JPH01302144A - Analysis based on luminescence in the generation of electricity in solution - Google Patents

Analysis based on luminescence in the generation of electricity in solution

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JPH01302144A
JPH01302144A JP6915089A JP6915089A JPH01302144A JP H01302144 A JPH01302144 A JP H01302144A JP 6915089 A JP6915089 A JP 6915089A JP 6915089 A JP6915089 A JP 6915089A JP H01302144 A JPH01302144 A JP H01302144A
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Abstract

PURPOSE: To lower the detection limit significantly by regarding than a chemical part is coupled with an electrode or exists in a solution and the luminescence represents the quantity of the chemical part existing in the vicinity of the electrode. CONSTITUTION: Poresence and/or the quantity of a chemical part containing terbium or europium is determined by applying an electric pulse into and/or on the surface of an electrode immersed into a solution of a solute, i.e., the chemical part containing terbium or europium and measuring a retarded emission after applying the same pulse additionally. Measured emission is regarded as indicating the quantity of the chemical part existing in the vicinity of the electrode. The chemical part is shown by a general formula; (M-Z)n-Lm-Yp. In the formula, M is terbium or europium, n is an integer of 1 or above, m and p are integers of 0 or above, Z is a pectinated ligand, and L is a bond group.

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、水溶液または非水溶液中の発光性化合物が、
直接的には電極からの電子移動によって、あるいは間接
的には電気化学的に誘起される仲介的な反応による電気
パルスによって励起される方法に関する。なお前記化合
物からの発光は励起パルス終了後に検出される。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Application Field] The present invention provides that a luminescent compound in an aqueous or non-aqueous solution is
It relates to methods that are excited by electrical pulses, either directly by electron transfer from electrodes or indirectly by electrochemically induced mediated reactions. Note that the light emission from the compound is detected after the excitation pulse ends.

この新規な方法は検出限界が非常に低い分野に用途があ
る。たとえば、イムノア・ｌセイとハイブリッドアッセ
イのようなア・１セイを結付けるような分析方法である
。This new method has applications in areas where the detection limit is very low. For example, it is an analytical method that combines immunolabeling and immunolabeling, such as a hybrid assay.

［発明が解決しようとする課ＩＩ］ ルミネセンスに基づくいろいろな分析方法はその感度の
点で知られているが、発光種の濃度が非常に低い点が欠
点である。蛍光の感度は、非特定なバックグラウンド発
光を増加させる蛍光不純物は勿論のことレイリーおよび
ラーマン散乱によって限界がある。燐光は主として固体
状態に限られており溶液状態にあって室温燐光を有する
ごくわずかなこれら化合物の発光は普通極端に酸素に敏
感であるため実用化が阻まれている。ある種のランタニ
ドキレートの遅延蛍光はイムノアッセイの基準として用
いられているが、非常に検出が難しい、従来の蛍光や燐
光に基づく方法は光による励起を用い、適当な光源とオ
プチックスが必要である。化学発光（Ｃ［）をに基づく
これらの方法は励起用のオプチックスが必要でなく、そ
の計装は普通大変簡単である。しかし、ＣＬ法はしばし
ば難しい化学的障害をうけるものである。[Problem to be Solved by the Invention II] Various analytical methods based on luminescence are known for their sensitivity, but the drawback is that the concentration of the luminescent species is very low. Fluorescence sensitivity is limited by Rayleigh and Raman scattering as well as fluorescent impurities that increase non-specific background emissions. Phosphorescence is primarily limited to the solid state, and the very few compounds that exhibit room temperature phosphorescence in the solution state emit light, which is usually extremely sensitive to oxygen, thus hindering their practical application. Delayed fluorescence of certain lanthanide chelates has been used as a standard in immunoassays, but is very difficult to detect; traditional fluorescence- and phosphorescence-based methods use optical excitation and require appropriate light sources and optics. These methods based on chemiluminescence (C[) do not require excitation optics and their instrumentation is usually very simple. However, the CL method is often subject to difficult chemical obstacles.

本発明が示す方法は他の発光法の持つ欠点に打勝つもの
である。励起オプチクスを必要とせず、しかも、電流に
よるパルス励起に必要な電子計装は非常に簡単に製作で
きる。The method presented by the present invention overcomes the drawbacks of other light emitting methods. No excitation optics are required, and the electronic instrumentation required for pulsed current excitation is very simple to fabricate.

本発明の核心は、寿命のながいルミネセンスを有する適
当な発光化合物を用い、そして励起パルスからしばらく
遅延して発する光を測定することによって非特定性のバ
・７フグラウンド発光を全面的に消去する事である。The core of the invention is to completely eliminate non-specific buff-ground emissions by using suitable luminescent compounds with long-lived luminescence and by measuring the emitted light after a short delay from the excitation pulse. It is something to do.

［従来の技術］ 電気による化学発光（ＥＣＬＩは、古くから知られてい
る。この方法のイムノアッセイに対する応用はバードな
どによって既に揚案されている（　Ｄ、　Ｅｇｅ、　Ｗ
、　Ｂｅｃｋｅｒ　ａｎｄ　Ａ、　Ｂａｒｄ。[Prior art] Electrical chemiluminescence (ECLI) has been known for a long time. The application of this method to immunoassays has already been proposed by Bird et al. (D, Ege, W.
, Becker and A., Bard.

＾ｎａ１．　Ｃｈｅｗ、　５６　（１９８４１２４１３
，ＰＣＴ　Ｉｎｔ、＾ｐｐ１、　Ｗｏ　８Ｂ１０２７３
４１．彼等はアッセイを結合するさいにｔｌｌｌとして
ルテニウムまたはオスミウムを含有する化合物を使用す
ることを提案している。白金とガラス状炭素を実施例で
の電極の材料に使用し、この電極からの発光をポテンシ
ャルパルスの段階において測定する。^na1. Chew, 56 (198412413
, PCT Int, ^pp1, Wo 8B10273
41. They suggest using compounds containing ruthenium or osmium as tllll in coupling the assay. Platinum and glassy carbon are used as electrode materials in the example, and the light emission from this electrode is measured during the potential pulse stage.

われわれがすでに発表したように電気で発生するルミネ
センスは、酸化物で覆すれたアルミニウムまたはタンタ
ル電極から適当な酸化剤の存在下で多数の無機イオンに
よって発生する。［ケー、ハバブカなど（に、　Ｈａａ
ｐａｋｋｅｔ　ａｌ、）による＾ｎａ１．　Ｃｈｉｌ、
　Ａｃｔａ、　１７１　（４９８Ｓ）　２５９］　、こ
れらの研究においても、電極からの発光は電極にポテン
シャルパルスを与えているときに測定している。As we have previously announced, electrically generated luminescence is generated by a large number of inorganic ions from oxide-covered aluminum or tantalum electrodes in the presence of a suitable oxidizing agent. [Ke, Hababuka, etc. (ni, Haa
pakket al, ) by ^na1. Chill,
Acta, 171 (498S) 259], and in these studies as well, the light emission from the electrode is measured while applying a potential pulse to the electrode.

