JPH01302138A - 粒子解析装置のデータ補正方法 - Google Patents
粒子解析装置のデータ補正方法Info
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- JPH01302138A JPH01302138A JP63133149A JP13314988A JPH01302138A JP H01302138 A JPH01302138 A JP H01302138A JP 63133149 A JP63133149 A JP 63133149A JP 13314988 A JP13314988 A JP 13314988A JP H01302138 A JPH01302138 A JP H01302138A
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- detectors
- particle
- fluorescent agents
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
本発明は、例えばフローサイトメータ等のように、検体
粒子からの散乱光及び蛍光を検出することにより検体粒
子の性質を解析する粒子解析装置のデータ補正方法に関
するものである。
粒子からの散乱光及び蛍光を検出することにより検体粒
子の性質を解析する粒子解析装置のデータ補正方法に関
するものである。
[従来の技術]
フローサイトメータ等に用いられる従来の粒子解析装置
では、フローセルの中央部の例えば200 JLmX
2004mの微小な断面を有する流通部内を、シース液
に包まれて通過する検体粒子に光ビームを照射し、その
結果生ずる散乱光及び蛍光により、検体粒子の形状、大
きさ、屈折率等の粒子的性質を解明することが可能であ
る。
では、フローセルの中央部の例えば200 JLmX
2004mの微小な断面を有する流通部内を、シース液
に包まれて通過する検体粒子に光ビームを照射し、その
結果生ずる散乱光及び蛍光により、検体粒子の形状、大
きさ、屈折率等の粒子的性質を解明することが可能であ
る。
発生した蛍光は分光され、赤色蛍光及び緑色蛍光として
検出されるが、赤色蛍光と緑色蛍光の波長領域には重な
り合う部分があるため、互いの検出器に他の蛍光が混入
することが避けられない。
検出されるが、赤色蛍光と緑色蛍光の波長領域には重な
り合う部分があるため、互いの検出器に他の蛍光が混入
することが避けられない。
これは例えば白血球中のリンパ球を赤色及び緑色の蛍光
剤を用いて同時に染色し、それぞれの蛍光強度により2
種類の免疫機能を検査する場合に、一方の蛍光色だけが
発生しても双方の検出器に出力が生じてしまうという問
題となる。
剤を用いて同時に染色し、それぞれの蛍光強度により2
種類の免疫機能を検査する場合に、一方の蛍光色だけが
発生しても双方の検出器に出力が生じてしまうという問
題となる。
そこで、混入した信号を除去する補正を必要とするが、
従来の補正方法では測定者が検体粒子から発生する赤色
及び緑色蛍光の信号強度を見ながら補正の程度を手動で
決定しているために、個人差が生じて客観性に欠け、ま
た時間が掛かる等の問題点がある。
従来の補正方法では測定者が検体粒子から発生する赤色
及び緑色蛍光の信号強度を見ながら補正の程度を手動で
決定しているために、個人差が生じて客観性に欠け、ま
た時間が掛かる等の問題点がある。
[発明の目的]
本発明の目的は、上述の問題点を解決し、測定者個人に
よる信号の補正誤差を無くして正確な補正を可能とし、
更に測定時間が短縮できる粒子解析装置のデータ補正方
法を提供することにある。
よる信号の補正誤差を無くして正確な補正を可能とし、
更に測定時間が短縮できる粒子解析装置のデータ補正方
法を提供することにある。
[発明の概要]
上述の目的を達成するための本発明の要旨は、蛍光剤に
より染色した検体粒子に光ビームを照射し、検体粒子か
ら発生する蛍光を分光して、分光された蛍光強度を測定
する検出波長範囲が異なる複数個の検出器を備えた粒子
解析装置において、予め特定の蛍光剤で染色した検体粒
子に対して光ビームを照射し、前記各検出器が測定した
蛍光強度から前記特定の蛍光剤に対する前記各検出器間
の補正係数を算出し、測定時における前記各検出器の出
力から他の検出器が測定すべき蛍光成分の影響を除去す
るように補正することを特徴とする粒子解析装置のデー
タ補正方法である。
より染色した検体粒子に光ビームを照射し、検体粒子か
ら発生する蛍光を分光して、分光された蛍光強度を測定
する検出波長範囲が異なる複数個の検出器を備えた粒子
解析装置において、予め特定の蛍光剤で染色した検体粒
子に対して光ビームを照射し、前記各検出器が測定した
蛍光強度から前記特定の蛍光剤に対する前記各検出器間
の補正係数を算出し、測定時における前記各検出器の出
力から他の検出器が測定すべき蛍光成分の影響を除去す
るように補正することを特徴とする粒子解析装置のデー
