
JPH0228199A (ja) | ヒト神経成長因子 | |
EP0529300A1 (de) | Neues rekombinantes Human-IFN-beta, Verfahren zu dessen Herstellung und dieses enthaltende pharmazeutische Zubereitungen | |
GB2086392A (en) | Preparation controlling t-system of immunity and method for producing same | |
USH22H (en) | Synergistic effect of chemotherapeutic agents on beta-interferon | |
JP4463885B2 (ja) | 劇症肝炎疾患治療剤 | |
JPH02108627A (ja) | 貧血治療剤 | |
US4851219A (en) | Method for the treatment of chronic myelogenous leukemia | |
JP4006058B2 (ja) | 多臓器不全予防及び/又は治療剤 | |
JP2632014B2 (ja) | 骨髄機能障害性貧血治療剤 | |
JPS6231A (ja) | 腎性貧血治療剤 | |
Burzynski | Toxicology studies on antineoplaston AS2-5 injections in cancer patients | |
JP2517956B2 (ja) | 血糖低下剤 | |
JPH04360840A (ja) | 血小板減少症治療剤 | |
EP0331088A2 (en) | Remedy for hematopoietic tissue diseases comprising human monocytic macrophage colony stimulating factor as active ingredient | |
JPH1129493A (ja) | 放射線障害予防及び/又は治療剤 | |
JPH02108628A (ja) | 制癌剤 |