経済的で優先的に廃棄可能な電極を用い、比較的妨害の
少ない寿命のながいルミネセンスを有する化合物を使用
する方法が非常に有利であると思われる。このような方
法によれば、たとえば可成り単純で経済的な計装置でホ
モジニアスなイムノアッセイとヘテロジニアスなイムノ
アッセイとを結合するという用途があるであろう、イム
ノアッセイの場合または、もつと−数的な組合わされた
ア・ｌセイの場合、二つの成分ｂ（たがいに特定的に反
応し、生成物を適切な高感度の方法で定量する。測定す
るまえに生成物を分離することが必要ならば、その方法
はへテロジニアスと呼ばれ、分離ステップが不必要なら
ばホモジニアスな方法と呼ばれる。ＰＪ単だという理由
でホモジニアスなアッセイが好ましい、そしてヘテロジ
ニアスなアッセイは検出限界が低い、典型的には、これ
らの方法の場合、ある化合物の存在は、それに対して高
感度物質たとえば放射性同位元素、酵素、蛍光性化合物
など、定量できる化学的成分で標識することによって示
される。励起状態の発光減衰が緩慢である蛍光性化合物
で標識するのが特に有利である。イムノアッセイする大
半のサンプルは天然の蛍光性の種を含有しており、その
ためバックグラウンド発光が増加して従来の蛍光測定の
検出限界を阻害するのである。A process that uses economical, preferentially disposable electrodes and compounds that have relatively undisturbed and long-lived luminescence would be highly advantageous. Such methods may have applications, for example, in the case of immunoassays, in which homogeneous and heterogeneous immunoassays may be combined in a fairly simple and economical instrumentation, or even in the case of numerical In the case of combined assays, the two components b (which react specifically with each other and the products are quantified by a suitable sensitive method; if it is necessary to separate the products before measurement) , the method is called heterogeneous, or homogeneous if no separation step is required. Homogeneous assays are preferred because they are PJ simple, and heterogeneous assays typically have lower detection limits. In these methods, the presence of a compound is indicated by labeling it with a chemical moiety that can be quantified, such as a sensitive substance such as a radioisotope, an enzyme, a fluorescent compound, etc. Excited state emission decay It is particularly advantageous to label with fluorescent compounds that have a slow fluorochrome profile.Most samples to be immunoassayed contain naturally fluorescent species, which increases the background luminescence and limits the detection of traditional fluorescence measurements. It inhibits

ユーロビウムおよびテルビウムのキレートはその蛍光発
光の寿命がミリセカンドの範囲にあり、生物起源の有機
化合物の「自然」蛍光にくらべて数オーダー長い。Chelates of eurobium and terbium have fluorescence lifetimes in the millisecond range, several orders of magnitude longer than the "natural" fluorescence of organic compounds of biological origin.

ルミネセンスに基づくホモジニアスアッセイは、表面に
吸着した抗体−抗原コンプレックスが溶液中の標識した
化合物を励起することなく、そして選択的に励起がるこ
とができるならば可能である。このことはすてに（米国
特許第３，９３９，３５０号１９１６年にて）石英スラ
イドに結合した抗体に結合した標識した抗原を用いるこ
とによって達成されている。試料はスライド表面から全
面的に光を反射しながら別の側から励起される。［定の
際には、固相結合部分だけが励起されるので分離段階は
不要となる。この方法では試料のスライドに厳密な光学
的要件が必要なので通常のアッセイには使用上限界があ
る。さらに散乱およびバックグラウンド蛍光が難しい問
題を残している０表面またはそのすぐ隣の発光性物質を
優先的に励起することは電気によるルミネセンスにより
技術的にさらに容易に達成できる。Homogeneous assays based on luminescence are possible if the antibody-antigen complex adsorbed to the surface does not excite labeled compounds in solution and can be selectively excited. This has previously been accomplished (in US Pat. No. 3,939,350, 1916) by using labeled antigen coupled to antibodies bound to quartz slides. The sample is excited from the other side with light reflecting entirely from the slide surface. [In this case, only the solid-phase bound portion is excited, so no separation step is required. This method requires stringent optical requirements for sample slides, which limits its use in conventional assays. Furthermore, preferential excitation of emissive substances at or immediately adjacent to the surface, where scattering and background fluorescence remain difficult problems, is technically easier to achieve with electroluminescence.

［課題を解決するための手段］ 本発明はテルビウムまたはユーロビウムを含有した化学
的部分を溶質とする溶液に浸漬した電極中にそして／又
は電極の表面に電気パルスを加えることにより、さらに
同パルスをくわえてから暫くした後の遅延発光を１定す
ることにより、テルビウムまたはユーロビウムを含有し
た化学的部分の存在および／又は量を測定する方法に関
するものである。[Means for Solving the Problems] The present invention further provides an electric pulse that is applied to an electrode immersed in a solution containing a chemical moiety containing terbium or eurobium as a solute and/or to the surface of the electrode. The present invention relates to a method for measuring the presence and/or amount of a chemical moiety containing terbium or eurobium by measuring delayed luminescence after a while after being held in the mouth.

測定した発光は電極の近傍に存在する化学的部分の量を
示すものと考えられる。この測定現象をここでは遅延電
気ルミネセンス、略してＤＥＬと名づける。The measured luminescence is believed to indicate the amount of chemical moieties present in the vicinity of the electrode. This measurement phenomenon is herein named delayed electroluminescence, or DEL for short.

前記化学的部分の一般式は （Ｍ−Ｚ）　ｎ−Ｌｍ−Ｙｐ である、ただしＭはテルビウムまたはユーロビウムであ
り、ｎは１以上の整数であり、ｍとｐは０以上の整数で
あり、Ｚは多歯状の配位子てあり、しは結合基である。The general formula of the chemical moiety is (M-Z)n-Lm-Yp, where M is terbium or eurobium, n is an integer greater than or equal to 1, and m and p are integers greater than or equal to 0; Z is a multi-toothed ligand, and ``S'' is a bonding group.

Ｙについては後述する。Ｚ、ＬおよびＹは、遅延電気ル
ミネセンスが必要とする条件に合せた場合、化学的部分
を発光させることのできる組成物である。Y will be described later. Z, L and Y are compositions that can cause the chemical moieties to emit light when matched to the conditions required for delayed electroluminescence.

最も簡単な例では、ｍとｐは共に０で、ｎは１である。In the simplest example, m and p are both 0 and n is 1.

この場合、Ｍ−Ｚはテルビウムまたはユーロビウムのキ
レートである。Ｚの好ましい一つの構造は次の通りであ
る。In this case, M-Z is a chelate of terbium or eurobium. One preferred structure of Z is as follows.

本方法はたとえば実施例１に述べるようにテルビウムの
高感度定量に利用できる。This method can be used, for example, for the highly sensitive determination of terbium, as described in Example 1.