タ補正方法である。
[発明の実施例]
本発明に係る方法を図示の実施例に基づいて詳細に説明
する。
する。
第1図は光学系と信号処理系の構成図である。
フローセルlの流通部la内を高速暦法となったシース
液に包まれて、赤色及び緑色の蛍光剤で染色された検体
粒子が通過し、この流れと直交する方向にレーザー光源
2が配置されている。このレーザー光源2から照射され
たレーザービームLを流通部1aに導くために、光軸G
1上に結像レンズ3が配置され、更に検体粒子からの9
0°散乱光及び蛍光を測定するために、検体粒子の流れ
の方向と光軸01にそれぞれ直交する方向である光軸0
2上に、フローセル1側から集光レンズ4、緑色光を反
射するグイクロイックミラー5、赤色光を反射するグイ
クロイックミラー6が順次に配列されている。グイクロ
イックミラー5の反射方向には集光レンズ7、光検出器
8が、グイクロイックミラー6の反射方向には集光レン
ズ9、光検出器10が配列されている。
液に包まれて、赤色及び緑色の蛍光剤で染色された検体
粒子が通過し、この流れと直交する方向にレーザー光源
2が配置されている。このレーザー光源2から照射され
たレーザービームLを流通部1aに導くために、光軸G
1上に結像レンズ3が配置され、更に検体粒子からの9
0°散乱光及び蛍光を測定するために、検体粒子の流れ
の方向と光軸01にそれぞれ直交する方向である光軸0
2上に、フローセル1側から集光レンズ4、緑色光を反
射するグイクロイックミラー5、赤色光を反射するグイ
クロイックミラー6が順次に配列されている。グイクロ
イックミラー5の反射方向には集光レンズ7、光検出器
8が、グイクロイックミラー6の反射方向には集光レン
ズ9、光検出器10が配列されている。
信号処理系としては、光検出器8,10の出力は信号処
理部11に接続され、この信号処理部11の出力はA/
D変換部12を経てインタフェイス13に接続されてい
る。更に、インタフェイス13は解析部14と接続され
、この解析部14の出力が再び信号処理部11に入力さ
れるようになっている。
理部11に接続され、この信号処理部11の出力はA/
D変換部12を経てインタフェイス13に接続されてい
る。更に、インタフェイス13は解析部14と接続され
、この解析部14の出力が再び信号処理部11に入力さ
れるようになっている。
ここで、結像レンズ3を介してフローセルlの流通部1
aに集光されたレーザービームLは検体粒子によって散
乱され、90°蛍光は集光レンズ4を経て、緑色蛍光は
グイクロイックミラー5で、赤色蛍光はグイクロイック
ミラー6で反射され、それぞれ集光レンズ7.9を介し
て光検出器8.10に入射し電気信号に変換される。光
検出器8.10からの電気信号は後述する信号処理部1
1へ入力され1次にA/D変換部12でA/D変換され
、インタフェイス13を介して解析部14に送られる。
aに集光されたレーザービームLは検体粒子によって散
乱され、90°蛍光は集光レンズ4を経て、緑色蛍光は
グイクロイックミラー5で、赤色蛍光はグイクロイック
ミラー6で反射され、それぞれ集光レンズ7.9を介し
て光検出器8.10に入射し電気信号に変換される。光
検出器8.10からの電気信号は後述する信号処理部1
1へ入力され1次にA/D変換部12でA/D変換され
、インタフェイス13を介して解析部14に送られる。
第2図は緑色及び赤色蛍光剤とグイクロイックミラー5
.6の波長特性図を示し、曲線G及びRは緑色及び赤色
の蛍光剤波長特性であり、グイクロイックミラー5は波
長がD1以下の光、グイクロイックミラー6は波長がD
2以上の光を反射する。
.6の波長特性図を示し、曲線G及びRは緑色及び赤色
の蛍光剤波長特性であり、グイクロイックミラー5は波
長がD1以下の光、グイクロイックミラー6は波長がD
2以上の光を反射する。
このため、01以下の波長は緑色蛍光として、 02以
上の波長は赤色蛍光として検出されることになる。一方
1曲線G及びRは波長特性の重なりが大きいため、波長
がD2以上の斜線で示す緑色蛍光部分G°は赤色蛍光に
混入し、逆に波長が旧以下の赤色蛍光部分R′は緑色蛍
光に混入する。
上の波長は赤色蛍光として検出されることになる。一方
1曲線G及びRは波長特性の重なりが大きいため、波長
がD2以上の斜線で示す緑色蛍光部分G°は赤色蛍光に
混入し、逆に波長が旧以下の赤色蛍光部分R′は緑色蛍
光に混入する。
第3図はこれらの波長部分が混入した電気信号を補正す
るために設けられた信号処理部内の補正系ブロック図で
あり、Gl、 G2は信号処理系のゲイン、11.12
はそれぞれ緑色、赤色蛍光による光電流、R1,R2は
電流電圧変換用抵抗、)[1,R2は補正係数である。
るために設けられた信号処理部内の補正系ブロック図で
あり、Gl、 G2は信号処理系のゲイン、11.12
はそれぞれ緑色、赤色蛍光による光電流、R1,R2は
電流電圧変換用抵抗、)[1,R2は補正係数である。
第2図からも理解し得るように、入力信号の補正を行う