もつと複雑な場合には、ｎ１ｍ≧１でありｐ≧１である
。物質ＹはＤＥＬ標識で標識できると言われる。適切な
物質Ｙのなかには沢山の生物的物質、たとえば全細胞、
亜細胞粒子、ウィルス、核酸、ヌクレオチド、オリゴヌ
クレオチド、ポリヌクレオチド、多し蛋白、ポリペプチ
ド、酵素、細胞代謝産物、ホルモン、薬理学的物質、ア
ルカロイド、ステロイド、ビタミン、アミノ酸、炭水化
物、血清誘導抗体またはモノクロナール抗体がある。In more complex cases, n1m≧1 and p≧1. It is said that substance Y can be labeled with a DEL label. Among the suitable substances Y are many biological substances, such as whole cells,
Subcellular particles, viruses, nucleic acids, nucleotides, oligonucleotides, polynucleotides, multi-proteins, polypeptides, enzymes, cellular metabolites, hormones, pharmacological substances, alkaloids, steroids, vitamins, amino acids, carbohydrates, serum-derived antibodies or There are monoclonal antibodies.

合成物質、たとえば薬剤、合成核酸、合成ポリペプチド
もまた本発明の範囲に含まれる。Also included within the scope of the invention are synthetic substances, such as drugs, synthetic nucleic acids, and synthetic polypeptides.

物質Ｙは結合基りによってキレートＭ−Ｚに結合する。Substance Y is bound to chelate M-Z by a linking group.

結合基は２価のラヂカルでよく普通、当業者には周知の
ようにプローブ分子によって分析する分子に標識するの
に使用されるものである。これら２価の結合基のなかに
は、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＭｅ−ｔｆ）ようなウレイ
ド、チオウレイド、アミド、−Ｓ−。The linking group may be a divalent radical and is commonly used to label the molecule to be analyzed by the probe molecule, as is well known to those skilled in the art. Among these divalent linking groups are ureido, thioureido, amide, -S-, such as -CONH-, -CONMe-tf).

−５−Ｓ−のようなチオエーテル、−３Ｏ２ＮＨ−、−
３Ｏ２ＮＭｅ−のようなスルホアミドが含まれている。thioethers such as -5-S-, -3O2NH-, -
Contains sulfamides such as 3O2NMe-.

結合基りもまた長さと組成が変化するスペーサーと呼ば
れる分子鎖を含んでいる。このスペーサーはキレート部
と物質Ｙとをたがいに適当な距離に離しておくのに使用
され、しかもそれは前述の２僅の結合基を開基として有
している。これら側基の一部分は多歯状の配位子Ｚに結
合し、他部分は物質Ｙに結合する。多歯状の配位子Ｚは
−ＣＨ２Ｎ　（ＣＨ２Ｃ００Ｈ）２のようなキレート化
用側基を有する芳香態化合物であってもよい、好ましい
一つのキレートの構造は次の通りである： 本発明は問題とする標識した部分ｔ！−測定するのに使
用でき、問題とする分析物を測定するために標識した部
分を利用するのに使用でき、あるいは競合結合アッセイ
および非競合結合アッセイのいずれの場合においても問
題とする分析物を測定するために間圧の分析物のｔｓ識
した票似物を利用するのに使用できる、またこれら結合
アッセイはへテロジニアスかあるいはホモジニアスであ
る。また票似の結合アッセイは核酸ハイブリッド形成技
術に利用でき、この場合たとえば採取およびＰＣＲ（重
合酵素連鎖反応：　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ
　ｒｅａｃ−ｔｉｏｎ＋技術に基づく親和性を用いたハ
イブリッド形成アッセイとともにドツト・プロット（ｄ
ｏｔ−ｂｌｏｔ）およびサンドイッチハイブリッド形成
アッセイのような用途がある。The linking group also contains molecular chains called spacers that vary in length and composition. This spacer is used to keep the chelating moiety and the substance Y at an appropriate distance from each other, and it also has as an open group the only two linking groups mentioned above. A portion of these side groups is bonded to the multi-toothed ligand Z, and the other portion is bonded to the substance Y. The polydentate ligand Z may be an aromatic compound with a chelating side group such as -CH2N (CH2C00H)2; one preferred chelate structure is as follows: The labeled part in question t! - can be used to measure the analyte of interest, or to utilize a labeled moiety to measure the analyte of interest, or in both competitive and non-competitive binding assays; These binding assays can be used to utilize ts-identified analogues of analytes to measure the pressure, and these binding assays can be either heterogeneous or homogeneous. Similar binding assays can also be used in nucleic acid hybridization techniques, such as collection and PCR (polymerase chain reaction).
Dot plot (d
Applications include ot-blot) and sandwich hybridization assays.

たとえば、競合イムノアッセイにおいて抗体を電極の表
面に被覆すると抗原とＤＥＬ標諧を有する抗原とが抗体
の活性部位に対して競争する。さて抗原は物質Ｙに対応
しそして前述したタイプのうちの一つに属することがで
きる。電極表面上の抗体・抗原コンプレックスの量は０
［［によって、免疫反応後に直接定量するか、あるいは
洗浄を行いそして例えば過酸化二値酸塩を含有した適当
な電解質溶液を添加してから定量する。さもなければ、
ホモジニアス非競合イムノアッセイを、を極表面の「捕
獲用（Ｃａｔｃｈｉｎｇ）　Ｊ抗体を固定化することに
よって行うことができる。こうした抗体で捕獲した試料
抗原は、抗原の別の場所に結合したＤＥＬ標りした抗体
を用いて定量する。この場合の抗原は、Ｙの定義に関連
して前記に掲げた物質である。For example, when an antibody is coated on the surface of an electrode in a competitive immunoassay, the antigen and the antigen with the DEL label compete for the active site of the antibody. The antigen now corresponds to substance Y and can belong to one of the types mentioned above. The amount of antibody/antigen complex on the electrode surface is 0
[[The assay can be carried out either directly after the immunoreaction or after washing and addition of a suitable electrolyte solution containing, for example, peroxide di-acid. Otherwise,
Homogeneous non-competitive immunoassays can be performed by immobilizing "Caching J antibodies" on the surface of the membrane. It is quantified using an antibody.The antigen in this case is the substance listed above in connection with the definition of Y.

ム」じ 装置について特許請求はしていないが、本測定方法につ
いて明確なイメージを与えるためその詳細な説明を行う
。Although we do not claim a patent for the measurement device, we will provide a detailed explanation of this measurement method in order to give a clear image of it.

本測定装置はパルス発生器、定電位装置、二または三ヶ
の電極を有する試料セル、オプションの光のフィルター
またはモノクロメータ−１光検出器およびゲーテイドイ
ンチブレター又は光子カウンターから構成されている。The measuring device consists of a pulse generator, a potentiometer, a sample cell with two or three electrodes, an optional light filter or monochromator - one photodetector and a gated incubator or photon counter. .

パルス発生器は、Ｓ幅が調節でき自由にプログラムでき
るパルス鏝を発生するものなら何でもよい。The pulse generator may be any device that generates a freely programmable pulse trowel with adjustable S width.

定電位装置は普通の三電極定電位装置がよいが、もし二
電極のものしか使えない場合には数十ミリアンペアの電
流を流すことのできるブースタ増幅器を用いる。An ordinary three-electrode potentiostatic device is preferable, but if only a two-electrode device is available, a booster amplifier capable of passing a current of several tens of milliamperes is used.

試料セルと光検出器は同一の光遮断箱に収納されている
。セルには電解溶液に浸漬した二または三ヶの電極があ
る。三電極の場合は一つの電極は参照電極・で、一つの
電極は補助電極で、いま一つの！極は作動電極である、
これらのｔ８ｉは普通の方法で定電位装置に接続しであ
る０発光は導電性材料で出来ている作動電極で測定する
。好ましい材料としては酸化物で覆われた金属たとえば
アルミニウム、タンタル、ジルコニウムまたはハフニウ
ムである。参照電極は普通の電極たとえばカロメル電極
またはＡＩＪ−＾ｇＣ１電極でよい、補助電極は導電性
材料なら何んでもよいが普通は白金を使用する。らし二
電極だけを使用する場合には；掻は同一材料たとえばア
ルミニウムで作ってもよく、この場合には光は両′ｒ４
［Ｉから発することができる。あるいは一方の電極を別
の材料でつくる。さもなければ、試料用コツプ自体をア
ルミニウムでつくってよく、その場合にはそれは作動１
ｇ極としてａ！能し光はそこから発光する。The sample cell and photodetector are housed in the same light-blocking box. The cell has two or three electrodes immersed in an electrolyte solution. In the case of three electrodes, one electrode is the reference electrode, one electrode is the auxiliary electrode, and the other electrode is the reference electrode. The pole is the working electrode,
These t8i's are connected in the usual way to a potentiometer and the zero emission is measured with a working electrode made of conductive material. Preferred materials are oxide-coated metals such as aluminum, tantalum, zirconium or hafnium. The reference electrode may be a conventional electrode, such as a calomel electrode or an AIJ-^gC1 electrode, and the auxiliary electrode may be any conductive material, but platinum is commonly used. If only two electrodes are used; the electrodes may be made of the same material, e.g. aluminum, in which case the light will pass through both 'r4
[Can emanate from I. Alternatively, one electrode can be made of a different material. Otherwise, the sample tip itself may be made of aluminum, in which case it is
a as g pole! The light emanates from it.

作動電極からの光の強さを、光電子増倍管または中間に
第１チオンのフィルターまたはモノクロメータ−を持っ
たフォトダイオードを用いて測定し、光検出器からの電
気信号をゲーテイド　インチブレターまたはゲーテイド
光子カウンターへ伝える。ゲーティングは適当な遅れを
もってパルス・ゼネレーターからのパルスに同期化する
。The intensity of the light from the working electrode is measured using a photomultiplier tube or a photodiode with a primary thione filter or monochromator in the middle, and the electrical signal from the photodetector is measured using a gated incubator or a photodiode with a monochromator in between. Inform the gated photon counter. Gating is synchronized to the pulses from the pulse generator with a suitable delay.

旦ニー必二迭 ＤＥＬを測定する試料°は溶液に溶解した化合物かある
いは作動電極の表面に吸着した化合物である。その化合
物のエレクトロルミネセンスの減衰は緩慢でなければな
らない、ｆｔＩｔ先的化金的化合物ランタニドコンプレ
ックスであり、好ましくはたとえばＴｂ”°またはＥｕ
”のキレートであってその減衰はミリセカンドの時間ス
ケールである。この化合物はそれ自体でも測定できるが
、標識としてアッセイすべき材料に結合することもでき
る。測定すべき化合物の外に、試料セル中の電解溶液に
は成る電解質が含まれているが、好ましくは導電度を増
加する硫酸塩かあるいは酢酸塩を用いる。過敢化二硫酸
塩、過酸化水素または溶存酸素のような酸化剤が溶液中
に存在してもよい、酸化剤の機能は直接または媒介され
た電解還元反応、たとえば。The sample for which DEL is to be measured is either a compound dissolved in a solution or a compound adsorbed on the surface of the working electrode. The decay of the electroluminescence of the compound must be slow, preferably in a lanthanide complex, such as Tb"° or Eu
” whose decay is on the millisecond time scale. The compound can be measured on its own, but it can also be bound to the material to be assayed as a label. In addition to the compound to be measured, the sample cell The electrolytic solution contains an electrolyte, preferably a sulfate or acetate salt to increase conductivity.An oxidizing agent such as hydrogen peroxide, hydrogen peroxide or dissolved oxygen is used to increase the conductivity. The oxidizing agent, which may be present in solution, functions in a direct or mediated electrolytic reduction reaction, e.g.

によって反応性に富んだイオン基を生成することである
。This is to generate highly reactive ionic groups.

これらのイオン基は発光化合物と反応して発光する。そ
の結果、作動電極にないし陰極パルスが与えられた後、
エレクトロルミネセンスが観察される。陽極パルスはあ
る種のランタニド化合物に対して使用できる可能性があ
る。These ionic groups react with luminescent compounds to emit light. As a result, after a cathodic pulse is applied to the working electrode,
Electroluminescence is observed. Anodic pulses may be used for certain lanthanide compounds.

発光化合物によって適当な持続性と衝撃係数を有する一
連の陰極パルスを作動；掻に与える。その結果生じた発
光は適当なゲートの幅と遅れを用いて陰極パルス終了後
に測定する。好ましいテルビウム・コンブレフラスの場
合、陰極パルスの長さは０．２ｍｓないし５１の範囲を
変動し、パルス後の遅延はＯ，＋ｍｓないし０．５ｓ＋
ｓであり、そしてゲート幅は２ｍｓないしＴｏｍｓであ
る。ユーロビウム・コンプレックスの場合は、約４借用
い、オープン・ゲート時間中に本積した信号は、所要な
信号対ノイズ比を達成するに必要な期間を対象に平均す
る。A series of cathodic pulses of suitable duration and impact coefficient are actuated by the luminescent compound; The resulting light emission is measured after the end of the cathode pulse using appropriate gate width and delay. For the preferred Terbium Combrefras, the length of the cathode pulse varies from 0.2 ms to 51 ms, and the post-pulse delay is from 0,+ ms to 0.5 s+
s, and the gate width is 2ms to Toms. For the Eurobium complex, the signals accumulated during the open gate time are averaged over the period necessary to achieve the required signal-to-noise ratio.