には一方の信号の混入比分の信号を他方の信号から差し
引けばよい、そこで、赤色蛍光剤の波長特性曲線Rの内
部において、波長がD2以上の領域に対する領域R°の
割合をα、同様に緑色蛍光の曲線Gの内部において、波
長がO1以下の領域に対する領域G′の割合をβとし、
また補正前の電圧をVl’ 、 V2°、補正後の電圧
をvl、v2とすると、次式が成立する。
には一方の信号の混入比分の信号を他方の信号から差し
引けばよい、そこで、赤色蛍光剤の波長特性曲線Rの内
部において、波長がD2以上の領域に対する領域R°の
割合をα、同様に緑色蛍光の曲線Gの内部において、波
長がO1以下の領域に対する領域G′の割合をβとし、
また補正前の電圧をVl’ 、 V2°、補正後の電圧
をvl、v2とすると、次式が成立する。
vl=vt′−に2V2’ −(t)
= GIRI(It◆α12) −に2G2R2(12
◆βII)= (GIRI−βに2G2R2)11+
(αGIRI−に2G2R2)12・・・(2) ここで、光電流I2の影響を無くすには、αGIRI−
K2G2R2= 0 −”、に2=αGIRI/ G2R2・・・(3)同様
にして、 V2= V2’−KIVI’ ・(
4)が成立し、 K1=βG2R2/ GIRI ・・
・(5)ここで、 (3) 、 (5)式から、Vl
= GIRI (1−(X 73 )11
・・・(6)V2= G2R2(1−(X 13 )
f2 ・・・(7)αβ= KIK
2 ・・・(8)(
8) 、 (7) 、 (8)式から、Vl= GIR
I (1−KIK2)11 ・ (
9)V2= G2R2(1−KIK2)12
・ (10)(9) 、 (10)式から、
補正後の値Vl、 V2を真の値V1= GIRIIl
、 V2= G2R2V2ト等シくスルタメニハ、第4
図に示すようにVl、・v2を更に次式で書き換えれば
よい。
= GIRI(It◆α12) −に2G2R2(12
◆βII)= (GIRI−βに2G2R2)11+
(αGIRI−に2G2R2)12・・・(2) ここで、光電流I2の影響を無くすには、αGIRI−
K2G2R2= 0 −”、に2=αGIRI/ G2R2・・・(3)同様
にして、 V2= V2’−KIVI’ ・(
4)が成立し、 K1=βG2R2/ GIRI ・・
・(5)ここで、 (3) 、 (5)式から、Vl
= GIRI (1−(X 73 )11
・・・(6)V2= G2R2(1−(X 13 )
f2 ・・・(7)αβ= KIK
2 ・・・(8)(
8) 、 (7) 、 (8)式から、Vl= GIR
I (1−KIK2)11 ・ (
9)V2= G2R2(1−KIK2)12
・ (10)(9) 、 (10)式から、
補正後の値Vl、 V2を真の値V1= GIRIIl
、 V2= G2R2V2ト等シくスルタメニハ、第4
図に示すようにVl、・v2を更に次式で書き換えれば
よい。
V1=(Vlo−に2V2’ )/(1−KIK2)
−(11)V2 = (V2’−KIVI’ )
/(1−KIK2) ・(12)次に、補正係
数Kl、 K2の算出方法について述べる。第5図は赤
色蛍光剤のみにより染色された検体粒子の測定データで
あり、縦軸を赤色蛍光強度、横軸を緑色蛍光強度とした
二次元サイトグラム上に1つのまとまった粒子群として
表示される。この粒子群をウィンドウWで囲み、ウィン
ドウW内の粒子群の緑色及び赤色蛍光強度の平均値をM
C)l 1及びMeO2とすると、MCll0CVI’ MCH2oc V2’
・ (13)となる、ここで、赤色蛍光の緑色
側への混入成分を除去するためには、(11)式でv1
=0として、K2=V1’ /V2° =MCH1/M
GH2・(14)となるように補正係数に2を定めれば
よい、同様に、補正係数Klについては、線色蛍光剤の
みにより染色された粒子を測定して求めることができる
。
−(11)V2 = (V2’−KIVI’ )
/(1−KIK2) ・(12)次に、補正係
数Kl、 K2の算出方法について述べる。第5図は赤
色蛍光剤のみにより染色された検体粒子の測定データで
あり、縦軸を赤色蛍光強度、横軸を緑色蛍光強度とした
二次元サイトグラム上に1つのまとまった粒子群として
表示される。この粒子群をウィンドウWで囲み、ウィン
ドウW内の粒子群の緑色及び赤色蛍光強度の平均値をM
C)l 1及びMeO2とすると、MCll0CVI’ MCH2oc V2’
・ (13)となる、ここで、赤色蛍光の緑色
側への混入成分を除去するためには、(11)式でv1
=0として、K2=V1’ /V2° =MCH1/M
GH2・(14)となるように補正係数に2を定めれば
よい、同様に、補正係数Klについては、線色蛍光剤の
みにより染色された粒子を測定して求めることができる
。
このように、2種類の蛍光剤を用いる粒子解析の蛍光補
正を行うには、予め一方の蛍光剤だけが発光する二次元
サイトグラム上の粒子群にウィンドウをかけ、解析部1
4において各蛍光強度の平均値を算出して補正係数に1