［実施例］ 本例における試料溶液は、［酸ナトリウの０．３８溶液
、過酸化二硫酸カリウムの０．００１１１溶液および３
．６−ビス−［Ｎ、トビス（カルボキシメチル）アミノ
メチル］−４−ベンゾイルフェノールの１０−’Ｈ温溶
液あり、そしてそのｐＨをＳ　Ｘ　”’（７）　）すｘ
　（Ｔｒｉｓ）とＮａ０）１によッテ１１．２に調整す
る。ＯＥ［の測定は厚さ０３ＩＩ１１で純度９９．９に
のアルミニウム製の使い捨てコツプ中で行った。塩化テ
ルビウムの添加量を増加させながら加え、そして遅延エ
レクトロルミネセンスを、連続時間＋ｌｓ、振幅８．５
Ｖ、衝撃係数４％の陰極パルスを使って測定しな、アル
ミニウムコツプから発した光を光電子増信管と２チヤン
ネル光子カウンター［スタンダードリサーチ（５ｔａｎ
ｄａｒｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈｌ製モデル５Ｒ４００］で
測定した。一つのチャンネルのゲートは陰極パルス終了
後０２■Ｓないしｌ０ｍ５開いており、そして池のチャ
ンネルは＋０．２■Ｓないし２０Ｉｓのあいだｒ暗流１
光子をカウントした。１００ｓカウントしたｆ＆に２台
のカウンターレジスターの値を相互に差引いた０表１と
第１図はその結果である。[Example] The sample solutions in this example were [0.38 solution of sodium acid, 0.00111 solution of potassium peroxide disulfate, and 3
．． There is a 10-'H warm solution of 6-bis-[N,tobis(carboxymethyl)aminomethyl]-4-benzoylphenol, and its pH is
(Tris) and Na0)1 to adjust to 11.2. The measurements of OE were carried out in aluminum disposable cups with a thickness of 03II11 and a purity of 99.9. Increasing doses of terbium chloride were added and delayed electroluminescence was applied for continuous time +ls, amplitude 8.5
The light emitted from the aluminum tip was measured using a cathode pulse with a shock coefficient of 4% and a photomultiplier tube and a two-channel photon counter [Standard Research (5tan)].
dard Re5earchl model 5R400]. The gate of one channel is open from 02 S to 10 m5 after the end of the cathode pulse, and the pond channel is open for +0.2 S to 20 Is.
Photons were counted. Table 1 and FIG. 1 are the results obtained by subtracting the values of the two counter registers from f& counted for 100 seconds.

表　　　１ テレビラム　−ｏ１／ｌ　　　　　　　光子／１００ｓ
亙」Ｌ旦−一１ 指環イ用　合物の　造 （以下余白） ス（メト　シ　ルボニルメチル）アミノメチメタノール
（２０１１中に３１駕のホルムアルデヒド水溶液＋０．
８１９，１０−ｍａｌｌ　を溶かした溶液に、ジメチル
イミノジアセテート（１，６＋　ｇ、　ＴＯｍｍａｌｌ
を加えた。得られた溶液を真空中で？ａＩＩＬな、別に
用意したメタノール（２５ｍｌ）を残渣に加え、得られ
た溶液を真空中で濃縮した。残部に対し４−ヒドロキシ
−３°−ニトロベンゾフェノン（１２２０，５−一０１
）を加え、得られた混合物を撹拌しながら１１０℃で２
０時間加熱した。生成物は溶離液にクロロホルムを使用
しシリカゲルでクロマトグラフィーにより精製した。帯
黄色のオイルの収を 量は１．７６１Ｊ（６０駕）であった、ＨＮＨＲ（ＣＤ
ＣＩ３１δ　３．４８　（＋Ｈ，ｓ）、　３．５８　＋
８８．　ｓ）、　３．７１　（１２Ｈ，ｓｌ、　４．０
８　（４Ｈ，ｓｌ、　７．７３　（２Ｈ，、ｓｌ、　７
．５６−　８．５８　　ｆ４Ｈ，ｍｌ　　。Table 1 TVram -o1/l photon/100s
亙"Ldan-11 Preparation of compound for ring I (below blank space) Su(methosylbonylmethyl)aminomethimethanol (in 2011, 31 formaldehyde aqueous solution +0.
Dimethyliminodiacetate (1,6+ g, TOmmall
added. The resulting solution in vacuum? Separately prepared methanol (25 ml) was added to the residue and the resulting solution was concentrated in vacuo. For the remainder, 4-hydroxy-3°-nitrobenzophenone (1220,5-101
) and the resulting mixture was heated at 110°C for 2 hours with stirring.
Heated for 0 hours. The product was purified by chromatography on silica gel using chloroform as eluent. The yield of yellowish oil was 1.761J (60 pieces), HNHR (CD
CI31δ 3.48 (+H,s), 3.58 +
88. s), 3.71 (12H, sl, 4.0
8 (4H, sl, 7.73 (2H,, sl, 7
．． 56-8.58 f4H, ml.

４−（３−アミノベンゾイルｌ−２，６−ビス　ＮＮ−
ビス（メトキシカルボニルメチル）アミノメチル　フェ
ノール　（２）のΔ 化合物１　（０，８９ｏ、　１．５　ａｍａｌｌを圧力
５０ｐｓｉ　（３，５２にｇ／ｃｍ　）　ノ水素雰囲気
下テｌＯＸノＰｄ／Ｃ（９０ｍｏｌを加えたメタノール
（５０ｌ１ｌｌ中で１時ｒｒｌＩ撹拌した。得られた混
合物を一過し真空中で蒸発した。生成物を、溶Ｈａとし
て軽油（ｂ、９．５０−７０℃）／酢酸エチル（２：５
１と使用しシリカゲルでクロマトグラフィーにより精製
した。帯黄色のオイルの収量は０．４００（４８％）Ｔ
ア−）な、　　　ＨＮＨＲＴＣＤＣＩ３　）　　：　Ｋ
　３５６、　（ＩＨ，ｓ）、　３．５９　（８Ｈ１ｓ）
、３．７１　ｆ＋２Ｈ，ｓ）、４．０１　＋６８．　ブ
ロードｓ）、　７．０５−７．１４　（４Ｈ，ｌ１１、
７．７０　（２Ｈ，Ｓ）　。4-(3-aminobenzoyll-2,6-bisNN-
Δ of bis(methoxycarbonylmethyl)aminomethyl phenol (2) Compound 1 (0,89o, 1.5amall) under hydrogen atmosphere at a pressure of 50psi (3,52g/cm) The resulting mixture was passed and evaporated in vacuo. The product was dissolved in gas oil (b, 9.50-70°C)/ethyl acetate (2 :5
1 and purified by chromatography on silica gel. Yield of yellowish oil is 0.400 (48%) T
A-)na, HNHRTCDCI3): K
356, (IH,s), 3.59 (8H1s)
, 3.71 f+2H,s), 4.01 +68. broads), 7.05-7.14 (4H, l11,
7.70 (2H,S).

化合物（２）（０，４０ａ、　　０．７＋　ａｍａｌｌ
を０．５８７７）にＯＨ−エタノール（２０ｍＬ）と水
ｆ５　ｍａｌの溶液中で３時ｒ：Ｉ撹拌した。得られた
混合物を１ＨのＨＣ１で中和し真空中で蒸発した。水（
ＩＳ　ａｌｌと塩化テルビウム（０，２７ｇ、　０．７
２　■ｏｌ）を加え、ｐＨを８０に調節してから混合物
を濾過した、Ｐ液に数ミリリットルのアセトンを添加し
、テルビウムコンプレックスをＰ別した。水（３ｓＬ］
中にある本コンプレックスの小部分（６８ｍｇ）を、Ｃ
ＨＣｌ３中にあるチオホスゲン（３１μＬ、　　０．４
　　ｍｍｏｌｌとＮ　ａ　ＨＣＯ３＋４２　１！＋、　
　０．５園−０１）の混合物に対して滴下した。１時間
撹拌後、水層を分離しＣＨＣｌ３で洗浄しな、数ミリリ
ットルのアセトンを加えた後、析出物をＰ別し、溶離液
としてＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０（４：１）を用い、シリカゲ
ルでクロマトグラフィーによって精製した。収量は１５
■ａ　［３８％：　（２）を基準として］であった。Compound (2) (0,40a, 0.7+ a mall
(0.5877) was stirred r:I for 3 hours in a solution of OH-ethanol (20 mL) and water f5 mal. The resulting mixture was neutralized with 1H HCl and evaporated in vacuo. water(
IS all and terbium chloride (0.27 g, 0.7
After adjusting the pH to 80 and filtering the mixture, a few milliliters of acetone was added to the P solution to separate the terbium complex from the P solution. Water (3sL)
A small portion (68 mg) of this complex inside was added to C.
Thiophosgene in HCl3 (31 μL, 0.4
mmol and Na HCO3+42 1! +,
It was added dropwise to the mixture of 0.5 Sono-01). After stirring for 1 hour, the aqueous layer was separated and washed with CHCl3. After adding a few milliliters of acetone, the precipitate was separated with P and chromatographed on silica gel using CH3CN/H20 (4:1) as the eluent. It was purified by The yield is 15
■a [38%: based on (2)].

ヒツジ−抗−ヒトＰＬＡ２抗血清の標識化：　４−（３
−インチオシアネートベンゾイル）−２，６−ビス［８
，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）−アミノメチル】フェ
ノールのテルビウムコンプレックス【実施例■の（３）
Ｊを６０倍モル過剰にして抗体とｐＨ９，５で一晩反応
させた。１５［識した抗体を、セファデックＸ　（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘｌＧ−５０（ｌｘ　５．５　Ｃｍ）　ト４
ニア　ｙ　ｏ−ズ（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅｌ　６８（ＩＸ
　５．２　ｃａｌを充填したカラムにて溶離液として９
　Ｑ／ＬのＮａＣ＋と０．０５ＸのＮａＮ３を含有する
ｐＨ９，３の０．ＩＭの炭酸ナトリウム［１液を使用し
て過剰な遊離テルビウムコンプレックスから分離した。Labeling of sheep-anti-human PLA2 antiserum: 4-(3
-thiocyanate benzoyl)-2,6-bis[8
, N-bis(carboxymethyl)-aminomethyl] terbium complex of phenol [Example ■(3)
A 60-fold molar excess of J was reacted with the antibody overnight at pH 9.5. 15 [Recognize the antibody with Sephadec X (Se
phadexlG-50 (lx 5.5 Cm) 4
Near y o-'s (Sepharosel 68 (IX)
9 as an eluent in a column packed with 5.2 cal.
0.0.0 at pH 9.3 containing Q/L NaC+ and 0.05X NaN3. IM sodium carbonate [1 part] was used to separate from excess free terbium complex.

アルミニウムコツプの被覆ニ アルミニウムコツプ（厚さ０．３Ｈ純度９９９ｚのアル
ミニウム箔製）を、９　Ｑ／ＬのＮａＣ１とｏ、ｏｓｘ
のＮ　ａ　Ｎ３　（ＴＳＡ−Ｍｆｆｆ液）を含有したｐ
Ｈ７，５の０，５ＨのＴｒｉｓ−ＨＣＩｌｌＩ街液中で
室混液中晩物理的に吸着させることによって抗−ヒトＰ
ＬＡ２抗血清で被覆した。被覆後アルミニウムコツプを
洗浄？ｌＩ　（９ｇ／ｌのＮａＣ１、０，ＯＩＸのＮａ
Ｎ３及び０．２　Ｑ／ＬのＴＷｅｅｎ２０）で洗い、そ
して０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で−晩飽
和し、そして＋４℃で湿潤状態に保存した。Coating of Aluminum Cop A aluminum tip (made of aluminum foil with a thickness of 0.3H and purity of 999z) was coated with 9 Q/L of NaCl and o, osx.
p containing Na N3 (TSA-Mfff solution)
Anti-human P was isolated by physical adsorption overnight in a chamber mixture of H7,5 in 0,5H Tris-HCIllI street solution.
Coated with LA2 antiserum. Clean aluminum tip after coating? lI (9 g/l NaCl, 0, OIX Na
N3 and 0.2 Q/L Tween 20) and saturated with 0.1% bovine serum albumin (BSA) overnight and stored humid at +4°C.

イムノアッセイ： アルミニウムコツプを一回５００μ［の洗浄液で洗浄し
た。　ＴＳＡ−ＧＩｌ街液（０，１駕のＢ−３Ａ　ｌ中
の０．９．５４および３２４　ｎｇ／ｍＬのホスホリパ
ーゼＡ２を含有した２５μ［の標準を前記コツプに加え
、次いで５９／［のＢＳＡ、　０．５　ａ／ＬのＮａＮ
３を含有したｐＨ７，８で００５ＨのＴｒ　ｉ　５−Ｈ
２５０４ＭＮ液中７７）　＋７５　ｔｔ　Ｌ　ｆ）Ｔ　
ｂ　ｃｅ識した抗−ＰＬＡ２抗体（５７０ｎｏ／ｍＬｌ
を加えた。Immunoassay: Aluminum chips were washed once with 500μ washing solution. A 25 μl standard containing 0.9.54 and 324 ng/mL phospholipase A2 in 0.1 μl of B-3A 1 was added to the tap, followed by 59 μl of BSA, 0.5 a/L NaN
Tri 5-H of 005H at pH 7,8 containing 3
2504MN in liquid 77) +75 tt L f)T
b ce-recognized anti-PLA2 antibody (570 no/mL
added.

連続的に振とうしながら３時間製置した後、コツプを６
回洗浄液で洗った。カウンティング時開が僅か３秒であ
った点は別として、実施例工のように０．３　ｓｏｌ／
ＬのＮａ２　ＳＯ４と０．００１　ｓｏｌ／Ｌのに２　
Ｎ２０８を含有したｐＨ８゜７である４５０μＬの０．
００１　ＨのＴｒ　ｉ　５−Ｈ２５０４榎衝液を加えた
後にコツプの中でエレクトロルミネセンスを測定した。After incubating for 3 hours with continuous shaking,
Washed twice with washing solution. Apart from the fact that the counting time was only 3 seconds, it was 0.3 sol/
L of Na2 SO4 and 0.001 sol/L of 2
450 μL of 0.5 μL containing N208 at pH 8°7.
Electroluminescence was measured in the pot after addition of 001 H Tri 5-H2504 Enoki buffer solution.