、K2を求め、それらの値を信号処理部11に入力した
後に測定を開始すればよい。
正を行うには、予め一方の蛍光剤だけが発光する二次元
サイトグラム上の粒子群にウィンドウをかけ、解析部1
4において各蛍光強度の平均値を算出して補正係数に1
、K2を求め、それらの値を信号処理部11に入力した
後に測定を開始すればよい。
なお、補正係数Kl、 K2を求めるに当り、蛍当強度
の平均値MCHI、MeO2の代りに、最大頻度の蛍当
強度を使用することもできる。また、補正係数の算出に
ついては、補正前のアナログ信号をA/D変換して解析
部14に送り、解析部14において行うことも可能であ
る。なお、蛍光剤の種類が更に増加しても、同様な方法
で校正が可能である。
の平均値MCHI、MeO2の代りに、最大頻度の蛍当
強度を使用することもできる。また、補正係数の算出に
ついては、補正前のアナログ信号をA/D変換して解析
部14に送り、解析部14において行うことも可能であ
る。なお、蛍光剤の種類が更に増加しても、同様な方法
で校正が可能である。
また、蛍光剤が1種類でも、結合する検体粒子によって
は発生する波長領域が異なる場合にも応用可能である。
は発生する波長領域が異なる場合にも応用可能である。
[発明の効果]
以上説明したように本発明に係る粒子解析装置のデータ
補正方法は、単一又は複数の蛍光剤を用いた場合の信号
強度から予め補正係数を算出して補正することにより、
補正値の客観性及び信頼性が向上し、また測定時間の短
縮や検体粒子の節約が可能となる。
補正方法は、単一又は複数の蛍光剤を用いた場合の信号
強度から予め補正係数を算出して補正することにより、
補正値の客観性及び信頼性が向上し、また測定時間の短
縮や検体粒子の節約が可能となる。
図面は本発明に係る粒子解析装置のデータ補正方法の実
施例を示し、第1図は構成図、第2図は蛍光剤及び分光
系の波長特性図、第3図、第4図は補正系の構成図、第
5図は二次元ヒストグラム図である。 符号1はフローセル、2はレーザー光源、5.6はグイ
クロイックミラー、8,10は光検出器、11は信号処
理部、12はA/D変換部、13はインタフェイス、1
4は解析部である。 特許出願人 キャノン株式会社 、5 第1図
施例を示し、第1図は構成図、第2図は蛍光剤及び分光
系の波長特性図、第3図、第4図は補正系の構成図、第
5図は二次元ヒストグラム図である。 符号1はフローセル、2はレーザー光源、5.6はグイ
クロイックミラー、8,10は光検出器、11は信号処
理部、12はA/D変換部、13はインタフェイス、1
4は解析部である。 特許出願人 キャノン株式会社 、5 第1図
Claims (1)
- 1、蛍光剤により染色した検体粒子に光ビームを照射し
、検体粒子から発生する蛍光を分光して、分光された蛍
光強度を測定する検出波長範囲が異なる複数個の検出器
を備えた粒子解析装置において、予め特定の蛍光剤で染
色した検体粒子に対して光ビームを照射し、前記各検出
器が測定した蛍光強度から前記特定の蛍光剤に対する前
記各検出器間の補正係数を算出し、測定時における前記
各検出器の出力から他の検出器が測定すべき蛍光成分の
影響を除去するように補正することを特徴とする粒子解
析装置のデータ補正方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63133149A JPH01302138A (ja) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | 粒子解析装置のデータ補正方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63133149A JPH01302138A (ja) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | 粒子解析装置のデータ補正方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01302138A true JPH01302138A (ja) | 1989-12-06 |
Family
ID=15097862
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63133149A Pending JPH01302138A (ja) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | 粒子解析装置のデータ補正方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH01302138A (ja) |
-
1988
- 1988-05-31 JP JP63133149A patent/JPH01302138A/ja active Pending
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