アッセイの結果は表２と第２図に示しである。The results of the assay are shown in Table 2 and Figure 2.

表　　　２ ＾ＬＡ霊ｎｇ／ｍＬ　　　　光子／１０’／３゜ＯＬ、
９　１．７ ９　　　　　　　　　　　　　　３．０　　　　　２．
４５４　　　６．５　５．９ ３２４　　　１８．６　２４．４ コツプの被覆とヒツジ−抗−ヒトＰＬＡ２抗血清の標識
化は実施例■のように行ったイムノアッセイ： アルミニウムコツプを１回５００μ［の洗浄液で洗浄し
た。ヒト血清中の０．９，５４および３２４　ｎｏ／鳳
ＥのホスホリパーゼＡ２を含有した２５μＥの標準を前
記コツプに加え、次いでＳｏ／ＬのＢＳＡ、　　０．５
ａ／ＬのＮａＮ３．０．３ｓｌ／Ｌｆ）　Ｎ　ａ　２　
　Ｓ　Ｏ４，Ｏ，ＧＯ＋　　ｍｏｌ／Ｌのに２　　Ｎ２
０８を含有したＤ）１８．７で０．０５　ＨのＴ　ｒ　
ｉ　ｓ　−Ｈ２ＳＯ４［ｆｆ１ｉ中）４２５　μＬ　ノ
Ｔｂ　″ｃ標識した抗−ＰＬＡ２抗体（２３５ｎｏ／ａ
ｌｌを加えた。Table 2 ＾LA spirit ng/mL photon/10'/3゜OL,
9 1.7 9 3.0 2.
454 6.5 5.9 324 18.6 24.4 Coating of the tips and labeling of the sheep-anti-human PLA2 antiserum were performed as in Example ①. Washed. 25 μE standards containing 0.9, 54 and 324 no/Otori E phospholipase A2 in human serum were added to the tip, followed by So/L BSA, 0.5
a/L NaN3.0.3sl/Lf) N a 2
S O4, O, GO+ mol/L of 2 N2
D) containing 0.08 Tr of 0.05 H at 18.7
i s -H2SO4 [in ff1i] 425 μL NOTb''c labeled anti-PLA2 antibody (235no/a
ll was added.

連続的に振とうしながら３時間温室した後。After greenhouseing for 3 hours with continuous shaking.

カウンティング時間が１か３秒であった点は別として、
実施例Ｉのようにコツプの中でエレクトロルミネセンス
を直接測定した。アッセイの結果は表３と第３図に示し
である。Apart from the fact that the counting time was 1 or 3 seconds,
Electroluminescence was measured directly in the cup as in Example I. The results of the assay are shown in Table 3 and Figure 3.

表　　３ ＰＬＡ愈ｎｇ／■Ｌ　　光子／１０“／３゜ＯＬ、６　
１．５ ９　　１．８　２．１ ５４　　３．１　３．７ ３２４　　９．１　１０．４　。Table 3 PLA ng/■L photon/10"/3°OL, 6
1.5 9 1.8 2.1 54 3.1 3.7 324 9.1 10.4.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、テルビウムまたはユーロビウムを含有する化学的部
分の存在及び／又は量を、電気的パルスを溶液に浸漬し
た電極に与えることによりそしてパルス終了後しばらく
してからの遅延した発光を測定することにより把握する
方法おいて、前記化学的部分が前記電極に結合している
か、そして／又は前記溶液中に存在し、かつ前記発光が
前記電極の近傍に存在する化学的部分の量を示すもので
あると見做されることを特徴とする方法。 ２、前記化学的部分が一般式： （Ｍ−Ｚ）ｎ−Ｌｍ−Ｙｐ を有することを特徴とする請求項１記載の方法。ただし
式中： Ｍはテルビウムまたはユーロビウムであり；ＺはＭの多
歯状の配位子であり；Ｌは−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＭｅ
のようなウレイド、チオウレイド、アミド；−Ｓ−、−
Ｓ−Ｓ−のようなチオエーテル；−ＳＯ２ＮＨ−、−Ｓ
Ｏ２ＮＭｅ−のようなスルホンナミドのごとき結合基で
あり、かつＬは種々の組成と長さの分子鎖を含むことが
でき、しかもこの分子鎖は前記の２価の基の一部分によ
つて多歯状の配位子Ｚに結合し、また他部分によって物
質Ｙに結合する。 そして、Ｙは一個以上の結合基Ｌを経てＺに結合する物
質であるが；ｎは１以上の整数であり；ｐは０以上の整
数であり；ｍは０以上の整数である。 ３、前記化学的部分が化学的物質に結合できることを特
徴とする請求項１または２記載の方法。 ４、問題の分析物の存在を測定するための競合結合法に
おいて、分析物と化学的部分は競合的に化学的材料に結
合するが、化学的部分は一般式： （Ｍ−Ｚ）ｎ−Ｌｍ−Ｙｐ を有し、式中 Ｍはテルビウムまたはユーロビウムであり；ＺはＭの多
歯状の配位子であり；Ｌは−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＭｅ
のようなウレイド、チオウレイド、アミド；−Ｓ−、−
Ｓ−Ｓ−のようなチオエーテル；−ＳＯ２ＮＨ−、−Ｓ
Ｏ２ＮＭｅ−のようなスルホンナミドのごとき結合基で
あり、かつＬは種々の組成と長さの分子鎖を含むことが
でき、しかもこの分子鎖は前記の２価の基の一部分によ
つて多歯状の配位子Ｚに結合し、また他部分によつて物
質Ｙに結合する。 そして、Ｙは一個以上の結合基Ｌを経てＺに結合する物
質であるが；ｎは１以上の整数であり；ｐは１以上の整
数であり；ｍは１以上の整数である。 前記の方法は； ａ）前記の、化学的材料、化学的部分および分析物を、
試薬混合物が形成するように適当な条件の下で接触させ
る事； ｂ）溶液中に浸漬した電極に電気パルスを与えることに
よって化学的部分の発光を誘起する事； ｃ）電気パルスを与えてから少しおくれて発する光を検
出する事とそれによって問題の分析物を測定する事とか
ら成ることを特徴とする。 ５、Ｙが全細胞、亜細胞粒子、ウィルス、核酸、多糖、
蛋白、ポリペプチド、酵素、細胞代謝産物、ホルモン、
薬理学的物質、薬剤、アルカロイド、ステロイド、ビタ
ミン、アミノ酸または炭水化物であることを特徴とする
請求項２、３または４記載の方法。 ６、Ｙがヌクレオチド、オリゴヌクレオチドまたはポリ
ヌクレオチドであることを特徴とする請求項２記載の方
法。 ７、Ｙが抗体であることを特徴とする請求項５記載の方
法。 ８、前記化学的物質が全細胞、亜細胞粒子、ウィルス、
核酸、多糖、蛋白、ポリペプチド、酵素、細胞代謝産物
、ホルモン、薬理学的物質、薬剤、アルカロイド、ステ
ロイド、ビタミン、アミノ酸または炭水化物であること
を特徴とする請求項３記載の方法。 ９、前記化学的物質が少なくとも一つの電極の表面上に
固定化されることを特徴とする請求項３記載の方法。 １０、前記化学的物質が抗体であることを特徴とする請
求項３記載の方法。 １１、前記分析物が全細胞、亜細胞粒子、ウィルス、核
酸、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオ
チド、多糖、蛋白、ポリペプチド、酵素、細胞代謝産物
、ホルモン、薬理学的物質、薬剤、アルカロイド、ステ
ロイド、ビタミン、アミノ酸または炭水化物であること
を特徴とする請求項４記載の方法。 １２、前記分析物が抗体であることを特徴とする請求項
１１記載の方法。 １３、前記化学的材料が抗体であることを特徴とする請
求項４記載の方法。 １４、前記化学的物質が電極の表面上に固定された分析
物特有抗体であり、Ｙが分析物上の別のあるいは同じ抗
原決定基に対する抗体であり、そして分析物が抗体の間
に結合していることを特徴とする請求項３記載の方法。 但しこの方法は非競合アッセイである。 １５、前記分析物がが全細胞、亜細胞粒子、ウィルス、
核酸、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、多糖、
蛋白、ポリペプチド、酵素、細胞代謝産物、ホルモン、
薬理学的物質、アルカロイドまたは炭水化物であること
を特徴とする請求項１４記載の方法。 １６、方法がホモジニアスな方法であり、そして適切な
条件が、結合化学的部分と非結合化学的部分とが電気パ
ルスによる発光が検出される前には分離されないような
条件であることを特徴とする請求項３、４、１４または
１５記載の方法。 １７、方法がヘテロジニアスな方法であり、そして適切
な条件が、電極に対して電気パルスを加えそして発光を
測定する前に結合化学的部分と非結合化学的部分とを分
離することから成ることを特徴とする請求項３、４、１
４または１５記載の方法。 １８、電極の少なくとも一つがアルミニウム製であるこ
とを特徴とする請求項１記載の方法。Claims: 1. The presence and/or amount of a chemical moiety containing terbium or eurobium is determined by applying an electrical pulse to an electrode immersed in a solution and by delaying the emission of light some time after the end of the pulse. in which the chemical moiety is bound to the electrode and/or is present in the solution and the amount of the chemical moiety present in the vicinity of the electrode; A method characterized by being deemed to indicate. 2. The method of claim 1, wherein the chemical moiety has the general formula: (M-Z)n-Lm-Yp. where: M is terbium or eurobium; Z is a polydentate ligand of M; L is -CONH-, -CONMe
ureido, thioureido, amide; -S-, -
Thioethers such as S-S-; -SO2NH-, -S
is a linking group such as a sulfonamide such as O2NMe-, and L can include molecular chains of various compositions and lengths, and this molecular chain can be polydentate depending on a portion of the divalent group mentioned above. is bonded to the ligand Z, and is bonded to the substance Y through another moiety. Further, Y is a substance that is bonded to Z via one or more bonding groups L; n is an integer of 1 or more; p is an integer of 0 or more; m is an integer of 0 or more. 3. The method of claim 1 or 2, wherein the chemical moiety is capable of binding to a chemical substance. 4. In competitive binding methods for determining the presence of an analyte of interest, the analyte and the chemical moiety competitively bind to the chemical material, where the chemical moiety has the general formula: (M-Z)n- Lm-Yp, where M is terbium or eurobium; Z is a polydentate ligand of M; L is -CONH-, -CONMe
ureido, thioureido, amide; -S-, -
Thioethers such as S-S-; -SO2NH-, -S
is a linking group such as a sulfonamide such as O2NMe-, and L can include molecular chains of various compositions and lengths, and this molecular chain can be polydentate depending on a portion of the divalent group mentioned above. is bonded to the ligand Z, and is also bonded to the substance Y through another moiety. Further, Y is a substance that is bonded to Z via one or more bonding groups L; n is an integer of 1 or more; p is an integer of 1 or more; m is an integer of 1 or more. Said method comprises: a) said chemical material, chemical moiety and analyte;
contacting under suitable conditions such that a reagent mixture forms; b) inducing luminescence of the chemical moiety by applying an electric pulse to an electrode immersed in the solution; c) applying an electric pulse and then It is characterized in that it consists in detecting light emitted with a slight delay and thereby measuring the analyte in question. 5. Y is whole cell, subcellular particle, virus, nucleic acid, polysaccharide,
proteins, polypeptides, enzymes, cellular metabolites, hormones,
5. A method according to claim 2, 3 or 4, characterized in that it is a pharmacological substance, drug, alkaloid, steroid, vitamin, amino acid or carbohydrate. 6. The method according to claim 2, wherein Y is a nucleotide, oligonucleotide or polynucleotide. 7. The method according to claim 5, wherein Y is an antibody. 8. The chemical substance is whole cells, subcellular particles, viruses,
4. A method according to claim 3, characterized in that it is a nucleic acid, a polysaccharide, a protein, a polypeptide, an enzyme, a cellular metabolite, a hormone, a pharmacological substance, a drug, an alkaloid, a steroid, a vitamin, an amino acid or a carbohydrate. 9. The method of claim 3, wherein the chemical is immobilized on the surface of at least one electrode. 10. The method according to claim 3, wherein the chemical substance is an antibody. 11. The analyte is a whole cell, a subcellular particle, a virus, a nucleic acid, a nucleotide, an oligonucleotide, a polynucleotide, a polysaccharide, a protein, a polypeptide, an enzyme, a cell metabolite, a hormone, a pharmacological substance, a drug, an alkaloid, a steroid. 5. The method according to claim 4, characterized in that it is a vitamin, an amino acid or a carbohydrate. 12. The method according to claim 11, wherein the analyte is an antibody. 13. The method of claim 4, wherein the chemical material is an antibody. 14. the chemical entity is an analyte-specific antibody immobilized on the surface of the electrode, Y is an antibody directed against another or the same antigenic determinant on the analyte, and the analyte is bound between the antibodies; 4. The method according to claim 3, characterized in that: However, this method is a non-competitive assay. 15. The analyte is a whole cell, a subcellular particle, a virus,
Nucleic acids, oligonucleotides, polynucleotides, polysaccharides,
proteins, polypeptides, enzymes, cellular metabolites, hormones,
15. The method according to claim 14, characterized in that it is a pharmacological substance, an alkaloid or a carbohydrate. 16. The method is a homogeneous method and the suitable conditions are such that the bound and unbound chemical moieties are not separated before the emission of light by the electric pulse is detected. 16. The method according to claim 3, 4, 14 or 15. 17. The method is a heterogeneous method and the appropriate conditions consist of separating the bound and unbound chemical moieties before applying an electrical pulse to the electrode and measuring the luminescence. Claims 3, 4, 1 characterized by
4 or 15. 18. The method of claim 1, wherein at least one of the electrodes is made of aluminum.
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